新規Ａ−９７０６５類物質
【課題】
従来のタイプの薬剤とは交差耐性がなく、かつ、優れた抗菌活性を有する化合物を提供すること。
【解決手段】
下記一般式（Ｉ）で表される化合物等。
【化１】
（Ｉ）
［式中、Ｘは水酸基又はリン酸基を表し、Ｘが水酸基である場合、Ｒは−（ＣＨ２）８ＣＨ（ＣＨ３）２ ]又は −（ＣＨ２）１０ＣＨ（ＣＨ３）２を表し、Ｘがリン酸基である場合Ｒは−（ＣＨ２）１０ＣＨ（ＣＨ３）２を表す］
従来のタイプの薬剤とは交差耐性がなく、かつ、優れた抗菌活性を有する化合物を提供すること。
【解決手段】
下記一般式（Ｉ）で表される化合物等。
【化１】
（Ｉ）
［式中、Ｘは水酸基又はリン酸基を表し、Ｘが水酸基である場合、Ｒは−（ＣＨ２）８ＣＨ（ＣＨ３）２ ]又は −（ＣＨ２）１０ＣＨ（ＣＨ３）２を表し、Ｘがリン酸基である場合Ｒは−（ＣＨ２）１０ＣＨ（ＣＨ３）２を表す］
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、優れたトランスロケースＩ阻害活性を有する新規化合物、該化合物を有効成分として含有する医薬（特に、抗菌剤）、該化合物の製造方法、及び該化合物を生産する新規微生物に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、細菌感染症の予防及び治療には各種ベータラクタム抗生物質、アミノ配糖体、マクロライド、グリコペプチド、キノロンなどが使われてきたが、最近これらの抗生物質に耐性を示す感染菌が増加しており、従来のタイプとは異なる抗生物質が渇望されている。
【０００３】
細菌細胞壁構成成分である、ペプチドグリカン生合成に関与するトランスロケースＩは、細菌の生育には必須の酵素である。近年、トランスロケースＩ阻害活性に基づき、マイコバクテリウム属の細菌に対して抗菌活性を示す化合物として、リポシドマイシン（ｌｉｐｏｓｉｄｏｍｙｃｉｎ）類、カプラザマシン（ｃａｐｒａｚａｍｙｃｉｎ）類、ムラミノミシン（ｍｕｒａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）類等が報告されている（例えば、特許文献１、特許文献２、非特許文献１及び非特許文献２参照）。これらはいずれも類似した母核構造を有する化合物であるが、本発明の化合物であるＡ‐９７０６５類物質と同一の母核構造を有する化合物は未だ報告されていない。
【特許文献１】国際公開第 ＷＯ ０１／１２６４３号パンフレット
【特許文献２】国際公開第 ＷＯ ２００４／０４６３６８号パンフレット
【非特許文献１】ジャーナルオブアンチビオチクス，１９８５年，第３８巻，ｐ．１６１７−１６２１（J．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，１９８５，３８，ｐ．１６１７−１６２１）
【非特許文献２】アグリカルチュラルアンドバイオロジカルケミストリー，１９８９年，第５３巻，ｐ．１８１１−１８１５（Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，１９８９，５３，ｐ．１８１１−１８１５）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明者らは、抗菌活性を有する新規化合物を見出すべく鋭意探索研究を行った結果、ストレプトマイセス属に属する微生物の培養物中に新規化合物を見出し、これらの化合物がトランスロケースＩ阻害活性に基づく抗菌活性を有し、従来のタイプの薬剤とは交差耐性がなく、かつ、従来知られていた化合物と比べて優れた酵素阻害活性を有することを見出すと共に、該化合物を生産する新規微生物及び該微生物を用いた該化合物の製造方法を確立し、本発明を完成した。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、下記（１）乃至（３）のいずれかで示される新規化合物に関する。
（１）下記、一般式(Ｉ)：
【０００６】
【化１】
【０００７】
（Ｉ）
［式中、Ｘは水酸基又はリン酸基を表し、Ｘが水酸基である場合、Ｒは−（ＣＨ２）８ＣＨ（ＣＨ３）２ ]又は −（ＣＨ２）１０ＣＨ（ＣＨ３）２を表し、Ｘがリン酸基である場合Ｒは−（ＣＨ２）１０ＣＨ（ＣＨ３）２を表す］
で表される化合物又はその塩。
（２）下記の物理化学的性状を有する化合物又はその塩。
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）溶解性：メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶、クロロホルムに不溶
３）分子式：Ｃ４３Ｈ６９Ｎ５Ｏ１８
４）分子量：９４３（ＦＡＢマススペクトル法により測定)
５）高分解能ＦＡＢマススペクトル法により測定した精密質量、[Ｍ＋Ｈ]＋は次に示す通りである。
実測値：９４４．４６７１
計算値：９４４．４７１６
６）紫外部吸収スペクトル：
ジメチルスルホキシド中で測定した紫外部吸収スペクトルは、次に示す極大吸収を示す：
２６３ｎｍ（ε８３００)
７）旋光度：
ジメチルスルホキシド中で測定した旋光度は、以下に示す値を示す：
[α]Ｄ２９：＋１．５°（ｃ０．４)
８）赤外吸収スペクトル：
臭化カリウム（ＫＢｒ）錠剤法で測定した赤外吸収スペクトルは以下に示す極大吸収を示す。
３３８８，２９５４，２９２６，２８５５，１７３６，１６９９，１６３２，１４６６，１３９３，１２６９，１１２２，１０６８，１０１５ｃｍ−１
９）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：
重メタノール中、内部標準に重メタノール（４．７８ｐｐｍ）を用いて測定した、１Ｈ−核磁気共鳴スペクトルは、以下に示すとおりである。
０．７４（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），０．８７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．０−１．２（１４Ｈ，ｍ），１．３７（１Ｈ，ｍ），１．４９（２Ｈ，ｍ），２．０−２．３（５Ｈ，ｍ），２．３３（３Ｈ，ｓ），２．５（２Ｈ，ｍ），２．９５（１Ｈ，ｍ），２．９７（３Ｈ，ｓ），３．０２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．０，３．７Ｈｚ），３．１２(１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．７，１３．４），３．２９（１Ｈ，ｍ），３．３０（３Ｈ，ｓ），３．６５（１Ｈ，ｄ，４．７Ｈｚ），３．７８（１Ｈ，ｄ，J＝８．７Ｈｚ），３．９３（１Ｈ，ｄｄ，５．４，７．４Ｈｚ），３．９７（１Ｈ，ｍ)，４．０５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．３，７．４Ｈｚ），４．０７（２Ｈ，ｍ），４．１８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ），４．２７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．３，８．７Ｈｚ），５．１１（１Ｈ，ｍ），５．１３（１Ｈ，ｓ），５．３７（１Ｈ，ｍ），５．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ），５．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）ｐｐｍ
１０）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：
重メタノール中、内部標準に重メタノール（４９．０ｐｐｍ）を用いて測定した、１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトルは、以下に示すとおりである。
２０．１（ｑ），２３．１（ｑ），２３．１（ｑ），２６．３（ｔ），２８．６（ｔ），２８．７（ｄ），２９．２（ｄ），３０．４（ｔ），３０．６（ｔ），３０．７（ｔ），３１．０（ｔ），３５．１（ｔ），３７．８（ｑ），３９．０（ｑ），４０．２（ｔ)，４０．４（ｔ)，４１．６（ｔ)，４１．６（ｔ），４１．８（ｔ）５８．２（ｔ)，５８．７（ｑ)，６４．１(ｄ)，６７．７（ｄ)，７０．７（ｄ)，７１．６（ｄ），７１．９（ｄ)，７３．７（ｄ)，７４．９（ｄ)，７９．２（ｄ)，８０．５（ｄ)，８４．９（ｄ)，８５．７（ｄ)，９２．８（ｄ)，１０２．３（ｄ)，１０９．１（ｄ)，１４３．４（ｄ)，１５２．０（ｓ)，１６６．３（ｓ)，１７１．０（ｓ)，１７２．８（ｓ)，１７３．０（ｓ)，１７３．８（ｓ)，１７６．４（ｓ）ｐｐｍ。
（３）下記の物理化学的性状を有する化合物又はその塩。
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）溶解性：メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶、クロロホルムに不溶
３）分子式：Ｃ４５Ｈ７４Ｎ５Ｏ２１Ｐ
４）分子量：１０５１（ＦＡＢマススペクトル法により測定)
５）高分解能ＦＡＢマススペクトル法により測定した精密質量、[Ｍ−Ｈ]―は次に示す通りである。
実測値：１０５０．４５５０
計算値：１０５０．４５３６
６）紫外部吸収スペクトル：
メタノール中で測定した紫外部吸収スペクトルは、次に示す極大吸収を示す：
２６２ｎｍ（ε７９００)
７）旋光度：
メタノール中で測定した旋光度は、以下に示す値を示す：
[α]Ｄ２９：＋７．０°（ｃ０．８)
８）赤外吸収スペクトル：
臭化カリウム（ＫＢｒ）錠剤法で測定した赤外吸収スペクトルは以下に示す極大吸収を示す。
３３９７，２９２６，２８５４，１７３５，１７００，１４６６，１３８５，１２６８，１１２９，１０７４，９３８ｃｍ−１
９）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：
重メタノール中、内部標準に重メタノール（４．７８ｐｐｍ）を用いて測定した、１Ｈ−核磁気共鳴スペクトルは、以下に示すとおりである。
０．７９（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），０．９２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．０９（２Ｈ，ｍ），１．２−１．３（１６Ｈ，ｍ），１．４３（１Ｈ，ｍ），１．５５（２Ｈ，ｍ），２．１（２Ｈ，ｍ），２．２−２．３（３Ｈ，ｍ），２．３８（３Ｈ，ｓ），２．５５（２Ｈ，ｍ），３．０２（３Ｈ，ｓ），３．０（１Ｈ，ｂｒ．ｍ），３．２（２Ｈ，ｍ），３．３６（３Ｈ，ｓ)，３．４０（１Ｈ，ｍ），３．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ），３．８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ)，３．９７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．９，６．６Ｈｚ），４．１１（２Ｈ，ｍ)，４．１７（２Ｈ，ｍ)，４．３０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．０，８．４Ｈｚ），４．５２（１Ｈ，ｍ)，５．１４（１Ｈ，ｍ)，５．１５（１Ｈ，ｍ），５．４４（１Ｈ，ｍ)，５．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ)，５．７６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ)，７．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ）ｐｐｍ
１０）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：
重メタノール中、内部標準に重メタノール（４９．０ｐｐｍ）を用いて測定した、１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトルは、以下に示すとおりである。
２０．２（ｑ），２３．１（ｑ），２６．３（ｔ），２８．５（ｔ），２８．９（ｄ），２９．２（ｄ），３０．４（ｔ），３０．６(ｔ)，３０．７（ｔ），３０．７（ｔ），３０．８（ｔ），３１．０（ｔ），３５．１（ｔ），３８．０（ｑ），３９．０（ｑ），４０．３（ｔ），４０．４（ｔ），４１．４（ｔ），４１．７（ｔ），４２．３（ｔ），５８．４（ｔ），５９．１（ｑ），６４．０(ｄ），６８．２（ｄ），７０．８（ｄ），７１．９（ｄ），７４．１（ｄ），７４．４（ｄ），７５．１（ｄ），７８．９（ｄ），７９．２（ｄ），８４．９（ｄ），８５．３（ｄ），９２．０（ｄ），１０２．７（ｄ），１０９．１（ｄ），１４３．０（ｄ），１５２．１（ｓ），１６６．３（ｓ），１７１．０（ｓ），１７３．０（ｓ），１７３．８（ｓ），１７７．１（ｓ）ｐｐｍ。
【０００８】
また、本発明は、下記の（４）及び（５）に記載の製造方法に関する。
（４）ストレプトマイセス属に属する、（１）乃至（３）のいずれか１項に記載の化合物の生産菌を培養し、その培養物より該化合物を採取することを特徴とする、（１）乃至（３）のいずれか１項に記載の化合物の製造方法。
（５）該生産菌がストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＳＡＮＫ６０７０４（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６２９）である、（４）に記載の製造方法。
【０００９】
また、本発明は（６）及び（７）に記載の微生物に関する。
（６）ストレプトマイセス属に属し、（１）乃至（３）のいずれか１項に記載の化合物を生産することを特徴とする微生物。
（７）ストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＳＡＮＫ６０７０４（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６２９）。
【００１０】
また本発明は、下記（８）及び（９）に記載の脱リン酸化化合物の製造方法に関する。
（８）一般式（Ｉ）においてＸがリン酸基である（１）に記載の化合物又はその塩を脱リン酸化反応に供することを特徴とする、一般式（Ｉ）においてＸがリン酸基である（１）に記載の化合物又はその塩を出発物質として一般式（Ｉ）においてＸが水酸基であり、Ｒが出発物質と同一である（１）に記載の化合物又はその塩を製造する方法。
（９）脱リン酸化酵素を用いることを特徴とする（８）に記載の製造方法
更に本発明は、下記（１０）及び（１１）に記載の医薬に関する。
（１０）請求項１乃至３のいずれか１項に記載の化合物又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬。
（１１）抗菌剤である、請求項１０に記載の医薬。
【００１１】
本発明において、一般式（Ｉ）
【００１２】
【化２】
【００１３】
（Ｉ）
［式中、Ｘは水酸基又はリン酸基を表し、Ｒは炭化水素鎖を表す］により表わされる構造からなる化合物を「Ａ−９７０６５類物質」とよぶ。
本発明のＡ−９７０６５類物質において、上記一般式（Ｉ）中Ｘが水酸基である化合物をＡ−９７０６５Ａ物質と呼ぶ。また、Ａ−９７０６５Ａ物質において、Ｒが−（ＣＨ２）８ＣＨ（ＣＨ３）２である化合物又は上記（ｉ）に記載の物理化学的性状を有する化合物をＡ１物質と呼び、Ｒが−（ＣＨ２）１０ＣＨ（ＣＨ３）２である化合物をＡ２物質と呼ぶ。
本発明のＡ−９７０６５類物質において、上記一般式（Ｉ）中Ｘがリン酸基である化合物をＡ−９７０６５Ｂ物質と呼ぶ。また、Ａ−９７０６５Ｂ物質において、Ｒが−（ＣＨ２）１０ＣＨ（ＣＨ３）２である化合物又は上記（ｉｉ）に記載の物理化学的性状を有する化合物をＢ２物質と呼ぶ。
【００１４】
本発明の化合物は、いくつかの不斉炭素原子を有するため、種々の光学異性体が存在する。一般式（Ｉ）において、これらの異性体はすべて単一の式で示されているが、本発明はラセミ化合物を含むこれらの異性体、及びこれらの異性体の混合物をもすべて含む。これらの異性体は、立体特異的合成法により、若しくは光学活性化合物を原料化合物とした合成により、製造することができ、又は、異性体の混合物として製造した後、所望の異性体をクロマトグラフィー等を用いて常法により単離することにより製造することもできる。
【００１５】
本発明の化合物は、カルボキシル基、アミノ基等を有するため、酸又は塩基を用いて当業者に周知の方法により塩にすることができる。本発明はこれらの塩も包含する。本発明の化合物の塩を医薬として使用する場合、医学的に使用され、薬理学的に許容されるものであれば特に限定されない。また、本発明の化合物の塩を医薬以外の用途に用いる場合、例えば中間体として用いる場合には、該用途に用いることのできるものであれば特に限定されない。
そのような塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、のようなアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩、のようなアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、ニッケル塩、コバルト塩等の金属塩；アンモニウム塩のような無機塩；ｔ−オクチルアミン塩、ジベンジルアミン塩、モルホリン塩、グルコサミン塩、フェニルグリシンアルキルエステル塩、エチレンジアミン塩、Ｎ−メチルグルカミン塩、グアニジン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩、クロロプロカイン塩、プロカイン塩、ジエタノールアミン塩、Ｎ−ベンジル−フェネチルアミン塩、ピペラジン塩、テトラメチルアンモニア塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩のような有機アミン塩；グリシン塩、リジン塩、アルギニン塩、オルニチン塩、アスパラギン塩のようなアミノ酸塩；酢酸塩、臭化物塩、塩化物塩、塩酸塩、臭酸塩、ヨウ化物塩、硫酸塩、リン酸塩、ニリン酸塩のような無機塩；及びクエン酸塩、マレイン酸塩、パモ酸塩、酒石酸塩のような有機酸塩等を挙げることができる。好適には、薬理学的に許容される塩であり、より好適には、ナトリウム塩、カリウム塩、塩酸塩、アンモニウム塩、パモ酸塩である。
【００１６】
また、本発明の化合物及びその塩は、大気中に放置したり、水又は有機溶媒と混和することによって水又は溶媒と結合し、水和物又は溶媒和物を形成する場合があるが、これらの水和物及び溶媒和物も「薬理上許容される塩」として本発明に含まれる。
本発明のＡ−９７０６５類物質のうちＡ１物質、Ｂ２物質等多くのものはは、ストレプトマイセス属に属する菌株を培養することにより、その培養液中から得ることができる。本発明の化合物の製造法において用いられるストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する菌株としては、例えばストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＳＡＮＫ ６０７０４株を挙げることができる。ＳＡＮＫ ６０７０４株は沖縄県で採集された土壌から分離できる。ＳＡＮＫ ６０７０４株の菌学的特徴は、次のとおりである。
【００１７】
１．形態学的特徴
ＳＡＮＫ ６０７０４株は、ＩＳＰ〔インターナショナル・ストレプトマイセス・プロジェクト（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ Ｐｒｏｊｅｃｔ）〕規定の寒天培地上２８℃、１４日間培養後、顕微鏡下観察では、基生菌糸は良好に伸長、分岐し、白乃至茶味灰を示すが、ノカルディア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）属菌株様の菌糸断裂やジグザグ伸長は観察されない。気菌糸は単純分岐である。気菌糸の先端に１０乃至５０個又はそれ以上の胞子連鎖を形成し、胞子連鎖の形態は螺旋状を示す。走査型電子顕微鏡による観察では、胞子の表面構造は平滑(smooth)状を示す。胞子は楕円形で、その大きさは0.4乃至0.7 μm、×0.8乃至1.2 μmである。また、気菌糸の車軸分岐、菌核や胞子のうなどの特殊器官は観察されない。
【００１８】
２．各種培養基上の諸性質
各種培養基上で２８℃、１４日培養後の性状は表１に示したとおりである。色調の表示はマンセル方式による日本色彩研究所版「標準色票」のカラーチップ・ナンバーをあらわす。
［表１］
培地の種類 項目*1 ＳＡＮＫ ６０７０４株の性状
イーストエキス Ｇ ： 非常に良好、隆起状、黄味茶(10YR 7/6)
麦芽エキス寒天 ＡＭ ： 豊富に形成、ビロード状、明茶味灰(10YR 7/1)
(ISP 2) Ｒ ： 黄味茶(10YR 7/6)
ＳＰ ： 黄味茶(10YR 5/6)
オートミール寒天 Ｇ ： 良好、隆起状、薄黄味茶(2.5Y 8/4)
(ISP 3) ＡＭ ： 余り良くない、ビロード状、白
Ｒ ： 薄黄味茶(2.5Y 8/4)
ＳＰ ： 産生せず
澱粉・無機塩寒天 Ｇ ： 非常に良好、隆起状、黄味茶(2.5Y 7/4)
(ISP 4) ＡＭ ： 非常に良好、ビロード状、茶味灰(2.5Y 5/1)
Ｒ ： 黄味茶(2.5Y 7/4)
ＳＰ ： 産生せず
グリセリン・ Ｇ ： 非常に良好、隆起状、薄黄味茶(2.5Y 8/4)
アスパラギン寒天 ＡＭ ： 非常に良好、茶味灰(2.5Y 6/2)
(ISP 5) Ｒ ： 薄黄味茶(2.5Y 8/4)
ＳＰ ： 産生せず
ペプトン・ Ｇ ： 余り良くない、隆起状、薄黄味茶(2.5Y 8/6)
イースト・鉄寒天 ＡＭ ： 余り良くない、白
(ISP 6) Ｒ ： 薄黄味茶(2.5Y 8/6)
ＳＰ ： 産生せず
チロシン寒天 Ｇ ： 非常に良好、隆起状、黄味茶(10YR 5/6)
(ISP 7) ＡＭ ： 非常に良好、ビロード状、黄味茶(10YR 5/4)
Ｒ ： 黄味茶(10YR 5/6)
ＳＰ ： 灰味赤茶(2.5YR 5/6)
シュークロース・ Ｇ ： 余り良くない、隆起状、薄黄橙(2.5Y 9/2)
硝酸塩寒天 ＡＭ ： 余り良くない、ビロード状、茶味灰(2.5Y 4/2)
Ｒ ： 薄黄味橙(2.5Y 9/2)
ＳＰ ： 産生せず
グルコース・ Ｇ ： 余り良くない、隆起状、薄黄橙(2.5Y 9/2)
アスパラギン寒天 ＡＭ ： 余り良くない、白
Ｒ ： 薄黄味橙(2.5Y 9/2)
ＳＰ ： 産生せず
栄養寒天 Ｇ ： 余り良くない、平坦、黄味茶(2.5Y 8/2)
(Difco) ＡＭ ： 形成せず
Ｒ ： 黄味茶(2.5Y 8/2)
ＳＰ ： 産生せず
ポテトエキス・ Ｇ ： 余り良くない、平坦、薄黄味橙(2.5Y 9/2)
人参エキス寒天 ＡＭ ： 余り良くない、ビロード状、明茶味灰(2.5Y 7/1)
Ｒ ： 薄黄味橙(2.5Y 9/2)
ＳＰ ： 産生せず
水寒天 Ｇ ： 良くない、平坦、白
ＡＭ ： 良くない、ビロード状、白
Ｒ ： 白
ＳＰ ： 産生せず
＊１ Ｇ：生育、ＡＭ：気菌糸、Ｒ：裏面、ＳＰ：可溶性色素
＊２ 性状の欄の（ ）内はマンセル方式による色調表示。
【００１９】
３．生理学的性質
２８℃で培養後、２乃至２１日間に観察したＳＡＮＫ ６０７０４株の生理学的性質は表２に示したとおりである。
［表２］
澱粉の水解 陽性
ゼラチンの液化 陽性
硝酸塩の還元 陰性
ミルクのペプトン化 陽性
ミルクの凝固 陽性
メラニン様色素の生産性（培地１）＊ 陰性
（培地２）＊ 陰性
（培地３）＊ 陰性
基質分解性 カゼイン 陰性
チロシン 陽性
キサンチン 陰性
生育温度範囲（培地４）＊ １０〜３７℃
生育適正温度（培地４） ２４〜３４℃
食塩耐性 ７％
＊）培地１；トリプトン・イーストエキス・ブロス(ISP 1)
培地２；ペプトン・イーストエキス・鉄寒天(ISP 6)
培地３；チロシン寒天(ISP 7)
培地４；イーストエキス・麦芽エキス寒天(ISP 2)
また、プリドハム・ゴトリーブ寒天培地(ISP ９)を使用して、２８℃、１４日間培養後に観察したＳＡＮＫ ６０７０４株の炭素源の資化性は表３に示すとおりである。
［表３］
Ｄ−グルコース ＋ ：Ｄ−フルクトース ＋
Ｌ−アラビノース − ：Ｌ−ラムノース −
Ｄ−キシロース ＋ ：シュクロース ＋
イノシトール ＋ ：ラフィノース ＋
Ｄ−マンニトール ± ：対照 −
＋：利用する、±：弱く利用する、−：利用しない。
【００２０】
４．菌体成分について
ＳＡＮＫ ６０７０４株の化学分類学的性状は「放線菌の分類と同定(Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ) （日本放線菌学会編、日本学会事務センター、49-82頁(2001) ）」に従い検討した。その結果、細胞壁からＬＬ−ジアミノピメリン酸が検出され、全細胞中の糖成分として特徴的なパターンは認められなかった。主要メナキノン分子種としてMK-9(H6)， MK-9(H8)が検出された。
【００２１】
５．１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子解析
ＳＡＮＫ ６０７０４株の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列（１４８８ｂｐ：配列番号１）を解読しデータベース検索を行った結果、公知の菌株の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列の中にＳＡＮＫ ６０７０４株と一致するものは見出されなかったが、その配列相同性からＳＡＮＫ ６０７０４株はストレプトマイセス属のクラスターに含まれると判断された。１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列（１４８８ｂｐ）においてＳＡＮＫ ６０７０４株と最も高い相同性を示した公知の菌株としては、ストレプトマイセス・ハイグロスコピカス・サブエスピー．・グレボサス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ ｓｕｂｓｐ． ｇｌｅｂｏｓｕｓ） (ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ． ＡＢ１８４４７９)、ストレプトマイセス・プラテンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ） (ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ． ＡＢ０４５８８２)、ストレプトマイセス・リバニ・サブエスピー．・ルファス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｌｉｂａｎｉ ｓｕｂｓｐ． ｒｕｆｕｓ (ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ． ＡＪ７８１３５１)、及び、ストレプトマイセス・カニフェラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃａｎｉｆｅｒｕｓ (ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ． ＡＢ１８４６４０)が挙げられ、いずれもＳＡＮＫ ６０７０４株と１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子塩基配列において９９％以上の相同性を示した。
【００２２】
上記の知見に基づき、「ＩＳＰ（インターナショナル・ストレプトマイセス・プロジェクト（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ Ｐｒｏｊｅｃｔ））基準」、ワックスマン（Ｓ． Å． Ｗａｋｓｍａｎ）著、「ジ・アクチノミセテス（Ｔｈｅ Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ）・第２巻」、ブキャナンとギボンズ（Ｒ． Ｅ． Ｂｕｃｈａｎａｎ ａｎｄ Ｎ．Ｅ． Ｇｉｂｂｏｎｓ）編、「バージーズ・マニュアル（’Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第８版」（１９７４年）、「バージーズ・マニュアル（’Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第 ４ 巻」（１９８９年）、及びストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属放線菌に関する最近の文献によって本菌株の同定を行い、本菌株が放線菌の中でもストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属すると判断された。そこで、本菌株をストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＳＡＮＫ ６０７０４株と命名した。種レベルの同定については、バージーズ・マニュアル（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第 ４ 巻（１９８９年）でストレプトマイセス・リディカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｌｙｄｉｃｕｓ）と呼称された分類群に所属すると考えるのが妥当である。なお、本菌株は２００６年６月２８日に独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センター（日本国茨城県つくば市東１丁目１番１号中央第６）に国際寄託され、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６２９を付与された。
【００２３】
周知のとおり、放線菌は自然界において、又は人工的な操作（例えば、紫外線照射、放射線照射、化学薬品処理等）により、変異を起こし易く、本発明のＳＡＮＫ ６０７０４株もこの点は同じである。また、これらの変異株の中には、遺伝学的方法、例えば組み換え、形質導入、形質転換等により得られたものも包含される。これら、ＳＡＮＫ ６０７０４株及びその変異株並びに菌学的性状によりそれらと明確に区別されない菌株は、すべてＳＡＮＫ ６０７０４株に包含されるものである。本発明のＳＡＮＫ ６０７０４株として、好適には前記菌株のうちＡ−９７０６５類物質を産生するストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する菌株であり、より好適には、それらのうち更に１６Ｓ ｒＲＮＡの塩基配列が、配列番号１に記載の塩基配列と同一である菌株であり、更により好適には受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６２９として国際寄託されているＳＡＮＫ ６０７０４株である。
また、本発明は、ストレプトマイセス属に属し、Ａ−９７０６５類物質を生産する全ての菌株を包含する。
【００２４】
本発明のＡ−９７０６５類物質の生産菌を培養するに際し使用される培地としては、炭素源、窒素源、無機イオン及び有機栄養源等より選択されたものを適宜含有する培地であれば、合成又は天然培地のいずれも使用することができる。
【００２５】
該栄養源としては、従来真菌類や放線菌類の菌株の培養に利用されている公知の、微生物が資化できる炭素源、窒素源及び無機塩が使用できる。
【００２６】
具体的には、炭素源としてグルコース、フルクトース、マルトース、シュークロース、マンニトール、グリセロール、デキストリン、オート麦、ライ麦、トウモロコシ澱粉、ジャガイモ、トウモロコシ粉、大豆粉、綿実油、水飴、糖蜜、大豆油、クエン酸、酒石酸などを単一に、あるいは併用して使用できる。一般的には、上記炭素源を培地量の１乃至１０重量％で使用することができるが、この範囲に限定されない。
また、窒素源としては、蛋白質又はその水解物を含有する物質、あるいは含窒素無機塩類を用いることができる。好適な窒素源としては、例えば大豆粉、フスマ、落花生粉、綿実粉、スキムミルク、カゼイン加水分解物、ファーマミン、魚粉、コーンスチープリカー、ペプトン、肉エキス、生イースト、乾燥イースト、イーストエキス、マルトエキス、ジャガイモ、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム等を使用することができる。該窒素源は、単一で又は併用して、好ましくは培地量の０．２乃至６重量％の範囲で使用する。
さらに栄養無機塩としては、ナトリウム、アンモニウム、カルシウム、フォスフェート、サルフェート、クロライド、カーボネート等のイオンを含む、通常の塩類を使用することができる。また、カリウム、カルシウム、コバルト、マンガン、鉄、マグネシウム等の微量の金属も使用することができる。
なお、液体培養に際しては、消泡剤としてシリコン油、植物油、界面活性剤等を使用することができる。
【００２７】
ＳＡＮＫ６０７０４株を培養してＡ−９７０６５類物質を生産するための培地のｐＨは、好適には５．０乃至８．０である。
ＳＡＮＫ６０７０４株の生育温度は１２乃至３８℃であるが、Ａ−９７０６５類物質を生産させるためには、該菌株を１８乃至３６℃で培養することが好ましく、より好適には、２０乃至３２℃で培養するのが好ましい。
Ａ−９７０６５類物質は、ＳＡＮＫ６０７０４株を好気的に培養することにより得られるが、そのような培養法としては、通常用いられる好気的培養法、例えば固体培養法、振とう培養法、通気攪拌培養法等を用いることができる。
【００２８】
小規模の培養においては、２０乃至３２℃で数日間振とう培養を行うのが好適である。培養は、バッフル（水流調節壁）のついた、あるいはついていない三角フラスコ中で、１又は２段階の種の発育工程により開始する。
種発育段階の培地には、炭素源及び窒素源を併用することができる。種培養は、２０乃至３２℃の定温インキュベーター中で、８日間振とうするか、又は充分に成長するまで振とうすることにより行う。成長した種は、第二の種培地、又は、生産培地に接種する。
中間の発育工程を用いる場合には、種培養と同様の方法で行うことができる。中間の発育工程により得られた種は、その一部を生産培地に接種する。
【００２９】
生産のための培養は、種を接種した生産培養用フラスコを一定の温度で数日間振とう培養することにより行うことができる。
生産のための培養を大量培養で行う場合には、攪拌機、通気装置が付いたジャーファーメンターあるいはタンクで培養するのが好ましい。そのためには、まず栄養培地を１２１乃至１３０℃まで加熱して滅菌し、その後冷却させておく。次いで、該滅菌済培地に前述の方法によって予め成長させておいた種を接種する。その後の培養は２０乃至３２℃で通気攪拌して行う。この方法は、多量の化合物を得るのに適している。
【００３０】
培養終了後、フラスコ内の培養物を遠心分離又はろ過するか、又は培養物全体を用いて抽出、精製することにより、目的の化合物を得ることができる。
培養の経過に伴って生産されるＡ−９７０６５類物質の量は、培養液の一部を採取して該化合物群を抽出し、トランスロケースＩ阻害活性を測定することにより該化合物群を総活性量として確認するか、又は、高速液体クロマトグラフィーを実施し、該化合物群を各々測定することによりモニターすることができる。Ａ−９７０６５類物質の生産量は、通常３乃至１５日で最高値に達する。
【００３１】
培養終了後、培養液中の液体部分及び菌体内、又はその双方に存在するＡ−９７０６５類物質は、培養終了液の全て、あるいは菌体、その他の固形部分を、珪藻土をろ過助剤とするろ過操作又は遠心分離によって分別し、得られたろ液又は上清及び菌体中から、トランスロケースＩ阻害活性又は高速液体クロマトグラフィーを指標にして、その物理化学的性状を利用し抽出精製することができる。
【００３２】
ろ液又は上清中に存在するＡ−９７０６５類物質は、中性ｐＨ条件下で、水と混和しない有機溶剤、例えば、酢酸エチル、クロロホルム、塩化エチレン、塩化メチレン、ブタノール等の単独又は、それらの組み合わせにより抽出精製することができる。あるいは、吸着剤として、例えば、活性炭又は吸着用樹脂であるアンバーライトＸＡＤ−２、ＸＡＤ−４（登録商標、ローム・アンド・ハース社製）等や、ダイヤイオンＨＰ−１０、ＨＰ−２０、ＣＨＰ−２０Ｐ、ＨＰ−５０、セパビーズＳＰ−２０７（登録商標、三菱化学社製）等を使用して抽出精製することもできる。吸着剤を使用して抽出精製する場合、目的化合物を含む液を吸着剤の層を通過させ、不純物を吸着剤に吸着させることにより取り除くか、又は、目的化合物を吸着させて不純物を洗い流した後、メタノール水、アセトン水、ブタノ−ル水等を用いて目的化合物を溶出させることにより、目的化合物を抽出精製することができる。
【００３３】
菌体内に存在するＡ−９７０６５類物質は、５０乃至９０％の含水アセトン又は含水メタノールにより抽出し、濃縮操作により有機溶剤を除去した後、上記と同様に抽出精製操作を行うことにより得ることができる。例えば、培養終了後に適当量（好ましくは終濃度５０％）の、アセトン又はメタノールを添加することにより目的の化合物を抽出することができる。抽出終了後、珪藻土をろ過助剤とするろ過操作を行ない、得られた抽出液をろ液と同様な抽出精製操作を行うことにより目的の化合物を抽出精製することができる。
【００３４】
上記の方法により抽出精製されたＡ−９７０６５類物質を含む溶液は、シリカゲル、セファデックスＬＨ−２０（アマシャムバイオサイエンス社製）、フロリジル、コスモシル（ナカライテスク社製）のような担体を用いた分配カラムクロマトグラフィー；ダイヤイオンＣＨＰ−２０Ｐ（三菱化学社製）のような担体を用いた吸着カラムクロマトグラフィー；セファデックスＧ−１０（アマシャムバイオサイエンス社製）、トヨパールＨＷ４０Ｆ（トーソー社製）などを用いたゲルろ過クロマトグラフィー；ダウエックス５０（ダウケミカル社製）ダウエックス１（ダウケミカル社製）、ダイヤイオンＰＫ２１６（三菱化学社製）、ダイヤイオンＰＡ３１６（三菱化学社製）、ＣＭセファデックスＣ−２５（アマシャムバイオサイエンス社製）、ＤＥＡＥセファデックスＡ−２５（アマシャムバイオサイエンス社製）などを用いたイオン交換クロマトグラフィー；順層、逆層カラムを用いた高速液体クロマトグラフィー等により更に精製することができる。
以上の分離、精製の手段を単独又は適宜組み合わせ、場合によっては反復して用いることにより、本発明のＡ−９７０６５類物質を分離精製することができる。
【００３５】
本発明のＡ−９７０６５Ｂ物質は、周知の方法により加水分解及び脱リン酸化されることで、対応する炭化水素鎖を有するＡ−９７０６５Ａ物質に変換されうる。反応の方法としては、脱リン酸化に用いられる方法であれば特に限定されず、化学的反応、酵素的反応、微生物変換反応等をあげることができる。脱リン酸化は、例えば、溶媒中でＡ−９７０６５Ｂ物質に脱リン酸化酵素を作用させることにより達成される。
使用される溶媒としては、酵素反応に使用できる溶媒であれば特に限定は無く、溶媒中に有機溶媒を含んでいても良く、有機溶媒のみからなる溶媒であっても良い。本反応に用いる溶媒として、具体的には、水；メタノール、エタノール、イソプロパノール等のアルコール類；アセトン、等を挙げることができ、これらの溶媒の２種類以上の混合物であっても良いが、好適には、水である。
脱リン酸化酵素としては、酸性フォスファターゼ、塩基性フォスファターゼの他、ヌクレアーゼ、ヌクレオチダーゼを挙げることができ、好適には酸性フォスファターゼ又は塩基性フォスファターゼであり、より好適には酸性フォスファターゼであり、更により好適にはジャガイモ由来の酸性フォスファターゼである。
【００３６】
前記の脱リン酸化処理に用いるＡ−９７０６５Ｂ物質を含むサンプルは、Ａ−９７０６５Ａ物質を含んでいてもよく、また、Ａ−９７０６５Ａ物質を除いた分離されたＡ−９７０６５Ｂ物質であっても良い。また、前記サンプル中には複数種類のＡ−９７０６５Ｂ物質が含まれていても良い。
得られた脱リン酸化体は、前記と同様に公知の分離手法（例えば、コスモシル（ナカライテスク社製）のような担体を用いた分配カラムクロマトグラフィー；ダイヤイオンＣＨＰ−２０Ｐ（三菱化学社製）のような担体を用いた吸着カラムクロマトグラフィー；セファデックスＧ−１０（アマシャムバイオサイエンス社製）、トヨパールＨＷ４０Ｆ（トーソー社製）などを用いたゲルろ過クロマトグラフィー；ダウエックス５０（ダウケミカル社製）ダウエックス１（ダウケミカル社製）、ダイヤイオンＰＫ２１６（三菱化学社製）、ダイヤイオンＰＡ３１６（三菱化学社製）、ＣＭセファデックスＣ−２５（アマシャムバイオサイエンス社製）、ＤＥＡＥセファデックスＡ−２５（アマシャムバイオサイエンス社製）などを用いたイオン交換クロマトグラフィー；順層、逆層カラムを用いた高速液体クロマトグラフィー等）を用いる（必要に応じて複数組み合わせても良い）ことにより精製することができる。 以上、Ａ−９７０６５類物質の製造法の代表的な方法を説明したが、製造方法はこれらに限定されず、既に当業者に知られているこれら以外の製造方法を用いることもできる。
【００３７】
本発明は、さらに、一般式（Ｉ）のＲが所望の脂肪酸側鎖であるＡ−９７０６５類物質の製造方法に関する。
上記したようなＡ−９７０６５類物質生産菌の培養において、通常用いられる培地に所望の脂肪酸を添加することにより（「脂肪酸添加培養」という）、一般式（Ｉ）においてＲが前記脂肪酸に対応した炭化水素鎖であるＡ−９７０６５類物質の生産量を特異的に増加させることが出来る。用いる脂肪酸は主鎖の炭素数が３以上のものであれば特に限定されず、直鎖脂肪酸、分枝鎖脂肪酸、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸等を用いることができるが、好適には分枝状飽和脂肪酸である。分枝状飽和脂肪酸の鎖長は炭素数３以上であれば特に限定されないが、好適には炭素数７乃至１５であり、より好適には炭素数９乃至１３である。
【００３８】
例えば、下記一般式（ＩＩ）で表わされる脂肪酸を用いた場合、生産量が増加するＡ−９７０６５類物質は、一般式（Ｉ）において、Ｒ＝Ｒ１として表わされる。
【００３９】
【化３】
【００４０】
このようにして、Ａ−９７０６５生産菌の脂肪酸添加培養により生産される所望の脂肪酸側鎖を有するＡ−９７０６５類物質は、他のＡ−９７０６５類物質と同様、前記の方法を用いて単離、精製される。このようにして製造される、所望の脂肪酸側鎖を有するＡ−９７０６５類物質も本発明のＡ−９７０６５類物質に含まれる。
【００４１】
また、本発明は、所望の脂肪酸側鎖を有するＡ−９７０６５Ａ物質を特異的に製造する方法に関する。脂肪酸添加培養により生産される所望の脂肪酸側鎖を有するＡ−９７０６５Ｂ物質は、前述の通り脱リン酸化反応に供することにより、対応する脂肪酸側鎖を有するＡ−９７０６５Ａ物質に変換することが出来る。このような手法により所望の脂肪酸側鎖を有するＡ−９７０６５Ａ物質の製造量を特異的に向上させることが可能である。
【００４２】
以上のごとくして得られる本発明の化合物の、一般グラム陽性細菌及びグラム陰性細菌に対する最少生育阻止濃度（ＭＩＣ）は、普通寒天培地（栄研化学社製）や、ミュラー−ヒントン寒天（Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎａｇａｒ）培地（ＢＢＬ社製）等を用いた、当業者周知の寒天平板希釈法によって測定することができる。
【００４３】
また、本発明の化合物のトランスロケースＩに対する酵素阻害活性は、酵素とＵＤＰ−Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニル−γ−Ｄ−グルタミル−ｍ−ジアミノピメリル−（Ｎε−ダンシル）−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニン（ＵＤＰ−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｍｕｒａｍｙｌ−Ｌ−Ａｌａ−γ−Ｄ−Ｇｌｕ−ｍ−ＤＡＰ−（Ｎε−ｄａｎｓｙｌ）−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ）及びウンデカプレニルリン酸（ｕｎｄｅｃａｐｒｅｎｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ）の反応を用いて測定することができる。また、本発明の化合物のトランスロケースＩに対する酵素阻害活性は、当業者周知の方法により測定することもできる。
【００４４】
本発明の化合物はトランスロケースＩ酵素阻害活性を示す。トランスロケースＩは、細菌細胞壁の構成成分であるペプチドグリカンの生合成に関与する酵素であり、該酵素を阻害すると細菌が細胞壁を維持することが出来なくなると考えられている。すなわち、トランスロケースＩ阻害作用を有する本発明の化合物は抗菌活性を有する。また、このようなトランスロケースＩ阻害活性に基づく抗菌活性は、従来の抗菌剤とは異なるメカニズムであり、従来品に対する耐性菌に対しても有効な抗菌活性を発揮する。
【００４５】
本発明は、Ａ−９７０６５類物質又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬組成物に関する。前記医薬組成物は、好適にはトランスロケースＩ阻害剤であり、より好適には抗菌剤である。このような医薬組成物は、細菌感染症、特に耐性菌を含む細菌感染症の予防剤又は治療剤として有用である。また、このような医薬組成物の製造のためのＡ−９７０６５類物質の使用も本発明に含まれるものである。また、患者にＡ−９７０６５類物質又はその薬理学的に許容される塩の有効量を投与することを含む細菌感染症、特に耐性菌を含む細菌感染症、の治療方法も本発明に含まれる。
【００４６】
本発明のＡ−９７０６５類物質又はその薬理学的に許容される塩は、その投与される形態に応じて種々の形態で製剤化することができる。その製剤の形態としては、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、乳剤、丸剤、散剤、シロップ剤（液剤）等による経口投与、又は注射剤（静脈内、筋肉内、皮下又は腹腔内投与）、点滴剤、坐剤（直腸投与）等による非経口投与を挙げることができる。これらの各種製剤は、常法に従って主薬に賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤等の医薬の製剤技術分野において通常使用し得る補助剤を用いて製剤化することができる。
【００４７】
錠剤として使用する場合、担体として、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、グルコース、尿素、澱粉、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸等の賦形剤；水、エタノール、プロパノール、単シロップ、グルコース液、澱粉液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤；乾燥澱粉、アルギン酸ナトリウム、寒天末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、澱粉、乳糖等の崩壊剤；白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤；第４級アンモニウム塩類、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤；グリセリン、澱粉等の保湿剤；澱粉、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤；精製タルク、ステアリン酸塩、硼酸末、ポリエチレングリコール等の潤沢剤等を使用することができる。また、必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠あるいは二重錠、多層錠とすることができる。
【００４８】
丸剤として使用する場合、担体として、例えば、グルコース、乳糖、カカオバター、澱粉、硬化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤；アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノール等の結合剤；ラミナラン寒天等の崩壊剤等を使用することができる。
坐剤として使用する場合、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えばポリエチレングリコール、カカオバター、高級アルコール、高級アルコールのエステル類、ゼラチン、半合成グリセリド等を挙げることができる。
注射剤として使用する場合、液剤、乳剤又は懸濁剤として使用することができる。これらの液剤、乳剤又は懸濁剤は、殺菌され、血液と等張であることが好ましい。これら液剤、乳剤又は懸濁剤の製造に用いる溶液は、医療用の希釈剤として使用できるものであれば特に限定はなく、例えば、水、エタノール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等を挙げることができる。なお、この場合、等張性の溶液を調製するのに充分な量の食塩、グルコース又はグリセリンを製剤中に含んでいてもよく、また通常の溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤等を含んでいてもよい。
【００４９】
また、上記の製剤には、必要に応じて、着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等を含めることもでき、更に、他の医薬品を含めることもできる。
【００５０】
上記製剤に含まれる有効成分化合物の量は、特に限定されず広範囲に適宜選択されるが、通常、全組成物中１乃至７０重量％、好ましくは１乃至３０重量％含む。
【００５１】
使用量としては、症状、年齢、体重、投与方法及び剤形等によって異なるが、通常は成人に対して１日あたり、上限として40 mg/kg（好ましくは2 mg/kg）であり、下限として0.002 mg/kg（好ましくは0.02 mg/kg、さらに好ましくは0.2 mg/kg）を症状に応じて、一日１回又は数回に分けて投与することができる。
【００５２】
このように医薬用途に用いられるＡ−９７０６５類物質としては、本発明に含まれるものなら全て用いることが出来るが、好適にはＡ１物質である。
【発明の効果】
【００５３】
上記の通り、本発明の化合物群はグラム陽性菌を含む各種細菌感染症の予防薬又は治療薬として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５４】
以下に実施例をあげて、本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００５５】
（実施例１）ストレプトマイセス・エスピー．ＳＡＮＫ ６０７０４株の培養
１）一次培養
斜面培地上に生育させたＳＡＮＫ ６０７０４株に、滅菌水を添加し、白金耳を用いて菌糸をかきとった。この菌糸懸濁液をホモジナイズし均一化したものを、表４に記載する組成の前培養培地１００ｍｌを入れた５００ｍｌ容の三角フラスコに無菌的に接種し、次いで該フラスコをロータリー振とう機中で２８℃、２１０ｒｐｍにて、３日間振とう培養して、一次前培養液を得た。
［表４］前培養培地
―――――――――――――――――――――――
グルコース ２０ ｇ
可溶性デンプン １０ ｇ
カツオエキス １ ｇ
大豆粉 ２．５ｇ
ＮａＣｌ ２ ｇ
Ｋ２ＨＰＯ４ ５０ ｍｇ
―――――――――――――――――――――――
水道水 １０００ ｍｌ
滅菌前のｐＨ６．７
滅菌：１２１℃にて３０分間滅菌した。
【００５６】
２）二次培養
滅菌済みの上記表４の組成の前培養培地３００ｍｌが入った２Ｌ容の三角フラスコ２本に、前記一次前培養液を１％（Ｖ／Ｖ）植菌し、該フラスコをロータリー振とう機中で２８℃、２１０ｒｐｍにて、１日間振とう培養して、二次前培養液を得た。
【００５７】
３）本培養
滅菌済みの下記表５の組成の本培養培地２０Ｌが入った３０Ｌ容タンク培養機２基に、前記二次前培養液を１％（Ｖ／Ｖ）植菌し、温度２８℃、通気量１ｖｖｍ、回転数１００乃至２００ｒｐｍ、溶存酸素量５．０ｐｐｍで８日間培養し、培養終了液を得た。
[表５]本培養培地
―――――――――――――――――――――――
シュークロース ５０ ｇ
カツオエキス ３０ ｇ
ＮａＣｌ ２ ｇ
Ｋ２ＨＰＯ４ ５０ ｍｇ
消泡剤（ＣＢ４４２） １０ ｍｇ
―――――――――――――――――――――――
水道水 １０００ ｍｌ
滅菌前のｐＨ６．７
滅菌：１２１℃にて３０分間滅菌した。
【００５８】
（実施例２）Ａ１物質及びＢ２物質の単離
以下の精製においては、活性画分を以下の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）でモニターした。
ｉ）Ａ１物質
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ（インタクト株式会社製）ＵＫ−Ｃ１８：４．６φ×７５ｍｍ
溶媒：０．３％トリエチルアミン・４５％アセトニトリル水（ｐＨ３．０）［＊］
流速：１．０ｍｌ／分
検出：紫外部吸収２６０ｎｍ
保持時間： ７．６分
ｉｉ）Ｂ２物質
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ（インタクト株式会社製）ＵＫ−Ｃ１８：４．６φ×７５ｍｍ
溶媒：０．３％トリエチルアミン・５０％アセトニトリル水（ｐＨ３．０）
流速：１．０ｍｌ／分
検出：紫外部吸収２６０ｎｍ
保持時間： ５．９分。
［＊］「０．３％トリエチルアミン・４５％アセトニトリル水（ｐＨ３．０）」は、次のように調製した。すなわち、リン酸によりｐＨ３．０に調節した３％トリエチルアミン水溶液とアセトニトリルと水を、トリエチルアミンの終濃度が０．３％、アセトニトリルの終濃度が４５％となるように混合した。本明細書の実施例において、濃度及び／又はｐＨの異なるトリエチルアミン・アセトニトリル水についても、同様の手法により調製した。
【００５９】
１）混合粗粉末の抽出
実施例１で得られた培養終了液（３０Ｌ）にアセトンを３０Ｌ添加した後、セライト５４５（１．５ｋｇ）をろ過助剤として添加し、フィルタープレスろ過した。得られたろ液及び洗液を合併し（５４Ｌ）、７５％硫酸を用いてｐＨを３に調節した後、食塩６３２ｇを添加し、２０Ｌ、１５Ｌ及び１７Ｌの酢酸エチルで３回抽出を行った。得られた溶媒層（８３Ｌ）に、ｐＨを７に調節した０．２Ｍリン酸バッファー (１．６Ｌ)を添加した後、１０Ｌまで減圧濃縮した。次いで、得られた溶液に対し、１．６Ｌ及び０．５Ｌの前記０．２Ｍリン酸バッファーで２回逆抽出を行った。続いて得られた逆抽出液（８Ｌ）を濃縮した後、水で平衡化したダイヤイオンＨＰ‐２０カラム（３Ｌ容）に付し、カラムを１０ｍＭギ酸アンモニウム水、水、 及び４０％アセトン水で洗浄の後、６０％アセトン水（１１Ｌ）で活性物質を溶出することにより脱塩を行った。この溶出液を減圧濃縮、凍結乾燥して粗粉末（１１．１ｇ）を得た。
【００６０】
この粗粉末のうち１０ｇを、ｐＨを６．８に調節した５０ｍＭリン酸バッファー（１２０ｍｌ）に溶解し、同一のリン酸バッファーで平衡化したコスモシルカラム（１Ｌ容：ナカライテスク社製）に付した。カラムを同溶媒１．５Ｌで洗浄の後、ｐＨ６．８に調整した５００ｍＭリン酸バッファーとアセトニトリルと水を混合して得られた５０ｍＭリン酸・３０％アセトニトリル水（２．５Ｌ）、続いて前記リン酸・アセトリトリル水と同様に調製した５０ｍＭリン酸・３５％アセトニトリル水（４．５Ｌ）で活性物質の溶出を行った。溶出液は１５ｍｌ毎に分画・回収した。得られたフラクション１３５から１７０を合わせてＢ２物質を含有する粗精製画分１（３７５ｍｌ）、フラクション１９１から２６０を合わせてＡ１物質を含有する粗精製画分２（１Ｌ）を、それぞれ得た。
【００６１】
２）Ａ１物質の単離
上記の粗精製画分２を減圧濃縮し、得られた濃縮液を水で平衡化したダイヤイオンＨＰ−２０カラム（５０ｍｌ容）に付した。カラムを水（２５０ｍｌ) で洗浄した後、９０％アセトン水（２５０ｍｌ）で活性物質を溶出することにより脱塩を行った。得られた溶出液を減圧濃縮後、凍結乾燥し、粗精製粉末９６１．６ｍｇを得た。この粗精製粉末のうち２００ｍｇをジメチルスルホキシド（８ｍｌ）に溶解し、１５０μｌを０．５％トリエチルアミン・４５％アセトニトリル水（ｐＨ３．３）で平衡化したＨＰＬＣカラム（カプセルパック（ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ）Ｃ１８ＵＧ１２０、２０φ×２５０ｍｍ、資生堂（株）製）に供与した。カラムを流速１０．０ｍｌ／分で展開し、目的物質の２６０ｎｍでの紫外部吸収を検出して、保持時間２９．２分に溶出される画分を分取した。この操作を５３回に分けて行った。得られた同一保持時間の画分をあわせ、ｐＨを７に調節した後、減圧濃縮し、水で平衡化したダイヤイオンＨＰ−２０カラム（１０ｍｌ）に付した。カラムを水（５０ｍｌ) で洗浄した後、７０％アセトン水（５０ｍｌ）で活性物質を溶出することにより脱塩を行った。得られた溶出液を減圧濃縮後、凍結乾燥し、Ａ１物質（７８．９ｍｇ）を無色粉末として得た。
【００６２】
３）Ｂ２物質の単離
上記の粗精製画分１を減圧濃縮し、得られた濃縮液を水で平衡化したダイヤイオンＨＰ−２０カラム（５０ｍｌ容）に付した。カラムを水（２５０ｍｌ) で洗浄した後、９０％アセトン水（２５０ｍｌ）で活性物質を溶出することにより脱塩を行った。得られた溶出液を減圧濃縮後、凍結乾燥し、粗精製粉末６８４．３ｍｇを得た。この粗精製粉末のうち６５０ｍｇをジメチルスルホキシドと５％トリエチルアミン水溶液（リン酸によりｐＨ３．３に調節）を９：１で混合した溶液（１１ｍｌ）に溶解し、このうち１００μｌを０．５％トリエチルアミンを含有する５１．３％アセトニトリル水（リン酸によりｐＨ３．３に調節）で平衡化したＨＰＬＣカラム（カプセルパック（ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ）Ｃ１８ＵＧ１２０、２０φ×２５０ｍｍ）に供与した。カラムを流速１０．０ｍｌ／分で展開し、目的物質の２６０ｎｍでの紫外部吸収を検出して、保持時間２６．５分に溶出される画分を分取した。この操作を１１０回に分けて行った。得られた同一保持時間の画分をあわせ、ｐＨを７に調節した後、減圧濃縮し、ｐＨを３に再調節した後、水で平衡化したダイヤイオンＨＰ−２０カラム（１０ｍｌ）に付した。カラムを水（５０ｍｌ) で洗浄した後、７０％アセトン水（５０ｍｌ）で活性物質を溶出することにより脱塩を行った。得られた溶出液を減圧濃縮後、凍結乾燥し、Ｂ２物質（１４６．６ｍｇ）を無色粉末として得た。
【００６３】
（実施例３）Ｂ２物質からＡ２物質への変換
以下の反応においては、活性画分を以下の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）でモニターした。
ｉ）Ｂ２物質
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ（インタクト株式会社製）ＵＫ−Ｃ１８：４．６φ×７５ｍｍ
溶媒：０．３％トリエチルアミン・５０％アセトニトリル水（ｐＨ３．０）
流速：０．７ｍｌ／分
検出：紫外部吸収２６０ｎｍ
保持時間：６．２分
ｉｉ）Ａ２物質
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ（インタクト株式会社製）ＵＫ−Ｃ１８：４．６φ×７５ｍｍ
溶媒：０．３％トリエチルアミン・５０％アセトニトリル水（ｐＨ３．０）
流速：０．７ｍｌ／分
検出：紫外部吸収２６０ｎｍ
保持時間：７．３分。
【００６４】
実施例２で得られたＢ２物質（５５ｍｇ）をメタノールとジメチルスルホキシドと水を４：３：１の割合で混合した溶液（０．８ｍｌ）に溶解し、基質溶液とした。この基質溶液２０μｌにｐＨを５に調節した０．１Ｍの酢酸−酢酸ナトリウムバッファーを１００μｌ、水７０μｌを順次添加した後、酵素溶液（ジャガイモ由来酸性フォスファターゼ（ＥＣ３．１．３．２：和光純薬（株）社製）１２．５ｍｇを上記０．１Ｍ酢酸−酢酸ナトリウムバッファー５０μｌに溶解し調製）を１０μｌ添加し反応を開始させた。、３７℃で３０分インキュベーションした後、この混合溶液に２００μｌのアセトニトリルを添加することにより、反応を終了させた。この終了液を７５００ｒｐｍで１０分間遠心分離し残存酵素を沈殿させ、上澄に存在するＡ２物質を得た。
【００６５】
（試験例１）抗菌活性の測定（抗グラム陽性菌活性）
本発明のＡ１物質の黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）ＦＤＡ２０９Ｐ ＪＣ−１株（以降Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ２０９Ｐ株と略記)に対する最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）の測定は、以下の方法で行った。検体水溶液を１０００μｇ／ｍｌの濃度より２倍希釈し、１４段階（１０００μｇ／ｍｌ、５００μｇ／ｍｌ、２５０μｇ／ｍｌ、１２５μｇ／ｍｌ、６２．５μｇ／ｍｌ、３１．３μｇ／ｍｌ、１５．６μｇ／ｍｌ、７．８μｇ／ｍｌ、３．９μｇ／ｍｌ、２μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、０．５μｇ／ｍｌ、０．２４μｇ／ｍｌ、０．１２μｇ／ｍｌ）の希釈液を調製した。各希釈液を丸型シャーレ（９０φ×２０ｍｍ、テルモ社製）に１ｍｌずつ分注後、ミュラー−ヒントン寒天（Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ ａｇａｒ）培地（ＢＢＬ社製）を９ｍｌ加えて混合し、平板とした。被検菌Ｓ．ａｕｒｅｕｓ２０９Ｐ株をトリプトソイブイヨン（ＴＳＢ）培地（栄研化学社製）にて３７℃、一夜前培養した。試験当日、得られた菌液を、ＴＳＢを用いて１００倍に希釈し、その１白金耳を平板培地に画線塗沫した。この画線塗沫した平板培地を３７℃、１８時間培養した後、ＭＩＣを判定した。
［表６］抗菌活性（抗グラム陽性菌活性）
―――――――――――――――――――――――――――――――
試験化合物 ＭＩＣ（μｇ／ｍｌ）
―――――――――――――――――――――
被検菌 Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ２０９Ｐ
―――――――――――――――――――――――――――――――
Ａ１物質 ６．２５
―――――――――――――――――――――――――――――――
以上の結果から、Ａ１物質は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ２０９Ｐ株に対して抗菌活性を有することが示された。
【００６６】
（試験例２）トランスロケースＩ酵素阻害活性の測定
本発明の各化合物のトランスロケースＩに対する酵素阻害活性は、酵素とＵＤＰ−Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニル−γ−Ｄ−グルタミル−ｍ−ジアミノピメリル−（Ｎε−ダンシル）−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニン（ＵＤＰ−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｍｕｒａｍｙｌ−Ｌ−Ａｌａ−γ−Ｄ−Ｇｌｕ−ｍ−ＤＡＰ−（Ｎε−ｄａｎｓｙｌ）−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ）及びウンデカプレニルリン酸（ｕｎｄｅｃａｐｒｅｎｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ)の反応を用いて測定した。
すなわち、トランスロケースＩをコードしたプラスミドを有する大腸菌、Ｅ．ｃｏｌｉ／ｐＴＡ５株を培養して得られる菌体を、トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）中にて超音波破砕した後、粗抽出液を超遠心し、得られた沈殿を界面活性化剤で可溶化した溶液を酵素源として使用した。ＵＤＰ−Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニル−γ−Ｄ−グルタミル−ｍ−ジアミノピメリル−（Ｎε−ダンシル）−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニンとウンデカプレニルリン酸を酵素液とともにインキュベートした後、酵素反応により増加した蛍光度を、励起波長３５５ｎｍ、検出波長５３８ｎｍの条件で定量して酵素活性とし、５０％酵素阻害濃度（ＩＣ５０）は、同時に添加した阻害剤の濃度と阻害率から計算して求めた。
[表７]トランスロケースＩ阻害活性
―――――――――――――――――――――――――――――――
試験化合物 ＩＣ５０値（μｇ／ｍｌ）
―――――――――――――――――――――――――――――――
Ａ１物質 ０．００２４
Ｂ２物質 ０．１０
―――――――――――――――――――――――――――――――
Ａ１物質及びＢ２物質は、トランスロケースＩに対し阻害活性を示した。
【００６７】
（製剤例）カプセル剤
Ａ１物質 １００ｍｇ
乳糖 １００ｍｇ
トウモロコシ澱粉 １４８．８ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム １．２ｍｇ
――――――――――――――――――――――――――
全量 ３５０ｍｇ
上記処方の粉末を混合し、６０メッシュのふるいに通した後、この粉末をゼラチンカプセルに入れ、カプセル剤とする。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、優れたトランスロケースＩ阻害活性を有する新規化合物、該化合物を有効成分として含有する医薬（特に、抗菌剤）、該化合物の製造方法、及び該化合物を生産する新規微生物に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、細菌感染症の予防及び治療には各種ベータラクタム抗生物質、アミノ配糖体、マクロライド、グリコペプチド、キノロンなどが使われてきたが、最近これらの抗生物質に耐性を示す感染菌が増加しており、従来のタイプとは異なる抗生物質が渇望されている。
【０００３】
細菌細胞壁構成成分である、ペプチドグリカン生合成に関与するトランスロケースＩは、細菌の生育には必須の酵素である。近年、トランスロケースＩ阻害活性に基づき、マイコバクテリウム属の細菌に対して抗菌活性を示す化合物として、リポシドマイシン（ｌｉｐｏｓｉｄｏｍｙｃｉｎ）類、カプラザマシン（ｃａｐｒａｚａｍｙｃｉｎ）類、ムラミノミシン（ｍｕｒａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）類等が報告されている（例えば、特許文献１、特許文献２、非特許文献１及び非特許文献２参照）。これらはいずれも類似した母核構造を有する化合物であるが、本発明の化合物であるＡ‐９７０６５類物質と同一の母核構造を有する化合物は未だ報告されていない。
【特許文献１】国際公開第 ＷＯ ０１／１２６４３号パンフレット
【特許文献２】国際公開第 ＷＯ ２００４／０４６３６８号パンフレット
【非特許文献１】ジャーナルオブアンチビオチクス，１９８５年，第３８巻，ｐ．１６１７−１６２１（J．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，１９８５，３８，ｐ．１６１７−１６２１）
【非特許文献２】アグリカルチュラルアンドバイオロジカルケミストリー，１９８９年，第５３巻，ｐ．１８１１−１８１５（Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，１９８９，５３，ｐ．１８１１−１８１５）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明者らは、抗菌活性を有する新規化合物を見出すべく鋭意探索研究を行った結果、ストレプトマイセス属に属する微生物の培養物中に新規化合物を見出し、これらの化合物がトランスロケースＩ阻害活性に基づく抗菌活性を有し、従来のタイプの薬剤とは交差耐性がなく、かつ、従来知られていた化合物と比べて優れた酵素阻害活性を有することを見出すと共に、該化合物を生産する新規微生物及び該微生物を用いた該化合物の製造方法を確立し、本発明を完成した。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、下記（１）乃至（３）のいずれかで示される新規化合物に関する。
（１）下記、一般式(Ｉ)：
【０００６】
【化１】
【０００７】
（Ｉ）
［式中、Ｘは水酸基又はリン酸基を表し、Ｘが水酸基である場合、Ｒは−（ＣＨ２）８ＣＨ（ＣＨ３）２ ]又は −（ＣＨ２）１０ＣＨ（ＣＨ３）２を表し、Ｘがリン酸基である場合Ｒは−（ＣＨ２）１０ＣＨ（ＣＨ３）２を表す］
で表される化合物又はその塩。
（２）下記の物理化学的性状を有する化合物又はその塩。
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）溶解性：メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶、クロロホルムに不溶
３）分子式：Ｃ４３Ｈ６９Ｎ５Ｏ１８
４）分子量：９４３（ＦＡＢマススペクトル法により測定)
５）高分解能ＦＡＢマススペクトル法により測定した精密質量、[Ｍ＋Ｈ]＋は次に示す通りである。
実測値：９４４．４６７１
計算値：９４４．４７１６
６）紫外部吸収スペクトル：
ジメチルスルホキシド中で測定した紫外部吸収スペクトルは、次に示す極大吸収を示す：
２６３ｎｍ（ε８３００)
７）旋光度：
ジメチルスルホキシド中で測定した旋光度は、以下に示す値を示す：
[α]Ｄ２９：＋１．５°（ｃ０．４)
８）赤外吸収スペクトル：
臭化カリウム（ＫＢｒ）錠剤法で測定した赤外吸収スペクトルは以下に示す極大吸収を示す。
３３８８，２９５４，２９２６，２８５５，１７３６，１６９９，１６３２，１４６６，１３９３，１２６９，１１２２，１０６８，１０１５ｃｍ−１
９）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：
重メタノール中、内部標準に重メタノール（４．７８ｐｐｍ）を用いて測定した、１Ｈ−核磁気共鳴スペクトルは、以下に示すとおりである。
０．７４（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），０．８７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．０−１．２（１４Ｈ，ｍ），１．３７（１Ｈ，ｍ），１．４９（２Ｈ，ｍ），２．０−２．３（５Ｈ，ｍ），２．３３（３Ｈ，ｓ），２．５（２Ｈ，ｍ），２．９５（１Ｈ，ｍ），２．９７（３Ｈ，ｓ），３．０２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．０，３．７Ｈｚ），３．１２(１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．７，１３．４），３．２９（１Ｈ，ｍ），３．３０（３Ｈ，ｓ），３．６５（１Ｈ，ｄ，４．７Ｈｚ），３．７８（１Ｈ，ｄ，J＝８．７Ｈｚ），３．９３（１Ｈ，ｄｄ，５．４，７．４Ｈｚ），３．９７（１Ｈ，ｍ)，４．０５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．３，７．４Ｈｚ），４．０７（２Ｈ，ｍ），４．１８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ），４．２７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．３，８．７Ｈｚ），５．１１（１Ｈ，ｍ），５．１３（１Ｈ，ｓ），５．３７（１Ｈ，ｍ），５．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ），５．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）ｐｐｍ
１０）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：
重メタノール中、内部標準に重メタノール（４９．０ｐｐｍ）を用いて測定した、１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトルは、以下に示すとおりである。
２０．１（ｑ），２３．１（ｑ），２３．１（ｑ），２６．３（ｔ），２８．６（ｔ），２８．７（ｄ），２９．２（ｄ），３０．４（ｔ），３０．６（ｔ），３０．７（ｔ），３１．０（ｔ），３５．１（ｔ），３７．８（ｑ），３９．０（ｑ），４０．２（ｔ)，４０．４（ｔ)，４１．６（ｔ)，４１．６（ｔ），４１．８（ｔ）５８．２（ｔ)，５８．７（ｑ)，６４．１(ｄ)，６７．７（ｄ)，７０．７（ｄ)，７１．６（ｄ），７１．９（ｄ)，７３．７（ｄ)，７４．９（ｄ)，７９．２（ｄ)，８０．５（ｄ)，８４．９（ｄ)，８５．７（ｄ)，９２．８（ｄ)，１０２．３（ｄ)，１０９．１（ｄ)，１４３．４（ｄ)，１５２．０（ｓ)，１６６．３（ｓ)，１７１．０（ｓ)，１７２．８（ｓ)，１７３．０（ｓ)，１７３．８（ｓ)，１７６．４（ｓ）ｐｐｍ。
（３）下記の物理化学的性状を有する化合物又はその塩。
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）溶解性：メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶、クロロホルムに不溶
３）分子式：Ｃ４５Ｈ７４Ｎ５Ｏ２１Ｐ
４）分子量：１０５１（ＦＡＢマススペクトル法により測定)
５）高分解能ＦＡＢマススペクトル法により測定した精密質量、[Ｍ−Ｈ]―は次に示す通りである。
実測値：１０５０．４５５０
計算値：１０５０．４５３６
６）紫外部吸収スペクトル：
メタノール中で測定した紫外部吸収スペクトルは、次に示す極大吸収を示す：
２６２ｎｍ（ε７９００)
７）旋光度：
メタノール中で測定した旋光度は、以下に示す値を示す：
[α]Ｄ２９：＋７．０°（ｃ０．８)
８）赤外吸収スペクトル：
臭化カリウム（ＫＢｒ）錠剤法で測定した赤外吸収スペクトルは以下に示す極大吸収を示す。
３３９７，２９２６，２８５４，１７３５，１７００，１４６６，１３８５，１２６８，１１２９，１０７４，９３８ｃｍ−１
９）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：
重メタノール中、内部標準に重メタノール（４．７８ｐｐｍ）を用いて測定した、１Ｈ−核磁気共鳴スペクトルは、以下に示すとおりである。
０．７９（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），０．９２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．０９（２Ｈ，ｍ），１．２−１．３（１６Ｈ，ｍ），１．４３（１Ｈ，ｍ），１．５５（２Ｈ，ｍ），２．１（２Ｈ，ｍ），２．２−２．３（３Ｈ，ｍ），２．３８（３Ｈ，ｓ），２．５５（２Ｈ，ｍ），３．０２（３Ｈ，ｓ），３．０（１Ｈ，ｂｒ．ｍ），３．２（２Ｈ，ｍ），３．３６（３Ｈ，ｓ)，３．４０（１Ｈ，ｍ），３．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ），３．８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ)，３．９７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．９，６．６Ｈｚ），４．１１（２Ｈ，ｍ)，４．１７（２Ｈ，ｍ)，４．３０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．０，８．４Ｈｚ），４．５２（１Ｈ，ｍ)，５．１４（１Ｈ，ｍ)，５．１５（１Ｈ，ｍ），５．４４（１Ｈ，ｍ)，５．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ)，５．７６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ)，７．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ）ｐｐｍ
１０）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：
重メタノール中、内部標準に重メタノール（４９．０ｐｐｍ）を用いて測定した、１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトルは、以下に示すとおりである。
２０．２（ｑ），２３．１（ｑ），２６．３（ｔ），２８．５（ｔ），２８．９（ｄ），２９．２（ｄ），３０．４（ｔ），３０．６(ｔ)，３０．７（ｔ），３０．７（ｔ），３０．８（ｔ），３１．０（ｔ），３５．１（ｔ），３８．０（ｑ），３９．０（ｑ），４０．３（ｔ），４０．４（ｔ），４１．４（ｔ），４１．７（ｔ），４２．３（ｔ），５８．４（ｔ），５９．１（ｑ），６４．０(ｄ），６８．２（ｄ），７０．８（ｄ），７１．９（ｄ），７４．１（ｄ），７４．４（ｄ），７５．１（ｄ），７８．９（ｄ），７９．２（ｄ），８４．９（ｄ），８５．３（ｄ），９２．０（ｄ），１０２．７（ｄ），１０９．１（ｄ），１４３．０（ｄ），１５２．１（ｓ），１６６．３（ｓ），１７１．０（ｓ），１７３．０（ｓ），１７３．８（ｓ），１７７．１（ｓ）ｐｐｍ。
【０００８】
また、本発明は、下記の（４）及び（５）に記載の製造方法に関する。
（４）ストレプトマイセス属に属する、（１）乃至（３）のいずれか１項に記載の化合物の生産菌を培養し、その培養物より該化合物を採取することを特徴とする、（１）乃至（３）のいずれか１項に記載の化合物の製造方法。
（５）該生産菌がストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＳＡＮＫ６０７０４（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６２９）である、（４）に記載の製造方法。
【０００９】
また、本発明は（６）及び（７）に記載の微生物に関する。
（６）ストレプトマイセス属に属し、（１）乃至（３）のいずれか１項に記載の化合物を生産することを特徴とする微生物。
（７）ストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＳＡＮＫ６０７０４（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６２９）。
【００１０】
また本発明は、下記（８）及び（９）に記載の脱リン酸化化合物の製造方法に関する。
（８）一般式（Ｉ）においてＸがリン酸基である（１）に記載の化合物又はその塩を脱リン酸化反応に供することを特徴とする、一般式（Ｉ）においてＸがリン酸基である（１）に記載の化合物又はその塩を出発物質として一般式（Ｉ）においてＸが水酸基であり、Ｒが出発物質と同一である（１）に記載の化合物又はその塩を製造する方法。
（９）脱リン酸化酵素を用いることを特徴とする（８）に記載の製造方法
更に本発明は、下記（１０）及び（１１）に記載の医薬に関する。
（１０）請求項１乃至３のいずれか１項に記載の化合物又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬。
（１１）抗菌剤である、請求項１０に記載の医薬。
【００１１】
本発明において、一般式（Ｉ）
【００１２】
【化２】
【００１３】
（Ｉ）
［式中、Ｘは水酸基又はリン酸基を表し、Ｒは炭化水素鎖を表す］により表わされる構造からなる化合物を「Ａ−９７０６５類物質」とよぶ。
本発明のＡ−９７０６５類物質において、上記一般式（Ｉ）中Ｘが水酸基である化合物をＡ−９７０６５Ａ物質と呼ぶ。また、Ａ−９７０６５Ａ物質において、Ｒが−（ＣＨ２）８ＣＨ（ＣＨ３）２である化合物又は上記（ｉ）に記載の物理化学的性状を有する化合物をＡ１物質と呼び、Ｒが−（ＣＨ２）１０ＣＨ（ＣＨ３）２である化合物をＡ２物質と呼ぶ。
本発明のＡ−９７０６５類物質において、上記一般式（Ｉ）中Ｘがリン酸基である化合物をＡ−９７０６５Ｂ物質と呼ぶ。また、Ａ−９７０６５Ｂ物質において、Ｒが−（ＣＨ２）１０ＣＨ（ＣＨ３）２である化合物又は上記（ｉｉ）に記載の物理化学的性状を有する化合物をＢ２物質と呼ぶ。
【００１４】
本発明の化合物は、いくつかの不斉炭素原子を有するため、種々の光学異性体が存在する。一般式（Ｉ）において、これらの異性体はすべて単一の式で示されているが、本発明はラセミ化合物を含むこれらの異性体、及びこれらの異性体の混合物をもすべて含む。これらの異性体は、立体特異的合成法により、若しくは光学活性化合物を原料化合物とした合成により、製造することができ、又は、異性体の混合物として製造した後、所望の異性体をクロマトグラフィー等を用いて常法により単離することにより製造することもできる。
【００１５】
本発明の化合物は、カルボキシル基、アミノ基等を有するため、酸又は塩基を用いて当業者に周知の方法により塩にすることができる。本発明はこれらの塩も包含する。本発明の化合物の塩を医薬として使用する場合、医学的に使用され、薬理学的に許容されるものであれば特に限定されない。また、本発明の化合物の塩を医薬以外の用途に用いる場合、例えば中間体として用いる場合には、該用途に用いることのできるものであれば特に限定されない。
そのような塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、のようなアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩、のようなアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、ニッケル塩、コバルト塩等の金属塩；アンモニウム塩のような無機塩；ｔ−オクチルアミン塩、ジベンジルアミン塩、モルホリン塩、グルコサミン塩、フェニルグリシンアルキルエステル塩、エチレンジアミン塩、Ｎ−メチルグルカミン塩、グアニジン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩、クロロプロカイン塩、プロカイン塩、ジエタノールアミン塩、Ｎ−ベンジル−フェネチルアミン塩、ピペラジン塩、テトラメチルアンモニア塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩のような有機アミン塩；グリシン塩、リジン塩、アルギニン塩、オルニチン塩、アスパラギン塩のようなアミノ酸塩；酢酸塩、臭化物塩、塩化物塩、塩酸塩、臭酸塩、ヨウ化物塩、硫酸塩、リン酸塩、ニリン酸塩のような無機塩；及びクエン酸塩、マレイン酸塩、パモ酸塩、酒石酸塩のような有機酸塩等を挙げることができる。好適には、薬理学的に許容される塩であり、より好適には、ナトリウム塩、カリウム塩、塩酸塩、アンモニウム塩、パモ酸塩である。
【００１６】
また、本発明の化合物及びその塩は、大気中に放置したり、水又は有機溶媒と混和することによって水又は溶媒と結合し、水和物又は溶媒和物を形成する場合があるが、これらの水和物及び溶媒和物も「薬理上許容される塩」として本発明に含まれる。
本発明のＡ−９７０６５類物質のうちＡ１物質、Ｂ２物質等多くのものはは、ストレプトマイセス属に属する菌株を培養することにより、その培養液中から得ることができる。本発明の化合物の製造法において用いられるストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する菌株としては、例えばストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＳＡＮＫ ６０７０４株を挙げることができる。ＳＡＮＫ ６０７０４株は沖縄県で採集された土壌から分離できる。ＳＡＮＫ ６０７０４株の菌学的特徴は、次のとおりである。
【００１７】
１．形態学的特徴
ＳＡＮＫ ６０７０４株は、ＩＳＰ〔インターナショナル・ストレプトマイセス・プロジェクト（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ Ｐｒｏｊｅｃｔ）〕規定の寒天培地上２８℃、１４日間培養後、顕微鏡下観察では、基生菌糸は良好に伸長、分岐し、白乃至茶味灰を示すが、ノカルディア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）属菌株様の菌糸断裂やジグザグ伸長は観察されない。気菌糸は単純分岐である。気菌糸の先端に１０乃至５０個又はそれ以上の胞子連鎖を形成し、胞子連鎖の形態は螺旋状を示す。走査型電子顕微鏡による観察では、胞子の表面構造は平滑(smooth)状を示す。胞子は楕円形で、その大きさは0.4乃至0.7 μm、×0.8乃至1.2 μmである。また、気菌糸の車軸分岐、菌核や胞子のうなどの特殊器官は観察されない。
【００１８】
２．各種培養基上の諸性質
各種培養基上で２８℃、１４日培養後の性状は表１に示したとおりである。色調の表示はマンセル方式による日本色彩研究所版「標準色票」のカラーチップ・ナンバーをあらわす。
［表１］
培地の種類 項目*1 ＳＡＮＫ ６０７０４株の性状
イーストエキス Ｇ ： 非常に良好、隆起状、黄味茶(10YR 7/6)
麦芽エキス寒天 ＡＭ ： 豊富に形成、ビロード状、明茶味灰(10YR 7/1)
(ISP 2) Ｒ ： 黄味茶(10YR 7/6)
ＳＰ ： 黄味茶(10YR 5/6)
オートミール寒天 Ｇ ： 良好、隆起状、薄黄味茶(2.5Y 8/4)
(ISP 3) ＡＭ ： 余り良くない、ビロード状、白
Ｒ ： 薄黄味茶(2.5Y 8/4)
ＳＰ ： 産生せず
澱粉・無機塩寒天 Ｇ ： 非常に良好、隆起状、黄味茶(2.5Y 7/4)
(ISP 4) ＡＭ ： 非常に良好、ビロード状、茶味灰(2.5Y 5/1)
Ｒ ： 黄味茶(2.5Y 7/4)
ＳＰ ： 産生せず
グリセリン・ Ｇ ： 非常に良好、隆起状、薄黄味茶(2.5Y 8/4)
アスパラギン寒天 ＡＭ ： 非常に良好、茶味灰(2.5Y 6/2)
(ISP 5) Ｒ ： 薄黄味茶(2.5Y 8/4)
ＳＰ ： 産生せず
ペプトン・ Ｇ ： 余り良くない、隆起状、薄黄味茶(2.5Y 8/6)
イースト・鉄寒天 ＡＭ ： 余り良くない、白
(ISP 6) Ｒ ： 薄黄味茶(2.5Y 8/6)
ＳＰ ： 産生せず
チロシン寒天 Ｇ ： 非常に良好、隆起状、黄味茶(10YR 5/6)
(ISP 7) ＡＭ ： 非常に良好、ビロード状、黄味茶(10YR 5/4)
Ｒ ： 黄味茶(10YR 5/6)
ＳＰ ： 灰味赤茶(2.5YR 5/6)
シュークロース・ Ｇ ： 余り良くない、隆起状、薄黄橙(2.5Y 9/2)
硝酸塩寒天 ＡＭ ： 余り良くない、ビロード状、茶味灰(2.5Y 4/2)
Ｒ ： 薄黄味橙(2.5Y 9/2)
ＳＰ ： 産生せず
グルコース・ Ｇ ： 余り良くない、隆起状、薄黄橙(2.5Y 9/2)
アスパラギン寒天 ＡＭ ： 余り良くない、白
Ｒ ： 薄黄味橙(2.5Y 9/2)
ＳＰ ： 産生せず
栄養寒天 Ｇ ： 余り良くない、平坦、黄味茶(2.5Y 8/2)
(Difco) ＡＭ ： 形成せず
Ｒ ： 黄味茶(2.5Y 8/2)
ＳＰ ： 産生せず
ポテトエキス・ Ｇ ： 余り良くない、平坦、薄黄味橙(2.5Y 9/2)
人参エキス寒天 ＡＭ ： 余り良くない、ビロード状、明茶味灰(2.5Y 7/1)
Ｒ ： 薄黄味橙(2.5Y 9/2)
ＳＰ ： 産生せず
水寒天 Ｇ ： 良くない、平坦、白
ＡＭ ： 良くない、ビロード状、白
Ｒ ： 白
ＳＰ ： 産生せず
＊１ Ｇ：生育、ＡＭ：気菌糸、Ｒ：裏面、ＳＰ：可溶性色素
＊２ 性状の欄の（ ）内はマンセル方式による色調表示。
【００１９】
３．生理学的性質
２８℃で培養後、２乃至２１日間に観察したＳＡＮＫ ６０７０４株の生理学的性質は表２に示したとおりである。
［表２］
澱粉の水解 陽性
ゼラチンの液化 陽性
硝酸塩の還元 陰性
ミルクのペプトン化 陽性
ミルクの凝固 陽性
メラニン様色素の生産性（培地１）＊ 陰性
（培地２）＊ 陰性
（培地３）＊ 陰性
基質分解性 カゼイン 陰性
チロシン 陽性
キサンチン 陰性
生育温度範囲（培地４）＊ １０〜３７℃
生育適正温度（培地４） ２４〜３４℃
食塩耐性 ７％
＊）培地１；トリプトン・イーストエキス・ブロス(ISP 1)
培地２；ペプトン・イーストエキス・鉄寒天(ISP 6)
培地３；チロシン寒天(ISP 7)
培地４；イーストエキス・麦芽エキス寒天(ISP 2)
また、プリドハム・ゴトリーブ寒天培地(ISP ９)を使用して、２８℃、１４日間培養後に観察したＳＡＮＫ ６０７０４株の炭素源の資化性は表３に示すとおりである。
［表３］
Ｄ−グルコース ＋ ：Ｄ−フルクトース ＋
Ｌ−アラビノース − ：Ｌ−ラムノース −
Ｄ−キシロース ＋ ：シュクロース ＋
イノシトール ＋ ：ラフィノース ＋
Ｄ−マンニトール ± ：対照 −
＋：利用する、±：弱く利用する、−：利用しない。
【００２０】
４．菌体成分について
ＳＡＮＫ ６０７０４株の化学分類学的性状は「放線菌の分類と同定(Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ) （日本放線菌学会編、日本学会事務センター、49-82頁(2001) ）」に従い検討した。その結果、細胞壁からＬＬ−ジアミノピメリン酸が検出され、全細胞中の糖成分として特徴的なパターンは認められなかった。主要メナキノン分子種としてMK-9(H6)， MK-9(H8)が検出された。
【００２１】
５．１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子解析
ＳＡＮＫ ６０７０４株の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列（１４８８ｂｐ：配列番号１）を解読しデータベース検索を行った結果、公知の菌株の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列の中にＳＡＮＫ ６０７０４株と一致するものは見出されなかったが、その配列相同性からＳＡＮＫ ６０７０４株はストレプトマイセス属のクラスターに含まれると判断された。１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列（１４８８ｂｐ）においてＳＡＮＫ ６０７０４株と最も高い相同性を示した公知の菌株としては、ストレプトマイセス・ハイグロスコピカス・サブエスピー．・グレボサス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ ｓｕｂｓｐ． ｇｌｅｂｏｓｕｓ） (ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ． ＡＢ１８４４７９)、ストレプトマイセス・プラテンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ） (ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ． ＡＢ０４５８８２)、ストレプトマイセス・リバニ・サブエスピー．・ルファス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｌｉｂａｎｉ ｓｕｂｓｐ． ｒｕｆｕｓ (ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ． ＡＪ７８１３５１)、及び、ストレプトマイセス・カニフェラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃａｎｉｆｅｒｕｓ (ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ． ＡＢ１８４６４０)が挙げられ、いずれもＳＡＮＫ ６０７０４株と１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子塩基配列において９９％以上の相同性を示した。
【００２２】
上記の知見に基づき、「ＩＳＰ（インターナショナル・ストレプトマイセス・プロジェクト（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ Ｐｒｏｊｅｃｔ））基準」、ワックスマン（Ｓ． Å． Ｗａｋｓｍａｎ）著、「ジ・アクチノミセテス（Ｔｈｅ Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ）・第２巻」、ブキャナンとギボンズ（Ｒ． Ｅ． Ｂｕｃｈａｎａｎ ａｎｄ Ｎ．Ｅ． Ｇｉｂｂｏｎｓ）編、「バージーズ・マニュアル（’Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第８版」（１９７４年）、「バージーズ・マニュアル（’Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第 ４ 巻」（１９８９年）、及びストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属放線菌に関する最近の文献によって本菌株の同定を行い、本菌株が放線菌の中でもストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属すると判断された。そこで、本菌株をストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＳＡＮＫ ６０７０４株と命名した。種レベルの同定については、バージーズ・マニュアル（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第 ４ 巻（１９８９年）でストレプトマイセス・リディカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｌｙｄｉｃｕｓ）と呼称された分類群に所属すると考えるのが妥当である。なお、本菌株は２００６年６月２８日に独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センター（日本国茨城県つくば市東１丁目１番１号中央第６）に国際寄託され、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６２９を付与された。
【００２３】
周知のとおり、放線菌は自然界において、又は人工的な操作（例えば、紫外線照射、放射線照射、化学薬品処理等）により、変異を起こし易く、本発明のＳＡＮＫ ６０７０４株もこの点は同じである。また、これらの変異株の中には、遺伝学的方法、例えば組み換え、形質導入、形質転換等により得られたものも包含される。これら、ＳＡＮＫ ６０７０４株及びその変異株並びに菌学的性状によりそれらと明確に区別されない菌株は、すべてＳＡＮＫ ６０７０４株に包含されるものである。本発明のＳＡＮＫ ６０７０４株として、好適には前記菌株のうちＡ−９７０６５類物質を産生するストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する菌株であり、より好適には、それらのうち更に１６Ｓ ｒＲＮＡの塩基配列が、配列番号１に記載の塩基配列と同一である菌株であり、更により好適には受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６２９として国際寄託されているＳＡＮＫ ６０７０４株である。
また、本発明は、ストレプトマイセス属に属し、Ａ−９７０６５類物質を生産する全ての菌株を包含する。
【００２４】
本発明のＡ−９７０６５類物質の生産菌を培養するに際し使用される培地としては、炭素源、窒素源、無機イオン及び有機栄養源等より選択されたものを適宜含有する培地であれば、合成又は天然培地のいずれも使用することができる。
【００２５】
該栄養源としては、従来真菌類や放線菌類の菌株の培養に利用されている公知の、微生物が資化できる炭素源、窒素源及び無機塩が使用できる。
【００２６】
具体的には、炭素源としてグルコース、フルクトース、マルトース、シュークロース、マンニトール、グリセロール、デキストリン、オート麦、ライ麦、トウモロコシ澱粉、ジャガイモ、トウモロコシ粉、大豆粉、綿実油、水飴、糖蜜、大豆油、クエン酸、酒石酸などを単一に、あるいは併用して使用できる。一般的には、上記炭素源を培地量の１乃至１０重量％で使用することができるが、この範囲に限定されない。
また、窒素源としては、蛋白質又はその水解物を含有する物質、あるいは含窒素無機塩類を用いることができる。好適な窒素源としては、例えば大豆粉、フスマ、落花生粉、綿実粉、スキムミルク、カゼイン加水分解物、ファーマミン、魚粉、コーンスチープリカー、ペプトン、肉エキス、生イースト、乾燥イースト、イーストエキス、マルトエキス、ジャガイモ、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム等を使用することができる。該窒素源は、単一で又は併用して、好ましくは培地量の０．２乃至６重量％の範囲で使用する。
さらに栄養無機塩としては、ナトリウム、アンモニウム、カルシウム、フォスフェート、サルフェート、クロライド、カーボネート等のイオンを含む、通常の塩類を使用することができる。また、カリウム、カルシウム、コバルト、マンガン、鉄、マグネシウム等の微量の金属も使用することができる。
なお、液体培養に際しては、消泡剤としてシリコン油、植物油、界面活性剤等を使用することができる。
【００２７】
ＳＡＮＫ６０７０４株を培養してＡ−９７０６５類物質を生産するための培地のｐＨは、好適には５．０乃至８．０である。
ＳＡＮＫ６０７０４株の生育温度は１２乃至３８℃であるが、Ａ−９７０６５類物質を生産させるためには、該菌株を１８乃至３６℃で培養することが好ましく、より好適には、２０乃至３２℃で培養するのが好ましい。
Ａ−９７０６５類物質は、ＳＡＮＫ６０７０４株を好気的に培養することにより得られるが、そのような培養法としては、通常用いられる好気的培養法、例えば固体培養法、振とう培養法、通気攪拌培養法等を用いることができる。
【００２８】
小規模の培養においては、２０乃至３２℃で数日間振とう培養を行うのが好適である。培養は、バッフル（水流調節壁）のついた、あるいはついていない三角フラスコ中で、１又は２段階の種の発育工程により開始する。
種発育段階の培地には、炭素源及び窒素源を併用することができる。種培養は、２０乃至３２℃の定温インキュベーター中で、８日間振とうするか、又は充分に成長するまで振とうすることにより行う。成長した種は、第二の種培地、又は、生産培地に接種する。
中間の発育工程を用いる場合には、種培養と同様の方法で行うことができる。中間の発育工程により得られた種は、その一部を生産培地に接種する。
【００２９】
生産のための培養は、種を接種した生産培養用フラスコを一定の温度で数日間振とう培養することにより行うことができる。
生産のための培養を大量培養で行う場合には、攪拌機、通気装置が付いたジャーファーメンターあるいはタンクで培養するのが好ましい。そのためには、まず栄養培地を１２１乃至１３０℃まで加熱して滅菌し、その後冷却させておく。次いで、該滅菌済培地に前述の方法によって予め成長させておいた種を接種する。その後の培養は２０乃至３２℃で通気攪拌して行う。この方法は、多量の化合物を得るのに適している。
【００３０】
培養終了後、フラスコ内の培養物を遠心分離又はろ過するか、又は培養物全体を用いて抽出、精製することにより、目的の化合物を得ることができる。
培養の経過に伴って生産されるＡ−９７０６５類物質の量は、培養液の一部を採取して該化合物群を抽出し、トランスロケースＩ阻害活性を測定することにより該化合物群を総活性量として確認するか、又は、高速液体クロマトグラフィーを実施し、該化合物群を各々測定することによりモニターすることができる。Ａ−９７０６５類物質の生産量は、通常３乃至１５日で最高値に達する。
【００３１】
培養終了後、培養液中の液体部分及び菌体内、又はその双方に存在するＡ−９７０６５類物質は、培養終了液の全て、あるいは菌体、その他の固形部分を、珪藻土をろ過助剤とするろ過操作又は遠心分離によって分別し、得られたろ液又は上清及び菌体中から、トランスロケースＩ阻害活性又は高速液体クロマトグラフィーを指標にして、その物理化学的性状を利用し抽出精製することができる。
【００３２】
ろ液又は上清中に存在するＡ−９７０６５類物質は、中性ｐＨ条件下で、水と混和しない有機溶剤、例えば、酢酸エチル、クロロホルム、塩化エチレン、塩化メチレン、ブタノール等の単独又は、それらの組み合わせにより抽出精製することができる。あるいは、吸着剤として、例えば、活性炭又は吸着用樹脂であるアンバーライトＸＡＤ−２、ＸＡＤ−４（登録商標、ローム・アンド・ハース社製）等や、ダイヤイオンＨＰ−１０、ＨＰ−２０、ＣＨＰ−２０Ｐ、ＨＰ−５０、セパビーズＳＰ−２０７（登録商標、三菱化学社製）等を使用して抽出精製することもできる。吸着剤を使用して抽出精製する場合、目的化合物を含む液を吸着剤の層を通過させ、不純物を吸着剤に吸着させることにより取り除くか、又は、目的化合物を吸着させて不純物を洗い流した後、メタノール水、アセトン水、ブタノ−ル水等を用いて目的化合物を溶出させることにより、目的化合物を抽出精製することができる。
【００３３】
菌体内に存在するＡ−９７０６５類物質は、５０乃至９０％の含水アセトン又は含水メタノールにより抽出し、濃縮操作により有機溶剤を除去した後、上記と同様に抽出精製操作を行うことにより得ることができる。例えば、培養終了後に適当量（好ましくは終濃度５０％）の、アセトン又はメタノールを添加することにより目的の化合物を抽出することができる。抽出終了後、珪藻土をろ過助剤とするろ過操作を行ない、得られた抽出液をろ液と同様な抽出精製操作を行うことにより目的の化合物を抽出精製することができる。
【００３４】
上記の方法により抽出精製されたＡ−９７０６５類物質を含む溶液は、シリカゲル、セファデックスＬＨ−２０（アマシャムバイオサイエンス社製）、フロリジル、コスモシル（ナカライテスク社製）のような担体を用いた分配カラムクロマトグラフィー；ダイヤイオンＣＨＰ−２０Ｐ（三菱化学社製）のような担体を用いた吸着カラムクロマトグラフィー；セファデックスＧ−１０（アマシャムバイオサイエンス社製）、トヨパールＨＷ４０Ｆ（トーソー社製）などを用いたゲルろ過クロマトグラフィー；ダウエックス５０（ダウケミカル社製）ダウエックス１（ダウケミカル社製）、ダイヤイオンＰＫ２１６（三菱化学社製）、ダイヤイオンＰＡ３１６（三菱化学社製）、ＣＭセファデックスＣ−２５（アマシャムバイオサイエンス社製）、ＤＥＡＥセファデックスＡ−２５（アマシャムバイオサイエンス社製）などを用いたイオン交換クロマトグラフィー；順層、逆層カラムを用いた高速液体クロマトグラフィー等により更に精製することができる。
以上の分離、精製の手段を単独又は適宜組み合わせ、場合によっては反復して用いることにより、本発明のＡ−９７０６５類物質を分離精製することができる。
【００３５】
本発明のＡ−９７０６５Ｂ物質は、周知の方法により加水分解及び脱リン酸化されることで、対応する炭化水素鎖を有するＡ−９７０６５Ａ物質に変換されうる。反応の方法としては、脱リン酸化に用いられる方法であれば特に限定されず、化学的反応、酵素的反応、微生物変換反応等をあげることができる。脱リン酸化は、例えば、溶媒中でＡ−９７０６５Ｂ物質に脱リン酸化酵素を作用させることにより達成される。
使用される溶媒としては、酵素反応に使用できる溶媒であれば特に限定は無く、溶媒中に有機溶媒を含んでいても良く、有機溶媒のみからなる溶媒であっても良い。本反応に用いる溶媒として、具体的には、水；メタノール、エタノール、イソプロパノール等のアルコール類；アセトン、等を挙げることができ、これらの溶媒の２種類以上の混合物であっても良いが、好適には、水である。
脱リン酸化酵素としては、酸性フォスファターゼ、塩基性フォスファターゼの他、ヌクレアーゼ、ヌクレオチダーゼを挙げることができ、好適には酸性フォスファターゼ又は塩基性フォスファターゼであり、より好適には酸性フォスファターゼであり、更により好適にはジャガイモ由来の酸性フォスファターゼである。
【００３６】
前記の脱リン酸化処理に用いるＡ−９７０６５Ｂ物質を含むサンプルは、Ａ−９７０６５Ａ物質を含んでいてもよく、また、Ａ−９７０６５Ａ物質を除いた分離されたＡ−９７０６５Ｂ物質であっても良い。また、前記サンプル中には複数種類のＡ−９７０６５Ｂ物質が含まれていても良い。
得られた脱リン酸化体は、前記と同様に公知の分離手法（例えば、コスモシル（ナカライテスク社製）のような担体を用いた分配カラムクロマトグラフィー；ダイヤイオンＣＨＰ−２０Ｐ（三菱化学社製）のような担体を用いた吸着カラムクロマトグラフィー；セファデックスＧ−１０（アマシャムバイオサイエンス社製）、トヨパールＨＷ４０Ｆ（トーソー社製）などを用いたゲルろ過クロマトグラフィー；ダウエックス５０（ダウケミカル社製）ダウエックス１（ダウケミカル社製）、ダイヤイオンＰＫ２１６（三菱化学社製）、ダイヤイオンＰＡ３１６（三菱化学社製）、ＣＭセファデックスＣ−２５（アマシャムバイオサイエンス社製）、ＤＥＡＥセファデックスＡ−２５（アマシャムバイオサイエンス社製）などを用いたイオン交換クロマトグラフィー；順層、逆層カラムを用いた高速液体クロマトグラフィー等）を用いる（必要に応じて複数組み合わせても良い）ことにより精製することができる。 以上、Ａ−９７０６５類物質の製造法の代表的な方法を説明したが、製造方法はこれらに限定されず、既に当業者に知られているこれら以外の製造方法を用いることもできる。
【００３７】
本発明は、さらに、一般式（Ｉ）のＲが所望の脂肪酸側鎖であるＡ−９７０６５類物質の製造方法に関する。
上記したようなＡ−９７０６５類物質生産菌の培養において、通常用いられる培地に所望の脂肪酸を添加することにより（「脂肪酸添加培養」という）、一般式（Ｉ）においてＲが前記脂肪酸に対応した炭化水素鎖であるＡ−９７０６５類物質の生産量を特異的に増加させることが出来る。用いる脂肪酸は主鎖の炭素数が３以上のものであれば特に限定されず、直鎖脂肪酸、分枝鎖脂肪酸、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸等を用いることができるが、好適には分枝状飽和脂肪酸である。分枝状飽和脂肪酸の鎖長は炭素数３以上であれば特に限定されないが、好適には炭素数７乃至１５であり、より好適には炭素数９乃至１３である。
【００３８】
例えば、下記一般式（ＩＩ）で表わされる脂肪酸を用いた場合、生産量が増加するＡ−９７０６５類物質は、一般式（Ｉ）において、Ｒ＝Ｒ１として表わされる。
【００３９】
【化３】
【００４０】
このようにして、Ａ−９７０６５生産菌の脂肪酸添加培養により生産される所望の脂肪酸側鎖を有するＡ−９７０６５類物質は、他のＡ−９７０６５類物質と同様、前記の方法を用いて単離、精製される。このようにして製造される、所望の脂肪酸側鎖を有するＡ−９７０６５類物質も本発明のＡ−９７０６５類物質に含まれる。
【００４１】
また、本発明は、所望の脂肪酸側鎖を有するＡ−９７０６５Ａ物質を特異的に製造する方法に関する。脂肪酸添加培養により生産される所望の脂肪酸側鎖を有するＡ−９７０６５Ｂ物質は、前述の通り脱リン酸化反応に供することにより、対応する脂肪酸側鎖を有するＡ−９７０６５Ａ物質に変換することが出来る。このような手法により所望の脂肪酸側鎖を有するＡ−９７０６５Ａ物質の製造量を特異的に向上させることが可能である。
【００４２】
以上のごとくして得られる本発明の化合物の、一般グラム陽性細菌及びグラム陰性細菌に対する最少生育阻止濃度（ＭＩＣ）は、普通寒天培地（栄研化学社製）や、ミュラー−ヒントン寒天（Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎａｇａｒ）培地（ＢＢＬ社製）等を用いた、当業者周知の寒天平板希釈法によって測定することができる。
【００４３】
また、本発明の化合物のトランスロケースＩに対する酵素阻害活性は、酵素とＵＤＰ−Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニル−γ−Ｄ−グルタミル−ｍ−ジアミノピメリル−（Ｎε−ダンシル）−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニン（ＵＤＰ−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｍｕｒａｍｙｌ−Ｌ−Ａｌａ−γ−Ｄ−Ｇｌｕ−ｍ−ＤＡＰ−（Ｎε−ｄａｎｓｙｌ）−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ）及びウンデカプレニルリン酸（ｕｎｄｅｃａｐｒｅｎｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ）の反応を用いて測定することができる。また、本発明の化合物のトランスロケースＩに対する酵素阻害活性は、当業者周知の方法により測定することもできる。
【００４４】
本発明の化合物はトランスロケースＩ酵素阻害活性を示す。トランスロケースＩは、細菌細胞壁の構成成分であるペプチドグリカンの生合成に関与する酵素であり、該酵素を阻害すると細菌が細胞壁を維持することが出来なくなると考えられている。すなわち、トランスロケースＩ阻害作用を有する本発明の化合物は抗菌活性を有する。また、このようなトランスロケースＩ阻害活性に基づく抗菌活性は、従来の抗菌剤とは異なるメカニズムであり、従来品に対する耐性菌に対しても有効な抗菌活性を発揮する。
【００４５】
本発明は、Ａ−９７０６５類物質又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬組成物に関する。前記医薬組成物は、好適にはトランスロケースＩ阻害剤であり、より好適には抗菌剤である。このような医薬組成物は、細菌感染症、特に耐性菌を含む細菌感染症の予防剤又は治療剤として有用である。また、このような医薬組成物の製造のためのＡ−９７０６５類物質の使用も本発明に含まれるものである。また、患者にＡ−９７０６５類物質又はその薬理学的に許容される塩の有効量を投与することを含む細菌感染症、特に耐性菌を含む細菌感染症、の治療方法も本発明に含まれる。
【００４６】
本発明のＡ−９７０６５類物質又はその薬理学的に許容される塩は、その投与される形態に応じて種々の形態で製剤化することができる。その製剤の形態としては、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、乳剤、丸剤、散剤、シロップ剤（液剤）等による経口投与、又は注射剤（静脈内、筋肉内、皮下又は腹腔内投与）、点滴剤、坐剤（直腸投与）等による非経口投与を挙げることができる。これらの各種製剤は、常法に従って主薬に賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤等の医薬の製剤技術分野において通常使用し得る補助剤を用いて製剤化することができる。
【００４７】
錠剤として使用する場合、担体として、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、グルコース、尿素、澱粉、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸等の賦形剤；水、エタノール、プロパノール、単シロップ、グルコース液、澱粉液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤；乾燥澱粉、アルギン酸ナトリウム、寒天末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、澱粉、乳糖等の崩壊剤；白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤；第４級アンモニウム塩類、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤；グリセリン、澱粉等の保湿剤；澱粉、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤；精製タルク、ステアリン酸塩、硼酸末、ポリエチレングリコール等の潤沢剤等を使用することができる。また、必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠あるいは二重錠、多層錠とすることができる。
【００４８】
丸剤として使用する場合、担体として、例えば、グルコース、乳糖、カカオバター、澱粉、硬化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤；アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノール等の結合剤；ラミナラン寒天等の崩壊剤等を使用することができる。
坐剤として使用する場合、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えばポリエチレングリコール、カカオバター、高級アルコール、高級アルコールのエステル類、ゼラチン、半合成グリセリド等を挙げることができる。
注射剤として使用する場合、液剤、乳剤又は懸濁剤として使用することができる。これらの液剤、乳剤又は懸濁剤は、殺菌され、血液と等張であることが好ましい。これら液剤、乳剤又は懸濁剤の製造に用いる溶液は、医療用の希釈剤として使用できるものであれば特に限定はなく、例えば、水、エタノール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等を挙げることができる。なお、この場合、等張性の溶液を調製するのに充分な量の食塩、グルコース又はグリセリンを製剤中に含んでいてもよく、また通常の溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤等を含んでいてもよい。
【００４９】
また、上記の製剤には、必要に応じて、着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等を含めることもでき、更に、他の医薬品を含めることもできる。
【００５０】
上記製剤に含まれる有効成分化合物の量は、特に限定されず広範囲に適宜選択されるが、通常、全組成物中１乃至７０重量％、好ましくは１乃至３０重量％含む。
【００５１】
使用量としては、症状、年齢、体重、投与方法及び剤形等によって異なるが、通常は成人に対して１日あたり、上限として40 mg/kg（好ましくは2 mg/kg）であり、下限として0.002 mg/kg（好ましくは0.02 mg/kg、さらに好ましくは0.2 mg/kg）を症状に応じて、一日１回又は数回に分けて投与することができる。
【００５２】
このように医薬用途に用いられるＡ−９７０６５類物質としては、本発明に含まれるものなら全て用いることが出来るが、好適にはＡ１物質である。
【発明の効果】
【００５３】
上記の通り、本発明の化合物群はグラム陽性菌を含む各種細菌感染症の予防薬又は治療薬として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５４】
以下に実施例をあげて、本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００５５】
（実施例１）ストレプトマイセス・エスピー．ＳＡＮＫ ６０７０４株の培養
１）一次培養
斜面培地上に生育させたＳＡＮＫ ６０７０４株に、滅菌水を添加し、白金耳を用いて菌糸をかきとった。この菌糸懸濁液をホモジナイズし均一化したものを、表４に記載する組成の前培養培地１００ｍｌを入れた５００ｍｌ容の三角フラスコに無菌的に接種し、次いで該フラスコをロータリー振とう機中で２８℃、２１０ｒｐｍにて、３日間振とう培養して、一次前培養液を得た。
［表４］前培養培地
―――――――――――――――――――――――
グルコース ２０ ｇ
可溶性デンプン １０ ｇ
カツオエキス １ ｇ
大豆粉 ２．５ｇ
ＮａＣｌ ２ ｇ
Ｋ２ＨＰＯ４ ５０ ｍｇ
―――――――――――――――――――――――
水道水 １０００ ｍｌ
滅菌前のｐＨ６．７
滅菌：１２１℃にて３０分間滅菌した。
【００５６】
２）二次培養
滅菌済みの上記表４の組成の前培養培地３００ｍｌが入った２Ｌ容の三角フラスコ２本に、前記一次前培養液を１％（Ｖ／Ｖ）植菌し、該フラスコをロータリー振とう機中で２８℃、２１０ｒｐｍにて、１日間振とう培養して、二次前培養液を得た。
【００５７】
３）本培養
滅菌済みの下記表５の組成の本培養培地２０Ｌが入った３０Ｌ容タンク培養機２基に、前記二次前培養液を１％（Ｖ／Ｖ）植菌し、温度２８℃、通気量１ｖｖｍ、回転数１００乃至２００ｒｐｍ、溶存酸素量５．０ｐｐｍで８日間培養し、培養終了液を得た。
[表５]本培養培地
―――――――――――――――――――――――
シュークロース ５０ ｇ
カツオエキス ３０ ｇ
ＮａＣｌ ２ ｇ
Ｋ２ＨＰＯ４ ５０ ｍｇ
消泡剤（ＣＢ４４２） １０ ｍｇ
―――――――――――――――――――――――
水道水 １０００ ｍｌ
滅菌前のｐＨ６．７
滅菌：１２１℃にて３０分間滅菌した。
【００５８】
（実施例２）Ａ１物質及びＢ２物質の単離
以下の精製においては、活性画分を以下の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）でモニターした。
ｉ）Ａ１物質
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ（インタクト株式会社製）ＵＫ−Ｃ１８：４．６φ×７５ｍｍ
溶媒：０．３％トリエチルアミン・４５％アセトニトリル水（ｐＨ３．０）［＊］
流速：１．０ｍｌ／分
検出：紫外部吸収２６０ｎｍ
保持時間： ７．６分
ｉｉ）Ｂ２物質
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ（インタクト株式会社製）ＵＫ−Ｃ１８：４．６φ×７５ｍｍ
溶媒：０．３％トリエチルアミン・５０％アセトニトリル水（ｐＨ３．０）
流速：１．０ｍｌ／分
検出：紫外部吸収２６０ｎｍ
保持時間： ５．９分。
［＊］「０．３％トリエチルアミン・４５％アセトニトリル水（ｐＨ３．０）」は、次のように調製した。すなわち、リン酸によりｐＨ３．０に調節した３％トリエチルアミン水溶液とアセトニトリルと水を、トリエチルアミンの終濃度が０．３％、アセトニトリルの終濃度が４５％となるように混合した。本明細書の実施例において、濃度及び／又はｐＨの異なるトリエチルアミン・アセトニトリル水についても、同様の手法により調製した。
【００５９】
１）混合粗粉末の抽出
実施例１で得られた培養終了液（３０Ｌ）にアセトンを３０Ｌ添加した後、セライト５４５（１．５ｋｇ）をろ過助剤として添加し、フィルタープレスろ過した。得られたろ液及び洗液を合併し（５４Ｌ）、７５％硫酸を用いてｐＨを３に調節した後、食塩６３２ｇを添加し、２０Ｌ、１５Ｌ及び１７Ｌの酢酸エチルで３回抽出を行った。得られた溶媒層（８３Ｌ）に、ｐＨを７に調節した０．２Ｍリン酸バッファー (１．６Ｌ)を添加した後、１０Ｌまで減圧濃縮した。次いで、得られた溶液に対し、１．６Ｌ及び０．５Ｌの前記０．２Ｍリン酸バッファーで２回逆抽出を行った。続いて得られた逆抽出液（８Ｌ）を濃縮した後、水で平衡化したダイヤイオンＨＰ‐２０カラム（３Ｌ容）に付し、カラムを１０ｍＭギ酸アンモニウム水、水、 及び４０％アセトン水で洗浄の後、６０％アセトン水（１１Ｌ）で活性物質を溶出することにより脱塩を行った。この溶出液を減圧濃縮、凍結乾燥して粗粉末（１１．１ｇ）を得た。
【００６０】
この粗粉末のうち１０ｇを、ｐＨを６．８に調節した５０ｍＭリン酸バッファー（１２０ｍｌ）に溶解し、同一のリン酸バッファーで平衡化したコスモシルカラム（１Ｌ容：ナカライテスク社製）に付した。カラムを同溶媒１．５Ｌで洗浄の後、ｐＨ６．８に調整した５００ｍＭリン酸バッファーとアセトニトリルと水を混合して得られた５０ｍＭリン酸・３０％アセトニトリル水（２．５Ｌ）、続いて前記リン酸・アセトリトリル水と同様に調製した５０ｍＭリン酸・３５％アセトニトリル水（４．５Ｌ）で活性物質の溶出を行った。溶出液は１５ｍｌ毎に分画・回収した。得られたフラクション１３５から１７０を合わせてＢ２物質を含有する粗精製画分１（３７５ｍｌ）、フラクション１９１から２６０を合わせてＡ１物質を含有する粗精製画分２（１Ｌ）を、それぞれ得た。
【００６１】
２）Ａ１物質の単離
上記の粗精製画分２を減圧濃縮し、得られた濃縮液を水で平衡化したダイヤイオンＨＰ−２０カラム（５０ｍｌ容）に付した。カラムを水（２５０ｍｌ) で洗浄した後、９０％アセトン水（２５０ｍｌ）で活性物質を溶出することにより脱塩を行った。得られた溶出液を減圧濃縮後、凍結乾燥し、粗精製粉末９６１．６ｍｇを得た。この粗精製粉末のうち２００ｍｇをジメチルスルホキシド（８ｍｌ）に溶解し、１５０μｌを０．５％トリエチルアミン・４５％アセトニトリル水（ｐＨ３．３）で平衡化したＨＰＬＣカラム（カプセルパック（ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ）Ｃ１８ＵＧ１２０、２０φ×２５０ｍｍ、資生堂（株）製）に供与した。カラムを流速１０．０ｍｌ／分で展開し、目的物質の２６０ｎｍでの紫外部吸収を検出して、保持時間２９．２分に溶出される画分を分取した。この操作を５３回に分けて行った。得られた同一保持時間の画分をあわせ、ｐＨを７に調節した後、減圧濃縮し、水で平衡化したダイヤイオンＨＰ−２０カラム（１０ｍｌ）に付した。カラムを水（５０ｍｌ) で洗浄した後、７０％アセトン水（５０ｍｌ）で活性物質を溶出することにより脱塩を行った。得られた溶出液を減圧濃縮後、凍結乾燥し、Ａ１物質（７８．９ｍｇ）を無色粉末として得た。
【００６２】
３）Ｂ２物質の単離
上記の粗精製画分１を減圧濃縮し、得られた濃縮液を水で平衡化したダイヤイオンＨＰ−２０カラム（５０ｍｌ容）に付した。カラムを水（２５０ｍｌ) で洗浄した後、９０％アセトン水（２５０ｍｌ）で活性物質を溶出することにより脱塩を行った。得られた溶出液を減圧濃縮後、凍結乾燥し、粗精製粉末６８４．３ｍｇを得た。この粗精製粉末のうち６５０ｍｇをジメチルスルホキシドと５％トリエチルアミン水溶液（リン酸によりｐＨ３．３に調節）を９：１で混合した溶液（１１ｍｌ）に溶解し、このうち１００μｌを０．５％トリエチルアミンを含有する５１．３％アセトニトリル水（リン酸によりｐＨ３．３に調節）で平衡化したＨＰＬＣカラム（カプセルパック（ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ）Ｃ１８ＵＧ１２０、２０φ×２５０ｍｍ）に供与した。カラムを流速１０．０ｍｌ／分で展開し、目的物質の２６０ｎｍでの紫外部吸収を検出して、保持時間２６．５分に溶出される画分を分取した。この操作を１１０回に分けて行った。得られた同一保持時間の画分をあわせ、ｐＨを７に調節した後、減圧濃縮し、ｐＨを３に再調節した後、水で平衡化したダイヤイオンＨＰ−２０カラム（１０ｍｌ）に付した。カラムを水（５０ｍｌ) で洗浄した後、７０％アセトン水（５０ｍｌ）で活性物質を溶出することにより脱塩を行った。得られた溶出液を減圧濃縮後、凍結乾燥し、Ｂ２物質（１４６．６ｍｇ）を無色粉末として得た。
【００６３】
（実施例３）Ｂ２物質からＡ２物質への変換
以下の反応においては、活性画分を以下の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）でモニターした。
ｉ）Ｂ２物質
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ（インタクト株式会社製）ＵＫ−Ｃ１８：４．６φ×７５ｍｍ
溶媒：０．３％トリエチルアミン・５０％アセトニトリル水（ｐＨ３．０）
流速：０．７ｍｌ／分
検出：紫外部吸収２６０ｎｍ
保持時間：６．２分
ｉｉ）Ａ２物質
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ（インタクト株式会社製）ＵＫ−Ｃ１８：４．６φ×７５ｍｍ
溶媒：０．３％トリエチルアミン・５０％アセトニトリル水（ｐＨ３．０）
流速：０．７ｍｌ／分
検出：紫外部吸収２６０ｎｍ
保持時間：７．３分。
【００６４】
実施例２で得られたＢ２物質（５５ｍｇ）をメタノールとジメチルスルホキシドと水を４：３：１の割合で混合した溶液（０．８ｍｌ）に溶解し、基質溶液とした。この基質溶液２０μｌにｐＨを５に調節した０．１Ｍの酢酸−酢酸ナトリウムバッファーを１００μｌ、水７０μｌを順次添加した後、酵素溶液（ジャガイモ由来酸性フォスファターゼ（ＥＣ３．１．３．２：和光純薬（株）社製）１２．５ｍｇを上記０．１Ｍ酢酸−酢酸ナトリウムバッファー５０μｌに溶解し調製）を１０μｌ添加し反応を開始させた。、３７℃で３０分インキュベーションした後、この混合溶液に２００μｌのアセトニトリルを添加することにより、反応を終了させた。この終了液を７５００ｒｐｍで１０分間遠心分離し残存酵素を沈殿させ、上澄に存在するＡ２物質を得た。
【００６５】
（試験例１）抗菌活性の測定（抗グラム陽性菌活性）
本発明のＡ１物質の黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）ＦＤＡ２０９Ｐ ＪＣ−１株（以降Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ２０９Ｐ株と略記)に対する最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）の測定は、以下の方法で行った。検体水溶液を１０００μｇ／ｍｌの濃度より２倍希釈し、１４段階（１０００μｇ／ｍｌ、５００μｇ／ｍｌ、２５０μｇ／ｍｌ、１２５μｇ／ｍｌ、６２．５μｇ／ｍｌ、３１．３μｇ／ｍｌ、１５．６μｇ／ｍｌ、７．８μｇ／ｍｌ、３．９μｇ／ｍｌ、２μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、０．５μｇ／ｍｌ、０．２４μｇ／ｍｌ、０．１２μｇ／ｍｌ）の希釈液を調製した。各希釈液を丸型シャーレ（９０φ×２０ｍｍ、テルモ社製）に１ｍｌずつ分注後、ミュラー−ヒントン寒天（Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ ａｇａｒ）培地（ＢＢＬ社製）を９ｍｌ加えて混合し、平板とした。被検菌Ｓ．ａｕｒｅｕｓ２０９Ｐ株をトリプトソイブイヨン（ＴＳＢ）培地（栄研化学社製）にて３７℃、一夜前培養した。試験当日、得られた菌液を、ＴＳＢを用いて１００倍に希釈し、その１白金耳を平板培地に画線塗沫した。この画線塗沫した平板培地を３７℃、１８時間培養した後、ＭＩＣを判定した。
［表６］抗菌活性（抗グラム陽性菌活性）
―――――――――――――――――――――――――――――――
試験化合物 ＭＩＣ（μｇ／ｍｌ）
―――――――――――――――――――――
被検菌 Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ２０９Ｐ
―――――――――――――――――――――――――――――――
Ａ１物質 ６．２５
―――――――――――――――――――――――――――――――
以上の結果から、Ａ１物質は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ２０９Ｐ株に対して抗菌活性を有することが示された。
【００６６】
（試験例２）トランスロケースＩ酵素阻害活性の測定
本発明の各化合物のトランスロケースＩに対する酵素阻害活性は、酵素とＵＤＰ−Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニル−γ−Ｄ−グルタミル−ｍ−ジアミノピメリル−（Ｎε−ダンシル）−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニン（ＵＤＰ−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｍｕｒａｍｙｌ−Ｌ−Ａｌａ−γ−Ｄ−Ｇｌｕ−ｍ−ＤＡＰ−（Ｎε−ｄａｎｓｙｌ）−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ）及びウンデカプレニルリン酸（ｕｎｄｅｃａｐｒｅｎｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ)の反応を用いて測定した。
すなわち、トランスロケースＩをコードしたプラスミドを有する大腸菌、Ｅ．ｃｏｌｉ／ｐＴＡ５株を培養して得られる菌体を、トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）中にて超音波破砕した後、粗抽出液を超遠心し、得られた沈殿を界面活性化剤で可溶化した溶液を酵素源として使用した。ＵＤＰ−Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニル−γ−Ｄ−グルタミル−ｍ−ジアミノピメリル−（Ｎε−ダンシル）−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニンとウンデカプレニルリン酸を酵素液とともにインキュベートした後、酵素反応により増加した蛍光度を、励起波長３５５ｎｍ、検出波長５３８ｎｍの条件で定量して酵素活性とし、５０％酵素阻害濃度（ＩＣ５０）は、同時に添加した阻害剤の濃度と阻害率から計算して求めた。
[表７]トランスロケースＩ阻害活性
―――――――――――――――――――――――――――――――
試験化合物 ＩＣ５０値（μｇ／ｍｌ）
―――――――――――――――――――――――――――――――
Ａ１物質 ０．００２４
Ｂ２物質 ０．１０
―――――――――――――――――――――――――――――――
Ａ１物質及びＢ２物質は、トランスロケースＩに対し阻害活性を示した。
【００６７】
（製剤例）カプセル剤
Ａ１物質 １００ｍｇ
乳糖 １００ｍｇ
トウモロコシ澱粉 １４８．８ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム １．２ｍｇ
――――――――――――――――――――――――――
全量 ３５０ｍｇ
上記処方の粉末を混合し、６０メッシュのふるいに通した後、この粉末をゼラチンカプセルに入れ、カプセル剤とする。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記、一般式(Ｉ)：
【化１】
（Ｉ）
［式中、Ｘは水酸基又はリン酸基を表し、Ｘが水酸基である場合、Ｒは−（ＣＨ２）８ＣＨ（ＣＨ３）２ ]又は −（ＣＨ２）１０ＣＨ（ＣＨ３）２を表し、Ｘがリン酸基である場合Ｒは−（ＣＨ２）１０ＣＨ（ＣＨ３）２を表す］
で表される化合物又はその塩。
【請求項２】
下記の物理化学的性状を有する化合物又はその塩。
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）溶解性：メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶、クロロホルムに不溶
３）分子式：Ｃ４３Ｈ６９Ｎ５Ｏ１８
４）分子量：９４３（ＦＡＢマススペクトル法により測定)
５）高分解能ＦＡＢマススペクトル法により測定した精密質量、[Ｍ＋Ｈ]＋は次に示す通りである。
実測値：９４４．４６７１
計算値：９４４．４７１６
６）紫外部吸収スペクトル：
ジメチルスルホキシド中で測定した紫外部吸収スペクトルは、次に示す極大吸収を示す：
２６３ｎｍ（ε８３００)
７）旋光度：
ジメチルスルホキシド中で測定した旋光度は、以下に示す値を示す：
[α]Ｄ２９：＋１．５°（ｃ０．４)
８）赤外吸収スペクトル：
臭化カリウム（ＫＢｒ）錠剤法で測定した赤外吸収スペクトルは以下に示す極大吸収を示す。
３３８８，２９５４，２９２６，２８５５，１７３６，１６９９，１６３２，１４６６，１３９３，１２６９，１１２２，１０６８，１０１５ｃｍ−１
９）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：
重メタノール中、内部標準に重メタノール（４．７８ｐｐｍ）を用いて測定した、１Ｈ−核磁気共鳴スペクトルは、以下に示すとおりである。
０．７４（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），０．８７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．０−１．２（１４Ｈ，ｍ），１．３７（１Ｈ，ｍ），１．４９（２Ｈ，ｍ），２．０−２．３（５Ｈ，ｍ），２．３３（３Ｈ，ｓ），２．５（２Ｈ，ｍ），２．９５（１Ｈ，ｍ），２．９７（３Ｈ，ｓ），３．０２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．０，３．７Ｈｚ），３．１２(１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．７，１３．４），３．２９（１Ｈ，ｍ），３．３０（３Ｈ，ｓ），３．６５（１Ｈ，ｄ，４．７Ｈｚ），３．７８（１Ｈ，ｄ，J＝８．７Ｈｚ），３．９３（１Ｈ，ｄｄ，５．４，７．４Ｈｚ），３．９７（１Ｈ，ｍ)，４．０５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．３，７．４Ｈｚ），４．０７（２Ｈ，ｍ），４．１８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ），４．２７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．３，８．７Ｈｚ），５．１１（１Ｈ，ｍ），５．１３（１Ｈ，ｓ），５．３７（１Ｈ，ｍ），５．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ），５．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）ｐｐｍ
１０）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：
重メタノール中、内部標準に重メタノール（４９．０ｐｐｍ）を用いて測定した、１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトルは、以下に示すとおりである。
２０．１（ｑ），２３．１（ｑ），２３．１（ｑ），２６．３（ｔ），２８．６（ｔ），２８．７（ｄ），２９．２（ｄ），３０．４（ｔ），３０．６（ｔ），３０．７（ｔ），３１．０（ｔ），３５．１（ｔ），３７．８（ｑ），３９．０（ｑ），４０．２（ｔ)，４０．４（ｔ)，４１．６（ｔ)，４１．６（ｔ），４１．８（ｔ）５８．２（ｔ)，５８．７（ｑ)，６４．１(ｄ)，６７．７（ｄ)，７０．７（ｄ)，７１．６（ｄ），７１．９（ｄ)，７３．７（ｄ)，７４．９（ｄ)，７９．２（ｄ)，８０．５（ｄ)，８４．９（ｄ)，８５．７（ｄ)，９２．８（ｄ)，１０２．３（ｄ)，１０９．１（ｄ)，１４３．４（ｄ)，１５２．０（ｓ)，１６６．３（ｓ)，１７１．０（ｓ)，１７２．８（ｓ)，１７３．０（ｓ)，１７３．８（ｓ)，１７６．４（ｓ）ｐｐｍ
【請求項３】
下記の物理化学的性状を有する化合物又はその塩。
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）溶解性：メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶、クロロホルムに不溶
３）分子式：Ｃ４５Ｈ７４Ｎ５Ｏ２１Ｐ
４）分子量：１０５１（ＦＡＢマススペクトル法により測定)
５）高分解能ＦＡＢマススペクトル法により測定した精密質量、[Ｍ−Ｈ]―は次に示す通りである。
実測値：１０５０．４５５０
計算値：１０５０．４５３６
６）紫外部吸収スペクトル：
メタノール中で測定した紫外部吸収スペクトルは、次に示す極大吸収を示す：
２６２ｎｍ（ε７９００)
７）旋光度：
メタノール中で測定した旋光度は、以下に示す値を示す：
[α]Ｄ２９：＋７．０°（ｃ０．８)
８）赤外吸収スペクトル：
臭化カリウム（ＫＢｒ）錠剤法で測定した赤外吸収スペクトルは以下に示す極大吸収を示す。
３３９７，２９２６，２８５４，１７３５，１７００，１４６６，１３８５，１２６８，１１２９，１０７４，９３８ｃｍ−１
９）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：
重メタノール中、内部標準に重メタノール（４．７８ｐｐｍ）を用いて測定した、１Ｈ−核磁気共鳴スペクトルは、以下に示すとおりである。
０．７９（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），０．９２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．０９（２Ｈ，ｍ），１．２−１．３（１６Ｈ，ｍ），１．４３（１Ｈ，ｍ），１．５５（２Ｈ，ｍ），２．１（２Ｈ，ｍ），２．２−２．３（３Ｈ，ｍ），２．３８（３Ｈ，ｓ），２．５５（２Ｈ，ｍ），３．０２（３Ｈ，ｓ），３．０（１Ｈ，ｂｒ．ｍ），３．２（２Ｈ，ｍ），３．３６（３Ｈ，ｓ)，３．４０（１Ｈ，ｍ），３．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ），３．８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ)，３．９７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．９，６．６Ｈｚ），４．１１（２Ｈ，ｍ)，４．１７（２Ｈ，ｍ)，４．３０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．０，８．４Ｈｚ），４．５２（１Ｈ，ｍ)，５．１４（１Ｈ，ｍ)，５．１５（１Ｈ，ｍ），５．４４（１Ｈ，ｍ)，５．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ)，５．７６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ)，７．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ）ｐｐｍ
１０）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：
重メタノール中、内部標準に重メタノール（４９．０ｐｐｍ）を用いて測定した、１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトルは、以下に示すとおりである。
２０．２（ｑ），２３．１（ｑ），２６．３（ｔ），２８．５（ｔ），２８．９（ｄ），２９．２（ｄ），３０．４（ｔ），３０．６(ｔ)，３０．７（ｔ），３０．７（ｔ），３０．８（ｔ），３１．０（ｔ），３５．１（ｔ），３８．０（ｑ），３９．０（ｑ），４０．３（ｔ），４０．４（ｔ），４１．４（ｔ），４１．７（ｔ），４２．３（ｔ），５８．４（ｔ），５９．１（ｑ），６４．０(ｄ），６８．２（ｄ），７０．８（ｄ），７１．９（ｄ），７４．１（ｄ），７４．４（ｄ），７５．１（ｄ），７８．９（ｄ），７９．２（ｄ），８４．９（ｄ），８５．３（ｄ），９２．０（ｄ），１０２．７（ｄ），１０９．１（ｄ），１４３．０（ｄ），１５２．１（ｓ），１６６．３（ｓ），１７１．０（ｓ），１７３．０（ｓ），１７３．８（ｓ），１７７．１（ｓ）ｐｐｍ
【請求項４】
ストレプトマイセス属に属する、請求項１乃至３のいずれか１項に記載の化合物の生産菌を培養し、その培養物より請求項１乃至３のいずれか１項に記載の化合物を採取することを特徴とする、請求項１乃至３のいずれか１項に記載の化合物の製造方法。
【請求項５】
該生産菌がストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＳＡＮＫ６０７０４（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６２９）である、請求項４に記載の製造方法。
【請求項６】
ストレプトマイセス属に属し、請求項１乃至３のいずれか１項に記載の化合物を生産することを特徴とする微生物。
【請求項７】
ストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＳＡＮＫ６０７０４（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６２９）。
【請求項８】
一般式（Ｉ）においてＸがリン酸基である請求項１に記載の化合物又はその塩を脱リン酸化反応に供することを特徴とする、一般式（Ｉ）においてＸがリン酸基である請求項１に記載の化合物又はその塩を出発物質として一般式（Ｉ）においてＸが水酸基であり、Ｒが出発物質と同一である請求項１に記載の化合物又はその塩を製造する方法。
【請求項９】
脱リン酸化酵素を用いることを特徴とする請求項８に記載の製造方法
【請求項１０】
請求項１乃至３のいずれか１項に記載の化合物又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬。
【請求項１１】
抗菌剤である、請求項１０に記載の医薬。
【請求項１】
下記、一般式(Ｉ)：
【化１】
（Ｉ）
［式中、Ｘは水酸基又はリン酸基を表し、Ｘが水酸基である場合、Ｒは−（ＣＨ２）８ＣＨ（ＣＨ３）２ ]又は −（ＣＨ２）１０ＣＨ（ＣＨ３）２を表し、Ｘがリン酸基である場合Ｒは−（ＣＨ２）１０ＣＨ（ＣＨ３）２を表す］
で表される化合物又はその塩。
【請求項２】
下記の物理化学的性状を有する化合物又はその塩。
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）溶解性：メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶、クロロホルムに不溶
３）分子式：Ｃ４３Ｈ６９Ｎ５Ｏ１８
４）分子量：９４３（ＦＡＢマススペクトル法により測定)
５）高分解能ＦＡＢマススペクトル法により測定した精密質量、[Ｍ＋Ｈ]＋は次に示す通りである。
実測値：９４４．４６７１
計算値：９４４．４７１６
６）紫外部吸収スペクトル：
ジメチルスルホキシド中で測定した紫外部吸収スペクトルは、次に示す極大吸収を示す：
２６３ｎｍ（ε８３００)
７）旋光度：
ジメチルスルホキシド中で測定した旋光度は、以下に示す値を示す：
[α]Ｄ２９：＋１．５°（ｃ０．４)
８）赤外吸収スペクトル：
臭化カリウム（ＫＢｒ）錠剤法で測定した赤外吸収スペクトルは以下に示す極大吸収を示す。
３３８８，２９５４，２９２６，２８５５，１７３６，１６９９，１６３２，１４６６，１３９３，１２６９，１１２２，１０６８，１０１５ｃｍ−１
９）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：
重メタノール中、内部標準に重メタノール（４．７８ｐｐｍ）を用いて測定した、１Ｈ−核磁気共鳴スペクトルは、以下に示すとおりである。
０．７４（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），０．８７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．０−１．２（１４Ｈ，ｍ），１．３７（１Ｈ，ｍ），１．４９（２Ｈ，ｍ），２．０−２．３（５Ｈ，ｍ），２．３３（３Ｈ，ｓ），２．５（２Ｈ，ｍ），２．９５（１Ｈ，ｍ），２．９７（３Ｈ，ｓ），３．０２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．０，３．７Ｈｚ），３．１２(１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．７，１３．４），３．２９（１Ｈ，ｍ），３．３０（３Ｈ，ｓ），３．６５（１Ｈ，ｄ，４．７Ｈｚ），３．７８（１Ｈ，ｄ，J＝８．７Ｈｚ），３．９３（１Ｈ，ｄｄ，５．４，７．４Ｈｚ），３．９７（１Ｈ，ｍ)，４．０５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．３，７．４Ｈｚ），４．０７（２Ｈ，ｍ），４．１８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ），４．２７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．３，８．７Ｈｚ），５．１１（１Ｈ，ｍ），５．１３（１Ｈ，ｓ），５．３７（１Ｈ，ｍ），５．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ），５．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）ｐｐｍ
１０）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：
重メタノール中、内部標準に重メタノール（４９．０ｐｐｍ）を用いて測定した、１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトルは、以下に示すとおりである。
２０．１（ｑ），２３．１（ｑ），２３．１（ｑ），２６．３（ｔ），２８．６（ｔ），２８．７（ｄ），２９．２（ｄ），３０．４（ｔ），３０．６（ｔ），３０．７（ｔ），３１．０（ｔ），３５．１（ｔ），３７．８（ｑ），３９．０（ｑ），４０．２（ｔ)，４０．４（ｔ)，４１．６（ｔ)，４１．６（ｔ），４１．８（ｔ）５８．２（ｔ)，５８．７（ｑ)，６４．１(ｄ)，６７．７（ｄ)，７０．７（ｄ)，７１．６（ｄ），７１．９（ｄ)，７３．７（ｄ)，７４．９（ｄ)，７９．２（ｄ)，８０．５（ｄ)，８４．９（ｄ)，８５．７（ｄ)，９２．８（ｄ)，１０２．３（ｄ)，１０９．１（ｄ)，１４３．４（ｄ)，１５２．０（ｓ)，１６６．３（ｓ)，１７１．０（ｓ)，１７２．８（ｓ)，１７３．０（ｓ)，１７３．８（ｓ)，１７６．４（ｓ）ｐｐｍ
【請求項３】
下記の物理化学的性状を有する化合物又はその塩。
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）溶解性：メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶、クロロホルムに不溶
３）分子式：Ｃ４５Ｈ７４Ｎ５Ｏ２１Ｐ
４）分子量：１０５１（ＦＡＢマススペクトル法により測定)
５）高分解能ＦＡＢマススペクトル法により測定した精密質量、[Ｍ−Ｈ]―は次に示す通りである。
実測値：１０５０．４５５０
計算値：１０５０．４５３６
６）紫外部吸収スペクトル：
メタノール中で測定した紫外部吸収スペクトルは、次に示す極大吸収を示す：
２６２ｎｍ（ε７９００)
７）旋光度：
メタノール中で測定した旋光度は、以下に示す値を示す：
[α]Ｄ２９：＋７．０°（ｃ０．８)
８）赤外吸収スペクトル：
臭化カリウム（ＫＢｒ）錠剤法で測定した赤外吸収スペクトルは以下に示す極大吸収を示す。
３３９７，２９２６，２８５４，１７３５，１７００，１４６６，１３８５，１２６８，１１２９，１０７４，９３８ｃｍ−１
９）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：
重メタノール中、内部標準に重メタノール（４．７８ｐｐｍ）を用いて測定した、１Ｈ−核磁気共鳴スペクトルは、以下に示すとおりである。
０．７９（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），０．９２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．０９（２Ｈ，ｍ），１．２−１．３（１６Ｈ，ｍ），１．４３（１Ｈ，ｍ），１．５５（２Ｈ，ｍ），２．１（２Ｈ，ｍ），２．２−２．３（３Ｈ，ｍ），２．３８（３Ｈ，ｓ），２．５５（２Ｈ，ｍ），３．０２（３Ｈ，ｓ），３．０（１Ｈ，ｂｒ．ｍ），３．２（２Ｈ，ｍ），３．３６（３Ｈ，ｓ)，３．４０（１Ｈ，ｍ），３．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ），３．８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ)，３．９７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．９，６．６Ｈｚ），４．１１（２Ｈ，ｍ)，４．１７（２Ｈ，ｍ)，４．３０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．０，８．４Ｈｚ），４．５２（１Ｈ，ｍ)，５．１４（１Ｈ，ｍ)，５．１５（１Ｈ，ｍ），５．４４（１Ｈ，ｍ)，５．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ)，５．７６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ)，７．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ）ｐｐｍ
１０）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：
重メタノール中、内部標準に重メタノール（４９．０ｐｐｍ）を用いて測定した、１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトルは、以下に示すとおりである。
２０．２（ｑ），２３．１（ｑ），２６．３（ｔ），２８．５（ｔ），２８．９（ｄ），２９．２（ｄ），３０．４（ｔ），３０．６(ｔ)，３０．７（ｔ），３０．７（ｔ），３０．８（ｔ），３１．０（ｔ），３５．１（ｔ），３８．０（ｑ），３９．０（ｑ），４０．３（ｔ），４０．４（ｔ），４１．４（ｔ），４１．７（ｔ），４２．３（ｔ），５８．４（ｔ），５９．１（ｑ），６４．０(ｄ），６８．２（ｄ），７０．８（ｄ），７１．９（ｄ），７４．１（ｄ），７４．４（ｄ），７５．１（ｄ），７８．９（ｄ），７９．２（ｄ），８４．９（ｄ），８５．３（ｄ），９２．０（ｄ），１０２．７（ｄ），１０９．１（ｄ），１４３．０（ｄ），１５２．１（ｓ），１６６．３（ｓ），１７１．０（ｓ），１７３．０（ｓ），１７３．８（ｓ），１７７．１（ｓ）ｐｐｍ
【請求項４】
ストレプトマイセス属に属する、請求項１乃至３のいずれか１項に記載の化合物の生産菌を培養し、その培養物より請求項１乃至３のいずれか１項に記載の化合物を採取することを特徴とする、請求項１乃至３のいずれか１項に記載の化合物の製造方法。
【請求項５】
該生産菌がストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＳＡＮＫ６０７０４（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６２９）である、請求項４に記載の製造方法。
【請求項６】
ストレプトマイセス属に属し、請求項１乃至３のいずれか１項に記載の化合物を生産することを特徴とする微生物。
【請求項７】
ストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＳＡＮＫ６０７０４（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６２９）。
【請求項８】
一般式（Ｉ）においてＸがリン酸基である請求項１に記載の化合物又はその塩を脱リン酸化反応に供することを特徴とする、一般式（Ｉ）においてＸがリン酸基である請求項１に記載の化合物又はその塩を出発物質として一般式（Ｉ）においてＸが水酸基であり、Ｒが出発物質と同一である請求項１に記載の化合物又はその塩を製造する方法。
【請求項９】
脱リン酸化酵素を用いることを特徴とする請求項８に記載の製造方法
【請求項１０】
請求項１乃至３のいずれか１項に記載の化合物又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬。
【請求項１１】
抗菌剤である、請求項１０に記載の医薬。
【公開番号】特開２００８−７４７１０（Ｐ２００８−７４７１０Ａ）
【公開日】平成２０年４月３日（２００８．４．３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−２５２２３７（Ｐ２００６−２５２２３７）
【出願日】平成１８年９月１９日（２００６．９．１９）
【出願人】（０００００１８５６）三共株式会社 (98)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年４月３日（２００８．４．３）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年９月１９日（２００６．９．１９）
【出願人】（０００００１８５６）三共株式会社 (98)
【Ｆターム（参考）】
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