生薬試料中の残留農薬の精製方法
【課題】ダイオウ、シャクヤク、ゴボウシ、リュウタン等の生薬試料においても高い回収率で残留農薬を精製することができる方法を提供する。
【解決手段】次の工程：
（ｉ）生薬試料をアセトニトリル水溶液で抽出する工程、
（ii）その後、水溶性の夾雑物を除く工程
（iii）その後、酢酸エチルを加える工程、及び
（iv）脂溶性の夾雑物を除く工程
を含む生薬試料中の残留農薬の精製方法。
【解決手段】次の工程：
（ｉ）生薬試料をアセトニトリル水溶液で抽出する工程、
（ii）その後、水溶性の夾雑物を除く工程
（iii）その後、酢酸エチルを加える工程、及び
（iv）脂溶性の夾雑物を除く工程
を含む生薬試料中の残留農薬の精製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生薬試料中の残留農薬を精製する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来より、農産物の生産性を高めるために種々の農薬が使用されてきた。近年、農産物中の残留物質への関心が高まり、残留物質の測定が重視されてきている。
【０００３】
センナ、ニンジン、サンシュユ等の生薬については、生薬試料の抽出物から液−液分配により水溶性の夾雑物を除いた後、有機溶媒を留去して得られた残留物をヘキサンに溶解して、カラムに負荷することにより残留農薬を精製することが報告されている（非特許文献１及び２）。
【０００４】
しかしながら、本発明者らがこの方法をダイオウ、シャクヤク、ゴボウシ、リュウタン等の生薬に適用したところ、農薬の回収率が低下し、十分な結果を得ることができなかった。
【０００５】
【非特許文献１】東京健安研セ年報(Ann. Rep. Tokyo Metr. Inst. P.H.)，５５，４３−４７（２００４）
【非特許文献２】東京健安研セ年報(Ann. Rep. Tokyo Metr. Inst. P.H.)，５５，４９−５３（２００４）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、ダイオウ、シャクヤク、ゴボウシ、リュウタン等の生薬試料においても高い回収率で残留農薬を精製することができる方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の要旨は以下のとおりである。
（１）次の工程：
（ｉ）生薬試料をアセトニトリル水溶液で抽出する工程、
（ii）その後、水溶性の夾雑物を除く工程、
（iii）その後、酢酸エチルを加える工程、及び
（iv）その後、脂溶性の夾雑物を除く工程
を含む生薬試料中の残留農薬の精製方法。
（２）生薬試料が生薬又は漢方製剤である前記（１）に記載の方法。
（３）生薬試料がダイオウ、シャクヤク、ゴボウシ及びリュウタンから選ばれる前記（１）に記載の方法。
（４）残留農薬がピレスロイド系農薬である前記（１）〜（３）のいずれかに記載の方法。
（５）工程（ii）において、逆相カラムクロマトグラフィーに付することにより水溶性の夾雑物を除く前記（１）〜（４）のいずれかに記載の方法。
（６）工程（iv）において、イオン交換クロマトグラフィー及び／又は順相クロマトグラフィーに付することにより脂溶性の夾雑物を除く前記（１）〜（５）のいずれかに記載の方法。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、ダイオウ、シャクヤク、ゴボウシ、リュウタン等の生薬試料においても高い回収率で残留農薬を精製することができる。従って、本発明方法は生薬試料中の残留農薬の分析方法における前処理方法として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明の対象となる生薬としては、例えばカンキョウ、アキョウ、イレイセン、インチンコウ、ウイキョウ、エンゴサク、オウギ、オウゴン、オウバク、オウレン、オンジ、ガイヨウ、カシュウ、カッコン、カッセキ、カロコン、カロニン、カンゾウ、キキョウ、キクカ、キジツ、キッソウコン、キョウカツ、キョウニン、クジン、ケイガイ、ケイヒ、コウカ、コウジン、コウブシ、コウベイ、コウボク、ゴシツ、ゴシュユ、ゴボウシ、ゴマ、ゴミシ、サイコ、サイシン、サンザシ、サンシシ、サンシュユ、サンショウ、サンソウニン、サンヤク、カンジオウ、ジコッピ、シコン、シツリシ、シャクヤク、シャゼンシ、ジュクジオウ、シュクシャ、ショウキョウ、ショウバク、ショウマ、シンイ、セッコウ、センキュウ、ゼンコ、センコツ、センタイ、センナ、ソウジュツ、ソウハクヒ、ソボク、ソヨウ、ダイオウ、タイソウ、タクシャ、チクジョ、チクセツニンジン、チモ、チャヨウ、チョウジ、チョウトウコウ、チョレイ、チンピ、テンナンショウ、テンマ、テンモンドウ、トウガシ、トウキ、トウニン、トウヒ、トコン、トチュウ、ドッカツ、ニンジン、ニンドウ、バイモ、バクガ、バクモンドウ、ハッカ、ハマボウフウ、ハンゲ、ビャクゴウ、ビャクシ、ビャクジュツ、ビワヨウ、ビンロウジ、ブクリョウ、ブシ、フンマツアメ、ボウイ、ボウフウ、ボクソク、ボタンピ、ボレイ、マオウ、マシニン、モクツウ、モッコウ、ヨクイニン、リュウガンニク、リュウコツ、リュウタン、リョウキョウ、レンギョウ、レンニク、ワキョウカツ、好ましくはカンキョウ、カンゾウ、ケイヒ、ゴボウシ、サンシシ、チンピ、ビワヨウ、ニンジン、トウニン、チョレイ、ソヨウ、ダイオウ、タイソウ、センナ、シャクヤク、サンショウ、サンシュユ、コウジン、ボタンピ、オンジ、オウギ、更に好ましくはダイオウ、シャクヤク、ゴボウシ、リュウタンが挙げられる。
【００１０】
本発明において精製対象となる農薬としては、特に制限はなく、例えば、テフルトリン、シネリンＩ、シネリンII、シハロトリン、シペルメトリンＩ、シペルメトリンII、シペルメトリンIII、シペルメトリンIV、ジャスモリンＩ、ジャスモリンII、ピレトリンＩ、ピレトリンII、フルシトリネート、フルバリネート、デルタメトリン、アクリナトリン、ペルメトリンＩ、ペルメトリンII、シフルトリン、シラフルオフェン、フェンバレレートＩ、フェンバレレートII、エスフェンバレレート、フィプロニル、ビフェントリン、フェンプロパトリン、トラロメトリン等のピレスロイド系農薬；ジクロラン、ブロモブチド、クロメトキシニル、スウェップ、ジクロフルアニド、クロルフェンソン、ビフェノックス、シフルトリン、フルバリネート、テフルトリン、プロピザミド、ジコホール、ビナパクリル、クロルベンジレート、キントゼン、エンドスファン、プロシミドン、クロルプロピレート、ブロモプロピレート、テトラジホン、ハルフェンプロックス、フルオロイミド、クロロフェネトール、ホルペット、エンドリン等の有機塩素系農薬；メトラクロール、トリアジメノール、キノメチオネート、パクロブトラゾール、プレチラクロル、フルシラゾール、プロピコナゾール、レナシル、テニルクロール、アセタミプリド、フルトラニル、メフェナセット、フェナリモル、ビテルタノール、ピリダベン、ピリミジフェン、ＥＰＴＣ、エスプロカルブ、ペンジメタリン、ミクロブタニル、トリシクラゾール、シプロコナゾール、メプロニル、テブコナゾール、イプロジオン、テブフェンピラド、ピリプロキシフェン、ジフェノコナゾール、イミベンコナゾール、トリフルラリン、メトリブジン、トリクラミド、ヘキサコナゾール、エトキサゾール、シハロホップブチル、カフェンストロール等の含窒素系農薬；ピペロニル・ブトキシド等のベンゾジオキソール系農薬；アラクロール等のアセトアニリド系農薬；ブチレート、イソプロカルブ、ジエトフェンカルブ、メチオカルブ、クロロプロファム、ピリミカーブ、チオベンカルブ、ピリブチカルブ、ベンダイオカルブ、エチオフェンカルブ、フェノブカルブ、カルバリル等のカーバメート系農薬；ジメチピン、ベンフレセート等の有機硫黄系農薬等が挙げられる。
【００１１】
本発明における抽出工程においては、生薬の特性（水分含量が１０％以下である）の点から、抽出溶媒としてアセトニトリル水溶液を用いる。アセトニトリル水溶液におけるアセトニトリルと水との割合は、容量比で、好ましくは１：１〜９５：５、更に好ましくは７：３〜９：１、最も好ましくは４：１である。アセトニトリル水溶液の使用量は、試料１ｇ当たり、通常８〜１２ｍＬ、好ましくは９〜１１ｍＬである。抽出に際して、試料及び溶媒の混合順序には制限はなく、予めアセトニトリル水溶液を調製した後、試料と混合してもよく、また試料と、アセトニトリル及び水の一方を混合した後、他方の溶媒を加えてもよい。
【００１２】
試料の使用量は、特に制限はないが、通常１〜２０ｇ、好ましくは１〜４ｇである。
次いで、試料と溶媒との混合物を十分に振盪する。その後、前記混合物を遠心分離し、上清をとる。好ましくは、残留物に前記アセトニトリル水溶液を添加し（残留物１ｇ当たり、通常１０〜３０ｍＬ、好ましくは１５〜２５ｍＬ）、振盪後、遠心分離して上清をとる操作を１回以上繰り返し、得られた上清を合わせる。
【００１３】
好ましくは、生薬の水不溶性の固形分を析出させ、かつ抽出上清の粘性を低下させるため、得られた上清に水を加える。ここで加える水の添加量は、試料１ｇ当たり、通常６〜２０ｍＬ、好ましく９〜１５ｍＬである。
【００１４】
本発明においては、農薬の回収率を向上させる点から、前記のようにして得られた抽出液のｐＨを３．５〜４．５に調整することが好ましい。前記ｐＨは、更に好ましくは３．８〜４．２、最も好ましくは４．０である。ｐＨ調整するために用いる溶液としては特に制限はないが、通常リン酸水溶液、酢酸水溶液、ギ酸水溶液、パラトルエンスルホン酸水溶液等の酸性水溶液、炭酸水素ナトリウム水溶液、炭酸ナトリウム水溶液、水酸化ナトリウム水溶液等のアルカリ性水溶液等を単独で又は組み合わせて用いる。
【００１５】
本発明においては、前記のようにしてｐＨ調整された溶液をカラムクロマトグラフィーに付す。
【００１６】
本発明においては、水溶性の夾雑物を除くが、その方法は特に制限されず、例えば、逆相クロマトグラフィー、液−液分配等、好ましくは逆相クロマトグラフィーが挙げられる。逆相クロマトグラフィーとしては、例えばＣ１８（ＯＤＳ）カラムクロマトグラフィー、ポリマー系カラムクロマトグラフィー、ＧＣＢ（グラファイトカーボンブラック）クロマトグラフィーが挙げられる。
【００１７】
本発明においては、その後、酢酸エチルを加えるが、酢酸エチルの添加量は特に制限されず、試料が均一になる最低限の量が好ましい。また、その後の工程の操作性から、更にヘキサンを加えることが好ましい。ヘキサンの添加量は特に制限されないが、酢酸エチルと同量以上で不溶物が析出しない量が好ましい。試料１ｇあたり、酢酸エチル１ｍＬ及びヘキサン２ｍＬとするのが特に好ましい。
【００１８】
本発明においては、その後、脂溶性の夾雑物を除くが、その方法は特に制限されず、例えば、イオン交換クロマトグラフィー、順相クロマトグラフィー、液−液分配等、好ましくはイオン交換クロマトグラフィー、順相クロマトグラフィーまたはそれらの組み合わせが挙げられる。イオン交換クロマトグラフィーとしては、例えばＰＳＡカラムクロマトグラフィー、ＳＡＸ／ＰＳＡカラムクロマトグラフィーが挙げられ、順相クロマトグラフィーとしては、例えばフロリジルカラムクロマトグラフィー、ＧＣＢカラムクロマトグラフィーが挙げられる。
【００１９】
本発明に従えば、ダイオウ、シャクヤク、ゴボウシ、リュウタン等の生薬試料においても高い回収率で残留農薬が精製されるので、これを、例えばＧＣ／ＭＳＤ（質量分析計付きガスクロマトグラフ装置）により分析することにより、生薬中の残留農薬を高精度で分析することができる。
【実施例】
【００２０】
以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明の範囲は以下の実施例に限定されるものではない。
【００２１】
（実施例１〜４）
１．試料秤量
５０ｍＬのスリ栓付き遠沈管にダイオウ（実施例１）、シャクヤク（実施例２）、ゴボウシ（実施例３）又はリュウタン（実施例４）の粉末２．０ｇ（１．９５〜２．０４ｇ）を精密に量り取った。
【００２２】
２．抽出
２−１．遠沈管にアセトニトリル／水混液（容量比４：１）２０ｍＬを加えた。
２−２．遠沈管に栓をして、下記条件にて振盪した。
振盪時間：１０分、振盪速度：２００回／分
２−３．振盪後、下記条件にて遠心分離した。
回転速度：３０００ｒｐｍ、遠心時間：５分
２−４．綿栓をした漏斗を１００ｍＬ三角フラスコの上に載せ、アセトニトリル／水混液（容量比４：１）約２ｍＬで洗浄した。
２−５．綿栓をした漏斗を２００ｍＬ三角フラスコの上に載せ、遠沈管を傾け、上清を漏斗に移した。
２−６．遠沈管中の試料についてもう一度２−１〜３の操作を行った。２−５の漏斗に移し、先の抽出液と合わせた。
【００２３】
３．抽出液のｐＨ調整
３−１．２−６の漏斗を水１０ｍＬで洗い込む。漏斗をはずした後、抽出液に水４０ｍＬを加え、よく混和した。
３−２． 前記抽出液に、１０％リン酸水溶液、又は飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて、ｐＨを４に調整した。
【００２４】
４．Ｃ１８（５ｇ）−ＰＳＡ−ＧＣＢカラム処理
（Ｃ１８カートリッジ下準備）
４−１．Ｃ１８（５ｇ）カートリッジに注射針を取り付け、組立式漏斗台に載せ、下部にビーカーを置いた。カートリッジ上部にアセトニトリル２０ｍＬを加えた。カートリッジ上部の溶媒がなくなったら、水２０ｍＬ、水／アセトニトリル混液（容量比３：２）２０ｍＬを順次加えた。
【００２５】
（農薬の吸着）
４−２．３−２の調整液をＣ１８（５ｇ）カートリッジに加えた。アダプターをつけたリザーバーカートリッジをＣ１８（５ｇ）カートリッジに取り付け、リザーバーカートリッジに３−２の調整液約８０ｍＬを加えた。Ｃ１８（５ｇ）カートリッジ上部の調整液がなくなったら、アダプターをつけたリザーバーカートリッジを外し、シリンジを用いてＣ１８（５ｇ）カートリッジ内の溶媒を押し出した。通導した液は廃棄した。水／アセトニトリル混液（容量比３：２）２０ｍＬで溶出した。
【００２６】
（ＰＳＡカートリッジ下準備）
４−３．ＰＳＡカートリッジに注射針を取り付け、組立式漏斗台に載せ、下部にビーカーを置いた。カートリッジ上部にアセトニトリル１０ｍＬを加えた。通導した液は廃棄した。
【００２７】
（ＧＣＢカートリッジ下準備）
４−４．ＧＣＢカートリッジに注射針を取り付け、組立式漏斗台に載せ、下部にビーカーを置いた。カートリッジ上部にヘキサン１０ｍＬ、アセトン１０ｍＬ、アセトニトリル１０ｍＬを順次加えた。通導した液は廃棄した。
４−５．１００ｍＬ三角フラスコに無水硫酸ナトリウム大さじ３杯を加えた。
【００２８】
（吸着させた農薬の溶出）
４−６．４−２のＣ１８（５ｇ）カートリッジにアダプターをつけたリザーバーカートリッジを取り付けた。Ｃ１８（５ｇ）カートリッジの下に４−３のＰＳＡカートリッジを、ＰＳＡカートリッジの下に４−４のＧＣＢカートリッジを置いた。ＧＣＢカートリッジの下に１００ｍＬ三角フラスコを置いた。
４−７．アセトニトリル５０ｍＬを量り取り、Ｃ１８（５ｇ）カートリッジ上部のリザーバーカートリッジに加えた。
【００２９】
４−８．Ｃ１８（５ｇ）カートリッジ上部の溶媒がなくなったら、アダプターをつけたリザーバーカートリッジを外し、シリンジを用いてＣ１８（５ｇ）カートリッジ内の溶媒を押し出した。
４−９．ＰＳＡカートリッジ上部の溶媒がなくなったら、シリンジを用いてカートリッジ内の溶媒を押し出し、カートリッジを取り外した。
４−１０．ＧＣＢカートリッジ上部の溶媒がなくなったら、ヘキサン飽和アセトニトリル２０ｍＬをＧＣＢカートリッジ上部に加えた。カートリッジ上部に溶媒がなくなったら、シリンジを用いてカートリッジ内の溶媒を押し出し、そのまま５分間放置した。
【００３０】
５．脱水剤分離
５−１．ひだ折り濾紙を載せた漏斗を１００ｍＬ三角フラスコの上に載せ、アセトニトリル約５ｍＬで洗浄した。
５−２．ひだ折り濾紙を載せた漏斗を２００ｍＬナス型フラスコの上に載せた。
５−３．４−１０の溶出液をひだ折り濾紙を載せた漏斗に移した。４−１０の１００ｍＬ三角フラスコにアセトニトリル約５ｍＬを加え洗浄した。同操作を更に２回行った。
【００３１】
６．溶出液濃縮
６−１．５−３の溶出液を、ロータリーエバポレーターを用い乾固まで減圧濃縮した。
６−２．６−１の残渣を酢酸エチル２ｍＬで溶解し、ヘキサン４ｍＬを加え、超音波洗浄器を用いて均一に分散させた。
【００３２】
７．ＳＡＸ／ＰＳＡ−フロリジル（１ｇ）カラム処理
７−１．ＳＡＸ／ＰＳＡカートリッジに注射針を取り付け、組立式漏斗台に載せ、下部にビーカーを置いた。カートリッジ上部にヘキサン１０ｍＬを加えた。カートリッジ上部の溶媒がなくなったら、酢酸エチル１０ｍＬ、ヘキサン１０ｍＬを順次加えた。通導した液は廃棄した。
７−２．フロリジル（１ｇ）カートリッジに注射針を取り付け、組立式漏斗台に載せ、下部にビーカーを置いた。カートリッジ上部にヘキサン１０ｍＬを加えた。カートリッジ上部の溶媒がなくなったら、酢酸エチル１０ｍＬ、ヘキサン１０ｍＬを順次加えた。通導した液は廃棄した。
７−３．７−１のＳＡＸ／ＰＳＡカートリッジの下に７−２のフロリジル（１ｇ）カートリッジを、フロリジル（１ｇ）カートリッジの下に１００ｍＬナス型フラスコを置いた。
７−４．６−２の溶液をパスツールピペットを用いてＳＡＸ／ＰＳＡカートリッジ上部に加えた。
【００３３】
７−５．７−４の２００ｍＬナス型フラスコにヘキサン／酢酸エチル混液（容量比３：１）２ｍＬを加えた。超音波洗浄器を用いて均一に分散させ、ＳＡＸ／ＰＳＡカートリッジ上部に加えた。同操作をもう一度行った。
７−６．フロリジル（１ｇ）カートリッジ上部の溶媒がなくなったら、ＳＡＸ／ＰＳＡカートリッジ上部にヘキサン／酢酸エチル混液（容量比３：１）３０ｍＬを加えた。
７−７．ＳＡＸ／ＰＳＡカートリッジ上部の溶媒がなくなったら、シリンジを用いてカートリッジ内の溶媒を押し出し、カートリッジを取り外した。
７−８．フロリジル（１ｇ）カートリッジ上部の溶媒がなくなったら、シリンジを用いてカートリッジ内の溶媒を押し出した。
【００３４】
８．溶出液濃縮
８−１．７−８の溶出液を、ロータリーエバポレーターを用い４０℃以下で２ｍＬまで減圧濃縮した。
８−２．８−１の濃縮液にアセトン５ｍＬを加え、約１ｍＬまで減圧濃縮した。同操作をもう一度行った。
【００３５】
９．分析試料調製
９−１．８−２の濃縮液を２ｍＬメスフラスコに移し、０．０１％ポリエチレングリコールアセトンを用いて２ｍＬに定容した。
９−２．パスツールピペットを用い、メスフラスコ内をよく撹拌した。
９−３．バイアル瓶に試料溶液を約１ｍＬ入れ、キャップをセットした。
９−４．クリンパーを用いて、キャップを閉じた。
【００３６】
１０．ＧＣ／ＭＳＤ測定
以下の条件にしたがって、ＧＣ／ＭＳＤによる分析を行った。
検出器：ＭＳＤ
カラム：ＤＢ−１ＭＳ 長さ１５ｍ，内径０．２５ｍｍ，膜厚０．２５μｍ
カラム温度：100℃(2min hold) - (20℃/min) - 194℃ - (5℃/min) -220℃- (15℃/min) - 300℃(5.77min hold)
注入口温度：２５０℃
インターフェース：３００℃
注入量：２．０μＬ
注入方法：パルスドスプリットレス
パルス圧：２０．０ｐｓｉ
パルス時間：１．００ｍｉｎ
キャリアガス：ヘリウム
平均線速度：６３ｃｍ／ｓｅｃ
分析結果を表１に示す。
【００３７】
（判定基準）
添加回収率が７０〜１２０％を示すものを適用可能と判断した。前記範囲外の回収率には取り消し線を付した。
【００３８】
（比較例１〜４）
実施例１〜４における１．試料秤量から５．脱水剤分離と同様の操作を繰り返した後、以下のように処理した。
６．溶出液濃縮
６−１．５−３の溶出液を、ロータリーエバポレーターを用い乾固まで減圧濃縮した。
６−２．６−１の残渣をヘキサン５ｍＬで溶解し、ロータリーエバポレーターを用い乾固まで減圧濃縮した。
６−３．６−２の残渣をヘキサン２ｍＬで溶解した。
【００３９】
７．ＳＡＸ／ＰＳＡ−フロリジル（１ｇ）カラム処理
７−１．ＳＡＸ／ＰＳＡカートリッジに注射針を取り付け、組立式漏斗台に載せ、下部にビーカーを置いた。カートリッジ上部にヘキサン１０ｍＬを加えた。カートリッジ上部の溶媒がなくなったら、酢酸エチル１０ｍＬ、ヘキサン１０ｍＬを順次加えた。通導した液は廃棄した。
７−２．フロリジル（１ｇ）カートリッジに注射針を取り付け、組立式漏斗台に載せ、下部にビーカーを置いた。カートリッジ上部にヘキサン１０ｍＬを加えた。カートリッジ上部の溶媒がなくなったら、酢酸エチル１０ｍＬ、ヘキサン１０ｍＬを順次加えた。通導した液は廃棄した。
【００４０】
７−３．７−１のＳＡＸ／ＰＳＡカートリッジの下に７−２のフロリジル（１ｇ）カートリッジを、フロリジル（１ｇ）カートリッジの下にビーカーを置いた。
７−４．６−３の溶液にヘキサン４ｍＬを加え、超音波洗浄器を用いて均一に分散させた。パスツールピペットを用いてＳＡＸ／ＰＳＡカートリッジ上部に加えた。
７−５．７−４の２００ｍＬナス型フラスコにヘキサン４ｍＬを加えた。超音波洗浄器を用いて均一に分散させ、ＳＡＸ／ＰＳＡカートリッジ上部に加えた。同操作をもう一度行った。通導した液は廃棄した。
【００４１】
７−６．フロリジル（１ｇ）カートリッジ上部の溶媒がなくなったら、フロリジル（１ｇ）カートリッジ下部に１００ｍＬナス型フラスコを置いた。ＳＡＸ／ＰＳＡカートリッジ上部にヘキサン／酢酸エチル混液（容量比３：１）３０ｍＬを加えた。
７−７．ＳＡＸ／ＰＳＡカートリッジ上部の溶媒がなくなったら、シリンジを用いてカートリッジ内の溶媒を押し出し、カートリッジを取り外した。
７−８．フロリジル（１ｇ）カートリッジ上部の溶媒がなくなったら、シリンジを用いてカートリッジ内の溶媒を押し出した。
【００４２】
以下、実施例１〜４における８．溶出液濃縮から５．脱水剤分離と同様の操作を繰り返した。
分析結果を表１に示す。
【００４３】
【表１】
【００４４】
表１から、本発明によれば、ダイオウ、シャクヤク、ゴボウシ、リュウタン等の生薬試料においても高い回収率で残留農薬を精製できることがわかる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生薬試料中の残留農薬を精製する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来より、農産物の生産性を高めるために種々の農薬が使用されてきた。近年、農産物中の残留物質への関心が高まり、残留物質の測定が重視されてきている。
【０００３】
センナ、ニンジン、サンシュユ等の生薬については、生薬試料の抽出物から液−液分配により水溶性の夾雑物を除いた後、有機溶媒を留去して得られた残留物をヘキサンに溶解して、カラムに負荷することにより残留農薬を精製することが報告されている（非特許文献１及び２）。
【０００４】
しかしながら、本発明者らがこの方法をダイオウ、シャクヤク、ゴボウシ、リュウタン等の生薬に適用したところ、農薬の回収率が低下し、十分な結果を得ることができなかった。
【０００５】
【非特許文献１】東京健安研セ年報(Ann. Rep. Tokyo Metr. Inst. P.H.)，５５，４３−４７（２００４）
【非特許文献２】東京健安研セ年報(Ann. Rep. Tokyo Metr. Inst. P.H.)，５５，４９−５３（２００４）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、ダイオウ、シャクヤク、ゴボウシ、リュウタン等の生薬試料においても高い回収率で残留農薬を精製することができる方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の要旨は以下のとおりである。
（１）次の工程：
（ｉ）生薬試料をアセトニトリル水溶液で抽出する工程、
（ii）その後、水溶性の夾雑物を除く工程、
（iii）その後、酢酸エチルを加える工程、及び
（iv）その後、脂溶性の夾雑物を除く工程
を含む生薬試料中の残留農薬の精製方法。
（２）生薬試料が生薬又は漢方製剤である前記（１）に記載の方法。
（３）生薬試料がダイオウ、シャクヤク、ゴボウシ及びリュウタンから選ばれる前記（１）に記載の方法。
（４）残留農薬がピレスロイド系農薬である前記（１）〜（３）のいずれかに記載の方法。
（５）工程（ii）において、逆相カラムクロマトグラフィーに付することにより水溶性の夾雑物を除く前記（１）〜（４）のいずれかに記載の方法。
（６）工程（iv）において、イオン交換クロマトグラフィー及び／又は順相クロマトグラフィーに付することにより脂溶性の夾雑物を除く前記（１）〜（５）のいずれかに記載の方法。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、ダイオウ、シャクヤク、ゴボウシ、リュウタン等の生薬試料においても高い回収率で残留農薬を精製することができる。従って、本発明方法は生薬試料中の残留農薬の分析方法における前処理方法として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明の対象となる生薬としては、例えばカンキョウ、アキョウ、イレイセン、インチンコウ、ウイキョウ、エンゴサク、オウギ、オウゴン、オウバク、オウレン、オンジ、ガイヨウ、カシュウ、カッコン、カッセキ、カロコン、カロニン、カンゾウ、キキョウ、キクカ、キジツ、キッソウコン、キョウカツ、キョウニン、クジン、ケイガイ、ケイヒ、コウカ、コウジン、コウブシ、コウベイ、コウボク、ゴシツ、ゴシュユ、ゴボウシ、ゴマ、ゴミシ、サイコ、サイシン、サンザシ、サンシシ、サンシュユ、サンショウ、サンソウニン、サンヤク、カンジオウ、ジコッピ、シコン、シツリシ、シャクヤク、シャゼンシ、ジュクジオウ、シュクシャ、ショウキョウ、ショウバク、ショウマ、シンイ、セッコウ、センキュウ、ゼンコ、センコツ、センタイ、センナ、ソウジュツ、ソウハクヒ、ソボク、ソヨウ、ダイオウ、タイソウ、タクシャ、チクジョ、チクセツニンジン、チモ、チャヨウ、チョウジ、チョウトウコウ、チョレイ、チンピ、テンナンショウ、テンマ、テンモンドウ、トウガシ、トウキ、トウニン、トウヒ、トコン、トチュウ、ドッカツ、ニンジン、ニンドウ、バイモ、バクガ、バクモンドウ、ハッカ、ハマボウフウ、ハンゲ、ビャクゴウ、ビャクシ、ビャクジュツ、ビワヨウ、ビンロウジ、ブクリョウ、ブシ、フンマツアメ、ボウイ、ボウフウ、ボクソク、ボタンピ、ボレイ、マオウ、マシニン、モクツウ、モッコウ、ヨクイニン、リュウガンニク、リュウコツ、リュウタン、リョウキョウ、レンギョウ、レンニク、ワキョウカツ、好ましくはカンキョウ、カンゾウ、ケイヒ、ゴボウシ、サンシシ、チンピ、ビワヨウ、ニンジン、トウニン、チョレイ、ソヨウ、ダイオウ、タイソウ、センナ、シャクヤク、サンショウ、サンシュユ、コウジン、ボタンピ、オンジ、オウギ、更に好ましくはダイオウ、シャクヤク、ゴボウシ、リュウタンが挙げられる。
【００１０】
本発明において精製対象となる農薬としては、特に制限はなく、例えば、テフルトリン、シネリンＩ、シネリンII、シハロトリン、シペルメトリンＩ、シペルメトリンII、シペルメトリンIII、シペルメトリンIV、ジャスモリンＩ、ジャスモリンII、ピレトリンＩ、ピレトリンII、フルシトリネート、フルバリネート、デルタメトリン、アクリナトリン、ペルメトリンＩ、ペルメトリンII、シフルトリン、シラフルオフェン、フェンバレレートＩ、フェンバレレートII、エスフェンバレレート、フィプロニル、ビフェントリン、フェンプロパトリン、トラロメトリン等のピレスロイド系農薬；ジクロラン、ブロモブチド、クロメトキシニル、スウェップ、ジクロフルアニド、クロルフェンソン、ビフェノックス、シフルトリン、フルバリネート、テフルトリン、プロピザミド、ジコホール、ビナパクリル、クロルベンジレート、キントゼン、エンドスファン、プロシミドン、クロルプロピレート、ブロモプロピレート、テトラジホン、ハルフェンプロックス、フルオロイミド、クロロフェネトール、ホルペット、エンドリン等の有機塩素系農薬；メトラクロール、トリアジメノール、キノメチオネート、パクロブトラゾール、プレチラクロル、フルシラゾール、プロピコナゾール、レナシル、テニルクロール、アセタミプリド、フルトラニル、メフェナセット、フェナリモル、ビテルタノール、ピリダベン、ピリミジフェン、ＥＰＴＣ、エスプロカルブ、ペンジメタリン、ミクロブタニル、トリシクラゾール、シプロコナゾール、メプロニル、テブコナゾール、イプロジオン、テブフェンピラド、ピリプロキシフェン、ジフェノコナゾール、イミベンコナゾール、トリフルラリン、メトリブジン、トリクラミド、ヘキサコナゾール、エトキサゾール、シハロホップブチル、カフェンストロール等の含窒素系農薬；ピペロニル・ブトキシド等のベンゾジオキソール系農薬；アラクロール等のアセトアニリド系農薬；ブチレート、イソプロカルブ、ジエトフェンカルブ、メチオカルブ、クロロプロファム、ピリミカーブ、チオベンカルブ、ピリブチカルブ、ベンダイオカルブ、エチオフェンカルブ、フェノブカルブ、カルバリル等のカーバメート系農薬；ジメチピン、ベンフレセート等の有機硫黄系農薬等が挙げられる。
【００１１】
本発明における抽出工程においては、生薬の特性（水分含量が１０％以下である）の点から、抽出溶媒としてアセトニトリル水溶液を用いる。アセトニトリル水溶液におけるアセトニトリルと水との割合は、容量比で、好ましくは１：１〜９５：５、更に好ましくは７：３〜９：１、最も好ましくは４：１である。アセトニトリル水溶液の使用量は、試料１ｇ当たり、通常８〜１２ｍＬ、好ましくは９〜１１ｍＬである。抽出に際して、試料及び溶媒の混合順序には制限はなく、予めアセトニトリル水溶液を調製した後、試料と混合してもよく、また試料と、アセトニトリル及び水の一方を混合した後、他方の溶媒を加えてもよい。
【００１２】
試料の使用量は、特に制限はないが、通常１〜２０ｇ、好ましくは１〜４ｇである。
次いで、試料と溶媒との混合物を十分に振盪する。その後、前記混合物を遠心分離し、上清をとる。好ましくは、残留物に前記アセトニトリル水溶液を添加し（残留物１ｇ当たり、通常１０〜３０ｍＬ、好ましくは１５〜２５ｍＬ）、振盪後、遠心分離して上清をとる操作を１回以上繰り返し、得られた上清を合わせる。
【００１３】
好ましくは、生薬の水不溶性の固形分を析出させ、かつ抽出上清の粘性を低下させるため、得られた上清に水を加える。ここで加える水の添加量は、試料１ｇ当たり、通常６〜２０ｍＬ、好ましく９〜１５ｍＬである。
【００１４】
本発明においては、農薬の回収率を向上させる点から、前記のようにして得られた抽出液のｐＨを３．５〜４．５に調整することが好ましい。前記ｐＨは、更に好ましくは３．８〜４．２、最も好ましくは４．０である。ｐＨ調整するために用いる溶液としては特に制限はないが、通常リン酸水溶液、酢酸水溶液、ギ酸水溶液、パラトルエンスルホン酸水溶液等の酸性水溶液、炭酸水素ナトリウム水溶液、炭酸ナトリウム水溶液、水酸化ナトリウム水溶液等のアルカリ性水溶液等を単独で又は組み合わせて用いる。
【００１５】
本発明においては、前記のようにしてｐＨ調整された溶液をカラムクロマトグラフィーに付す。
【００１６】
本発明においては、水溶性の夾雑物を除くが、その方法は特に制限されず、例えば、逆相クロマトグラフィー、液−液分配等、好ましくは逆相クロマトグラフィーが挙げられる。逆相クロマトグラフィーとしては、例えばＣ１８（ＯＤＳ）カラムクロマトグラフィー、ポリマー系カラムクロマトグラフィー、ＧＣＢ（グラファイトカーボンブラック）クロマトグラフィーが挙げられる。
【００１７】
本発明においては、その後、酢酸エチルを加えるが、酢酸エチルの添加量は特に制限されず、試料が均一になる最低限の量が好ましい。また、その後の工程の操作性から、更にヘキサンを加えることが好ましい。ヘキサンの添加量は特に制限されないが、酢酸エチルと同量以上で不溶物が析出しない量が好ましい。試料１ｇあたり、酢酸エチル１ｍＬ及びヘキサン２ｍＬとするのが特に好ましい。
【００１８】
本発明においては、その後、脂溶性の夾雑物を除くが、その方法は特に制限されず、例えば、イオン交換クロマトグラフィー、順相クロマトグラフィー、液−液分配等、好ましくはイオン交換クロマトグラフィー、順相クロマトグラフィーまたはそれらの組み合わせが挙げられる。イオン交換クロマトグラフィーとしては、例えばＰＳＡカラムクロマトグラフィー、ＳＡＸ／ＰＳＡカラムクロマトグラフィーが挙げられ、順相クロマトグラフィーとしては、例えばフロリジルカラムクロマトグラフィー、ＧＣＢカラムクロマトグラフィーが挙げられる。
【００１９】
本発明に従えば、ダイオウ、シャクヤク、ゴボウシ、リュウタン等の生薬試料においても高い回収率で残留農薬が精製されるので、これを、例えばＧＣ／ＭＳＤ（質量分析計付きガスクロマトグラフ装置）により分析することにより、生薬中の残留農薬を高精度で分析することができる。
【実施例】
【００２０】
以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明の範囲は以下の実施例に限定されるものではない。
【００２１】
（実施例１〜４）
１．試料秤量
５０ｍＬのスリ栓付き遠沈管にダイオウ（実施例１）、シャクヤク（実施例２）、ゴボウシ（実施例３）又はリュウタン（実施例４）の粉末２．０ｇ（１．９５〜２．０４ｇ）を精密に量り取った。
【００２２】
２．抽出
２−１．遠沈管にアセトニトリル／水混液（容量比４：１）２０ｍＬを加えた。
２−２．遠沈管に栓をして、下記条件にて振盪した。
振盪時間：１０分、振盪速度：２００回／分
２−３．振盪後、下記条件にて遠心分離した。
回転速度：３０００ｒｐｍ、遠心時間：５分
２−４．綿栓をした漏斗を１００ｍＬ三角フラスコの上に載せ、アセトニトリル／水混液（容量比４：１）約２ｍＬで洗浄した。
２−５．綿栓をした漏斗を２００ｍＬ三角フラスコの上に載せ、遠沈管を傾け、上清を漏斗に移した。
２−６．遠沈管中の試料についてもう一度２−１〜３の操作を行った。２−５の漏斗に移し、先の抽出液と合わせた。
【００２３】
３．抽出液のｐＨ調整
３−１．２−６の漏斗を水１０ｍＬで洗い込む。漏斗をはずした後、抽出液に水４０ｍＬを加え、よく混和した。
３−２． 前記抽出液に、１０％リン酸水溶液、又は飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて、ｐＨを４に調整した。
【００２４】
４．Ｃ１８（５ｇ）−ＰＳＡ−ＧＣＢカラム処理
（Ｃ１８カートリッジ下準備）
４−１．Ｃ１８（５ｇ）カートリッジに注射針を取り付け、組立式漏斗台に載せ、下部にビーカーを置いた。カートリッジ上部にアセトニトリル２０ｍＬを加えた。カートリッジ上部の溶媒がなくなったら、水２０ｍＬ、水／アセトニトリル混液（容量比３：２）２０ｍＬを順次加えた。
【００２５】
（農薬の吸着）
４−２．３−２の調整液をＣ１８（５ｇ）カートリッジに加えた。アダプターをつけたリザーバーカートリッジをＣ１８（５ｇ）カートリッジに取り付け、リザーバーカートリッジに３−２の調整液約８０ｍＬを加えた。Ｃ１８（５ｇ）カートリッジ上部の調整液がなくなったら、アダプターをつけたリザーバーカートリッジを外し、シリンジを用いてＣ１８（５ｇ）カートリッジ内の溶媒を押し出した。通導した液は廃棄した。水／アセトニトリル混液（容量比３：２）２０ｍＬで溶出した。
【００２６】
（ＰＳＡカートリッジ下準備）
４−３．ＰＳＡカートリッジに注射針を取り付け、組立式漏斗台に載せ、下部にビーカーを置いた。カートリッジ上部にアセトニトリル１０ｍＬを加えた。通導した液は廃棄した。
【００２７】
（ＧＣＢカートリッジ下準備）
４−４．ＧＣＢカートリッジに注射針を取り付け、組立式漏斗台に載せ、下部にビーカーを置いた。カートリッジ上部にヘキサン１０ｍＬ、アセトン１０ｍＬ、アセトニトリル１０ｍＬを順次加えた。通導した液は廃棄した。
４−５．１００ｍＬ三角フラスコに無水硫酸ナトリウム大さじ３杯を加えた。
【００２８】
（吸着させた農薬の溶出）
４−６．４−２のＣ１８（５ｇ）カートリッジにアダプターをつけたリザーバーカートリッジを取り付けた。Ｃ１８（５ｇ）カートリッジの下に４−３のＰＳＡカートリッジを、ＰＳＡカートリッジの下に４−４のＧＣＢカートリッジを置いた。ＧＣＢカートリッジの下に１００ｍＬ三角フラスコを置いた。
４−７．アセトニトリル５０ｍＬを量り取り、Ｃ１８（５ｇ）カートリッジ上部のリザーバーカートリッジに加えた。
【００２９】
４−８．Ｃ１８（５ｇ）カートリッジ上部の溶媒がなくなったら、アダプターをつけたリザーバーカートリッジを外し、シリンジを用いてＣ１８（５ｇ）カートリッジ内の溶媒を押し出した。
４−９．ＰＳＡカートリッジ上部の溶媒がなくなったら、シリンジを用いてカートリッジ内の溶媒を押し出し、カートリッジを取り外した。
４−１０．ＧＣＢカートリッジ上部の溶媒がなくなったら、ヘキサン飽和アセトニトリル２０ｍＬをＧＣＢカートリッジ上部に加えた。カートリッジ上部に溶媒がなくなったら、シリンジを用いてカートリッジ内の溶媒を押し出し、そのまま５分間放置した。
【００３０】
５．脱水剤分離
５−１．ひだ折り濾紙を載せた漏斗を１００ｍＬ三角フラスコの上に載せ、アセトニトリル約５ｍＬで洗浄した。
５−２．ひだ折り濾紙を載せた漏斗を２００ｍＬナス型フラスコの上に載せた。
５−３．４−１０の溶出液をひだ折り濾紙を載せた漏斗に移した。４−１０の１００ｍＬ三角フラスコにアセトニトリル約５ｍＬを加え洗浄した。同操作を更に２回行った。
【００３１】
６．溶出液濃縮
６−１．５−３の溶出液を、ロータリーエバポレーターを用い乾固まで減圧濃縮した。
６−２．６−１の残渣を酢酸エチル２ｍＬで溶解し、ヘキサン４ｍＬを加え、超音波洗浄器を用いて均一に分散させた。
【００３２】
７．ＳＡＸ／ＰＳＡ−フロリジル（１ｇ）カラム処理
７−１．ＳＡＸ／ＰＳＡカートリッジに注射針を取り付け、組立式漏斗台に載せ、下部にビーカーを置いた。カートリッジ上部にヘキサン１０ｍＬを加えた。カートリッジ上部の溶媒がなくなったら、酢酸エチル１０ｍＬ、ヘキサン１０ｍＬを順次加えた。通導した液は廃棄した。
７−２．フロリジル（１ｇ）カートリッジに注射針を取り付け、組立式漏斗台に載せ、下部にビーカーを置いた。カートリッジ上部にヘキサン１０ｍＬを加えた。カートリッジ上部の溶媒がなくなったら、酢酸エチル１０ｍＬ、ヘキサン１０ｍＬを順次加えた。通導した液は廃棄した。
７−３．７−１のＳＡＸ／ＰＳＡカートリッジの下に７−２のフロリジル（１ｇ）カートリッジを、フロリジル（１ｇ）カートリッジの下に１００ｍＬナス型フラスコを置いた。
７−４．６−２の溶液をパスツールピペットを用いてＳＡＸ／ＰＳＡカートリッジ上部に加えた。
【００３３】
７−５．７−４の２００ｍＬナス型フラスコにヘキサン／酢酸エチル混液（容量比３：１）２ｍＬを加えた。超音波洗浄器を用いて均一に分散させ、ＳＡＸ／ＰＳＡカートリッジ上部に加えた。同操作をもう一度行った。
７−６．フロリジル（１ｇ）カートリッジ上部の溶媒がなくなったら、ＳＡＸ／ＰＳＡカートリッジ上部にヘキサン／酢酸エチル混液（容量比３：１）３０ｍＬを加えた。
７−７．ＳＡＸ／ＰＳＡカートリッジ上部の溶媒がなくなったら、シリンジを用いてカートリッジ内の溶媒を押し出し、カートリッジを取り外した。
７−８．フロリジル（１ｇ）カートリッジ上部の溶媒がなくなったら、シリンジを用いてカートリッジ内の溶媒を押し出した。
【００３４】
８．溶出液濃縮
８−１．７−８の溶出液を、ロータリーエバポレーターを用い４０℃以下で２ｍＬまで減圧濃縮した。
８−２．８−１の濃縮液にアセトン５ｍＬを加え、約１ｍＬまで減圧濃縮した。同操作をもう一度行った。
【００３５】
９．分析試料調製
９−１．８−２の濃縮液を２ｍＬメスフラスコに移し、０．０１％ポリエチレングリコールアセトンを用いて２ｍＬに定容した。
９−２．パスツールピペットを用い、メスフラスコ内をよく撹拌した。
９−３．バイアル瓶に試料溶液を約１ｍＬ入れ、キャップをセットした。
９−４．クリンパーを用いて、キャップを閉じた。
【００３６】
１０．ＧＣ／ＭＳＤ測定
以下の条件にしたがって、ＧＣ／ＭＳＤによる分析を行った。
検出器：ＭＳＤ
カラム：ＤＢ−１ＭＳ 長さ１５ｍ，内径０．２５ｍｍ，膜厚０．２５μｍ
カラム温度：100℃(2min hold) - (20℃/min) - 194℃ - (5℃/min) -220℃- (15℃/min) - 300℃(5.77min hold)
注入口温度：２５０℃
インターフェース：３００℃
注入量：２．０μＬ
注入方法：パルスドスプリットレス
パルス圧：２０．０ｐｓｉ
パルス時間：１．００ｍｉｎ
キャリアガス：ヘリウム
平均線速度：６３ｃｍ／ｓｅｃ
分析結果を表１に示す。
【００３７】
（判定基準）
添加回収率が７０〜１２０％を示すものを適用可能と判断した。前記範囲外の回収率には取り消し線を付した。
【００３８】
（比較例１〜４）
実施例１〜４における１．試料秤量から５．脱水剤分離と同様の操作を繰り返した後、以下のように処理した。
６．溶出液濃縮
６−１．５−３の溶出液を、ロータリーエバポレーターを用い乾固まで減圧濃縮した。
６−２．６−１の残渣をヘキサン５ｍＬで溶解し、ロータリーエバポレーターを用い乾固まで減圧濃縮した。
６−３．６−２の残渣をヘキサン２ｍＬで溶解した。
【００３９】
７．ＳＡＸ／ＰＳＡ−フロリジル（１ｇ）カラム処理
７−１．ＳＡＸ／ＰＳＡカートリッジに注射針を取り付け、組立式漏斗台に載せ、下部にビーカーを置いた。カートリッジ上部にヘキサン１０ｍＬを加えた。カートリッジ上部の溶媒がなくなったら、酢酸エチル１０ｍＬ、ヘキサン１０ｍＬを順次加えた。通導した液は廃棄した。
７−２．フロリジル（１ｇ）カートリッジに注射針を取り付け、組立式漏斗台に載せ、下部にビーカーを置いた。カートリッジ上部にヘキサン１０ｍＬを加えた。カートリッジ上部の溶媒がなくなったら、酢酸エチル１０ｍＬ、ヘキサン１０ｍＬを順次加えた。通導した液は廃棄した。
【００４０】
７−３．７−１のＳＡＸ／ＰＳＡカートリッジの下に７−２のフロリジル（１ｇ）カートリッジを、フロリジル（１ｇ）カートリッジの下にビーカーを置いた。
７−４．６−３の溶液にヘキサン４ｍＬを加え、超音波洗浄器を用いて均一に分散させた。パスツールピペットを用いてＳＡＸ／ＰＳＡカートリッジ上部に加えた。
７−５．７−４の２００ｍＬナス型フラスコにヘキサン４ｍＬを加えた。超音波洗浄器を用いて均一に分散させ、ＳＡＸ／ＰＳＡカートリッジ上部に加えた。同操作をもう一度行った。通導した液は廃棄した。
【００４１】
７−６．フロリジル（１ｇ）カートリッジ上部の溶媒がなくなったら、フロリジル（１ｇ）カートリッジ下部に１００ｍＬナス型フラスコを置いた。ＳＡＸ／ＰＳＡカートリッジ上部にヘキサン／酢酸エチル混液（容量比３：１）３０ｍＬを加えた。
７−７．ＳＡＸ／ＰＳＡカートリッジ上部の溶媒がなくなったら、シリンジを用いてカートリッジ内の溶媒を押し出し、カートリッジを取り外した。
７−８．フロリジル（１ｇ）カートリッジ上部の溶媒がなくなったら、シリンジを用いてカートリッジ内の溶媒を押し出した。
【００４２】
以下、実施例１〜４における８．溶出液濃縮から５．脱水剤分離と同様の操作を繰り返した。
分析結果を表１に示す。
【００４３】
【表１】
【００４４】
表１から、本発明によれば、ダイオウ、シャクヤク、ゴボウシ、リュウタン等の生薬試料においても高い回収率で残留農薬を精製できることがわかる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の工程：
（ｉ）生薬試料をアセトニトリル水溶液で抽出する工程、
（ii）その後、水溶性の夾雑物を除く工程、
（iii）その後、酢酸エチルを加える工程、及び
（iv）その後、脂溶性の夾雑物を除く工程
を含む生薬試料中の残留農薬の精製方法。
【請求項２】
生薬試料が生薬又は漢方製剤である請求項１記載の方法。
【請求項３】
生薬試料がダイオウ、シャクヤク、ゴボウシ及びリュウタンから選ばれる請求項１記載の方法。
【請求項４】
残留農薬がピレスロイド系農薬である請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
工程（ii）において、逆相クロマトグラフィーに付することにより水溶性の夾雑物を除く請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
工程（iv）において、イオン交換クロマトグラフィー及び／又は順相クロマトグラフィーに付することにより脂溶性の夾雑物を除く請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１】
次の工程：
（ｉ）生薬試料をアセトニトリル水溶液で抽出する工程、
（ii）その後、水溶性の夾雑物を除く工程、
（iii）その後、酢酸エチルを加える工程、及び
（iv）その後、脂溶性の夾雑物を除く工程
を含む生薬試料中の残留農薬の精製方法。
【請求項２】
生薬試料が生薬又は漢方製剤である請求項１記載の方法。
【請求項３】
生薬試料がダイオウ、シャクヤク、ゴボウシ及びリュウタンから選ばれる請求項１記載の方法。
【請求項４】
残留農薬がピレスロイド系農薬である請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
工程（ii）において、逆相クロマトグラフィーに付することにより水溶性の夾雑物を除く請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
工程（iv）において、イオン交換クロマトグラフィー及び／又は順相クロマトグラフィーに付することにより脂溶性の夾雑物を除く請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【公開番号】特開２００９−１８６４３５（Ｐ２００９−１８６４３５Ａ）
【公開日】平成２１年８月２０日（２００９．８．２０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−２９５２１（Ｐ２００８−２９５２１）
【出願日】平成２０年２月８日（２００８．２．８）
【出願人】（０００００３６６５）株式会社ツムラ (43)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年８月２０日（２００９．８．２０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年２月８日（２００８．２．８）
【出願人】（０００００３６６５）株式会社ツムラ (43)
【Ｆターム（参考）】
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