【課題】安定なα−リポ酸の提供。
【解決手段】非イオン性界面活性剤と、２価金属イオンと、炭酸イオンまたはリン酸イオンとを特定の順序で使用することにより、α−リポ酸ナノ粒子の製造方法であって、α−リポ酸と非イオン性界面活性剤とを含む水性分散液を調製する工程；該水性分散液に、２価金属塩を添加する工程であって、該２価金属塩が、２価金属ハロゲン化物、２価金属酢酸化物または２価金属グルコン酸化物である、工程；および該２価金属塩を添加した水性分散液に、アルカリ金属炭酸化物またはアルカリ金属リン酸化物を添加して、α−リポ酸ナノ粒子を形成させる工程を包含する方法。

【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、α−リポ酸を含むナノ粒子およびその調製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
α−リポ酸は生体内に含まれ、糖の代謝およびＴＣＡサイクルの回転に作用する補酵素の一種であり、構造式Ｃ_８Ｈ_１４Ｏ_２Ｓ_２、分子量２０６．３、黄色結晶で融点６０〜６２℃の物質である。α−リポ酸は人間の体内にも存在し、ブロッコリーや赤身肉など多くの食品にも含まれる。そのため、α−リポ酸は安全性の高い物質といえる。機能面に関して、α−リポ酸は、生体内で強力な抗酸化力を持ち、酸化ストレスを軽減することや、重金属排出に効果的なキレート剤であることが認められている。α−リポ酸は、現在、「チオクト酸」として医薬品に配合されており、チオクト酸製剤は、通常、注射剤として販売されている。チオクト酸製剤の効能・効果としては、チオクト酸の需要が増大した際の補給（激しい肉体労働時）、リー症候群（亜急性壊死性脳脊髄炎）、中毒性（ストレプトマイシン、カナマイシンによる）および騒音性（職業性）の内耳性難聴が日本医薬品集 医療薬（非特許文献１）に記載されている。
【０００３】
α−リポ酸は、近年の規制緩和によって食品および化粧品への使用が認められたので、これらの分野でのさらなる応用が期待される。
【０００４】
α−リポ酸は黄色粉末状の性状を持つが、水に難溶であるためにその用途が限られている。またα−リポ酸は熱および光に対して非常に不安定であり、製剤中に安定して存在することが困難である。さらにα−リポ酸は特有の硫黄臭を持ち、変質することでその臭いがより強力になること、および熱によってガム化してしまうことが問題となり、食品、化粧品および医薬品に使用するには、これらの品質および使用感の面で大きな問題がある。
【０００５】
上記のような問題を解決するために、特許文献１においては、α−リポ酸またはその薬理学的に許容できる塩および亜硫酸塩またはその水和物を含有する水溶製剤が提案されている。
【０００６】
また、特許文献２においては、α−リポ酸をエタノールなどの有機溶剤に溶解した後、乳化剤、多価アルコールを添加し、乳化機等の物理的作用によりα−リポ酸を乳化状態にする水溶製剤の製法が提案されている。
【０００７】
さらに、特許文献３および特許文献４においては、α−リポ酸をエタノールなどの有機溶剤や乳化剤、多価アルコールと混合し、水への分散性、乳化安定性を向上させるα−リポ酸水溶製剤の製法が提案されている。
【０００８】
しかしながら、これらの特許文献に記載されるような、乳化状態にする方法は、乳化機という特殊な装置を必要とするうえ、乳化液の粒径が大きい場合および粒子径の大きさの分布が不均一である場合には、分離しやすい状態になる。またその他の方法でも、乳化によるα−リポ酸の分散が不完全であるために保存中にα−リポ酸特有の硫黄臭が強く生じることも指摘されている。
【０００９】
他方、レチノイン酸のナノ粒子化に関する文献がある。特許文献５〜８は、多価金属無機塩被覆レチノイン酸ナノ粒子を開示する。
【００１０】
しかし、レチノイン酸とα−リポ酸とは構造が全く異なるため、特許文献５〜８のレチノイン酸の代わりにα−リポ酸を使用することは容易には想到できず、全く考えられてこなかった。
【００１１】
この点に関してより詳細に説明する。第１に、下記に示す構造のようにα−リポ酸とレチノイン酸はカルボキシル基をひとつ含有していること以外は全く異なる構造を有している。さらにα−リポ酸は分子中に硫黄原子を含んでいる点および２重結合を全く持たない点でもレチノイン酸と全く異なっている。以上のことから特許文献５〜特許文献８に記載される方法において、レチノイン酸の代わりにα−リポ酸を用いることは容易には想到できない。
【００１２】
【化１】

第２に、レチノイン酸は生体内において、細胞の増殖・分化、生体の恒常性維持、形態形成に関わる重要な生体内ホルモンであるといわれており、その作用機序として核内のレチノイン酸レセプターへの結合による各種遺伝子発現のコントロールが提唱されている。一方、α−リポ酸は解糖系の補酵素としてピルビン酸からアセチルＣｏＡへの酸化的脱炭酸反応を触媒し、細胞の呼吸やエネルギー産生に不可欠な栄養素であるといわれている。またα−リポ酸のよく知られる機能として抗酸化作用が知られている。以上のようなことからレチノイン酸とα−リポ酸は生体内での働きや期待される薬理効果が全く異なっており、産業上の利用を考える際に求める有効性の観点からも、特許文献５〜特許文献８に記載される方法においてレチノイン酸の代替物としてα−リポ酸を用いることは容易には想到できない。
【００１３】
第３に、非特許文献２のｐ．４１０ではレチノイン酸のｐＫａ値は６．４であると報告されており、ｐ．４１１のＤｉｓｃｕｓｓｉｏｎでは、ミセル化することでｐＫａが７〜８へと上昇すると記載されている。一方、非特許文献３には、α−リポ酸のｐＫａ値が４．７６であると記載されている。以上のように、α−リポ酸とレチノイン酸とは解離に関する性質が全く異なる。それゆえ、α−リポ酸を特許文献５〜特許文献８に記載される方法においてレチノイン酸の代替物として用いることは容易には想到できない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】特開２００５−２０９６公報
【特許文献２】特開２００６−１２９８４１号公報
【特許文献３】特開２００６−２５７０１０号公報
【特許文献４】特開２００７−１６０００号公報
【特許文献５】特開２００４−１６１７３９号公報
【特許文献６】国際公開第２００５／０３７２６７号パンフレット
【特許文献７】国際公開第２００５／０３７２６８号パンフレット
【特許文献８】国際公開第２００５／０７０４１３号パンフレット
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】日本医薬品集 医療薬 ２００７年版、株式会社 じほう、１３２７頁（２００６）
【非特許文献２】Ｒｏｂｂｅｒｔ Ｃｒｅｔｏｎら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．３９：４０９−４１４（１９９５）
【非特許文献３】Ｌｅｓｔｅｒ Ｊ．Ｒｅｅｄら、ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＴＨＥ ＡＭＥＲＩＣＡＮ ＣＨＥＭＩＣＡＬ ＳＯＣＩＥＴＹ，Ｖｏｌ．７５：１２６７（１９５３）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
本発明は、上記問題点の解決を意図するものであり、安定なα−リポ酸を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、非イオン性界面活性剤と、２価金属イオンと、炭酸イオンまたはリン酸イオンとを特定の順序で使用することにより、安定したα−リポ酸ナノ粒子が得られることを見出し、これに基づいて本発明を完成させた。
【００１８】
本発明はα−リポ酸の両親媒性を利用するものである。α−リポ酸は酸性条件または中性条件では非常に水に難溶であるが、アルカリを加えると透明な液状になる。アルカリ溶液中のα−リポ酸は、水中で球状ミセルを形成すると考えられる。ついで、α−リポ酸に非イオン性界面活性剤を添加すると、α−リポ酸と非イオン性界面活性剤の混合ミセルが形成すると考えられる。さらに２価金属のハロゲン化物、酢酸塩、あるいはグルコン酸塩を添加することにより、リポ酸イオンのマイナス電荷に２価の金属カチオンを結合させ、α−リポ酸の凝集・沈澱を防ぐことによりリポ酸の表面に２価の金属イオンが結合した球状、もしくは卵形等を有するミセルが形成すると考えられる。さらに２価の陰イオンを添加して、２価の陰イオンをミセル表面の金属イオンに吸着（結合）させて、ミセル表面荷電を中和させる。その結果、ミセル表面に多価金属無機塩の皮膜が形成され、多価金属無機塩皮膜α−リポ酸ナノ粒子が調製されると考えられる。本ナノ粒子の調製法はα−リポ酸ミセルを鋳型にしていることから、封入率は単分散α−リポ酸分子を除いた濃度に相当し１００％に近いものとなると考えられる。本ナノ粒子の表面には非イオン性界面活性剤の親水基が露出すると考えられる。本発明のナノ粒子は、水中に透明に分散する。またＣａＣＯ_３などの多価金属無機塩結晶は水に溶解しないが、ナノ粒子表面ではパテライトあるいはアモルファス構造をとると考えられ、生体内では徐々に溶解し、α−リポ酸が徐放されるＤＤＳ効果が期待される。
【００１９】
本発明者らはさらに、α−リポ酸がある種の非イオン性界面活性剤に可溶化され、この可溶化物を水中に分散させることによりα−リポ酸と非イオン性界面活性剤の混合ミセルが形成されることもまた見出した。このα−リポ酸溶解非イオン性界面活性剤の混合ミセルに、２価金属のハロゲン化物、酢酸塩、あるいはグルコン酸塩を添加することにより、α−リポ酸イオンのマイナス電荷に２価の金属カチオンを結合させる。この際、界面活性剤の存在によりα−リポ酸の凝集・沈澱が妨げられ、リポ酸の表面に２価の金属イオンが結合した球状もしくは卵形の形状のミセルが形成されると考えられる。このミセルに対してさらに２価の陰イオン（アルカリ金属炭酸化物またはアルカリ金属リン酸化物）を添加して、２価の陰イオンをミセル表面の金属イオンに吸着（結合）させて、ミセル表面荷電を中和させる。その結果、ミセル表面に多価金属無機塩の皮膜が形成され、多価金属無機塩皮膜α−リポ酸ナノ粒子が調製されると考えられる。
【００２０】
上記目的を達成するために、本発明は、例えば、以下の手段を提供する：
（項目１）
α−リポ酸ナノ粒子の製造方法であって、
α−リポ酸と非イオン性界面活性剤とを含む水性分散液を調製する工程；
該水性分散液に、２価金属塩を添加する工程であって、該２価金属塩が、２価金属ハロゲン化物、２価金属酢酸化物または２価金属グルコン酸化物である、工程；および
該２価金属塩を添加した水性分散液に、アルカリ金属炭酸化物またはアルカリ金属リン酸化物を添加して、α−リポ酸ナノ粒子を形成させる工程
を包含する、方法。
【００２１】
（項目２）
前記α−リポ酸と非イオン性界面活性剤とを含む水性分散液を調製する工程が、
液状の非イオン性界面活性剤にα−リポ酸を溶解して界面活性剤溶液を得ること；および該界面活性剤溶液に水または水を含む液体を添加して水性分散液を得ることを含む、項目１に記載の方法。
【００２２】
（項目３）
前記α−リポ酸と非イオン性界面活性剤とを含む水性分散液を調製する工程が、α−リポ酸とアルカリ性物質と水との混合物を作製してα−リポ酸含有水性分散液を調製すること；および該α−リポ酸含有水性分散液に非イオン性界面活性剤を添加することを含む、項目１に記載の方法。
【００２３】
（項目４）
前記２価金属塩が、塩化カルシウム、臭化カルシウム、フッ化カルシウム、ヨウ化カルシウム、塩化マグネシウム、臭化マグネシウム、フッ化マグネシウム、ヨウ化マグネシウム、塩化亜鉛、臭化亜鉛、フッ化亜鉛、ヨウ化亜鉛、酢酸カルシウム、酢酸マグネシウム、酢酸亜鉛、グルコン酸カルシウム、グルコン酸マグネシウムおよびグルコン酸亜鉛からなる群より選択される、項目１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【００２４】
（項目５）
前記２価金属塩が、塩化カルシウム、塩化マグネシウムおよびグルコン酸亜鉛からなる群より選択される、項目１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【００２５】
（項目６）
前記アルカリ金属炭酸化物またはアルカリ金属リン酸化物が、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、リン酸ナトリウムおよびリン酸カリウムからなる群より選択される、項目１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【００２６】
（項目７）
前記アルカリ金属炭酸化物またはアルカリ金属リン酸化物が、炭酸ナトリウムおよびリン酸水素二ナトリウムからなる群より選択される、項目１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【００２７】
（項目８）
前記非イオン性界面活性剤が、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ショ糖脂肪酸エステルおよびポリグリセリン脂肪酸エステルからなる群より選択される、項目１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【００２８】
（項目９）
前記非イオン性界面活性剤のＨＬＢ値が、１０以上である、項目８に記載の方法。
【００２９】
（項目１０）
前記非イオン性界面活性剤が、ポリオキシエチレン（重合度１０〜２０）オクチルドデシルエーテル、ポリオキシエチレン（重合度１０〜２０）ステアリルエーテル、ポリオキシエチレン（重合度１０〜２０）ポリオキシプロピレン（重合度４〜８）セチルエーテル、ポリオキシエチレン（重合度２０〜１００）硬化ヒマシ油およびショ糖ラウリン酸エステルからなる群より選択される、項目１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【００３０】
（項目１１）
前記α−リポ酸と非イオン性界面活性剤とを含む水性分散液を調製する工程において、
前記非イオン性界面活性剤にα−リポ酸を溶解する前に、ポリエチレングリコールを該非イオン性界面活性剤中に混合しておくか、または
前記界面活性剤溶液に水を含む液体を添加する際に、該水を含む液体として、ポリエチレングリコールを含む水を用いる、項目２および４〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【００３１】
（項目１２）
α−リポ酸と、非イオン性界面活性剤と、２価金属イオンと、炭酸イオンまたはリン酸イオンとを含む、α−リポ酸ナノ粒子。
【００３２】
（項目１３）
前記２価金属イオンがカルシウムイオン、亜鉛イオンまたはマグネシウムイオンである、項目１２に記載のα−リポ酸ナノ粒子。
【００３３】
（項目１４）
前記非イオン性界面活性剤が、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ショ糖脂肪酸エステルおよびポリグリセリン脂肪酸エステルからなる群より選択される、項目１２または１３に記載のα−リポ酸ナノ粒子。
【００３４】
（項目１５）
さらにポリエチレングリコールを含む、項目１２〜１４のいずれか１項に記載のα−リポ酸ナノ粒子。
【００３５】
（項目１６）
項目１２〜１５のいずれか１項に記載のα−リポ酸ナノ粒子を含有する、皮膚外用剤。
【００３６】
（項目１７）
項目１２〜１５のいずれか１項に記載のα−リポ酸ナノ粒子を含有する、医薬品。
【００３７】
（項目１８）
項目１２〜１５のいずれか１項に記載のα−リポ酸ナノ粒子を含有する、口腔用組成物。
【００３８】
（項目１９）
項目１２〜１５のいずれか１項に記載のα−リポ酸ナノ粒子を含有する、食品。
【００３９】
本発明はまた、例えば、以下の手段も提供する：
（項目Ａ１）
α−リポ酸ナノ粒子の製造方法であって、
α−リポ酸とアルカリ性物質と水との混合物を作製してα−リポ酸含有水性分散液を調製する工程；
該水性分散液に非イオン性界面活性剤を添加する工程；
該非イオン性界面活性剤を添加した水性分散液に、２価金属塩を添加する工程であって、該２価金属塩が、２価金属ハロゲン化物、２価金属酢酸化物または２価金属グルコン酸化物である、工程；および
該２価金属塩を添加した水性分散液に、アルカリ金属炭酸化物またはアルカリ金属リン酸化物を添加して、α−リポ酸ナノ粒子を形成させる工程
を包含する、方法。
【００４０】
（項目Ａ２）
前記２価金属塩が、塩化カルシウム、臭化カルシウム、フッ化カルシウム、ヨウ化カルシウム、塩化マグネシウム、臭化マグネシウム、フッ化マグネシウム、ヨウ化マグネシウム、塩化亜鉛、臭化亜鉛、フッ化亜鉛、ヨウ化亜鉛、酢酸カルシウム、酢酸マグネシウム、酢酸亜鉛、グルコン酸カルシウム、グルコン酸マグネシウムおよびグルコン酸亜鉛からなる群より選択される、項目Ａ１に記載の方法。
【００４１】
（項目Ａ３）
前記２価金属塩が、塩化カルシウム、塩化マグネシウムおよびグルコン酸亜鉛からなる群より選択される、項目Ａ１に記載の方法。
【００４２】
（項目Ａ４）
前記アルカリ金属炭酸化物またはアルカリ金属リン酸化物が、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、リン酸ナトリウムおよびリン酸カリウムからなる群より選択される、項目Ａ１に記載の方法。
【００４３】
（項目Ａ５）
前記アルカリ金属炭酸化物またはアルカリ金属リン酸化物が、炭酸ナトリウムおよびリン酸水素二ナトリウムからなる群より選択される、項目Ａ１に記載の方法。
【００４４】
（項目Ａ６）
前記非イオン性界面活性剤が、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ショ糖脂肪酸エステルおよびポリグリセリン脂肪酸エステルからなる群より選択される、項目Ａ１に記載の方法。
【００４５】
（項目Ａ７）
前記非イオン性界面活性剤のＨＬＢ値が、１０以上である、項目Ａ６に記載の方法。
【００４６】
（項目Ａ８）
前記非イオン性界面活性剤が、ポリオキシエチレン（重合度１０〜２０）オクチルドデシルエーテル、ポリオキシエチレン（重合度１０〜２０）ステアリルエーテル、ポリオキシエチレン（重合度１０〜２０）ポリオキシプロピレン（重合度４〜８）セチルエーテル、ポリオキシエチレン（重合度２０〜１００）硬化ヒマシ油およびショ糖ラウリン酸エステルからなる群より選択される、項目Ａ１に記載の方法。
【００４７】
（項目Ａ９）
α−リポ酸と、非イオン性界面活性剤と、２価金属イオンと、炭酸イオンまたはリン酸イオンとを含む、α−リポ酸ナノ粒子。
【００４８】
（項目Ａ１０）
前記２価金属イオンがカルシウムイオン、亜鉛イオンまたはマグネシウムイオンである、項目Ａ９に記載のα−リポ酸ナノ粒子。
【００４９】
（項目Ａ１１）
前記非イオン性界面活性剤が、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ショ糖脂肪酸エステルおよびポリグリセリン脂肪酸エステルからなる群より選択される、項目Ａ９に記載のα−リポ酸ナノ粒子。
【００５０】
（項目Ａ１２）
項目Ａ９に記載のα−リポ酸ナノ粒子を含有する、皮膚外用剤。
【００５１】
（項目Ａ１３）
項目Ａ９に記載のα−リポ酸ナノ粒子を含有する、医薬品。
【００５２】
（項目Ａ１４）
項目Ａ９に記載のα−リポ酸ナノ粒子を含有する、口腔用組成物。
【００５３】
（項目Ａ１５）
項目Ａ９に記載のα−リポ酸ナノ粒子を含有する、食品。
【発明の効果】
【００５４】
本発明のナノ粒子の調製法はα−リポ酸ミセルを鋳型にしていることから、封入率は単分散α−リポ酸分子を除いた濃度に相当し１００％に近いものとなる。本発明のナノ粒子の表面には非イオン性界面活性剤の親水基が露出していると考えられ、水中に透明に分散する。またナノ粒子表面では多価金属無機塩はパテライトあるいはアモルファス構造をとると考えられ、生体内では徐々に溶解し、α−リポ酸が徐放されるＤＤＳ効果が期待される。また本発明のナノ粒子は表面を多価金属無機塩に被覆されていることから、α−リポ酸に特有の硫黄臭の発生を著しく抑制することができる。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】図１は、実施例１で蒸留水を使用して作製したα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の粒子径分布を光散乱光度計（大塚電子 ＥＬＳ−７１０ＴＹ）によって測定した結果を示す。
【図２】図２は、比較例１Ａでイオン交換水を使用して作製したα−リポ酸ナノ粒子の粒子径分布を光散乱光度計（大塚電子 ＥＬＳ−７１０ＴＹ）によって測定した結果を示す。
【図３】図３は、α−リポ酸の残存率の結果を示す。△は対照である試薬のα−リポ酸の結果であり、■は比較例１のα−リポ酸ナノ粒子の結果であり、□は実施例１のα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の結果である。
【図４】図４は、試験例３の結果を示す。
【図５】図５は、試験例４の結果を示す。
【図６】図６は、試験例４のしわのレプリカを示す。
【図７】図７は、実施例２２Ａで蒸留水を使用して作製したα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の粒子径分布を光散乱光度計（大塚電子 ＦＰＡＲ１０００）によって測定した結果を示す。
【図８】図８は、実施例２９Ｂで蒸留水を使用して作製したα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の粒子径分布を光散乱光度計（大塚電子 ＦＰＡＲ１０００）によって測定した結果を示す。
【図９】図９は、試験例５の結果を示す。
【図１０】図１０は、試験例６の結果を示す。
【図１１】図１１は、試験例７で３Ｔ３−Ｌ１細胞培養液にα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を添加し、未成熟脂肪細胞内に蓄積した脂肪をオイルレッドＯで染色し、吸光度計（波長５２０ｎｍ）にて測定した結果を示す。
【図１２】図１２は、試験例８で３Ｔ３−Ｌ１細胞培養液にα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を添加し、成熟脂肪細胞内に蓄積した脂肪をオイルレッドＯで染色し、吸光度計（波長５２０ｎｍ）にて測定した結果を示す。
【図１３】図１３は、試験例９で３Ｔ３−Ｌ１細胞培養液にα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を添加し培養した未成熟脂肪細胞を破砕した細胞破砕液中のα−リポ酸濃度を高速液体クロマトグラフ質量分析計によって測定した結果を示す。
【図１４】図１４は、試験例９で３Ｔ３−Ｌ１細胞培養液にα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を添加し培養した未成熟脂肪細胞培養上清液中のα−リポ酸濃度を高速液体クロマトグラフ質量分析計によって測定した結果を示す。
【図１５】図１５は、試験例１０で作製した皺モデルマウスの評価基準例を示す。
【図１６】図１６は、試験例１０で作製した皺モデルマウスに６週間α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を塗布したマウスの皺レプリカとその皺評価点数を示す。
【図１７】図１７は、試験例１０で作製した皺モデルマウス皮膚切片のヒアルロン酸染色の結果を示す。
【図１８】図１８は、試験例１１の皺レプリカを示す。
【図１９】図１９は、試験例１２の細胞破砕液画分に対するヒアルロン酸ＥＬＩＳＡの結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５６】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００５７】
（１．α−リポ酸ナノ粒子の材料）
本発明のα−リポ酸ナノ粒子は、α−リポ酸、非イオン性界面活性剤、２価金属塩、アルカリ金属炭酸化物またはアルカリ金属リン酸化物を使用して製造される。当業者は、本発明の製造法において、アルカリ性水溶液など、必要に応じて他の材料を使用し得る。
【００５８】
（１ａ．α−リポ酸）
本発明において用いられるα−リポ酸は、当該分野で公知の任意のα−リポ酸であり得る。α−リポ酸はチオクト酸としても公知である。α−リポ酸は、Ｒ，Ｓ−（＋／−）−α−リポ酸、Ｒ−（＋）−α−リポ酸、Ｓ−（−）−α−リポ酸のいずれであってもよい。α−リポ酸は、酸の形態であってもよく、塩の形態であってもよい。市販の任意のα−リポ酸が用いられ得る。α−リポ酸は、粉末または結晶の形態であり得る。
【００５９】
（１ｂ．非イオン性界面活性剤）
本発明において用いられる非イオン性界面活性剤は、非イオン性であれば任意の界面活性剤であり得る。本発明において用いられる非イオン性界面活性剤の例としては、特に限定はないが、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル類、プロピレングリコール脂肪酸エステル、モノグリセリン脂肪酸エステル、ジグリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル等が挙げられる。本発明において用いられる非イオン性界面活性剤としては特に、ＨＬＢ値が約１０以上であるものが好ましい。本発明において用いられる非イオン性界面活性剤としては特に、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ショ糖脂肪酸エステルおよびポリグリセリン脂肪酸エステルからなる群より選択される非イオン性界面活性剤であって、かつＨＬＢ値が約１０以上であるものが好ましい。本発明においてはさらに、非イオン性界面活性剤が、ポリオキシエチレン（重合度１０〜２０）オクチルドデシルエーテル、ポリオキシエチレン（重合度１０〜２０）ステアリルエーテル、ポリオキシエチレン（重合度１０〜２０）ポリオキシプロピレン（重合度４〜８）セチルエーテル、ポリオキシエチレン（重合度２０〜１００）硬化ヒマシ油およびショ糖ラウリン酸エステルからなる群より選択されることが特に好ましい。本発明においては、１種類の非イオン性界面活性剤を使用してもよく、または２種類以上の非イオン性界面活性剤を組み合わせて使用してもよい。ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルのＨＬＢ値は、約１０以上であることが好ましく、約１２以上であることがより好ましく、約１４以上であることが最も好ましい；ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルのＨＬＢ値は、約２０以下であることが好ましく、約１８以下であることがより好ましく、約１６以下であることが最も好ましい。
【００６０】
非イオン性界面活性剤は、室温で固体のもの（すなわち、融点が室温よりも高い界面活性剤）であってもよく、室温で液体のもの（すなわち、融点が室温よりも低い界面活性剤）であってもよい。本願明細書中で「液状の非イオン性界面活性剤」との用語は、室温で液体の非イオン性界面活性剤を使用する実施形態と、室温で固体の非イオン性界面活性剤を加熱して融解させて液状にして使用する実施形態との両方に関して用いられる。
【００６１】
本明細書中で用いられる場合、「ＨＬＢ値」とは、親水性疎水性バランス（Ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｅ Ｌｉｐｏｐｈｉｌｅ Ｂａｌａｎｃｅ）をいい、一般に、２０×Ｍ_Ｈ／Ｍにより計算され、ここで、Ｍ_Ｈ＝親水基部分の分子量であり、Ｍ＝分子全体の分子量である。ＨＬＢ値は、分子中の親水基の量が０％のとき０であり、１００％のとき２０である。ＨＬＢ値は、界面活性剤では界面活性剤分子を形成する親水性および疎水性の基の大きさと強さを表し、疎水性の高い界面活性剤はＨＬＢ値が小さく、親水性の高い界面活性剤はＨＬＢ値が大きい。
【００６２】
本発明において好適に使用されるポリオキシエチレン硬化ヒマシ油の例としては、酸化エチレンの重合度が任意のものであるポリオキシエチレン硬化ヒマシ油が挙げられる。例えば、酸化エチレンの重合度が約１０以上のものが好ましく、酸化エチレンの重合度が約２００以下のものが好ましい。さらにより好ましいポリオキシエチレン硬化ヒマシ油の例としては、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油４０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０およびポリオキシエチレン硬化ヒマシ油８０が挙げられる。なお、この数字は、酸化エチレンの重合度の程度を表し、例えば、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油４０は、酸化エチレンの付加モル数が４０であることを示す。
【００６３】
本発明において好適に使用されるポリオキシエチレンアルキルエーテルの例としては、酸化エチレンの重合度が任意のものであるポリオキシエチレンアルキルエーテルが挙げられる。酸化エチレンの重合度が約１０以上のものが好ましく、酸化エチレンの重合度が約２０以下のものが好ましい。さらにより好ましいポリオキシエチレンアルキルエーテルの例としては、例えば、ポリオキシエチレン（２０）ステアリルエーテル（ＰＯＥ（２０）ステアリルエーテルとも記載される）、ポリオキシエチレン（２０）オクチルドデシルエーテル（ＰＯＥ（２０）オクチルドデシルエーテルとも記載される）およびポリオキシエチレン（２０）イソステアリルエーテル（ＰＯＥ（２０）イソステアリルエーテル）が挙げられる。この（２０）という数字は酸化エチレンの重合度が２０であることを示す。
【００６４】
本発明において好適に使用されるポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルの例としては、酸化エチレンの重合度が任意のものであるポリオキシエチレンソルビタン酸エステルが挙げられる。酸化エチレンの重合度が約１０以上のものが好ましく、酸化エチレンの重合度が約２０以下のものが好ましい。さらにより好ましいポリオキシエチレンソルビタン酸エステルの例としては、例えば、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート（ＰＯＥ（２０）ソルビタンモノオレエートとも記載される）、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート（ＰＯＥ（２０）ソルビタンモノラウレートとも記載される）、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート（ＰＯＥ（２０）ソルビタンモノステアレートとも記載される）、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート（ＰＯＥ（２０）ソルビタンモノパルミテートとも記載される）およびポリオキシエチレン（２０）ソルビタントリオレート（ＰＯＥ（２０）ソルビタントリオレートとも記載される）が挙げられる。この（２０）という数字は酸化エチレンの重合度が２０であることを示す。
【００６５】
本発明において好適に使用されるポリオキシエチレンポリオキシエチレンプロピレンアルキルエーテルの例としては、酸化エチレンの重合度が任意のものであるポリオキシエチレンポリオキシプロピレンエーテルが挙げられる。ポリオキシエチレン部分の重合度が約１０以上のものが好ましく、ポリオキシエチレン部分の重合度が約２０以下のものが好ましい。ポリオキシプロピレン部分の重合度が約４以上のものが好ましく、ポリオキシプロピレン部分の重合度が約８以下のものが好ましい。さらにより好ましいポリオキシエチレンポリオキシエチレンプロピレンアルキルエーテルの例としては、例えば、ポリオキシエチレン（２０）ポリオキシプロピレン（８）セチルエーテル（ＰＯＥ（２０）ＰＯＰ（８）セチルエーテルとも記載される）、ポリオキシエチレン（２０）ポリオキシプロピレン（４）セチルエーテル（ＰＯＥ（２０）ＰＯＰ（４）セチルエーテルとも記載される）、ポリオキシエチレン（３４）ポリオキシプロピレン（２３）セチルエーテル（ＰＯＥ（３４）ＰＯＰ（２３）セチルエーテルとも記載される）、ポリオキシエチレンポリオキシエチレンプロピレンデシルテトラデシルエーテル（ＰＯＥＰＯＥプロピレンデシルテトラデシルエーテルとも記載される）およびポリオキシエチレン（２０）イソステアリルエーテル（ＰＯＥ（２０）イソステアリルエーテルとも記載される）が挙げられる。
【００６６】
本発明において好適に使用されるポリグリセリン脂肪酸エステル類の例としては、例えば、デカグリセリンモノラウレート、デカグリセリンモノミリステート、デカグリセリンモノオレートおよびデカグリセリンモノステアレートが挙げられる。使用されるポリグリセリン脂肪酸エステルのＨＬＢ値は特に限定はされないが、ＨＬＢ値は好ましくは約８以上であり、より好ましくは約１０以上であり、さらに好ましくは約１２以上である。ＨＬＢ値は好ましくは約２０以下であり、より好ましくは約１９以下であり、さらに好ましくは約１８以下である。
【００６７】
本発明において好適に使用されるショ糖脂肪酸エステル類の例としては、例えば、ショ糖ステアリン酸エステル、ショ糖パルミチン酸エステル、ショ糖ミリスチン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステルが挙げられる。中でもショ糖ラウリン酸エステルがより好適に使用される。
【００６８】
本発明において、α−リポ酸ナノ粒子中の界面活性剤の含有量は、界面活性剤の種類により異なる。界面活性剤の量は、α−リポ酸重量の、好ましくは約１倍以上であり、より好ましくは約２倍以上であり、さらに好ましくは約３倍以上であり、特に好ましくは約４倍以上であり、最も好ましくは約５倍以上である。界面活性剤の量は、α−リポ酸重量の、好ましくは約４０倍以下であり、より好ましくは約３５倍以下であり、さらに好ましくは約３０倍以下であり、特に好ましくは約２５倍以下であり、最も好ましくは約２０倍以下である。α−リポ酸に対する界面活性剤の量が少なすぎると、ナノ粒子が凝集しやすくなり、透明かつ安定な粒子を得ることが難しい場合がある。α−リポ酸に対する界面活性剤の量が多すぎると、添加量を増やしてもそれにより得られる効果がそれほど増えない上に、α−リポ酸含量が相対的に低下する、使用時のハンドリングが悪くなる、本ナノ粒子を食品に利用した場合に界面活性剤由来の味が発現し商品価値を下げる、などの問題が生じ得る。
【００６９】
（１ｃ．２価金属塩）
本発明においては、２価金属塩が使用される。使用され得る２価金属塩の例としては、２価金属ハロゲン化物、２価金属酢酸化物および２価金属グルコン酸化物が挙げられる。
【００７０】
２価金属酢酸化物とは、酢酸と２価金属との塩であり、酢酸二価金属塩ともいう。２価金属グルコン酸化物とは、グルコン酸と２価金属との塩であり、グルコン酸二価金属塩ともいう。２価金属塩は好ましくは、塩化カルシウム、臭化カルシウム、フッ化カルシウム、ヨウ化カルシウム、塩化マグネシウム、臭化マグネシウム、フッ化マグネシウム、ヨウ化マグネシウム、塩化亜鉛、臭化亜鉛、フッ化亜鉛、ヨウ化亜鉛、酢酸カルシウム、酢酸マグネシウム、酢酸亜鉛、グルコン酸カルシウム、グルコン酸マグネシウムおよびグルコン酸亜鉛からなる群より選択され、より好ましくは、塩化マグネシウム、塩化カルシウムおよびグルコン酸亜鉛からなる群より選択される。市販の２価金属塩が使用され得る。１種類の２価金属塩を使用してもよく、２種類以上の２価金属塩を混合して使用してもよい。１種類の２価金属塩を使用することが好ましい。
【００７１】
（１ｄ．アルカリ金属炭酸化物またはアルカリ金属リン酸化物）
本発明においては、アルカリ金属炭酸化物またはアルカリ金属リン酸化物が使用される。アルカリ金属炭酸化物またはアルカリ金属リン酸化物中のアルカリ金属の例としては、ナトリウム、カリウム、リチウム、ルビジウム、セシウムおよびフランシウムが挙げられる。アルカリ金属は、ナトリウムまたはカリウムであることが好ましく、ナトリウムであることがさらに好ましい。本発明において使用され得るアルカリ金属炭酸化物の例としては、例えば、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウムおよび炭酸水素カリウムが挙げられ、炭酸ナトリウムが好ましい。本発明において使用され得るアルカリ金属リン酸化物の例としては、例えば、リン酸ナトリウムおよびリン酸カリウムが挙げられる。リン酸ナトリウムは、メタリン酸ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸三ナトリウム、ピロリン酸ナトリウムまたはピロリン酸水素ナトリウムであり得、好ましくはリン酸水素二ナトリウムである。リン酸カリウムは、リン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウムまたはリン酸三カリウムであり得、好ましくはリン酸水素二カリウムである。
【００７２】
市販のアルカリ金属炭酸化物およびアルカリ金属リン酸化物が使用され得る。１種類のアルカリ金属炭酸化物またはアルカリ金属リン酸化物を使用してもよく、２種類以上のアルカリ金属炭酸化物またはアルカリ金属リン酸化物を混合して使用してもよい。１種類のアルカリ金属炭酸化物またはアルカリ金属リン酸化物を使用することが好ましい。
【００７３】
（１ｅ．添加剤）
本発明においては、添加剤を使用することができる。添加剤は、水溶性高分子であることが好ましい。添加剤の例としては、ポリエチレングリコール、植物系高分子、微生物系高分子、動物系高分子、デンプン類およびデキストリン類、セルロース類、ビニル系高分子およびアクリル系高分子が挙げられる。
【００７４】
添加剤を用いることにより、ミセル表面へと水溶性高分子が吸着することによるミセルの凝集抑制効果および分散効果；ミセル間の水中（連続相）に高分子化合物が存在することによる立体障害によるミセルの凝集抑制効果；ならびに増粘によるミセルの凝集抑制効果などの効果が得られると考えられる。
【００７５】
ポリエチレングリコールは、ＨＯ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＨによって示される物質である。ポリエチレングリコールは、エチレングリコールの脱水重縮合によって生成したと考えられる構造をもち、両末端がヒドロキシル基であるポリエーテルである。分子量約２００から約２０，０００の種々のものが公知である。ポリエチレングリコールは、分子量が約２００〜約６００では液体であり、分子量が約１０００を超えると固体である。ポリエチレングリコールは高分子であるので、通常、種々の分子量の分子の混合物として販売される。ポリエチレングリコールの数平均分子量は、好ましくは約５００以上であり、より好ましくは約６００以上であり、さらに好ましくは約７００以上であり、なおさらに好ましくは約８００以上であり、特に好ましくは約９００以上であり、そして最も好ましくは約１，０００以上である。ポリエチレングリコールの数平均分子量は、好ましくは約１０，０００以下であり、より好ましくは約９，０００以下であり、さらに好ましくは約８，０００以下であり、なおさらに好ましくは約７，０００以下であり、特に好ましくは約６，５００以下であり、そして最も好ましくは約２０，０００以下である。本発明で好適に使用されるポリエチレングリコールの例としては、ポリエチレングリコール１０００、ポリエチレングリコール４０００、ポリエチレングリコール６０００が挙げられる。
【００７６】
植物系高分子とは、植物から抽出または精製される高分子をいう。植物系高分子の例としては、アラビアガム、トラガカントガム、ガラクタン、グアガム、ローカストビーンガム、カラギナン、ペクチン、クインスシード（マルメロ種子）抽出物、褐藻粉末などが挙げられる。
【００７７】
微生物系高分子とは、微生物から抽出または精製される高分子をいう。微生物系高分子の例としては、キサンタンガム、デキストラン、プルランなどが挙げられる。
【００７８】
動物系高分子とは、動物から抽出または精製される高分子をいう。動物系高分子の例としては、コラーゲン、カゼイン、アルブミン、ゼラチン、ヒアルロン酸などが挙げられる。
【００７９】
デンプン類およびデキストリン類とは、デンプンおよびデキストリン、ならびにそれらの化学修飾物、酵素処理物および物理的処理物をいう。デンプン類は、好ましくは、化学修飾されたデンプンである。デンプン類の例としては、カルボキシメチルデンプン、メチルヒドロキシデンプンなどが挙げられる。
【００８０】
セルロース類とは、セルロース類およびその化学修飾物、酵素処理物および物理的処理物をいう。セルロース類の例としては、メチルセルロース、ニトロセルロース、エチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、セルロース硫酸塩、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、結晶セルロース、セルロース末などが挙げられる。
【００８１】
ビニル系高分子とは、ビニル系モノマーを重合して得られる高分子をいう。ビニル系高分子の例としては、ポリビニルアルコール、ポリビニルメチルエーテル、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマーなどが挙げられる。
【００８２】
アクリル系高分子とは、アクリル系モノマーを重合して得られる高分子をいう。アクリル系高分子の例としては、ポリアクリル酸及びその塩、ポリアクリルイミドなどが挙げられる。
【００８３】
（２．α−リポ酸ナノ粒子の製造方法）
本発明のα−リポ酸ナノ粒子の製造方法は、α−リポ酸と非イオン性界面活性剤とを含む水性分散液を調製する工程；該水性分散液に、２価金属塩を添加する工程であって、該２価金属塩が、２価金属ハロゲン化物、２価金属酢酸化物または２価金属グルコン酸化物である、工程；および該２価金属塩を添加した水性分散液に、アルカリ金属炭酸化物またはアルカリ金属リン酸化物を添加して、α−リポ酸ナノ粒子を形成させる工程を包含する。
【００８４】
好ましい実施形態では、前記α−リポ酸と非イオン性界面活性剤とを含む水性分散液を調製する工程が、液状の非イオン性界面活性剤にα−リポ酸を溶解して界面活性剤溶液を得ること；および該界面活性剤溶液に水または水を含む液体を添加して水性分散液を得ることを含む。この実施形態では、以下に記載の「２ａ−１」、「２ｂ−１」、「２ｃ」および「２ｄ」を含む工程を行うことにより、α−リポ酸ナノ粒子を製造し得る。
【００８５】
別の好ましい実施形態では、前記α−リポ酸と非イオン性界面活性剤とを含む水性分散液を調製する工程が、α−リポ酸とアルカリ性物質と水との混合物を作製してα−リポ酸水性分散液を調製すること；および該α−リポ酸含有水性分散液に非イオン性界面活性剤を添加することを含む。この実施形態では、以下に記載の「２ａ−２」、「２ｂ−２」、「２ｃ」および「２ｄ」を含む工程を行うことにより、α−リポ酸ナノ粒子を製造し得る。
【００８６】
特定の好ましい実施形態では、本発明の方法は、α−リポ酸ナノ粒子の製造方法であって、α−リポ酸とアルカリ性物質と水との混合物を作製してα−リポ酸含有水性分散液を調製する工程（該水性分散液中でα−リポ酸がミセルを形成すると考えられる）；該水性分散液に非イオン性界面活性剤を添加する工程（α−リポ酸と非イオン性界面活性剤との混合ミセルが形成すると考えられる）；該水性分散液に、２価金属塩を添加する工程であって、該２価金属塩が、２価金属ハロゲン化物、２価金属酢酸化物または２価金属グルコン酸化物である、工程；および該２価金属塩を添加した水性分散液に、アルカリ金属炭酸化物またはアルカリ金属リン酸化物を添加して、α−リポ酸ナノ粒子を形成させる工程を包含する。
【００８７】
（２ａ−１．α−リポ酸を液状の非イオン性界面活性剤に溶解する工程）
α−リポ酸を非イオン性界面活性剤に最初に溶解させる実施形態を説明する。この実施形態においては、非イオン性界面活性剤を溶媒として用いる。すなわち、界面活性剤溶液を調製する。この実施形態においては、まず、液状の非イオン性界面活性剤にα−リポ酸を溶解して界面活性剤溶液を得る。このα−リポ酸は、非イオン性界面活性剤に直接添加してもよく、間接的に添加してもよい。「間接的に添加する」とは、他の物質と混合してから添加することをいう。例えば、α−リポ酸を添加剤と混合した後に非イオン性界面活性剤に添加してもよい。α−リポ酸は、通常、結晶または粉末の形態で市販されている。この実施形態では、α−リポ酸は、液状の非イオン性界面活性剤にほぼ完全に溶解する。非イオン性界面活性剤が室温で液状であれば、室温でこの溶解操作を行うことができるが、必要に応じて、加熱してこの溶解操作を行っても良い。非イオン性界面活性剤が室温で固体であれば、加熱して非イオン性界面活性剤を液状にして、この溶解操作を行う。この界面活性剤溶液を調製する際、必要に応じて、非イオン性界面活性剤に上述した添加剤を加えておいても良い。
【００８８】
この界面活性剤溶液を調製する際、好ましくは、水を使用しない。すなわち、界面活性剤溶液を調製する際に混入する水の量は、α−リポ酸１００重量部に対して約５０重量部以下とすることが好ましく、約２０重量部以下とすることがより好ましく、約１０重量部以下とすることがさらに好ましく、約５重量部以下とすることがいっそう好ましく、約１重量部以下とすることが特に好ましい。水分量の下限は特にないが、α−リポ酸１００重量部に対して約０．００１重量部以上、約０．０１重量部以上、または約０．１重量部以上の水が混合される条件を採用してもよい。
【００８９】
α−リポ酸はアルコールには溶解するが、本発明においてはアルコールを実質的に使用しないことが好ましい。アルコールを使用するとα−リポ酸のミセル形成効率に悪影響を及ぼし得る。従って、例えば、α−リポ酸１００重量部に対して、アルコールの使用量を約１０重量部以下とすることが好ましく、約５重量部以下とすることがより好ましく、約１重量部以下とすることがさらに好ましく、約０．５重量部以下とすることが特に好ましく、約０．１重量部以下とすることが最も好ましい。ただし、必要に応じてアルコールを使用する場合、そのアルコールの使用量の下限は特にないが、例えば、α−リポ酸１００重量部に対して、アルコールの使用量が約０．０１重量部以上に設定することは可能である。
【００９０】
なお、後述する実施形態では、α−リポ酸を溶解させる際にアルカリ性化合物を使用するが、本実施形態では、アルカリ性化合物を使用してα−リポ酸を溶解させる必要はない。本実施形態において、α−リポ酸を非イオン性界面活性剤に溶解する際には、好ましくは、α−リポ酸および非イオン性界面活性剤以外の材料を用いずに、当該溶解操作を行う。例えば、アルカリ性化合物を実質的に使用せずに、当該溶解操作を行うことができる。従って、溶解操作を行う際に使用されるアルカリ性化合物の量については、例えば、α−リポ酸１００重量部に対して、アルカリ性化合物の使用量を５重量部以下とすることが可能であり、約１重量部以下とすることも可能であり、約０．５重量部以下とすることも可能であり、約０．１重量部以下とすることも可能であり、約０．０５重量部以下とすることも可能であり、約０．０１重量部以下とすることも可能である。
【００９１】
なお、α−リポ酸を非イオン性界面活性剤に溶解した後、水を加える際には、必要に応じて、水とともにアルカリを同時に添加しても良く、アルカリ性の水（例えば、塩基性化合物の水溶液）を添加しても良い。
【００９２】
非イオン性界面活性剤は、融点が室温以上のものは、加熱して融解することが好ましい。加熱は、使用する非イオン性界面活性剤が融解するに充分な温度になるように行われればよい。α−リポ酸を分解するおそれがあるので、非イオン性界面活性剤の温度が約７０℃以上になるような、過度の加熱は好ましくない。α−リポ酸を添加する際の非イオン性界面活性剤の温度は、この非イオン性界面活性剤の融点より高く、（融点＋２０℃）以下であることが好ましく、（融点＋１５℃）以下であることがより好ましく、（融点＋１０℃）以下であることが最も好ましい。
【００９３】
非イオン性界面活性剤とα−リポ酸との混合物の作製の際に、α−リポ酸と非イオン性界面活性剤との混合（ミセル形成）に実質的に悪影響を及ぼさない限り、他の物質をまた混合してもよい。例えば、非イオン性界面活性剤と添加剤（例えば、ポリエチレングリコール）とを混合した後にα−リポ酸を添加することにより混合物を作製してもよい。あるいは、非イオン性界面活性剤とα−リポ酸との混合物に添加剤（例えば、ポリエチレングリコール）を添加してもよい。
【００９４】
α−リポ酸を添加した後の混合物をよく攪拌することが好ましい。
【００９５】
α−リポ酸の量は、工程２ｂ−１で得られるα−リポ酸含有水性分散液中のα−リポ酸の濃度が、臨界ミセル濃度以上になるように選択される。α−リポ酸含有水性分散液中のα−リポ酸の濃度は、好ましくは約０．１重量％以上であり、より好ましくは約０．５重量％以上であり、より好ましくは約１．０重量％以上である。α−リポ酸含有水性分散液中のα−リポ酸の濃度は、好ましくは約２０重量％以下であり、より好ましくは約１６重量％以下であり、さらに好ましくは約１４重量％以下であり、特に好ましくは約１２重量％以下であり、最も好ましくは約１０重量％以下である。
【００９６】
α−リポ酸を溶解するために使用される非イオン性界面活性剤の量は、任意に選択され得るが、α−リポ酸の量を１００としたときに、重量比で、好ましくは約１００％以上であり、より好ましくは約２００％以上であり、さらに好ましくは約３００％以上であり、特に好ましくは約４００％以上であり、最も好ましくは約５００％以上である。この工程で添加される非イオン性界面活性剤の量は、α−リポ酸の量を１００％としたときに、重量比で、好ましくは約４０００％以下であり、より好ましくは約３５００％以下であり、さらに好ましくは約３０００％以下であり、特に好ましくは約２５００％以下であり、最も好ましくは約２０００％以下である。
【００９７】
（２ｂ−１．非イオン性界面活性剤とα−リポ酸との混合物に水を添加してα−リポ酸含有水性分散液を得る工程）
次いで、非イオン性界面活性剤とα−リポ酸との混合物に水を添加して、α−リポ酸含有水性分散液が得られる。α−リポ酸含有水性分散液の作製の際に、α−リポ酸と非イオン性界面活性剤との混合（ミセル形成）に実質的に悪影響を及ぼさない限り、他の物質をまた混合してもよい。
【００９８】
非イオン性界面活性剤とα−リポ酸との混合物に水を添加して混合することにより、α−リポ酸と非イオン性界面活性剤との混合ミセルが自然に形成されると考えられる。この実施形態では、α−リポ酸と非イオン性界面活性剤とが規則的に配列している状態から、水の添加によって一気に混合ミセルが形成されると考えられるので、非常に安定的に混合ミセルを形成できると考えられる。水を添加した後の溶液をよく攪拌することが好ましい。攪拌は、ある程度の時間継続されることが好ましい。攪拌時間は、好ましくは約１０分間以上であり、より好ましくは約２０分間以上であり、さらに好ましくは約２５分間以上であり、最も好ましくは約３０分間以上である。攪拌時間に特に上限はない。例えば、約４８時間以下、約２４時間以下、約１８時間以下、約１２時間以下、約６時間以下、約４時間以下、約２時間以下、約１時間以下、約５０分間以下、約４０分間以下、約３５分間以下など、任意に設定され得る。
【００９９】
このようにしてα−リポ酸と非水溶性界面活性剤とを含む水性分散液が得られる。
【０１００】
（２ａ−２．α−リポ酸とアルカリを混合する工程）
α−リポ酸とアルカリを最初に混合する実施形態の本発明の方法においては、まず、α−リポ酸とアルカリ性物質と水との混合物を作製してα−リポ酸含有水性分散液が調製される。α−リポ酸は、通常、結晶または粉末の形態で市販されている。α−リポ酸を水に添加すると、分散はするが、完全に溶解することはない。α−リポ酸はアルコールには溶解するが、本発明においてはアルコールを使用しないことが好ましい。アルコールを使用するとα−リポ酸のミセル形成効率に悪影響を及ぼし得る。アルカリ性物質は、任意のアルカリ性物質であり得るが、好ましくは、強塩基であり、より好ましくは水酸化ナトリウムである。
【０１０１】
α−リポ酸含有水性分散液は、例えば、まず、水にα−リポ酸を添加して混合し、そこにアルカリ性溶液を添加して混合することによって作製され得る。α−リポ酸含有水性分散液はまた、水にα−リポ酸を添加して混合し、そこにアルカリ性物質を添加して混合することによっても作製され得る。α−リポ酸含有水性分散液はまた、アルカリ性溶液にα−リポ酸を添加して混合することによっても作製され得る。α−リポ酸含有水性分散液はまた、水にα−リポ酸とアルカリ性物質とを添加して混合することによっても作製され得る。
【０１０２】
α−リポ酸含有水性分散液の作製の際に、α−リポ酸とアルカリとの混合（ミセル形成）に実質的に悪影響を及ぼさない限り、他の物質をまた混合してもよい。
【０１０３】
α−リポ酸含有水性分散液を作製するために使用されるα−リポ酸の量は、α−リポ酸含有水性分散液中のα−リポ酸の濃度が、臨界ミセル濃度以上になるように選択される。α−リポ酸含有水性分散液中のα−リポ酸の濃度は、好ましくは約０．１重量％以上であり、より好ましくは約０．５重量％以上であり、より好ましくは約１．０重量％以上である。α−リポ酸含有水性分散液中のα−リポ酸の濃度は、好ましくは約２０重量％以下であり、より好ましくは約１６重量％以下であり、さらに好ましくは約１４重量％以下であり、特に好ましくは約１２重量％以下であり、最も好ましくは約１０重量％以下である。
【０１０４】
α−リポ酸含有水性分散液を作製するために使用されるアルカリ性物質の量は、α−リポ酸を水に分散させる量であれば任意の量であり得る。アルカリ性物質の量は、好ましくは、α−リポ酸含有水性分散液のｐＨを約６．５以上にする量である。アルカリ性物質の量は、好ましくは、α−リポ酸含有水性分散液のｐＨを約１３．５以下にする量であり、より好ましくはα−リポ酸含有水性分散液のｐＨを約１３．０以下にする量であり、特に好ましくはα−リポ酸含有水性分散液のｐＨを約１２．５以下にする量である。
【０１０５】
このようにしてα−リポ酸含有水性分散液が得られる。
【０１０６】
（２ｂ−２．α−リポ酸含有水性分散液と非イオン性界面活性剤を添加する工程）
次いで、このα−リポ酸含有水性分散液に非イオン性界面活性剤を添加する。α−リポ酸のミセルの表面は、マイナス荷電で覆われた状態となっているため、容易に２価金属イオン、たとえばカルシウムイオン（Ｃａ^２＋）が吸着（結合）し、ナトリウムイオンとの交換反応が生じ得る。この場合、２価金属イオンはナトリウムイオンに比較して吸着力（結合力）が高いことから、２価金属イオンを吸着したミセルは、その表面の荷電は解離しにくくなり、水に不溶化して、ミセルが沈澱する。沈澱を生じると、粒子同士の凝集が生じ、非常に大きな粒子を形成することとなる。この段階での粒子同士の凝集を防ぐために、非イオン性界面活性剤が添加される。非イオン性界面活性剤は、α−リポ酸と共に混合ミセルを形成し、ミセル表面上に親水基を突出させるために、多価金属イオンがミセル表面に吸着（結合）しても、ミセル表面に突出した親水基の存在により、ミセルの沈澱が生じないこととなると考えられる。
【０１０７】
この工程で添加される非イオン性界面活性剤の量は任意に選択され得るが、α−リポ酸の濃度を１００としたときに、重量比で、好ましくは約１００％以上であり、より好ましくは約２００％以上であり、さらに好ましくは約３００％以上であり、特に好ましくは約４００％以上であり、最も好ましくは約５００％以上である。この工程で添加される非イオン性界面活性剤の量は、α−リポ酸の濃度を１００％としたときに、重量比で、好ましくは約４０００％以下であり、より好ましくは約３５００％以下であり、さらに好ましくは約３０００％以下であり、特に好ましくは約２５００％以下であり、最も好ましくは約２０００％以下である。
【０１０８】
α−リポ酸含有水性分散液に非イオン性界面活性剤を添加して混合することにより、α−リポ酸と非イオン性界面活性剤との混合ミセルが自然に形成されると考えられる。非イオン性界面活性剤を添加した後の溶液をよく攪拌することが好ましい。攪拌は、ある程度の時間継続されることが好ましい。攪拌時間は、好ましくは約１０分間以上であり、より好ましくは約２０分間以上であり、さらに好ましくは約２５分間以上であり、最も好ましくは約３０分間以上である。攪拌時間に特に上限はない。例えば、約４８時間以下、約２４時間以下、約１８時間以下、約１２時間以下、約６時間以下、約４時間以下、約２時間以下、約１時間以下、約５０分間以下、約４０分間以下、約３５分間以下など、任意に設定され得る。
【０１０９】
このようにしてα−リポ酸と非水溶性界面活性剤を含む水性分散液が得られる。
【０１１０】
（２ｃ．２価金属塩を添加する工程）
次いで、上記２ｂ−１または２ｂ−２で調製された水性分散液に、２価金属塩が添加される。２価金属塩は、この水性分散液に直接添加されてもよく、水溶液として添加されてもよいが、好ましくは、２価金属塩の水溶液として添加される。
【０１１１】
２価金属塩を添加すべき水性分散液は、前の工程のものがそのまま使用され得るが、好ましくは、使用する金属塩に応じて、金属塩を添加する直前にｐＨが調整される。
【０１１２】
本発明者らは、α−リポ酸においてはα−リポ酸の分散に好適なｐＨと、２価金属塩を添加する際に好適なｐＨとが異なり、α−リポ酸および非イオン性界面活性剤を含む混合ミセルを含む水性分散液に２価の金属イオンを付加する際に、金属イオンの種類によって好適なｐＨが存在することを見出した。このｐＨは、２価の金属イオンがＭｇ^２＋の際には約１２．０以下、Ｃａ^２＋の際には約１２．０以下、Ｚｎ^２＋の際には約９．５以下であることが望ましく、さらに好ましくはＭｇ^２＋の際には約１１．５以下、Ｃａ^２＋の際には約１１．５以下、Ｚｎ^２＋の際には約８．８以下が望ましい。
【０１１３】
２価金属塩が塩化カルシウム、臭化カルシウム、フッ化カルシウム、ヨウ化カルシウム、酢酸カルシウムまたはグルコン酸カルシウムである場合、２価金属塩を添加する直前の水性分散液のｐＨは、好ましくは約３．４以上であり、より好ましくは約３．６以上であり、特に好ましくは約３．８以上であり、最も好ましくは約４．０以上であり；２価金属塩を添加する直前の水性分散液のｐＨは好ましくは約１２．０以下であり、さらに好ましくは約１１．９以下であり、特に好ましくは約１１．７以下であり、最も好ましくは約１１．５以下である。
【０１１４】
２価金属塩が塩化マグネシウム、臭化マグネシウム、フッ化マグネシウム、ヨウ化マグネシウム、酢酸マグネシウムまたはグルコン酸マグネシウムである場合、２価金属塩を添加する直前の水性分散液のｐＨは、好ましくは約３．４以上であり、より好ましくは約３．６以上であり、特に好ましくは約３．８以上であり、最も好ましくは約４．０以上であり；２価金属塩を添加する直前の水性分散液のｐＨは好ましくは約１２．０以下であり、さらに好ましくは約１１．９以下であり、特に好ましくは約１１．７以下であり、最も好ましくは約１１．５以下である。
【０１１５】
２価金属塩が塩化亜鉛、臭化亜鉛、フッ化亜鉛、ヨウ化亜鉛、酢酸亜鉛またはグルコン酸亜鉛である場合、２価金属塩を添加する直前の水性分散液のｐＨは、好ましくは約３．５以上であり、より好ましくは約３．７以上であり、最も好ましくは約３．９以上であり；２価金属塩を添加する直前の水性分散液のｐＨは好ましくは約９．５以下であり、さらに好ましくは約９．２以下であり、最も好ましくは約８．８以下である。
【０１１６】
この工程で添加される２価金属塩の量は任意に選択され得るが、α−リポ酸の濃度を１００としたときに、モル比で、好ましくは約１０％以上であり、より好ましくは約２０％以上であり、さらに好ましくは約３０％以上であり、特に好ましくは約４０％以上であり、最も好ましくは約５０％以上である。この工程で添加される２価金属塩の量は、α−リポ酸の濃度を１００％としたときに、モル比で、好ましくは約２００％以下であり、より好ましくは約１６０％以下であり、さらに好ましくは約１４０％以下であり、特に好ましくは約１２０％以下であり、最も好ましくは約１００％以下である。
【０１１７】
水性分散液に２価金属塩を添加して混合することにより、混合ミセル表面のマイナス電荷に２価の金属イオンが結合して、α−リポ酸のミセル同士の凝集および沈澱が防御されると考えられる。２価金属塩を添加した後の溶液をよく攪拌することが好ましい。攪拌は、ある程度の時間継続されることが好ましい。攪拌時間は、好ましくは約１０分間以上であり、より好ましくは約２０分間以上であり、さらに好ましくは約２５分間以上であり、最も好ましくは約３０分間以上である。攪拌時間に特に上限はない。例えば、約４８時間以下、約２４時間以下、約１８時間以下、約１２時間以下、約６時間以下、約４時間以下、約２時間以下、約１時間以下、約５０分間以下、約４０分間以下、約３５分間以下など、任意に設定され得る。
【０１１８】
（２ｄ．アルカリ金属炭酸化物またはアルカリ金属リン酸化物を添加する工程）
次いで、この２価金属塩を添加した水性分散液に、アルカリ金属炭酸化物またはアルカリ金属リン酸化物が添加される。
【０１１９】
アルカリ金属炭酸化物およびアルカリ金属リン酸化物（「２価陰イオンを持つ塩」ともいう）の量は任意に選択され得るが、添加した２価金属塩の量を１としたときの２価陰イオンを持つ塩の量は、モル比で、好ましくは約０．０１以上であり、より好ましくは約０．０２以上であり、さらに好ましくは約０．１以上である。添加した２価金属塩の量を１としたときの２価陰イオンを持つ塩の量は、モル比で、好ましくは約０．８０以下であり、より好ましくは約０．７０以下であり、さらに好ましくは約０．６０以下である。特定の実施形態では、添加した２価金属塩の量を１としたときの２価陰イオンを持つ塩の量は、モル比で、例えば、約０．６０以下、約０．５０以下または約０．４０以下であってもよい。添加した２価金属塩の量を１としたときの２価陰イオンを持つ塩の量は、モル比で、最も好ましくは０．２である。２価金属塩の量に対する２価陰イオンを持つ塩の量が少なすぎるとミセル表面のプラス電荷が中和されず、ミセル同士の凝集及び沈殿の防御効率が低下するという場合がある。２価金属塩の量に対する２価陰イオンを持つ塩の量が多すぎると沈澱が生じやすくなる場合がある。
【０１２０】
例えば、塩化マグネシウムと炭酸ナトリウムのモル比を１：１とした場合、一昼夜放置すると沈澱が生じるようになるが、１：０．０１〜０．８、特に１：０．４までの場合は透明で、長時間の放置でも沈澱を生じない。濁ったり、沈澱が生じたりする場合は、形成された粒子の粒子径が大きすぎるからであり、粒子径が大きすぎると、皮膚透過性が悪くなり、注射する場合でも不都合が生じる。しかし、透明で沈澱も生じない場合は、形成される粒子の粒子径が小さくかつ分布が狭い。したがって皮膚透過性もよく注射にも不都合が生じないのである。
【０１２１】
このようにして、水性分散液中でα−リポ酸ナノ粒子が形成される。
【０１２２】
この工程で添加される２価陰イオンを持つ塩の量は任意に選択され得るが、α−リポ酸の濃度を１００としたときに、モル比で、好ましくは約０．１％以上であり、より好ましくは約０．５％以上であり、さらに好ましくは約１．０％以上であり、特に好ましくは約１．５％以上であり、最も好ましくは約２．０％以上である。この工程で添加される２価陰イオンを持つ塩の量は、α−リポ酸の濃度を１００％としたときに、モル比で、好ましくは約８０％以下であり、より好ましくは約７４％以下であり、さらに好ましくは約６８％以下であり、特に好ましくは約６２％以下であり、最も好ましくは約６０％以下である。特定の実施形態では、この工程で添加される２価陰イオンを持つ塩の量は、α−リポ酸の濃度を１００％としたときに、モル比で、例えば、約５０％以下、約４６％以下、約４４％以下、約４２％以下または約４０％であってもよい。
【０１２３】
２価金属塩を添加した水性分散液に２価陰イオンを持つ塩を添加して混合することにより、ミセル表面に結合した２価金属イオンに２価陰イオンが結合すると考えられる。ミセル表面に結合した２価金属塩に２価陰イオンが結合することにより、ミセル表面の荷電が実質的に中和されると考えられる。ミセル表面では、２価金属イオンと２価陰イオンとが結合して多価金属無機塩を形成していると考えられる。このようにしてミセル表面に多価金属無機塩の被膜が形成されており、その結果、ミセル同士の結合による沈澱が防御されていると考えられる。
【０１２４】
アルカリ金属炭酸化物またはアルカリ金属リン酸化物を添加した後の溶液をよく攪拌することが好ましい。攪拌は、ある程度の時間継続されることが好ましい。攪拌時間は、好ましくは約１０分間以上であり、より好ましくは約２０分間以上であり、さらに好ましくは約２５分間以上であり、最も好ましくは約３０分間以上である。攪拌時間に特に上限はない。例えば、約４８時間以下、約２４時間以下、約１８時間以下、約１２時間以下、約６時間以下、約４時間以下、約２時間以下、約１時間以下、約５０分間以下、約４０分間以下、約３５分間以下など、任意に設定され得る。
【０１２５】
（２ｅ．他の工程）
上記の各工程を行うことにより、水性分散液中でα−リポ酸のナノ粒子が形成される。この水性分散液を必要に応じて乾燥させて粉末を得ることができる。乾燥は、当該分野で公知の任意の方法によって行われ得る。乾燥は、例えば、凍結乾燥、スプレードライ、ドラムドライなどによって行われる。凍結乾燥が好ましい。本発明の方法に従って製造されたα−リポ酸ナノ粒子を含む粉末は、水に添加したときに容易に分散して透明な液を形成する。
【０１２６】
（３．α−リポ酸ナノ粒子）
本発明のα−リポ酸ナノ粒子は、α−リポ酸と、非イオン性界面活性剤と、２価金属イオンと、炭酸イオンまたはリン酸イオンとを含む。
【０１２７】
本発明のα−リポ酸ナノ粒子中の非イオン性界面活性剤の量は、α−リポ酸の濃度を１００としたときに、重量比で、好ましくは約１００％以上であり、より好ましくは約２００％以上であり、さらに好ましくは約３００％以上であり、特に好ましくは約４００％以上であり、最も好ましくは約５００％以上である。本発明のα−リポ酸ナノ粒子中の非イオン性界面活性剤の量は、α−リポ酸の濃度を１００％としたときに、重量比で、好ましくは約４０００％以下であり、より好ましくは約３５００％以下であり、さらに好ましくは約３０００％以下であり、特に好ましくは約２５００％以下であり、最も好ましくは約２０００％以下である。
【０１２８】
本発明のα−リポ酸ナノ粒子中の２価金属イオンの量は、α−リポ酸の濃度を１００としたときに、モル比で、好ましくは約１０％以上であり、より好ましくは約２０％以上であり、さらに好ましくは約３０％以上であり、特に好ましくは約４０％以上であり、最も好ましくは約５０％以上である。本発明のα−リポ酸ナノ粒子中の２価金属イオンの量は、α−リポ酸の濃度を１００％としたときに、モル比で、好ましくは約２００％以下であり、より好ましくは約１６０％以下であり、さらに好ましくは約１４０％以下であり、特に好ましくは約１２０％以下であり、最も好ましくは約１００％以下である。
【０１２９】
本発明のα−リポ酸ナノ粒子中の炭酸イオンまたはリン酸イオン（２価陰イオンともいう）の量は、α−リポ酸の濃度を１００としたときに、モル比で、好ましくは約０．１％以上であり、より好ましくは約０．５％以上であり、さらに好ましくは約１．０％以上であり、特に好ましくは約１．５％以上であり、最も好ましくは約２．０％以上である。本発明のα−リポ酸ナノ粒子中の炭酸イオンまたはリン酸イオンの量は、α−リポ酸の濃度を１００％としたときに、モル比で、好ましくは約８０％以下であり、より好ましくは約７４％以下であり、さらに好ましくは約６８％以下であり、特に好ましくは約６２％以下であり、最も好ましくは約６０％以下である。特定の実施形態では、この工程で添加される２価陰イオンを持つ塩の量は、α−リポ酸の濃度を１００％としたときに、モル比で、例えば、約５０％以下、約４６％以下、約４４％以下、約４２％以下または約４０％であってもよい。
【０１３０】
本発明のα−リポ酸ナノ粒子中の２価金属イオンは、好ましくはカルシウムイオン、亜鉛イオンまたはマグネシウムイオンである。
【０１３１】
本発明のα−リポ酸ナノ粒子中の２価金属イオンの量を１としたときの２価陰イオンの量は、モル比で、好ましくは約０．０１以上であり、より好ましくは約０．１０以上であり、さらに好ましくは約０．２０以上である。本発明のα−リポ酸ナノ粒子中の２価金属イオンの量を１としたときの２価陰イオンの量は、モル比で、好ましくは約０．８０以下であり、より好ましくは約０．５０以下であり、さらに好ましくは約０．４０以下である。本発明のα−リポ酸ナノ粒子中の２価金属イオンの量を１としたときの２価陰イオンの量は、モル比で、最も好ましくは約０．２である。
【０１３２】
（４．α−リポ酸ナノ粒子の用途）
本発明のα−リポ酸ナノ粒子は、従来α−リポ酸が使用されてきた種々の用途に使用され得る。このような用途の例としては、皮膚外用剤、医薬品（注射液を含む）、口腔用組成物および食品が挙げられる。
【０１３３】
（４ａ．α−リポ酸ナノ粒子を含む皮膚外用剤）
本発明の皮膚外用剤は、本発明のα−リポ酸ナノ粒子を含有する。
【０１３４】
本明細書において、用語「皮膚外用剤」とは皮膚に接触させることにより、所望の効果を達成する、皮膚に対して使用する製剤をいう。特に長時間継続的に皮膚に接触させる用途（例えば、約１時間以上継続的に皮膚に接触させる用途、または約５時間以上継続的に皮膚に接触させる用途）に本発明は有効である。
【０１３５】
皮膚外用剤の好ましい例は、化粧料である。
【０１３６】
化粧料の好ましい例としては、スキンケア化粧料が挙げられる。化粧料の具体的な例としては、化粧水、乳液、クリーム等のスキンケア化粧料、ファンデーション、アイシャドウ、口紅、頬紅などの化粧品、頭髪化粧料、エモリエントクリーム、エモリエントローション、クリーム、クリームリンス、コールドクリーム、バニッシングクリーム、ローション、パック剤、ジェル、フェイスパック、石鹸、ボディーソープ、シャンプー、コンディショナー、リンス、入浴剤、浴用剤、洗顔料、シェービングクリーム、ヘアクリーム、ヘアローション、ヘアートリートメント、髪パック、グロス、リップクリーム、ケーキ、などが挙げられる。特に、保湿効果が望まれる用途に本発明は有効である。例えば、スキンケア化粧料に本発明は有効である。本発明は、長時間皮膚に接触させる用途に特に有効であるが、洗顔料やシャンプーなどのように、短時間で使用した後に洗い流してしまうような用途においても本発明は有効である。
【０１３７】
上述したとおり、化粧品も化粧料に含まれる。化粧品としては、清浄用化粧品、頭髪用化粧品、基礎化粧品、メークアップ化粧品、芳香化粧品、日焼け用化粧品、日焼け止め用化粧品、爪化粧品、アイライナー化粧品、アイシャドウ化粧品、チーク、口唇化粧品、口腔化粧品などに分類され、そのいずれの用途にも本発明は有効である。
【０１３８】
また、皮膚外用剤は、医薬品または医薬部外品であってもよい。例えば、薬学的に有効な成分を含む軟膏にα−リポ酸ナノ粒子を配合することもできる。
【０１３９】
乳液、化粧水、クリーム、シャンプー、洗顔料などの化粧品および医薬部外品などの皮膚外用剤にα−リポ酸ナノ粒子を配合することにより、シワ、シミ、ソバカス、色素沈着などの予防および治療に有効な皮膚外用剤が得られる。本発明の皮膚外用剤はまた、肌の保湿を高め、乾燥肌、肌荒れ、アレルギー、アトピー性皮膚炎等の症状改善にも有効である。本発明の皮膚外用剤は、抗酸化能を発揮することにより、皮膚の新陳代謝を活発化する。さらに、本発明の皮膚外用剤は、紫外線等により発生したメラニン色素および活性酸素をすばやく除去することにより、美白効果を発揮し、そして皮膚の障害予防に有効である。したがって、α−リポ酸ナノ粒子を含む皮膚外用剤は、乾燥および紫外線による肌への悪影響を軽減し、シミ、ソバカス等の色素異常症を改善し、くすみ、シワ、たるみ、脱毛等の老化現象を遅延させるのにも有効である。
【０１４０】
本発明の皮膚外用剤の剤形の例としては、軟膏、増粘ゲル系、ローション、油中水型エマルジョン、水中油型エマルジョン、固形状、シート状、パウダー状、ジェル状、ムース状およびスプレー状が挙げられる。メーク落としパックなどのように、皮膚外用剤を布等に含浸させた形態の製品としてもよい。
【０１４１】
皮膚外用剤の剤形をローション、乳液、増粘ゲル系などとする場合、上記の成分の中でも特に、増粘剤のうち、アラビアガム、トラガカントガム、ガラクタン、グアガム、カラギナン、ローカストビーンガム、ペクチン、クインスシード（マルメロ種子）抽出物、褐藻粉末などの植物系高分子；キサンタンガム、デキストラン、プルランなどの微生物系高分子；コラーゲン、カゼイン、アルブミン、ゼラチン、ヒアルロン酸などの動物系高分子；カルボキシメチルデンプン、メチルヒドロキシデンプンなどのデンプン類；メチルセルロース、ニトロセルロース、エチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、セルロース硫酸塩、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、結晶セルロース、セルロース末などのセルロース類；ポリビニルアルコール、ポリビニルメチルエーテル、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマーなどのビニル系高分子；ポリアクリル酸及びその塩、ポリアクリルイミドなどのアクリル系高分子；グリチルリチン酸やアルギン酸などの有機系増粘剤；ベントナイト、ヘクトライト、ラボナイト、珪酸アルミニウムマグネシウム、無水珪酸などの無機系増粘剤；などからなる水溶性増粘剤と、アルコールのうち、エタノール、イソプロパノールなどの低級アルコールとを配合することが効果を増大させる点で好ましい。
【０１４２】
本発明の皮膚外用剤は公知の方法により製造することができる。
【０１４３】
本明細書中では、α−リポ酸ナノ粒子を繊維に結合したり、繊維材料に混合したり、繊維に含浸させたり、または布帛の表面に塗布したりすることにより、その繊維または布帛から製造した衣類（例えば、肌着など）と皮膚とが接触したときにα−リポ酸ナノ粒子が経皮吸収されるような利用方法におけるα−リポ酸ナノ粒子を含む衣類も、皮膚外用剤の概念に含む。α−リポ酸ナノ粒子を繊維に結合することは、例えば、架橋などにより行われ得る。化合物を繊維に結合する方法、繊維材料に混合する方法、繊維に含浸させる方法、布帛表面に塗布する方法などは、当該分野で公知である。
【０１４４】
本発明の方法で合成されたα−リポ酸ナノ粒子を皮膚外用剤に添加するには特別な工程を必要とせず、皮膚外用剤の製造工程の初期において原料と共に添加するか、製造工程中に添加するか、あるいは製造工程の終期に添加する。添加方式は混和、混練、溶解、浸漬、散布、噴霧、塗布等通常の方法を皮膚外用剤の種類および性状に応じて選択する。本発明の方法で合成された皮膚外用剤は、当業者に公知の方法に従って調製され得る。
【０１４５】
本発明の皮膚外用剤に含まれるα−リポ酸ナノ粒子の含有量は、α−リポ酸に換算して、好ましくは約０．００２重量％以上であり、より好ましくは約０．０１重量％以上であり、さらに好ましくは約０．１重量％以上であり、特に好ましくは約０．５重量％以上であり、最も好ましくは約１．０重量％以上である。本発明の皮膚外用剤に含まれるα−リポ酸ナノ粒子の含有量は、α−リポ酸に換算して、好ましくは約１０重量％以下であり、より好ましくは約８重量％以下であり、さらに好ましくは約５重量％以下であり、特に好ましくは約４重量％以下であり、最も好ましくは約３重量％以下である。
【０１４６】
（４ｂ．α−リポ酸ナノ粒子を含む徐放性皮膚外用剤）
本発明の皮膚外用剤は、徐放性製剤であり得る。徐放性製剤は、固体であっても、半固体であっても、液体であってもよいが、好ましくは液体である。
【０１４７】
本発明の方法で合成されたα−リポ酸ナノ粒子を徐放性製剤に添加するには特別な工程を必要とせず、徐放性製剤の製造工程の初期において原料と共に添加するか、製造工程中に添加するか、あるいは製造工程の終期に添加する。添加方式は混和、混練、溶解、浸漬、散布、噴霧、塗布等通常の方法を徐放性製剤の種類および性状に応じて選択する。本発明の徐放性製剤は、当業者に公知の方法に従って調製され得る。
【０１４８】
本発明の徐放性製剤に含まれるα−リポ酸ナノ粒子の含有量は、α−リポ酸に換算して、好ましくは約０．００２重量％以上であり、より好ましくは約０．０１重量％以上であり、さらに好ましくは約０．１重量％以上であり、特に好ましくは約０．５重量％以上であり、最も好ましくは約１．０重量％以上である。本発明の徐放性製剤に含まれるα−リポ酸ナノ粒子の含有量は、α−リポ酸に換算して、好ましくは約１０重量％以下であり、より好ましくは約８重量％以下であり、さらに好ましくは約５重量％以下であり、特に好ましくは約４重量％以下であり、最も好ましくは約３重量％以下である。
【０１４９】
（４ｃ．α−リポ酸ナノ粒子を含む口腔用組成物）
本発明の口腔用組成物は、本発明のα−リポ酸ナノ粒子を含有する。口腔用組成物は、任意の口腔用組成物であり得る。口腔用組成物は、固体であっても、半固体であっても、液体であってもよいが、好ましくは液体である。口腔用組成物の例としては、歯磨剤（例えば、練り歯磨、粉歯磨きなど）、歯用クリーム、含嗽剤（マウスウォッシュを含む）、マウススプレー、崩壊性フィルム、ゲル、トローチが挙げられる。
【０１５０】
本発明の方法で合成されたα−リポ酸ナノ粒子を口腔用組成物に添加するには特別な工程を必要とせず、口腔用組成物の製造工程の初期において原料と共に添加するか、製造工程中に添加するか、あるいは製造工程の終期に添加する。添加方式は混和、混練、溶解、浸漬、散布、噴霧、塗布等通常の方法を口腔用組成物の種類および性状に応じて選択する。本発明の口腔用組成物は、当業者に公知の方法に従って調製され得る。
【０１５１】
本発明の口腔用組成物に含まれるα−リポ酸ナノ粒子の含有量は、α−リポ酸に換算して、好ましくは約０．００２重量％以上であり、より好ましくは約０．０１重量％以上であり、さらに好ましくは約０．１重量％以上であり、特に好ましくは約０．５重量％以上であり、最も好ましくは約１．０重量％以上である。本発明の口腔用組成物に含まれるα−リポ酸ナノ粒子の含有量は、α−リポ酸に換算して、好ましくは約１０重量％以下であり、より好ましくは約８重量％以下であり、さらに好ましくは約５重量％以下であり、特に好ましくは約４重量％以下であり、最も好ましくは約３重量％以下である。
【０１５２】
（４ｅ．α−リポ酸ナノ粒子を含む食品）
本発明の食品は、本発明のα−リポ酸ナノ粒子を含有する。食品は、任意の食品であり得る。食品は、固体であっても、半固体であっても、液体であってもよいが、好ましくは液体である。食品は、好ましくは、健康食品であり、より好ましくは健康飲料であるが、これらに限定されない。健康食品は、その健康食品に含まれるα−リポ酸と同じ通常の用途に用いられ得る。健康食品の用途・効能の例としては、シワ、シミ、ソバカス、色素沈着などが挙げられる。
【０１５３】
食品は、例えば、冷菓（アイスクリーム、アイスミルク、氷菓など）、嗜好性飲料（例えば、清涼飲料、炭酸飲料（サイダー、ラムネ等）、薬味飲料、アルコール性飲料、粉末ジュースなど）、乳製品（牛乳、ヨーグルト、アイスクリーム、バター、マーガリン、チーズ、ホイップクリーム等）、菓子類（洋菓子、和菓子、スナック菓子等、例えば、あんこ、羊羹、饅頭、チョコレート、ガム、ゼリー、寒天、杏仁豆腐、ケーキ、カステラ、クッキー、煎餅、錠菓等）、パン、餅、水産練製品（蒲鉾、ちくわ等）、畜肉加工品（ソーセージ、ハム等）、果実加工品（ジャム、マーマレード、果実ソース等）、調味料（ドレッシング、マヨネーズ、味噌等）、麺類（うどん、そば等）、漬物、および蓄肉、魚肉、果実の瓶詰、缶詰類などであり得る。
【０１５４】
本発明の方法で合成されたα−リポ酸ナノ粒子を食品に添加するには特別な工程を必要とせず、食品の製造工程の初期において原料と共に添加するか、製造工程中に添加するか、あるいは製造工程の終期に添加する。添加方式は混和、混練、溶解、浸漬、散布、噴霧、塗布等通常の方法を食品の種類および性状に応じて選択する。本発明の食品は、当業者に公知の方法に従って調製され得る。
【０１５５】
本発明の食品に含まれるα−リポ酸ナノ粒子の含有量は、α−リポ酸に換算して、好ましくは約０．０１重量％以上であり、より好ましくは約０．０５重量％以上であり、さらに好ましくは約０．１重量％以上であり、特に好ましくは約０．５重量％以上であり、最も好ましくは約１．０重量％以上である。本発明の食品に含まれるα−リポ酸ナノ粒子の含有量は、α−リポ酸に換算して、好ましくは約１０重量％以下であり、より好ましくは約８重量％以下であり、さらに好ましくは約５重量％以下であり、特に好ましくは約４重量％以下であり、最も好ましくは約３重量％以下である。
【０１５６】
（４ｆ．α−リポ酸ナノ粒子を含む医薬品）
本発明の医薬品は、本発明のα−リポ酸ナノ粒子を含有する。医薬品は、任意の医薬品であり得る。医薬品の形態は、任意であり得る。本発明の医薬品は、散剤、顆粒剤、錠剤（タブレット）、カプセル剤、丸剤、液剤、分散剤、軟膏、クリームなどであり得る。本発明の医薬品が経口投与用途に使用される場合、本発明の医薬品は好ましくは、タブレット、粉末製剤、内服液、カプセル剤などの形態である。本発明の医薬品が非経口投与用途に使用される場合、好ましくは、注射剤、軟膏またはクリーム剤であるが、これに限定されない。本発明の医薬品を用いることにより、α−リポ酸ナノ粒子が体内で徐々に分解することによって徐放効果が得られ得る。
【０１５７】
本発明の医薬品は、α−リポ酸を主成分とする通常の医薬品と同じ通常の用途に用いられ得る。本発明の医薬品の用途・効能の例としては、チオクト酸の需要が増大した際の補給（激しい肉体労働時）、リー症候群（亜急性壊死性脳脊髄炎）、中毒性（ストレプトマイシン、カナマイシンによる）および騒音性（職業性）の内耳性難聴が挙げられる。本発明の医薬品はまた、重金属の解毒のための点滴剤または注射剤であってもよい。本発明の医薬品はまた、糖尿病の治療のための経口投与用の医薬品であり得る。
【０１５８】
本発明の方法で合成されたα−リポ酸ナノ粒子を医薬品に添加するには特別な工程を必要とせず、医薬品の製造工程の初期において原料と共に添加するか、製造工程中に添加するか、あるいは製造工程の終期に添加する。添加方式は混和、混練、溶解、浸漬、散布、噴霧、塗布等通常の方法を医薬品の種類および性状に応じて選択する。本発明の医薬品は、当業者に公知の方法に従って調製され得る。
【０１５９】
本発明の医薬品に含まれるα−リポ酸ナノ粒子の含有量は、α−リポ酸に換算して、好ましくは約０．０１重量％以上であり、より好ましくは約０．０５重量％以上であり、さらに好ましくは約０．１重量％以上であり、特に好ましくは約０．５重量％以上であり、最も好ましくは約１．０重量％以上である。本発明の医薬品に含まれるα−リポ酸ナノ粒子の含有量は、α−リポ酸に換算して、好ましくは約１０重量％以下であり、より好ましくは約８重量％以下であり、さらに好ましくは約５重量％以下であり、特に好ましくは約４重量％以下であり、最も好ましくは約３重量％以下である。
【実施例】
【０１６０】
以下の実施例および比較例においては、試薬として以下のものを用いた：
α−リポ酸：和光純薬社製 α−リポ酸 特級（純度９８％以上、粉末状）；
ショ糖ラウリン酸エステル：三菱化学フーズ株式会社製リョートーシュガーエステルＬ−１６９５（ＨＬＢ値約１５；結合脂肪酸約９９％；モノエステル約８０％；ジ・トリ・ポリエステル約２０％）；
ポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油：日光ケミカルズ社製ＮＩＫＫＯＬ ＨＣＯ−６０（ＨＬＢ約１４；白色〜微黄色のペースト〜固体）；
ポリオキシエチレンオクチドデシルエーテル：花王株式会社製エマルゲン２０２０Ｇ−ＨＡ（ＨＬＢ値１３．０）；
ＰＯＥ（２０）ＰＯＰ（８）セチルエーテル：日光ケミカルズ社製ＮＩＫＫＯＬ ＰＢＣ４４（ＨＬＢ約１２．５；白色〜微黄色の固体）
ＰＯＥ（２０）ステアリルエーテル：日光ケミカルズ社製ＮＩＫＫＯＬ ＢＳ−２０（ＨＬＢ１８．０；白色〜微黄色の固体）；
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレイン酸エステル：日油株式会社製ポリソルベート（８０）（ＨＬＢ約１５；無色透明の液体）；
ＭｇＣｌ_２：市販品、試薬グレード；
ＣａＣｌ_２：市販品、試薬グレード；
グルコン酸亜鉛：市販品、試薬グレード；
Ｎａ_２ＣＯ_３：市販品、試薬グレード；
Ｎａ_２ＨＰＯ_４：市販品、試薬グレード。
【０１６１】
（実施例１：α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例１Ａ）
α−リポ酸 ０．５ｇを９ｍＬのイオン交換水に添加して混合し、この混合液に５Ｍ ＮａＯＨを加えて混合液のｐＨを７．２に調整した。ｐＨが７．２になると、α−リポ酸の粉末が消滅し、溶液のような透明な外観になった。この溶液をイオン交換水で１０ｍＬにメスアップした。この溶液を母液として１００μＬ採取し、これをリョートーシュガーエステルＬ−１６９５ ０．１ｇを含む蒸留水０．９ｍＬに加え、よく攪拌した。攪拌を約３０分間行った後、この溶液に０．５Ｍ ＭｇＣｌ_２を２０μＬ加えて攪拌した。攪拌を３０分間行った後、この溶液に０．１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３を２０μＬ加えてさらに攪拌した。これにより、α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。この透明な分散液を一昼夜（２４時間）攪拌した後、分散液を１晩かけて凍結乾燥させてペーストを得た。このα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を他の試験に使用する際は、凍結乾燥後のペーストを蒸留水で所定の濃度に再分散させて使用した。この凍結乾燥後のペーストを蒸留水に添加したところ、よく再分散し、透明な分散液が得られた。これは、凍結乾燥後に対してα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子が安定であることを示す。
【０１６２】
（実施例１Ｂ）
母液の調製のためにイオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例１Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含むペーストを得た。このα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を他の試験に使用する際は、凍結乾燥後のペーストを蒸留水で所定の濃度に再分散させて使用した。この凍結乾燥後のペーストを蒸留水に添加したところ、よく再分散し、透明な分散液が得られた。これは、凍結乾燥後に対してα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子が安定であることを示す。
【０１６３】
（実施例２：α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例２Ａ）
α−リポ酸 ０．２５ｇを９ｍＬのイオン交換水に添加して混合し、この混合液に５Ｍ ＮａＯＨを加えて混合液のｐＨを７．１に調整した。ｐＨが７．１になると、α−リポ酸の粉末が消滅し、溶液のような透明な外観になった。この溶液をイオン交換水で１０ｍＬにメスアップした。この溶液を母液として１００μＬ採取し、これをリョートーシュガーエステルＬ−１６９５ ０．１ｇを含む蒸留水０．９ｍＬに加え、よく攪拌した。攪拌を約３０分間行った後、この溶液に０．５Ｍ ＭｇＣｌ_２を２０μＬ加えて攪拌した。攪拌を３０分間行った後、この溶液に０．１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３を２０μＬ加えてさらに攪拌した。これにより、α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。この透明な分散液を一昼夜（２４時間）攪拌した後、分散液を１晩かけて凍結乾燥させてペーストを得た。このα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を他の試験に使用する際は、凍結乾燥後のペーストを蒸留水で所定の濃度に再分散させて使用した。この凍結乾燥後のペーストを蒸留水に添加したところ、よく再分散し、透明な分散液が得られた。これは、凍結乾燥に対してα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子が安定であることを示す。
【０１６４】
（実施例２Ｂ）
母液の調製のためにイオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例２Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含むペーストを得た。このα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を他の試験に使用する際は、凍結乾燥後のペーストを蒸留水で所定の濃度に再分散させて使用した。この凍結乾燥後のペーストを蒸留水に添加したところ、よく再分散し、透明な分散液が得られた。これは、凍結乾燥に対してα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子が安定であることを示す。
【０１６５】
（比較例１：α−リポ酸分散液の作製）
（比較例１Ａ）
α−リポ酸 ０．５ｇを９ｍＬのイオン交換水に添加して混合し、この混合液に５Ｍ ＮａＯＨを加えて混合液のｐＨを７．２に調整した。ｐＨが約７．２になると、α−リポ酸の粉末が消滅し、溶液のような透明な外観になった。この溶液をイオン交換水で１０ｍＬにメスアップした。この溶液を母液として１００μＬ採取し、これをリョートーシュガーエステルＬ−１６９５ ０．１ｇを含む蒸留水０．９ｍＬに加え、よく攪拌した。この分散液を一昼夜（２４時間）攪拌した後、分散液を１晩かけて凍結乾燥させてペーストを得た。
【０１６６】
（比較例１Ｂ）
母液の調製のためにイオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は比較例１Ａと同じ手順でペーストを得た。
【０１６７】
（測定例１：粒子径の測定）
実施例１Ａで使用した作製したα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子のペーストと、塩化マグネシウムと炭酸ナトリウムを添加しないで作製した比較例１Ａのα−リポ酸ナノ粒子のペーストそれぞれ０．３ｇを３ｍＬの水に添加し、３時間程度４℃で放置した後、１分間攪拌することによって分散させ、光散乱光度計（大塚電子 ＥＬＳ−７１０ＴＹ）によって粒子径を測定した。その結果、実施例１Ａで作製したα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の粒子径が約１０ｎｍであり、塩化マグネシウムと炭酸ナトリウムを添加しないで作製した比較例１Ａのα−リポ酸ナノ粒子の粒子径が約７６０ｎｍであることが確認できた。蒸留水を使用した場合もイオン交換水を使用した場合も粒子径はほぼ同じであった。実施例１Ａで蒸留水を使用して作製したα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の粒子径分布を（大塚電子 ＥＬＳ−７１０ＴＹ）によって測定した結果を、図１に示し、比較例１Ａで蒸留水を使用して作製したα−リポ酸ナノ粒子の粒子径分布を光散乱光度計（大塚電子 ＥＬＳ−７１０ＴＹ）によって測定した結果を図２に示す。
【０１６８】
（実施例３：α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例３Ａ）
α−リポ酸 ０．５ｇを９ｍＬのイオン交換水に添加して混合し、この混合液に５Ｍ ＮａＯＨを加えて混合液のｐＨを７．０に調整した。ｐＨが７．０になると、α−リポ酸の粉末が消滅し、溶液のような透明な外観になった。この溶液をイオン交換水で１０ｍＬにメスアップした。この溶液を母液として１００μＬ採取し、これをＨＣＯ−６０ ０．１ｇを含む蒸留水０．９ｍＬに加え、よく攪拌した。攪拌を約３０分間行った後、この溶液に０．５Ｍ ＭｇＣｌ_２を２０μＬ加えて攪拌した。攪拌を３０分間行った後、この溶液に０．１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３を２０μＬ加えてさらに攪拌した。これにより、α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０１６９】
（実施例３Ｂ）
母液の調製のためにイオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例３Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０１７０】
（実施例４：α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例４Ａ）
α−リポ酸 ０．５ｇを９ｍＬのイオン交換水に添加して混合し、この混合液に５Ｍ ＮａＯＨを加えて混合液のｐＨを７．３に調整した。ｐＨが７．３になると、α−リポ酸の粉末が消滅し、溶液のような透明な外観になった。この溶液をイオン交換水で１０ｍＬにメスアップした。この溶液を母液として５０μＬ採取し、これをエマルゲン２０２０Ｇ−ＨＡ ０．０２ｇを含む蒸留水０．９５ｍＬに加え、よく攪拌した。攪拌を約３０分間行った後、この溶液に０．５Ｍ ＭｇＣｌ_２を１０μＬ加えて攪拌した。攪拌を３０分間行った後、この溶液に０．１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３を５μＬ加えてさらに攪拌した。これにより、α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０１７１】
（実施例４Ｂ）
母液の調製のためにイオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例４Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０１７２】
（実施例５：α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例５Ａ）
α−リポ酸 ０．５ｇを９ｍＬのイオン交換水に添加して混合し、この混合液に５Ｍ ＮａＯＨを加えて混合液のｐＨを７．１に調整した。ｐＨが７．１になると、α−リポ酸の粉末が消滅し、溶液のような透明な外観になった。この溶液をイオン交換水で１０ｍＬにメスアップした。この溶液を母液として５０μＬ採取し、これをＨＣＯ−６０ ０．０５ｇを含む蒸留水０．９５ｍＬに加え、よく攪拌した。攪拌を約３０分間行った後、０．１Ｍ ＨＣｌまたは０．１Ｍ ＮａＯＨでこの溶液のｐＨを６．６に調整し、その後、０．５Ｍ ＣａＣｌ_２を１０μＬ加えて攪拌した。攪拌を３０分間行った後、この溶液に０．１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３を１０μＬ加えてさらに攪拌した。これにより、α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。この透明な分散液を一昼夜（２４時間）攪拌した後、分散液を１晩かけて凍結乾燥し、ペーストとした。
【０１７３】
（実施例５Ｂ）
母液の調製のためにイオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例５Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含むペーストを得た。
【０１７４】
（実施例６：α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例６Ａ）
α−リポ酸 ０．５ｇを９ｍＬのイオン交換水に添加して混合し、この混合液に５Ｍ ＮａＯＨを加えて混合液のｐＨを７．０に調整した。ｐＨが７．０になると、α−リポ酸の粉末が消滅し、溶液のような透明な外観になった。この溶液をイオン交換水で１０ｍＬにメスアップした。この溶液を母液として２０μＬ採取し、これをエマルゲン２０２０Ｇ−ＨＡ ０．０２ｇを含む蒸留水０．９８ｍＬに加え、よく攪拌した。攪拌を約３０分間行った後、０．１Ｍ ＨＣｌまたは０．１Ｍ ＮａＯＨでこの溶液のｐＨを６．２に調整し、その後、０．５Ｍ ＣａＣｌ_２を５μＬ加えて攪拌した。攪拌を３０分間行った後、この溶液に０．１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３を５μＬ加えてさらに攪拌した。これにより、α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０１７５】
（実施例６Ｂ）
母液の調製のためにイオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例６Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０１７６】
（実施例７：α−リポ酸−ＣａＰＯ_４ナノ粒子の作製）
（実施例７Ａ）
α−リポ酸 ０．５ｇを９ｍＬのイオン交換水に添加して混合し、この混合液に５Ｍ ＮａＯＨを加えて混合液のｐＨを６．９に調整した。ｐＨが６．９になると、α−リポ酸の粉末が消滅し、溶液のような透明な外観になった。この溶液をイオン交換水で１０ｍＬにメスアップした。この溶液を母液として２０μＬ採取し、これをＨＣＯ−６０ ０．０２ｇを含む蒸留水０．９８ｍＬに加え、よく攪拌した。攪拌を約３０分間行った後、０．１Ｍ ＨＣｌまたは０．１Ｍ ＮａＯＨでこの溶液のｐＨを６．４に調整し、その後、０．５Ｍ ＣａＣｌ_２を５μＬ加えて攪拌した。攪拌を３０分間行った後、この溶液に０．１Ｍ Ｎａ_２ＨＰＯ_４を５μＬ加えてさらに攪拌した。これにより、α−リポ酸−ＣａＰＯ_４ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。この透明な分散液を一昼夜（２４時間）攪拌した後、分散液を１晩かけて凍結乾燥し、ペーストとした。
【０１７７】
（実施例７Ｂ）
母液の調製のためにイオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例７Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＣａＰＯ_４ナノ粒子を含むペーストを得た。
【０１７８】
（実施例８：α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例８Ａ）
α−リポ酸 ０．５ｇを９ｍＬのイオン交換水に添加して混合し、この混合液に１Ｍ ＮａＯＨを加えて混合液のｐＨを１１．７に調整した。ｐＨが１１．７になると、α−リポ酸の粉末が消滅し、溶液のような透明な外観になった。この溶液をイオン交換水で１０ｍＬにメスアップした。この溶液を母液として１００μＬ採取し、これをＰＯＥ（２０）ＰＯＰ（８）セチルエーテル（ＰＢＣ４４）０．１ｇを含む蒸留水０．９ｍＬに加え、よく攪拌した。攪拌を約３０分間行った後、０．１Ｍ ＨＣｌまたは０．１Ｍ ＮａＯＨでこの溶液のｐＨを１１．０に調整し、その後、０．５Ｍ ＣａＣｌ_２を４０μＬ加えて攪拌した。攪拌を３０分間行った後、この溶液に０．１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３を４μＬ加えてさらに攪拌した。これにより、α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０１７９】
（実施例８Ｂ）
母液の調製のためにイオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例８Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０１８０】
（実施例９：α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例９Ａ）
α−リポ酸 ０．５ｇを９ｍＬのイオン交換水に添加して混合し、この混合液に１Ｍ ＮａＯＨを加えて混合液のｐＨを１１．５に調整した。ｐＨが１１．５になると、α−リポ酸の粉末が消滅し、溶液のような透明な外観になった。この溶液をイオン交換水で１０ｍＬ）にメスアップした。この溶液を母液として１００μＬ採取し、これをＰＯＥ（２０）ステアリルエーテル ０．０２ｇを含む蒸留水０．９ｍＬに加え、よく攪拌した。攪拌を約３０分間行った後、０．１Ｍ ＨＣｌまたは０．１Ｍ ＮａＯＨでこの溶液のｐＨを１０．８に調整し、その後、０．５Ｍ ＣａＣｌ_２を４０μＬ加えて攪拌した。攪拌を３０分間行った後、この溶液に０．１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３を４μＬ加えてさらに攪拌した。これにより、α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０１８１】
（実施例９Ｂ）
母液の調製のためにイオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例９Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０１８２】
（実施例１０：α−リポ酸−ＺｎＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例１０Ａ）
α−リポ酸 ０．５ｇを９ｍＬのイオン交換水に添加して混合し、この混合液に５Ｍ ＮａＯＨを加えて混合液のｐＨを６．８に調整した。ｐＨが６．８になると、α−リポ酸の粉末が消滅し、溶液のような透明な外観になった。この溶液をイオン交換水で１０ｍＬにメスアップした。この溶液を母液として１００μＬ採取し、これをＨＣＯ−６０ ０．１ｇを含む蒸留水０．９ｍＬに加え、よく攪拌した。攪拌を約３０分間行った後、０．１Ｍ ＨＣｌでこの溶液のｐＨを５．０に調整し、その後、５％ グルコン酸亜鉛溶液を２０μＬ加えて攪拌した。攪拌を３０分間行った後、この溶液に０．１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３を２０μＬ加えてさらに攪拌した。これにより、α−リポ酸−ＺｎＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０１８３】
（実施例１０Ｂ）
母液の調製のためにイオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例１０Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＺｎＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０１８４】
（実施例１１：α−リポ酸−ＺｎＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例１１Ａ）
α−リポ酸 ０．５ｇを９ｍＬのイオン交換水に添加して混合し、この混合液に５Ｍ ＮａＯＨを加えて混合液のｐＨを６．９に調整した。ｐＨが６．９になると、α−リポ酸の粉末が消滅し、溶液のような透明な外観になった。この溶液をイオン交換水で１０ｍＬにメスアップした。この溶液を母液として１００μＬ採取し、これをＨＣＯ−６０ ０．１ｇを含む蒸留水０．９ｍＬに加え、よく攪拌した。攪拌を約３０分間行った後、０．１Ｍ ＨＣｌでこの溶液のｐＨを５．０に調整し、その後、０．５Ｍ 酢酸亜鉛溶液を２０μＬ加えて攪拌した。攪拌を３０分間行った後、この溶液に０．１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３を２０μＬ加えてさらに攪拌した。これにより、α−リポ酸−ＺｎＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０１８５】
（実施例１１Ｂ）
母液の調製のためにイオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例１１Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＺｎＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０１８６】
（実施例１２：α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例１２Ａ）
α−リポ酸 ０．５ｇを９ｍＬのイオン交換水に添加して混合し、この混合液に５Ｍ ＮａＯＨを加えて混合液のｐＨを６．９に調整した。ｐＨが６．９になると、α−リポ酸の粉末が消滅し、溶液のような透明な外観になった。この溶液をイオン交換水で１０ｍＬにメスアップした。この溶液を母液として１００μＬ採取し、これをリョートーシュガーエステルＬ−１６９５ ０．１ｇを含む蒸留水０．９ｍＬに加え、よく攪拌した。攪拌を約３０分間行った後、０．１Ｍ ＨＣｌでこの溶液のｐＨを６．８に調整し、その後、０．５Ｍ 塩化マグネシウム溶液を４０μＬ加えて攪拌した。攪拌を３０分間行った後、この溶液に０．１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３を８０μＬ加えてさらに攪拌した。これにより、α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０１８７】
（実施例１２Ｂ）
母液の調製のためにイオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例１２Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０１８８】
（実施例１３：α−リポ酸−ＺｎＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例１３Ａ）
α−リポ酸 ０．５ｇを９ｍＬのイオン交換水に添加して混合し、この混合液に５Ｍ ＮａＯＨを加えて混合液のｐＨを６．９に調整した。ｐＨが６．９になると、α−リポ酸の粉末が消滅し、溶液のような透明な外観になった。この溶液をイオン交換水で１０ｍＬにメスアップした。この溶液を母液として１００μＬ採取し、これをＨＣＯ−６０ ０．１ｇを含む蒸留水０．９ｍＬに加え、よく攪拌した。攪拌を約３０分間行った後、０．１Ｍ ＨＣｌでこの溶液のｐＨを３．９に調整し、その後、０．５Ｍ 酢酸亜鉛溶液を２０μＬ加えて攪拌した。攪拌を３０分間行った後、この溶液に０．１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３を２０μＬ加えてさらに攪拌した。これにより、α−リポ酸−ＺｎＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０１８９】
（実施例１３Ｂ）
母液の調製のためにイオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例１３Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＺｎＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０１９０】
（実施例１４：α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例１４Ａ）
α−リポ酸 ０．５ｇを９ｍＬのイオン交換水に添加して混合し、この混合液に５Ｍ ＮａＯＨを加えて混合液のｐＨを１０．９に調整した。ｐＨが１０．９になると、α−リポ酸の粉末が消滅し、溶液のような透明な外観になった。この溶液をイオン交換水で１０ｍＬにメスアップした。この溶液を母液として１００μＬ採取し、これをＨＣＯ−６０ ０．１ｇを含む蒸留水０．９ｍＬに加え、よく攪拌した。攪拌を約３０分間行った後、０．１Ｍ ＨＣｌでこの溶液のｐＨを６．４に調整し、その後、０．５Ｍ 塩化カルシウム溶液を４０μＬ加えて攪拌した。攪拌を３０分間行った後、この溶液に０．１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３を４０μＬ加えてさらに攪拌した。これにより、α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０１９１】
（実施例１４Ｂ）
母液の調製のためにイオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例１４Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０１９２】
（実施例１５：α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例１５Ａ）
α−リポ酸 ０．５ｇを９ｍＬのイオン交換水に添加して混合し、この混合液に５Ｍ ＮａＯＨを加えて混合液のｐＨを８．７に調整した。ｐＨが８．７になると、α−リポ酸の粉末が消滅し、溶液のような透明な外観になった。この溶液をイオン交換水で１０ｍＬにメスアップした。この溶液を母液として１００μＬ採取し、これをＨＣＯ−６０ ０．１ｇを含む蒸留水０．９ｍＬに加え、よく攪拌した。攪拌を約３０分間行った後、０．１Ｍ ＨＣｌでこの溶液のｐＨを６．３に調整し、その後、０．５Ｍ 塩化カルシウム溶液を４０μＬ加えて攪拌した。攪拌を３０分間行った後、この溶液に０．１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３を４０μＬ加えてさらに攪拌した。これにより、α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０１９３】
（実施例１５Ｂ）
母液の調製のためにイオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例１５Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０１９４】
（実施例１６：α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例１６Ａ）
α−リポ酸 ０．５ｇを９ｍＬのイオン交換水に添加して混合し、この混合液に５Ｍ ＮａＯＨを加えて混合液のｐＨを６．９に調整した。ｐＨが６．９になると、α−リポ酸の粉末が消滅し、溶液のような透明な外観になった。この溶液をイオン交換水で１０ｍＬにメスアップした。この溶液を母液として１００μＬ採取し、これをＨＣＯ−６０ ０．１ｇを含む蒸留水０．９ｍＬに加え、よく攪拌した。攪拌を約３０分間行った後、０．１Ｍ ＨＣｌでこの溶液のｐＨを６．４に調整し、その後、０．５Ｍ 塩化カルシウム溶液を２０μＬ加えて攪拌した。攪拌を３０分間行った後、この溶液に０．１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３を４０μＬ加えてさらに攪拌した。これにより、α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０１９５】
（実施例１６Ｂ）
母液の調製のためにイオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例１６Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０１９６】
（実施例１７：α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例１７Ａ）
α−リポ酸 ０．５ｇを９ｍＬのイオン交換水に添加して混合し、この混合液に５Ｍ ＮａＯＨを加えて混合液のｐＨを６．９に調整した。ｐＨが６．９になると、α−リポ酸の粉末が消滅し、溶液のような透明な外観になった。この溶液をイオン交換水で１０ｍＬにメスアップした。この溶液を母液として１００μＬ採取し、これをエマルゲン２０２０Ｇ−ＨＡ ０．１ｇを含む蒸留水０．９ｍＬに加え、よく攪拌した。攪拌を約３０分間行った後、０．１Ｍ ＨＣｌでこの溶液のｐＨを６．７に調整し、その後、０．５Ｍ 塩化カルシウム溶液を２０μＬ加えて攪拌した。攪拌を３０分間行った後、この溶液に０．１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３を４０μＬ加えてさらに攪拌した。これにより、α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０１９７】
（実施例１７Ｂ）
母液の調製のためにイオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例１７Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０１９８】
（実施例１８：α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例１８Ａ）
α−リポ酸 ０．５ｇを９ｍＬのイオン交換水に添加して混合し、この混合液に５Ｍ ＮａＯＨを加えて混合液のｐＨを１１．８に調整した。ｐＨが１１．８になると、α−リポ酸の粉末が消滅し、溶液のような透明な外観になった。この溶液をイオン交換水で１０ｍＬにメスアップした。この溶液を母液として１００μＬ採取し、これをＨＣＯ−６０ ０．１ｇを含む蒸留水０．９ｍＬに加え、よく攪拌した。攪拌を約３０分間行った後、０．１Ｍ ＨＣｌでこの溶液のｐＨを１０．９に調整し、その後、０．５Ｍ ＣａＣｌ_２を２０μＬ加えて攪拌した。攪拌を３０分間行った後、この溶液に０．１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３を２０μＬ加えてさらに攪拌した。これにより、α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０１９９】
（実施例１８Ｂ）
母液の調製のためにイオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例１８Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２００】
（実施例１９：α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例１９Ａ）
α−リポ酸 ０．５ｇを９ｍＬのイオン交換水に添加して混合し、この混合液に５Ｍ ＮａＯＨを加えて混合液のｐＨを９．１に調整した。ｐＨが９．１になると、α−リポ酸の粉末が消滅し、溶液のような透明な外観になった。この溶液をイオン交換水で１０ｍＬにメスアップした。この溶液を母液として１００μＬ採取し、これをリョートーシュガーエステルＬ−１６９５ ０．１ｇを含む蒸留水０．９ｍＬに加え、よく攪拌した。攪拌を約３０分間行った後、０．１Ｍ ＨＣｌでこの溶液のｐＨを８．５に調整し、その後、０．５Ｍ ＭｇＣｌ_２溶液を２０μＬ加えて攪拌した。攪拌を３０分間行った後、この溶液に０．１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３を２０μＬ加えてさらに攪拌した。これにより、α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２０１】
（実施例１９Ｂ）
母液の調製のためにイオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例１９Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２０２】
（実施例２０：α−リポ酸−ＭｇＣＯ₃ナノ粒子の作製）
（実施例２０Ａ）
α−リポ酸０．０５ｇに０．２８ｇの１Ｍ ＮａＯＨを添加して混合し、完全に溶解するまで攪拌した。そこに注射用水（大塚製薬製 日本薬局方注射用水）を９．３２８ｍｌ添加し混合した。この混合液にＰＯＥ（２０）ステアリルエーテルを０．３ｇ加えて３０分以上攪拌した後、５Ｎ ＨＣｌでこの溶液のｐＨを７．０に調整した。そこに２．５Ｍ ＭｇＣｌ_２を４０μＬ添加しよく攪拌した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３を２μＬ加えてさらに攪拌し、注射用水を加えて１０ｍｌとした。これによりα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２０３】
（実施例２０Ｂ）
注射用水の代わりにイオン交換水を用いたこと以外は実施例２０Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２０４】
（実施例２１：α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例２１Ａ）
α−リポ酸０．０５ｇに９５０μＬの０．２６Ｍ ＮａＯＨを添加して混合し、完全に溶解するまで攪拌した。そこにＰＯＥ（２０）ステアリルエーテルを０．２５ｇ加えよく攪拌した後、そこにイオン交換水を３．６２６ｍｌ添加して３０分以上攪拌した。５Ｎ ＨＣｌでこの溶液のｐＨを５．５に調整した。そこに２．５Ｍ ＭｇＣｌ_２を４８μＬ添加してよく攪拌した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３を４８μＬ加えてさらに攪拌し、イオン交換水を加えて５ｍｌとした。これによりα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２０５】
（実施例２１Ｂ）
イオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例２１Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２０６】
（比較例２２−１：α−リポ酸分散液の作製）
（比較例２２−１Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（ＨＣＯ−６０）４．０ｇへα−リポ酸粉末０．５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。この混合物に約３５ｍｌの蒸留水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを６．８に調整した後、さらに蒸留水を加えて５０ｍｌとした。これにより、α−リポ酸分散液が得られた。
【０２０７】
（比較例２２−１Ｂ）
蒸留水の代わりに同量のイオン交換水を用いたこと以外は比較例２２−１Ａと同じ手順でα−リポ酸分散液を得た。
【０２０８】
（比較例２２−２：α−リポ酸分散液の作製）
（比較例２２−２Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（ＨＣＯ−６０）５．０ｇへα−リポ酸粉末０．５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。この混合物に約３５ｍｌのイオン交換水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを７．０に調整した後、さらにイオン交換水を加えて５０ｍｌとした。これにより、α−リポ酸分散液が得られた。
【０２０９】
（比較例２２−２Ｂ）
イオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は比較例２２−２Ａと同じ手順でα−リポ酸分散液を得た。
【０２１０】
（実施例２２：α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例２２Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（ＨＣＯ−６０）４．０ｇへα−リポ酸粉末０．５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。この混合物に約３５ｍｌの蒸留水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．６に調整した。ここに、５Ｍ ＣａＣｌ_２水溶液０．４８ｍｌを添加して混合した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を０．９６ｍｌ加えてさらに混合した。この溶液のｐＨを測定し、１Ｍ ＮａＯＨ又は１Ｍ ＨＣｌでｐＨ６．７に調整し、さらに蒸留水を加えて５０ｍｌとした。これにより、α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２１１】
（実施例２２Ｂ）
蒸留水の代わりに同量のイオン交換水を用いたこと以外は実施例２２Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２１２】
（実施例２３：α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例２３Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（ＨＣＯ−６０）４．０ｇへα−リポ酸粉末０．５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。この混合物に約３５ｍｌのイオン交換水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．６に調整した。ここに、２．５Ｍ ＭｇＣｌ_２水溶液０．９６ｍｌを添加して混合した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を０．９６ｍｌ加えてさらに混合した。この溶液のｐＨを測定し、１Ｍ ＮａＯＨ又は１Ｍ ＨＣｌでｐＨ６．８に調整し、さらにイオン交換水を加えて５０ｍｌとした。これによりα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２１３】
（実施例２３Ｂ）
イオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例２３Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２１４】
（実施例２４：α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例２４Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（ＨＣＯ−６０）４．０ｇへα−リポ酸粉末０．５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。この混合物に約３５ｍｌの蒸留水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．３に調整した。ここに、５Ｍ ＣａＣｌ_２水溶液０．２４ｍｌを添加して混合した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を０．２４ｍｌ加えてさらに混合した。この溶液のｐＨを測定し、１Ｍ ＮａＯＨ又は１Ｍ ＨＣｌでｐＨ６．７に調整し、さらに蒸留水を加えて５０ｍｌとした。これにより、α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２１５】
（実施例２４Ｂ）
蒸留水の代わりに同量のイオン交換水を用いたこと以外は実施例２４Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２１６】
（実施例２５：α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例２５Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（ＨＣＯ−６０）３．５ｇへα−リポ酸粉末０．５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。この混合物に約３５ｍｌの蒸留水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．５に調整した。ここに、２．５Ｍ ＭｇＣｌ_２水溶液０．４８ｍｌを添加して混合した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を０．２４ｍｌ加えてさらに混合した。この溶液のｐＨを測定し、１Ｍ ＮａＯＨ又は１Ｍ ＨＣｌでｐＨ６．３に調整し、さらに蒸留水を加えて５０ｍｌとした。これによりα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２１７】
（実施例２５Ｂ）
蒸留水の代わりに同量のイオン交換水を用いたこと以外は実施例２５Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２１８】
（実施例２６：α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例２６Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（ＨＣＯ−６０）３．５ｇへα−リポ酸粉末０．５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。この混合物に約３５ｍｌの蒸留水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．２に調整した。ここに、５Ｍ ＣａＣｌ_２水溶液０．２４ｍｌを添加して混合した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を０．７２ｍｌ加えてさらに混合した。この溶液のｐＨを測定し、１Ｍ ＮａＯＨ又は１Ｍ ＨＣｌでｐＨ６．９に調整し、さらに蒸留水を加えて５０ｍｌとした。これにより、α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２１９】
（実施例２６Ｂ）
蒸留水の代わりに同量のイオン交換水を用いたこと以外は実施例２６Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２２０】
（実施例２７：α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例２７Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（ＨＣＯ−６０）４．５ｇへα−リポ酸粉末０．５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。この混合物に約３５ｍｌのイオン交換水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．５に調整した。ここに、５Ｍ ＣａＣｌ_２水溶液０．２４ｍｌを添加して混合した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を０．２４ｍｌ加えてさらに混合した。この溶液のｐＨを測定し、１Ｍ ＮａＯＨ又は１Ｍ ＨＣｌでｐＨ６．８に調整し、さらにイオン交換水を加えて５０ｍｌとした。これにより、α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２２１】
（実施例２７Ｂ）
イオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例２７Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２２２】
（実施例２８：α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例２８Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（ＨＣＯ−６０）４．５ｇへα−リポ酸粉末０．５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。この混合物に約３５ｍｌのイオン交換水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．５に調整した。ここに、２．５Ｍ ＭｇＣｌ_２水溶液０．４８ｍｌを添加して混合した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を０．４８ｍｌ加えてさらに混合した。この溶液のｐＨを測定し、１Ｍ ＮａＯＨ又は１Ｍ ＨＣｌでｐＨ６．８に調整し、さらにイオン交換水を加えて５０ｍｌとした。これによりα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２２３】
（実施例２８Ｂ）
イオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例２８Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２２４】
（実施例２９：α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例２９Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（ＨＣＯ−６０）５．０ｇへα−リポ酸粉末０．５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。この混合物に約３５ｍｌのイオン交換水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．６に調整した。ここに、２．５Ｍ ＭｇＣｌ_２水溶液０．９６ｍｌを添加して混合した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を１．４４ｍｌ加えてさらに混合した。この溶液のｐＨを測定し、１Ｍ ＮａＯＨ又は１Ｍ ＨＣｌでｐＨ６．８に調整し、さらにイオン交換水を加えて５０ｍｌとした。これによりα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２２５】
（実施例２９Ｂ）
イオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例２９Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２２６】
（実施例３０：α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例３０Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（ＨＣＯ−６０）５．０ｇへα−リポ酸粉末０．５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。この混合物に約３５ｍｌのイオン交換水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．６に調整した。ここに、５Ｍ ＣａＣｌ_２水溶液０．４８ｍｌを添加して混合した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を０．４８ｍｌ加えてさらに混合した。この溶液のｐＨを測定し、１Ｍ ＮａＯＨ又は１Ｍ ＨＣｌでｐＨ６．６に調整し、さらにイオン交換水を加えて５０ｍｌとした。これにより、α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２２７】
（実施例３０Ｂ）
イオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例３０Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２２８】
（実施例３１：α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例３１Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリオキシエチレン（２０）ステアリルエーテル４．０ｇへα−リポ酸粉末０．５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。この混合物に約３５ｍｌの蒸留水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．３に調整した。ここに、５Ｍ ＣａＣｌ_２水溶液０．２４ｍｌを添加して混合した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を０．４８ｍｌ加えてさらに混合した。この溶液のｐＨを測定し、１Ｍ ＮａＯＨ又は１Ｍ ＨＣｌでｐＨ６．９に調整し、さらに蒸留水を加えて５０ｍｌとした。これにより、α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２２９】
（実施例３１Ｂ）
蒸留水の代わりに同量のイオン交換水を用いたこと以外は実施例３１Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２３０】
（実施例３２：α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例３２Ａ）
あらかじめ加温して融解したエマルゲン２０２０Ｇ−ＨＡ ７．０ｇへα−リポ酸粉末１．０ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。この混合物に約７０ｍｌの蒸留水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．６に調整した。ここに、５Ｍ ＣａＣｌ_２水溶液０．２４ｍｌを添加して混合した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を０．２４ｍｌ加えてさらに混合した。この溶液のｐＨを測定し、１Ｍ ＮａＯＨ又は１Ｍ ＨＣｌでｐＨ６．８に調整し、さらに蒸留水を加えて５０ｍｌとした。これにより、α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２３１】
（実施例３２Ｂ）
蒸留水の代わりに同量のイオン交換水を用いたこと以外は実施例３２Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２３２】
（実施例３３：α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例３３Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリソルベート（８０）７．０ｇへα−リポ酸粉末０．２５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。この混合物に約３５ｍｌの蒸留水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．３に調整した。ここに、５Ｍ ＣａＣｌ_２水溶液０．１２ｍｌを添加して混合した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を０．１２ｍｌ加えてさらに混合した。この溶液のｐＨを測定し、１Ｍ ＮａＯＨ又は１Ｍ ＨＣｌでｐＨ６．５に調整し、さらに蒸留水を加えて５０ｍｌとした。これにより、α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２３３】
（実施例３３Ｂ）
蒸留水の代わりに同量のイオン交換水を用いたこと以外は実施例３３Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２３４】
（実施例３４：α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例３４Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリソルベート（８０）７．０ｇへα−リポ酸粉末０．２５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。この混合物に約３５ｍｌの蒸留水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．５に調整した。ここに、２．５Ｍ ＭｇＣｌ_２水溶液０．２４ｍｌを添加して混合した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を０．１２ｍｌ加えてさらに混合した。この溶液のｐＨを測定し、１Ｍ ＮａＯＨ又は１Ｍ ＨＣｌでｐＨ６．８に調整し、さらに蒸留水を加えて５０ｍｌとした。これによりα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２３５】
（実施例３４Ｂ）
蒸留水の代わりに同量のイオン交換水を用いたこと以外は実施例３４Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２３６】
（実施例３５：α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例３５Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリソルベート（８０）７．０ｇへα−リポ酸粉末０．２５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。この混合物に約３５ｍｌの蒸留水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．３に調整した。ここに、５Ｍ ＣａＣｌ_２水溶液０．２４ｍｌを添加して混合した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を０．４８ｍｌ加えてさらに混合した。この溶液のｐＨを測定し、１Ｍ ＮａＯＨ又は１Ｍ ＨＣｌでｐＨ６．５に調整し、さらに蒸留水を加えて５０ｍｌとした。これにより、α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２３７】
（実施例３５Ｂ）
蒸留水の代わりに同量のイオン交換水を用いたこと以外は実施例３５Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２３８】
（実施例３６：α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例３６Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリソルベート（８０）７．０ｇへα−リポ酸粉末０．２５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。この混合物に約３５ｍｌの蒸留水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．５に調整した。ここに、２．５Ｍ ＭｇＣｌ_２水溶液０．４８ｍｌを添加して混合した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を０．４８ｍｌ加えてさらに混合した。この溶液のｐＨを測定し、１Ｍ ＮａＯＨ又は１Ｍ ＨＣｌでｐＨ６．９に調整し、さらに蒸留水を加えて５０ｍｌとした。これによりα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２３９】
（実施例３６Ｂ）
蒸留水の代わりに同量のイオン交換水を用いたこと以外は実施例３６Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２４０】
（実施例３７：α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例３７Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリオキシエチレン（２０）ステアリルエーテル４．０ｇとポリエチレングリコール（１０００）１．０ｇへα−リポ酸粉末０．５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。この混合物に約３５ｍｌの蒸留水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．５に調整した。ここに、５Ｍ ＣａＣｌ_２水溶液０．２４ｍｌを添加して混合した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を０．２４ｍｌ加えてさらに混合した。この溶液のｐＨを測定し、１Ｍ ＮａＯＨ又は１Ｍ ＨＣｌでｐＨ６．６に調整し、さらに蒸留水を加えて５０ｍｌとした。これにより、α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２４１】
（実施例３７Ｂ）
蒸留水の代わりに同量のイオン交換水を用いたこと以外は実施例３７Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２４２】
（実施例３８：α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例３８Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリオキシエチレン（２０）ステアリルエーテル４．０ｇとポリエチレングリコール（４０００）１．５ｇへα−リポ酸粉末０．５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。この混合物に約３５ｍｌの蒸留水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．３に調整した。ここに、５Ｍ ＣａＣｌ_２水溶液０．２４ｍｌを添加して混合した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を０．２４ｍｌ加えてさらに混合した。この溶液のｐＨを測定し、１Ｍ ＮａＯＨ又は１Ｍ ＨＣｌでｐＨ６．８に調整し、さらに蒸留水を加えて５０ｍｌとした。これにより、α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２４３】
（実施例３８Ｂ）
蒸留水の代わりに同量のイオン交換水を用いたこと以外は実施例３８Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２４４】
（実施例３９：α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例３９Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリオキシエチレン（２０）ステアリルエーテル４．０ｇとポリエチレングリコール（４０００）２．０ｇへα−リポ酸粉末０．５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。この混合物に約３５ｍｌの蒸留水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．５に調整した。ここに、５Ｍ ＣａＣｌ_２水溶液０．２４ｍｌを添加して混合した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を０．２４ｍｌ加えてさらに混合した。この溶液のｐＨを測定し、１Ｍ ＮａＯＨ又は１Ｍ ＨＣｌでｐＨ６．５に調整し、さらに蒸留水を加えて５０ｍｌとした。これにより、α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２４５】
（実施例３９Ｂ）
蒸留水の代わりに同量のイオン交換水を用いたこと以外は実施例３９Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２４６】
（実施例４０：α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例４０Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリオキシエチレン（２０）ステアリルエーテル４．０ｇとポリエチレングリコール（１０００）２．０ｇへα−リポ酸粉末０．５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。この混合物に約３５ｍｌの蒸留水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．４に調整した。ここに、５Ｍ ＣａＣｌ_２水溶液０．２４ｍｌを添加して混合した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を０．２４ｍｌ加えてさらに混合した。この溶液のｐＨを測定し、１Ｍ ＮａＯＨ又は１Ｍ ＨＣｌでｐＨ６．９に調整し、さらに蒸留水を加えて５０ｍｌとした。これにより、α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２４７】
（実施例４０Ｂ）
蒸留水の代わりに同量のイオン交換水を用いたこと以外は実施例４０Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２４８】
（実施例４１：α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例４１Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリオキシエチレン（２０）ステアリルエーテル４．０ｇとポリエチレングリコール（１０００）１．５ｇへα−リポ酸粉末０．５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。この混合物に約３５ｍｌのイオン交換水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．５に調整した。ここに、２．５Ｍ ＭｇＣｌ_２水溶液０．４８ｍｌを添加して混合した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を０．２４ｍｌ加えてさらに混合した。この溶液のｐＨを測定し、１Ｍ ＮａＯＨ又は１Ｍ ＨＣｌでｐＨ６．４に調整し、さらにイオン交換水を加えて５０ｍｌとした。これにより、α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２４９】
（実施例４１Ｂ）
イオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例４１Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２５０】
（実施例４２：α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例４２Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリオキシエチレン（２０）ステアリルエーテル４．０ｇとポリエチレングリコール（４０００）１．５ｇへα−リポ酸粉末０．５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。この混合物に約３５ｍｌのイオン交換水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．６に調整した。ここに、２．５Ｍ ＭｇＣｌ_２水溶液０．４８ｍｌを添加して混合した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を０．２４ｍｌ加えてさらに混合した。この溶液のｐＨを測定し、１Ｍ ＮａＯＨ又は１Ｍ ＨＣｌでｐＨ６．８に調整し、さらにイオン交換水を加えて５０ｍｌとした。これにより、α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２５１】
（実施例４２Ｂ）
イオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例４２Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２５２】
（実施例４３：α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例４３Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリオキシエチレン（２０）ステアリルエーテル５．０ｇとポリエチレングリコール（１０００）１．５ｇへα−リポ酸粉末０．５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。この混合物に約３５ｍｌのイオン交換水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．５に調整した。ここに、２．５Ｍ ＭｇＣｌ_２水溶液０．４８ｍｌを添加して混合した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を０．４８ｍｌ加えてさらに混合した。この溶液のｐＨを測定し、１Ｍ ＮａＯＨ又は１Ｍ ＨＣｌでｐＨ６．７に調整し、さらにイオン交換水を加えて５０ｍｌとした。これにより、α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２５３】
（実施例４３Ｂ）
イオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例４３Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２５４】
（実施例４４：α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例４４Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリオキシエチレン（２０）ステアリルエーテル５．０ｇとポリエチレングリコール（１０００）１．５ｇへα−リポ酸粉末０．５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。この混合物に約３５ｍｌのイオン交換水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．６に調整した。ここに、５Ｍ ＣａＣｌ_２水溶液０．２４ｍｌを添加して混合した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を０．７２ｍｌ加えてさらに混合した。この溶液のｐＨを測定し、１Ｍ ＮａＯＨ又は１Ｍ ＨＣｌでｐＨ６．８に調整し、さらにイオン交換水を加えて５０ｍｌとした。これにより、α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２５５】
（実施例４４Ｂ）
イオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例４４Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２５６】
（実施例４５：α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例４５Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリオキシエチレン（２０）ステアリルエーテル５．０ｇとポリエチレングリコール（１０００）１．５ｇへα−リポ酸粉末０．５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。この混合物に約３５ｍｌのイオン交換水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．５に調整した。ここに、２．５Ｍ ＭｇＣｌ_２水溶液０．４８ｍｌを添加して混合した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を０．７２ｍｌ加えてさらに混合した。この溶液のｐＨを測定し、１Ｍ ＮａＯＨ又は１Ｍ ＨＣｌでｐＨ６．６に調整し、さらにイオン交換水を加えて５０ｍｌとした。これにより、α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２５７】
（実施例４５Ｂ）
イオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例４５Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２５８】
（実施例４６：α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例４６Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリオキシエチレン（２０）ステアリルエーテル５．０ｇへα−リポ酸粉末０．５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。ここにポリエチレングリコール（１０００）１０ｇをイオン交換水に溶解して１００ｍｌとした溶液を１５ｍｌ添加して混合し、さらに約２０ｍｌのイオン交換水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．５に調整した。ここに、５Ｍ ＣａＣｌ_２水溶液０．２４ｍｌを添加して混合した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を０．２４ｍｌ加えてさらに混合した。この溶液のｐＨを測定し、１Ｍ ＮａＯＨ又は１Ｍ ＨＣｌでｐＨ６．７に調整し、さらにイオン交換水を加えて５０ｍｌとした。これにより、α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２５９】
（実施例４６Ｂ）
イオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例４６Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２６０】
（実施例４７：α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例４７Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリオキシエチレン（２０）ステアリルエーテル５．０ｇへα−リポ酸粉末０．５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。ここにポリエチレングリコール（４０００）１０ｇをイオン交換水に溶解して１００ｍｌとした溶液を１５ｍｌ添加して混合し、さらに約２０ｍｌのイオン交換水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．３に調整した。ここに、５Ｍ ＣａＣｌ_２水溶液０．２４ｍｌを添加して混合した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を０．２４ｍｌ加えてさらに混合した。この溶液のｐＨを測定し、１Ｍ ＮａＯＨ又は１Ｍ ＨＣｌでｐＨ６．６に調整し、さらにイオン交換水を加えて５０ｍｌとした。これにより、α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２６１】
（実施例４７Ｂ）
イオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例４７Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２６２】
（実施例４８：α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例４８Ａ）
あらかじめ加温して融解したポリオキシエチレン（２０）ステアリルエーテル５．０ｇへα−リポ酸粉末０．５ｇを加えて混合し、α−リポ酸を溶解した。ここにポリエチレングリコール（６０００）１０ｇをイオン交換水に溶解して１００ｍｌとした溶液を１５ｍｌ添加して混合し、さらに約２０ｍｌのイオン交換水を加えて３０分以上混合し、５Ｍ ＮａＯＨでｐＨを４．４に調整した。ここに、５Ｍ ＣａＣｌ_２水溶液０．２４ｍｌを添加して混合した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を０．２４ｍｌ加えてさらに混合した。この溶液のｐＨを測定し、１Ｍ ＮａＯＨ又は１Ｍ ＨＣｌでｐＨ６．８に調整し、さらにイオン交換水を加えて５０ｍｌとした。これにより、α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２６３】
（実施例４８Ｂ）
イオン交換水の代わりに同量の蒸留水を用いたこと以外は実施例４８Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２６４】
（実施例４９：高濃度のα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の作製）
（実施例４９Ａ）
α−リポ酸０．１５ｇに２．８５ｍｌの０．２６Ｍ ＮａＯＨを添加して混合し、完全に溶解するまで攪拌した。そこにＰＯＥ（２０）ステアリルエーテルを０．７５ｇ加えよく攪拌した後、そこに蒸留水を０．５ｍｌ添加して３０分以上攪拌した。５Ｎ ＨＣｌでこの溶液のｐＨを５．５に調整した。そこに２．５Ｍ ＭｇＣｌ_２を１４４μＬ添加して１２時間以上攪拌した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３を１４４μＬ加えてさらに１２時間以上攪拌した。そこに蒸留水を加えて５．０ｍｌとした。これによりα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２６５】
（実施例４９Ｂ）
蒸留水の代わりにイオン交換水を用いたこと以外は実施例４９Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２６６】
（実施例５０：α−リポ酸−ＭｇＣＯ₃ナノ粒子の作製）
（実施例５０Ａ）
α−リポ酸０．０５ｇに０．２８ｇの１Ｍ ＮａＯＨを添加して混合し、完全に溶解するまで攪拌した。そこに注射用水（大塚製薬製 日本薬局方注射用水）を９．３５ｍｌ添加し混合した。この混合液にポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（ＨＣＯ−６０）を０．３ｇ加えて３０分以上攪拌した後、５Ｎ ＨＣｌでこの溶液のｐＨを７．０に調整した。そこに２．５Ｍ ＭｇＣｌ_２を４０μＬ添加しよく攪拌した後、１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３を２０μＬ加えてさらに攪拌し、注射用水を加えて１０ｍｌとした。これによりα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液が得られた。
【０２６７】
（実施例５０Ｂ）
注射用水の代わりにイオン交換水を用いたこと以外は実施例５０Ａと同じ手順でα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子を含む透明な分散液を得た。
【０２６８】
これらの実施例１Ａ〜５０Ｂおよび比較例１Ａ、１Ｂ、２２−１Ａ〜２２−２Ｂの結果を以下の表１−１から表１−３にまとめる。なお、実施例１Ａ〜２１Ｂ及び４９Ａ〜５０Ｂでは、α−リポ酸含有水性分散液を調製した後に非イオン性界面活性剤を添加する手順を用い、実施例２２Ａ〜４８Ｂでは、α−リポ酸を非イオン性界面活性剤に溶かした後に水を添加する手順を用いた。
【０２６９】
【表１−１】

【０２７０】
【表１−２】

【０２７１】
【表１−３】

【０２７２】
（試験例１：製剤の熱安定性試験）
実施例１Ａで作製したα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子と、比較例１Ａで作製した、塩化マグネシウムと炭酸ナトリウムを添加しないα−リポ酸ナノ粒子をそれぞれ６０℃にて加温し、加熱１時間後および加熱３時間後のサンプル中のα−リポ酸の量をＨＰＬＣで分析した。対照として試薬のα−リポ酸を用いた。加熱後のα−リポ酸の量を加熱前のα−リポ酸の量で除算して１００を乗算することにより、α−リポ酸の残存率を計算した。α−リポ酸の残存率の結果を以下の表２および図３に示す。△は対照である試薬のα−リポ酸の結果であり、■は比較例１のα−リポ酸分散液の結果であり、□は実施例１Ａのα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の結果である。
【０２７３】
【表２】

その結果、加温３時間後に試薬のα−リポ酸は５５％程度減少したのに対し、実施例１Ａのα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子と、塩化マグネシウムと炭酸ナトリウムを添加しないα−リポ酸ナノ粒子ではα−リポ酸の実質的な減少が見られなかった。コントロールとの比較からも明らかなように、本発明の製剤は、α−リポ酸の安定性が極めて優れているものであることが理解される。
【０２７４】
（試験例２：硫黄臭の改善）
実施例１Ａで作製したα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の凍結乾燥後のペーストと、比較例１Ａで作製した、塩化マグネシウムと炭酸ナトリウムを添加しないα−リポ酸ナノ粒子の凍結乾燥後のペーストをそれぞれ、α−リポ酸が最終濃度０．１％となるように蒸留水に分散させ、透明な樹脂製の試験管に入れ、太陽光の届く室内で放置した。対照として、試薬のα−リポ酸にアルカリ（５Ｍ ＮａＯＨ）を加えてｐＨを７〜７．５にすることによってα−リポ酸を水に溶解した水性分散液（α−リポ酸の最終濃度０．１％）も同様に放置した。
【０２７５】
その結果、２週間経過後、対照溶液および比較例１Ａで作製した塩化マグネシウムと炭酸ナトリウムを添加しないα−リポ酸ナノ粒子の分散液からは特有の硫黄臭が強く感じられた。その程度は、対照としたα-リポ酸を水に溶解した水性分散液と同程度であった。それに対して、α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子分散液では臭いは感じられなかった。
【０２７６】
（試験例３：有色モルモットにおけるα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の紫外線惹起色素沈着抑制効果試験）
メラニン色素産生細胞を持つ有色モルモット（Ｗｅｉｓｅｒ Ｍａｐｌｅｓ、５週齢、雄）の背部を２ｃｍ×２ｃｍの面積で毛剃りし、実施例３Ａにおいて得られたα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子分散液（α−リポ酸を３５０μｇ含有する）を一日あたり８０ｍｇずつ１日１回、５日／週（月曜日〜金曜日）、塗布した。塗布後、塗布開始日（月曜日）および、２、４、７日後（水曜日、金曜日、次週の月曜日）にそれぞれＵＶ−Ａを８Ｊ／ｃｍ^２、ＵＶ−Ｂを１２ｍＪ／ｃｍ^２照射した。モルモット皮膚でのメラニン産生の指標として色差計を用いて皮膚の明度（Ｌ＊値）を測定し、明度の減少量を黒色化の程度の指標とした。明度はＬ＊値が大きいほど、色が白いことを示す。メラニン産生による試験開始日からの明度の変化量（ΔＬ＊値）の絶対値を比較した。α−リポ酸を含まない水のみを塗布したモルモットをコントロール区として比較を行った。
【０２７７】
その結果、α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子塗布区は試験の全期間を通じてコントロール区よりも明度の減少が少なく、すなわち、皮膚の黒色化が抑制されていた。試験終了時のΔＬ＊値の絶対値はコントロール区が８．３であったのに対し、α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子塗布区は６．６であった。
【０２７８】
以下の表３および図４に、０日後（月曜日）、４日後（金曜日）、７日後（月曜日）および９日後（水曜日）に測定したΔＬ＊値の絶対値を示す。以上の結果により、α−リポ酸ナノ粒子が皮膚に吸収され、紫外線により惹起される色素沈着を抑制できることが確認された。
【０２７９】
【表３】

【０２８０】
（試験例４：光老化モデルマウスの皮膚水分、バリア機能およびシワの回復におけるα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の効果確認試験）
ヘアレスマウス（Ｈｏｓ：ＨＲ−１、７週齢、雄）の背部に一日あたり５５ｍＪ／ｃｍ^２のＵＶ−Ｂを週５日（すなわち、月曜日〜金曜日のみ照射し、土曜日および日曜日には照射しなかった）、２ヶ月間照射し、光老化モデルマウスを作製した。このマウスに（実験３Ａにより得られたα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子分散液（α−リポ酸を３５０μｇ含有する）を一日あたり８０ｍｇずつ１日１回、週５日（すなわち、月曜日〜金曜日のみ塗布し、土曜日および日曜日には塗布しなかった）、１ヶ月間塗布した。塗布開始時と塗布終了時のマウス皮膚について目視による皮膚状態観察および、角層水分量、経皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）の測定を行い、シワおよび角層水分、皮膚バリア機能の状態をチェックした。
【０２８１】
その結果、以下の表４および図５に示すように、α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子塗布区は塗布開始時よりも角層水分量の回復が認められた。一方、コントロール区（α−リポ酸を含まない水のみを同様に塗布）では角層水分量の回復は認められなかった。試験終了時の角層水分量はα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子塗布区が１８．２（μｓ）であったのに対し、コントロール区で５．６（μｓ）であった。また、試験最終日のＴＥＷＬ値はα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子塗布区が１５．７（ｇ／ｈ・ｍ^２）であったのに対し、コントロール区では３２．６（ｇ／ｈ・ｍ^２）であり、α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子塗布により皮膚のバリア機能が回復していることが確認できた。また、シワのレプリカ写真を図６に示す。コントロール区は試験開始時とシワの状態に変化は認められなかったがα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子塗布区では明らかなシワの減少が認められた。以上の結果により、α−リポ酸ナノ粒子が皮膚に吸収され、光老化した皮膚の状態を健全な状態に戻す効果が確認できた。
【０２８２】
【表４】

【０２８３】
（測定例２：粒子径の測定）
実施例２２Ａで作製したα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の溶液を、光散乱光度計（大塚電子 ＦＰＡＲ１０００）によって粒子径を測定した。その結果、実施例２２Ａで作製したα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の粒子径が約２０ｎｍであることが確認できた。蒸留水を使用した場合もイオン交換水を使用した場合も粒子径はほぼ同じであった。実施例２２Ａで蒸留水を使用して作製したα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の粒子径分布を（大塚電子 ＦＰＡＲ１０００）によって測定した結果を、図７に示す。
【０２８４】
（測定例３：粒子径の測定）
実施例２９Ａで作製したα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の溶液を、光散乱光度計（大塚電子 ＦＰＡＲ１０００）によって粒子径を測定した。溶液が完全に透明であること及び粒子径測定の結果から、実施例２９Ａで作製したα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子は平均粒子径が約１２ｎｍである一次粒子が平均粒径２００ｎｍおよび１７００ｎｍの、弱いクラスターを形成していることが確認できた。蒸留水を使用した場合もイオン交換水を使用した場合も粒子径はほぼ同じであった。実施例２９Ａでイオン交換水を使用して作製したα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の粒子径分布を（大塚電子 ＦＰＡＲ１０００）によって測定した結果を、図８に示す。
【０２８５】
（測定例４：粒子径の測定）
実施例２４Ａ、２４Ｂ、２５Ａ、２５Ｂ、３３Ａ、３３Ｂ、３６Ａおよび３６Ｂで作製したα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の溶液のそれぞれについても、光散乱光度計（大塚電子 ＦＰＡＲ１０００）によって粒子径を測定した。
【０２８６】
測定例１〜４で測定した各α−リポ酸ナノ粒子の平均粒子径（ｎｍ）を以下の表５にまとめる。
【０２８７】
【表５】

【０２８８】
（試験例５：製剤の熱安定性試験）
実施例２２Ａで作製したα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子と、比較例２２−１Ａで作製したα−リポ酸分散液（塩化カルシウムも炭酸ナトリウムも添加しないもの）をそれぞれ６０℃にて保存（加熱保存）し、３週間まで１週間ごとに溶液中のα-リポ酸の量をＨＰＬＣで分析した。加熱保存後のα−リポ酸の量を加熱前のα−リポ酸の量で除算して１００を乗算することにより、α−リポ酸の残存率を計算した。α−リポ酸の残存率の結果を以下の表６および図９に示す。■は比較例２２−１Ａのα−リポ酸分散液の結果であり、□は実施例２２Ａのα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子の結果である。
【０２８９】
【表６】

その結果、６０℃で３週間保存後に比較例２２−１Ａで作製した塩化マグネシウムと炭酸ナトリウムを添加しないα−リポ酸ナノ粒子では約１８％の現象が見られたが、実施例２２Ａのα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子ではα−リポ酸の減少が約１１％に抑えられていた。このことから、本発明の製剤は、α−リポ酸の安定性が極めて優れているものであることが理解される。
【０２９０】
（試験例６：製剤の熱安定性試験）
実施例２９Ａで作製したα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子と、比較例２２−２Ａで作製した塩化マグネシウムと炭酸ナトリウムを添加しないα−リポ酸ナノ粒子をそれぞれ６０℃にて保存し、３週間まで１週間ごとに溶液中のα-リポ酸の量をＨＰＬＣで分析した。加熱保存後のα−リポ酸の量を加熱前のα−リポ酸の量で除算して１００を乗算することにより、α−リポ酸の残存率を計算した。α−リポ酸の残存率の結果を以下の表７および図１０に示す。■は比較例２２−２Ａのα−リポ酸ナノ粒子の結果であり、△は実施例２９Ａのα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の結果である。
【０２９１】
【表７】

その結果、６０℃で３週間保存後に比較例２２−２Ａで作製した塩化マグネシウムと炭酸ナトリウムを添加しないα−リポ酸ナノ粒子では約１３％の減少が見られたが、実施例２９Ａのα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子ではα−リポ酸の減少が約８％に抑えられていた。このことから、本発明の製剤は、α−リポ酸の安定性が極めて優れているものであることが理解される。
【０２９２】
（試験例７：脂肪前駆細胞の分化に関するα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の機能試験）
直径３．５ｃｍのプラスチックシャーレにＤ−ＭＥＭ培地（Ｄ−ＭＥＭ培地に終濃度１０％ ＦＣＳ、１００ユニット／ｍｌのペニシリン（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ）と１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン（ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ）になるように添加したもの）を１．５ｍｌ添加した。そこに脂肪前駆細胞である３Ｔ３−Ｌ１細胞を５．０×１０^４個接種し、３日間前培養を行いコンフルエント状態にした。その後、培地を脂肪細胞分化誘導培地（Ｄ−ＭＥＭに終濃度１０％ＦＣＳ、１００ユニット／ｍｌのペニシリンと１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、５μｇ／ｍｌのインスリン、０．２５μＭのデキサメタソン（ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、０．５ｍＭのイソブチル−メチルキサンチン（ｉｓｏｂｕｔｙｌ−ｍｅｔｈｙｌｘａｎｔｈｉｎｅ）（ＩＢＭＸ）になるように添加したもの）３ｍｌに交換した。さらに２日後、同じ組成の脂肪細胞分化誘導培地３ｍｌと交換し、そして２日間培養し、合計して４日間脂肪細胞分化誘導培地で培養した。この培養の際に、脂肪細胞分化誘導培地にはα−リポ酸溶液あるいは実施例２０Ａのα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子溶液を、α−リポ酸濃度で０、１００、２５０または５００μＭになるように添加した。培養は全て５％ＣＯ_２、３７°Ｃの条件で行った。
【０２９３】
こうして得られた培養細胞の蓄積脂肪量を計測した。ＰＢＳ緩衝液１ｍｌで洗浄後、中性ホルマリンで５分間固定を行った。さらに７０％エタノール溶液および蒸留水で洗浄を行った。続いてオイルレッドＯ溶液（飽和オイルレッドＯ／イソプロパノール溶液と蒸留水を６：４の比率で混合し、濾過した染色液）を１ｍｌ添加し１５分間放置した。染色液を除去し、７０％エタノール溶液で色素が拡散しなくなるまで洗浄を行った後、０．７５ｍｌの４％ノニデットＰ−４０／イソプロパノール溶液を添加し、３０分間攪拌し、色素を溶出させた。この溶液を全量回収し、吸光度計を用いて５２０ｎｍの波長の吸光度を測定した。
【０２９４】
その結果、α−リポ酸の添加により脂肪の蓄積が減少する結果となったのに対し、α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子添加では脂肪を細胞内蓄積させる作用が認められた（図１１）。すなわちα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子には効率よく未成熟脂肪細胞内に糖を取り込ませる作用があることが示唆された。上記試験において糖の取り込みを促進したことは、α−リポ酸ナノ粒子にはα−リポ酸単体では認められなかった血糖値を改善する効果が期待でき、糖尿病治療薬としての有用性が示唆された。
【０２９５】
（試験例８：成熟脂肪細胞の脱分化に関するα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の機能試験）
直径３．５ｃｍのプラスチックシャーレにＤ−ＭＥＭ培地（Ｄ−ＭＥＭ培地に終濃度１０％ＦＣＳ、１００ユニット／ｍｌのペニシリンと１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンになるように添加したもの）を１．５ｍｌ添加した。そこに脂肪前駆細胞である３Ｔ３−Ｌ１細胞を５．０×１０^４個接種し、３日間前培養を行いコンフルエント状態にした。その後、培地を脂肪細胞分化誘導培地（Ｄ−ＭＥＭ培地に終濃度１０％ＦＣＳ、１００ユニット／ｍｌのペニシリンと１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、５μｇ／ｍｌのインスリン、０．２５μＭのデキサメタゾン、０．５ｍＭのイソブチル−メチルキサンチンになるように添加したもの）３ｍｌに交換して４日間培養し、脂肪細胞への分化を誘導した。さらにその後、脂肪細胞成熟化培地（Ｄ−ＭＥＭ培地に終濃度１０％ＦＣＳ、１００ユニット／ｍｌのペニシリンと１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、５μｇ／ｍｌのインスリンになるように添加したもの）に交換し、７日間培養した。その後、試験培地に交換して更に４日間培養した。試験培地には脂肪細胞成熟化培地にα−リポ酸溶液あるいは実施例２０Ａのα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子溶液をα−リポ酸濃度で０、１００、２５０または５００μＭになるように添加した。それぞれの培地は培養２日毎に同じものに交換した。培養は全て５％ＣＯ_２、３７°Ｃの条件で行った。
【０２９６】
こうして得られた培養細胞の蓄積脂肪量を計測した。ＰＢＳ緩衝液１ｍｌで洗浄後、中性ホルマリンで５分間固定を行った。さらに７０％エタノール溶液および蒸留水で洗浄を行った。そこにオイルレッドＯ溶液を１ｍｌ添加し１５分間放置した。染色後、７０％エタノール溶液で色素が拡散しなくなるまで洗浄を行った。ここに０．７５ｍｌの４％ノニデットＰ−４０／イソプロパノール溶液を添加し、３０分間攪拌し、色素を溶出させた。この溶液を全量回収し、吸光度計を用いて５２０ｎｍの波長の吸光度を測定した。
【０２９７】
その結果、α−リポ酸添加区では無添加区と脂肪蓄積量がほとんど変わらなかったのに対し、α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子添加区では脂肪を細胞内へ蓄積させる作用が認められた（図１２）。すなわち試験例７同様、α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子には効率よく成熟脂肪細胞内に糖を取り込ませる作用があることを示唆している。特に脂肪細胞に対してはどのような分化段階にあっても脂肪を蓄積させる作用が確認された。以上のことからα−リポ酸ナノ粒子にはα−リポ酸単体では認められなかった高い血糖値改善効果が期待でき、糖尿病治療薬としての有用性が示唆された。
【０２９８】
（試験例９：α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の培養液中での安定性とその細胞局在解析）
試験例７と同様の方法で培養を行った。α−リポ酸および実施例２０Ａのα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子はそれぞれ終濃度２５０μＭで添加した。この細胞の培養上清を全量回収し培養上清画分とした。さらに細胞をＰＢＳ緩衝液で洗浄後、常法にて回収・洗浄を行い遠心処理で沈殿させ、５００μＬの精製水で懸濁し超音波処理にて破砕した。この破砕液を毎分１５０００回転、４℃で１５分間遠心し、上清を回収し、これを細胞破砕液画分とした。各画分の残存α−リポ酸濃度を高速液体クロマトグラフ質量分析計を用いて定量した。
【０２９９】
その結果、細胞破砕液画分では濃度差が確認されなかった（図１３）。しかし、培養上清画分においてはα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子添加実験群において高いα−リポ酸残存が確認された（図１４）。以上の結果から、α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子は培養液中でも非常に安定であることが確認された。また、試験例７において観察されたα−リポ酸とα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の作用の違いは、細胞内α−リポ酸濃度の違いによるものではなく、α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子の持つ物理化学的な性質の違いによるものであることが示唆された。
【０３００】
（試験例１０：α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子塗布による皺モデルマウス抗皺効果試験）
ヘアレスマウス（Ｈｒ／ｋｕｄ、９週齢、雄）に紫外線を照射し皺モデルマウスを作製した。この皺モデルの作製においては、紫外線を１３週間（５日間／週、月曜から金曜まで）にわたって、ＵＶＡ、ＵＶＢがそれぞれ合計１４８．９９Ｊ／ｃｍ^２、３．４９Ｊ／ｃｍ^２の照射量になるように照射した。皺モデルを作製後、マウス背部に０．０１％α−リポ酸を含有する市販品化粧品と実施例２１Ａの０．０１％α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子含有水性分散液をそれぞれ３０ｍｇ／ｃｍ^２／ｄａｙの量で５回／週（月曜から金曜まで）で塗布し、これを６週間行った。対照区としては何も製剤を塗布せず６週間飼育した無塗布群およびＵＶ照射による皺形成を行わずに同時に飼育した無処置区を用いた。作製した皺モデルはレプリカ法によって評価し、図１５に示す独自に設定した点数化基準を元に、目視によって皺の程度を比較し、皺モデルマウスの点数化を行った。また、マウス背部皮膚のパラフィン包埋切片を作製し、ヒアルロン酸の染色をすることでその量を比較した。ヒアルロン酸の染色は、ビオチンで標識化したヒアルロン酸結合タンパク質（ビオチン標識ＨＡＢＰ、生化学工業）をプローブとして用い、ストレプトアビジン標識した蛍光色素（Ｃｙ３ストレプトアビジン（Ｃｙ３ ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ）、Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ）により検出する方法を用いた。
【０３０１】
その結果、６週間塗布したマウス背部のレプリカ解析から０．０１％α−リポ酸含有市販品と比較して０．０１％α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子含有水性分散液塗布群においてより高い皺の改善効果が観察された（図１６）。また点数化においても、皺改善効果が確認された（表８）。
【０３０２】
また、同マウス皮膚切片のヒアルロン酸染色を行った結果、０．０１％α−リポ酸含有市販品や無塗布群ではヒアルロン酸の減少が観察されたが、０．０１％α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子塗布群において無処置群と同程度のヒアルロン酸の蓄積が観察された（図１７）。真皮におけるヒアルロン酸減少が皺の形成に関与していることが知られている。以上の結果から、α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子は紫外線により障害を受けた真皮層において細胞外基質であるヒアルロン酸の量を増加させる作用があり、これらの効果により皺が改善されたことが確認された。
【０３０３】
【表８】

【０３０４】
（試験例１１：α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子塗布によるヒト皺改善効果試験）
３０代男性被験者（被験者１）に一方の半顔には０．０１％α−リポ酸含有水性分散液を、他方の半顔には実施例２１Ａの０．０１％α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子含有水性分散液を、１日２回、連日、ムラなく塗布してもらった。また、５０代女性被験者（被験者２）には半顔だけに実施例２１Ａの０．０１％α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子含有水性分散液を連日ムラなく塗布してもらい、半顔は無塗布とした。それぞれの試験期間は１６週間行い、皺の評価は試験前と１６週間後に眼尻からレプリカを作製して行った。
【０３０５】
その結果、どちらの被験者とも０．０１％α−リポ酸含有水性分散液を塗布した側が０．０１％α−リポ酸含有水性分散液や無塗布であった反対側と比較して皺の改善が観察された（図１８）。以上の結果から、α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子はヒトの皺を改善する効果があることが確認された。
【０３０６】
（試験例１２：α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子によるヒアルロン酸蓄積試験）
直径６．０ｃｍのプラスチックシャーレにＤ−ＭＥＭ培地（Ｄ−ＭＥＭ培地に終濃度１０％ＦＣＳ、１００ユニット／ｍｌのペニシリンと１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンになるように添加したもの）を３ｍｌ添加した。そこに脂肪前駆細胞である３Ｔ３−Ｌ１細胞を１．５×１０^５個接種し、３日間前培養を行いコンフルエント状態にした。その後、培地を脂肪細胞分化誘導培地（Ｄ−ＭＥＭに終濃度１０％ＦＣＳ、１００ユニット／ｍｌのペニシリンと１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、５μｇ／ｍｌのインスリン、０．２５μＭのデキサメタゾン、０．５ｍＭのイソブチル−メチルキサンチンになるように添加したもの）３ｍｌに交換した。さらに２日後、同じ組成の脂肪細胞化誘導培地３ｍｌと交換し２日間培養し、合計４日間脂肪細胞分化誘導培地で培養した。脂肪細胞分化誘導培地にはα−リポ酸溶液と実施例５０Ａのα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子溶液がそれぞれα−リポ酸濃度で０、１００、２５０、５００μＭになるように添加した。培養後、培養上清を除いたシャーレにＰＢＳ緩衝液を１ｍｌ添加し、細胞をセルスクレーパーで回収した。こうして回収した細胞を超音波破砕したものを細胞破砕液とし、これに含まれるヒアルロン酸量を酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）により定量した。ヒアルロン酸ＥＬＩＳＡの実験方法はＡｎｎｉｃａ Ｊａｃｏｂｓｏｎら、Ｉｎｔ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ． １０２：２１２−２１９（２００２）に記載される方法に従って行った。また、培養は全て５％ＣＯ_２、３７°Ｃ条件で行った。
【０３０７】
その結果、α−リポ酸添加群と比較してα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子添加群の方が高いヒアルロン酸量を示した（図１９）。以上の結果から、α−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子はヒアルロン酸を細胞表面へ蓄積させる作用があることが確認された。このことからα−リポ酸−ＭｇＣＯ_３ナノ粒子は皮膚真皮層の保水性を向上さることにより、皺を改善していることが示唆された。また、関節において軟骨細胞表面にヒアルロン酸を蓄積・濃縮させ、間接軟骨組織間の損傷を低減する効果が期待され、変形性関節症の治療薬としての有用性も示唆された。
【０３０８】
（実施例５１：外用剤軟膏の製造）
当該分野で通常行われる方法に従って以下の表９に示す配合の材料を混合して外用剤軟膏を製造する。
【０３０９】
【表９】

【０３１０】
（実施例５２：化粧用乳液の製造）
当該分野で通常行われる方法に従って以下の表１０に示す配合の材料を混合して化粧用乳液を製造する。
【０３１１】
【表１０】

【０３１２】
（実施例５３：練り歯磨きの製造）
当該分野で通常行われる方法に従って以下の表１１に示す配合の材料を混合して練り歯磨きを製造する。
【０３１３】
【表１１】

【０３１４】
（実施例５４：タブレットの製造）
当該分野で通常行われる方法に従って以下の表１２に示す配合の材料を混合してタブレットを製造する。
【０３１５】
【表１２】

【０３１６】
（実施例５５：注射液の製造）
当該分野で通常行われる方法に従って以下の表１３に示す配合の材料を混合して注射液を製造する。
【０３１７】
【表１３】

【０３１８】
（実施例５６：化粧水の製造）
当該分野で通常行われる方法に従って以下の表１４に示す配合の材料を混合して化粧水を製造する。
【０３１９】
【表１４】

【０３２０】
（実施例５７：皮膚外用ローションの製造）
当該分野で通常行われる方法に従って以下の表１５に示す配合の材料を混合して皮膚外用ローションを製造した。
【０３２１】
【表１５】

【０３２２】
（試験例１３：ＵＶ−Ｂ照射によるヘアレスマウス皮膚のバリア機能低下に対するα−リポ酸ナノ粒子含有皮膚外用ローションの効果確認試験）
ヘアレスマウス（Ｈｏｓ：ＨＲ−１、２５週齢、雄）の背部に７０ｍＪ／ｃｍ^２のＵＶ−Ｂを単回照射した。紫外線照射後、このマウスに実施例５７により得られたα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子含有皮膚外用ローションを一日あたり１００μlずつ１日１回、連続４日間塗布した。紫外線照射直前および紫外線照射日から４日目および５日目に経皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）の測定を行い、皮膚バリア機能の状態をチェックした。紫外線照射日から各測定日における紫外線照射直前のＴＥＷＬに対する増加量をΔＴＥＷＬとし皮膚バリア機能低下の目安とした。
【０３２３】
表１６に示すように、どちらの測定日においてもα−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子含有皮膚外用ローション塗布区（ｎ＝３）はコントロール区（α−リポ酸を含まない水のみを同様に塗布、ｎ＝３）と比較しＴＥＷＬ値の上昇、すなわち皮膚バリア機能の低下が抑制されていることが確認された。以上の結果により、α−リポ酸−ＣａＣＯ_３ナノ粒子含有皮膚外用ローションは紫外線照射後の皮膚に作用し、紫外線刺激による皮膚の機能障害を低減する効果を発揮することが確認できた。
【０３２４】
【表１６】

【０３２５】
（実施例５８：ドリンク剤の製造）
当該分野で通常行われる方法に従って以下の表１７に示す配合の材料を混合してドリンク剤を製造した。
【０３２６】
【表１７】

上記表１７におけるα−リポ酸-Ｃａナノ粒子溶液のかわりに、α−リポ酸を最小量の０．２５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を用いて中和溶解し１％水溶液としたもので置換した比較品を作製した。専門のパネル５名で実施例５８のドリンク剤と比較品の官能評価を行ったところ、全員が本実施例のドリンク剤は比較品に比べて、α−リポ酸に起因する硫黄臭や舌のピリピリ感が低減されており、嗜好性に優れているとの評価を得た。
【０３２７】
（実施例５９：清涼飲料水の製造）
当該分野で通常行われる方法に従って以下の表１８に示す配合の材料を混合して清涼飲料水を製造した。
【０３２８】
【表１８】

上記表１８におけるα−リポ酸-Ｍｇナノ粒子溶液のかわりに、α−リポ酸を最小量の０．２５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を用いて中和溶解し１％水溶液としたもので置換した比較品を作製した。専門のパネル５名で実施例５９の清涼飲料水（ドリンク剤）と比較品の官能評価を行ったところ、全員が本実施例の清涼飲料水（ドリンク剤）は比較品に比べて、α−リポ酸に起因する硫黄臭や舌のピリピリ感が低減されており、嗜好性に優れているとの評価を得た。
【０３２９】
以上のように、本発明の好ましい実施形態を用いて本発明を例示してきたが、本発明は、この実施形態に限定して解釈されるべきものではない。本発明は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。当業者は、本発明の具体的な好ましい実施形態の記載から、本発明の記載および技術常識に基づいて等価な範囲を実施することができることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。
【産業上の利用可能性】
【０３３０】
本ナノ粒子は水に溶解した場合に透明溶液の形態を保つものであり、且つ、多価金属無機塩の皮膜によりα−リポ酸が被覆されていることから低刺激性である。従って、皮下および静脈内注射製剤として投与することが可能となる。
【０３３１】
本ナノ粒子を外用剤として塗布投与、あるいは口腔組成物として歯肉等口腔粘膜から投与した場合には、良好に経皮吸収され、刺激性がないことから炎症を惹起せず、ナノ粒子から除法的にα−リポ酸が放出され、皮膚の活性化、光老化の抑制、光老化からの回復、紫外線刺激によるメラニン生成抑制等の効果を発揮できる。
【０３３２】
本ナノ粒子を食品として利用した場合には、α−リポ酸に特有の硫黄臭が低減されていることから、嗜好品としての価値が向上するとともに、α−リポ酸の配合量を増やすことも可能となるので、α−リポ酸のもつ有効性をより発揮しやすい組成物を得ることができる。また本ナノ粒子は比表面積が非常に大きいことから、生体内へ非常に良好に吸収される。さらに本ナノ粒子は水溶性であることから、飲料等幅広い形態の食品での利用が可能となる。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
α−リポ酸と、非イオン性界面活性剤と、２価金属イオンと、炭酸イオンまたはリン酸イオンとを含む、α−リポ酸ナノ粒子を含有する、皮膚外用剤。
【請求項２】
α−リポ酸と、非イオン性界面活性剤と、２価金属イオンと、炭酸イオンまたはリン酸イオンとを含む、α−リポ酸ナノ粒子を含有する、医薬品。
【請求項３】
α−リポ酸と、非イオン性界面活性剤と、２価金属イオンと、炭酸イオンまたはリン酸イオンとを含む、α−リポ酸ナノ粒子を含有する、口腔用組成物。
【請求項４】
α−リポ酸と、非イオン性界面活性剤と、２価金属イオンと、炭酸イオンまたはリン酸イオンとを含む、α−リポ酸ナノ粒子を含有する、食品。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１９】

【図６】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【公開番号】特開２０１１−６３６０６（Ｐ２０１１−６３６０６Ａ）
【公開日】平成２３年３月３１日（２０１１．３．３１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−２５３３１０（Ｐ２０１０−２５３３１０）
【出願日】平成２２年１１月１１日（２０１０．１１．１１）
【分割の表示】特願２００９−５４６２４９（Ｐ２００９−５４６２４９）の分割
【原出願日】平成２０年１２月１２日（２００８．１２．１２）
【出願人】（００００００２２８）江崎グリコ株式会社 (187)
【出願人】（５０６１５１２３５）株式会社ナノエッグ (11)
【Ｆターム（参考）】