感染症に対抗する代替医薬品としてのプロバイオティクス
【課題】鳥コクシジウム症、またパルボウイルスなどの感染症など、病原性微生物、ウイルス、菌類、寄生虫、原虫などによる感染症にかかった鳥、魚、哺乳動物に対して、液体性免疫と細胞性免疫の両方へ作用する有効な代替療法の提供。
【解決手段】乳酸菌のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ、と酵母菌のＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ、とを粉末状にした混合プロバイオティクス。
【解決手段】乳酸菌のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ、と酵母菌のＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ、とを粉末状にした混合プロバイオティクス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
プロバイオティクス、ペディオコッカス菌、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ、Ｅｉｍｅｒｉａ、鶏、鳥、消化器疾患、犬、パルボウイルス、ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ
【背景分野】
【０００２】
【特許文献１】米国特許Ｎｏ．５，９６８，５６９はプロバイオティクスを含むゲル化したでんぷん細胞間質のペットフードを示すものであり、具体的には、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属とＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ属について公開している。
【特許文献２】米国特許Ｎｏ．６，５５１，６３３はラクターゼと乳糖を含むペット用の牛乳を主成分とするパウダーに関して公表している。また米国特許Ｎｏ．５，９６８，５６９もプロバイオティクスに関するものである。
【特許文献３】米国特許Ｎｏ．６，７８０，４４７はソルビン酸と微生物（生きているもの、または死んでしまったもの）を含む動物用食品であることを公開している。Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉを含む非常に多種の微生物について公表している。
【特許文献４】米国特許Ｎｏ．６，８２７，９５７は内部がやわらかく、外部にはプロバイオティクスを含む固い殻となっている動物用食品の製造方法を公開したもので、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属について公表されている。
【特許文献５】米国特許Ｎｏ．６，８３５，３９７はＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉとＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃを含む多種のプロバイオティクスを含むカプセル化された酵母について公表している。
【特許文献６】米国公開特許申請番号２００３／００４９２４０はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属とＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属を用いたヘリコバクター感染症を治療する方法について公開している。
【特許文献７】米国公開特許申請番号２００４／０１０９０２５はコーティング処理された生菌を含む粒子の製造方法について公開している。
【特許文献８】米国公開特許申請番号２００４／０１９７３５２は、微生物の数々の菌種を含む、またクレアチンと血液中の尿素窒素を減少させるプレバイオティクス成分について公開している。
【特許文献９】米国公開特許申請番号２００３／０１６５４７２は、微生物の保存と輸送に関しての情報を公開している。
【特許文献１０】米国公開特許申請番号２００６／０００８５１１は、キサンタンとキトサンの混合体カプセルまたはゼラチンカプセルでプロバイオティクスを包み込む製法について公開している。
【非特許文献１】上述とともに関係した手法と制限される前述の例が、実例として挙げられ、あくまで唯一の手法とは限らないことを示唆している。そして、ある論述の他の手法、制限範囲は文献や研究により明白となる。
【発明の開示】
【０００３】
動物用食品などに混ぜて与えるプロバイオティクスを粉末状にする製法。粉末状のプロバイオティクスまたは動物用食品や動物用間食用食品（おやつ）に含まれたプロバイオティクスが鳥や哺乳動物における感染性胃腸症状を治療する方法を示す。粉末状のプロバイオティクスまたは動物用食品や動物用間食用食品（おやつ）に含まれたプロバイオティクスが鳥や哺乳動物における抗原に対する免疫応答を高める方法を示す。
【０００４】
主張内容を分かりやすく説明をするための手法、方法などを用いているが、その範囲には制限されない。上記主張では、上記に記載されている一つまたは複数の問題が減少・解消されたと明記されているが、別の主張では、別の問題に対する向上があったことを示している。
【０００５】
上記の説明の他に、参考文献や図、下記の説明により主張を更に明確にしている。
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
鳥コクシジウム症は鶏の脂肪、吸収不良（飼料が十分に利用されてない）、成長率の低下、雌鳥の卵生産低減を引起す重大な感染症である（Ｌｅｌｌｅｈｏｊ ｅｔ ａｌ．，２００４）。鳥コクシジウム症の最も著しい問題は体重増加率の減少やひどい時には体重減少などの成長障害であり、養鶏業に経済的なダメージを与える（Ｄａｌｌｏｕｌ ａｎｄ Ｌｉｌｌｅｈｏｊ，２００６）。医薬品と生ワクチンがこれまで症状を抑制する方法であったが、医薬品の予防的な使用に対する懸念の高まりやワクチンのコストが高いことなどがあり、代替療法が必要とされている（Ｄａｌｌｏｕｌ ａｎｄ Ｌｉｌｌｅｈｏｊ，２００４）。最近のプロバイオティクス研究では、消化器疾患をもたらすロタウイルスや大腸菌、サルモネラ菌などに対する宿主の液体性免疫に生菌が影響を及ぼすことができることを証明している（Ｉｓｏｌａｕｒｉ，Ｅ．２００３；Ｍａｊａｍａａ，ｅｔ ａｌ １９９５；Ｐｅｒｄｉｇｏｎ，ｅｔ ａｌ ２００１）。プロバイオティクスがＥｉｍｅｒｉａに感染したブロイラーに対して有効な代替医薬品として使用できるには、液体性免疫と細胞性免疫の両方へ作用し、効果があることを証明する必要がある。
【０００７】
パルボイウルスに感染した犬は嘔吐や血便など重い消化器症状を示す。適切に処置しなければ数時間で死に至ることもある。米国ではパルボウイルスに感染した犬を治療する抗生剤はなく、ウイルスを駆逐し回復する為の手段は、犬の自己免疫機能のみである。故に我々はパルボウイルスに感染した犬がプロバイオティクスを与えるべき良い研究対象であると判断した。
【発明が解決するための手段】
【０００８】
Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉがＥｉｍｅｒｉａに感染したブロイラーに有効であることを実証するために、我々はＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉを与えた鶏と与えない鶏に分け、Ｅ．ｔｅｌｌｅｎａの胞子を形成したオーシストに感染させた。Ｅｉｍｅｒｉａに感染したブロイラーへのＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉの有効性を判断するために、Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉを与えたＥｉｍｅｒｉａ感染鶏とプレシーボから採取した便のオーシスト数と、鶏の体重を測定した。
【０００９】
Ｅｉｍｅｒｉａ抗原ＥｔＭＩＣ２に対する抗体反応を評価するために、分子レベルで明らかにされ、複製されたＥｉｍｅｒｉａ微小タンパクの遺伝子を用いた（Ｄａｌｌｏｕｌ ｅｔ ａｌ，２００６）。鶏から集めた血清から抗体生成を判断するためにＥＬＩＳＡ法を用いた。
【００１０】
Ｅｉｍｅｒｉａ感染に対する細胞免疫反応を判断するため、Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉとＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｉｄｉｉを与えたＥｉｍｅｒｉａに感染鶏でのＴ細胞増殖を試みた。脾細胞を集めて、２４時間ＣｏｎＡの存在下で培養された。細胞の増加は［３Ｈ］−チミジンアッセイ法によって計測した。
【００１１】
Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉが消化器疾患に悩む犬への有効性を証明するために、様々な消化器疾患を持つ犬にＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉを与える評価試験を行った。評価試験はブラジルのサンパウロにある３つの動物病院において４名の獣医師によって共同で行った（表２）。犬の体重は２ＫＧから２６ＫＧ、年齢は１歳から１５歳と幅広かった。犬はそれぞれ異なったレベルの消化器疾患を患っており、体重によって、プロバイオティクスのカプセルを毎日１個〜２個与えた。
【００１２】
Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉが病原菌の感染による消化器疾患に悩む犬への有効性を証明するために、パルボウイルスに感染した犬にＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉを与えた。
【００１３】
典型的な面と実施例が以上の様に検討されてきたが、技術的手法の改訂、追加等がある。以下に示す、添付の特許請求範囲において、改訂、修正、追加がそれぞれの条項の本質の範疇において含まれることが意図される。
【発明の効果】
【００１４】
ブロイラーの寄生虫感染症に対する代替医薬品としてのプロバイオティクス
【００１５】
Ｅｉｍｅｒｉａに感染したブロイラーにおけるプロバイオティクスの毒性試験
【００１６】
生後１日後のブロイラー１５羽〜２０羽を１グループとしてそれぞれの育雛器に入れた。各グループはプレシーボとして餌のみを与えるものと、餌と一緒にＰ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉを混ぜて与えるものに分けた。Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉを０％，０．０１％，０．０５％，０．１％，０．４％の濃度で餌に混ぜて与えた。１０日目にはプレシーボ（Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉを与えない、感染なし）以外は、５，０００個のＥｉｍｅｒｉａ ａｃｅｒｖｕｌｉｎａオーシストを口径投与により感染させた。体重は０，６，９日目に測定し（ｄｐｉ）、体重の増加を観察した。オーシスト数を測定するため、感染後４，６，９日目の糞便を収集した。
【００１７】
試験的な治療はカリフォルニア州、サンディエゴに所在するＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．が所有する統計学ソフトウエア、ＧＲＡＰＨＰＡＤ ＩＮＳＴＡＴによって相違分析を行った。確率がＰ＜０．０５であれば違いを認めることにした。平均値はＤｕｎｎｅｔｔ比較テストにより比較した。
【表１】
【００１８】
医薬品としての薬効があるかどうかの創薬実験をする前に、毒性などの副作用をいかに回避するかが重要である。Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉは人や動物の消化管にもともと住んでいる天然の微生物であり、毒性があると報告をしている文献はこれまでに発表されていない。またブロイラーにおいてＰ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉに毒性があるかどうかを調査するために、ブロイラーもしくはＥ．ａｃｅｒｖｕｌｉｎａに感染した鶏に、０．０１％から０．０４％のＰ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉを与えた。Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉを与えたブロイラー、またＰ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉを与えたＥ．ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ感染鶏、いずれにおいても体重減少や死亡などは確認されなかった。また１％から１００％のＰ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉを混ぜた餌を０．０１％の濃度で与えた群と１．０％の濃度で与えた群があるが、ＥＡ感染群とＥＴ感染群において感染中でもかなりの体重増加が見られた（表１Ａ）。実験期間中、プロバイオティクスを与えた後、鶏の主要器官（肝臓、心臓、腎臓、脾臓）において異常はみられなかった。Ｅｉｍｅｒｉａに感染したブロイラーに４０倍の濃度範囲（０．０１−０．４％の範囲）、またＰ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉ Ｓ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉを混ぜて１００倍の濃度範囲（０．０１−１．０％の範囲）で与えたが組織的な変化は見られなかったことが結果から分かる。
【００１９】
Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉがＥｉｍｅｒｉａに感染したブロイラーに有効であることを実証するために、我々はＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉを与えた鶏と与えない鶏に分け、Ｅ．ｔｅｌｌｅｎａの胞子を形成したオーシストに感染させた。
Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉを与えたブロイラーでは、オーシストが２０％−４０％減少した。同様にＥ．ａｃｅｒｖｕｌｉｎａに感染させたブロイラーでＰ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉの菌混合体を与えた場合、３０％−５０％、Ｅ．ｔｅｌｌｅｎａに感染させたブロイラーでＰ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉの菌混合体を与えた場合、１０％−２０％減少した。これらは、プロバイオティクスが病原菌や寄生虫感染を減少させる効果があることを示している。
【００２０】
Ｅｉｍｅｒｉａに感染したブロイラーにプロバオイティクスを与えると液体性免疫反応が刺激される。
【００２１】
図１は、ブロイラーにそれぞれプロバオイティクスを与えなかった場合、Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉの菌混合体を０．１％餌に混ぜて２１日間与えた場合、または０．２％混ぜた場合でのＥｔＭＩＣ２抗原への抗体反応を示している（それぞれＮＯＲ，ＭＧ０．１，ＭＧ０．２）。鳥は感染していないもの、ふ化後１２日で５，０００個のＥ．ｔｅｌｌｅｎａオーシストに感染させ、感染後１０日後に血清をサンプリングしたものとがある。バーは平均±標準偏差（Ｎ＝３）（Ｐ＜０．０５）。
【００２２】
ＥＴ感染に対する抗体誘発反応はすべての感染群で発現された。
更にＰ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉを与えた鳥では、プロバイオティクスを与えなかった鳥に比べると血清から非常に高い（Ｐ＜０．０５）Ｅｉｍｅｒｉａに特有の抗体が検出された（図１）。Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉがブロイラーの特定の寄生虫感染症に対しての液体性免疫を誘起することができることをこの実験は証明している。
【００２３】
組織的細胞免疫反応：リンパ球増殖
【００２４】
図２は、通常の餌のみ、プロバオイティクスを０．０１％，０．１％，１．０％を与えたそれぞれの場合において、鶏の脾細胞の増殖を示すコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）の値を示したものである。ＭはＰ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉの菌混合体である。ふ化後１４日で５，０００のＥＡ（Ｅ．ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ）またはＥＴ（Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ）オーシストによって感染させたものである。脾細胞を集めて、２４時間ＣｏｎＡの存在下で培養された。細胞の増加は［３Ｈ］−チミジンアッセイ法によって計測した。バーは平均±標準偏差（Ｎ＝３）。（Ｐ＜．０５）。
【００２５】
プロバイオティクスを与えた鳥と通常の餌だけを与えた鳥とで、コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）によって誘引された脾細胞の増殖反応により、Ｅｉｍｅｒｉａの感染に対する細胞免疫反応を判断した。
ＥＡ感染症群で０，１％を与えた鳥の脾細胞は通常の餌だけを与えた群やプロバイオティクスの投与量を変えた群と比べると増殖率が非常に高かった（Ｐ＜０．０５）。ＥＴ感染症群で０．０１％０．１％を与えた鳥にＣｏｎＡを刺激する非常に高い脾細胞増殖反応があり（Ｐ＜０．０５）、増殖率は０．１％の方が０．０１％与えた群よりも高かった（図２）。
【００２６】
図３は、Ｅ．ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ（ＥＡ）に感染した鳥の糞便中のオーシスト数を示す。通常の餌のみ（ＲＥＧ）、０．１％（ＭＧ０．１），０．２％（ＭＧ０．２）の濃度でＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉを餌に混ぜて与えた場合の鶏の糞を６−９ｄｐｉの単位で５，０００のＥ．ｔｅｎｅｌｌａを回収した際にオーシスト数を測定した結果である。バーは平均±標準偏差（Ｎ＝５ｃａｇｅ）。
【００２７】
図４は、ふ化後１２日で、５，０００個のＥ．ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ（ＥＡ）オーシストまたはＥ．ｔｅｎｅｌｌａ（ＥＴ）オーシストに感染させた鶏に、通常の餌のみ（ＲＥＧ）、プロバイオティクスをそれぞれ０．０１％（Ｍ００．１），０．１％（Ｍ０．１），１．０％（Ｍ１．０）餌に混ぜて与え、６日後〜１０日後に糞便を回収し、糞便中のオーシスト数を測定した結果である。ＭはＰ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉの菌混合体を示す。バーは平均±標準偏差（Ｎ＝５ｃａｇｅｓ）。
【００２８】
消化器疾患の犬またはウイルスに感染した犬に対する代替医薬品としてのプロバイオティクス
【００２９】
消化器疾患を患った犬へのプロバイオティクスの応用
【００３０】
Ｅｉｍｅｒｉａに感染したブロイラーにＰ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉの菌混合体プロバイオティクスであるＭＩＴＯＭＡＸを与えた成功的結果により、私たちは次に消化器疾患を持つ犬での評価試験を行うことにした。ＭＩＴＯＭＡＸはマサチュウセッツ州ポトマックに所在するイマジリンテクノロジー社のプロバイオティクスの商標であり、Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉとＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ（Ｓ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉ）の混合体をゼラチンカプセルで包み込んだものである。評価試験はブラジルのサンパウロにある３つの動物病院において４名の獣医師によって共同で行った（表２）。犬の体重は２ＫＧから２６ＫＧ、年齢は１歳から１５歳と幅広かった。犬はそれぞれ異なったレベルの消化器疾患を患っており、体重によって、プロバイオティクスのカプセルを毎日１個〜２個与えた。プロバイオティクスを与えて１４日以内に犬の消化器疾患は回復を見せ、症状に大きな回復が見られた。これらの結果はプロバイオティクスが消化器疾患を持つ犬に対して有効であることを示している。
【表２】
【００３１】
バルボウイルスに感染した犬の血便を止める代替医薬品としてのプロバイオティクス
【００３２】
パルボウイルス感染症と診断された４頭の犬は、ＮｏｒｍｏｓｏｌＲ，Ｒｅｇｌａｎ，Ｃｅｆａｚｏｌｉｎ，Ｍｅｔｒｏｎｉｄａｚｏｌｅ，Ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ，＋／−Ｆａｍｏｔｉｄｏｎｅなどを投薬されたが、それでも血便が止まらなかった。そこで、プロバイオティクスとして、Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉの菌混合体を４頭の犬に２−３日間与えた。すると、４頭すべての犬において、血便が止まっただけでなく、便も硬くなった。退院後もプロバイオティクス治療を続けた結果、２週間経過後も血便が再発することはなかった（表３）。
【表３】
【００３３】
プロバイオティクスが動物や人に有効かどうかはプロバイオティクスの生存状態によって左右される。カプセルに包まれたＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉの混合体プロバイオティクスは、室温または４℃で２年間保管した後も保管前とほぼ同様の生存菌数が確認された。Ｅｉｍｅｒｉａに感染したブロイラーに０．０１％−０．４％のＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉを与えても機能形態や体重には特に変化は見られなかった。Ｅ．ａｃｅｒｖｕｌｉｎａまたはＥ．ｔｅｌｌｅｎａに感染したブロイラーに０．１％−１％のＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉを与えた場合でも同じ結果であった。
【００３４】
Ｅｉｍｅｒｉａに感染したブロイラーに対してＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉの混合体プロバイオティクスを与えた時の効果を次の側面から判断した。１）糞便から分離し、測定したオーシスト数の減少、２）抗体生成促進、３）脾細胞の増加促進。Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉの混合体プロバイオティクスを与えることにより下痢、嘔吐、食欲不振、体臭などの消化器疾患を持つ犬の健康状態が良くなることを評価試験が示している。またパルボウイルス感染による血便に苦しむ犬でもＰ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉの混合体プロバイオティクスを２−３日与えることで症状の回復が見られた。
【００３５】
適しているプロバイオティクスは、酵母菌と乳酸菌である。適している微生物のプロバイオティクスはＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属である。適切な酵母菌はＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ｂｏｕｌａｒｄｉｉである。粉末状のプロバイオティクスは、病原性微生物（バクテリア）、ウイルス、菌類、寄生虫、原虫によって引起される消化器疾患に対して有効である。粉末状のプロバイオティクスは、鉤虫、回虫、鞭虫、条虫に対して有効である。粉末状のプロバイオティクスは、ジアルジアなどの寄生虫に対して有効である。
【００３６】
プロバイオティクスは、適量を摂取すれば、人の感染性消化器疾患に有効である。プロバイオティクスは、適量を摂取すれば、魚の感染性消化器疾患に有効である。ドライパウダー状のプロバイオティクスもカプセルに包まれたプロバイオティクスと同様の特徴を持ち、有効である。
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１は抗体反応に対するプロバイオティクスの効果をグラフで示したものである。
【図２】 図２は細胞免疫反応に対するプロバイオティクスの効果をグラフで示したものである。
【図３】 図３はＥ．ａｃｅｒｖｕｌｌｉｎａに感染した鳥の糞便のオーシストをグラフで示したものである。
【図４】 図４はＥ．ａｃｅｒｖｕｌｌｉｎａまたはＥ．ｔｅｎｅｌｌａに感染した鳥の糞便のオーシストをグラフで示したものである。
【技術分野】
【０００１】
プロバイオティクス、ペディオコッカス菌、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ、Ｅｉｍｅｒｉａ、鶏、鳥、消化器疾患、犬、パルボウイルス、ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ
【背景分野】
【０００２】
【特許文献１】米国特許Ｎｏ．５，９６８，５６９はプロバイオティクスを含むゲル化したでんぷん細胞間質のペットフードを示すものであり、具体的には、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属とＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ属について公開している。
【特許文献２】米国特許Ｎｏ．６，５５１，６３３はラクターゼと乳糖を含むペット用の牛乳を主成分とするパウダーに関して公表している。また米国特許Ｎｏ．５，９６８，５６９もプロバイオティクスに関するものである。
【特許文献３】米国特許Ｎｏ．６，７８０，４４７はソルビン酸と微生物（生きているもの、または死んでしまったもの）を含む動物用食品であることを公開している。Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉを含む非常に多種の微生物について公表している。
【特許文献４】米国特許Ｎｏ．６，８２７，９５７は内部がやわらかく、外部にはプロバイオティクスを含む固い殻となっている動物用食品の製造方法を公開したもので、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属について公表されている。
【特許文献５】米国特許Ｎｏ．６，８３５，３９７はＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉとＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃを含む多種のプロバイオティクスを含むカプセル化された酵母について公表している。
【特許文献６】米国公開特許申請番号２００３／００４９２４０はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属とＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属を用いたヘリコバクター感染症を治療する方法について公開している。
【特許文献７】米国公開特許申請番号２００４／０１０９０２５はコーティング処理された生菌を含む粒子の製造方法について公開している。
【特許文献８】米国公開特許申請番号２００４／０１９７３５２は、微生物の数々の菌種を含む、またクレアチンと血液中の尿素窒素を減少させるプレバイオティクス成分について公開している。
【特許文献９】米国公開特許申請番号２００３／０１６５４７２は、微生物の保存と輸送に関しての情報を公開している。
【特許文献１０】米国公開特許申請番号２００６／０００８５１１は、キサンタンとキトサンの混合体カプセルまたはゼラチンカプセルでプロバイオティクスを包み込む製法について公開している。
【非特許文献１】上述とともに関係した手法と制限される前述の例が、実例として挙げられ、あくまで唯一の手法とは限らないことを示唆している。そして、ある論述の他の手法、制限範囲は文献や研究により明白となる。
【発明の開示】
【０００３】
動物用食品などに混ぜて与えるプロバイオティクスを粉末状にする製法。粉末状のプロバイオティクスまたは動物用食品や動物用間食用食品（おやつ）に含まれたプロバイオティクスが鳥や哺乳動物における感染性胃腸症状を治療する方法を示す。粉末状のプロバイオティクスまたは動物用食品や動物用間食用食品（おやつ）に含まれたプロバイオティクスが鳥や哺乳動物における抗原に対する免疫応答を高める方法を示す。
【０００４】
主張内容を分かりやすく説明をするための手法、方法などを用いているが、その範囲には制限されない。上記主張では、上記に記載されている一つまたは複数の問題が減少・解消されたと明記されているが、別の主張では、別の問題に対する向上があったことを示している。
【０００５】
上記の説明の他に、参考文献や図、下記の説明により主張を更に明確にしている。
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
鳥コクシジウム症は鶏の脂肪、吸収不良（飼料が十分に利用されてない）、成長率の低下、雌鳥の卵生産低減を引起す重大な感染症である（Ｌｅｌｌｅｈｏｊ ｅｔ ａｌ．，２００４）。鳥コクシジウム症の最も著しい問題は体重増加率の減少やひどい時には体重減少などの成長障害であり、養鶏業に経済的なダメージを与える（Ｄａｌｌｏｕｌ ａｎｄ Ｌｉｌｌｅｈｏｊ，２００６）。医薬品と生ワクチンがこれまで症状を抑制する方法であったが、医薬品の予防的な使用に対する懸念の高まりやワクチンのコストが高いことなどがあり、代替療法が必要とされている（Ｄａｌｌｏｕｌ ａｎｄ Ｌｉｌｌｅｈｏｊ，２００４）。最近のプロバイオティクス研究では、消化器疾患をもたらすロタウイルスや大腸菌、サルモネラ菌などに対する宿主の液体性免疫に生菌が影響を及ぼすことができることを証明している（Ｉｓｏｌａｕｒｉ，Ｅ．２００３；Ｍａｊａｍａａ，ｅｔ ａｌ １９９５；Ｐｅｒｄｉｇｏｎ，ｅｔ ａｌ ２００１）。プロバイオティクスがＥｉｍｅｒｉａに感染したブロイラーに対して有効な代替医薬品として使用できるには、液体性免疫と細胞性免疫の両方へ作用し、効果があることを証明する必要がある。
【０００７】
パルボイウルスに感染した犬は嘔吐や血便など重い消化器症状を示す。適切に処置しなければ数時間で死に至ることもある。米国ではパルボウイルスに感染した犬を治療する抗生剤はなく、ウイルスを駆逐し回復する為の手段は、犬の自己免疫機能のみである。故に我々はパルボウイルスに感染した犬がプロバイオティクスを与えるべき良い研究対象であると判断した。
【発明が解決するための手段】
【０００８】
Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉがＥｉｍｅｒｉａに感染したブロイラーに有効であることを実証するために、我々はＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉを与えた鶏と与えない鶏に分け、Ｅ．ｔｅｌｌｅｎａの胞子を形成したオーシストに感染させた。Ｅｉｍｅｒｉａに感染したブロイラーへのＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉの有効性を判断するために、Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉを与えたＥｉｍｅｒｉａ感染鶏とプレシーボから採取した便のオーシスト数と、鶏の体重を測定した。
【０００９】
Ｅｉｍｅｒｉａ抗原ＥｔＭＩＣ２に対する抗体反応を評価するために、分子レベルで明らかにされ、複製されたＥｉｍｅｒｉａ微小タンパクの遺伝子を用いた（Ｄａｌｌｏｕｌ ｅｔ ａｌ，２００６）。鶏から集めた血清から抗体生成を判断するためにＥＬＩＳＡ法を用いた。
【００１０】
Ｅｉｍｅｒｉａ感染に対する細胞免疫反応を判断するため、Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉとＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｉｄｉｉを与えたＥｉｍｅｒｉａに感染鶏でのＴ細胞増殖を試みた。脾細胞を集めて、２４時間ＣｏｎＡの存在下で培養された。細胞の増加は［３Ｈ］−チミジンアッセイ法によって計測した。
【００１１】
Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉが消化器疾患に悩む犬への有効性を証明するために、様々な消化器疾患を持つ犬にＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉを与える評価試験を行った。評価試験はブラジルのサンパウロにある３つの動物病院において４名の獣医師によって共同で行った（表２）。犬の体重は２ＫＧから２６ＫＧ、年齢は１歳から１５歳と幅広かった。犬はそれぞれ異なったレベルの消化器疾患を患っており、体重によって、プロバイオティクスのカプセルを毎日１個〜２個与えた。
【００１２】
Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉが病原菌の感染による消化器疾患に悩む犬への有効性を証明するために、パルボウイルスに感染した犬にＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉを与えた。
【００１３】
典型的な面と実施例が以上の様に検討されてきたが、技術的手法の改訂、追加等がある。以下に示す、添付の特許請求範囲において、改訂、修正、追加がそれぞれの条項の本質の範疇において含まれることが意図される。
【発明の効果】
【００１４】
ブロイラーの寄生虫感染症に対する代替医薬品としてのプロバイオティクス
【００１５】
Ｅｉｍｅｒｉａに感染したブロイラーにおけるプロバイオティクスの毒性試験
【００１６】
生後１日後のブロイラー１５羽〜２０羽を１グループとしてそれぞれの育雛器に入れた。各グループはプレシーボとして餌のみを与えるものと、餌と一緒にＰ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉを混ぜて与えるものに分けた。Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉを０％，０．０１％，０．０５％，０．１％，０．４％の濃度で餌に混ぜて与えた。１０日目にはプレシーボ（Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉを与えない、感染なし）以外は、５，０００個のＥｉｍｅｒｉａ ａｃｅｒｖｕｌｉｎａオーシストを口径投与により感染させた。体重は０，６，９日目に測定し（ｄｐｉ）、体重の増加を観察した。オーシスト数を測定するため、感染後４，６，９日目の糞便を収集した。
【００１７】
試験的な治療はカリフォルニア州、サンディエゴに所在するＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．が所有する統計学ソフトウエア、ＧＲＡＰＨＰＡＤ ＩＮＳＴＡＴによって相違分析を行った。確率がＰ＜０．０５であれば違いを認めることにした。平均値はＤｕｎｎｅｔｔ比較テストにより比較した。
【表１】
【００１８】
医薬品としての薬効があるかどうかの創薬実験をする前に、毒性などの副作用をいかに回避するかが重要である。Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉは人や動物の消化管にもともと住んでいる天然の微生物であり、毒性があると報告をしている文献はこれまでに発表されていない。またブロイラーにおいてＰ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉに毒性があるかどうかを調査するために、ブロイラーもしくはＥ．ａｃｅｒｖｕｌｉｎａに感染した鶏に、０．０１％から０．０４％のＰ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉを与えた。Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉを与えたブロイラー、またＰ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉを与えたＥ．ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ感染鶏、いずれにおいても体重減少や死亡などは確認されなかった。また１％から１００％のＰ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉを混ぜた餌を０．０１％の濃度で与えた群と１．０％の濃度で与えた群があるが、ＥＡ感染群とＥＴ感染群において感染中でもかなりの体重増加が見られた（表１Ａ）。実験期間中、プロバイオティクスを与えた後、鶏の主要器官（肝臓、心臓、腎臓、脾臓）において異常はみられなかった。Ｅｉｍｅｒｉａに感染したブロイラーに４０倍の濃度範囲（０．０１−０．４％の範囲）、またＰ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉ Ｓ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉを混ぜて１００倍の濃度範囲（０．０１−１．０％の範囲）で与えたが組織的な変化は見られなかったことが結果から分かる。
【００１９】
Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉがＥｉｍｅｒｉａに感染したブロイラーに有効であることを実証するために、我々はＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉを与えた鶏と与えない鶏に分け、Ｅ．ｔｅｌｌｅｎａの胞子を形成したオーシストに感染させた。
Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉを与えたブロイラーでは、オーシストが２０％−４０％減少した。同様にＥ．ａｃｅｒｖｕｌｉｎａに感染させたブロイラーでＰ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉの菌混合体を与えた場合、３０％−５０％、Ｅ．ｔｅｌｌｅｎａに感染させたブロイラーでＰ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉの菌混合体を与えた場合、１０％−２０％減少した。これらは、プロバイオティクスが病原菌や寄生虫感染を減少させる効果があることを示している。
【００２０】
Ｅｉｍｅｒｉａに感染したブロイラーにプロバオイティクスを与えると液体性免疫反応が刺激される。
【００２１】
図１は、ブロイラーにそれぞれプロバオイティクスを与えなかった場合、Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉの菌混合体を０．１％餌に混ぜて２１日間与えた場合、または０．２％混ぜた場合でのＥｔＭＩＣ２抗原への抗体反応を示している（それぞれＮＯＲ，ＭＧ０．１，ＭＧ０．２）。鳥は感染していないもの、ふ化後１２日で５，０００個のＥ．ｔｅｌｌｅｎａオーシストに感染させ、感染後１０日後に血清をサンプリングしたものとがある。バーは平均±標準偏差（Ｎ＝３）（Ｐ＜０．０５）。
【００２２】
ＥＴ感染に対する抗体誘発反応はすべての感染群で発現された。
更にＰ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉを与えた鳥では、プロバイオティクスを与えなかった鳥に比べると血清から非常に高い（Ｐ＜０．０５）Ｅｉｍｅｒｉａに特有の抗体が検出された（図１）。Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉがブロイラーの特定の寄生虫感染症に対しての液体性免疫を誘起することができることをこの実験は証明している。
【００２３】
組織的細胞免疫反応：リンパ球増殖
【００２４】
図２は、通常の餌のみ、プロバオイティクスを０．０１％，０．１％，１．０％を与えたそれぞれの場合において、鶏の脾細胞の増殖を示すコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）の値を示したものである。ＭはＰ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉの菌混合体である。ふ化後１４日で５，０００のＥＡ（Ｅ．ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ）またはＥＴ（Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ）オーシストによって感染させたものである。脾細胞を集めて、２４時間ＣｏｎＡの存在下で培養された。細胞の増加は［３Ｈ］−チミジンアッセイ法によって計測した。バーは平均±標準偏差（Ｎ＝３）。（Ｐ＜．０５）。
【００２５】
プロバイオティクスを与えた鳥と通常の餌だけを与えた鳥とで、コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）によって誘引された脾細胞の増殖反応により、Ｅｉｍｅｒｉａの感染に対する細胞免疫反応を判断した。
ＥＡ感染症群で０，１％を与えた鳥の脾細胞は通常の餌だけを与えた群やプロバイオティクスの投与量を変えた群と比べると増殖率が非常に高かった（Ｐ＜０．０５）。ＥＴ感染症群で０．０１％０．１％を与えた鳥にＣｏｎＡを刺激する非常に高い脾細胞増殖反応があり（Ｐ＜０．０５）、増殖率は０．１％の方が０．０１％与えた群よりも高かった（図２）。
【００２６】
図３は、Ｅ．ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ（ＥＡ）に感染した鳥の糞便中のオーシスト数を示す。通常の餌のみ（ＲＥＧ）、０．１％（ＭＧ０．１），０．２％（ＭＧ０．２）の濃度でＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉを餌に混ぜて与えた場合の鶏の糞を６−９ｄｐｉの単位で５，０００のＥ．ｔｅｎｅｌｌａを回収した際にオーシスト数を測定した結果である。バーは平均±標準偏差（Ｎ＝５ｃａｇｅ）。
【００２７】
図４は、ふ化後１２日で、５，０００個のＥ．ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ（ＥＡ）オーシストまたはＥ．ｔｅｎｅｌｌａ（ＥＴ）オーシストに感染させた鶏に、通常の餌のみ（ＲＥＧ）、プロバイオティクスをそれぞれ０．０１％（Ｍ００．１），０．１％（Ｍ０．１），１．０％（Ｍ１．０）餌に混ぜて与え、６日後〜１０日後に糞便を回収し、糞便中のオーシスト数を測定した結果である。ＭはＰ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉの菌混合体を示す。バーは平均±標準偏差（Ｎ＝５ｃａｇｅｓ）。
【００２８】
消化器疾患の犬またはウイルスに感染した犬に対する代替医薬品としてのプロバイオティクス
【００２９】
消化器疾患を患った犬へのプロバイオティクスの応用
【００３０】
Ｅｉｍｅｒｉａに感染したブロイラーにＰ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉの菌混合体プロバイオティクスであるＭＩＴＯＭＡＸを与えた成功的結果により、私たちは次に消化器疾患を持つ犬での評価試験を行うことにした。ＭＩＴＯＭＡＸはマサチュウセッツ州ポトマックに所在するイマジリンテクノロジー社のプロバイオティクスの商標であり、Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉとＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ（Ｓ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉ）の混合体をゼラチンカプセルで包み込んだものである。評価試験はブラジルのサンパウロにある３つの動物病院において４名の獣医師によって共同で行った（表２）。犬の体重は２ＫＧから２６ＫＧ、年齢は１歳から１５歳と幅広かった。犬はそれぞれ異なったレベルの消化器疾患を患っており、体重によって、プロバイオティクスのカプセルを毎日１個〜２個与えた。プロバイオティクスを与えて１４日以内に犬の消化器疾患は回復を見せ、症状に大きな回復が見られた。これらの結果はプロバイオティクスが消化器疾患を持つ犬に対して有効であることを示している。
【表２】
【００３１】
バルボウイルスに感染した犬の血便を止める代替医薬品としてのプロバイオティクス
【００３２】
パルボウイルス感染症と診断された４頭の犬は、ＮｏｒｍｏｓｏｌＲ，Ｒｅｇｌａｎ，Ｃｅｆａｚｏｌｉｎ，Ｍｅｔｒｏｎｉｄａｚｏｌｅ，Ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ，＋／−Ｆａｍｏｔｉｄｏｎｅなどを投薬されたが、それでも血便が止まらなかった。そこで、プロバイオティクスとして、Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉの菌混合体を４頭の犬に２−３日間与えた。すると、４頭すべての犬において、血便が止まっただけでなく、便も硬くなった。退院後もプロバイオティクス治療を続けた結果、２週間経過後も血便が再発することはなかった（表３）。
【表３】
【００３３】
プロバイオティクスが動物や人に有効かどうかはプロバイオティクスの生存状態によって左右される。カプセルに包まれたＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉの混合体プロバイオティクスは、室温または４℃で２年間保管した後も保管前とほぼ同様の生存菌数が確認された。Ｅｉｍｅｒｉａに感染したブロイラーに０．０１％−０．４％のＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉを与えても機能形態や体重には特に変化は見られなかった。Ｅ．ａｃｅｒｖｕｌｉｎａまたはＥ．ｔｅｌｌｅｎａに感染したブロイラーに０．１％−１％のＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉを与えた場合でも同じ結果であった。
【００３４】
Ｅｉｍｅｒｉａに感染したブロイラーに対してＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉの混合体プロバイオティクスを与えた時の効果を次の側面から判断した。１）糞便から分離し、測定したオーシスト数の減少、２）抗体生成促進、３）脾細胞の増加促進。Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉの混合体プロバイオティクスを与えることにより下痢、嘔吐、食欲不振、体臭などの消化器疾患を持つ犬の健康状態が良くなることを評価試験が示している。またパルボウイルス感染による血便に苦しむ犬でもＰ．ａｃｉｄｉｌａｔｉｃｉとＳ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉの混合体プロバイオティクスを２−３日与えることで症状の回復が見られた。
【００３５】
適しているプロバイオティクスは、酵母菌と乳酸菌である。適している微生物のプロバイオティクスはＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属である。適切な酵母菌はＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ｂｏｕｌａｒｄｉｉである。粉末状のプロバイオティクスは、病原性微生物（バクテリア）、ウイルス、菌類、寄生虫、原虫によって引起される消化器疾患に対して有効である。粉末状のプロバイオティクスは、鉤虫、回虫、鞭虫、条虫に対して有効である。粉末状のプロバイオティクスは、ジアルジアなどの寄生虫に対して有効である。
【００３６】
プロバイオティクスは、適量を摂取すれば、人の感染性消化器疾患に有効である。プロバイオティクスは、適量を摂取すれば、魚の感染性消化器疾患に有効である。ドライパウダー状のプロバイオティクスもカプセルに包まれたプロバイオティクスと同様の特徴を持ち、有効である。
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１は抗体反応に対するプロバイオティクスの効果をグラフで示したものである。
【図２】 図２は細胞免疫反応に対するプロバイオティクスの効果をグラフで示したものである。
【図３】 図３はＥ．ａｃｅｒｖｕｌｌｉｎａに感染した鳥の糞便のオーシストをグラフで示したものである。
【図４】 図４はＥ．ａｃｅｒｖｕｌｌｉｎａまたはＥ．ｔｅｎｅｌｌａに感染した鳥の糞便のオーシストをグラフで示したものである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
プロバイオティクスとして、最低１種類以上のプロバイオティクスを粉末状にする製法。
【請求項２】
プロバイオティクスとして乳酸菌・酵母菌を粉末状にする製法。
【請求項３】
プロバイオティクスとしてＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属の乳酸菌・Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属の酵母菌を粉末状にする製法。
【請求項４】
Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ｂｏｕｌａｒｄｉｉをを粉末状にする製法。
【請求項５】
請求項１で主張するプロバイオティクスを与えることは、感染症にかかった鳥、魚、哺乳動物の生体内の抗原に対する免疫応答を調整・治療する手段の一つである。
【請求項６】
請求項５で主張する手段としてのプロバイオティクスは、動物用食品、動物用間食（おやつ）、動物用調味料、発酵牛乳製品、もしくはヨーグルトに含まれる。
【請求項７】
請求項５で主張する手段の対象となる鳥は、鶏、オウム、インコ、鳩、七面鳥、鴨、ガチョウを含む。
【請求項８】
請求項５で主張する手段の対象となる哺乳動物は、犬、猫、モルモット、ハムスター、ネズミ、うさぎ、サル、チンパンジー、豚、人を含む。
【請求項９】
請求項５で主張する感染症とは、病原性微生物、ウイルス、菌類、寄生虫、原虫によって引起される。
【請求項１０】
請求項９で主張するウイルスとは、パルボウイルス、ロタウイルス、インフルエンザウイルスを示す。
【請求項１１】
請求項９で主張する寄生虫とは、鉤虫、回虫、鞭虫、条虫を示す。
【請求項１２】
請求項９で主張する原虫とは、アイメリア、ジアルジア、クリプトスポリジウム、トキソプラズマ、プラスモジウム、リーシュマニア、サイクロスポーラを示す。
【請求項１３】
請求項５で主張する免疫応答の調整とは、抗体を増やす、またはＴ細胞もしくはヘルパーＴ細胞の増殖を促進することを示す。
【請求項１４】
請求項１で主張するプロバイオティクスを与えることは、鳥、魚、哺乳動物の抗原に対する免疫応答を高める手段の一つである。
【請求項１５】
請求項１４で主張する免疫応答の調整とは、抗体生成能力を高めること、またはＴ細胞の増殖能力を高めることを示す。
【請求項１６】
請求項１４で主張する手段としてのプロバイオティクスは動物用食品、動物用間食（おやつ）、動物用調味料、発酵牛乳製品、もしくはヨーグルトに含まれる。
【請求項１】
プロバイオティクスとして、最低１種類以上のプロバイオティクスを粉末状にする製法。
【請求項２】
プロバイオティクスとして乳酸菌・酵母菌を粉末状にする製法。
【請求項３】
プロバイオティクスとしてＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属の乳酸菌・Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属の酵母菌を粉末状にする製法。
【請求項４】
Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ｂｏｕｌａｒｄｉｉをを粉末状にする製法。
【請求項５】
請求項１で主張するプロバイオティクスを与えることは、感染症にかかった鳥、魚、哺乳動物の生体内の抗原に対する免疫応答を調整・治療する手段の一つである。
【請求項６】
請求項５で主張する手段としてのプロバイオティクスは、動物用食品、動物用間食（おやつ）、動物用調味料、発酵牛乳製品、もしくはヨーグルトに含まれる。
【請求項７】
請求項５で主張する手段の対象となる鳥は、鶏、オウム、インコ、鳩、七面鳥、鴨、ガチョウを含む。
【請求項８】
請求項５で主張する手段の対象となる哺乳動物は、犬、猫、モルモット、ハムスター、ネズミ、うさぎ、サル、チンパンジー、豚、人を含む。
【請求項９】
請求項５で主張する感染症とは、病原性微生物、ウイルス、菌類、寄生虫、原虫によって引起される。
【請求項１０】
請求項９で主張するウイルスとは、パルボウイルス、ロタウイルス、インフルエンザウイルスを示す。
【請求項１１】
請求項９で主張する寄生虫とは、鉤虫、回虫、鞭虫、条虫を示す。
【請求項１２】
請求項９で主張する原虫とは、アイメリア、ジアルジア、クリプトスポリジウム、トキソプラズマ、プラスモジウム、リーシュマニア、サイクロスポーラを示す。
【請求項１３】
請求項５で主張する免疫応答の調整とは、抗体を増やす、またはＴ細胞もしくはヘルパーＴ細胞の増殖を促進することを示す。
【請求項１４】
請求項１で主張するプロバイオティクスを与えることは、鳥、魚、哺乳動物の抗原に対する免疫応答を高める手段の一つである。
【請求項１５】
請求項１４で主張する免疫応答の調整とは、抗体生成能力を高めること、またはＴ細胞の増殖能力を高めることを示す。
【請求項１６】
請求項１４で主張する手段としてのプロバイオティクスは動物用食品、動物用間食（おやつ）、動物用調味料、発酵牛乳製品、もしくはヨーグルトに含まれる。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公開番号】特開２００８−４４９４５（Ｐ２００８−４４９４５Ａ）
【公開日】平成２０年２月２８日（２００８．２．２８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−２１７６２８（Ｐ２００７−２１７６２８）
【出願日】平成１９年７月２６日（２００７．７．２６）
【出願人】（５０６２６７９０５）有限会社ヘルスビジョン (2)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年２月２８日（２００８．２．２８）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年７月２６日（２００７．７．２６）
【出願人】（５０６２６７９０５）有限会社ヘルスビジョン (2)
【Ｆターム（参考）】
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