脂肪蓄積抑制剤
【課題】優れた脂肪蓄積抑制効果を有するホエータンパク質加水分解物からなる脂肪蓄積抑制剤の提供。
【解決手段】分子量分布が１０ｋＤａ以下でメインピーク２００Ｄａ〜３ｋＤａ、ＡＰＬ（平均ペプチド鎖長）が２〜８、全ての構成成分に対する遊離アミノ酸含量が２０％以下、分岐鎖アミノ酸含量が２０％以上、抗原性はβ-ラクトグロブリンの抗原性の１／１００，０００以下であるホエータンパク質加水分解物を用いた脂肪蓄積抑制剤。
【解決手段】分子量分布が１０ｋＤａ以下でメインピーク２００Ｄａ〜３ｋＤａ、ＡＰＬ（平均ペプチド鎖長）が２〜８、全ての構成成分に対する遊離アミノ酸含量が２０％以下、分岐鎖アミノ酸含量が２０％以上、抗原性はβ-ラクトグロブリンの抗原性の１／１００，０００以下であるホエータンパク質加水分解物を用いた脂肪蓄積抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、苦味が少なく、安定性及び安全性に優れたホエータンパク質加水分解物を有効成分とする脂肪蓄積抑制剤に関するものである。
本発明はまた、苦味が少なく、安定性及び安全性に優れたホエータンパク質加水分解物を有効成分として含有した脂肪蓄積抑制用飲食品、脂肪蓄積抑制用栄養組成物、又は脂肪蓄積抑制用飼料に関する。
本発明の脂肪蓄積抑制剤は、高齢化や老化によって代謝が低下し体脂肪が蓄積することの防止に有効で、且つ苦味が少なく、安定性及び安全性に優れた脂肪蓄積抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
高齢化や老化は、生物の身体に様々な生理学的変調（基礎代謝の低下による脂肪の蓄積、骨格筋の萎縮、骨の脱灰など）を起こすことが知られている。特に脂肪の蓄積による肥満については、心筋梗塞・致死率の増加や、生活の質（Ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｆｅ：ＱＯＬ）の低下につながることが問題となっている（非特許文献１、非特許文献２）。これに伴い、心筋梗塞の症例や致死率を低減させることを目的として、肥満の改善方法に関する研究が盛んに行われている（非特許文献３、非特許文献４）。
肥満を改善する方法としては食生活の改善や継続的な適度の運動等が挙げられるが、これらはある程度の忍耐や苦痛を伴うものである。このような背景から、食事成分によって肥満を改善しようとする試みが行われており、例えば、大豆ペプチドの摂取によるダイエット効果に関する報告がなされている（特許文献１）。
【０００３】
牛乳や乳製品は、食物アレルギーの原因として挙げられることが多いが、なかでも、ヒトの母乳中には含まれないホエータンパク質がアレルゲンとなっていると考えられている。このため、ホエータンパク質を酵素で加水分解することでアレルゲン性を低下させる方法が知られており、特許文献２等の方法が報告されている。
特に、特許文献３の方法で製造されたホエータンパク質加水分解物は、Inhibition ELISA法（非特許文献５）での測定により、抗原性がβ-ラクトグロブリンに比べて１／１０,０００以下、ホエータンパク質に比べて１／１０,０００以下になることが確認されている。一方で、このホエータンパク質加水分解物は、経口摂取により、筋肉増強効果があることが明らかになっており、低アレルゲン性と機能性を併せ持つ素材として注目されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００２−２０３１２号公報
【特許文献３】国際公開番号ＷＯ２００８／１１１５６２
【非特許文献１】Obesity in Old Age, I.M.Chapman, Obesity and Metabolism. Front Horm Res. Basel, Karger, 2008, Vol.36, pp97-106
【非特許文献２】Obesity as an independent risk factor for cardiovascular disease, Circulation 1983, Vol. 67, pp968-977
【非特許文献３】Primary prevention of cardiovascular disease, Acta Med Croatica 2009, Vol. 63, pp71-74
【非特許文献４】Prevention of excess gain, Int. J. Obes (Lond) 2009, in press.
【非特許文献５】日本小児アレルギー学会誌、１、36（1987）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
現在知られている大豆ペプチドの摂取による肥満の解消方法は、確かに効果が認められるものではあるが、大豆ペプチド特有の苦味があり、また水に分散させた際に白濁するため、飲食品等に使用するには制限があり、特に透明性を求める製品には使用できないという問題がある。一方、牛乳中のホエータンパク質の加水分解によって得られるホエータンパク質加水分解物は、抗原性も低く、苦味や沈殿も生じないことから、飲食品への添加に適しているが、脂肪の蓄積抑制効果に関する報告は無い。
【０００６】
そこで、本発明は、上記の課題に鑑み、苦味や白濁、沈殿を生じることなく、かつ脂肪蓄積抑制効果を有する脂肪蓄積抑制剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、鋭意研究の結果、牛乳中のホエータンパク質の加水分解によって得られるホエータンパク質加水分解物に高い脂肪蓄積抑制効果があることを見出し、この知見に基づいて本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、以下の脂肪蓄積抑制剤及び、該脂肪蓄積抑制剤を含有させてなる脂肪蓄積抑制用飲食品、飼料を提供するものである。
【０００８】
（１）以下の特徴を有するホエータンパク質加水分解物を有効成分とする脂肪蓄積抑制剤。
１．分子量分布が１０ｋＤａ以下でメインピーク２００Ｄａ〜３ｋＤａ
２．ＡＰＬ（平均ペプチド鎖長）は２〜８
３．遊離アミノ酸含量２０％以下
４．分岐鎖アミノ酸含量２０％以上
５．抗原性が、β-ラクトグロブリンの１／１００，０００以下
（２）前記ホエータンパク質加水分解物が、ホエータンパク質をｐＨ６〜１０、５０〜７０℃において耐熱性のタンパク質加水分解酵素を用いて熱変性させながら分解する分解工程と、前記分解工程を経た後、加熱して酵素を失活させる失活工程と、を経て得られるものであることを特徴とする（１）に記載の脂肪蓄積抑制剤。
（３）前記ホエータンパク質加水分解物が、ホエータンパク質をｐＨ６〜１０、２０〜５５℃においてタンパク質加水分解酵素を用いて分解する前分解工程と、前記前分解工程を経た後、５０〜７０℃に昇温させ、ｐＨ６〜１０、５０〜７０℃において耐熱性のタンパク質加水分解酵素を用いて未分解のホエータンパク質を熱変性させながら分解する分解工程と、前記分解工程を経た後に、加熱して酵素を失活させる失活工程と、を経て得られるものである（１）に記載の脂肪蓄積抑制剤。
（４）前記ホエータンパク質加水分解物が、ホエータンパク質をｐＨ６〜１０、２０〜５５℃においてタンパク質加水分解酵素を用いて分解する前分解工程と、前記前分解工程を経た後に５０〜７０℃に昇温させ、ｐＨ６〜１０、５０〜７０℃において耐熱性のタンパク質加水分解酵素を用いて未分解のホエータンパク質を熱変性させながら分解する分解工程と、前記分解工程を経た後に加熱して酵素を失活させる酵素失活工程と、分画分子量１〜２０ｋＤａの限外ろ過膜処理する限外ろ過工程と、前記限外ろ過工程を経て得られた透過液を、分画分子量１００〜５００ｋＤａの精密ろ過膜処理し、未投下物を得る精密ろ過工程と、を経ることによって得られるものである（１）に記載の脂肪蓄積抑制剤。
（５）（１）〜（４）のいずれかに記載の脂肪蓄積抑制剤を含むことを特徴とする脂肪蓄積抑制用飲食品、栄養組成物又は飼料。
（６）ホエータンパク質をｐＨ６〜１０、５０〜７０℃において耐熱性のタンパク質加水分解酵素を用いて熱変性させながら分解する分解工程と、前記分解工程を経た後、加熱して酵素を失活させる失活工程と、を有する脂肪蓄積抑制剤の製造方法。
（７）前記分解工程の前工程として、ホエータンパク質をｐＨ６〜１０、２０〜５５℃においてタンパク質加水分解酵素を用いて分解する前分解工程を有する（６）記載の脂肪蓄積抑制剤の製造方法。
（８）前記失活工程の後工程として、分画分子量１〜２０ｋＤａの限外ろ過膜処理する限外ろ過工程と、前記限外ろ過工程を経て得られた透過液を、分画分子量１００〜５００Ｄａの精密ろ過膜処理し、未透過物を得る精密ろ過工程と、を有する（６）又は（７）記載の脂肪蓄積抑制剤の製造方法。
（９）以下の特徴を有するホエータンパク質加水分解物を１０ｇ／日以上摂取することによる脂肪蓄積抑制方法。
１．分子量分布が１０ｋＤａ以下でメインピーク２００Ｄａ〜３ｋＤａ
２．ＡＰＬ（平均ペプチド鎖長）は２〜８
３．遊離アミノ酸含量２０％以下
４．分岐鎖アミノ酸含量２０％以上
５．抗原性が、β-ラクトグロブリンの１／１００，０００以下
【発明の効果】
【０００９】
本発明の脂肪蓄積抑制剤は、顕著な脂肪蓄積抑制作用効果を有するものである。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明を詳細に説明する。
[有効成分]
この脂肪蓄積抑制剤の有効成分として用いるホエータンパク質加水分解物は、以下の性質を有するものである。
・ 分子量分布が１０ｋＤａ以下でメインピーク２００Ｄａ〜3ｋＤａ
・ ＡＰＬ（平均ペプチド鎖長）は２〜８
・ 遊離アミノ酸含量２０％以下
・ 分岐鎖アミノ酸含量２０％以上
・ 抗原性がβ-ラクトグロブリンの１／１００，０００以下
すなわち、本願発明の有効成分であるホエータンパク質加水分解物は、抗原性がβ-ラクトグロブリンに比べて１／１００，０００以下、ホエータンパク質に比べて１／１００，０００以下であることから、食物アレルギーの抑制という観点から極めて安全である。また、その水溶液は透明で、苦味度も２程度であることから、脂肪蓄積抑制剤として使用する際に味や外観の面での制限がなく、特に、透明性を求める脂肪蓄積抑制剤に対しても高配合が可能である。また、ホエータンパク質加水分解物を限外ろ過（ＵＦ）膜や精密ろ過（ＭＦ）膜処理することにより、水への溶解能を向上させることができる。
さらに、上記脂肪蓄積抑制剤を有効成分として含有する脂肪蓄積抑制能を有し、安全性に優れた脂肪蓄積抑制用飲食品、脂肪蓄積抑制用栄養組成物や脂肪蓄積抑制用飼料を提供できる。なお、本発明の脂肪蓄積抑制剤は、ホエータンパク質を原料としているため、簡便且つ経済的に容易に製造することができる。
【００１１】
[製造方法]
本発明の脂肪蓄積抑制剤に含有されるホエータンパク質加水分解物は、ホエータンパク質をｐＨ６〜１０、５０〜７０℃とし、これに耐熱性のタンパク質加水分解酵素を加えて熱変性させながら分解した後、加熱して酵素を失活させることにより得られる。また、上記酵素分解を行う前に、ホエータンパク質をｐＨ６〜１０、２０〜５５℃においてタンパク質加水分解酵素を用いて分解し、これを冷却することなくただちに上記条件で酵素分解することによって収率を一層高めることができる。
なお、上記のように調製したホエータンパク質加水分解物を、さらに分画分子量１ｋＤａ〜２０ｋＤａ、好ましくは２ｋＤａ〜１０ｋＤａの限外ろ過（ＵＦ）膜及び/又は分画分子量１００Ｄａ〜５００Ｄａ、好ましくは１５０Ｄａ〜３００Ｄａの精密ろ過（ＭＦ）膜から選択される方法で濃縮することにより、一層脂肪蓄積抑制作用を高めることができる。また、さらに苦味を低減し、透明性を高めることができる。
本発明におけるホエータンパク質は、牛、水牛、山羊、ヒト等の哺乳動物のホエー、その凝集物、粉末、あるいは精製タンパク質をいい、これを酵素反応させるときは水溶液の状態で使用する。
この溶液をｐＨ６〜１０に調整するが、通常ホエータンパク質はこの範囲のｐＨになっているので格別ｐＨの調整を行う必要はないが、必要な場合は塩酸、クエン酸及び乳酸等の酸溶液あるいは苛性ソーダ、水酸化カルシウム及びリン酸ソーダ等のアルカリ溶液を用いてｐＨ６〜１０とする。また、加熱によって５０〜７０℃まで昇温するが、耐熱性のタンパク質加水分解酵素は、昇温後に添加するよりも、加熱前に添加し、加温中も酵素分解を行っていた方が収率の面からは好ましい。
一般的なタンパク質加水分解酵素であるProtease（プロテアーゼ）の至適温度は４０℃以下であるが、耐熱性のタンパク質加水分解酵素は４５℃以上であり、耐熱性のタンパク質加水分解酵素としては、このような至適温度を有する耐熱性のタンパク質加水分解酵素であれば特に制限無く用いることができる。このような耐熱性のタンパク質加水分解酵素として、例えば、パパイン、プロテアーゼS（商品名）、プロレザー（商品名）、サモアーゼ（商品名）、アルカラーゼ（商品名）、プロチンＡ（商品名）等を例示することができる。耐熱性のタンパク質加水分解酵素は８０℃で３０分加熱して残存活性が１０％あるいはそれ以上になるものが望ましい。また、単独よりも複数の酵素を併用するとより効果的である。反応は３０分〜１０時間程度行うことが好ましい。
最後に反応液を加熱して酵素を失活させる。酵素の失活は反応液を１００℃以上で１０秒間以上加熱することにより行うことができる。
酵素を失活させた後、反応液を遠心分離して上清を回収し、上清を乾燥して粉末製品とする。なお、遠心分離した時に生じる沈殿物は上清に比べて低アレルゲン化の程度が小さいので、除去した方が好ましいが、抗原性の問題がなければ、反応液をそのまま乾燥して使用しても差し支えない。
この方法により得られるホエータンパク質加水分解物は、Inhibition ELISA法で測定して、抗原性がβ-ラクトグロブリンに比べて１／１００，０００以下、ホエータンパク質に比べて１／１００，０００以下になることが確認されているため、極めて安全である。また、その水溶液は透明で、苦味度も２程度であることから、製品に使用する際に色及び風味の点で課題が少ない。なお、透明性及び苦味の評価は下記の方法により評価した。
透明性評価法：１％ホエータンパク質加水分解物溶液を調製し、６５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
苦味評価法：１０％ホエータンパク質加水分解物溶液を調製し、苦味物質である塩酸キニーネを添加して、苦味を評価する。表１に示すように、苦味点数が2点以下であれば、飲食品などに利用可能である。
また、得られたホエータンパク質のＡＰＬについては、ＨＰＬＣ等の方法によって測定することができる。
【００１２】
【表１】
【００１３】
[使用方法]
本発明のホエータンパク質加水分解物は、そのまま脂肪蓄積抑制剤として使用することが可能であるが、常法に従い、粉末剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、ドリンク剤等に製剤化して用いることも出来る。また、さらに限外ろ過（ＵＦ）膜や精密ろ過（ＭＦ）膜処理により得られたホエータンパク質加水分解物についても、そのまま脂肪蓄積抑制剤として使用することも可能であり、そのまま乾燥しても使用できる。また、常法に従い、製剤化して用いることもできる。
さらに、これらを製剤化した後、栄養剤やヨーグルト、飲料、乳飲料、ウエハース等の飲食品、飼料及びサプリメント等に配合することも可能である。
脂肪蓄積抑制用飲食品、脂肪蓄積抑制用栄養組成物、脂肪蓄積抑制用飼料におけるタンパク質分解物の配合量は、特に制限はないが、成人一人一日あたりホエータンパク質加水分解物を１０ｇ以上、好ましくは２０ｇ以上摂取できるように商品設計を行うことが好ましい。
本発明の脂肪蓄積抑制剤は、上記の有効成分に適当な助剤を添加して任意の形態に製剤化して、経口投与が可能な脂肪蓄積抑制剤とすることができる。
【００１４】
以下に、実施例および比較例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例等に何ら限定されるものではない。
【００１５】
［実施例１］
ホエータンパク質１０％水溶液１Lに、パパイン５０Ｕ／ｇ・ホエータンパク質、及びプロレザー（Proleather : 天野エンザイム社製）１５０Ｕ／ｇ・ホエータンパク質となるように加え、ｐＨ８に調整し、５５℃において６時間ホエータンパク質を変性させながら酵素分解を行った。反応液を１００℃で１５秒間以上加熱して酵素を失活させ、遠心分離して上清を回収し、これを乾燥してホエータンパク質加水分解物（実施例品１）を得た。得られたホエータンパク質加水分解物（実施例品１）の分子量分布は１０ｋＤａ以下、メインピークは１．３ｋＤａ、ＡＰＬは７．２、全ての構成成分に対する遊離アミノ酸含量は１８．９％であった。
Inhibition ELISA法によってβ-ラクトグロブリンに対する抗原性の低下を測定したところ、１／１００，０００以下で収率（酵素反応液を遠心分離し、仕込み量の乾燥重量に対する上清の乾燥重量の比率(％)）８０．３％、苦味度は２であった。
このようにして得られたホエータンパク質加水分解物（実施例品１）は、そのまま発明の脂肪蓄積抑制剤として使用可能である。
【００１６】
［実施例２］
ホエータンパク質１０％水溶液１Lに、パパイン５０Ｕ／ｇ・ホエータンパク質、及びプロレザー１５０Ｕ/ｇ・ホエータンパク質を加え、ｐＨ８、５０℃で３時間酵素分解を行った。これを５５℃に昇温させ、この温度で３時間維持し、タンパク質を変性させるとともに、タンパク質の酵素分解を行い、１００℃で１５秒間以上加熱して酵素を失活させた。この反応液を分画分子量１０ｋＤａのＵＦ膜（ＳＴＣ社製）及び分画分子量３００ＤａのＭＦ膜（ＳＴＣ社製）処理を行い、濃縮液画分を回収し、これを乾燥してホエータンパク質加水分解物（実施例品２）を得た。
得られたホエータンパク質加水分解物（実施例品２）の分子量分布は１０ｋＤａ以下、メインピークは５００Ｄａ、ＡＰＬは３．０、全ての構成成分に対する遊離アミノ酸含量は１５．２％であった。
Inhibition ELISA法によってβ-ラクトグロブリンに対する抗原性の低下を測定したところ、１／１００，０００以下となっており、収率６５．４％、苦味度は２であった。このようにして得られたホエータンパク質加水分解物（実施例品２）は、そのまま本発明の脂肪蓄積抑制剤として使用可能である。
【００１７】
［比較例１］
ホエータンパク質１２０ｇを精製水１，８００ｍｌに溶解し、１Ｍ苛性ソーダ溶液でｐＨを７．０に調整した。次いで、６０℃で１０分間加熱して殺菌し、４５℃に保持してアマノＡ（天野エンザイム社製）２０ｇを添加し、２時間反応させた。８０℃で１０分間加熱して酵素を失活させ、凍結乾燥し、ホエータンパク質加水分解物（比較例品１）を得た。得られたホエータンパク質加水分解物の分解率は１８％、収率は８０．６％であった。
【００１８】
［比較例２］
ホエータンパク質１２０ｇを精製水１，８００ｍｌに溶解し、１Ｍ苛性ソーダ溶液でｐＨを７．０に調整した。次いで、６０℃で１０分間加熱して殺菌し、４５℃に保持してアマノＡ（天野エンザイム社性）２０ｇを添加し、８時間反応させた。８０℃で１０分間加熱して酵素を失活させ、凍結乾燥し、ホエータンパク質加水分解物を得た。得られたホエータンパク質加水分解物の分解率３０％、収率８０．６％であった。
【００１９】
［試験例１］
（透明性試験）
実施例１，２及び比較例１，２の各タンパク質加水分解物の１％水溶液を調製し、６５０ｎｍにおける吸光度を測定した。その結果を表２に示す。
【００２０】
【表２】
【００２１】
実施例品１、実施例品２のホエータンパク質加水分解物は吸光度が低いことからわかるように、透明性が高い。一方、比較試料においては、実施例１，２のホエータンパク質加水分解物に比べて吸光度が高く透明性が低いことがわかった。また、膜処理をした実施例品２の吸光度は、実施例品１のより低く、透明性に優れていた。
【００２２】
[試験例２]
（脂肪蓄積抑制試験）
実験動物として、日本ＳＬＣより購入した２０週齢のＳＡＭ−Ｐ系雌ラットを体重が等しくなるように５群に分類した（各群n=６〜10、144±6.8g）。餌はＡＩＮ９３標準試料をベースにカゼインタンパク質を加水分解前のホエータンパク質、実施例品１、実施例品２、比較例品１で置き換えたものを与えた。また、一方、肥満のコントロールとして２０週齢のＳＡＭ−Ｒ系雌ラット（n=8、143±5.4g）に対し、ＡＩＮ９３標準試料与えた。各群とも摂取量は自由としたが、２〜３日毎に摂食量の測定を行った。各群のラットは４５週齢まで飼育した後、ペントバルビタールナトリウム（５０ｍｇ/ｋｇ）による麻酔下で、白色脂肪組織（ＷＡＴ）を摘出し、白色脂肪組織重量の測定に供した。白色脂肪組織の体重あたりの相対白色脂肪組織重を測定した結果を表３に示す。
【００２３】
【表３】
【００２４】
体重あたりの相対白色脂肪細胞重量は、標準飼料群では、コントロール群に比べて優位な白色脂肪細胞重量の増加を示した。これは、ＳＡＭ−Ｐ系雌ラットは老化促進マウスであり、ＳＡＭ−Ｒ系に比べて基礎代謝量が低下していることを示している。一方、ホエータンパク質群及び、比較例品１群では標準飼料群と比較しても有意差はみられず、ホエータンパク質及び比較例１群の摂取では脂肪蓄積を抑制できないことを示している。
一方、実施例品１および実施例品２を摂取した群においては、標準飼料群やホエータンパク質群、比較例品１群と比較して、有意に白色脂肪細胞重量の増加量が低いことが認められる。すなわち、本発明の脂肪蓄積抑制剤の摂取により、脂肪の蓄積が抑制されていることを示している。以上の結果から、本願発明の脂肪蓄積抑制剤は、優れた脂肪蓄積抑制効果を有し、肥満によって引き起こされる心筋梗塞・致死率の増加の防止、ならびに生活の質低下防止に有用であることが示唆された。
【００２５】
［実施例３］
（脂肪蓄積抑制用錠剤の製造）
表４に示す配合で原材料を混合後、常法により１ｇに成型、打錠して本発明の脂肪蓄積抑制用錠剤を製造した。
【００２６】
【表４】
【００２７】
［実施例４］
（脂肪蓄積抑制用栄養組成物の製造）
５００ｇの実施例品２を４５００ｇの脱イオン水に溶解し、５０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６０００ｒｐｍで３０分間攪拌混合して、溶液Ａを得た。この溶液Ａ５．０ｋｇに、カゼイン５．０ｋｇ、大豆タンパク質５．０ｋｇ、魚油１．０ｋｇ、シソ油３．０ｋｇ、デキストリン１８．０ｋｇ、ミネラル混合物６．０ｋｇ、ビタミン混合物１．９５ｋｇ、乳化剤２．０ｋｇ、安定剤４．０ｋｇ、香料０．０５ｋｇを配合し、２００ｍｌのレトルトパウチに充填し、レトルト殺菌機（第１種圧力容器、ＴＹＰＥ：ＲＣＳ-４ＣＲＴＧＮ、日阪製作所製）で１２１℃、２０分間殺菌して、本発明の脂肪蓄積抑制用栄養素生物５０ｋｇを製造した。
【００２８】
［実施例５］
（脂肪蓄積抑制用飲料の調製）
脱脂粉乳３０ｇを６７０ｇの脱イオン水に溶解した後、実施例品１を１０ｇ溶解し、５０℃まで加熱後、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、９５００ｒｐｍで３０分間攪拌混合した。マルチトール１００ｇ、酸味料２ｇ、還元水飴２０ｇ、香料２ｇ、脱イオン水１６６ｇを添加した後、１００ｍｌのガラス瓶に充填し、９０℃、１５分間殺菌後、密栓し、本発明の脂肪蓄積抑制用飲料１０本（１００ｍｌ入り）を調製した。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、苦味が少なく、安定性及び安全性に優れたホエータンパク質加水分解物を有効成分とする脂肪蓄積抑制剤に関するものである。
本発明はまた、苦味が少なく、安定性及び安全性に優れたホエータンパク質加水分解物を有効成分として含有した脂肪蓄積抑制用飲食品、脂肪蓄積抑制用栄養組成物、又は脂肪蓄積抑制用飼料に関する。
本発明の脂肪蓄積抑制剤は、高齢化や老化によって代謝が低下し体脂肪が蓄積することの防止に有効で、且つ苦味が少なく、安定性及び安全性に優れた脂肪蓄積抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
高齢化や老化は、生物の身体に様々な生理学的変調（基礎代謝の低下による脂肪の蓄積、骨格筋の萎縮、骨の脱灰など）を起こすことが知られている。特に脂肪の蓄積による肥満については、心筋梗塞・致死率の増加や、生活の質（Ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｆｅ：ＱＯＬ）の低下につながることが問題となっている（非特許文献１、非特許文献２）。これに伴い、心筋梗塞の症例や致死率を低減させることを目的として、肥満の改善方法に関する研究が盛んに行われている（非特許文献３、非特許文献４）。
肥満を改善する方法としては食生活の改善や継続的な適度の運動等が挙げられるが、これらはある程度の忍耐や苦痛を伴うものである。このような背景から、食事成分によって肥満を改善しようとする試みが行われており、例えば、大豆ペプチドの摂取によるダイエット効果に関する報告がなされている（特許文献１）。
【０００３】
牛乳や乳製品は、食物アレルギーの原因として挙げられることが多いが、なかでも、ヒトの母乳中には含まれないホエータンパク質がアレルゲンとなっていると考えられている。このため、ホエータンパク質を酵素で加水分解することでアレルゲン性を低下させる方法が知られており、特許文献２等の方法が報告されている。
特に、特許文献３の方法で製造されたホエータンパク質加水分解物は、Inhibition ELISA法（非特許文献５）での測定により、抗原性がβ-ラクトグロブリンに比べて１／１０,０００以下、ホエータンパク質に比べて１／１０,０００以下になることが確認されている。一方で、このホエータンパク質加水分解物は、経口摂取により、筋肉増強効果があることが明らかになっており、低アレルゲン性と機能性を併せ持つ素材として注目されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００２−２０３１２号公報
【特許文献３】国際公開番号ＷＯ２００８／１１１５６２
【非特許文献１】Obesity in Old Age, I.M.Chapman, Obesity and Metabolism. Front Horm Res. Basel, Karger, 2008, Vol.36, pp97-106
【非特許文献２】Obesity as an independent risk factor for cardiovascular disease, Circulation 1983, Vol. 67, pp968-977
【非特許文献３】Primary prevention of cardiovascular disease, Acta Med Croatica 2009, Vol. 63, pp71-74
【非特許文献４】Prevention of excess gain, Int. J. Obes (Lond) 2009, in press.
【非特許文献５】日本小児アレルギー学会誌、１、36（1987）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
現在知られている大豆ペプチドの摂取による肥満の解消方法は、確かに効果が認められるものではあるが、大豆ペプチド特有の苦味があり、また水に分散させた際に白濁するため、飲食品等に使用するには制限があり、特に透明性を求める製品には使用できないという問題がある。一方、牛乳中のホエータンパク質の加水分解によって得られるホエータンパク質加水分解物は、抗原性も低く、苦味や沈殿も生じないことから、飲食品への添加に適しているが、脂肪の蓄積抑制効果に関する報告は無い。
【０００６】
そこで、本発明は、上記の課題に鑑み、苦味や白濁、沈殿を生じることなく、かつ脂肪蓄積抑制効果を有する脂肪蓄積抑制剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、鋭意研究の結果、牛乳中のホエータンパク質の加水分解によって得られるホエータンパク質加水分解物に高い脂肪蓄積抑制効果があることを見出し、この知見に基づいて本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、以下の脂肪蓄積抑制剤及び、該脂肪蓄積抑制剤を含有させてなる脂肪蓄積抑制用飲食品、飼料を提供するものである。
【０００８】
（１）以下の特徴を有するホエータンパク質加水分解物を有効成分とする脂肪蓄積抑制剤。
１．分子量分布が１０ｋＤａ以下でメインピーク２００Ｄａ〜３ｋＤａ
２．ＡＰＬ（平均ペプチド鎖長）は２〜８
３．遊離アミノ酸含量２０％以下
４．分岐鎖アミノ酸含量２０％以上
５．抗原性が、β-ラクトグロブリンの１／１００，０００以下
（２）前記ホエータンパク質加水分解物が、ホエータンパク質をｐＨ６〜１０、５０〜７０℃において耐熱性のタンパク質加水分解酵素を用いて熱変性させながら分解する分解工程と、前記分解工程を経た後、加熱して酵素を失活させる失活工程と、を経て得られるものであることを特徴とする（１）に記載の脂肪蓄積抑制剤。
（３）前記ホエータンパク質加水分解物が、ホエータンパク質をｐＨ６〜１０、２０〜５５℃においてタンパク質加水分解酵素を用いて分解する前分解工程と、前記前分解工程を経た後、５０〜７０℃に昇温させ、ｐＨ６〜１０、５０〜７０℃において耐熱性のタンパク質加水分解酵素を用いて未分解のホエータンパク質を熱変性させながら分解する分解工程と、前記分解工程を経た後に、加熱して酵素を失活させる失活工程と、を経て得られるものである（１）に記載の脂肪蓄積抑制剤。
（４）前記ホエータンパク質加水分解物が、ホエータンパク質をｐＨ６〜１０、２０〜５５℃においてタンパク質加水分解酵素を用いて分解する前分解工程と、前記前分解工程を経た後に５０〜７０℃に昇温させ、ｐＨ６〜１０、５０〜７０℃において耐熱性のタンパク質加水分解酵素を用いて未分解のホエータンパク質を熱変性させながら分解する分解工程と、前記分解工程を経た後に加熱して酵素を失活させる酵素失活工程と、分画分子量１〜２０ｋＤａの限外ろ過膜処理する限外ろ過工程と、前記限外ろ過工程を経て得られた透過液を、分画分子量１００〜５００ｋＤａの精密ろ過膜処理し、未投下物を得る精密ろ過工程と、を経ることによって得られるものである（１）に記載の脂肪蓄積抑制剤。
（５）（１）〜（４）のいずれかに記載の脂肪蓄積抑制剤を含むことを特徴とする脂肪蓄積抑制用飲食品、栄養組成物又は飼料。
（６）ホエータンパク質をｐＨ６〜１０、５０〜７０℃において耐熱性のタンパク質加水分解酵素を用いて熱変性させながら分解する分解工程と、前記分解工程を経た後、加熱して酵素を失活させる失活工程と、を有する脂肪蓄積抑制剤の製造方法。
（７）前記分解工程の前工程として、ホエータンパク質をｐＨ６〜１０、２０〜５５℃においてタンパク質加水分解酵素を用いて分解する前分解工程を有する（６）記載の脂肪蓄積抑制剤の製造方法。
（８）前記失活工程の後工程として、分画分子量１〜２０ｋＤａの限外ろ過膜処理する限外ろ過工程と、前記限外ろ過工程を経て得られた透過液を、分画分子量１００〜５００Ｄａの精密ろ過膜処理し、未透過物を得る精密ろ過工程と、を有する（６）又は（７）記載の脂肪蓄積抑制剤の製造方法。
（９）以下の特徴を有するホエータンパク質加水分解物を１０ｇ／日以上摂取することによる脂肪蓄積抑制方法。
１．分子量分布が１０ｋＤａ以下でメインピーク２００Ｄａ〜３ｋＤａ
２．ＡＰＬ（平均ペプチド鎖長）は２〜８
３．遊離アミノ酸含量２０％以下
４．分岐鎖アミノ酸含量２０％以上
５．抗原性が、β-ラクトグロブリンの１／１００，０００以下
【発明の効果】
【０００９】
本発明の脂肪蓄積抑制剤は、顕著な脂肪蓄積抑制作用効果を有するものである。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明を詳細に説明する。
[有効成分]
この脂肪蓄積抑制剤の有効成分として用いるホエータンパク質加水分解物は、以下の性質を有するものである。
・ 分子量分布が１０ｋＤａ以下でメインピーク２００Ｄａ〜3ｋＤａ
・ ＡＰＬ（平均ペプチド鎖長）は２〜８
・ 遊離アミノ酸含量２０％以下
・ 分岐鎖アミノ酸含量２０％以上
・ 抗原性がβ-ラクトグロブリンの１／１００，０００以下
すなわち、本願発明の有効成分であるホエータンパク質加水分解物は、抗原性がβ-ラクトグロブリンに比べて１／１００，０００以下、ホエータンパク質に比べて１／１００，０００以下であることから、食物アレルギーの抑制という観点から極めて安全である。また、その水溶液は透明で、苦味度も２程度であることから、脂肪蓄積抑制剤として使用する際に味や外観の面での制限がなく、特に、透明性を求める脂肪蓄積抑制剤に対しても高配合が可能である。また、ホエータンパク質加水分解物を限外ろ過（ＵＦ）膜や精密ろ過（ＭＦ）膜処理することにより、水への溶解能を向上させることができる。
さらに、上記脂肪蓄積抑制剤を有効成分として含有する脂肪蓄積抑制能を有し、安全性に優れた脂肪蓄積抑制用飲食品、脂肪蓄積抑制用栄養組成物や脂肪蓄積抑制用飼料を提供できる。なお、本発明の脂肪蓄積抑制剤は、ホエータンパク質を原料としているため、簡便且つ経済的に容易に製造することができる。
【００１１】
[製造方法]
本発明の脂肪蓄積抑制剤に含有されるホエータンパク質加水分解物は、ホエータンパク質をｐＨ６〜１０、５０〜７０℃とし、これに耐熱性のタンパク質加水分解酵素を加えて熱変性させながら分解した後、加熱して酵素を失活させることにより得られる。また、上記酵素分解を行う前に、ホエータンパク質をｐＨ６〜１０、２０〜５５℃においてタンパク質加水分解酵素を用いて分解し、これを冷却することなくただちに上記条件で酵素分解することによって収率を一層高めることができる。
なお、上記のように調製したホエータンパク質加水分解物を、さらに分画分子量１ｋＤａ〜２０ｋＤａ、好ましくは２ｋＤａ〜１０ｋＤａの限外ろ過（ＵＦ）膜及び/又は分画分子量１００Ｄａ〜５００Ｄａ、好ましくは１５０Ｄａ〜３００Ｄａの精密ろ過（ＭＦ）膜から選択される方法で濃縮することにより、一層脂肪蓄積抑制作用を高めることができる。また、さらに苦味を低減し、透明性を高めることができる。
本発明におけるホエータンパク質は、牛、水牛、山羊、ヒト等の哺乳動物のホエー、その凝集物、粉末、あるいは精製タンパク質をいい、これを酵素反応させるときは水溶液の状態で使用する。
この溶液をｐＨ６〜１０に調整するが、通常ホエータンパク質はこの範囲のｐＨになっているので格別ｐＨの調整を行う必要はないが、必要な場合は塩酸、クエン酸及び乳酸等の酸溶液あるいは苛性ソーダ、水酸化カルシウム及びリン酸ソーダ等のアルカリ溶液を用いてｐＨ６〜１０とする。また、加熱によって５０〜７０℃まで昇温するが、耐熱性のタンパク質加水分解酵素は、昇温後に添加するよりも、加熱前に添加し、加温中も酵素分解を行っていた方が収率の面からは好ましい。
一般的なタンパク質加水分解酵素であるProtease（プロテアーゼ）の至適温度は４０℃以下であるが、耐熱性のタンパク質加水分解酵素は４５℃以上であり、耐熱性のタンパク質加水分解酵素としては、このような至適温度を有する耐熱性のタンパク質加水分解酵素であれば特に制限無く用いることができる。このような耐熱性のタンパク質加水分解酵素として、例えば、パパイン、プロテアーゼS（商品名）、プロレザー（商品名）、サモアーゼ（商品名）、アルカラーゼ（商品名）、プロチンＡ（商品名）等を例示することができる。耐熱性のタンパク質加水分解酵素は８０℃で３０分加熱して残存活性が１０％あるいはそれ以上になるものが望ましい。また、単独よりも複数の酵素を併用するとより効果的である。反応は３０分〜１０時間程度行うことが好ましい。
最後に反応液を加熱して酵素を失活させる。酵素の失活は反応液を１００℃以上で１０秒間以上加熱することにより行うことができる。
酵素を失活させた後、反応液を遠心分離して上清を回収し、上清を乾燥して粉末製品とする。なお、遠心分離した時に生じる沈殿物は上清に比べて低アレルゲン化の程度が小さいので、除去した方が好ましいが、抗原性の問題がなければ、反応液をそのまま乾燥して使用しても差し支えない。
この方法により得られるホエータンパク質加水分解物は、Inhibition ELISA法で測定して、抗原性がβ-ラクトグロブリンに比べて１／１００，０００以下、ホエータンパク質に比べて１／１００，０００以下になることが確認されているため、極めて安全である。また、その水溶液は透明で、苦味度も２程度であることから、製品に使用する際に色及び風味の点で課題が少ない。なお、透明性及び苦味の評価は下記の方法により評価した。
透明性評価法：１％ホエータンパク質加水分解物溶液を調製し、６５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
苦味評価法：１０％ホエータンパク質加水分解物溶液を調製し、苦味物質である塩酸キニーネを添加して、苦味を評価する。表１に示すように、苦味点数が2点以下であれば、飲食品などに利用可能である。
また、得られたホエータンパク質のＡＰＬについては、ＨＰＬＣ等の方法によって測定することができる。
【００１２】
【表１】
【００１３】
[使用方法]
本発明のホエータンパク質加水分解物は、そのまま脂肪蓄積抑制剤として使用することが可能であるが、常法に従い、粉末剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、ドリンク剤等に製剤化して用いることも出来る。また、さらに限外ろ過（ＵＦ）膜や精密ろ過（ＭＦ）膜処理により得られたホエータンパク質加水分解物についても、そのまま脂肪蓄積抑制剤として使用することも可能であり、そのまま乾燥しても使用できる。また、常法に従い、製剤化して用いることもできる。
さらに、これらを製剤化した後、栄養剤やヨーグルト、飲料、乳飲料、ウエハース等の飲食品、飼料及びサプリメント等に配合することも可能である。
脂肪蓄積抑制用飲食品、脂肪蓄積抑制用栄養組成物、脂肪蓄積抑制用飼料におけるタンパク質分解物の配合量は、特に制限はないが、成人一人一日あたりホエータンパク質加水分解物を１０ｇ以上、好ましくは２０ｇ以上摂取できるように商品設計を行うことが好ましい。
本発明の脂肪蓄積抑制剤は、上記の有効成分に適当な助剤を添加して任意の形態に製剤化して、経口投与が可能な脂肪蓄積抑制剤とすることができる。
【００１４】
以下に、実施例および比較例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例等に何ら限定されるものではない。
【００１５】
［実施例１］
ホエータンパク質１０％水溶液１Lに、パパイン５０Ｕ／ｇ・ホエータンパク質、及びプロレザー（Proleather : 天野エンザイム社製）１５０Ｕ／ｇ・ホエータンパク質となるように加え、ｐＨ８に調整し、５５℃において６時間ホエータンパク質を変性させながら酵素分解を行った。反応液を１００℃で１５秒間以上加熱して酵素を失活させ、遠心分離して上清を回収し、これを乾燥してホエータンパク質加水分解物（実施例品１）を得た。得られたホエータンパク質加水分解物（実施例品１）の分子量分布は１０ｋＤａ以下、メインピークは１．３ｋＤａ、ＡＰＬは７．２、全ての構成成分に対する遊離アミノ酸含量は１８．９％であった。
Inhibition ELISA法によってβ-ラクトグロブリンに対する抗原性の低下を測定したところ、１／１００，０００以下で収率（酵素反応液を遠心分離し、仕込み量の乾燥重量に対する上清の乾燥重量の比率(％)）８０．３％、苦味度は２であった。
このようにして得られたホエータンパク質加水分解物（実施例品１）は、そのまま発明の脂肪蓄積抑制剤として使用可能である。
【００１６】
［実施例２］
ホエータンパク質１０％水溶液１Lに、パパイン５０Ｕ／ｇ・ホエータンパク質、及びプロレザー１５０Ｕ/ｇ・ホエータンパク質を加え、ｐＨ８、５０℃で３時間酵素分解を行った。これを５５℃に昇温させ、この温度で３時間維持し、タンパク質を変性させるとともに、タンパク質の酵素分解を行い、１００℃で１５秒間以上加熱して酵素を失活させた。この反応液を分画分子量１０ｋＤａのＵＦ膜（ＳＴＣ社製）及び分画分子量３００ＤａのＭＦ膜（ＳＴＣ社製）処理を行い、濃縮液画分を回収し、これを乾燥してホエータンパク質加水分解物（実施例品２）を得た。
得られたホエータンパク質加水分解物（実施例品２）の分子量分布は１０ｋＤａ以下、メインピークは５００Ｄａ、ＡＰＬは３．０、全ての構成成分に対する遊離アミノ酸含量は１５．２％であった。
Inhibition ELISA法によってβ-ラクトグロブリンに対する抗原性の低下を測定したところ、１／１００，０００以下となっており、収率６５．４％、苦味度は２であった。このようにして得られたホエータンパク質加水分解物（実施例品２）は、そのまま本発明の脂肪蓄積抑制剤として使用可能である。
【００１７】
［比較例１］
ホエータンパク質１２０ｇを精製水１，８００ｍｌに溶解し、１Ｍ苛性ソーダ溶液でｐＨを７．０に調整した。次いで、６０℃で１０分間加熱して殺菌し、４５℃に保持してアマノＡ（天野エンザイム社製）２０ｇを添加し、２時間反応させた。８０℃で１０分間加熱して酵素を失活させ、凍結乾燥し、ホエータンパク質加水分解物（比較例品１）を得た。得られたホエータンパク質加水分解物の分解率は１８％、収率は８０．６％であった。
【００１８】
［比較例２］
ホエータンパク質１２０ｇを精製水１，８００ｍｌに溶解し、１Ｍ苛性ソーダ溶液でｐＨを７．０に調整した。次いで、６０℃で１０分間加熱して殺菌し、４５℃に保持してアマノＡ（天野エンザイム社性）２０ｇを添加し、８時間反応させた。８０℃で１０分間加熱して酵素を失活させ、凍結乾燥し、ホエータンパク質加水分解物を得た。得られたホエータンパク質加水分解物の分解率３０％、収率８０．６％であった。
【００１９】
［試験例１］
（透明性試験）
実施例１，２及び比較例１，２の各タンパク質加水分解物の１％水溶液を調製し、６５０ｎｍにおける吸光度を測定した。その結果を表２に示す。
【００２０】
【表２】
【００２１】
実施例品１、実施例品２のホエータンパク質加水分解物は吸光度が低いことからわかるように、透明性が高い。一方、比較試料においては、実施例１，２のホエータンパク質加水分解物に比べて吸光度が高く透明性が低いことがわかった。また、膜処理をした実施例品２の吸光度は、実施例品１のより低く、透明性に優れていた。
【００２２】
[試験例２]
（脂肪蓄積抑制試験）
実験動物として、日本ＳＬＣより購入した２０週齢のＳＡＭ−Ｐ系雌ラットを体重が等しくなるように５群に分類した（各群n=６〜10、144±6.8g）。餌はＡＩＮ９３標準試料をベースにカゼインタンパク質を加水分解前のホエータンパク質、実施例品１、実施例品２、比較例品１で置き換えたものを与えた。また、一方、肥満のコントロールとして２０週齢のＳＡＭ−Ｒ系雌ラット（n=8、143±5.4g）に対し、ＡＩＮ９３標準試料与えた。各群とも摂取量は自由としたが、２〜３日毎に摂食量の測定を行った。各群のラットは４５週齢まで飼育した後、ペントバルビタールナトリウム（５０ｍｇ/ｋｇ）による麻酔下で、白色脂肪組織（ＷＡＴ）を摘出し、白色脂肪組織重量の測定に供した。白色脂肪組織の体重あたりの相対白色脂肪組織重を測定した結果を表３に示す。
【００２３】
【表３】
【００２４】
体重あたりの相対白色脂肪細胞重量は、標準飼料群では、コントロール群に比べて優位な白色脂肪細胞重量の増加を示した。これは、ＳＡＭ−Ｐ系雌ラットは老化促進マウスであり、ＳＡＭ−Ｒ系に比べて基礎代謝量が低下していることを示している。一方、ホエータンパク質群及び、比較例品１群では標準飼料群と比較しても有意差はみられず、ホエータンパク質及び比較例１群の摂取では脂肪蓄積を抑制できないことを示している。
一方、実施例品１および実施例品２を摂取した群においては、標準飼料群やホエータンパク質群、比較例品１群と比較して、有意に白色脂肪細胞重量の増加量が低いことが認められる。すなわち、本発明の脂肪蓄積抑制剤の摂取により、脂肪の蓄積が抑制されていることを示している。以上の結果から、本願発明の脂肪蓄積抑制剤は、優れた脂肪蓄積抑制効果を有し、肥満によって引き起こされる心筋梗塞・致死率の増加の防止、ならびに生活の質低下防止に有用であることが示唆された。
【００２５】
［実施例３］
（脂肪蓄積抑制用錠剤の製造）
表４に示す配合で原材料を混合後、常法により１ｇに成型、打錠して本発明の脂肪蓄積抑制用錠剤を製造した。
【００２６】
【表４】
【００２７】
［実施例４］
（脂肪蓄積抑制用栄養組成物の製造）
５００ｇの実施例品２を４５００ｇの脱イオン水に溶解し、５０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６０００ｒｐｍで３０分間攪拌混合して、溶液Ａを得た。この溶液Ａ５．０ｋｇに、カゼイン５．０ｋｇ、大豆タンパク質５．０ｋｇ、魚油１．０ｋｇ、シソ油３．０ｋｇ、デキストリン１８．０ｋｇ、ミネラル混合物６．０ｋｇ、ビタミン混合物１．９５ｋｇ、乳化剤２．０ｋｇ、安定剤４．０ｋｇ、香料０．０５ｋｇを配合し、２００ｍｌのレトルトパウチに充填し、レトルト殺菌機（第１種圧力容器、ＴＹＰＥ：ＲＣＳ-４ＣＲＴＧＮ、日阪製作所製）で１２１℃、２０分間殺菌して、本発明の脂肪蓄積抑制用栄養素生物５０ｋｇを製造した。
【００２８】
［実施例５］
（脂肪蓄積抑制用飲料の調製）
脱脂粉乳３０ｇを６７０ｇの脱イオン水に溶解した後、実施例品１を１０ｇ溶解し、５０℃まで加熱後、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、９５００ｒｐｍで３０分間攪拌混合した。マルチトール１００ｇ、酸味料２ｇ、還元水飴２０ｇ、香料２ｇ、脱イオン水１６６ｇを添加した後、１００ｍｌのガラス瓶に充填し、９０℃、１５分間殺菌後、密栓し、本発明の脂肪蓄積抑制用飲料１０本（１００ｍｌ入り）を調製した。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の特徴を有するホエータンパク質加水分解物を有効成分とする脂肪蓄積抑制剤。
１．分子量分布が１０ｋＤａ以下でメインピーク２００Ｄａ〜３ｋＤａ
２．ＡＰＬ（平均ペプチド鎖長）は２〜８
３．遊離アミノ酸含量２０％以下
４．分岐鎖アミノ酸含量２０％以上
５．抗原性が、β-ラクトグロブリンの１／１００，０００以下
【請求項２】
前記ホエータンパク質加水分解物が、
ホエータンパク質をｐＨ６〜１０、５０〜７０℃において耐熱性のタンパク質加水分解酵素を用いて熱変性させながら分解する分解工程と、
前記分解工程を経た後、加熱して酵素を失活させる失活工程と、
を経て得られるものであることを特徴とする請求項１に記載の脂肪蓄積抑制剤。
【請求項３】
前記ホエータンパク質加水分解物が、
ホエータンパク質をｐＨ６〜１０、２０〜５５℃においてタンパク質加水分解酵素を用いて分解する前分解工程と、
前記前分解工程を経た後、５０〜７０℃に昇温させ、ｐＨ６〜１０、５０〜７０℃において耐熱性のタンパク質加水分解酵素を用いて未分解のホエータンパク質を熱変性させながら分解する分解工程と、
前記分解工程を経た後に、加熱して酵素を失活させる失活工程と、
を経て得られるものである請求項１に記載の脂肪蓄積抑制剤。
【請求項４】
前記ホエータンパク質加水分解物が、
ホエータンパク質をｐＨ６〜１０、２０〜５５℃においてタンパク質加水分解酵素を用いて分解する前分解工程と、
前記前分解工程を経た後に５０〜７０℃に昇温させ、ｐＨ６〜１０、５０〜７０℃において耐熱性のタンパク質加水分解酵素を用いて未分解のホエータンパク質を熱変性させながら分解する分解工程と、
前記分解工程を経た後に加熱して酵素を失活させる酵素失活工程と、
前記酵素失活工程を経た後に、分画分子量１〜２０ｋＤａの限外ろ過膜処理する限外ろ過工程と、
前記限外ろ過工程を経て得られた透過液を、分画分子量１００〜５００Ｄａの精密ろ過膜処理し、未透過物を得る精密ろ過工程と、
を経ることによって得られるものである請求項１に記載の脂肪蓄積抑制剤。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の脂肪蓄積抑制剤を含むことを特徴とする脂肪蓄積抑制用飲食品、栄養組成物又は飼料。
【請求項６】
ホエータンパク質をｐＨ６〜１０、５０〜７０℃において耐熱性のタンパク質加水分解酵素を用いて熱変性させながら分解する分解工程と、
前記分解工程を経た後、加熱して酵素を失活させる失活工程と、
を有する脂肪蓄積抑制剤の製造方法。
【請求項７】
前記分解工程の前工程として、ホエータンパク質をｐＨ６〜１０、２０〜５５℃においてタンパク質加水分解酵素を用いて分解する前分解工程を有する請求項６記載の脂肪蓄積抑制剤の製造方法。
【請求項８】
前記失活工程の後工程として、分画分子量１〜２０ｋＤａの限外ろ過膜処理する限外ろ過工程と、
前記限外ろ過工程を経て得られた透過液を、分画分子量１００〜５００Ｄａの精密ろ過膜処理し、未透過物を得る精密ろ過工程と、
を有する請求項６又は７記載の脂肪蓄積抑制剤の製造方法。
【請求項９】
以下の特徴を有するホエータンパク質加水分解物を１０ｇ/日以上摂取することによる脂肪蓄積抑制方法。
１．分子量分布が１０ｋＤａ以下でメインピーク２００Ｄａ〜３ｋＤａ
２．ＡＰＬ（平均ペプチド鎖長）は２〜８
３．遊離アミノ酸含量２０％以下
４．分岐鎖アミノ酸含量２０％以上
５．抗原性が、β-ラクトグロブリンの１／１００，０００以下
【請求項１】
以下の特徴を有するホエータンパク質加水分解物を有効成分とする脂肪蓄積抑制剤。
１．分子量分布が１０ｋＤａ以下でメインピーク２００Ｄａ〜３ｋＤａ
２．ＡＰＬ（平均ペプチド鎖長）は２〜８
３．遊離アミノ酸含量２０％以下
４．分岐鎖アミノ酸含量２０％以上
５．抗原性が、β-ラクトグロブリンの１／１００，０００以下
【請求項２】
前記ホエータンパク質加水分解物が、
ホエータンパク質をｐＨ６〜１０、５０〜７０℃において耐熱性のタンパク質加水分解酵素を用いて熱変性させながら分解する分解工程と、
前記分解工程を経た後、加熱して酵素を失活させる失活工程と、
を経て得られるものであることを特徴とする請求項１に記載の脂肪蓄積抑制剤。
【請求項３】
前記ホエータンパク質加水分解物が、
ホエータンパク質をｐＨ６〜１０、２０〜５５℃においてタンパク質加水分解酵素を用いて分解する前分解工程と、
前記前分解工程を経た後、５０〜７０℃に昇温させ、ｐＨ６〜１０、５０〜７０℃において耐熱性のタンパク質加水分解酵素を用いて未分解のホエータンパク質を熱変性させながら分解する分解工程と、
前記分解工程を経た後に、加熱して酵素を失活させる失活工程と、
を経て得られるものである請求項１に記載の脂肪蓄積抑制剤。
【請求項４】
前記ホエータンパク質加水分解物が、
ホエータンパク質をｐＨ６〜１０、２０〜５５℃においてタンパク質加水分解酵素を用いて分解する前分解工程と、
前記前分解工程を経た後に５０〜７０℃に昇温させ、ｐＨ６〜１０、５０〜７０℃において耐熱性のタンパク質加水分解酵素を用いて未分解のホエータンパク質を熱変性させながら分解する分解工程と、
前記分解工程を経た後に加熱して酵素を失活させる酵素失活工程と、
前記酵素失活工程を経た後に、分画分子量１〜２０ｋＤａの限外ろ過膜処理する限外ろ過工程と、
前記限外ろ過工程を経て得られた透過液を、分画分子量１００〜５００Ｄａの精密ろ過膜処理し、未透過物を得る精密ろ過工程と、
を経ることによって得られるものである請求項１に記載の脂肪蓄積抑制剤。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の脂肪蓄積抑制剤を含むことを特徴とする脂肪蓄積抑制用飲食品、栄養組成物又は飼料。
【請求項６】
ホエータンパク質をｐＨ６〜１０、５０〜７０℃において耐熱性のタンパク質加水分解酵素を用いて熱変性させながら分解する分解工程と、
前記分解工程を経た後、加熱して酵素を失活させる失活工程と、
を有する脂肪蓄積抑制剤の製造方法。
【請求項７】
前記分解工程の前工程として、ホエータンパク質をｐＨ６〜１０、２０〜５５℃においてタンパク質加水分解酵素を用いて分解する前分解工程を有する請求項６記載の脂肪蓄積抑制剤の製造方法。
【請求項８】
前記失活工程の後工程として、分画分子量１〜２０ｋＤａの限外ろ過膜処理する限外ろ過工程と、
前記限外ろ過工程を経て得られた透過液を、分画分子量１００〜５００Ｄａの精密ろ過膜処理し、未透過物を得る精密ろ過工程と、
を有する請求項６又は７記載の脂肪蓄積抑制剤の製造方法。
【請求項９】
以下の特徴を有するホエータンパク質加水分解物を１０ｇ/日以上摂取することによる脂肪蓄積抑制方法。
１．分子量分布が１０ｋＤａ以下でメインピーク２００Ｄａ〜３ｋＤａ
２．ＡＰＬ（平均ペプチド鎖長）は２〜８
３．遊離アミノ酸含量２０％以下
４．分岐鎖アミノ酸含量２０％以上
５．抗原性が、β-ラクトグロブリンの１／１００，０００以下
【公開番号】特開２０１１−８４４８５（Ｐ２０１１−８４４８５Ａ）
【公開日】平成２３年４月２８日（２０１１．４．２８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２３６５８８（Ｐ２００９−２３６５８８）
【出願日】平成２１年１０月１３日（２００９．１０．１３）
【出願人】（０００００６６９９）雪印乳業株式会社 (155)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年４月２８日（２０１１．４．２８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１０月１３日（２００９．１０．１３）
【出願人】（０００００６６９９）雪印乳業株式会社 (155)
【Ｆターム（参考）】
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