ｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤
下記一般式Ｉで表される化合物が強いｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害活性を示し、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏでｃ−Ｋｉｔキナーゼが活性化した癌細胞の増殖を抑制することが見出された。ｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害活性を示す新たな抗癌剤が見出された。
一般式Ｉ：
〔式Ｉ中、Ｒ１はメチル基等を、Ｒ２はシアノ基等を、Ｒ３は水素原子等を、Ｒ４は水素原子等を、それぞれ意味する。〕
一般式Ｉ：
〔式Ｉ中、Ｒ１はメチル基等を、Ｒ２はシアノ基等を、Ｒ３は水素原子等を、Ｒ４は水素原子等を、それぞれ意味する。〕
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤、及びｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤を有効成分とするｃ−Ｋｉｔキナーゼの過剰な活性化により引き起こされた疾患の治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
受容体型チロシンキナーゼによる細胞内情報伝達は、細胞増殖、分化および代謝に寄与し、その結果、癌を始めとした種々の疾患の原因となっている（Ｋｏｌｉｂａｂａ Ｋ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂ．Ｂ．Ａ．１３３３，Ｆ２１７−Ｆ２４８，１９９７；Ｓｈｅｉｊｅｎ Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２１，３３１４−３３３３，２００２）。
【０００３】
受容体型チロシンキナーゼの一つであるｃ−Ｋｉｔキナーゼは、それに対する特異的なリガンドであるＳＣＦ（Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｆａｃｔｏｒ）と結合することにより、それ自身の２量体化に引き続きキナーゼ活性が活性化され、その結果細胞内に存在する種々のｃ−Ｋｉｔキナーゼの基質がリン酸化を受けることが知られている（Ｂｌｕｍｅ−Ｊｅｎｓｅｎ Ｐ．ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１０，４１２１−４１２８，１９９１；Ｌｅｖ Ｓ．ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，１０，６４７−６５４，１９９１）。
【０００４】
Ｃ−Ｋｉｔキナーゼの異常な活性化は、ある種（例を下記に記載）の癌細胞で増殖シグナルとなって癌化や悪性化の原因になっていると考えられている。
【０００５】
（１）急性骨髄性白血病（ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ ｌｅｕｋｅｍｉａ，ＡＭＬ）：多くの（６０−８０％）急性骨髄性白血病の患者でｃ−Ｋｉｔキナーゼの発現が見られ、それらの患者由来の芽球の増殖がＳＣＦ刺激で促進された。更に、１３／１８例の患者において、ＳＣＦ刺激無しでｃ−Ｋｉｔキナーゼの活性化が見られ、これらの患者ではｃ−Ｋｉｔキナーゼに活性化変異が生じていると考えられた（Ｌｅｖ Ｓ．ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，１０，６４７−６５４，１９９１；Ｗａｎｇ Ｃ．ｅｔ ａｌ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ ３，６９９−７０２，１９８９；Ｋａｎａｋｕｒａ Ｙ．ｅｔ ａｌ．Ｌｅｕｋ．Ｌｙｍｐｈ．１０，３５−４１，１９９３；Ｉｋｅｄａ Ｈ．ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ，７８，２９６２−２９６８，１９９１；Ｉｋｅｄａ Ｈ．ｅｔ ａｌ．Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２１，１６８６−１６９４，１９９３）。
【０００６】
（２）肥満細胞性白血病（ｍａｓｔ ｃｅｌｌ ｌｅｕｋｅｍｉａ）：肥満細胞症患者が発症する肥満細胞性白血病の細胞株においてｃ−Ｋｉｔキナーゼの活性化変異の存在が報告されている（Ｆｕｒｉｔｓｕ Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９２，１７３６−１７４４，１９９３）。
【０００７】
（３）小細胞肺癌（ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＳＣＬＣ）：ＳＣＬＣの７０％以上の細胞株でｃ−Ｋｉｔキナーゼの高発現が見られた。一方、非小細胞肺癌（Ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）の細胞株ではｃ−Ｋｉｔキナーゼの発現量は少ないか検出限界以下であった。また小細胞肺癌の細胞株ではリガンドであるＳＣＦも発現しており、オートクラインで増殖が促進されている可能性が示唆された（Ｈｉｂｉ Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，６，２２９１−２２９６，１９９１；Ｓｅｋｉｄｏ Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｃｅｒ Ｒｅｓ．，５１，２４１６−２４１９，１９９１）。
【０００８】
（４）ＧＩＳＴ（ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｔｕｍｏｒｓ）：ＧＩＳＴはｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現している消化管に発生する間質系癌と定義される。ＧＩＳＴでは約半数で活性化変異が見られ、この変異は悪性度の高いＧＩＳＴにおいてより高頻度に存在しており、予後因子となる可能性が示唆されている（Ｌａｓｏｔａ Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，１５７，１０９１−１０９５，２０００；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５９，４２９７−４３００，１９９９）。
【０００９】
（５）睾丸腫瘍（ｔｅｓｔｉｃｕｌａｒ ｃａｎｃｅｒ）：睾丸腫瘍は、前癌病変と考えられるｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｎ ｓｉｔｕ（ＣＩＳ）が進行してｓｅｍｉｎｏｍａとｎｏｎ−ｓｅｍｉｎｏｍａと呼ばれる腫瘍になる。ｃ−Ｋｉｔキナーゼは、ＣＩＳとｓｅｍｉｎｏｍａにおける高発現が報告されている（Ｓｔｒｏｈｍｅｙｅｒ Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５１，１８１１−１８１６，１９９１）。更に近年、ｓｅｍｉｎｏｍａにおいて活性化変異を起こしたｃ−Ｋｉｔキナーゼの発現が報告されている（Ｔｉａｎ Ｑ．，ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，１５４，１６４３−１６４７，１９９９）。
【００１０】
（６）卵巣癌（ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ）：正常の卵巣上皮ではＳＣＦが発現しているだけでｃ−Ｋｉｔキナーゼの発現が見られないが、癌化初期で良性の卵巣癌ではｃ−ＫｉｔキナーゼおよびＳＣＦの両方が発現し、更に悪性化した卵巣癌では逆にｃ−Ｋｉｔキナーゼの発現が低下する事が報告されている。この結果より、ｃ−Ｋｉｔキナーゼが卵巣癌の発生に重要な役割を果たしていることが示唆された（Ｔｏｎａｒｙ Ａ．Ｔ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８９，２４２−２５０，２０００）。
【００１１】
（７）乳癌（ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ）：乳癌は周囲の正常組織に比べｃ−Ｋｉｔキナーゼの発現が低下するという報告が有る（Ｎａｔａｌｉ Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，５２，７１３−７１７，１９９２）が、その後の研究で乳癌では正常組織で検出されなかったｃ−Ｋｉｔキナーゼの発現が見られ、更にＳＣＦの発現も検出され、オートクライン刺激で増殖が促進されている事が示唆された（Ｈｉｎｅｓ Ｓ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ ＆ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，６，７６９−７７９，１９９５）。
【００１２】
（８）脳腫瘍（ｂｒａｉｎ ｃａｎｃｅｒ）：脳腫瘍の中で最も悪性度の高い神経膠芽腫（ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ）の細胞株および組織においてｃ−Ｋｉｔキナーゼの発現が見られ、ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する神経膠芽腫の細胞株がＳＣＦ刺激により増殖が促進されたことが報告されている（Ｂｅｒｄｅｌ Ｗ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５２，３４９８−３５０２，１９９２）。
【００１３】
（９）神経芽細胞腫（ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ）：子供に発生する癌として有名な神経芽細胞腫の細胞株および組織標本において、ＳＣＦとｃ−Ｋｉｔキナーゼが共に発現している例が多く、抗ｃ−Ｋｉｔキナーゼ抗体により神経芽細胞腫の細胞株の増殖が抑制され、オートクラインにより増殖が促進されている事が報告されている（Ｃｏｈｅｎ Ｐ．Ｓ．，Ｂｌｏｏｄ，８４，３４６５−３４７２，１９９４）。
【００１４】
（１０）大腸癌（ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ）：ｃ−ＫｉｔキナーゼとそのリガンドであるＳＣＦは大腸癌組織における共発現が見られたのに対し正常粘膜組織では両者の発現が見られなかった。また大腸癌細胞株はＳＣＦ刺激により増殖が促進された。（Ｂｅｌｌｏｎｅ Ｇ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，１７２，１−１１，１９９７）。
【００１５】
また、ＳＣＦ刺激によるｃ−Ｋｉｔキナーゼの活性化が肥満細胞の増殖と分化に必須である事が報告されている（Ｈａｍｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏ−Ｏｎｃ．，３５，３２７−３３３，１９９７；Ｋｉｔａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１０７，５４−５６，１９９５）。従って、ｃ−Ｋｉｔキナーゼの過剰な活性化は、肥満細胞の過剰によって引き起こされる肥満細胞症、喘息、慢性鼻炎などの免疫異常の原因となっていると考えられている。
【００１６】
（１）肥満細胞症（Ｍａｓｔｏｃｙｔｏｓｉｓ）：肥満細胞の過剰増殖によって特徴付けられる色々な状態の病態の総称である。（Ｍｅｔｃａｌｆｅ，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍ．，９３，２Ｓ−４Ｓ，１９９１；Ｇｏｌｋａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ，３４９，１３７９−１３８５，１９９７）。肥満細胞症患者では、１）ｃ−Ｋｉｔキナーゼの過剰発現（Ｎａｇａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｍａｓｔｏｃｙｔｏｓｉｓ Ｌｅｕｋ．，１２，１７５−１８１，１９９８）、２）可溶型ＳＣＦ量の増加（Ｌｏｎｇｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３２８，１３０２−１３０７，１９９３）、３）ｃ−Ｋｉｔキナーゼの活性化変異（Ｎａｇａｔａ ｅｔ ａｌ．Ｍａｓｔｃｙｔｏｓｉｓ Ｌｅｕｋ．，１２，１７５−１８１，１９９８；Ｌｏｎｇｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎ．，１２，３１２−３１４，１９９６）などが報告されており、これらがｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰に活性化して肥満細胞症を引き起こすと考えられている。
【００１７】
（２）アレルギー、喘息：肥満細胞と好酸球は炎症、アレルギー喘息などの発症において重要な細胞である（Ｔｈｏｍａｓ ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２７，５９３−５９７，１９９６；Ｍｅｔｃａｌｆｅ ｅｔ ａｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ．，７７，１０３３−１０７９，１９９７）。この事は慢性鼻炎やアレルギーに伴う炎症に対して現在最も効果が有るとされているコルチコステロイドが、循環および浸潤する肥満細胞と好酸球の数を減少させるという報告からも示唆される（Ｎａｃｌｅｒｉｏ ｅｔ ａｌ．，ＪＡＭＡ，２７８，１８４２−１８４８，１９９７；Ｍｅｌｔｚｅｒ，Ａｌｌｅｒ．５２，３３−４０，１９９７）。ＳＣＦ刺激に伴うｃ−Ｋｉｔキナーゼの活性化は、肥満細胞の分化、生存、増殖に必須であるだけでなく、ｍａｓｔ ｃｅｌｌからの種々の因子の誘導を促進し、これらの因子が好酸球の分化、生存、浸潤性に重要な機能を果たしている事が報告されている（Ｏｋａｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１４，７５−７７，１９９７；Ｏｋａｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２８，７０８−７１５，１９９８；Ｍｅｔｃａｌｆ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９５，６４０８−６４２１，１９９８；Ｋａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１３，１９６−１９９，１９９７；Ｈｏｇａｂｏａｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０，６１６６−６１７１，１９９８；Ｌｕｃｋａｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５６，３９４５−３９５１，１９９６）。従ってｃ−Ｋｉｔキナーゼの阻害により喘息、アレルギーなどの患者において、活性化した肥満細胞と好酸球を阻害できると考えられる。
【００１８】
以上に述べた通り、ｃ−Ｋｉｔキナーゼは幾つかの癌の発生や悪性化や、肥満細胞の過剰が原因と考えられる疾患に密接に関係していると考えられ、その阻害剤は、これら疾患の治療剤として有用であると考えられた。
【発明の開示】
【００１９】
本発明の課題は、ｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害活性を示す新たな化合物を見出し、ｃ−Ｋｉｔキナーゼが原因となっている疾患の治療剤を開発することにある。
【００２０】
ｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害作用を示す化合物として、これまでにインドリン骨格を有する化合物が、報告されている（ＷＯ ０１／４５６８９）。また、キナゾリン骨格を有する化合物のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害作用が報告され（ＷＯ ０１／４７８９０）、類縁の化合物（ＫＲＮ６３３）もｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害作用を持つことが報告されている（久保和生ら、第２２回メディシナルケミストリーシンポジウム講演要旨集ｐ２７５−２７７，２Ｐ−３２０，２００２）。また最近、ｃ−Ｋｉｔ阻害に基づいたＧＩＳＴに対する治療剤としてグリーベック（ＳＴＩ５７１）が米国、欧州および日本で承認された（Ｄｒｕｇｓ，６３：５１３−２２，２００３）。
【００２１】
我々は、下記一般式Ｉで表される化合物がＶＥＧＦ受容体のｋｉｎａｓｅ活性を抑制し、ＶＥＧＦ，ＦＧＦ２，ＨＧＦ刺激による内皮細胞の管腔形成を阻害することを報告した（ＷＯ ０２／３２８７２）。そして、下記一般式Ｉで表される化合物がＶＥＧＦ ｋｉｎａｓｅのみならず、ｃ−Ｋｉｔキナーゼに対し強い阻害作用を有する事を見出し、更にｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する癌細胞に対して増殖を抑制する活性を有することを見出した。
【００２２】
すなわち本発明は、以下に関する。
１． 一般式Ｉ：
〔式Ｉ中、
Ｒ１はメチル基、２−メトキシエチル基または式ＩＩ：
（式ＩＩ中、Ｒａ３はメチル基、シクロプロピルメチル基またはシアノメチル基を意味する；Ｒａ１は水素原子、フッ素原子または水酸基を意味する；Ｒａ２は、１−ピロリジニル基、１−ピペリジニル基、４−モルフォリニル基、ジメチルアミノ基またはジエチルアミノ基を意味する。）の何れかで表される基を意味する；
Ｒ２はシアノ基または式−ＣＯＮＨＲａ４（式中、Ｒａ４は水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基またはＣ３−８シクロアルコキシ基を意味する。）で表される基を意味する；
Ｒ３は水素原子、メチル基、トリフルオロメチル基、塩素原子またはフッ素原子を意味する；
Ｒ４は水素原子、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、シクロプロピル基、２−チアゾリル基または４−フルオロフェニル基を意味する。〕で表される化合物もしくはその塩またはそれらの水和物を有効成分とするｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤。
２． Ｒ１がメチル基である、１記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤。
３． Ｒ４がメチル基、エチル基またはシクロプロピル基である１または２記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤。
４． Ｒ３が水素原子、塩素原子またはフッ素原子である１〜３いずれか１に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤。
５． Ｒ２が式−ＣＯＮＨＲａ４（式中、Ｒａ４は水素原子またはメトキシ基を意味する。）で表される基である、１〜４いずれか１に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤。
６． 一般式Ｉで表される化合物が、
（１）４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
（２）４−（３−クロロ−４−（エチルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
（３）Ｎ６−メトキシ−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドおよび
（４）Ｎ６−メトキシ−４−（３−クロロ−４−（（（エチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド
からなる群から選ばれるいずれか１の化合物である、１〜５いずれか１に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤。
７． １〜６いずれか１に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤を有効成分とする、ｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する癌を治療する抗癌剤。
８． ｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する癌が、急性骨髄性白血病、肥満細胞性白血病、小細胞肺癌、ＧＩＳＴ、睾丸腫瘍、卵巣癌、乳癌、脳腫瘍、神経芽細胞腫または大腸癌である７に記載の抗癌剤。
９． ｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する癌が、急性骨髄性白血病、小細胞肺癌またはＧＩＳＴである７に記載の抗癌剤。
１０． 患者から取り出した癌細胞がｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現することを確認した後に投与することを特徴とする、７〜９いずれか１に記載の抗癌剤。
１１． １〜６いずれか１に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤を有効成分とする、肥満細胞症、アレルギーまたは喘息の治療剤。
１２． ｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する癌を治療する抗癌剤の製造のための、１〜６いずれか１に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤の使用。
１３． ｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する癌が、急性骨髄性白血病、肥満細胞性白血病、小細胞肺癌、ＧＩＳＴ、睾丸腫瘍、卵巣癌、乳癌、脳腫瘍、神経芽細胞癌または大腸癌である、１２に記載の使用。
１４． ｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する癌が、急性骨髄性白血病、小細胞肺癌またはＧＩＳＴである、１２に記載の使用。
１５． 肥満細胞症、アレルギーまたは喘息の治療剤の製造のための、１〜６いずれか１に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤の使用。
【００２３】
強いｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害活性を示す化合物が見出され、ｃ−Ｋｉｔキナーゼの活性化が原因と考えられる、ある種の癌の癌化や悪性化を抑制する治療剤、あるいはｃ−Ｋｉｔキナーゼが原因と考えられるＭａｓｔｏｃｙｔｏｓｉｓ、アレルギー、喘息などの疾患に対する治療剤が可能となった。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
図１は、ＳＣＦ刺激によるリン酸化ｃ−Ｋｉｔキナーゼのイムノブロットの結果を示した図である。
【００２５】
図２は、Ｈ５６２をヌードマウスに移植した場合の、移植後の日数と主要体積の関係を示したグラフである。
【００２６】
図３は、Ｈ５６２をヌードマウスに移植した場合の、リン酸化ｃ−Ｋｉｔキナーゼ、ｃ−Ｋｉｔキナーゼおよびβ−アクチンのイムノブロットの結果を示した図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
以下に本発明の実施の形態について説明する。
【００２８】
本明細書中においては、化合物の構造式が便宜上一定の異性体を表すことがあるが、本発明には化合物の構造上生ずる全ての、幾何異性体、不斉炭素に基づく光学異性体、立体異性体、互変異性体などの総ての異性体および異性体混合物を含み、便宜上の式の記載に限定されるものではない。また、本発明化合物が生体内で酸化、還元、加水分解、抱合などの代謝を受けてなお所望の活性を示す化合物をも包含し、さらに本発明は生体内で酸化、還元、加水分解などの代謝を受けて本発明化合物を生成する化合物をも包含する。さらに、水をはじめとする溶媒和物も本発明に含まれる。
【００２９】
本明細書中において「Ｃ１−６アルキル基」とは、炭素数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖状のアルキル基を示し、具体的には例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｉ−ペンチル基、ｓｅｃ−ペンチル基、ｔ−ペンチル基、ネオペンチル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、１，２−ジメチルプロピル基、ｎ−ヘキシル基、ｉ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、１，２−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチルブチル基、２，３−ジメチルブチル基、３，３−ジメチルブチル基、１−エチルブチル基、２−エチルブチル基、１，１，２−トリメチルプロピル基、１，２，２−トリメチルプロピル基、１−エチル−１−メチルプロピル基、１−エチル−２−メチルプロピル基などが挙げられ、好ましくは、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｉ−ペンチル基、ｓｅｃ−ペンチル基、ｔ−ペンチル基、ネオペンチル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、１，２−ジメチルプロピル基、ｎ−ヘキシル基、ｉ−ヘキシル基であり、より好ましくは、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｉ−ペンチル基、ｓｅｃ−ペンチル基、ｔ−ペンチル基、ネオペンチル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、１，２−ジメチルプロピル基、さらに好ましくはメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔ−ブチル基であり、もっとも好ましくはメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基である。
【００３０】
本明細書中において「Ｃ３−８シクロアルキル基」とは、炭素数３〜８の環状のアルキル基を意味し、具体的には例えば、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基が挙げられる。好ましくはシクロプロピル基である。
【００３１】
本明細書中において「Ｃ１−６アルコキシ基」とは、酸素原子に前記「Ｃ１−６アルキル基」が結合した置換基を意味し、具体的には例えばメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、ｉ−プロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、ｉ−ブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔ−ブトキシ基、ｎ−ペンチルオキシ基、ｉ−ペンチルオキシ基、ｓｅｃ−ペンチルオキシ基、ｔ−ペンチルオキシ基、ネオペンチルオキシ基、１−メチルブトキシ基、２−メチルブトキシ基、１，１−ジメチルプロポキシ基、１，２−ジメチルプロポキシ基、ｎ−ヘキシルオキシ基、ｉ−ヘキシルオキシ基、１−メチルペンチルオキシ基、２−メチルペンチルオキシ基、３−メチルペンチルオキシ基、１，１−ジメチルブトキシ基、１，２−ジメチルブトキシ基、２，２−ジメチルブトキシ基、１，３−ジメチルブトキシ基、２，３−ジメチルブトキシ基、３，３−ジメチルブトキシ基、１−エチルブトキシ基、２−エチルブトキシ基、１，１，２−トリメチルプロポキシ基、１，２，２−トリメチルプロポキシ基、１−エチル−１−メチルプロポキシ基、１−エチル−２−メチルプロポキシ基などが挙げられ、好ましくはメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、ｉ−プロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、ｉ−ブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔ−ブトキシ基、ｎ−ペンチルオキシ基、ｉ−ペンチルオキシ基、ｓｅｃ−ペンチルオキシ基、ｔ−ペンチルオキシ基、ネオペンチルオキシ基、１−メチルブトキシ基、２−メチルブトキシ基、１，１−ジメチルプロポキシ基、１，２−ジメチルプロポキシ基、ｎ−ヘキシルオキシ基、ｉ−ヘキシルオキシ基であり、より好ましくはメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、ｉ−プロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、ｉ−ブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔ−ブトキシ基、ｎ−ペンチルオキシ基、ｉ−ペンチルオキシ基、ｓｅｃ−ペンチルオキシ基、ｔ−ペンチルオキシ基、ネオペンチルオキシ基、１−メチルブトキシ基、２−メチルブトキシ基、１，１−ジメチルプロポキシ基、１，２−ジメチルプロポキシ基、さらに好ましくはメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、ｉ−プロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、ｉ−ブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔ−ブトキシ基、もっとも好ましくはメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、ｉ−プロポキシ基である。
【００３２】
本明細書中において「Ｃ３−８シクロアルコキシ基」とは、炭素数３〜８の環状のアルコキシ基を意味し、具体的には例えば、シクロプロポキシ基、シクロブトキシ基、シクロペンチルオキシ基、シクロヘキシルオキシ基が挙げられる。好ましくはシクロプロポキシ基である。
【００３３】
本発明にかかる一般式Ｉで表される化合物は、ＷＯ ０２／３２８７２に記載の方法によって製造することができる。
【００３４】
本明細書中において「薬理学的に許容できる塩」としては、特に種類は限定されないが、たとえば塩酸塩、硫酸塩、炭酸塩、重炭酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩などの無機酸の付加塩；酢酸塩、マレイン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、トリフルオロ酢酸塩などの有機カルボン酸の付加塩；メタンスルホン酸塩、ヒドロキシメタンスルホン酸塩、ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、タウリン塩などの有機スルホン酸の付加塩；トリメチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ピリジン塩、プロカイン塩、ピコリン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩、Ｎ−メチルグルカミン塩、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、トリス（ヒドロキシメチルアミノ）メタン塩、フェネチルベンジルアミン塩などのアミンの付加塩；アルギニン塩、リジン塩、セリン塩、グリシン塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩などのアミノ酸の付加塩などを挙げることができる。
【００３５】
本発明に係る医薬の投与量は症状の程度、年齢、性別、体重、投与形態、疾患の種類などにより異なるが、通常成人１日当たり１００μｇ〜１０ｇであり、１〜数回に分けて投与される。
【００３６】
本発明に係る医薬の投与形態は特に限定されず、通常用いられる方法により経口または非経口的に投与することができる。
【００３７】
これら製剤化には通常用いられる賦形剤，結合剤，滑沢剤，着色剤，矯味矯臭剤など、および必要により安定化剤，乳化剤，吸収促進剤，界面活性剤などを使用することができ、一般に医薬品製剤の原料として用いられる成分を配合して常法により製剤化される。
【００３８】
これらの成分としては例えば、動植物油（大豆油、牛脂、合成グリセライドなど）、炭化水素（流動パラフィン、スクワラン、固形パラフィンなど）、エステル油（ミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸イソプロピルなど）、高級アルコール（セトステアリルアルコール、ベヘニルアルコールなど）、シリコン樹脂、シリコン油、界面活性剤（ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ひまし油、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックコポリマーなど）、水溶性高分子（ヒドロキシエチルセルロース、ポリアクリル酸、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロースなど）、アルコール（エタノール、イソプロパノールなど）、多価アルコール（グリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ソルビトールなど）、糖（グルコース、ショ糖など）、無機粉体（無水ケイ酸、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、ケイ酸アルミニウムなど）、精製水などが挙げられる。ｐＨ調製のためには無機酸（塩酸、りん酸など）、無機酸のアルカリ金属塩（りん酸ナトリウムなど）、無機塩基（水酸化ナトリウムなど）、有機酸（低級脂肪酸、クエン酸、乳酸など）、有機酸のアルカリ金属塩（クエン酸ナトリウム、乳酸ナトリウムなど）、有機塩基（アルギニン、エタノールアミンなど）などを用いることができる。また、必要に応じて、防腐剤、抗酸化剤などを添加することができる。
【実施例】
【００３９】
以下に、具体的な例をもって本発明を示すが、本発明はこれに限られるものではない。
【００４０】
［実施例１］ＳＣＦ刺激の細胞増殖に対する影響
【００４１】
ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現している小細胞肺癌細胞株Ｈ５２６（ＡＴＣＣより購入、ＣＲＬ−５８１１）の増殖に対する下記の化合物１、化合物２、化合物３および化合物４の影響を調べた。
化合物１：４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド
化合物２：４−（３−クロロ−４−（エチルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド
化合物３：Ｎ６−メトキシ−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド
化合物４：Ｎ６−メトキシ−４−（３−クロロ−４−（（（エチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド
【００４２】
化合物１〜４の構造式を以下に示す。
【００４３】
化合物１はＷＯ ０２／３２８７２の実施例３６８に記載の方法に従って製造した。化合物２はＷＯ ０２／３２８７２の実施例５８３に記載の方法に従って製造した。化合物３はＷＯ ０２／３２８７２の実施例４１７に記載の方法に従って製造した。化合物４はＷＯ ０２／３２８７２の実施例７０２に記載の方法に従って製造した。
【００４４】
Ｈ５２６は、１０％ ＦＣＳ（Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社より購入）を含むＲＰＭＩ１６４０培地（日水製薬株式会社製）で５％ ＣＯ２インキュベーター（３７℃）で培養した。培養後、Ｈ５２６細胞をＰＢＳで３回洗浄し、０．１％ ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ社製）を含むＲＰＭＩ１６４０培地（以下、ＢＳＡ−ＲＰＭＩ１６４０）で１．０ｘ１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌに懸濁し、この細胞懸濁液を５０μｌづつ丸底９６ウェルプレートに播種して、５％ ＣＯ２インキュベーター（３７℃）で一晩培養した。一晩培養後、２００ｎｇ／ｍｌ ＳＣＦ（Ｒ ＆ Ｄ社製）を含むＢＳＡ−ＲＰＭＩ１６４０ ５０μｌ、及び希釈した被検物質を含むＢＳＡ−ＲＰＭＩ１６４０ １００μｌを添加した。
【００４５】
被検物質添加開始日より７日目に、Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ−８（同仁化学研究所製）２０μｌを加え、５％ＣＯ２インキュベーター（３７℃）で約２時間培養した。発色後、測定波長４５０ｎｍ、対照波長６６０ｎｍで各ウェルの吸光度をプレートリーダーＭＴＰ−３２（コロナ電気社製）を用いて測定した。各ウェルの吸光度をＳＣＦを添加していないウェルの吸光度で引き、被検物質を添加していないウェルの吸光度に対する、被検物質を添加したウェルの吸光度の比を求め、この比の値から細胞増殖を５０％阻害するのに必要な被検物質の濃度（ＩＣ５０）を求めた。
【００４６】
その結果下表に示す通り、化合物１、化合物２、化合物３及び化合物４は、ＳＣＦで刺激される細胞増殖を抑制し、ｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害活性を有していると考えられた。また、久保和生ら、第２２回メディシナルケミストリーシンポジウム講演要旨集ｐ２７５−２７７，２Ｐ−３２０，２００２に記載の化合物ＫＲＮ６３３のＩＣ５０は３０１ｎＭで、化合物１、化合物２、化合物３及び化合物４と比較して、弱い活性しか示さなかった。また、ｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤として知られるＳＴＩ５７１のＩＣ５０は１９０ｎＭであった。
【００４７】
【００４８】
［実施例２］ＳＣＦ刺激よるｃ−Ｋｉｔキナーゼリン酸化に対する化合物１の影響
【００４９】
ｃ−Ｋｉｔキナーゼ発現小細胞肺癌細胞株Ｈ５２６細胞ｃ−Ｋｉｔキナーゼ分子の、ＳＣＦ刺激によるリン酸化に対する化合物１の影響を調べた。
【００５０】
Ｈ５２６は、１０％ ＦＣＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地で５％ ＣＯ２インキュベーター（３７℃）で培養した。培養後、Ｈ５２６細胞をＰＢＳで３回洗浄し、ＢＳＡ−ＲＰＭＩ１６４０で５．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌに懸濁し、この細胞懸濁液を１ｍｌづつ２４ウェルプレートに播種して、５％ ＣＯ２インキュベーター（３７℃）で６時間培養した。６時間培養後、希釈した被検物質を含むＢＳＡ−ＲＰＭＩ１６４０ １ｍｌを添加し５％ ＣＯ２インキュベーター（３７℃）で１時間培養した後、１０μｇ／ｍｌ ＳＣＦ（Ｒ ＆ Ｄ社製）１０μｌを添加して、５％ ＣＯ２インキュベーター（３７℃）で更に５分間培養した。５分間培養後、ＰＢＳで洗浄し、ＳＤＳサンプルローディングバッファー１００μｌを添加してｃｅｌｌ ｌｙｓａｔｅサンプルを調整し、９４℃・１０分間熱処理を行った後−２０℃で凍結保存した。
【００５１】
その後、ｃｅｌｌ ｌｙｓａｔｅサンプル２０μｌを４−２０％ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｇｅｌ（第一化学薬品株式会社製）で電気泳動を行った。泳動後、ＰＶＤＦ ｍｅｍｂｒａｎｅ（Ａｍｅｒｓｈａｍ ｐｈａｒｍａｃｉａ ｂｉｏｔｅｃｈ社製）に３時間でトランスファーし、トランスファーしたメンブレンを、１次抗体としてｐｈｏｓｐｈｏ−ｃ−ｋｉｔ（Ｔｙｒ７１９）ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製）、２次抗体としてａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ ＩｇＧ，ＨＲＰ−ｌｉｎｋｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製）を用いてイムノブロットを行った。メンブレンを洗浄後、Ｓｕｐｅｒ Ｓｉｇｎａｌ（ＰＩＥＲＣＥ社製）で発色させた。
【００５２】
その結果、図１に示す通り、ＳＣＦ非存在下ではｃ−Ｋｉｔキナーゼはリン酸化されず（一番左のレーン）、ＳＣＦの存在下で起こるｃ−Ｋｉｔキナーゼのリン酸化は、化合物１の添加により濃度依存的に抑制された。ｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤として知られるＳＴＩ５７１のリン酸化阻害活性は化合物１の約１／１０であった。
【００５３】
［実施例３］ヌードマウスに移植したＨ５６２腫瘍増殖に対する化合物１の影響
【００５４】
Ｈ５２６は、１０％ ＦＣＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地で５％ ＣＯ２インキュベーター（３７℃）で培養した。培養液を回収後、ＰＢＳで２回洗浄し、ＰＢＳで５．０×１０７ｃｅｌｌｓ／ｍｌに懸濁した。この細胞懸濁液を６週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃ ｎｕ／ｎｕ ｍｉｃｅ（チャールズリバー社より購入）の右脇腹皮下部に０．１ｍｌで移植した。移植後、腫瘍体積が約１５０ｍｍ３になった時点から、被検物質の投与を開始し、１日２回、１４日間の経口投与を行った。被検物質は０．１ｍｌ／１０ｇ体重の投与量になるように、０．５％メチルセルロース（和光純薬工業株式会社製）溶液に懸濁した。
【００５５】
投与期間中に、１週間に２回、腫瘍体積をキャリパーで測定した。腫瘍体積はキャリパーで腫瘍の長径と短径を測定し、１／２×長径×短径×短径で計算した。なお、実験はビークルコントロール群（溶媒投与群）を１０匹、被検物質投与群を１群５匹で行った。
【００５６】
その結果、図２に示す通り、化合物１は用量依存的にヌードマウスに移植したＨ５２６腫瘍の増殖を抑制した。また、ｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤として知られるＳＴＩ５７１は１６０ｍｇ／ｋｇの投与においても殆ど抗腫瘍効果を示さなかった。
【００５７】
［実施例４］ヌードマウスに移植したＨ５６２腫瘍増殖のｃ−Ｋｉｔリン酸化に対する化合物１の影響
【００５８】
５．０×１０７ｃｅｌｌｓ／ｍｌの濃度に調製したＨ５２６の細胞懸濁液０．１ｍｌを、６週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃ ｎｕ／ｎｕ ｍｉｃｅ（チャールズリバー社より購入）の右脇腹皮下部に移植した後、腫瘍体積が３００〜１０００ｍｍ３になった時点で、ビークルコントロール群（溶媒投与群）と被検物質投与群に分けて被検物質の投与を行った。摘出した腫瘍をｃｅｌｌ ｌｙｓａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４），１５０ｍＭ ＮａＣｌ，１０％ ｇｙｃｅｒｏｌ，１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００，１．５ｍＭ ＭｇＣｌ２，１ｍＭ ＥＤＴＡ，１００ｍＭ ＮａＦ，１ｍＭ ＰＭＳＦ，１０μｇ／ｍｌ ａｐｒｏｔｉｎｉｎ，５０μｇ／ｍｌ ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ，１μｇ／ｍｌ ｐｅｐｔａｔｉｎ Ａ，１ｍＭ Ｎａ３ＶＯ４，２５ｍＭ β−ｇｌｙｃｅｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ｐｈｏｐｈａｔａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｃｏｃｋｔａｉｌ ＩＩ）に入れてホモジナイズした。遠心した後に上清をタンパク定量し、３×ＳＤＳサンプルローディングバッファーを添加してｃｅｌｌ ｌｙｓａｔｅサンプルを作った。その後、ｃｅｌｌ ｌｙｓａｔｅサンプルを９４℃・１０分間熱処理をし、−２０℃で凍結保存した。
【００５９】
その後、タンパク量として３０μｇ相当のｃｅｌｌ ｌｙｓａｔｅサンプルを４−２０％ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｇｅｌ（第一化学薬品株式会社製）で電気泳動を行った。泳動後、ＰＶＤＦ ｍｅｍｂｒａｎｅ（Ａｍｅｒｓｈａｍ ｐｈａｒｍａｃｉａ ｂｉｏｔｅｃｈ社製）に３時間でトランスファーした。リン酸化ｃ−Ｋｉｔ、ｃ−Ｋｉｔ及びβアクチンを定量するために、それぞれ、ｐｈｏｓｐｈｏ−ｃ−ｋｉｔ（Ｔｙｒ７１９）ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製）、抗ｃ−Ｋｉｔ抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製）及び抗βアクチン抗体（Ｓｉｇｍａ社製）を１次抗体として用い、ａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ ＩｇＧ，ＨＲＰ−ｌｉｎｋｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製）を２次抗体として用いてイムノブロットを行った。メンブレンを洗浄後、Ｓｕｐｅｒ Ｓｉｇｎａｌ（ＰＩＥＲＣＥ社製）で発色させた。
【００６０】
その結果、図３に示すように、化合物１は３０，１００ｍｇ／ｋｇ投与で腫瘍組織におけるリン酸化ｃ−Ｋｉｔの量を減少させたが、ｃ−Ｋｉｔ及びβアクチンの量は変化させなかった。化合物１が３０，１００ｍｇ／ｋｇ投与で完全なリン酸化の抑制を示したのに対し、ｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤として知られるＳＴＩ５７１は１６０ｍｇ／ｋｇでも部分的な抑制しか示さなかった。
【００６１】
このことから、化合物１はｃ−Ｋｉｔのｉｎ ｖｉｖｏでのリン酸化を抑制することが示され、化合物１はｉｎ ｖｉｖｏにおいてもｃ−Ｋｉｔキナーゼの活性を抑制し、抗腫瘍活性を示していることが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００６２】
一般式Ｉで表される化合物が強いｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害活性を示し、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで、ｃ−Ｋｉｔキナーゼが活性化した癌細胞の増殖を抑制することが見出された。したがって、一般式Ｉで表される化合物は、ｃ−Ｋｉｔキナーゼの活性化により悪性化した癌に対する抗癌剤として利用可能であることが明らかとなった。また、一般式Ｉで表される化合物を有効成分として含有するｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤は、ｃ−Ｋｉｔキナーゼが原因と考えられるＭａｓｔｏｃｙｔｏｓｉｓ、アレルギー、喘息などの疾患に対する治療剤としても有効であることが示唆される。
【図１】
【図２】
【図３】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤、及びｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤を有効成分とするｃ−Ｋｉｔキナーゼの過剰な活性化により引き起こされた疾患の治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
受容体型チロシンキナーゼによる細胞内情報伝達は、細胞増殖、分化および代謝に寄与し、その結果、癌を始めとした種々の疾患の原因となっている（Ｋｏｌｉｂａｂａ Ｋ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂ．Ｂ．Ａ．１３３３，Ｆ２１７−Ｆ２４８，１９９７；Ｓｈｅｉｊｅｎ Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２１，３３１４−３３３３，２００２）。
【０００３】
受容体型チロシンキナーゼの一つであるｃ−Ｋｉｔキナーゼは、それに対する特異的なリガンドであるＳＣＦ（Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｆａｃｔｏｒ）と結合することにより、それ自身の２量体化に引き続きキナーゼ活性が活性化され、その結果細胞内に存在する種々のｃ−Ｋｉｔキナーゼの基質がリン酸化を受けることが知られている（Ｂｌｕｍｅ−Ｊｅｎｓｅｎ Ｐ．ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１０，４１２１−４１２８，１９９１；Ｌｅｖ Ｓ．ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，１０，６４７−６５４，１９９１）。
【０００４】
Ｃ−Ｋｉｔキナーゼの異常な活性化は、ある種（例を下記に記載）の癌細胞で増殖シグナルとなって癌化や悪性化の原因になっていると考えられている。
【０００５】
（１）急性骨髄性白血病（ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ ｌｅｕｋｅｍｉａ，ＡＭＬ）：多くの（６０−８０％）急性骨髄性白血病の患者でｃ−Ｋｉｔキナーゼの発現が見られ、それらの患者由来の芽球の増殖がＳＣＦ刺激で促進された。更に、１３／１８例の患者において、ＳＣＦ刺激無しでｃ−Ｋｉｔキナーゼの活性化が見られ、これらの患者ではｃ−Ｋｉｔキナーゼに活性化変異が生じていると考えられた（Ｌｅｖ Ｓ．ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，１０，６４７−６５４，１９９１；Ｗａｎｇ Ｃ．ｅｔ ａｌ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ ３，６９９−７０２，１９８９；Ｋａｎａｋｕｒａ Ｙ．ｅｔ ａｌ．Ｌｅｕｋ．Ｌｙｍｐｈ．１０，３５−４１，１９９３；Ｉｋｅｄａ Ｈ．ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ，７８，２９６２−２９６８，１９９１；Ｉｋｅｄａ Ｈ．ｅｔ ａｌ．Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２１，１６８６−１６９４，１９９３）。
【０００６】
（２）肥満細胞性白血病（ｍａｓｔ ｃｅｌｌ ｌｅｕｋｅｍｉａ）：肥満細胞症患者が発症する肥満細胞性白血病の細胞株においてｃ−Ｋｉｔキナーゼの活性化変異の存在が報告されている（Ｆｕｒｉｔｓｕ Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９２，１７３６−１７４４，１９９３）。
【０００７】
（３）小細胞肺癌（ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＳＣＬＣ）：ＳＣＬＣの７０％以上の細胞株でｃ−Ｋｉｔキナーゼの高発現が見られた。一方、非小細胞肺癌（Ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）の細胞株ではｃ−Ｋｉｔキナーゼの発現量は少ないか検出限界以下であった。また小細胞肺癌の細胞株ではリガンドであるＳＣＦも発現しており、オートクラインで増殖が促進されている可能性が示唆された（Ｈｉｂｉ Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，６，２２９１−２２９６，１９９１；Ｓｅｋｉｄｏ Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｃｅｒ Ｒｅｓ．，５１，２４１６−２４１９，１９９１）。
【０００８】
（４）ＧＩＳＴ（ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｔｕｍｏｒｓ）：ＧＩＳＴはｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現している消化管に発生する間質系癌と定義される。ＧＩＳＴでは約半数で活性化変異が見られ、この変異は悪性度の高いＧＩＳＴにおいてより高頻度に存在しており、予後因子となる可能性が示唆されている（Ｌａｓｏｔａ Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，１５７，１０９１−１０９５，２０００；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５９，４２９７−４３００，１９９９）。
【０００９】
（５）睾丸腫瘍（ｔｅｓｔｉｃｕｌａｒ ｃａｎｃｅｒ）：睾丸腫瘍は、前癌病変と考えられるｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｎ ｓｉｔｕ（ＣＩＳ）が進行してｓｅｍｉｎｏｍａとｎｏｎ−ｓｅｍｉｎｏｍａと呼ばれる腫瘍になる。ｃ−Ｋｉｔキナーゼは、ＣＩＳとｓｅｍｉｎｏｍａにおける高発現が報告されている（Ｓｔｒｏｈｍｅｙｅｒ Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５１，１８１１−１８１６，１９９１）。更に近年、ｓｅｍｉｎｏｍａにおいて活性化変異を起こしたｃ−Ｋｉｔキナーゼの発現が報告されている（Ｔｉａｎ Ｑ．，ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，１５４，１６４３−１６４７，１９９９）。
【００１０】
（６）卵巣癌（ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ）：正常の卵巣上皮ではＳＣＦが発現しているだけでｃ−Ｋｉｔキナーゼの発現が見られないが、癌化初期で良性の卵巣癌ではｃ−ＫｉｔキナーゼおよびＳＣＦの両方が発現し、更に悪性化した卵巣癌では逆にｃ−Ｋｉｔキナーゼの発現が低下する事が報告されている。この結果より、ｃ−Ｋｉｔキナーゼが卵巣癌の発生に重要な役割を果たしていることが示唆された（Ｔｏｎａｒｙ Ａ．Ｔ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８９，２４２−２５０，２０００）。
【００１１】
（７）乳癌（ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ）：乳癌は周囲の正常組織に比べｃ−Ｋｉｔキナーゼの発現が低下するという報告が有る（Ｎａｔａｌｉ Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，５２，７１３−７１７，１９９２）が、その後の研究で乳癌では正常組織で検出されなかったｃ−Ｋｉｔキナーゼの発現が見られ、更にＳＣＦの発現も検出され、オートクライン刺激で増殖が促進されている事が示唆された（Ｈｉｎｅｓ Ｓ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ ＆ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，６，７６９−７７９，１９９５）。
【００１２】
（８）脳腫瘍（ｂｒａｉｎ ｃａｎｃｅｒ）：脳腫瘍の中で最も悪性度の高い神経膠芽腫（ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ）の細胞株および組織においてｃ−Ｋｉｔキナーゼの発現が見られ、ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する神経膠芽腫の細胞株がＳＣＦ刺激により増殖が促進されたことが報告されている（Ｂｅｒｄｅｌ Ｗ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５２，３４９８−３５０２，１９９２）。
【００１３】
（９）神経芽細胞腫（ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ）：子供に発生する癌として有名な神経芽細胞腫の細胞株および組織標本において、ＳＣＦとｃ−Ｋｉｔキナーゼが共に発現している例が多く、抗ｃ−Ｋｉｔキナーゼ抗体により神経芽細胞腫の細胞株の増殖が抑制され、オートクラインにより増殖が促進されている事が報告されている（Ｃｏｈｅｎ Ｐ．Ｓ．，Ｂｌｏｏｄ，８４，３４６５−３４７２，１９９４）。
【００１４】
（１０）大腸癌（ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ）：ｃ−ＫｉｔキナーゼとそのリガンドであるＳＣＦは大腸癌組織における共発現が見られたのに対し正常粘膜組織では両者の発現が見られなかった。また大腸癌細胞株はＳＣＦ刺激により増殖が促進された。（Ｂｅｌｌｏｎｅ Ｇ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，１７２，１−１１，１９９７）。
【００１５】
また、ＳＣＦ刺激によるｃ−Ｋｉｔキナーゼの活性化が肥満細胞の増殖と分化に必須である事が報告されている（Ｈａｍｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏ−Ｏｎｃ．，３５，３２７−３３３，１９９７；Ｋｉｔａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１０７，５４−５６，１９９５）。従って、ｃ−Ｋｉｔキナーゼの過剰な活性化は、肥満細胞の過剰によって引き起こされる肥満細胞症、喘息、慢性鼻炎などの免疫異常の原因となっていると考えられている。
【００１６】
（１）肥満細胞症（Ｍａｓｔｏｃｙｔｏｓｉｓ）：肥満細胞の過剰増殖によって特徴付けられる色々な状態の病態の総称である。（Ｍｅｔｃａｌｆｅ，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍ．，９３，２Ｓ−４Ｓ，１９９１；Ｇｏｌｋａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ，３４９，１３７９−１３８５，１９９７）。肥満細胞症患者では、１）ｃ−Ｋｉｔキナーゼの過剰発現（Ｎａｇａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｍａｓｔｏｃｙｔｏｓｉｓ Ｌｅｕｋ．，１２，１７５−１８１，１９９８）、２）可溶型ＳＣＦ量の増加（Ｌｏｎｇｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３２８，１３０２−１３０７，１９９３）、３）ｃ−Ｋｉｔキナーゼの活性化変異（Ｎａｇａｔａ ｅｔ ａｌ．Ｍａｓｔｃｙｔｏｓｉｓ Ｌｅｕｋ．，１２，１７５−１８１，１９９８；Ｌｏｎｇｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎ．，１２，３１２−３１４，１９９６）などが報告されており、これらがｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰に活性化して肥満細胞症を引き起こすと考えられている。
【００１７】
（２）アレルギー、喘息：肥満細胞と好酸球は炎症、アレルギー喘息などの発症において重要な細胞である（Ｔｈｏｍａｓ ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２７，５９３−５９７，１９９６；Ｍｅｔｃａｌｆｅ ｅｔ ａｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ．，７７，１０３３−１０７９，１９９７）。この事は慢性鼻炎やアレルギーに伴う炎症に対して現在最も効果が有るとされているコルチコステロイドが、循環および浸潤する肥満細胞と好酸球の数を減少させるという報告からも示唆される（Ｎａｃｌｅｒｉｏ ｅｔ ａｌ．，ＪＡＭＡ，２７８，１８４２−１８４８，１９９７；Ｍｅｌｔｚｅｒ，Ａｌｌｅｒ．５２，３３−４０，１９９７）。ＳＣＦ刺激に伴うｃ−Ｋｉｔキナーゼの活性化は、肥満細胞の分化、生存、増殖に必須であるだけでなく、ｍａｓｔ ｃｅｌｌからの種々の因子の誘導を促進し、これらの因子が好酸球の分化、生存、浸潤性に重要な機能を果たしている事が報告されている（Ｏｋａｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１４，７５−７７，１９９７；Ｏｋａｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２８，７０８−７１５，１９９８；Ｍｅｔｃａｌｆ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９５，６４０８−６４２１，１９９８；Ｋａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１３，１９６−１９９，１９９７；Ｈｏｇａｂｏａｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０，６１６６−６１７１，１９９８；Ｌｕｃｋａｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５６，３９４５−３９５１，１９９６）。従ってｃ−Ｋｉｔキナーゼの阻害により喘息、アレルギーなどの患者において、活性化した肥満細胞と好酸球を阻害できると考えられる。
【００１８】
以上に述べた通り、ｃ−Ｋｉｔキナーゼは幾つかの癌の発生や悪性化や、肥満細胞の過剰が原因と考えられる疾患に密接に関係していると考えられ、その阻害剤は、これら疾患の治療剤として有用であると考えられた。
【発明の開示】
【００１９】
本発明の課題は、ｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害活性を示す新たな化合物を見出し、ｃ−Ｋｉｔキナーゼが原因となっている疾患の治療剤を開発することにある。
【００２０】
ｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害作用を示す化合物として、これまでにインドリン骨格を有する化合物が、報告されている（ＷＯ ０１／４５６８９）。また、キナゾリン骨格を有する化合物のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害作用が報告され（ＷＯ ０１／４７８９０）、類縁の化合物（ＫＲＮ６３３）もｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害作用を持つことが報告されている（久保和生ら、第２２回メディシナルケミストリーシンポジウム講演要旨集ｐ２７５−２７７，２Ｐ−３２０，２００２）。また最近、ｃ−Ｋｉｔ阻害に基づいたＧＩＳＴに対する治療剤としてグリーベック（ＳＴＩ５７１）が米国、欧州および日本で承認された（Ｄｒｕｇｓ，６３：５１３−２２，２００３）。
【００２１】
我々は、下記一般式Ｉで表される化合物がＶＥＧＦ受容体のｋｉｎａｓｅ活性を抑制し、ＶＥＧＦ，ＦＧＦ２，ＨＧＦ刺激による内皮細胞の管腔形成を阻害することを報告した（ＷＯ ０２／３２８７２）。そして、下記一般式Ｉで表される化合物がＶＥＧＦ ｋｉｎａｓｅのみならず、ｃ−Ｋｉｔキナーゼに対し強い阻害作用を有する事を見出し、更にｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する癌細胞に対して増殖を抑制する活性を有することを見出した。
【００２２】
すなわち本発明は、以下に関する。
１． 一般式Ｉ：
〔式Ｉ中、
Ｒ１はメチル基、２−メトキシエチル基または式ＩＩ：
（式ＩＩ中、Ｒａ３はメチル基、シクロプロピルメチル基またはシアノメチル基を意味する；Ｒａ１は水素原子、フッ素原子または水酸基を意味する；Ｒａ２は、１−ピロリジニル基、１−ピペリジニル基、４−モルフォリニル基、ジメチルアミノ基またはジエチルアミノ基を意味する。）の何れかで表される基を意味する；
Ｒ２はシアノ基または式−ＣＯＮＨＲａ４（式中、Ｒａ４は水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基またはＣ３−８シクロアルコキシ基を意味する。）で表される基を意味する；
Ｒ３は水素原子、メチル基、トリフルオロメチル基、塩素原子またはフッ素原子を意味する；
Ｒ４は水素原子、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、シクロプロピル基、２−チアゾリル基または４−フルオロフェニル基を意味する。〕で表される化合物もしくはその塩またはそれらの水和物を有効成分とするｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤。
２． Ｒ１がメチル基である、１記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤。
３． Ｒ４がメチル基、エチル基またはシクロプロピル基である１または２記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤。
４． Ｒ３が水素原子、塩素原子またはフッ素原子である１〜３いずれか１に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤。
５． Ｒ２が式−ＣＯＮＨＲａ４（式中、Ｒａ４は水素原子またはメトキシ基を意味する。）で表される基である、１〜４いずれか１に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤。
６． 一般式Ｉで表される化合物が、
（１）４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
（２）４−（３−クロロ−４−（エチルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
（３）Ｎ６−メトキシ−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドおよび
（４）Ｎ６−メトキシ−４−（３−クロロ−４−（（（エチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド
からなる群から選ばれるいずれか１の化合物である、１〜５いずれか１に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤。
７． １〜６いずれか１に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤を有効成分とする、ｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する癌を治療する抗癌剤。
８． ｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する癌が、急性骨髄性白血病、肥満細胞性白血病、小細胞肺癌、ＧＩＳＴ、睾丸腫瘍、卵巣癌、乳癌、脳腫瘍、神経芽細胞腫または大腸癌である７に記載の抗癌剤。
９． ｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する癌が、急性骨髄性白血病、小細胞肺癌またはＧＩＳＴである７に記載の抗癌剤。
１０． 患者から取り出した癌細胞がｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現することを確認した後に投与することを特徴とする、７〜９いずれか１に記載の抗癌剤。
１１． １〜６いずれか１に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤を有効成分とする、肥満細胞症、アレルギーまたは喘息の治療剤。
１２． ｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する癌を治療する抗癌剤の製造のための、１〜６いずれか１に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤の使用。
１３． ｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する癌が、急性骨髄性白血病、肥満細胞性白血病、小細胞肺癌、ＧＩＳＴ、睾丸腫瘍、卵巣癌、乳癌、脳腫瘍、神経芽細胞癌または大腸癌である、１２に記載の使用。
１４． ｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する癌が、急性骨髄性白血病、小細胞肺癌またはＧＩＳＴである、１２に記載の使用。
１５． 肥満細胞症、アレルギーまたは喘息の治療剤の製造のための、１〜６いずれか１に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤の使用。
【００２３】
強いｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害活性を示す化合物が見出され、ｃ−Ｋｉｔキナーゼの活性化が原因と考えられる、ある種の癌の癌化や悪性化を抑制する治療剤、あるいはｃ−Ｋｉｔキナーゼが原因と考えられるＭａｓｔｏｃｙｔｏｓｉｓ、アレルギー、喘息などの疾患に対する治療剤が可能となった。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
図１は、ＳＣＦ刺激によるリン酸化ｃ−Ｋｉｔキナーゼのイムノブロットの結果を示した図である。
【００２５】
図２は、Ｈ５６２をヌードマウスに移植した場合の、移植後の日数と主要体積の関係を示したグラフである。
【００２６】
図３は、Ｈ５６２をヌードマウスに移植した場合の、リン酸化ｃ−Ｋｉｔキナーゼ、ｃ−Ｋｉｔキナーゼおよびβ−アクチンのイムノブロットの結果を示した図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
以下に本発明の実施の形態について説明する。
【００２８】
本明細書中においては、化合物の構造式が便宜上一定の異性体を表すことがあるが、本発明には化合物の構造上生ずる全ての、幾何異性体、不斉炭素に基づく光学異性体、立体異性体、互変異性体などの総ての異性体および異性体混合物を含み、便宜上の式の記載に限定されるものではない。また、本発明化合物が生体内で酸化、還元、加水分解、抱合などの代謝を受けてなお所望の活性を示す化合物をも包含し、さらに本発明は生体内で酸化、還元、加水分解などの代謝を受けて本発明化合物を生成する化合物をも包含する。さらに、水をはじめとする溶媒和物も本発明に含まれる。
【００２９】
本明細書中において「Ｃ１−６アルキル基」とは、炭素数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖状のアルキル基を示し、具体的には例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｉ−ペンチル基、ｓｅｃ−ペンチル基、ｔ−ペンチル基、ネオペンチル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、１，２−ジメチルプロピル基、ｎ−ヘキシル基、ｉ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、１，２−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチルブチル基、２，３−ジメチルブチル基、３，３−ジメチルブチル基、１−エチルブチル基、２−エチルブチル基、１，１，２−トリメチルプロピル基、１，２，２−トリメチルプロピル基、１−エチル−１−メチルプロピル基、１−エチル−２−メチルプロピル基などが挙げられ、好ましくは、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｉ−ペンチル基、ｓｅｃ−ペンチル基、ｔ−ペンチル基、ネオペンチル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、１，２−ジメチルプロピル基、ｎ−ヘキシル基、ｉ−ヘキシル基であり、より好ましくは、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｉ−ペンチル基、ｓｅｃ−ペンチル基、ｔ−ペンチル基、ネオペンチル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルプロピル基、１，２−ジメチルプロピル基、さらに好ましくはメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔ−ブチル基であり、もっとも好ましくはメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基である。
【００３０】
本明細書中において「Ｃ３−８シクロアルキル基」とは、炭素数３〜８の環状のアルキル基を意味し、具体的には例えば、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基が挙げられる。好ましくはシクロプロピル基である。
【００３１】
本明細書中において「Ｃ１−６アルコキシ基」とは、酸素原子に前記「Ｃ１−６アルキル基」が結合した置換基を意味し、具体的には例えばメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、ｉ−プロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、ｉ−ブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔ−ブトキシ基、ｎ−ペンチルオキシ基、ｉ−ペンチルオキシ基、ｓｅｃ−ペンチルオキシ基、ｔ−ペンチルオキシ基、ネオペンチルオキシ基、１−メチルブトキシ基、２−メチルブトキシ基、１，１−ジメチルプロポキシ基、１，２−ジメチルプロポキシ基、ｎ−ヘキシルオキシ基、ｉ−ヘキシルオキシ基、１−メチルペンチルオキシ基、２−メチルペンチルオキシ基、３−メチルペンチルオキシ基、１，１−ジメチルブトキシ基、１，２−ジメチルブトキシ基、２，２−ジメチルブトキシ基、１，３−ジメチルブトキシ基、２，３−ジメチルブトキシ基、３，３−ジメチルブトキシ基、１−エチルブトキシ基、２−エチルブトキシ基、１，１，２−トリメチルプロポキシ基、１，２，２−トリメチルプロポキシ基、１−エチル−１−メチルプロポキシ基、１−エチル−２−メチルプロポキシ基などが挙げられ、好ましくはメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、ｉ−プロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、ｉ−ブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔ−ブトキシ基、ｎ−ペンチルオキシ基、ｉ−ペンチルオキシ基、ｓｅｃ−ペンチルオキシ基、ｔ−ペンチルオキシ基、ネオペンチルオキシ基、１−メチルブトキシ基、２−メチルブトキシ基、１，１−ジメチルプロポキシ基、１，２−ジメチルプロポキシ基、ｎ−ヘキシルオキシ基、ｉ−ヘキシルオキシ基であり、より好ましくはメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、ｉ−プロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、ｉ−ブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔ−ブトキシ基、ｎ−ペンチルオキシ基、ｉ−ペンチルオキシ基、ｓｅｃ−ペンチルオキシ基、ｔ−ペンチルオキシ基、ネオペンチルオキシ基、１−メチルブトキシ基、２−メチルブトキシ基、１，１−ジメチルプロポキシ基、１，２−ジメチルプロポキシ基、さらに好ましくはメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、ｉ−プロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、ｉ−ブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔ−ブトキシ基、もっとも好ましくはメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、ｉ−プロポキシ基である。
【００３２】
本明細書中において「Ｃ３−８シクロアルコキシ基」とは、炭素数３〜８の環状のアルコキシ基を意味し、具体的には例えば、シクロプロポキシ基、シクロブトキシ基、シクロペンチルオキシ基、シクロヘキシルオキシ基が挙げられる。好ましくはシクロプロポキシ基である。
【００３３】
本発明にかかる一般式Ｉで表される化合物は、ＷＯ ０２／３２８７２に記載の方法によって製造することができる。
【００３４】
本明細書中において「薬理学的に許容できる塩」としては、特に種類は限定されないが、たとえば塩酸塩、硫酸塩、炭酸塩、重炭酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩などの無機酸の付加塩；酢酸塩、マレイン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、トリフルオロ酢酸塩などの有機カルボン酸の付加塩；メタンスルホン酸塩、ヒドロキシメタンスルホン酸塩、ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、タウリン塩などの有機スルホン酸の付加塩；トリメチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ピリジン塩、プロカイン塩、ピコリン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩、Ｎ−メチルグルカミン塩、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、トリス（ヒドロキシメチルアミノ）メタン塩、フェネチルベンジルアミン塩などのアミンの付加塩；アルギニン塩、リジン塩、セリン塩、グリシン塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩などのアミノ酸の付加塩などを挙げることができる。
【００３５】
本発明に係る医薬の投与量は症状の程度、年齢、性別、体重、投与形態、疾患の種類などにより異なるが、通常成人１日当たり１００μｇ〜１０ｇであり、１〜数回に分けて投与される。
【００３６】
本発明に係る医薬の投与形態は特に限定されず、通常用いられる方法により経口または非経口的に投与することができる。
【００３７】
これら製剤化には通常用いられる賦形剤，結合剤，滑沢剤，着色剤，矯味矯臭剤など、および必要により安定化剤，乳化剤，吸収促進剤，界面活性剤などを使用することができ、一般に医薬品製剤の原料として用いられる成分を配合して常法により製剤化される。
【００３８】
これらの成分としては例えば、動植物油（大豆油、牛脂、合成グリセライドなど）、炭化水素（流動パラフィン、スクワラン、固形パラフィンなど）、エステル油（ミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸イソプロピルなど）、高級アルコール（セトステアリルアルコール、ベヘニルアルコールなど）、シリコン樹脂、シリコン油、界面活性剤（ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ひまし油、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックコポリマーなど）、水溶性高分子（ヒドロキシエチルセルロース、ポリアクリル酸、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロースなど）、アルコール（エタノール、イソプロパノールなど）、多価アルコール（グリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ソルビトールなど）、糖（グルコース、ショ糖など）、無機粉体（無水ケイ酸、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、ケイ酸アルミニウムなど）、精製水などが挙げられる。ｐＨ調製のためには無機酸（塩酸、りん酸など）、無機酸のアルカリ金属塩（りん酸ナトリウムなど）、無機塩基（水酸化ナトリウムなど）、有機酸（低級脂肪酸、クエン酸、乳酸など）、有機酸のアルカリ金属塩（クエン酸ナトリウム、乳酸ナトリウムなど）、有機塩基（アルギニン、エタノールアミンなど）などを用いることができる。また、必要に応じて、防腐剤、抗酸化剤などを添加することができる。
【実施例】
【００３９】
以下に、具体的な例をもって本発明を示すが、本発明はこれに限られるものではない。
【００４０】
［実施例１］ＳＣＦ刺激の細胞増殖に対する影響
【００４１】
ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現している小細胞肺癌細胞株Ｈ５２６（ＡＴＣＣより購入、ＣＲＬ−５８１１）の増殖に対する下記の化合物１、化合物２、化合物３および化合物４の影響を調べた。
化合物１：４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド
化合物２：４−（３−クロロ−４−（エチルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド
化合物３：Ｎ６−メトキシ−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド
化合物４：Ｎ６−メトキシ−４−（３−クロロ−４−（（（エチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド
【００４２】
化合物１〜４の構造式を以下に示す。
【００４３】
化合物１はＷＯ ０２／３２８７２の実施例３６８に記載の方法に従って製造した。化合物２はＷＯ ０２／３２８７２の実施例５８３に記載の方法に従って製造した。化合物３はＷＯ ０２／３２８７２の実施例４１７に記載の方法に従って製造した。化合物４はＷＯ ０２／３２８７２の実施例７０２に記載の方法に従って製造した。
【００４４】
Ｈ５２６は、１０％ ＦＣＳ（Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社より購入）を含むＲＰＭＩ１６４０培地（日水製薬株式会社製）で５％ ＣＯ２インキュベーター（３７℃）で培養した。培養後、Ｈ５２６細胞をＰＢＳで３回洗浄し、０．１％ ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ社製）を含むＲＰＭＩ１６４０培地（以下、ＢＳＡ−ＲＰＭＩ１６４０）で１．０ｘ１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌに懸濁し、この細胞懸濁液を５０μｌづつ丸底９６ウェルプレートに播種して、５％ ＣＯ２インキュベーター（３７℃）で一晩培養した。一晩培養後、２００ｎｇ／ｍｌ ＳＣＦ（Ｒ ＆ Ｄ社製）を含むＢＳＡ−ＲＰＭＩ１６４０ ５０μｌ、及び希釈した被検物質を含むＢＳＡ−ＲＰＭＩ１６４０ １００μｌを添加した。
【００４５】
被検物質添加開始日より７日目に、Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ−８（同仁化学研究所製）２０μｌを加え、５％ＣＯ２インキュベーター（３７℃）で約２時間培養した。発色後、測定波長４５０ｎｍ、対照波長６６０ｎｍで各ウェルの吸光度をプレートリーダーＭＴＰ−３２（コロナ電気社製）を用いて測定した。各ウェルの吸光度をＳＣＦを添加していないウェルの吸光度で引き、被検物質を添加していないウェルの吸光度に対する、被検物質を添加したウェルの吸光度の比を求め、この比の値から細胞増殖を５０％阻害するのに必要な被検物質の濃度（ＩＣ５０）を求めた。
【００４６】
その結果下表に示す通り、化合物１、化合物２、化合物３及び化合物４は、ＳＣＦで刺激される細胞増殖を抑制し、ｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害活性を有していると考えられた。また、久保和生ら、第２２回メディシナルケミストリーシンポジウム講演要旨集ｐ２７５−２７７，２Ｐ−３２０，２００２に記載の化合物ＫＲＮ６３３のＩＣ５０は３０１ｎＭで、化合物１、化合物２、化合物３及び化合物４と比較して、弱い活性しか示さなかった。また、ｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤として知られるＳＴＩ５７１のＩＣ５０は１９０ｎＭであった。
【００４７】
【００４８】
［実施例２］ＳＣＦ刺激よるｃ−Ｋｉｔキナーゼリン酸化に対する化合物１の影響
【００４９】
ｃ−Ｋｉｔキナーゼ発現小細胞肺癌細胞株Ｈ５２６細胞ｃ−Ｋｉｔキナーゼ分子の、ＳＣＦ刺激によるリン酸化に対する化合物１の影響を調べた。
【００５０】
Ｈ５２６は、１０％ ＦＣＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地で５％ ＣＯ２インキュベーター（３７℃）で培養した。培養後、Ｈ５２６細胞をＰＢＳで３回洗浄し、ＢＳＡ−ＲＰＭＩ１６４０で５．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌに懸濁し、この細胞懸濁液を１ｍｌづつ２４ウェルプレートに播種して、５％ ＣＯ２インキュベーター（３７℃）で６時間培養した。６時間培養後、希釈した被検物質を含むＢＳＡ−ＲＰＭＩ１６４０ １ｍｌを添加し５％ ＣＯ２インキュベーター（３７℃）で１時間培養した後、１０μｇ／ｍｌ ＳＣＦ（Ｒ ＆ Ｄ社製）１０μｌを添加して、５％ ＣＯ２インキュベーター（３７℃）で更に５分間培養した。５分間培養後、ＰＢＳで洗浄し、ＳＤＳサンプルローディングバッファー１００μｌを添加してｃｅｌｌ ｌｙｓａｔｅサンプルを調整し、９４℃・１０分間熱処理を行った後−２０℃で凍結保存した。
【００５１】
その後、ｃｅｌｌ ｌｙｓａｔｅサンプル２０μｌを４−２０％ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｇｅｌ（第一化学薬品株式会社製）で電気泳動を行った。泳動後、ＰＶＤＦ ｍｅｍｂｒａｎｅ（Ａｍｅｒｓｈａｍ ｐｈａｒｍａｃｉａ ｂｉｏｔｅｃｈ社製）に３時間でトランスファーし、トランスファーしたメンブレンを、１次抗体としてｐｈｏｓｐｈｏ−ｃ−ｋｉｔ（Ｔｙｒ７１９）ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製）、２次抗体としてａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ ＩｇＧ，ＨＲＰ−ｌｉｎｋｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製）を用いてイムノブロットを行った。メンブレンを洗浄後、Ｓｕｐｅｒ Ｓｉｇｎａｌ（ＰＩＥＲＣＥ社製）で発色させた。
【００５２】
その結果、図１に示す通り、ＳＣＦ非存在下ではｃ−Ｋｉｔキナーゼはリン酸化されず（一番左のレーン）、ＳＣＦの存在下で起こるｃ−Ｋｉｔキナーゼのリン酸化は、化合物１の添加により濃度依存的に抑制された。ｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤として知られるＳＴＩ５７１のリン酸化阻害活性は化合物１の約１／１０であった。
【００５３】
［実施例３］ヌードマウスに移植したＨ５６２腫瘍増殖に対する化合物１の影響
【００５４】
Ｈ５２６は、１０％ ＦＣＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地で５％ ＣＯ２インキュベーター（３７℃）で培養した。培養液を回収後、ＰＢＳで２回洗浄し、ＰＢＳで５．０×１０７ｃｅｌｌｓ／ｍｌに懸濁した。この細胞懸濁液を６週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃ ｎｕ／ｎｕ ｍｉｃｅ（チャールズリバー社より購入）の右脇腹皮下部に０．１ｍｌで移植した。移植後、腫瘍体積が約１５０ｍｍ３になった時点から、被検物質の投与を開始し、１日２回、１４日間の経口投与を行った。被検物質は０．１ｍｌ／１０ｇ体重の投与量になるように、０．５％メチルセルロース（和光純薬工業株式会社製）溶液に懸濁した。
【００５５】
投与期間中に、１週間に２回、腫瘍体積をキャリパーで測定した。腫瘍体積はキャリパーで腫瘍の長径と短径を測定し、１／２×長径×短径×短径で計算した。なお、実験はビークルコントロール群（溶媒投与群）を１０匹、被検物質投与群を１群５匹で行った。
【００５６】
その結果、図２に示す通り、化合物１は用量依存的にヌードマウスに移植したＨ５２６腫瘍の増殖を抑制した。また、ｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤として知られるＳＴＩ５７１は１６０ｍｇ／ｋｇの投与においても殆ど抗腫瘍効果を示さなかった。
【００５７】
［実施例４］ヌードマウスに移植したＨ５６２腫瘍増殖のｃ−Ｋｉｔリン酸化に対する化合物１の影響
【００５８】
５．０×１０７ｃｅｌｌｓ／ｍｌの濃度に調製したＨ５２６の細胞懸濁液０．１ｍｌを、６週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃ ｎｕ／ｎｕ ｍｉｃｅ（チャールズリバー社より購入）の右脇腹皮下部に移植した後、腫瘍体積が３００〜１０００ｍｍ３になった時点で、ビークルコントロール群（溶媒投与群）と被検物質投与群に分けて被検物質の投与を行った。摘出した腫瘍をｃｅｌｌ ｌｙｓａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４），１５０ｍＭ ＮａＣｌ，１０％ ｇｙｃｅｒｏｌ，１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００，１．５ｍＭ ＭｇＣｌ２，１ｍＭ ＥＤＴＡ，１００ｍＭ ＮａＦ，１ｍＭ ＰＭＳＦ，１０μｇ／ｍｌ ａｐｒｏｔｉｎｉｎ，５０μｇ／ｍｌ ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ，１μｇ／ｍｌ ｐｅｐｔａｔｉｎ Ａ，１ｍＭ Ｎａ３ＶＯ４，２５ｍＭ β−ｇｌｙｃｅｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ｐｈｏｐｈａｔａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｃｏｃｋｔａｉｌ ＩＩ）に入れてホモジナイズした。遠心した後に上清をタンパク定量し、３×ＳＤＳサンプルローディングバッファーを添加してｃｅｌｌ ｌｙｓａｔｅサンプルを作った。その後、ｃｅｌｌ ｌｙｓａｔｅサンプルを９４℃・１０分間熱処理をし、−２０℃で凍結保存した。
【００５９】
その後、タンパク量として３０μｇ相当のｃｅｌｌ ｌｙｓａｔｅサンプルを４−２０％ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｇｅｌ（第一化学薬品株式会社製）で電気泳動を行った。泳動後、ＰＶＤＦ ｍｅｍｂｒａｎｅ（Ａｍｅｒｓｈａｍ ｐｈａｒｍａｃｉａ ｂｉｏｔｅｃｈ社製）に３時間でトランスファーした。リン酸化ｃ−Ｋｉｔ、ｃ−Ｋｉｔ及びβアクチンを定量するために、それぞれ、ｐｈｏｓｐｈｏ−ｃ−ｋｉｔ（Ｔｙｒ７１９）ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製）、抗ｃ−Ｋｉｔ抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製）及び抗βアクチン抗体（Ｓｉｇｍａ社製）を１次抗体として用い、ａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ ＩｇＧ，ＨＲＰ−ｌｉｎｋｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製）を２次抗体として用いてイムノブロットを行った。メンブレンを洗浄後、Ｓｕｐｅｒ Ｓｉｇｎａｌ（ＰＩＥＲＣＥ社製）で発色させた。
【００６０】
その結果、図３に示すように、化合物１は３０，１００ｍｇ／ｋｇ投与で腫瘍組織におけるリン酸化ｃ−Ｋｉｔの量を減少させたが、ｃ−Ｋｉｔ及びβアクチンの量は変化させなかった。化合物１が３０，１００ｍｇ／ｋｇ投与で完全なリン酸化の抑制を示したのに対し、ｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤として知られるＳＴＩ５７１は１６０ｍｇ／ｋｇでも部分的な抑制しか示さなかった。
【００６１】
このことから、化合物１はｃ−Ｋｉｔのｉｎ ｖｉｖｏでのリン酸化を抑制することが示され、化合物１はｉｎ ｖｉｖｏにおいてもｃ−Ｋｉｔキナーゼの活性を抑制し、抗腫瘍活性を示していることが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００６２】
一般式Ｉで表される化合物が強いｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害活性を示し、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで、ｃ−Ｋｉｔキナーゼが活性化した癌細胞の増殖を抑制することが見出された。したがって、一般式Ｉで表される化合物は、ｃ−Ｋｉｔキナーゼの活性化により悪性化した癌に対する抗癌剤として利用可能であることが明らかとなった。また、一般式Ｉで表される化合物を有効成分として含有するｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤は、ｃ−Ｋｉｔキナーゼが原因と考えられるＭａｓｔｏｃｙｔｏｓｉｓ、アレルギー、喘息などの疾患に対する治療剤としても有効であることが示唆される。
【図１】
【図２】
【図３】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Ｉ：
〔式Ｉ中、
Ｒ１はメチル基、２−メトキシエチル基または式ＩＩ：
（式ＩＩ中、Ｒａ３はメチル基、シクロプロピルメチル基またはシアノメチル基を意味する；Ｒａ１は水素原子、フッ素原子または水酸基を意味する；Ｒａ２は、１−ピロリジニル基、１−ピペリジニル基、４−モルフォリニル基、ジメチルアミノ基またはジエチルアミノ基を意味する。）の何れかで表される基を意味する；
Ｒ２はシアノ基または式−ＣＯＮＨＲａ４（式中、Ｒａ４は水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基またはＣ３−８シクロアルコキシ基を意味する。）で表される基を意味する；
Ｒ３は水素原子、メチル基、トリフルオロメチル基、塩素原子またはフッ素原子を意味する；
Ｒ４は水素原子、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、シクロプロピル基、２−チアゾリル基または４−フルオロフェニル基を意味する。〕で表される化合物もしくはその塩またはそれらの水和物を有効成分とするｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤。
【請求項２】
Ｒ１がメチル基である、請求項１記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤。
【請求項３】
Ｒ４がメチル基、エチル基またはシクロプロピル基である請求項１または２記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤。
【請求項４】
Ｒ３が水素原子、塩素原子またはフッ素原子である請求項１〜３いずれか１項に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤。
【請求項５】
Ｒ２が式−ＣＯＮＨＲａ４（式中、Ｒａ４は水素原子またはメトキシ基を意味する。）で表される基である、請求項１〜４いずれか１項に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤。
【請求項６】
一般式Ｉで表される化合物が、
（１）４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
（２）４−（３−クロロ−４−（エチルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
（３）Ｎ６−メトキシ−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドおよび
（４）Ｎ６−メトキシ−４−（３−クロロ−４−（（（エチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド
からなる群から選ばれるいずれか１の化合物である、請求項１〜５いずれか１項に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤。
【請求項７】
請求項１〜６いずれか１項に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤を有効成分とする、ｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する癌を治療する抗癌剤。
【請求項８】
ｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する癌が、急性骨髄性白血病、肥満細胞性白血病、小細胞肺癌、ＧＩＳＴ、睾丸腫瘍、卵巣癌、乳癌、脳腫瘍、神経芽細胞腫または大腸癌である請求項７に記載の抗癌剤。
【請求項９】
ｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する癌が、急性骨髄性白血病、小細胞肺癌またはＧＩＳＴである請求項７に記載の抗癌剤。
【請求項１０】
患者から取り出した癌細胞がｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現することを確認した後に投与することを特徴とする、請求項７〜９いずれか１項に記載の抗癌剤。
【請求項１１】
請求項１〜６いずれか１項に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤を有効成分とする、肥満細胞症、アレルギーまたは喘息の治療剤。
【請求項１２】
ｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する癌を治療する抗癌剤の製造のための、請求項１〜６いずれか１項に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤の使用。
【請求項１３】
ｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する癌が、急性骨髄性白血病、肥満細胞性白血病、小細胞肺癌、ＧＩＳＴ、睾丸腫瘍、卵巣癌、乳癌、脳腫瘍、神経芽細胞腫または大腸癌である、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
ｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する癌が、急性骨髄性白血病、小細胞肺癌またはＧＩＳＴである、請求項１２に記載の使用。
【請求項１５】
肥満細胞症、アレルギーまたは喘息の治療剤の製造のための、請求項１〜６いずれか１項に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤の使用。
【請求項１】
一般式Ｉ：
〔式Ｉ中、
Ｒ１はメチル基、２−メトキシエチル基または式ＩＩ：
（式ＩＩ中、Ｒａ３はメチル基、シクロプロピルメチル基またはシアノメチル基を意味する；Ｒａ１は水素原子、フッ素原子または水酸基を意味する；Ｒａ２は、１−ピロリジニル基、１−ピペリジニル基、４−モルフォリニル基、ジメチルアミノ基またはジエチルアミノ基を意味する。）の何れかで表される基を意味する；
Ｒ２はシアノ基または式−ＣＯＮＨＲａ４（式中、Ｒａ４は水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基またはＣ３−８シクロアルコキシ基を意味する。）で表される基を意味する；
Ｒ３は水素原子、メチル基、トリフルオロメチル基、塩素原子またはフッ素原子を意味する；
Ｒ４は水素原子、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、シクロプロピル基、２−チアゾリル基または４−フルオロフェニル基を意味する。〕で表される化合物もしくはその塩またはそれらの水和物を有効成分とするｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤。
【請求項２】
Ｒ１がメチル基である、請求項１記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤。
【請求項３】
Ｒ４がメチル基、エチル基またはシクロプロピル基である請求項１または２記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤。
【請求項４】
Ｒ３が水素原子、塩素原子またはフッ素原子である請求項１〜３いずれか１項に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤。
【請求項５】
Ｒ２が式−ＣＯＮＨＲａ４（式中、Ｒａ４は水素原子またはメトキシ基を意味する。）で表される基である、請求項１〜４いずれか１項に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤。
【請求項６】
一般式Ｉで表される化合物が、
（１）４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
（２）４−（３−クロロ−４−（エチルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
（３）Ｎ６−メトキシ−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドおよび
（４）Ｎ６−メトキシ−４−（３−クロロ−４−（（（エチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド
からなる群から選ばれるいずれか１の化合物である、請求項１〜５いずれか１項に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤。
【請求項７】
請求項１〜６いずれか１項に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤を有効成分とする、ｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する癌を治療する抗癌剤。
【請求項８】
ｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する癌が、急性骨髄性白血病、肥満細胞性白血病、小細胞肺癌、ＧＩＳＴ、睾丸腫瘍、卵巣癌、乳癌、脳腫瘍、神経芽細胞腫または大腸癌である請求項７に記載の抗癌剤。
【請求項９】
ｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する癌が、急性骨髄性白血病、小細胞肺癌またはＧＩＳＴである請求項７に記載の抗癌剤。
【請求項１０】
患者から取り出した癌細胞がｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現することを確認した後に投与することを特徴とする、請求項７〜９いずれか１項に記載の抗癌剤。
【請求項１１】
請求項１〜６いずれか１項に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤を有効成分とする、肥満細胞症、アレルギーまたは喘息の治療剤。
【請求項１２】
ｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する癌を治療する抗癌剤の製造のための、請求項１〜６いずれか１項に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤の使用。
【請求項１３】
ｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する癌が、急性骨髄性白血病、肥満細胞性白血病、小細胞肺癌、ＧＩＳＴ、睾丸腫瘍、卵巣癌、乳癌、脳腫瘍、神経芽細胞腫または大腸癌である、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
ｃ−Ｋｉｔキナーゼを過剰発現する、または変異型ｃ−Ｋｉｔキナーゼを発現する癌が、急性骨髄性白血病、小細胞肺癌またはＧＩＳＴである、請求項１２に記載の使用。
【請求項１５】
肥満細胞症、アレルギーまたは喘息の治療剤の製造のための、請求項１〜６いずれか１項に記載のｃ−Ｋｉｔキナーゼ阻害剤の使用。
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０８０４６２
【国際公開日】平成１６年９月２３日（２００４．９．２３）
【発行日】平成１８年６月８日（２００６．６．８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−５０３５３９（Ｐ２００５−５０３５３９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００４／００３０８７
【国際出願日】平成１６年３月１０日（２００４．３．１０）
【出願人】（００００００２１７）エーザイ株式会社 (102)
【Ｆターム（参考）】
【国際公開日】平成１６年９月２３日（２００４．９．２３）
【発行日】平成１８年６月８日（２００６．６．８）
【国際特許分類】
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００４／００３０８７
【国際出願日】平成１６年３月１０日（２００４．３．１０）
【出願人】（００００００２１７）エーザイ株式会社 (102)
【Ｆターム（参考）】
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