神経難病の画像診断薬
【課題】本発明は、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患、特にアルツハイマー病の早期かつ正確な画像診断薬、並びにそれを含有する組成物の提供を目的とする。
【解決手段】本発明は、等価なフッ素原子を含む式（Ｉ）：
（式中、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に水素原子又はＣ１〜６アルキルであり、ＸはＯ又はＳであり、ｍは０又は１であり；Ａ１及びＡ２のどちらか一方は水素原子である）で表されるアニリン誘導体又はその塩に関する。
【解決手段】本発明は、等価なフッ素原子を含む式（Ｉ）：
（式中、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に水素原子又はＣ１〜６アルキルであり、ＸはＯ又はＳであり、ｍは０又は１であり；Ａ１及びＡ２のどちらか一方は水素原子である）で表されるアニリン誘導体又はその塩に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断薬、特に、アルツハイマー病のＭＲ画像診断に有用な新規アニリン誘導体又はその塩に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病は、初老期から老年期に起こる進行性の痴呆を特徴とする疾患であり、現在、国内の患者数は１００万人以上と言われている。今後人口の高齢化に伴いその数は確実に増加すると予想される。
【０００３】
アルツハイマー病の臨床症状は、記憶障害、高次脳機能障害（失語、失行、失認、構成失行）等である。その症状は他の痴呆疾患でも共通して見られることが多く、臨床症状だけでアルツハイマー病と確定診断することは極めて困難である。
【０００４】
一方、アルツハイマー病の特徴的な病理組織所見としては、老人斑と神経原線維変化がある。前者の主構成成分はβシート構造をとったアミロイドβ蛋白であり、後者のそれは過剰リン酸化されたタウ蛋白である。アルツハイマー病においては臨床症状が発症するかなり前から、脳内ではアミロイドβ蛋白の蓄積等の上記病理的組織変化が始まっていることが知られている。したがって、脳内のアミロイドβ蛋白をマーカーとして検出することが、アミロイドが蓄積する疾患、特にアルツハイマー病の早期診断方法の１つとなる。このような観点から、近年、脳内アミロイドβ蛋白に選択的に結合するポジトロン断層撮影法（PET）やシングルフォトン断層撮影法（SPECT）用の放射性造影剤の研究が進められている。アミロイドに親和性の高い古典的な化合物としては、アルツハイマー病の病理的確定診断に使用されているコンゴーレッド、チオフラビンSおよびチオフラビンTがある。その多くは、血液―脳関門を通過しがたく静脈内投与しても殆ど脳内へは移行しない。そこで、血液―脳関門の透過性を考慮した造影剤の研究が進められ、ISB、PIB、BF-168（特許文献１）等の造影剤が開発されており、そのいくつかは臨床試験で良好な成績が得られている。しかし、それらは、11C、13N、15O、18F等の放射性核種を用いるため放射線障害による副作用が懸念されるとともに、近くにサイクロトロン施設を併設する必要があり、放射性核種を用いない診断方法が望まれている。
【０００５】
放射性核種を用いない診断方法の一つとして核磁気共鳴イメージング法（MRI）がある。近年、１９Ｆ−ＭＲＩを用いて老人斑の画像化に成功したとの報告（特許文献２、非特許文献１）がなされ、ＭＲＩ診断への期待が高まっている。しかしながら、ＭＲＩはＰＥＴ等に比べ検出感度が低いことが知られており、安全なアルツハイマー病の診断法確立に向け、高感度のＭＲＩ造影剤の開発が切望されている。
【特許文献１】ＷＯ２００３/１０６４３９
【特許文献２】ＷＯ２００５/０４２４６１
【非特許文献１】M.Higuchi et al.,Nature Neuroscience 8(4),527(2005)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、アルツハイマー病のＭＲＩ診断用造影剤として好適なアミロイドβ蛋白に対する高い結合特異性と高い検出感度を併せ持つ物質を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決すべく、鋭意研究を重ねた結果、19Ｆ−ＭＲＩの感度向上に不可欠な等価なＦ原子を多く含む一定の化学構造の化合物が、アミロイドβ蛋白に対し高い結合特異性を持つことを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち、本発明は、式（Ｉ）：
【０００９】
【化１】
【００１０】
（式中、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に水素原子又はＣ１〜６アルキルであり、ＸはＯ又はＳであり、ｍは０又は１であり；Ａ１及びＡ２のどちらか一方は水素原子であり、もう一方は
【００１１】
【化２】
【００１２】
であり、Ｊは、
【００１３】
【化３】
【００１４】
であり、ｎは０〜５の整数であり、Ｑは、
【００１５】
【化４】
【００１６】
であり、Ｒ３は水素原子、フッ素原子、メチル又はトリフルオロメチルであり、Ｒ４はトリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ又は
【００１７】
【化５】
【００１８】
であり、Ｒ５は水素原子、フッ素原子、水酸基、メチル又はトリフルオロメチルであり、Ｙは、ＣＨ、ＣＲ４又はＮであり、ｐは１〜４の整数である。但し、Ａ１が水素原子であり、Ａ２が、
【００１９】
【化６】
【００２０】
であり、ＪがＪ−１又はＪ−２であり、ＱがＱ−５であり、Ｒ４がトリフルオロメチル又はトリフルオロメトキシであり、ｍが１である場合は除く）で表されるアニリン誘導体又はその塩。
【００２１】
また、本発明は、式（Ｉ）の化合物又はその塩を有効成分とするアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断薬に関する。
【００２２】
さらに、本発明は、式（Ｉ）の化合物又はその塩を有効成分とする脳をはじめとする組織中のアミロイドβ蛋白又は老人斑の染色薬に関する。
【００２３】
Ｒ１又はＲ２のアルキル基としては、直鎖又は分枝状のＣ1-6アルキルであればよく、その具体例としてはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、tert-ブチルなどが挙げられ、直鎖又は分枝状のＣ1-3アルキル基が好ましい。Ｒ１とＲ２の一方又は両方がアルキル基であるのが好ましい。
ｎは０〜５の整数であり、好ましくは０〜３の整数である。
ｐは１〜４の整数であり、好ましくは１〜２の整数である。
【００２４】
式（Ｉ）の化合物の塩としては、医薬上許容される塩であればよく、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩などの鉱酸塩；酒石酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、安息香酸塩、グリコール酸塩、琥珀酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩などの有機酸塩などが挙げられる。また、これらの塩の中で結晶水を持つものもある。
【発明の効果】
【００２５】
本発明化合物は、アミロイドβ蛋白に対する高い親和性と高い血液―脳関門透過性を有し、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断薬の有効成分として有用である。更に、本発明化合物は電子的に等価なＦ原子を多く含むため１９Ｆ−ＭＲＩ造影剤の有効成分として特に有用である。また、脳をはじめとする組織中のアミロイドβ蛋白又は老人斑染色薬の有効成分、例えば該蛋白の蛍光染色剤として有用である。従って、本発明化合物を用いれば、アルツハイマー病のようなアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の早期診断が可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
式（Ｉ）の化合物又はその塩は、下記製法〔１〕から〔３〕のいずれかに記載の方法により製造することができる。
製法〔１〕
前記式（Ｉ）において、ＪがＪ−１又はＪ−２である式（Ｉ−ａ）の化合物は、通常、溶媒の存在下で式（II）の化合物と式（III）の化合物とを反応させることにより製造することができる。
【００２７】
【化７】
【００２８】
（式中、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、ｍ及びｎは前述の通りであり、ＪａはＪ−１又はＪ−２であり、Ｔｓはトシル基である）
本反応の溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、石油エーテル、リグロイン、石油ベンジンなどの脂肪族炭化水素類；ジエチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジブチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドなどの酸アミド類；ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類；スルホランなどのスルホン類；ヘキサメチルホスホルアミドなどのリン酸アミド類；クロロホルム、ジクロロメタン、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素類及びこれらの混合溶媒を挙げることができる。
【００２９】
本反応を促進するために塩基を添加することが望ましく、その塩基としては、トリエチルアミン、ピリジン、Ｎ−メチルモルホリン、１，８−ジアザビシクロ〔５.４.０〕−７−ウンデセン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンなどの有機塩基；リチウム、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属；水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどのアルカリ金属の水酸化物；炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムなどのアルカリ金属の炭酸塩；炭酸水素リチウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウムなどのアルカリ金属の炭酸水素塩；水素化リチウム、水素化ナトリウム、水素化カリウムなどのアルカリ金属の水素化物；ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウム tert−ブトキシドなどの金属アルコキシドなどを挙げることができる。塩基は、式（III）の化合物に対して１〜５倍モル、望ましくは１〜３倍モル使用することができる。
【００３０】
本反応は、通常０〜１５０℃、望ましくは２０〜１００℃で行なうことができ、その反応時間は、通常１〜１７０時間程度である。
【００３１】
式（III）の化合物は、式（II）の化合物に対して１〜１０倍モル、望ましくは１〜５倍モル使用することができる。
【００３２】
式（II）の化合物は、公知の類似化合物の製造方法又はそれらに準じた方法によって製造することができる。例えば、下記の製造方法に従い、通常、溶媒中トリフェニルホスフィン及びアゾジカルボン酸ジイソプロピルの存在下で式（IＶ）の化合物と式（Ｖ）の化合物とを反応させることにより式（II）の化合物を製造することができる。
【００３３】
【化８】
【００３４】
（式中、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、ｍ、ｎ及びＴｓは前述の通りである）
本反応の溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、石油エーテル、リグロイン、石油ベンジンなどの脂肪族炭化水素類；ジエチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジブチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドなどの酸アミド類；ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類；スルホランなどのスルホン類；ヘキサメチルホスホルアミドなどのリン酸アミド類；クロロホルム、ジクロロメタン、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素類及びこれらの混合溶媒を挙げることができる。
【００３５】
本反応は、通常−２０〜１００℃、望ましくは０〜５０℃で行うことができ、反応時間は通常１〜３６時間程度である。
【００３６】
式（Ｖ）の化合物は、式（IＶ）の化合物に対して１〜１０倍モル、望ましくは１〜５倍モル使用することができる。
製法〔２〕
前記式（Ｉ）において、ＪがＪ−３であり、ｎが０である式（I−ｂ）の化合物は、式（IＶ）の化合物とトリエタノールアミンとを反応させて式（ＶI）の化合物を製造した後、得られた式（ＶI）の化合物と式（ＶII）の化合物とを反応させることにより製造することができる。
【００３７】
【化９】
【００３８】
（式中、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びｍは前述の通りである）
式（IＶ）の化合物から式（ＶI）の化合物を製造する反応は、通常、溶媒中トリフェニルホスフィン及びアゾジカルボン酸ジイソプロピルの存在下で行うことができる。
【００３９】
溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、石油エーテル、リグロイン、石油ベンジンなどの脂肪族炭化水素類；ジエチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジブチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドなどの酸アミド類；ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類；スルホランなどのスルホン類；ヘキサメチルホスホルアミドなどのリン酸アミド類；クロロホルム、ジクロロメタン、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素類及びこれらの混合溶媒を挙げることができる。
【００４０】
反応は、通常−２０〜１００℃、望ましくは０〜５０℃で行うことができ、反応時間は通常１〜３６時間程度である。
【００４１】
トリエタノールアミンは、式（IＶ）の化合物に対して１〜１０倍モル、望ましくは１〜５倍モル使用することができる。
【００４２】
式（ＶI）化合物と式（ＶII）の化合物とを反応させて式（I-ｂ）の化合物を製造する反応は、通常、溶媒中トリフェニルホスフィン及びアゾジカルボン酸ジイソプロピルの存在下で行うことができる。溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、石油エーテル、リグロイン、石油ベンジンなどの脂肪族炭化水素類；ジエチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジブチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドなどの酸アミド類；ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類；スルホランなどのスルホン類；ヘキサメチルホスホルアミドなどのリン酸アミド類；クロロホルム、ジクロロメタン、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素類及びこれらの混合溶媒を挙げることができる。
【００４３】
反応は、通常−２０〜１００℃、望ましくは０〜５０℃で行うことができ、反応時間は通常１〜３６時間程度である。
【００４４】
式（ＶII）の化合物は、式（ＶI）の化合物に対して１〜１０倍モル、望ましくは１〜５倍モル使用することができる。
製法〔３〕
前記式（Ｉ）において、ＪがＪ−２であり、ＱがＱ−３である式（Ｉ−ｃ）の化合物は、式（ＶIII）の化合物と式（IＸ）の化合物とを反応させて式（Ｘ）の化合物を製造した後、得られた式（Ｘ）の化合物のtert−ブトキシカルボニル基を脱保護することにより製造することができる。
【００４５】
【化１０】
【００４６】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘ、ｍ及びｎは前述の通りであり、Ｈａｌはハロゲンであり、Ｂｏｃはtert−ブトキシカルボニル基である）
式（ＶIII）の化合物と式（IＸ）の化合物から式（Ｘ）の化合物を製造する反応は、通常、塩基及び溶媒の存在下で行なうことができる。
【００４７】
塩基としては、トリエチルアミン、ピリジン、Ｎ−メチルモルホリン、１，８−ジアザビシクロ〔５.４.０〕−７−ウンデセン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンなどの有機塩基；リチウム、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属；水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどのアルカリ金属の水酸化物；炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムなどのアルカリ金属の炭酸塩；炭酸水素リチウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウムなどのアルカリ金属の炭酸水素塩；水素化リチウム、水素化ナトリウム、水素化カリウムなどのアルカリ金属の水素化物；ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウム tert−ブトキシドなどの金属アルコキシドなどを挙げることができる。塩基の使用量は、特に限定されないが、式（ＶIII）の化合物に対して等モルから過剰量である。
【００４８】
溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、石油エーテル、リグロイン、石油ベンジンなどの脂肪族炭化水素類；ジエチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジブチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドなどの酸アミド類；ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類；スルホランなどのスルホン類；ヘキサメチルホスホルアミドなどのリン酸アミド類；クロロホルム、ジクロロメタン、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素類及びこれらの混合溶媒を挙げることができる。
【００４９】
反応は、通常０〜１５０℃、望ましくは０〜１００℃の温度で行われ、反応時間は、通常１〜５０時間程度である。
【００５０】
式(IＸ)の化合物は、式（ＶIII）の化合物に対して０．８〜５倍モル、望ましくは１〜２倍モル使用することができる。
【００５１】
式（Ｘ）の化合物のtert−ブトキシカルボニル基を脱保護する反応は、通常、酸及び溶媒の存在下で処理することにより行なうことができる。
【００５２】
酸としては、塩酸、硫酸、トリフルオロ酢酸等が挙げられる。
【００５３】
溶媒としては、水；メタノール、エタノールなどのアルコール類；テトラヒドロフランなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドなどの酸アミド類；ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類及びこれらの混合溶媒を挙げることができる。
【００５４】
本反応は、通常０〜１００℃、望ましくは３０〜７０℃で行なうことができ、反応時間は、通常０．５〜５時間程度である。
【００５５】
前記式（ＶIII）の化合物は、公知の製造方法又はそれらに準じた製造方法により製造することができる。例えば、式（ＶIII）の化合物のうち、ｎが０の化合物（IＶ）はＷＯ２００５／０１６８８８等に記載の方法に準じて製造することができ、ｎが１〜５の化合物（ＸIII）は下記製法〔Ａ〕又は〔Ｂ〕に記載の方法により製造することができる。
製法〔Ａ〕
【００５６】
【化１１】
【００５７】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ及びｍは前述の定義通りであり、ｑは１〜５であり、Ｚは保護基である）
保護基Ｚとしては、例えばアセチル基、テトラヒドロピラニル基、トリメチルシリル基等が挙げられる。
【００５８】
式（IＶ）の化合物から式（ＸII）の化合物を製造する反応は、通常、溶媒中トリフェニルホスフィン及びアゾジカルボン酸ジイソプロピルの存在下で式（IＶ）の化合物と、式（ＸI）の化合物とを反応することにより行なうことができる。
【００５９】
溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、石油エーテル、リグロイン、石油ベンジンなどの脂肪族炭化水素類；ジエチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジブチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドなどの酸アミド類；ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類；スルホランなどのスルホン類；ヘキサメチルホスホルアミドなどのリン酸アミド類；クロロホルム、ジクロロメタン、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素類及びこれらの混合溶媒を挙げることができる。
【００６０】
本反応は、通常−２０〜１００℃、望ましくは０〜５０℃で行うことができ、反応時間は通常１〜３６時間程度である。
【００６１】
式（ＸI）の化合物は、式（IＶ）の化合物に対して１〜１０倍モル、望ましくは１〜５倍モル使用することができる。
【００６２】
式（ＸII）の化合物の保護基(Ｚ)を脱保護して式（ＸIII）の化合物を得る反応は、通常、酸及び溶媒の存在下で行なうことができる。
【００６３】
酸としては、塩酸、硫酸、トリフルオロ酢酸等が挙げられる。溶媒としては、水；メタノール、エタノールなどのアルコール類；テトラヒドロフランなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドなどの酸アミド類；ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類及びこれらの混合溶媒を挙げることができる。
【００６４】
本反応は、通常０〜１００℃、望ましくは３０〜７０℃で行なうことができ、反応時間は、通常０．５〜５時間程度である。
製法〔Ｂ〕
【００６５】
【化１２】
【００６６】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ、ｍ及びｑは前述の定義通りである。)
【００６７】
本反応は、通常、溶媒中トリフェニルホスフィン及びアゾジカルボン酸ジイソプロピルの存在下で式（IＶ）の化合物と式（ＸIＶ）の化合物とを反応することにより行なうことができる。
【００６８】
溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、石油エーテル、リグロイン、石油ベンジンなどの脂肪族炭化水素類；ジエチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジブチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドなどの酸アミド類；ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類；スルホランなどのスルホン類；ヘキサメチルホスホルアミドなどのリン酸アミド類；クロロホルム、ジクロロメタン、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素類及びこれらの混合溶媒を挙げることができる。
【００６９】
本反応は、通常−２０〜１００℃、望ましくは０〜５０℃で行うことができ、反応時間は通常１〜３６時間程度である。
【００７０】
式（ＸIＶ）の化合物は、式（IＶ）の化合物に対して１〜１０倍モル、望ましくは１〜５倍モル使用することができる。
【００７１】
上記した製法〔１〕〜〔３〕及びそれに付随した方法で得られる前記式（Ｉ）の化合物は、公知の手段、例えば、濃縮、減圧濃縮、蒸留、分留、転溶、溶媒抽出、結晶化、再結晶、クロマトグラフィーなどにより単離、精製することができる。
【００７２】
前記式（Ｉ）の化合物がフリー体で得られる場合、通常の方法で塩を形成させることができる。
【００７３】
式（I）の化合物のいくつかの例を第１表に示す。
【００７４】
第１表
【表１】
【００７５】
式（I）の化合物又はその塩は、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断薬として使用することができる。また、式（I）の化合物又はその塩は、脳をはじめとする組織中のアミロイドβ蛋白又は老人斑染色薬として使用することができる。
【００７６】
本発明の望ましい実施形態は、次のものである。
（１）式（I）の化合物又はその塩を有効成分とするアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断薬。
（２）アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患がアルツハイマー病である（１）に記載の画像診断薬。
（３）脳内アミロイドのＭＲＩ造影剤である（１）又は（２）に記載の画像診断薬。
（４）式（I）の化合物又はその塩を有効成分とする脳をはじめとする組織中のアミロイドβ蛋白又は老人斑染色薬。
（５）アミロイドβ蛋白の蛍光染色薬である（４）に記載の染色薬。
（６）（１）に記載の画像診断薬を用いる、蛋白のβシート構造が病因又は病因の一部となる疾患の診断方法。
（７）（４）に記載の染色薬を用いて組織中のアミロイドβ蛋白又は老人斑を染色する方法。
【００７７】
式（I）の化合物の多くは疎水性の化合物であり、水に対する溶解度は低い。生体に投与する化合物としては水溶解度が高いことが望ましく、式（I）の化合物の内、塩を持つ化合物がより望ましい。
【００７８】
式（I）の化合物又はその塩を画像診断薬として使用する場合、本化合物により脳内の老人斑を特異的に検出することができる。特に、19Ｆ―ＭＲＩを用いて非侵襲的にアミロイドβ蛋白を検出する場合、その検出感度は、フッ素原子の数に依存しており、Ｆ原子の数は多いほうが望ましい。
【００７９】
式（I）の化合物又はその塩を画像診断薬として使用する場合、その投与は、局所的であってもよく、全身的であってもよい。投与方法には特に制限はなく、経口的又は非経口的に投与される。非経口的投与経路としては、皮下、腹腔内、静脈、動脈又は脊髄液への注射又は点滴等が挙げられる。
【００８０】
式（I）の化合物又はその塩を含む画像診断薬は、ヒトへの投与に適した医薬上許容される形態であって、生理学的に許容し得る添加剤を含む。かかる組成物は、適宜、医薬として許容し得る希釈剤、緩衝剤、可溶化剤（例えば、シクロデキストリン、プルロニック、ポリエチレングリコール、Ｔｗｅｅｎ、クレモフォール又はリン脂質のような界面活性剤）、無痛化剤等を添加してもよく、更に必要に応じて、医薬として許容し得る溶剤、安定化剤又は酸化防止剤（例えばアスコルビン酸等）のような成分を含んでもよい。本発明化合物の投与量は、用法、患者の年齢、性別その他の条件、疾患の程度により適宜選択される。
【００８１】
アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患としては、アルツハイマー病の他、ダウン症候群が挙げられ、蛋白のβシート構造が病因又は病因の一部となる疾患しては、アルツハイマー病、ダウン症候群の他、前頭側頭型痴呆症、ピック病、進行核上性麻痺（PSP)、プリオン病等が挙げられる。
【実施例】
【００８２】
次に本発明に係わる合成例及び試験例を記載するが、本発明はこれらに限定されるわけではない。
【００８３】
〔合成例１〕２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−(２−ノナフルオロ- tert -ブトキシエトキシ)エトキシ]ベンゾオキサゾール（化合物１）の合成
ＤＭＦ１ｍｌ中に、ノナフルオロ- tert -ブタノール ５３μＬ（0.380mmol）を滴下し６０％水素化ナトリウム １９ｍｇ（0.475mmol）を加え、室温で30分間攪拌した。攪拌後、２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−(２−ｐ−トルエンスルホニルオキシエトキシ)エトキシ]ベンゾオキサゾール １００ｍｇ（0.192mmol）を加え５０℃で１６時間攪拌した。放冷後、水を投入し、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ロータリーエバポレーターにて溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル:n-ヘキサン＝１：１）により精製した。さらにシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル:n-ヘキサン＝１：２）により精製し、黄色油状の２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−(２−ノナフルオロ- tert -ブトキシエトキシ)エトキシ]ベンゾオキサゾール ５７ｍｇ（cis：trans＝２：３混合物）を得た。
1HNMR (CDCl3)：δ3.04 (s, 6H), δ3.83 (m, 2H), δ3.94 (m, 2H), δ4.18 (m, 4H), δ6.25 (d, J=13.2Hz, 0.4H, cis), δ6.80 (d, J=16.4Hz, 0.6H, trans), δ6.85 (d, J=13.2Hz, 0.4H, cis), δ7.64 (d, J=16.0Hz, 0.6H, trans), δ6.7〜7.9 (arom.H, 7H).
【００８４】
〔合成例２〕２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−〔２−（２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルアミノ）エトキシ〕ベンゾオキサゾール塩酸塩（化合物２）の合成
（１）ビス（２−クロロエチル）アミン０．９ｇをテトラヒドロフラン５ｍLに溶解し、室温攪拌下にジ−tert−ブチルジカーボネート１．５２ｇを滴下したあと、同温度で１７時間攪拌した。反応液に水を加えたあと酢酸エチルで抽出し、水洗浄、飽和食塩水洗浄、無水硫酸ナトリウムによる乾燥後、減圧濃縮により油状のN，N−ビス（２−クロロエチル）カルバミド酸 tert−ブチルエステル１．５３ｇを得た。
1HNMR (CDCl3)：δ1.47 (s, 9H), δ3.60 (m, 6H), δ3.66 (br.d, J=5.6Hz, 2H).
（２）ノナフルオロ−tert−ブタノール１．３ｇをヘキサメチルリン酸トリアミド ５ｍLに溶解し、氷水浴による冷却攪拌下、６０％水素化ナトリウム ２３７ｍｇを徐々に添加した。添加終了後、室温下に２０分攪拌し、次いで前記工程（１）で得られたN，N−ビス（２−クロロエチル）カルバミド酸 tert−ブチルエステル０．５３ｇをヘキサメチルリン酸トリアミド２ｍLに溶解した溶液を滴下した。滴下終了後、約５０℃で約４８時間攪拌し、反応液に水を加えたあと、酢酸エチル抽出、水洗浄、飽和食塩水洗浄、無水硫酸ナトリウムによる乾燥後、減圧濃縮し、シリカゲルカラム（酢酸エチル：n-ヘキサン＝１：２０）により精製して油状のN−２−クロロエチル−N−２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルカルバミド酸 tert−ブチルエステル０．３１ｇを得た。
1HNMR (CDCl3)：δ1.47 (s, 9H), δ3.54〜3.67 (m, 6H), δ4.14 (m, 2H).
（３）前記工程（１）で得られたN−２−クロロエチル−N−２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルカルバミド酸 tert−ブチルエステル３１０ｍｇ、２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−ヒドロキシベンゾオキサゾール １９７ｍｇ、ヘキサメチルリン酸トリアミド ５ｍLを仕込み室温攪拌下６０％水素化ナトリウム ３４ｍｇを徐々に添加した。添加終了後、約５０℃で約２２時間攪拌し、反応液に水を加えたあと、酢酸エチル抽出、水洗浄、飽和食塩水洗浄、無水硫酸ナトリウムによる乾燥後、減圧濃縮し、シリカゲルカラム（酢酸エチル：n-ヘキサン＝１：３）により精製して油状の２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−(N−tert−ブトキシカルボニル−N−２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルアミノ)エトキシ]ベンゾオキサゾール ２３９ｍｇ（cis：trans＝１：１混合物）を得た。1HNMR (CDCl3)：δ1.47 (s, 9H), δ3.10 (s, 6H), δ3.61〜3.69 (m, 4H), δ4.06〜4.25 (m, 4H), δ6.25 (d, J=12.4Hz, 0.5H, cis), δ6.80 (d, J=16.0Hz, 0.5H, trans ), δ7.64(d, J=16.0Hz, 0.5H, trans), δ6.70〜7.88 (arom.H, 7.5H).
（４）前記工程（３）で得られた２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−(N−tert−ブトキシカルボニル−N−２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルアミノ)エトキシ]ベンゾオキサゾール１１０ｍｇ、１M塩酸エタノール溶液３ｍLを混合し、約７０℃で１時間攪拌した。反応液を飽和炭酸水素ナトリウム水５０ｍL中に投入し室温で３０分攪拌したあと、減圧ろ過、水洗浄、減圧乾燥により黄褐色の結晶として２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−(２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルアミノ)エトキシ]ベンゾオキサゾール７８ｍｇ（cis：trans＝１：１混合物）を得た。
1HNMR (CDCl3)：δ3.03 (s, 6H), δ3.00〜3.08 (m, 4H), δ4.09〜4.20 (m, 4H), δ6.25 (d, J=12.8Hz, 0.5H, cis), δ6.80 (d, J=16.8Hz, 0.5H, trans), δ6.84 (d, J=13.2Hz, 0.5H, cis), δ7.64 (d, J=16.0Hz, 0.5H, trans), δ6.69〜7.88 (arom.H, 7H).
（５）前記工程（４）で得られた２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−(２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルアミノ)エトキシ]ベンゾオキサゾール４８ｍｇをジエチルエーテル２ｍLに溶解し、室温攪拌下０．１M塩酸エタノール溶液 ０．７４ｍLを滴下した。同温度で３０分攪拌後、減圧下に濃縮し、メタノールとジエチルエーテルによる再結晶により、橙色の結晶として２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−(２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルアミノ)エトキシ]ベンゾオキサゾール塩酸塩３９ｍｇ（cis：trans＝１：１混合物、融点：２０４〜２０８℃）を得た。
1HNMR (d6DMSO)：δ2.99 (s, 6H), δ3.42 (m, 4H), δ4.36 (br.t, J=4.8Hz, 2H), δ4.45 (br.t, J=5.2Hz, 2H), δ6.25 (br.d, J=13.2Hz, 0.5H, cis), δ6.89 (d, J=13.2Hz, 0.5H, cis), δ6.95 (d, J=16.4Hz, 0.5H, trans), δ6.77〜8.05 (m, 7.5H), δ9.39 (br.s, 2H).
【００８５】
〔合成例３〕２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−[N，N−ビス(２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチル)アミノ〕エトキシ]ベンゾオキサゾール塩酸塩（化合物３）の合成
（１）２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−ヒドロキシベンゾオキサゾール １００ｍｇ、N、N−ジメチルホルムアミド５ｍL、トリエタノールアミン１６０ｍｇ、トリフェニルホスフィン２８１ｍｇを仕込み、攪拌下氷水浴にて冷却した。次いで、１．９Mジイソプロピルアゾジカルボキシレートトルエン溶液０．６ｍLを滴下し、室温下に約１７時間攪拌したあと、水を加えて酢酸エチル抽出、水洗浄、飽和食塩水洗浄、無水硫酸ナトリウムによる乾燥後、減圧濃縮し、シリカゲルカラム（クロロホルム：メタノール＝１５：１）により精製して油状の２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−[N，N−ビス(２−ヒドロキシエチル)アミノ〕エトキシ]ベンゾオキサゾール６０ｍｇ（cis：trans＝１：１混合物）を得た。
1HNMR (CDCl3)：δ2.83 (ddd, J=2.4Hz, 4H), δ3.03(s, 6H), δ3.03〜3.06 (m, 2H), δ3.67 (ddd, J=2.4Hz, 4H), δ4.10 (dd, J=2.4Hz, 2H), δ6.25 (d, J=12.4Hz, 0.5H, cis), δ6.85 (d, J=16.4Hz, 0.5H, trans), δ7.64 (d, J=16.0Hz, 0.5H, trans), δ6.70〜7.89 (arom.H, 7.5H).
（２）前記工程（１）で得られた２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−[N，N−ビス(２−ヒドロキシエチル)アミノ〕エトキシ]ベンゾオキサゾール６０ｍｇ、N，N−ジメチルホルムアミド２ｍL、ノナフルオロ−tert−ブタノール１３８ｍｇ、トリフェニルホスフィン１５３ｍｇを仕込み、攪拌下氷水浴にて冷却した。次いで、１．９Mジイソプロピルアゾジカルボキシレートトルエン溶液０．３３ｍLを滴下し、室温下に約１６時間攪拌したあと、水を加えて酢酸エチル抽出、水洗浄、飽和食塩水洗浄、無水硫酸ナトリウムによる乾燥後、減圧濃縮し、シリカゲルカラム（酢酸エチル：n-ヘキサン＝１：１〜４）により精製して油状の２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−〔N，N−ビス(２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチル)アミノ〕エトキシ]ベンゾオキサゾール６４ｍｇ（cis：trans＝１：１混合物）を得た。
1HNMR (CDCl3)：δ3.03 (s, 6H), δ3.00〜3.09 (m, 6H), δ4.01〜4.09 (m, 6H), δ6.25 (d, J=12.8Hz, 0.5H, cis), δ6.79 (d, J=16.0Hz, 0.5H, trans), δ7.65 (d, J=16.0Hz, 0.5H, trans), δ6.70〜7.82 (m, 7.5H).
（３）前記工程（２）で得られた２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−〔N，N−ビス(２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチル)アミノ〕エトキシ]ベンゾオキサゾール６４ｍｇをジエチルエーテル２ｍLに溶解し、室温攪拌下０．１M塩酸エタノール溶液 ０．６８ｍLを滴下した。同温度で３０分攪拌後、減圧下に濃縮し、メタノールとジエチルエーテルによる再結晶により、橙色の結晶として２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−[N，N−ビス(２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチル)アミノ〕エトキシ]ベンゾオキサゾール塩酸塩３６ｍｇ（cis：trans＝１：４混合物、融点：１１４〜１１８℃）を得た。
1HNMR (CD3OD)：δ3.19 (s, 6H), δ3.67 (br.s, 6H), δ4.14 (br.s, 2H), δ4.53(br.s, 4H), δ6.55 (br.d, J=13.2Hz, 0.2H, cis), δ7.02〜7.98 (m, 8.8H).
【００８６】
〔合成例４〕２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−〔２−(４−ヘプタフルオロイソプロピルベンジルアミノ)エトキシ〕エトキシ]ベンゾオキサゾール塩酸塩（化合物４）の合成
（１）４−ヘプタフルオロイソプロピル安息香酸エチルエステル０．４６ｇ（1.45mmol）、９０％水素化ホウ素ナトリウム０．６１ｇ（14.4mmol）をＴＨＦ１０ｍＬに溶解し、５０℃で攪拌下、メタノール２．３ｍＬをゆっくり添加し、そのまま３０分間攪拌した。放冷後、水を投入し酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ロータリーエバポレーターにて溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：n-ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）にて精製し、４−ヘプタフルオロイソプロピルベンジルアルコール０．３３ｇを得た。
1HNMR (CDCl3)：δ1.78 (t, J=6.4Hz, 1H), δ4.78 (d, J=5.6Hz, 2H), δ7.51(d, J=8.8Hz, 2H), δ7.61 (d, J=8.4Hz, 2H).
（２）前記（１）で得られた４−ヘプタフルオロイソプロピルベンジルアルコール０．３３ｇ（1.2mmol）および塩化チオニル１５７ｍｇ（1.32mmol）をジエチルエーテル５ｍＬに添加し、室温で攪拌下、ピリジン１０４ｍｇを添加した。１時間室温で攪拌後、還流下で４時間３０分攪拌した。析出した結晶をろ過し、ろ液の溶媒をロータリーエバポレーターにて留去した。残渣をＤＭＦ３ｍＬで溶解し、フタルイミドカリウムを１７０ｍｇ（0.92mmol）加え５０℃で２時間攪拌した。放冷後、水を投入し氷冷下にて結晶を析出させた。結晶をろ過し、水でかけ洗浄した後に回収し、減圧乾燥して白色結晶のＮ−（４−ヘプタフルオロイソプロピルベンジル）フタルイミド０．２ｇを得た。
1HNMR (CDCl3)：δ4.90 (s, 2H),δ7.56 (s, 4H), δ7.61 (d, J=8.4Hz, 2H), δ7.61(d, J=8.4Hz, 2H).
（３）前記（２）で得られたＮ−（４−ヘプタフルオロイソプロピルベンジル）フタルイミド５０ｍｇをＴＨＦ２ｍＬ中に溶解し、ヒドラジン一水和物６ｍｇを添加後、５０℃で７５分間攪拌した。放冷後エーテルを投入してろ過し、ろ液を回収した。ろ液を水および飽和食塩水にて洗浄後、硫酸マグネシウムにて乾燥し、ロータリーエバポレーターにて溶媒を留去し、減圧乾燥した。その中にＤＭＦ１ｍＬ添加して溶解し、２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−(２−ｐ−トルエンスルホニルオキシエトキシ)エトキシ]ベンゾオキサゾール６２ｍｇ（0.12mmol）および炭酸カリウム３３ｍｇ（0.24mmol）を加え、４０℃で１９時間攪拌した。放冷後ジエチルエーテルを投入し、水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ロータリーエバポレーターにて溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル:n-ヘキサン＝１：１→３：１→１：０）により精製し、２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−〔２−(４−ヘプタフルオロイソプロピルベンジルアミノ)エトキシ〕エトキシ]ベンゾオキサゾール１０ｍｇ（cis：trans＝２：３混合物）を得た。
1HNMR (CDCl3)：δ2.86 (m, 2H), δ3.03 (s, 6H), δ3.71 (m, 2H), δ3.85 (m, 4H), δ4.17 (m, 2H), δ6.24 (d, J=13.2Hz, 0.4H, cis), δ6.80 (d, J=16.8Hz, 0.6H, trans), δ6.83 (d, J=12.4Hz, 0.4H, cis), δ7.64 (d, J=16.4Hz, 0.6H, trans), δ6.7〜7.9 (arom.H, 11H).
（４） 前記（３）で得られた２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−[２−(４−ヘプタフルオロイソプロピルベンジルアミノ)エトキシ]エトキシ]ベンゾオキサゾール ６ｍｇをジエチルエーテル１ｍＬ中に溶解し、１Ｎ−塩酸メタノール溶液を１０μＬ添加し、室温で1時間攪拌した。析出した結晶をろ過し、ジエチルエーテルにてかけ洗浄後、結晶を回収して減圧乾燥した。黄色結晶の２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−〔２−(４−ヘプタフルオロイソプロピルベンジルアミノ)エトキシ〕エトキシ]ベンゾオキサゾール塩酸塩４．２ｍｇ（融点：１７５−１７９℃）を得た。 .
1HNMR (CD3OD)：δ3.02 (s, 6H), δ3.40 (m, 2H), δ3.89 (m, 2H), δ3.71 (m, 2H),δ3.96 (m, 2H), δ4.35 (m, 2H), δ6.80 (d, J=16.4Hz, 1H), δ7.65 (d, J=16.0Hz, 1H), δ6.7〜7.8 (arom.H, 11H).
【００８７】
〔合成例５〕２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−(２−[４−(２，２，２−トリフルオロ−1−ヒドロキ−1−トリフルオロメチルエチル)アニリノ]エトキシ)エトキシ]ベンゾオキサゾール（化合物５）の合成
ノナフルオロ- tert -ブタノールに代えて４−(２，２，２−トリフルオロ−1−ヒドロキ−1−トリフルオロメチルエチル)アニリンを使用する以外は合成例５と同様にして、アモルファス状の標記化合物を得た。
1HNMR (CDCl3)：δ3.03 (s, 6H), δ3.75 (m, 2H), δ3.82 (m, 2H), δ3.94 (m, 2H), δ4.22 (m, 2H), δ6.81 (d, J=16.4Hz, 1H), δ7.64 (d, J=16.4Hz, 1H), δ6.6-7.6 (arom.H, 11H).
【００８８】
〔合成例６〕２−(４−ジメチルアミノスチリル)−５−[２−(２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエトキシ)エトキシ]ベンゾオキサゾール（化合物６）の合成
（１）２−(４−ジメチルアミノスチリル)−５−ヒドロキシベンゾオキサゾール２．８ｇ (10mmol)、トリフェニルホスフィン５．７６ｇ (22mmol)および２−ｐ−トルエンスルホニルオキシエトキシエタノール５．７２ｇ (22mmol)をＤＭＦ１００ｍＬに溶解し、氷浴中、撹拌しながらアゾジカルボン酸ジイソプロピル４．４ｍＬを滴下した。滴下終了後、反応液を室温で３０時間撹拌した後、反応液を水にあけて、ジエチルエーテル2000ｍＬで抽出した。抽出液を十分に水洗した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と飽和食塩水で洗い、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。抽出液を約５０ｍＬまで濃縮すると結晶が析出するので、濾別して、２−(４−ジメチルアミノスチリル)−５−〔２−(２−ｐ−トルエンスルホニルオキシエトキシ)エトキシ〕ベンゾオキサゾール３．０２ｇを黄褐色結晶（融点：１１４〜１１５℃）として得た。
1HNMR (CDCl3)：δ2.40 (3H, s), δ3.03 (6H, s), δ3.80 (4H, m), δ4.08 (2H, m), δ4.21 (2H, m), δ6.71 (2H, d, J=8.6Hz), δ6.81 (1H, d, J=16.2Hz), δ6.87 (1H, dd, J=2.4Hz, J=8.6Hz), δ7.12 (1H, d, J=2.4Hz), δ7.30 (2H, d, J=8.1Hz), δ7.35 (1H, d, J=8.6Hz), δ7.48 (2H, d, J=8.6Hz), δ7.69 (1H, d, J=16.2Hz), δ7.80 (2H, d, J=8.1Hz).
（２）氷冷したＤＭＦ １．５ｍｌ中にノナフルオロ−tert−ブタノール０．０８ｍｌ(0.57mmol)を加え、ついで60％水素化ナトリウム２８ｍｇ(0.7mmol)を加えて、室温で３０分間撹拌した後、前記前記工程（１）で得られた２−(４−ジメチルアミノスチリル)−５−[２−(２−ｐ−トルエンスルホニルオキシエトキシ)エトキシ]ベンゾオキサゾール１５０ｍｇ(0.28mmol)を加えて、撹拌しながら約5５０℃に４０時間加熱した。反応終了後、反応液を水２０ｍＬにあけて酢酸エチルで抽出した。抽出液を十分に水洗し、さらに飽和食塩水で洗った後、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去して得られる残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル：n-へキサン＝１：３）で精製して得られた黄色結晶をn-へキサンで洗うことにより、２−(４−ジメチルアミノスチリル)−５−[２−(２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエトキシ)エトキシ]ベンゾオキサゾール１１１ｍｇを結晶物（融点：１１３〜１１４℃）として得た。
1HNMR(CDCl3)：δ3.03 (6H, s), δ3.83 (2H, m), δ3.91 (2H, m), δ4.18 (4H, m), δ6.71 (2H, d, J=8.6Hz), δ6.81 (1H, d, J=16.2Hz), δ6.90 (1H, dd, J=2.4Hz, J=8.9Hz), δ7.16 (1H, d, J=2.4Hz), δ7.36 (1H, d, J=8.9Hz), δ7.48 (2H, d, J=8.6Hz), δ7.69 (1H, d, J=16.2Hz).
【００８９】
〔合成例７〕２−(４’−ジメチルアミノスチリル)−５−[２−（Ｎ−２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルアミノ）エトキシ] ベンゾオキサゾール・塩酸塩（化合物７）の合成
合成例４（３）において、２−(４−ジメチルアミノスチリル)−６−ヒドロキシベンゾオキサゾールに代えて、２−(４−ジメチルアミノスチリル)−５−ヒドロキシベンゾオキサゾールを使用し、得られた生成物を同（４）で使用した以外は合成例４と同様にして、標記化合物（７）を黄色結晶（融点：> ２００℃）として得た。
1HNMR(d6DMSO)：δ3.03 (6H, s), δ3.46 (4H, m), δ4.38 (2H, m), δ4.51 (2H, m), δ6.78 (2H, d, J=8.6Hz), δ6.99 (1H, d, J=16.2Hz), δ7.03 (1H, dd, J=2.4Hz, J=8.9Hz), δ7.34 (1H, d, J=2.4Hz), δ7.60〜7.80 (3H), δ7.70 (1H, d, J=16.2Hz), δ9.42 (2H, br.s).
【００９０】
〔合成例８〕２−(４−ジメチルアミノスチリル)−５−[２−[ [２−(３−トリフルオロメトキシ)ベンジルアミノエトキシ]エトキシ]ベンゾオキサゾール・塩酸塩（化合物８）の合成
前記合成例６の（１）で得られた２−(４−ジメチルアミノスチリル)−５−[２−(２−ｐ−トルエンスルホニルオキシエトキシ)エトキシ]ベンゾオキサゾール１２４ｍｇ（0.24mmol）と３−(トリフルオロメトキシ)ベンジルアミン１５３ｍｇ（0.80mmol）をＤＭＦ１．３ｍＬに溶解した後、炭酸カリウム１３８ｍｇ（1.0mmol）を加え、撹拌しながら約９５℃に３時間加熱した。反応終了後、反応液を水にあけてジエチルエーテルで抽出した。抽出液を十分に水洗した後、０．５Ｍ−ＨＣｌを加えて振り、０．５Ｍ−ＨＣｌに溶ける部分を集めた。水溶液をジエチルエーテルで洗った後、固体の炭酸水素カリウムを加えてアルカリ性にし、ジクロロメタンで抽出した。抽出液を硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶媒を留去して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール＝200：1）により精製して２−(４−ジメチルアミノスチリル)−５−[２−[ ２−(３−トリフルオロメトキシ)ベンジルアミノエトキシ]エトキシ]ベンゾオキサゾールを得た。得られた精製物をジエチルエーテルに溶解し、１Ｍ−ＨＣｌ／ＥｔＯＨを加えて得られる沈殿をエタノールより再結晶し、目的物である２−(４−ジメチルアミノスチリル)−５−[２−[ [２− (３−トリフルオロメトキシ)ベンジルアミノエトキシ]エトキシ]ベンゾオキサゾール・塩酸塩３４ｍｇを黄色結晶(融点：> ２００℃)として得た。
1HNMR(d6DMSO)：δ3.03 (6H, s), δ3.19 (2H, m), δ3.86 (4H, m), δ4.24 (2H, m), δ4.33 (2H, m), δ6.78 (2H, d, J=8.9Hz), δ6.95 (1H, dd, J=2.4Hz, J=8.6Hz), δ6.97 (1H, d, J=16.2Hz), δ7.27 (1H, d, J=2.4Hz), δ7.57 (1H, d, J=8.6Hz), δ7.60〜7.72 (4H), δ7.81 (1H, br.d, J=7.8Hz), δ7.90 (1H, br.d, J=7.8Hz), δ8.01 (1H, br.s).
【００９１】
〔合成例９〕2-(4-ジメチルアミノスチリル)-5-[2-[ 2- (3-トリフルオロメチル)ベンジルアミノエトキシ]エトキシ]ベンゾオキサゾール・塩酸塩（化合物９）の合成
３-(トリフルオロメトキシ)ベンジルアミンに代えて、3-(トリフルオロメチル)ベンジルアミンを使用する以外は実施例８と同様にして、黄色結晶（融点：> ２００℃）の標記化合物（９）を得た。
1HNMR(d6DMSO)：δ3.03 (6H, s), δ3.18 (2H, m), δ3.85 (4H, m), δ4.25 (4H, m), δ6.78 (2H, d, J=8.6Hz), δ6.96 (1H, dd, J=2.4Hz, J=8.9Hz), δ6.98 (1H, d, J=16.2Hz), δ7.27 (1H, d, J=2.4Hz), δ7.46 (1H, m), δ7.50〜7.70 (6H), δ7.69 (1H, d, J=16.2Hz).
【００９２】
〔合成例１０〕２-(４-ジメチルアミノスチリル)-５-[２-[２-(３,５-ビス(トリフルオロメチル)ベンジルアミノ)エトキシ]エトキシ]ベンゾオキサゾール・塩酸塩（化合物１０）の合成
３-(トリフルオロメトキシ)ベンジルアミンに代えて、３,５-ビス(トリフルオロメチル)ベンジルアミンを使用する以外は実施例８と同様にして、黄色結晶（融点：１７５〜１７７℃）の標記化合物（１０）を得た。
1HNMR(d6DMSO)：δ3.03 (6H, s), δ3.22 (2H, m), δ3.88 (4H, m), δ4.24 (2H, m), δ4.43 (2H, m), δ6.84 (2H, d, J=8.6Hz), δ6.96 (1H, dd, J=2.4Hz, J=8.9Hz), δ7.00 (1H, d, J=16.2Hz), δ7.27 (1H, d, J=2.4Hz), δ7.57 (1H, d, J=8.9Hz), δ7.66 (2H, d, J=8.6Hz), δ7.69 (1H, d, J=16.2Hz), δ8.21 (1H, s), δ8.37 (2H, s), δ9.60 (2H, br.s).
【００９３】
〔合成例１１〕２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−[２−(２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルアミノ)エトキシ]ベンゾチアゾール塩酸塩（化合物１１）の合成
（１）２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−ヒドロキシベンゾチアゾール ９０ｍｇ、ヘキサメチルリン酸トリアミド ２ｍL、N−２−クロロエチル−N−２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルカルバミド酸 tert−ブチルエステル２１８ｍｇを仕込み室温攪拌下６０％水素化ナトリウム ２２ｍｇを徐々に添加した。添加終了後、室温で約１８時間攪拌したあと、約４０℃で約２４時間攪拌し、さらに約６０℃で５時間攪拌した。反応液に水を加えたあと、酢酸エチル抽出、水洗浄、飽和炭酸水素ナトリウム水洗浄、飽和食塩水洗浄、無水硫酸ナトリウムによる乾燥後、減圧濃縮し、シリカゲルカラム（酢酸エチル：n-ヘキサン＝１：２）により精製して油状の２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−[２−(N−tert−ブトキシカルボニル−N−２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルアミノ)エトキシ]ベンゾチアゾール１３５ｍｇを得た。
1HNMR (CDCl3)：δ1.47 (d, J=6.0Hz, 9H), δ3.06 (s, 6H), δ3.64 (br.d, J=6.0Hz, 2H), δ3.67 (br.d, J=5.6Hz 2H), δ4.09〜4.25 (m, 4H), δ6.75 (d, J=8.8Hz, 2H), δ7.01 (dd, J=9.2, 2.4Hz, 1H), δ7.30 (br.s, 1H), δ7.88 (br.d, J=8.4Hz, 1H), δ7.92 (d, J=8.8Hz, 2H).
（２）前記（１）で得られた２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−[２−(N−tert−ブトキシカルボニル−N−２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルアミノ)エトキシ]ベンゾチアゾール１３５ｍｇ、１M塩酸エタノール溶液３ｍLを混合し、約７０℃で１時間攪拌した。反応液に水および飽和炭酸水素ナトリウム水を投入し室温で３０分攪拌したあと、減圧ろ過、水洗浄、減圧乾燥により白色の結晶として２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−[２−(２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルアミノ)エトキシ]ベンゾチアゾール９７ｍｇを得た。
1HNMR (CDCl3)：δ3.02 (t, J=5.0Hz 2H) δ3.05 (s, 6H), δ3.09 (t, J=5.2Hz 4H), δ4.15 (t, J=5.2Hz, 2H) δ4.18 (t, J=5.0Hz, 2H) δ6.74 (d, J=8.8Hz, 2H), δ7.03 (dd, J=8.8, 2.0Hz, 1H), δ7.32（br.d, J=2.0Hz, 1H), δ7.86 (d, J=9.2Hz, 1H), δ7.91 (d, J=8.4Hz, 2H).
（３）前記（２）で得られた２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−[２−(２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルアミノ)エトキシ]ベンゾチアゾール７０ｍｇをジエチルエーテル３ｍLに溶解し、室温攪拌下０．１M塩酸エタノール溶液 １．１６ｍLを滴下した。ジエチルエーテル３ｍLを添加し室温で３０分攪拌後、析出した結晶を減圧下にろ過して、ジエチルエーテル掛け洗浄、減圧乾燥し、白色結晶として２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−[２−(２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルアミノ)エトキシ]ベンゾチアゾール塩酸塩６８ｍｇ（融点２１８〜２２１℃）を得た。
1HNMR (CD3OD)：δ3.06 (s, 6H), δ3.57 (m, 4H), δ4.40 (t, J=5.0Hz, 2H), δ4.50 (t, J=5.0Hz, 2H), δ6.82 (d, J=8.8Hz, 2H), δ7.17 (dd, J=9.0, 2.6Hz, 1H), δ7.58 (d, J=2.4Hz, 1H), δ7.82 (d, J=8.8Hz, 1H), δ7.86 (d, J=9.2Hz, 2H).
【００９４】
〔合成例１２〕２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−[２−〔２−(３−トリフルオロメトキシベンジルアミノ)エトキシ〕エトキシ]ベンゾチアゾール塩酸塩（化合物１３）の合成
（１）２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−ヒドロキシベンゾチアゾール３００ｍｇ、N，N−ジメチルホルムアミド１０ｍL、２−ｐ−トルエンスルホニルオキシエトキシエタノール６３６ｍｇ、トリフェニルホスフィン６４１ｍｇを仕込み，攪拌下氷水浴にて冷却した。次いで、１．９Mジイソプロピルアゾジカルボキシレートトルエン溶液１．３５ｍLを滴下し，室温下に約２時間攪拌したあと、水を加えて酢酸エチル抽出、水洗浄、飽和食塩水洗浄、無水硫酸ナトリウムによる乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣にジエチルエーテル１５ｍLを加え分散したあと、減圧ろ過、ジエチルエーテル掛け洗浄、減圧乾燥により２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−[２−(２−ｐ−トルエンスルホニルオキシエトキシ)エトキシ]ベンゾチアゾール４２９ｍｇを得た。
1HNMR (CDCl3)：δ2.40 (s, 3H), δ3.06 (s, 6H), δ3.79 (t, J=4.6Hz, 2H), δ3.82 (t, J=4.6Hz, 2H), δ4.11 (t, J=4.8Hz, 2H), δ4.22 (t, J=4.6Hz, 2H), δ6.75 (d, J=8.8Hz, 2H), δ7.02 (dd, J=8.8, 2.4Hz, 1H) δ7.29 (m, 3H), δ7.80 (d, J=8.4Hz, 2H), δ7.85 (d, J=8.8Hz, 1H), δ7.91 (d, J=8.0Hz, 2H).
（２）前記（１）で得られた２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−[２−(２−ｐ−トルエンスルホニルオキシエトキシ)エトキシ]ベンゾチアゾール１１６ｍｇ，N，N−ジメチルホルムアミド５ｍL、３−トリフルオロメトキシベンジルアミン８７ｍｇ、炭酸カリウム１２５ｍｇを仕込み約４０℃で３時間攪拌後、室温に戻し１６５時間攪拌した。反応液に水を加えたあと、酢酸エチル抽出、水洗浄、飽和食塩水洗浄、無水硫酸ナトリウムによる乾燥後、減圧濃縮し、シリカゲルカラム（酢酸エチル）により精製して白色結晶の２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−[２−[２−(３−トリフルオロメトキシベンジルアミノ)エトキシ]エトキシ]ベンゾチアゾール３３ｍｇを得た。
1HNMR (CDCl3)：δ2.84 (t, J=5.2Hz 2H), δ3.05 (s, 6H), δ3.70 (t, 5.0Hz, 2H), δ3.83 (s, 2H), δ3.86 (t, J=4.8Hz, 2H), δ4.19 (t, J=4.8Hz, 2H), δ6.74 (d, J=8.8Hz, 2H), δ7.04 (dd, J=9.0, 2.6Hz 1H) δ7.09 (d, J=8.0Hz, 1H), δ7.21 (d, J=8.0Hz, 1H), δ7.24(d, J=8.0Hz, 1H), δ7.33 (m, 2H) , δ7.84 (d, J=9.2Hz, 1H) , δ7.90 (d, J=8.8Hz, 2H).
(3) 前記(2)で得られた２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−[２−〔２−(３−トリフルオロメトキシベンジルアミノ)エトキシ〕エトキシ]ベンゾチアゾール３０ｍｇをジエチルエーテル３ｍLに溶解し、室温攪拌下０．１M塩酸エタノール溶液 ０．５１ｍLを滴下した．室温で３０分攪拌後、析出した結晶を減圧下にろ過して，ジエチルエーテル掛け洗浄，減圧乾燥し，淡黄色結晶として２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−[２−〔２−(３−トリフルオロメトキシベンジルアミノ)エトキシ〕エトキシ]ベンゾチアゾール塩酸塩１８ｍｇ（融点：２０６〜２１２℃）を得た。
1HNMR (d6DMSO)：δ3.00 (s, 6H), δ3.14 (br.s, 2H), δ3.79 (t, J=5.2Hz, 2H), δ3.83 (t, J=4.4Hz, 2H), δ4.22 (m, 4H), δ6.80 (d, J=8.8Hz, 2H), δ7.05 (dd, J=9.0, 2.6Hz, 1H) δ7.40 (br.d, J=6.4Hz, 1H), δ7.55 (m, 3H), δ7.63 (d, J=3.2Hz, 1H), δ7.81 (m, 3H) , δ9.16 (br.s, 2H).
【００９５】
〔合成例１３〕２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−[２−〔２−(５−トリフルオロメチル−２−ピリジルメチルアミノ)エトキシ〕エトキシ]ベンゾチアゾール塩酸塩（化合物１４）の合成
前記合成例１２（２）において、３−トリフルオロメトキシベンジルアミンの代わりに
２−（５−トリフルオロメチル）ピコリルアミンを使用し、得られた生成物を同（３）に使用した以外は前記合成例１２と同様の方法で標記化合物（１４）を黄色結晶（融点：１８２〜１８６℃）として得た。
【００９６】
1HNMR (CD3OD)：δ3.05 (s, 6H), δ3.40 (t, J=5.0Hz, 2H), δ3.94 (t, J=4.8Hz, 2H), δ3.96 (tt, J=8.4, 1.6Hz 2H), δ4.27 (tt, J=4.4, 1.6Hz, 2H), δ4.54 (s, 2H) δ6.82 (d, J=7.2Hz, 2H), δ7.08(dd, J=9.0, 2.6Hz, 1H) δ7.49 (d, J=2.4Hz, 1H), δ7.58 (d, J=8.0Hz, 1H), δ7.76 (d, J=8.8Hz, 1H), δ7.84 (d, J=7.6Hz, 2H), δ8.14 (dd, J=8.0, 1.6Hz, 1H), δ8.91 (s, 1H).
〔試験例１〕
化合物（１）、（４）、（７）、（１０）及び（１１）の各２mg/mlのDMSO溶液を調製した後、各々１００μlを量りとり、０．３％-Triton X100含有１００mM-ホスフェートバッファー（pH７．４）（以下ＰＢＳ−Ｔ）を加えて４ｍlの試験溶液とした（薬液濃度：５０μg/ｍl）。
アルツハイマー症例のヒト脳組織固定標本（２０μm厚）を２％スキムミルク入りＰＢＳ−Ｔ液中に室温で１時間浸漬した後、マウス抗ヒトアミロイドβモノクローナル抗体（４Ｇ８,Signet社）と４℃で一晩反応させた。ついで本検体をＰＢＳ-Ｔで１０分間３回洗浄した後、遮光のうえAlexa６４７抗マウスIgG抗体（MolecularProbes社）と室温で４時間反応させた。４時間後、切片を取り出し上記試験溶液中に移し、遮光下に室温で１時間浸漬した後、ＰＢＳ−Ｔで５分間３回洗浄した。更に50mMトリス塩酸バッファー（pH７．５）で５分間洗浄後、グリセロール封入を行なったものを検体とし倒立型蛍光顕微鏡（IX70、オリンパス）にてアミロイドβ蛋白への化合物の結合能を観察した。尚、化合物像はＤＡＰＩフィルターで、アミロイドβ蛋白像はＣｙ５フィルターで測定した。又、陰性対照試験として0.1%−DMSO含有PBS-T溶液を用いて同染色処理を行なった。
図１及び図２にアルツハーマー病患者の死後脳側頭葉皮質切片における本発明化合物の蛍光染色像と抗アミロイドβ抗体による老人斑の染色像を示す。左列は化合物（ＤＡＰＩ）の染色像、右列はアミロイドβ抗体の染色像を示す。本発明化合物は老人斑を形成するアミロイドβ蛋白と親和性を有し、同一位置に染色を認めた。尚、陰性対照では老人斑特異的な蛍光染色像は認められなかった。
尚、他化合物も同様にアミロイドβ蛋白と高い親和性を示す。
【産業上の利用可能性】
【００９７】
本発明の化合物は、アミロイドβ蛋白に対する親和性が高く、１９Ｆ−ＭＲＩの検出に不可欠な等価なフッ素原子を多く含むためＭＲＩ造影剤として機能し、医療機関に広く普及しているＭＲＩ装置を用いてアルツハイマー病をはじめとするアミロイド蓄積性疾患の生前非侵襲的診断に利用できる。
【図面の簡単な説明】
【００９８】
【図１】アルツハイマー病患者の死後脳側頭葉皮質切片の染色像。
【図２】アルツハイマー病患者の死後脳側頭葉皮質切片の染色像。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断薬、特に、アルツハイマー病のＭＲ画像診断に有用な新規アニリン誘導体又はその塩に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病は、初老期から老年期に起こる進行性の痴呆を特徴とする疾患であり、現在、国内の患者数は１００万人以上と言われている。今後人口の高齢化に伴いその数は確実に増加すると予想される。
【０００３】
アルツハイマー病の臨床症状は、記憶障害、高次脳機能障害（失語、失行、失認、構成失行）等である。その症状は他の痴呆疾患でも共通して見られることが多く、臨床症状だけでアルツハイマー病と確定診断することは極めて困難である。
【０００４】
一方、アルツハイマー病の特徴的な病理組織所見としては、老人斑と神経原線維変化がある。前者の主構成成分はβシート構造をとったアミロイドβ蛋白であり、後者のそれは過剰リン酸化されたタウ蛋白である。アルツハイマー病においては臨床症状が発症するかなり前から、脳内ではアミロイドβ蛋白の蓄積等の上記病理的組織変化が始まっていることが知られている。したがって、脳内のアミロイドβ蛋白をマーカーとして検出することが、アミロイドが蓄積する疾患、特にアルツハイマー病の早期診断方法の１つとなる。このような観点から、近年、脳内アミロイドβ蛋白に選択的に結合するポジトロン断層撮影法（PET）やシングルフォトン断層撮影法（SPECT）用の放射性造影剤の研究が進められている。アミロイドに親和性の高い古典的な化合物としては、アルツハイマー病の病理的確定診断に使用されているコンゴーレッド、チオフラビンSおよびチオフラビンTがある。その多くは、血液―脳関門を通過しがたく静脈内投与しても殆ど脳内へは移行しない。そこで、血液―脳関門の透過性を考慮した造影剤の研究が進められ、ISB、PIB、BF-168（特許文献１）等の造影剤が開発されており、そのいくつかは臨床試験で良好な成績が得られている。しかし、それらは、11C、13N、15O、18F等の放射性核種を用いるため放射線障害による副作用が懸念されるとともに、近くにサイクロトロン施設を併設する必要があり、放射性核種を用いない診断方法が望まれている。
【０００５】
放射性核種を用いない診断方法の一つとして核磁気共鳴イメージング法（MRI）がある。近年、１９Ｆ−ＭＲＩを用いて老人斑の画像化に成功したとの報告（特許文献２、非特許文献１）がなされ、ＭＲＩ診断への期待が高まっている。しかしながら、ＭＲＩはＰＥＴ等に比べ検出感度が低いことが知られており、安全なアルツハイマー病の診断法確立に向け、高感度のＭＲＩ造影剤の開発が切望されている。
【特許文献１】ＷＯ２００３/１０６４３９
【特許文献２】ＷＯ２００５/０４２４６１
【非特許文献１】M.Higuchi et al.,Nature Neuroscience 8(4),527(2005)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、アルツハイマー病のＭＲＩ診断用造影剤として好適なアミロイドβ蛋白に対する高い結合特異性と高い検出感度を併せ持つ物質を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決すべく、鋭意研究を重ねた結果、19Ｆ−ＭＲＩの感度向上に不可欠な等価なＦ原子を多く含む一定の化学構造の化合物が、アミロイドβ蛋白に対し高い結合特異性を持つことを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち、本発明は、式（Ｉ）：
【０００９】
【化１】
【００１０】
（式中、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に水素原子又はＣ１〜６アルキルであり、ＸはＯ又はＳであり、ｍは０又は１であり；Ａ１及びＡ２のどちらか一方は水素原子であり、もう一方は
【００１１】
【化２】
【００１２】
であり、Ｊは、
【００１３】
【化３】
【００１４】
であり、ｎは０〜５の整数であり、Ｑは、
【００１５】
【化４】
【００１６】
であり、Ｒ３は水素原子、フッ素原子、メチル又はトリフルオロメチルであり、Ｒ４はトリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ又は
【００１７】
【化５】
【００１８】
であり、Ｒ５は水素原子、フッ素原子、水酸基、メチル又はトリフルオロメチルであり、Ｙは、ＣＨ、ＣＲ４又はＮであり、ｐは１〜４の整数である。但し、Ａ１が水素原子であり、Ａ２が、
【００１９】
【化６】
【００２０】
であり、ＪがＪ−１又はＪ−２であり、ＱがＱ−５であり、Ｒ４がトリフルオロメチル又はトリフルオロメトキシであり、ｍが１である場合は除く）で表されるアニリン誘導体又はその塩。
【００２１】
また、本発明は、式（Ｉ）の化合物又はその塩を有効成分とするアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断薬に関する。
【００２２】
さらに、本発明は、式（Ｉ）の化合物又はその塩を有効成分とする脳をはじめとする組織中のアミロイドβ蛋白又は老人斑の染色薬に関する。
【００２３】
Ｒ１又はＲ２のアルキル基としては、直鎖又は分枝状のＣ1-6アルキルであればよく、その具体例としてはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、tert-ブチルなどが挙げられ、直鎖又は分枝状のＣ1-3アルキル基が好ましい。Ｒ１とＲ２の一方又は両方がアルキル基であるのが好ましい。
ｎは０〜５の整数であり、好ましくは０〜３の整数である。
ｐは１〜４の整数であり、好ましくは１〜２の整数である。
【００２４】
式（Ｉ）の化合物の塩としては、医薬上許容される塩であればよく、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩などの鉱酸塩；酒石酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、安息香酸塩、グリコール酸塩、琥珀酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩などの有機酸塩などが挙げられる。また、これらの塩の中で結晶水を持つものもある。
【発明の効果】
【００２５】
本発明化合物は、アミロイドβ蛋白に対する高い親和性と高い血液―脳関門透過性を有し、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断薬の有効成分として有用である。更に、本発明化合物は電子的に等価なＦ原子を多く含むため１９Ｆ−ＭＲＩ造影剤の有効成分として特に有用である。また、脳をはじめとする組織中のアミロイドβ蛋白又は老人斑染色薬の有効成分、例えば該蛋白の蛍光染色剤として有用である。従って、本発明化合物を用いれば、アルツハイマー病のようなアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の早期診断が可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
式（Ｉ）の化合物又はその塩は、下記製法〔１〕から〔３〕のいずれかに記載の方法により製造することができる。
製法〔１〕
前記式（Ｉ）において、ＪがＪ−１又はＪ−２である式（Ｉ−ａ）の化合物は、通常、溶媒の存在下で式（II）の化合物と式（III）の化合物とを反応させることにより製造することができる。
【００２７】
【化７】
【００２８】
（式中、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、ｍ及びｎは前述の通りであり、ＪａはＪ−１又はＪ−２であり、Ｔｓはトシル基である）
本反応の溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、石油エーテル、リグロイン、石油ベンジンなどの脂肪族炭化水素類；ジエチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジブチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドなどの酸アミド類；ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類；スルホランなどのスルホン類；ヘキサメチルホスホルアミドなどのリン酸アミド類；クロロホルム、ジクロロメタン、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素類及びこれらの混合溶媒を挙げることができる。
【００２９】
本反応を促進するために塩基を添加することが望ましく、その塩基としては、トリエチルアミン、ピリジン、Ｎ−メチルモルホリン、１，８−ジアザビシクロ〔５.４.０〕−７−ウンデセン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンなどの有機塩基；リチウム、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属；水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどのアルカリ金属の水酸化物；炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムなどのアルカリ金属の炭酸塩；炭酸水素リチウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウムなどのアルカリ金属の炭酸水素塩；水素化リチウム、水素化ナトリウム、水素化カリウムなどのアルカリ金属の水素化物；ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウム tert−ブトキシドなどの金属アルコキシドなどを挙げることができる。塩基は、式（III）の化合物に対して１〜５倍モル、望ましくは１〜３倍モル使用することができる。
【００３０】
本反応は、通常０〜１５０℃、望ましくは２０〜１００℃で行なうことができ、その反応時間は、通常１〜１７０時間程度である。
【００３１】
式（III）の化合物は、式（II）の化合物に対して１〜１０倍モル、望ましくは１〜５倍モル使用することができる。
【００３２】
式（II）の化合物は、公知の類似化合物の製造方法又はそれらに準じた方法によって製造することができる。例えば、下記の製造方法に従い、通常、溶媒中トリフェニルホスフィン及びアゾジカルボン酸ジイソプロピルの存在下で式（IＶ）の化合物と式（Ｖ）の化合物とを反応させることにより式（II）の化合物を製造することができる。
【００３３】
【化８】
【００３４】
（式中、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、ｍ、ｎ及びＴｓは前述の通りである）
本反応の溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、石油エーテル、リグロイン、石油ベンジンなどの脂肪族炭化水素類；ジエチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジブチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドなどの酸アミド類；ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類；スルホランなどのスルホン類；ヘキサメチルホスホルアミドなどのリン酸アミド類；クロロホルム、ジクロロメタン、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素類及びこれらの混合溶媒を挙げることができる。
【００３５】
本反応は、通常−２０〜１００℃、望ましくは０〜５０℃で行うことができ、反応時間は通常１〜３６時間程度である。
【００３６】
式（Ｖ）の化合物は、式（IＶ）の化合物に対して１〜１０倍モル、望ましくは１〜５倍モル使用することができる。
製法〔２〕
前記式（Ｉ）において、ＪがＪ−３であり、ｎが０である式（I−ｂ）の化合物は、式（IＶ）の化合物とトリエタノールアミンとを反応させて式（ＶI）の化合物を製造した後、得られた式（ＶI）の化合物と式（ＶII）の化合物とを反応させることにより製造することができる。
【００３７】
【化９】
【００３８】
（式中、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びｍは前述の通りである）
式（IＶ）の化合物から式（ＶI）の化合物を製造する反応は、通常、溶媒中トリフェニルホスフィン及びアゾジカルボン酸ジイソプロピルの存在下で行うことができる。
【００３９】
溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、石油エーテル、リグロイン、石油ベンジンなどの脂肪族炭化水素類；ジエチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジブチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドなどの酸アミド類；ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類；スルホランなどのスルホン類；ヘキサメチルホスホルアミドなどのリン酸アミド類；クロロホルム、ジクロロメタン、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素類及びこれらの混合溶媒を挙げることができる。
【００４０】
反応は、通常−２０〜１００℃、望ましくは０〜５０℃で行うことができ、反応時間は通常１〜３６時間程度である。
【００４１】
トリエタノールアミンは、式（IＶ）の化合物に対して１〜１０倍モル、望ましくは１〜５倍モル使用することができる。
【００４２】
式（ＶI）化合物と式（ＶII）の化合物とを反応させて式（I-ｂ）の化合物を製造する反応は、通常、溶媒中トリフェニルホスフィン及びアゾジカルボン酸ジイソプロピルの存在下で行うことができる。溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、石油エーテル、リグロイン、石油ベンジンなどの脂肪族炭化水素類；ジエチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジブチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドなどの酸アミド類；ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類；スルホランなどのスルホン類；ヘキサメチルホスホルアミドなどのリン酸アミド類；クロロホルム、ジクロロメタン、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素類及びこれらの混合溶媒を挙げることができる。
【００４３】
反応は、通常−２０〜１００℃、望ましくは０〜５０℃で行うことができ、反応時間は通常１〜３６時間程度である。
【００４４】
式（ＶII）の化合物は、式（ＶI）の化合物に対して１〜１０倍モル、望ましくは１〜５倍モル使用することができる。
製法〔３〕
前記式（Ｉ）において、ＪがＪ−２であり、ＱがＱ−３である式（Ｉ−ｃ）の化合物は、式（ＶIII）の化合物と式（IＸ）の化合物とを反応させて式（Ｘ）の化合物を製造した後、得られた式（Ｘ）の化合物のtert−ブトキシカルボニル基を脱保護することにより製造することができる。
【００４５】
【化１０】
【００４６】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘ、ｍ及びｎは前述の通りであり、Ｈａｌはハロゲンであり、Ｂｏｃはtert−ブトキシカルボニル基である）
式（ＶIII）の化合物と式（IＸ）の化合物から式（Ｘ）の化合物を製造する反応は、通常、塩基及び溶媒の存在下で行なうことができる。
【００４７】
塩基としては、トリエチルアミン、ピリジン、Ｎ−メチルモルホリン、１，８−ジアザビシクロ〔５.４.０〕−７−ウンデセン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンなどの有機塩基；リチウム、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属；水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどのアルカリ金属の水酸化物；炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムなどのアルカリ金属の炭酸塩；炭酸水素リチウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウムなどのアルカリ金属の炭酸水素塩；水素化リチウム、水素化ナトリウム、水素化カリウムなどのアルカリ金属の水素化物；ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウム tert−ブトキシドなどの金属アルコキシドなどを挙げることができる。塩基の使用量は、特に限定されないが、式（ＶIII）の化合物に対して等モルから過剰量である。
【００４８】
溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、石油エーテル、リグロイン、石油ベンジンなどの脂肪族炭化水素類；ジエチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジブチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドなどの酸アミド類；ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類；スルホランなどのスルホン類；ヘキサメチルホスホルアミドなどのリン酸アミド類；クロロホルム、ジクロロメタン、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素類及びこれらの混合溶媒を挙げることができる。
【００４９】
反応は、通常０〜１５０℃、望ましくは０〜１００℃の温度で行われ、反応時間は、通常１〜５０時間程度である。
【００５０】
式(IＸ)の化合物は、式（ＶIII）の化合物に対して０．８〜５倍モル、望ましくは１〜２倍モル使用することができる。
【００５１】
式（Ｘ）の化合物のtert−ブトキシカルボニル基を脱保護する反応は、通常、酸及び溶媒の存在下で処理することにより行なうことができる。
【００５２】
酸としては、塩酸、硫酸、トリフルオロ酢酸等が挙げられる。
【００５３】
溶媒としては、水；メタノール、エタノールなどのアルコール類；テトラヒドロフランなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドなどの酸アミド類；ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類及びこれらの混合溶媒を挙げることができる。
【００５４】
本反応は、通常０〜１００℃、望ましくは３０〜７０℃で行なうことができ、反応時間は、通常０．５〜５時間程度である。
【００５５】
前記式（ＶIII）の化合物は、公知の製造方法又はそれらに準じた製造方法により製造することができる。例えば、式（ＶIII）の化合物のうち、ｎが０の化合物（IＶ）はＷＯ２００５／０１６８８８等に記載の方法に準じて製造することができ、ｎが１〜５の化合物（ＸIII）は下記製法〔Ａ〕又は〔Ｂ〕に記載の方法により製造することができる。
製法〔Ａ〕
【００５６】
【化１１】
【００５７】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ及びｍは前述の定義通りであり、ｑは１〜５であり、Ｚは保護基である）
保護基Ｚとしては、例えばアセチル基、テトラヒドロピラニル基、トリメチルシリル基等が挙げられる。
【００５８】
式（IＶ）の化合物から式（ＸII）の化合物を製造する反応は、通常、溶媒中トリフェニルホスフィン及びアゾジカルボン酸ジイソプロピルの存在下で式（IＶ）の化合物と、式（ＸI）の化合物とを反応することにより行なうことができる。
【００５９】
溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、石油エーテル、リグロイン、石油ベンジンなどの脂肪族炭化水素類；ジエチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジブチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドなどの酸アミド類；ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類；スルホランなどのスルホン類；ヘキサメチルホスホルアミドなどのリン酸アミド類；クロロホルム、ジクロロメタン、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素類及びこれらの混合溶媒を挙げることができる。
【００６０】
本反応は、通常−２０〜１００℃、望ましくは０〜５０℃で行うことができ、反応時間は通常１〜３６時間程度である。
【００６１】
式（ＸI）の化合物は、式（IＶ）の化合物に対して１〜１０倍モル、望ましくは１〜５倍モル使用することができる。
【００６２】
式（ＸII）の化合物の保護基(Ｚ)を脱保護して式（ＸIII）の化合物を得る反応は、通常、酸及び溶媒の存在下で行なうことができる。
【００６３】
酸としては、塩酸、硫酸、トリフルオロ酢酸等が挙げられる。溶媒としては、水；メタノール、エタノールなどのアルコール類；テトラヒドロフランなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドなどの酸アミド類；ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類及びこれらの混合溶媒を挙げることができる。
【００６４】
本反応は、通常０〜１００℃、望ましくは３０〜７０℃で行なうことができ、反応時間は、通常０．５〜５時間程度である。
製法〔Ｂ〕
【００６５】
【化１２】
【００６６】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ、ｍ及びｑは前述の定義通りである。)
【００６７】
本反応は、通常、溶媒中トリフェニルホスフィン及びアゾジカルボン酸ジイソプロピルの存在下で式（IＶ）の化合物と式（ＸIＶ）の化合物とを反応することにより行なうことができる。
【００６８】
溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、石油エーテル、リグロイン、石油ベンジンなどの脂肪族炭化水素類；ジエチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジブチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドなどの酸アミド類；ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類；スルホランなどのスルホン類；ヘキサメチルホスホルアミドなどのリン酸アミド類；クロロホルム、ジクロロメタン、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素類及びこれらの混合溶媒を挙げることができる。
【００６９】
本反応は、通常−２０〜１００℃、望ましくは０〜５０℃で行うことができ、反応時間は通常１〜３６時間程度である。
【００７０】
式（ＸIＶ）の化合物は、式（IＶ）の化合物に対して１〜１０倍モル、望ましくは１〜５倍モル使用することができる。
【００７１】
上記した製法〔１〕〜〔３〕及びそれに付随した方法で得られる前記式（Ｉ）の化合物は、公知の手段、例えば、濃縮、減圧濃縮、蒸留、分留、転溶、溶媒抽出、結晶化、再結晶、クロマトグラフィーなどにより単離、精製することができる。
【００７２】
前記式（Ｉ）の化合物がフリー体で得られる場合、通常の方法で塩を形成させることができる。
【００７３】
式（I）の化合物のいくつかの例を第１表に示す。
【００７４】
第１表
【表１】
【００７５】
式（I）の化合物又はその塩は、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断薬として使用することができる。また、式（I）の化合物又はその塩は、脳をはじめとする組織中のアミロイドβ蛋白又は老人斑染色薬として使用することができる。
【００７６】
本発明の望ましい実施形態は、次のものである。
（１）式（I）の化合物又はその塩を有効成分とするアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断薬。
（２）アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患がアルツハイマー病である（１）に記載の画像診断薬。
（３）脳内アミロイドのＭＲＩ造影剤である（１）又は（２）に記載の画像診断薬。
（４）式（I）の化合物又はその塩を有効成分とする脳をはじめとする組織中のアミロイドβ蛋白又は老人斑染色薬。
（５）アミロイドβ蛋白の蛍光染色薬である（４）に記載の染色薬。
（６）（１）に記載の画像診断薬を用いる、蛋白のβシート構造が病因又は病因の一部となる疾患の診断方法。
（７）（４）に記載の染色薬を用いて組織中のアミロイドβ蛋白又は老人斑を染色する方法。
【００７７】
式（I）の化合物の多くは疎水性の化合物であり、水に対する溶解度は低い。生体に投与する化合物としては水溶解度が高いことが望ましく、式（I）の化合物の内、塩を持つ化合物がより望ましい。
【００７８】
式（I）の化合物又はその塩を画像診断薬として使用する場合、本化合物により脳内の老人斑を特異的に検出することができる。特に、19Ｆ―ＭＲＩを用いて非侵襲的にアミロイドβ蛋白を検出する場合、その検出感度は、フッ素原子の数に依存しており、Ｆ原子の数は多いほうが望ましい。
【００７９】
式（I）の化合物又はその塩を画像診断薬として使用する場合、その投与は、局所的であってもよく、全身的であってもよい。投与方法には特に制限はなく、経口的又は非経口的に投与される。非経口的投与経路としては、皮下、腹腔内、静脈、動脈又は脊髄液への注射又は点滴等が挙げられる。
【００８０】
式（I）の化合物又はその塩を含む画像診断薬は、ヒトへの投与に適した医薬上許容される形態であって、生理学的に許容し得る添加剤を含む。かかる組成物は、適宜、医薬として許容し得る希釈剤、緩衝剤、可溶化剤（例えば、シクロデキストリン、プルロニック、ポリエチレングリコール、Ｔｗｅｅｎ、クレモフォール又はリン脂質のような界面活性剤）、無痛化剤等を添加してもよく、更に必要に応じて、医薬として許容し得る溶剤、安定化剤又は酸化防止剤（例えばアスコルビン酸等）のような成分を含んでもよい。本発明化合物の投与量は、用法、患者の年齢、性別その他の条件、疾患の程度により適宜選択される。
【００８１】
アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患としては、アルツハイマー病の他、ダウン症候群が挙げられ、蛋白のβシート構造が病因又は病因の一部となる疾患しては、アルツハイマー病、ダウン症候群の他、前頭側頭型痴呆症、ピック病、進行核上性麻痺（PSP)、プリオン病等が挙げられる。
【実施例】
【００８２】
次に本発明に係わる合成例及び試験例を記載するが、本発明はこれらに限定されるわけではない。
【００８３】
〔合成例１〕２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−(２−ノナフルオロ- tert -ブトキシエトキシ)エトキシ]ベンゾオキサゾール（化合物１）の合成
ＤＭＦ１ｍｌ中に、ノナフルオロ- tert -ブタノール ５３μＬ（0.380mmol）を滴下し６０％水素化ナトリウム １９ｍｇ（0.475mmol）を加え、室温で30分間攪拌した。攪拌後、２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−(２−ｐ−トルエンスルホニルオキシエトキシ)エトキシ]ベンゾオキサゾール １００ｍｇ（0.192mmol）を加え５０℃で１６時間攪拌した。放冷後、水を投入し、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ロータリーエバポレーターにて溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル:n-ヘキサン＝１：１）により精製した。さらにシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル:n-ヘキサン＝１：２）により精製し、黄色油状の２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−(２−ノナフルオロ- tert -ブトキシエトキシ)エトキシ]ベンゾオキサゾール ５７ｍｇ（cis：trans＝２：３混合物）を得た。
1HNMR (CDCl3)：δ3.04 (s, 6H), δ3.83 (m, 2H), δ3.94 (m, 2H), δ4.18 (m, 4H), δ6.25 (d, J=13.2Hz, 0.4H, cis), δ6.80 (d, J=16.4Hz, 0.6H, trans), δ6.85 (d, J=13.2Hz, 0.4H, cis), δ7.64 (d, J=16.0Hz, 0.6H, trans), δ6.7〜7.9 (arom.H, 7H).
【００８４】
〔合成例２〕２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−〔２−（２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルアミノ）エトキシ〕ベンゾオキサゾール塩酸塩（化合物２）の合成
（１）ビス（２−クロロエチル）アミン０．９ｇをテトラヒドロフラン５ｍLに溶解し、室温攪拌下にジ−tert−ブチルジカーボネート１．５２ｇを滴下したあと、同温度で１７時間攪拌した。反応液に水を加えたあと酢酸エチルで抽出し、水洗浄、飽和食塩水洗浄、無水硫酸ナトリウムによる乾燥後、減圧濃縮により油状のN，N−ビス（２−クロロエチル）カルバミド酸 tert−ブチルエステル１．５３ｇを得た。
1HNMR (CDCl3)：δ1.47 (s, 9H), δ3.60 (m, 6H), δ3.66 (br.d, J=5.6Hz, 2H).
（２）ノナフルオロ−tert−ブタノール１．３ｇをヘキサメチルリン酸トリアミド ５ｍLに溶解し、氷水浴による冷却攪拌下、６０％水素化ナトリウム ２３７ｍｇを徐々に添加した。添加終了後、室温下に２０分攪拌し、次いで前記工程（１）で得られたN，N−ビス（２−クロロエチル）カルバミド酸 tert−ブチルエステル０．５３ｇをヘキサメチルリン酸トリアミド２ｍLに溶解した溶液を滴下した。滴下終了後、約５０℃で約４８時間攪拌し、反応液に水を加えたあと、酢酸エチル抽出、水洗浄、飽和食塩水洗浄、無水硫酸ナトリウムによる乾燥後、減圧濃縮し、シリカゲルカラム（酢酸エチル：n-ヘキサン＝１：２０）により精製して油状のN−２−クロロエチル−N−２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルカルバミド酸 tert−ブチルエステル０．３１ｇを得た。
1HNMR (CDCl3)：δ1.47 (s, 9H), δ3.54〜3.67 (m, 6H), δ4.14 (m, 2H).
（３）前記工程（１）で得られたN−２−クロロエチル−N−２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルカルバミド酸 tert−ブチルエステル３１０ｍｇ、２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−ヒドロキシベンゾオキサゾール １９７ｍｇ、ヘキサメチルリン酸トリアミド ５ｍLを仕込み室温攪拌下６０％水素化ナトリウム ３４ｍｇを徐々に添加した。添加終了後、約５０℃で約２２時間攪拌し、反応液に水を加えたあと、酢酸エチル抽出、水洗浄、飽和食塩水洗浄、無水硫酸ナトリウムによる乾燥後、減圧濃縮し、シリカゲルカラム（酢酸エチル：n-ヘキサン＝１：３）により精製して油状の２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−(N−tert−ブトキシカルボニル−N−２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルアミノ)エトキシ]ベンゾオキサゾール ２３９ｍｇ（cis：trans＝１：１混合物）を得た。1HNMR (CDCl3)：δ1.47 (s, 9H), δ3.10 (s, 6H), δ3.61〜3.69 (m, 4H), δ4.06〜4.25 (m, 4H), δ6.25 (d, J=12.4Hz, 0.5H, cis), δ6.80 (d, J=16.0Hz, 0.5H, trans ), δ7.64(d, J=16.0Hz, 0.5H, trans), δ6.70〜7.88 (arom.H, 7.5H).
（４）前記工程（３）で得られた２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−(N−tert−ブトキシカルボニル−N−２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルアミノ)エトキシ]ベンゾオキサゾール１１０ｍｇ、１M塩酸エタノール溶液３ｍLを混合し、約７０℃で１時間攪拌した。反応液を飽和炭酸水素ナトリウム水５０ｍL中に投入し室温で３０分攪拌したあと、減圧ろ過、水洗浄、減圧乾燥により黄褐色の結晶として２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−(２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルアミノ)エトキシ]ベンゾオキサゾール７８ｍｇ（cis：trans＝１：１混合物）を得た。
1HNMR (CDCl3)：δ3.03 (s, 6H), δ3.00〜3.08 (m, 4H), δ4.09〜4.20 (m, 4H), δ6.25 (d, J=12.8Hz, 0.5H, cis), δ6.80 (d, J=16.8Hz, 0.5H, trans), δ6.84 (d, J=13.2Hz, 0.5H, cis), δ7.64 (d, J=16.0Hz, 0.5H, trans), δ6.69〜7.88 (arom.H, 7H).
（５）前記工程（４）で得られた２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−(２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルアミノ)エトキシ]ベンゾオキサゾール４８ｍｇをジエチルエーテル２ｍLに溶解し、室温攪拌下０．１M塩酸エタノール溶液 ０．７４ｍLを滴下した。同温度で３０分攪拌後、減圧下に濃縮し、メタノールとジエチルエーテルによる再結晶により、橙色の結晶として２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−(２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルアミノ)エトキシ]ベンゾオキサゾール塩酸塩３９ｍｇ（cis：trans＝１：１混合物、融点：２０４〜２０８℃）を得た。
1HNMR (d6DMSO)：δ2.99 (s, 6H), δ3.42 (m, 4H), δ4.36 (br.t, J=4.8Hz, 2H), δ4.45 (br.t, J=5.2Hz, 2H), δ6.25 (br.d, J=13.2Hz, 0.5H, cis), δ6.89 (d, J=13.2Hz, 0.5H, cis), δ6.95 (d, J=16.4Hz, 0.5H, trans), δ6.77〜8.05 (m, 7.5H), δ9.39 (br.s, 2H).
【００８５】
〔合成例３〕２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−[N，N−ビス(２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチル)アミノ〕エトキシ]ベンゾオキサゾール塩酸塩（化合物３）の合成
（１）２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−ヒドロキシベンゾオキサゾール １００ｍｇ、N、N−ジメチルホルムアミド５ｍL、トリエタノールアミン１６０ｍｇ、トリフェニルホスフィン２８１ｍｇを仕込み、攪拌下氷水浴にて冷却した。次いで、１．９Mジイソプロピルアゾジカルボキシレートトルエン溶液０．６ｍLを滴下し、室温下に約１７時間攪拌したあと、水を加えて酢酸エチル抽出、水洗浄、飽和食塩水洗浄、無水硫酸ナトリウムによる乾燥後、減圧濃縮し、シリカゲルカラム（クロロホルム：メタノール＝１５：１）により精製して油状の２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−[N，N−ビス(２−ヒドロキシエチル)アミノ〕エトキシ]ベンゾオキサゾール６０ｍｇ（cis：trans＝１：１混合物）を得た。
1HNMR (CDCl3)：δ2.83 (ddd, J=2.4Hz, 4H), δ3.03(s, 6H), δ3.03〜3.06 (m, 2H), δ3.67 (ddd, J=2.4Hz, 4H), δ4.10 (dd, J=2.4Hz, 2H), δ6.25 (d, J=12.4Hz, 0.5H, cis), δ6.85 (d, J=16.4Hz, 0.5H, trans), δ7.64 (d, J=16.0Hz, 0.5H, trans), δ6.70〜7.89 (arom.H, 7.5H).
（２）前記工程（１）で得られた２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−[N，N−ビス(２−ヒドロキシエチル)アミノ〕エトキシ]ベンゾオキサゾール６０ｍｇ、N，N−ジメチルホルムアミド２ｍL、ノナフルオロ−tert−ブタノール１３８ｍｇ、トリフェニルホスフィン１５３ｍｇを仕込み、攪拌下氷水浴にて冷却した。次いで、１．９Mジイソプロピルアゾジカルボキシレートトルエン溶液０．３３ｍLを滴下し、室温下に約１６時間攪拌したあと、水を加えて酢酸エチル抽出、水洗浄、飽和食塩水洗浄、無水硫酸ナトリウムによる乾燥後、減圧濃縮し、シリカゲルカラム（酢酸エチル：n-ヘキサン＝１：１〜４）により精製して油状の２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−〔N，N−ビス(２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチル)アミノ〕エトキシ]ベンゾオキサゾール６４ｍｇ（cis：trans＝１：１混合物）を得た。
1HNMR (CDCl3)：δ3.03 (s, 6H), δ3.00〜3.09 (m, 6H), δ4.01〜4.09 (m, 6H), δ6.25 (d, J=12.8Hz, 0.5H, cis), δ6.79 (d, J=16.0Hz, 0.5H, trans), δ7.65 (d, J=16.0Hz, 0.5H, trans), δ6.70〜7.82 (m, 7.5H).
（３）前記工程（２）で得られた２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−〔N，N−ビス(２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチル)アミノ〕エトキシ]ベンゾオキサゾール６４ｍｇをジエチルエーテル２ｍLに溶解し、室温攪拌下０．１M塩酸エタノール溶液 ０．６８ｍLを滴下した。同温度で３０分攪拌後、減圧下に濃縮し、メタノールとジエチルエーテルによる再結晶により、橙色の結晶として２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−[N，N−ビス(２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチル)アミノ〕エトキシ]ベンゾオキサゾール塩酸塩３６ｍｇ（cis：trans＝１：４混合物、融点：１１４〜１１８℃）を得た。
1HNMR (CD3OD)：δ3.19 (s, 6H), δ3.67 (br.s, 6H), δ4.14 (br.s, 2H), δ4.53(br.s, 4H), δ6.55 (br.d, J=13.2Hz, 0.2H, cis), δ7.02〜7.98 (m, 8.8H).
【００８６】
〔合成例４〕２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−〔２−(４−ヘプタフルオロイソプロピルベンジルアミノ)エトキシ〕エトキシ]ベンゾオキサゾール塩酸塩（化合物４）の合成
（１）４−ヘプタフルオロイソプロピル安息香酸エチルエステル０．４６ｇ（1.45mmol）、９０％水素化ホウ素ナトリウム０．６１ｇ（14.4mmol）をＴＨＦ１０ｍＬに溶解し、５０℃で攪拌下、メタノール２．３ｍＬをゆっくり添加し、そのまま３０分間攪拌した。放冷後、水を投入し酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ロータリーエバポレーターにて溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：n-ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）にて精製し、４−ヘプタフルオロイソプロピルベンジルアルコール０．３３ｇを得た。
1HNMR (CDCl3)：δ1.78 (t, J=6.4Hz, 1H), δ4.78 (d, J=5.6Hz, 2H), δ7.51(d, J=8.8Hz, 2H), δ7.61 (d, J=8.4Hz, 2H).
（２）前記（１）で得られた４−ヘプタフルオロイソプロピルベンジルアルコール０．３３ｇ（1.2mmol）および塩化チオニル１５７ｍｇ（1.32mmol）をジエチルエーテル５ｍＬに添加し、室温で攪拌下、ピリジン１０４ｍｇを添加した。１時間室温で攪拌後、還流下で４時間３０分攪拌した。析出した結晶をろ過し、ろ液の溶媒をロータリーエバポレーターにて留去した。残渣をＤＭＦ３ｍＬで溶解し、フタルイミドカリウムを１７０ｍｇ（0.92mmol）加え５０℃で２時間攪拌した。放冷後、水を投入し氷冷下にて結晶を析出させた。結晶をろ過し、水でかけ洗浄した後に回収し、減圧乾燥して白色結晶のＮ−（４−ヘプタフルオロイソプロピルベンジル）フタルイミド０．２ｇを得た。
1HNMR (CDCl3)：δ4.90 (s, 2H),δ7.56 (s, 4H), δ7.61 (d, J=8.4Hz, 2H), δ7.61(d, J=8.4Hz, 2H).
（３）前記（２）で得られたＮ−（４−ヘプタフルオロイソプロピルベンジル）フタルイミド５０ｍｇをＴＨＦ２ｍＬ中に溶解し、ヒドラジン一水和物６ｍｇを添加後、５０℃で７５分間攪拌した。放冷後エーテルを投入してろ過し、ろ液を回収した。ろ液を水および飽和食塩水にて洗浄後、硫酸マグネシウムにて乾燥し、ロータリーエバポレーターにて溶媒を留去し、減圧乾燥した。その中にＤＭＦ１ｍＬ添加して溶解し、２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−(２−ｐ−トルエンスルホニルオキシエトキシ)エトキシ]ベンゾオキサゾール６２ｍｇ（0.12mmol）および炭酸カリウム３３ｍｇ（0.24mmol）を加え、４０℃で１９時間攪拌した。放冷後ジエチルエーテルを投入し、水、飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ロータリーエバポレーターにて溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル:n-ヘキサン＝１：１→３：１→１：０）により精製し、２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−〔２−(４−ヘプタフルオロイソプロピルベンジルアミノ)エトキシ〕エトキシ]ベンゾオキサゾール１０ｍｇ（cis：trans＝２：３混合物）を得た。
1HNMR (CDCl3)：δ2.86 (m, 2H), δ3.03 (s, 6H), δ3.71 (m, 2H), δ3.85 (m, 4H), δ4.17 (m, 2H), δ6.24 (d, J=13.2Hz, 0.4H, cis), δ6.80 (d, J=16.8Hz, 0.6H, trans), δ6.83 (d, J=12.4Hz, 0.4H, cis), δ7.64 (d, J=16.4Hz, 0.6H, trans), δ6.7〜7.9 (arom.H, 11H).
（４） 前記（３）で得られた２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−[２−(４−ヘプタフルオロイソプロピルベンジルアミノ)エトキシ]エトキシ]ベンゾオキサゾール ６ｍｇをジエチルエーテル１ｍＬ中に溶解し、１Ｎ−塩酸メタノール溶液を１０μＬ添加し、室温で1時間攪拌した。析出した結晶をろ過し、ジエチルエーテルにてかけ洗浄後、結晶を回収して減圧乾燥した。黄色結晶の２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−〔２−(４−ヘプタフルオロイソプロピルベンジルアミノ)エトキシ〕エトキシ]ベンゾオキサゾール塩酸塩４．２ｍｇ（融点：１７５−１７９℃）を得た。 .
1HNMR (CD3OD)：δ3.02 (s, 6H), δ3.40 (m, 2H), δ3.89 (m, 2H), δ3.71 (m, 2H),δ3.96 (m, 2H), δ4.35 (m, 2H), δ6.80 (d, J=16.4Hz, 1H), δ7.65 (d, J=16.0Hz, 1H), δ6.7〜7.8 (arom.H, 11H).
【００８７】
〔合成例５〕２−（４−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−(２−[４−(２，２，２−トリフルオロ−1−ヒドロキ−1−トリフルオロメチルエチル)アニリノ]エトキシ)エトキシ]ベンゾオキサゾール（化合物５）の合成
ノナフルオロ- tert -ブタノールに代えて４−(２，２，２−トリフルオロ−1−ヒドロキ−1−トリフルオロメチルエチル)アニリンを使用する以外は合成例５と同様にして、アモルファス状の標記化合物を得た。
1HNMR (CDCl3)：δ3.03 (s, 6H), δ3.75 (m, 2H), δ3.82 (m, 2H), δ3.94 (m, 2H), δ4.22 (m, 2H), δ6.81 (d, J=16.4Hz, 1H), δ7.64 (d, J=16.4Hz, 1H), δ6.6-7.6 (arom.H, 11H).
【００８８】
〔合成例６〕２−(４−ジメチルアミノスチリル)−５−[２−(２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエトキシ)エトキシ]ベンゾオキサゾール（化合物６）の合成
（１）２−(４−ジメチルアミノスチリル)−５−ヒドロキシベンゾオキサゾール２．８ｇ (10mmol)、トリフェニルホスフィン５．７６ｇ (22mmol)および２−ｐ−トルエンスルホニルオキシエトキシエタノール５．７２ｇ (22mmol)をＤＭＦ１００ｍＬに溶解し、氷浴中、撹拌しながらアゾジカルボン酸ジイソプロピル４．４ｍＬを滴下した。滴下終了後、反応液を室温で３０時間撹拌した後、反応液を水にあけて、ジエチルエーテル2000ｍＬで抽出した。抽出液を十分に水洗した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と飽和食塩水で洗い、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。抽出液を約５０ｍＬまで濃縮すると結晶が析出するので、濾別して、２−(４−ジメチルアミノスチリル)−５−〔２−(２−ｐ−トルエンスルホニルオキシエトキシ)エトキシ〕ベンゾオキサゾール３．０２ｇを黄褐色結晶（融点：１１４〜１１５℃）として得た。
1HNMR (CDCl3)：δ2.40 (3H, s), δ3.03 (6H, s), δ3.80 (4H, m), δ4.08 (2H, m), δ4.21 (2H, m), δ6.71 (2H, d, J=8.6Hz), δ6.81 (1H, d, J=16.2Hz), δ6.87 (1H, dd, J=2.4Hz, J=8.6Hz), δ7.12 (1H, d, J=2.4Hz), δ7.30 (2H, d, J=8.1Hz), δ7.35 (1H, d, J=8.6Hz), δ7.48 (2H, d, J=8.6Hz), δ7.69 (1H, d, J=16.2Hz), δ7.80 (2H, d, J=8.1Hz).
（２）氷冷したＤＭＦ １．５ｍｌ中にノナフルオロ−tert−ブタノール０．０８ｍｌ(0.57mmol)を加え、ついで60％水素化ナトリウム２８ｍｇ(0.7mmol)を加えて、室温で３０分間撹拌した後、前記前記工程（１）で得られた２−(４−ジメチルアミノスチリル)−５−[２−(２−ｐ−トルエンスルホニルオキシエトキシ)エトキシ]ベンゾオキサゾール１５０ｍｇ(0.28mmol)を加えて、撹拌しながら約5５０℃に４０時間加熱した。反応終了後、反応液を水２０ｍＬにあけて酢酸エチルで抽出した。抽出液を十分に水洗し、さらに飽和食塩水で洗った後、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去して得られる残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル：n-へキサン＝１：３）で精製して得られた黄色結晶をn-へキサンで洗うことにより、２−(４−ジメチルアミノスチリル)−５−[２−(２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエトキシ)エトキシ]ベンゾオキサゾール１１１ｍｇを結晶物（融点：１１３〜１１４℃）として得た。
1HNMR(CDCl3)：δ3.03 (6H, s), δ3.83 (2H, m), δ3.91 (2H, m), δ4.18 (4H, m), δ6.71 (2H, d, J=8.6Hz), δ6.81 (1H, d, J=16.2Hz), δ6.90 (1H, dd, J=2.4Hz, J=8.9Hz), δ7.16 (1H, d, J=2.4Hz), δ7.36 (1H, d, J=8.9Hz), δ7.48 (2H, d, J=8.6Hz), δ7.69 (1H, d, J=16.2Hz).
【００８９】
〔合成例７〕２−(４’−ジメチルアミノスチリル)−５−[２−（Ｎ−２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルアミノ）エトキシ] ベンゾオキサゾール・塩酸塩（化合物７）の合成
合成例４（３）において、２−(４−ジメチルアミノスチリル)−６−ヒドロキシベンゾオキサゾールに代えて、２−(４−ジメチルアミノスチリル)−５−ヒドロキシベンゾオキサゾールを使用し、得られた生成物を同（４）で使用した以外は合成例４と同様にして、標記化合物（７）を黄色結晶（融点：> ２００℃）として得た。
1HNMR(d6DMSO)：δ3.03 (6H, s), δ3.46 (4H, m), δ4.38 (2H, m), δ4.51 (2H, m), δ6.78 (2H, d, J=8.6Hz), δ6.99 (1H, d, J=16.2Hz), δ7.03 (1H, dd, J=2.4Hz, J=8.9Hz), δ7.34 (1H, d, J=2.4Hz), δ7.60〜7.80 (3H), δ7.70 (1H, d, J=16.2Hz), δ9.42 (2H, br.s).
【００９０】
〔合成例８〕２−(４−ジメチルアミノスチリル)−５−[２−[ [２−(３−トリフルオロメトキシ)ベンジルアミノエトキシ]エトキシ]ベンゾオキサゾール・塩酸塩（化合物８）の合成
前記合成例６の（１）で得られた２−(４−ジメチルアミノスチリル)−５−[２−(２−ｐ−トルエンスルホニルオキシエトキシ)エトキシ]ベンゾオキサゾール１２４ｍｇ（0.24mmol）と３−(トリフルオロメトキシ)ベンジルアミン１５３ｍｇ（0.80mmol）をＤＭＦ１．３ｍＬに溶解した後、炭酸カリウム１３８ｍｇ（1.0mmol）を加え、撹拌しながら約９５℃に３時間加熱した。反応終了後、反応液を水にあけてジエチルエーテルで抽出した。抽出液を十分に水洗した後、０．５Ｍ−ＨＣｌを加えて振り、０．５Ｍ−ＨＣｌに溶ける部分を集めた。水溶液をジエチルエーテルで洗った後、固体の炭酸水素カリウムを加えてアルカリ性にし、ジクロロメタンで抽出した。抽出液を硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶媒を留去して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン：メタノール＝200：1）により精製して２−(４−ジメチルアミノスチリル)−５−[２−[ ２−(３−トリフルオロメトキシ)ベンジルアミノエトキシ]エトキシ]ベンゾオキサゾールを得た。得られた精製物をジエチルエーテルに溶解し、１Ｍ−ＨＣｌ／ＥｔＯＨを加えて得られる沈殿をエタノールより再結晶し、目的物である２−(４−ジメチルアミノスチリル)−５−[２−[ [２− (３−トリフルオロメトキシ)ベンジルアミノエトキシ]エトキシ]ベンゾオキサゾール・塩酸塩３４ｍｇを黄色結晶(融点：> ２００℃)として得た。
1HNMR(d6DMSO)：δ3.03 (6H, s), δ3.19 (2H, m), δ3.86 (4H, m), δ4.24 (2H, m), δ4.33 (2H, m), δ6.78 (2H, d, J=8.9Hz), δ6.95 (1H, dd, J=2.4Hz, J=8.6Hz), δ6.97 (1H, d, J=16.2Hz), δ7.27 (1H, d, J=2.4Hz), δ7.57 (1H, d, J=8.6Hz), δ7.60〜7.72 (4H), δ7.81 (1H, br.d, J=7.8Hz), δ7.90 (1H, br.d, J=7.8Hz), δ8.01 (1H, br.s).
【００９１】
〔合成例９〕2-(4-ジメチルアミノスチリル)-5-[2-[ 2- (3-トリフルオロメチル)ベンジルアミノエトキシ]エトキシ]ベンゾオキサゾール・塩酸塩（化合物９）の合成
３-(トリフルオロメトキシ)ベンジルアミンに代えて、3-(トリフルオロメチル)ベンジルアミンを使用する以外は実施例８と同様にして、黄色結晶（融点：> ２００℃）の標記化合物（９）を得た。
1HNMR(d6DMSO)：δ3.03 (6H, s), δ3.18 (2H, m), δ3.85 (4H, m), δ4.25 (4H, m), δ6.78 (2H, d, J=8.6Hz), δ6.96 (1H, dd, J=2.4Hz, J=8.9Hz), δ6.98 (1H, d, J=16.2Hz), δ7.27 (1H, d, J=2.4Hz), δ7.46 (1H, m), δ7.50〜7.70 (6H), δ7.69 (1H, d, J=16.2Hz).
【００９２】
〔合成例１０〕２-(４-ジメチルアミノスチリル)-５-[２-[２-(３,５-ビス(トリフルオロメチル)ベンジルアミノ)エトキシ]エトキシ]ベンゾオキサゾール・塩酸塩（化合物１０）の合成
３-(トリフルオロメトキシ)ベンジルアミンに代えて、３,５-ビス(トリフルオロメチル)ベンジルアミンを使用する以外は実施例８と同様にして、黄色結晶（融点：１７５〜１７７℃）の標記化合物（１０）を得た。
1HNMR(d6DMSO)：δ3.03 (6H, s), δ3.22 (2H, m), δ3.88 (4H, m), δ4.24 (2H, m), δ4.43 (2H, m), δ6.84 (2H, d, J=8.6Hz), δ6.96 (1H, dd, J=2.4Hz, J=8.9Hz), δ7.00 (1H, d, J=16.2Hz), δ7.27 (1H, d, J=2.4Hz), δ7.57 (1H, d, J=8.9Hz), δ7.66 (2H, d, J=8.6Hz), δ7.69 (1H, d, J=16.2Hz), δ8.21 (1H, s), δ8.37 (2H, s), δ9.60 (2H, br.s).
【００９３】
〔合成例１１〕２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−[２−(２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルアミノ)エトキシ]ベンゾチアゾール塩酸塩（化合物１１）の合成
（１）２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−ヒドロキシベンゾチアゾール ９０ｍｇ、ヘキサメチルリン酸トリアミド ２ｍL、N−２−クロロエチル−N−２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルカルバミド酸 tert−ブチルエステル２１８ｍｇを仕込み室温攪拌下６０％水素化ナトリウム ２２ｍｇを徐々に添加した。添加終了後、室温で約１８時間攪拌したあと、約４０℃で約２４時間攪拌し、さらに約６０℃で５時間攪拌した。反応液に水を加えたあと、酢酸エチル抽出、水洗浄、飽和炭酸水素ナトリウム水洗浄、飽和食塩水洗浄、無水硫酸ナトリウムによる乾燥後、減圧濃縮し、シリカゲルカラム（酢酸エチル：n-ヘキサン＝１：２）により精製して油状の２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−[２−(N−tert−ブトキシカルボニル−N−２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルアミノ)エトキシ]ベンゾチアゾール１３５ｍｇを得た。
1HNMR (CDCl3)：δ1.47 (d, J=6.0Hz, 9H), δ3.06 (s, 6H), δ3.64 (br.d, J=6.0Hz, 2H), δ3.67 (br.d, J=5.6Hz 2H), δ4.09〜4.25 (m, 4H), δ6.75 (d, J=8.8Hz, 2H), δ7.01 (dd, J=9.2, 2.4Hz, 1H), δ7.30 (br.s, 1H), δ7.88 (br.d, J=8.4Hz, 1H), δ7.92 (d, J=8.8Hz, 2H).
（２）前記（１）で得られた２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−[２−(N−tert−ブトキシカルボニル−N−２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルアミノ)エトキシ]ベンゾチアゾール１３５ｍｇ、１M塩酸エタノール溶液３ｍLを混合し、約７０℃で１時間攪拌した。反応液に水および飽和炭酸水素ナトリウム水を投入し室温で３０分攪拌したあと、減圧ろ過、水洗浄、減圧乾燥により白色の結晶として２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−[２−(２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルアミノ)エトキシ]ベンゾチアゾール９７ｍｇを得た。
1HNMR (CDCl3)：δ3.02 (t, J=5.0Hz 2H) δ3.05 (s, 6H), δ3.09 (t, J=5.2Hz 4H), δ4.15 (t, J=5.2Hz, 2H) δ4.18 (t, J=5.0Hz, 2H) δ6.74 (d, J=8.8Hz, 2H), δ7.03 (dd, J=8.8, 2.0Hz, 1H), δ7.32（br.d, J=2.0Hz, 1H), δ7.86 (d, J=9.2Hz, 1H), δ7.91 (d, J=8.4Hz, 2H).
（３）前記（２）で得られた２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−[２−(２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルアミノ)エトキシ]ベンゾチアゾール７０ｍｇをジエチルエーテル３ｍLに溶解し、室温攪拌下０．１M塩酸エタノール溶液 １．１６ｍLを滴下した。ジエチルエーテル３ｍLを添加し室温で３０分攪拌後、析出した結晶を減圧下にろ過して、ジエチルエーテル掛け洗浄、減圧乾燥し、白色結晶として２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−[２−(２−ノナフルオロ−tert−ブトキシエチルアミノ)エトキシ]ベンゾチアゾール塩酸塩６８ｍｇ（融点２１８〜２２１℃）を得た。
1HNMR (CD3OD)：δ3.06 (s, 6H), δ3.57 (m, 4H), δ4.40 (t, J=5.0Hz, 2H), δ4.50 (t, J=5.0Hz, 2H), δ6.82 (d, J=8.8Hz, 2H), δ7.17 (dd, J=9.0, 2.6Hz, 1H), δ7.58 (d, J=2.4Hz, 1H), δ7.82 (d, J=8.8Hz, 1H), δ7.86 (d, J=9.2Hz, 2H).
【００９４】
〔合成例１２〕２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−[２−〔２−(３−トリフルオロメトキシベンジルアミノ)エトキシ〕エトキシ]ベンゾチアゾール塩酸塩（化合物１３）の合成
（１）２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−ヒドロキシベンゾチアゾール３００ｍｇ、N，N−ジメチルホルムアミド１０ｍL、２−ｐ−トルエンスルホニルオキシエトキシエタノール６３６ｍｇ、トリフェニルホスフィン６４１ｍｇを仕込み，攪拌下氷水浴にて冷却した。次いで、１．９Mジイソプロピルアゾジカルボキシレートトルエン溶液１．３５ｍLを滴下し，室温下に約２時間攪拌したあと、水を加えて酢酸エチル抽出、水洗浄、飽和食塩水洗浄、無水硫酸ナトリウムによる乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣にジエチルエーテル１５ｍLを加え分散したあと、減圧ろ過、ジエチルエーテル掛け洗浄、減圧乾燥により２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−[２−(２−ｐ−トルエンスルホニルオキシエトキシ)エトキシ]ベンゾチアゾール４２９ｍｇを得た。
1HNMR (CDCl3)：δ2.40 (s, 3H), δ3.06 (s, 6H), δ3.79 (t, J=4.6Hz, 2H), δ3.82 (t, J=4.6Hz, 2H), δ4.11 (t, J=4.8Hz, 2H), δ4.22 (t, J=4.6Hz, 2H), δ6.75 (d, J=8.8Hz, 2H), δ7.02 (dd, J=8.8, 2.4Hz, 1H) δ7.29 (m, 3H), δ7.80 (d, J=8.4Hz, 2H), δ7.85 (d, J=8.8Hz, 1H), δ7.91 (d, J=8.0Hz, 2H).
（２）前記（１）で得られた２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−[２−(２−ｐ−トルエンスルホニルオキシエトキシ)エトキシ]ベンゾチアゾール１１６ｍｇ，N，N−ジメチルホルムアミド５ｍL、３−トリフルオロメトキシベンジルアミン８７ｍｇ、炭酸カリウム１２５ｍｇを仕込み約４０℃で３時間攪拌後、室温に戻し１６５時間攪拌した。反応液に水を加えたあと、酢酸エチル抽出、水洗浄、飽和食塩水洗浄、無水硫酸ナトリウムによる乾燥後、減圧濃縮し、シリカゲルカラム（酢酸エチル）により精製して白色結晶の２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−[２−[２−(３−トリフルオロメトキシベンジルアミノ)エトキシ]エトキシ]ベンゾチアゾール３３ｍｇを得た。
1HNMR (CDCl3)：δ2.84 (t, J=5.2Hz 2H), δ3.05 (s, 6H), δ3.70 (t, 5.0Hz, 2H), δ3.83 (s, 2H), δ3.86 (t, J=4.8Hz, 2H), δ4.19 (t, J=4.8Hz, 2H), δ6.74 (d, J=8.8Hz, 2H), δ7.04 (dd, J=9.0, 2.6Hz 1H) δ7.09 (d, J=8.0Hz, 1H), δ7.21 (d, J=8.0Hz, 1H), δ7.24(d, J=8.0Hz, 1H), δ7.33 (m, 2H) , δ7.84 (d, J=9.2Hz, 1H) , δ7.90 (d, J=8.8Hz, 2H).
(3) 前記(2)で得られた２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−[２−〔２−(３−トリフルオロメトキシベンジルアミノ)エトキシ〕エトキシ]ベンゾチアゾール３０ｍｇをジエチルエーテル３ｍLに溶解し、室温攪拌下０．１M塩酸エタノール溶液 ０．５１ｍLを滴下した．室温で３０分攪拌後、析出した結晶を減圧下にろ過して，ジエチルエーテル掛け洗浄，減圧乾燥し，淡黄色結晶として２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−[２−〔２−(３−トリフルオロメトキシベンジルアミノ)エトキシ〕エトキシ]ベンゾチアゾール塩酸塩１８ｍｇ（融点：２０６〜２１２℃）を得た。
1HNMR (d6DMSO)：δ3.00 (s, 6H), δ3.14 (br.s, 2H), δ3.79 (t, J=5.2Hz, 2H), δ3.83 (t, J=4.4Hz, 2H), δ4.22 (m, 4H), δ6.80 (d, J=8.8Hz, 2H), δ7.05 (dd, J=9.0, 2.6Hz, 1H) δ7.40 (br.d, J=6.4Hz, 1H), δ7.55 (m, 3H), δ7.63 (d, J=3.2Hz, 1H), δ7.81 (m, 3H) , δ9.16 (br.s, 2H).
【００９５】
〔合成例１３〕２−（４−ジメチルアミノフェニル）−６−[２−〔２−(５−トリフルオロメチル−２−ピリジルメチルアミノ)エトキシ〕エトキシ]ベンゾチアゾール塩酸塩（化合物１４）の合成
前記合成例１２（２）において、３−トリフルオロメトキシベンジルアミンの代わりに
２−（５−トリフルオロメチル）ピコリルアミンを使用し、得られた生成物を同（３）に使用した以外は前記合成例１２と同様の方法で標記化合物（１４）を黄色結晶（融点：１８２〜１８６℃）として得た。
【００９６】
1HNMR (CD3OD)：δ3.05 (s, 6H), δ3.40 (t, J=5.0Hz, 2H), δ3.94 (t, J=4.8Hz, 2H), δ3.96 (tt, J=8.4, 1.6Hz 2H), δ4.27 (tt, J=4.4, 1.6Hz, 2H), δ4.54 (s, 2H) δ6.82 (d, J=7.2Hz, 2H), δ7.08(dd, J=9.0, 2.6Hz, 1H) δ7.49 (d, J=2.4Hz, 1H), δ7.58 (d, J=8.0Hz, 1H), δ7.76 (d, J=8.8Hz, 1H), δ7.84 (d, J=7.6Hz, 2H), δ8.14 (dd, J=8.0, 1.6Hz, 1H), δ8.91 (s, 1H).
〔試験例１〕
化合物（１）、（４）、（７）、（１０）及び（１１）の各２mg/mlのDMSO溶液を調製した後、各々１００μlを量りとり、０．３％-Triton X100含有１００mM-ホスフェートバッファー（pH７．４）（以下ＰＢＳ−Ｔ）を加えて４ｍlの試験溶液とした（薬液濃度：５０μg/ｍl）。
アルツハイマー症例のヒト脳組織固定標本（２０μm厚）を２％スキムミルク入りＰＢＳ−Ｔ液中に室温で１時間浸漬した後、マウス抗ヒトアミロイドβモノクローナル抗体（４Ｇ８,Signet社）と４℃で一晩反応させた。ついで本検体をＰＢＳ-Ｔで１０分間３回洗浄した後、遮光のうえAlexa６４７抗マウスIgG抗体（MolecularProbes社）と室温で４時間反応させた。４時間後、切片を取り出し上記試験溶液中に移し、遮光下に室温で１時間浸漬した後、ＰＢＳ−Ｔで５分間３回洗浄した。更に50mMトリス塩酸バッファー（pH７．５）で５分間洗浄後、グリセロール封入を行なったものを検体とし倒立型蛍光顕微鏡（IX70、オリンパス）にてアミロイドβ蛋白への化合物の結合能を観察した。尚、化合物像はＤＡＰＩフィルターで、アミロイドβ蛋白像はＣｙ５フィルターで測定した。又、陰性対照試験として0.1%−DMSO含有PBS-T溶液を用いて同染色処理を行なった。
図１及び図２にアルツハーマー病患者の死後脳側頭葉皮質切片における本発明化合物の蛍光染色像と抗アミロイドβ抗体による老人斑の染色像を示す。左列は化合物（ＤＡＰＩ）の染色像、右列はアミロイドβ抗体の染色像を示す。本発明化合物は老人斑を形成するアミロイドβ蛋白と親和性を有し、同一位置に染色を認めた。尚、陰性対照では老人斑特異的な蛍光染色像は認められなかった。
尚、他化合物も同様にアミロイドβ蛋白と高い親和性を示す。
【産業上の利用可能性】
【００９７】
本発明の化合物は、アミロイドβ蛋白に対する親和性が高く、１９Ｆ−ＭＲＩの検出に不可欠な等価なフッ素原子を多く含むためＭＲＩ造影剤として機能し、医療機関に広く普及しているＭＲＩ装置を用いてアルツハイマー病をはじめとするアミロイド蓄積性疾患の生前非侵襲的診断に利用できる。
【図面の簡単な説明】
【００９８】
【図１】アルツハイマー病患者の死後脳側頭葉皮質切片の染色像。
【図２】アルツハイマー病患者の死後脳側頭葉皮質切片の染色像。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
（式中、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に水素原子又はＣ１〜６アルキルであり、ＸはＯ又はＳであり、ｍは０又は１であり；Ａ１及びＡ２のどちらか一方は水素原子であり、もう一方は
【化２】
であり、Ｊは、
【化３】
であり、ｎは０〜５の整数であり、Ｑは、
【化４】
であり、Ｒ３は水素原子、フッ素原子、メチル又はトリフルオロメチルであり、Ｒ４はトリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ又は
【化５】
であり、Ｒ５は水素原子、フッ素原子、水酸基、メチル又はトリフルオロメチルであり、Ｙは、ＣＨ、ＣＲ４又はＮであり、ｐは１〜４の整数である。但し、Ａ１が水素原子であり、Ａ２が、
【化６】
であり、ＪがＪ−１又はＪ−２であり、ＱがＱ−５であり、Ｒ４がトリフルオロメチル又はトリフルオロメトキシであり、ｍが１である場合は除く）で表されるアニリン誘導体又はその塩。
【請求項２】
ｍが０である、請求項１に記載のアニリン誘導体又はその塩。
【請求項３】
ｍが１である、請求項１に記載のアニリン誘導体又はその塩。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載のアニリン誘導体又はその塩を有効成分とするアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断薬。
【請求項５】
アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患がアルツハイマー病である請求項４に記載の画像診断薬。
【請求項６】
画像診断がＭＲＩである請求項４又は５記載の画像診断薬。
【請求項７】
請求項４又は５に記載の画像診断薬を用いる、蛋白のβシート構造が病因又は病因の一部となる疾患の診断方法。
【請求項８】
請求項１〜３のいずれか１項に記載のアニリン誘導体又はその塩を有効成分とする脳をはじめとする組織中のアミロイドβ蛋白又は老人斑の染色薬。
【請求項９】
請求項８に記載の染色薬を用いて組織中のアミロイドβ蛋白又は老人斑を染色する方法。
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
（式中、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に水素原子又はＣ１〜６アルキルであり、ＸはＯ又はＳであり、ｍは０又は１であり；Ａ１及びＡ２のどちらか一方は水素原子であり、もう一方は
【化２】
であり、Ｊは、
【化３】
であり、ｎは０〜５の整数であり、Ｑは、
【化４】
であり、Ｒ３は水素原子、フッ素原子、メチル又はトリフルオロメチルであり、Ｒ４はトリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ又は
【化５】
であり、Ｒ５は水素原子、フッ素原子、水酸基、メチル又はトリフルオロメチルであり、Ｙは、ＣＨ、ＣＲ４又はＮであり、ｐは１〜４の整数である。但し、Ａ１が水素原子であり、Ａ２が、
【化６】
であり、ＪがＪ−１又はＪ−２であり、ＱがＱ−５であり、Ｒ４がトリフルオロメチル又はトリフルオロメトキシであり、ｍが１である場合は除く）で表されるアニリン誘導体又はその塩。
【請求項２】
ｍが０である、請求項１に記載のアニリン誘導体又はその塩。
【請求項３】
ｍが１である、請求項１に記載のアニリン誘導体又はその塩。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載のアニリン誘導体又はその塩を有効成分とするアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断薬。
【請求項５】
アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患がアルツハイマー病である請求項４に記載の画像診断薬。
【請求項６】
画像診断がＭＲＩである請求項４又は５記載の画像診断薬。
【請求項７】
請求項４又は５に記載の画像診断薬を用いる、蛋白のβシート構造が病因又は病因の一部となる疾患の診断方法。
【請求項８】
請求項１〜３のいずれか１項に記載のアニリン誘導体又はその塩を有効成分とする脳をはじめとする組織中のアミロイドβ蛋白又は老人斑の染色薬。
【請求項９】
請求項８に記載の染色薬を用いて組織中のアミロイドβ蛋白又は老人斑を染色する方法。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２００９−６７７６２（Ｐ２００９−６７７６２Ａ）
【公開日】平成２１年４月２日（２００９．４．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−２４０９０１（Ｐ２００７−２４０９０１）
【出願日】平成１９年９月１８日（２００７．９．１８）
【出願人】（５０４１７７２８４）国立大学法人滋賀医科大学 (41)
【出願人】（３９１０４８０４９）滋賀県 (81)
【出願人】（００００００３５４）石原産業株式会社 (289)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年４月２日（２００９．４．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年９月１８日（２００７．９．１８）
【出願人】（５０４１７７２８４）国立大学法人滋賀医科大学 (41)
【出願人】（３９１０４８０４９）滋賀県 (81)
【出願人】（００００００３５４）石原産業株式会社 (289)
【Ｆターム（参考）】
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