シロイヌナズナ由来のミニ染色体保持系統
【課題】 染色体機能解析および人工染色体の開発に利用することができ、既知のミニ染色体とは由来・性質等の点で異なる新規ミニ染色体を保持するシロイヌナズナ由来のミニ染色体保持系統を作出・提供すること。
【解決手段】 シロイヌナズナ第４番染色体短腕由来のミニ染色体４Ｓを保持する系統Ｔｒ４ＳＣｏ５にマーカー遺伝子を組み込んだベクターを導入したところ、新規なミニ染色体が出現した。解析の結果、この新規ミニ染色体２Ｓは第２番染色体の短腕に由来することが明らかになった。このミニ染色体２Ｓには、ＧＦＰ遺伝子およびカナマイシン耐性遺伝子が含まれているため、このミニ染色体保持系統は、カナマイシンで選抜することができ、かつ、緑色の蛍光を発する。また、このミニ染色体が後代に２つ伝わると、カナマイシン耐性も緑色蛍光も消失する現象が観察された。
【解決手段】 シロイヌナズナ第４番染色体短腕由来のミニ染色体４Ｓを保持する系統Ｔｒ４ＳＣｏ５にマーカー遺伝子を組み込んだベクターを導入したところ、新規なミニ染色体が出現した。解析の結果、この新規ミニ染色体２Ｓは第２番染色体の短腕に由来することが明らかになった。このミニ染色体２Ｓには、ＧＦＰ遺伝子およびカナマイシン耐性遺伝子が含まれているため、このミニ染色体保持系統は、カナマイシンで選抜することができ、かつ、緑色の蛍光を発する。また、このミニ染色体が後代に２つ伝わると、カナマイシン耐性も緑色蛍光も消失する現象が観察された。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シロイヌナズナ第２番染色体由来のミニ染色体を保持する新規ミニ染色体保持系統に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
シロイヌナズナ由来のミニ染色体保持系統は、リサーチツールとして、染色体機能解析に有用なだけでなく、将来人工染色体を作り出す元材料にもなると考えられ、植物人工染色体の開発に利用可能である。
【０００３】
本発明者は以前、シロイヌナズナ第４番染色体短腕由来のミニ染色体４Ｓを保持するミニ染色体保持系統を作出した。その詳細な内容については、下記特許文献１に開示されている。
【０００４】
【特許文献１】特開２００３−３１０２６３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、上記の事情に着目してなされたものであり、その目的は、染色体機能解析および人工染色体の開発に利用することができ、既知のミニ染色体とは由来・性質等の点で異なる新規ミニ染色体を保持するシロイヌナズナ由来のミニ染色体保持系統を作出・提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、上記の課題に鑑み、シロイヌナズナ第４番染色体短腕由来のミニ染色体４Ｓを保持する系統Ｔｒ４ＳＣｏ５（シロイヌナズナのコロンビア株）にマーカー遺伝子を組み込んだベクターを導入したところ、新規なミニ染色体が出現した。解析の結果、この新規ミニ染色体２Ｓは第２番染色体の短腕に由来することが明らかになった。このミニ染色体２Ｓには、ＧＦＰ遺伝子およびカナマイシン耐性遺伝子が含まれているため、カナマイシンで選抜することができ、かつ、緑色の蛍光を発する。また、このミニ染色体が後代に２つ伝わると、カナマイシン耐性も緑色蛍光も消失するといったユニークな性質を有すること等を見出し、本発明を完成させるに至った。
【０００７】
即ち、本発明は、産業上有用な発明として、下記Ａ）〜Ｉ）の発明を包含するものである。
Ａ） シロイヌナズナ第２番染色体由来のミニ染色体を保持することを特徴とする、シロイヌナズナ由来のミニ染色体保持系統。
Ｂ） 上記ミニ染色体は、第２番染色体短腕由来のミニ染色体２Ｓである、上記Ａ）記載のミニ染色体保持系統。
Ｃ） シロイヌナズナ第４番染色体短腕由来のミニ染色体４Ｓを保持する系統に、マーカー遺伝子を組み込んだベクターを導入することにより作出される、上記Ａ）又はＢ）記載のミニ染色体保持系統。
Ｄ） 上記ベクターに組み込まれたマーカー遺伝子は、蛍光蛋白遺伝子および薬物耐性遺伝子である、上記Ｃ）記載のミニ染色体保持系統。
Ｅ） 上記蛍光蛋白遺伝子はＧＦＰ遺伝子であり、上記薬物耐性遺伝子はカナマイシン耐性遺伝子である、上記Ｄ）記載のミニ染色体保持系統。
Ｆ） 上記ミニ染色体２Ｓ上に、ＧＦＰ遺伝子とカナマイシン耐性遺伝子とが座乗することを特徴とする、上記Ｂ）記載のミニ染色体保持系統。
Ｇ） 上記Ｃ）記載のミニ染色体保持系統を正常の染色体数を有するシロイヌナズナと交配させることにより得られ、その染色体構成が通常の染色体数２ｎ＝１０に加えてミニ染色体２Ｓを１つ余分に含む２ｎ＝１０＋１であることを特徴とする、ミニ染色体保持系統。
Ｈ） 上記Ｇ）記載のミニ染色体保持系統を自殖させることにより得られ、その染色体構成が通常の染色体数２ｎ＝１０に加えてミニ染色体２Ｓを２つ余分に含む２ｎ＝１０＋２であることを特徴とする、ミニ染色体保持系統。
Ｉ） シロイヌナズナＧ４０（１８−５）系統（ＦＥＲＭ ＡＰ−２０１９１）
【発明の効果】
【０００８】
本発明に係るシロイヌナズナ由来のミニ染色体保持系統は、既知のミニ染色体とは由来・性質等の点で異なる新規ミニ染色体を保持するものであり、リサーチツールとして、セントロメア等の機能要素解析を含む植物の染色体機能解析に有用である。また、将来人工染色体を作り出す元材料にもなると考えられ、植物人工染色体の開発に利用可能である。
【０００９】
さらに、後述のミニ染色体２Ｓｇｋを保持する本発明のミニ染色体保持系統は、ＧＦＰ遺伝子およびカナマイシン耐性遺伝子がミニ染色体２Ｓｇｋに挿入されているため、選抜が容易であるという利点を持っている。このミニ染色体２Ｓｇｋが２つ伝わると、ジーンサイレンシングが引き起こされると考えられることから、本発明のミニ染色体保持系統は、この現象を解析するための材料としても利用できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下、本発明の具体的態様等について更に詳しく説明する。
本発明に係るシロイヌナズナ由来のミニ染色体保持系統は、例えば、第２番染色体短腕由来のミニ染色体２Ｓを保持する。そして、このミニ染色体保持系統は、シロイヌナズナ第４番染色体短腕由来のミニ染色体４Ｓを保持するＴｒ４ＳＣｏ５個体（シロイヌナズナのコロンビア株）に、マーカー遺伝子を組み込んだベクターを導入することにより作出することができる。
【００１１】
上記Ｔｒ４ＳＣｏ５個体は、特開２００３−３１０２６３号公報の記載にしたがって、エコタイプのＬａｎｄｂｅｒｇ ｅｒｅｃｔａ由来のＴｒ４Ｓに、エコタイプ コロンビア（Ｃｏｌｕｍｂｉａ）の花粉をかけ、戻し交配することにより作出することができる。即ち、Ｔｒ４Ｓにエコタイプ コロンビア（Ｃｏｌｕｍｂｉａ）の花粉を交配し、得られた種子からの個体について自殖させ、ついで、得られた種子からの個体に、再度コロンビアの花粉をかけ、その後、５世代にわたってコロンビアの花粉をかけることにより、上記Ｔｒ４ＳＣｏ５個体を得ることができる。
【００１２】
また、上記マーカー遺伝子を組み込んだベクターは、後述のように、アグロバクテリウム形質転換用のｐＢＩ系バイナリーベクターであるｐＢＩ１０１ベクターにＧＦＰ遺伝子をサブクローニングすることにより作製することができる。図１には、実際に本発明のミニ染色体保持系統の作出に使用したｐＢＧＦ１０１ベクター（Ｔ−ＤＮＡ挿入ベクター）の構造が模式的に示される。図中、「ＮＰＴＩＩ（ＫａｎＲ）」はカナマイシン耐性遺伝子、「ＮＯＳ−Ｐｒｏ」はアグロバクテリウム由来のプロモーター、「ＮＯＳ−ｔｅｒ」はアグロバクテリウム由来のターミネーター、「ＣａＭＶ３５ＳΩ」はカリフラワーモザイクウイルス由来のプロモーター、「ＮＯＳ３’」はアグロバクテリウム由来のターミネーター、「ＲＢ」「ＬＢ」はＴ−ＤＮＡ両端の境界配列、「ＨｉｎｄＩＩＩ」「ＥｃｏＲＩ」は制限酵素切断部位、をそれぞれ示す。また、「ｓＧＦＰ」はＧＦＰ遺伝子（S65T-type, Niwa et al., Plant J. 1999, 18(4):455-63.参照）を組み込んだものである。
【００１３】
上記バイナリーベクターｐＢＧＦ１０１は、アグロバクテリム法により上記Ｔｒ４ＳＣｏ５に導入することができる。後述の実施例では、上記ｐＢＧＦ１０１をアグロバクテリム（Ｃ５８Ｃｉ株）にエレクトロポレーション法で導入し、カナマイシン耐性を示すコロニーをスクリーニングした。そして、耐性菌を選抜後、増殖させ、in plant vacuum in filtration法で、Ｔｒ４ＳＣｏ５個体の形質転換に使用した。尚、各実験手順は、通常のアグロバクテリウム法に従って行うことができる。
【００１４】
上記の方法によりアグロバクテリウムを感染させた個体の自殖種子（Ｔ1）を集め、カナマイシン（５０ｍｇ／Ｌ）を含む寒天培地に播種し、２２度で発芽させたところ、数十個体のカナマイシン耐性植物が得られた。これらをさらに室内（２２度）で生育させ、それらの花芽から染色体を調べた（方法は、Murata & Motoyoshi, 1995, Chromosoma 104:39-43参照）。蛍光 in situ ハイブリダイゼイション（ＦＩＳＨ）法（Murata et al., 1997, Plant J. 12:31-37参照）による解析の結果、１個体（Ｇ４０）に染色体の異常が発見された。この個体（Ｇ４０）の染色体数は、２ｎ＝１４であり（図２参照）、そのうちの一つの小さな染色体（図中矢印２Ｓ）は、ＧＦＰ遺伝子を含むＴ−ＤＮＡが挿入されていた。
【００１５】
解析の結果、上記ミニ染色体２Ｓは、シロイヌナズナ第２番染色体の短腕（２Ｓ）に由来することが明らかになった。また、上記個体（Ｇ４０）は、（１）２本あるべき正常の２番染色体が１本しか存在しておらず、（２）ミニ染色体４Ｓ以外に、上記ミニ染色体２Ｓを含む新たな４つのミニ染色体を保持し、染色体構成は２ｎ＝９＋１（４Ｓ）＋４（２Ｓ等）となっており、（３）そのうち１つのミニ染色体（２Ｌ１）は、２番染色体の長腕から由来していると考えられる（図２（ａ）参照）。
【００１６】
なお、上記個体（Ｇ４０）については、シロイヌナズナＧ４０（１８−５）系統（受領番号ＦＥＲＭ ＡＰ−２０１９１）として特許生物寄託センターに寄託されている。
【００１７】
このように、ミニ染色体保持系統である上記個体（Ｇ４０）には、いろいろな染色体が混じっているため、この個体の自殖種子を集めた。幸いに、染色体の異常があるにもかかわらず、雌雄ともに稔性があった。得られた種子（Ｔ2世代）を播き、その染色体を調べたが、多くが親のＧ４０とその構成が同じであった。
【００１８】
そこで、いくつかの個体を選び、これらの花粉を正常のコロンビア株（Ｃｏｌ−０）と交配した。その結果得られた種子（Ｔ3）について解析を行った結果、１１本の染色体を持つ個体を得た（図３（ａ）参照）。即ち、この個体の染色体構成は、２ｎ＝１０＋１であり、余分な染色体は上記ミニ染色体２Ｓである。また、この２Ｓには、ＧＦＰ遺伝子およびカナマイシン耐性遺伝子が挿入されているため、このミニ染色体保持系統はカナマイシンで選抜することができるし、緑色の蛍光を発する。
【００１９】
ＧＦＰ遺伝子およびカナマイシン耐性遺伝子を有する上記ミニ染色体２Ｓを、便宜上「２Ｓｇｋ」と呼びことにした。そして、この２Ｓｇｋを１つ余分に含む上記個体を自殖させることにより、後代（Ｔ4）において、２Ｓｇｋを２つ余分に含む個体を得た（図３（ｂ）参照）。即ち、この個体の染色体構成は、２ｎ＝１０+２であり、通常の染色体数に加えてミニ染色体２Ｓｇｋを２つ余分に含む。このミニ染色体保持系統では、ジーンサイレンシングを受けるためか、カナマイシン耐性も緑色蛍光もなくなる。他方、上述のように、２Ｓｇｋを１つ余分に含むミニ染色体保持系統では、両遺伝子が働く。
【００２０】
このように、上記ミニ染色体２Ｓｇｋには、ＧＦＰ遺伝子およびカナマイシン耐性遺伝子が挿入されているため、２Ｓｇｋを１つ余分に含む本発明のミニ染色体保持系統は、選抜が容易であるという利点を持っている。さらに、このミニ染色体２Ｓｇｋを２つ余分に含む本発明のミニ染色体保持系統では、ジーンサイレンシングが引き起こされることから、この現象を解析する良い材料ともなる。
【００２１】
以上の方法により、本発明のミニ染色体保持系統を作出できるが、勿論、上記方法に種々の変更を加えて、本発明のミニ染色体保持系統を作出してもよい。例えば、ベクターに組み込まれる薬剤耐性遺伝子として、カナマイシン耐性遺伝子を使用したが、ハイグロマイシン耐性遺伝子などの他の薬剤耐性遺伝子を使用してもよい。各遺伝子のプロモーターおよびターミネーターについても特に限定されるものではない。ベクターについても、上記ｐＢＧＦ１０１ベクターと同様に、ｐＢＩ１２１、ｐＢＩ１０１、ｐＢＩ１０１．２、ｐＢＩ１０１．３などのｐＢＩ系バイナリーベクターに蛍光蛋白遺伝子を組み込んだベクターを作製し、これを使用して形質転換を行うことによって、本発明のミニ染色体保持系統を作出できると考えられる。
【００２２】
本発明のミニ染色体保持系統は、上記のように、既知のミニ染色体とは由来・性質等の点で異なる新規ミニ染色体２Ｓｇｋを保持するものであり、このミニ染色体２Ｓｇｋの供給材料として有用であるほか、リサーチツールとして、セントロメア等の機能要素解析を含む植物の染色体機能解析に有用である。また、将来人工染色体を作り出す元材料にもなると考えられ、植物人工染色体の開発に利用可能である。
【００２３】
本発明のミニ染色体保持系統は、シロイヌナズナ由来であり、シロイヌナズナはゲノムサイズが他の植物に比べて極めて小さいなどモデル植物として数多くの利点を有しているので、このような染色体機能解析、植物人工染色体の開発に好適な材料といえる。
【００２４】
さらに、本発明のミニ染色体保持系統は、このような染色体機能解析における利用、植物人工染色体の開発における利用を通じて、作物の改良や新たな形質を持った植物の開発などに貢献し得るものである。
【００２５】
なお、本発明の「ミニ染色体保持系統」の範疇には、植物個体のほか、根、茎、葉、生殖器官（花器官および種子を含む）などの各種器官、各種組織、細胞、などが含まれ、さらにはプロトプラスト、スフェロプラスト、誘導カルス、再生個体およびその子孫、なども含まれるものとする。
【実施例】
【００２６】
以下、図面を参照しながら本発明の実施例について説明するが、本発明はこれら実施例によって何ら限定されるものではない。
【００２７】
形質転換に用いたバイナリーベクターｐＢＧＦ１０１の構造が図１に模式的に示される。このｐＢＧＦ１０１は、ＧＦＰ遺伝子（S65T-type, Niwa et al., Plant J. 1999, 18(4):455-63.参照）を、アグロバクテリウム形質転換用のｐＢＩ１０１ベクターにサブクローニングすることにより作製した。
【００２８】
上記ｐＢＧＦ１０１をアグロバクテリム（Ｃ５８Ｃｉ株）にエレクトロポレーション法で導入し、カナマイシン耐性を示すコロニーをスクリーニングした。耐性菌を選抜後、増殖させ、in plant vacuum in filtration法で、４Ｓ染色体を保持するＴｒ４ＳＣｏ５個体（シロイヌナズナのコロンビア株）の形質転換に使用した。アグロバクテリウムを感染させた個体の自殖種子（Ｔ1）を集め、カナマイシン（５０ｍｇ／Ｌ）を含む寒天培地に播種し、２２度で発芽させた。
【００２９】
上記実験の結果、数十個体のカナマイシン耐性植物が得られたので、これらを室内（２２度）で生育させ、それらの花芽から染色体を調べた（方法は、Murata & Motoyoshi, 1995, Chromosoma 104:39-43参照）。蛍光 in situ ハイブリダイゼイション（ＦＩＳＨ）法（Murata et al., 1997, Plant J. 12:31-37参照）による解析の結果、１個体（Ｇ４０）に染色体の異常が発見された。この個体（Ｇ４０）の染色体数は、２ｎ＝１４であり（図２参照）、そのうちの一つの小さな染色体（図中矢印２Ｓ）は、ＧＦＰ遺伝子を含むＴ−ＤＮＡが挿入されていた。
【００３０】
上記ミニ染色体２Ｓが、２番染色体の短腕（２Ｓ）に由来することは、図２（ｂ）の結果からも推定された。何故ならミニ染色体２Ｓには、１８Ｓ ｒＤＮＡのシグナルが検出される一方、５Ｓ ｒＤＮＡのシグナルは検出されなかったからである。即ち、１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子（１８Ｓ ｒＤＮＡ）クラスターは、２番と４番の染色体にしか座乗しておらず、４番染色体には、５ＳリボソームＲＮＡ（５Ｓ ｒＤＮＡ）も座乗しているため、このミニ染色体２Ｓは２番染色体由来と判断された。また、この個体（Ｇ４０）には、２本あるべき正常の２番染色体が１本しか存在しなかった。さらに、このミニ染色体２Ｓが２番染色体短腕起源であることは、マーカーＤＮＡ（ＢＡＣクローンなど）を用いても確かめられた。
【００３１】
ミニ染色体保持系統である上記個体（Ｇ４０）には、いろいろな染色体が混じっているため、この個体の自殖種子を集めた。幸いに、染色体の異常があるにもかかわらず、雌雄ともに稔性があった。得られた種子（Ｔ2世代）を播き、その染色体を調べたが、多くが親のＧ４０とその構成が同じであった。
【００３２】
そこで、いくつかの個体を選び、これらの花粉を正常のコロンビア株（Ｃｏｌ−０）に交配した。その結果得られた種子（Ｔ3）について解析を行った結果、１１本の染色体を持つ個体を得た（図３（ａ）参照）。即ち、この個体の染色体構成は、２ｎ＝１０＋１であり、余分な染色体は上記ミニ染色体２Ｓである。また、この２Ｓには、ＧＦＰ遺伝子およびカナマイシン耐性遺伝子が挿入されているため、このミニ染色体保持系統はカナマイシンで選抜することができるし、緑色の蛍光を発する。
【００３３】
ＧＦＰ遺伝子およびカナマイシン耐性遺伝子を有する上記ミニ染色体２Ｓを、便宜上「２Ｓｇｋ」と呼びことにした。そして、この２Ｓｇｋを１つ余分に含む上記個体を自殖させることにより、後代（Ｔ4）において、２Ｓｇｋを２つ余分に含む個体を得た（図３（ｂ）参照）。即ち、この個体の染色体構成は、２ｎ＝１０+２であり、通常の染色体数に加えてミニ染色体２Ｓｇｋを２つ余分に含む。このミニ染色体保持系統では、ジーンサイレンシングを受けるためか、カナマイシン耐性も緑色蛍光もなくなる。他方、上述のように、２Ｓｇｋを１つ余分に含むミニ染色体保持系統では、両遺伝子が働く。
【００３４】
上記ミニ染色体２Ｓｇｋは、大きなリボソーム遺伝子クラスター（約３．５Ｍｂ）を含んでいるので、６−７Ｍｂほどのサイズであると考えられる。セントロメア（１８０−ｂｐ反復配列ファミリー）のサイズについては、減数分裂パキテン期のＦＩＳＨによる１８０−ｂｐ反復配列のシグナルを正常の染色体と比較すると、約２／５ほどであった（図３（ｃ）参照）。正常染色体の１８０−ｂｐコア領域は、約３Ｍｂであると推定されているため、上記ミニ染色体２Ｓｇｋのセントロメア（１８０−ｂｐクラスター）サイズは、１．２Ｍｂほどであると考えられる。
【００３５】
また、上記ミニ染色体２Ｓｇｋには、ＧＦＰ遺伝子およびカナマイシン耐性遺伝子が挿入されているため、選抜が容易であるという利点を持っている。さらに、このミニ染色体２Ｓｇｋが２つ伝わると、ジーンサイレンシングが引き起こされることから、この現象を解析する良い材料ともなる。
【００３６】
なお、前記個体（Ｇ４０）には、上記ミニ染色体２Ｓｇｋ以外にも、新たな３つのミニ染色体が存在したが、このうち１つのミニ染色体（２Ｌ１）は、２番染色体の長腕から由来していると考えられる（図２（ａ）参照）。
【産業上の利用可能性】
【００３７】
以上のように、本発明は、シロイヌナズナ由来の新規ミニ染色体保持系統に関するものであり、前述したとおり、リサーチツールとして、染色体機能解析に有用であるほか、将来人工染色体を作り出す元材料にもなると考えられ、植物人工染色体の開発に利用可能であるなど、種々の利用可能性を有するものである。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】ミニ染色体４Ｓを保持する系統（Ｔｒ４ＳＣｏ５）の形質転換に用いたバイナリーベクターｐＢＧＦ１０１の構成を模式的に示す図である。
【図２】（ａ）（ｂ）は、上記ｐＢＧＦ１０１のＴ−ＤＮＡを導入したシロイヌナズナ（Ｔｒ４ＳＣｏ５）Ｔ１個体の染色体を可視化した図である。原図はカラーであり、分図（ａ）では、ＦＩＳＨ（蛍光 in situ ハイブリダイゼイション）シグナルにより、ベクターのＴ−ＤＮＡの挿入部位は緑色に、１８０−ｂｐ反復配列はピンク色に表示される。また、分図（ｂ）では、ＦＩＳＨシグナルにより、１８Ｓ ｒＤＮＡは緑色に、５Ｓ ｒＤＮＡはピンク色に表示される。４Ｓ染色体以外に、２Ｓおよび２Ｌ１を含む４つの小型染色体が観察された（それぞれ矢印で示される）。
【図３】（ａ）〜（ｃ）は、本発明のミニ染色体保持系統における染色体を可視化した図である。原図はカラーであり、ＦＩＳＨシグナルにより、Ｔ−ＤＮＡ挿入部位は赤色に、１８０−ｂｐ反復配列は緑色に、５Ｓ ｒＤＮＡは紫色に、１８Ｓ ｒＤＮＡは赤色に表示される。（ａ）は、正常の染色体構成（２ｎ＝１０）に加えて、ミニ染色体２Ｓｇｋを１つ余分に持つ個体の体細胞、（ｂ）は、正常の染色体構成（２ｎ＝１０）に加えて、ミニ染色体２Ｓｇｋを２つ余分に持つ個体の体細胞、（ｃ）は、正常の染色体構成（２ｎ＝１０）に加えて、ミニ染色体２Ｓｇｋを１つ余分に持つ個体の減数分裂パキテン期の細胞、をそれぞれ示す。各分図において、矢印はミニ染色体２Ｓｇｋの位置を示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シロイヌナズナ第２番染色体由来のミニ染色体を保持する新規ミニ染色体保持系統に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
シロイヌナズナ由来のミニ染色体保持系統は、リサーチツールとして、染色体機能解析に有用なだけでなく、将来人工染色体を作り出す元材料にもなると考えられ、植物人工染色体の開発に利用可能である。
【０００３】
本発明者は以前、シロイヌナズナ第４番染色体短腕由来のミニ染色体４Ｓを保持するミニ染色体保持系統を作出した。その詳細な内容については、下記特許文献１に開示されている。
【０００４】
【特許文献１】特開２００３−３１０２６３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、上記の事情に着目してなされたものであり、その目的は、染色体機能解析および人工染色体の開発に利用することができ、既知のミニ染色体とは由来・性質等の点で異なる新規ミニ染色体を保持するシロイヌナズナ由来のミニ染色体保持系統を作出・提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、上記の課題に鑑み、シロイヌナズナ第４番染色体短腕由来のミニ染色体４Ｓを保持する系統Ｔｒ４ＳＣｏ５（シロイヌナズナのコロンビア株）にマーカー遺伝子を組み込んだベクターを導入したところ、新規なミニ染色体が出現した。解析の結果、この新規ミニ染色体２Ｓは第２番染色体の短腕に由来することが明らかになった。このミニ染色体２Ｓには、ＧＦＰ遺伝子およびカナマイシン耐性遺伝子が含まれているため、カナマイシンで選抜することができ、かつ、緑色の蛍光を発する。また、このミニ染色体が後代に２つ伝わると、カナマイシン耐性も緑色蛍光も消失するといったユニークな性質を有すること等を見出し、本発明を完成させるに至った。
【０００７】
即ち、本発明は、産業上有用な発明として、下記Ａ）〜Ｉ）の発明を包含するものである。
Ａ） シロイヌナズナ第２番染色体由来のミニ染色体を保持することを特徴とする、シロイヌナズナ由来のミニ染色体保持系統。
Ｂ） 上記ミニ染色体は、第２番染色体短腕由来のミニ染色体２Ｓである、上記Ａ）記載のミニ染色体保持系統。
Ｃ） シロイヌナズナ第４番染色体短腕由来のミニ染色体４Ｓを保持する系統に、マーカー遺伝子を組み込んだベクターを導入することにより作出される、上記Ａ）又はＢ）記載のミニ染色体保持系統。
Ｄ） 上記ベクターに組み込まれたマーカー遺伝子は、蛍光蛋白遺伝子および薬物耐性遺伝子である、上記Ｃ）記載のミニ染色体保持系統。
Ｅ） 上記蛍光蛋白遺伝子はＧＦＰ遺伝子であり、上記薬物耐性遺伝子はカナマイシン耐性遺伝子である、上記Ｄ）記載のミニ染色体保持系統。
Ｆ） 上記ミニ染色体２Ｓ上に、ＧＦＰ遺伝子とカナマイシン耐性遺伝子とが座乗することを特徴とする、上記Ｂ）記載のミニ染色体保持系統。
Ｇ） 上記Ｃ）記載のミニ染色体保持系統を正常の染色体数を有するシロイヌナズナと交配させることにより得られ、その染色体構成が通常の染色体数２ｎ＝１０に加えてミニ染色体２Ｓを１つ余分に含む２ｎ＝１０＋１であることを特徴とする、ミニ染色体保持系統。
Ｈ） 上記Ｇ）記載のミニ染色体保持系統を自殖させることにより得られ、その染色体構成が通常の染色体数２ｎ＝１０に加えてミニ染色体２Ｓを２つ余分に含む２ｎ＝１０＋２であることを特徴とする、ミニ染色体保持系統。
Ｉ） シロイヌナズナＧ４０（１８−５）系統（ＦＥＲＭ ＡＰ−２０１９１）
【発明の効果】
【０００８】
本発明に係るシロイヌナズナ由来のミニ染色体保持系統は、既知のミニ染色体とは由来・性質等の点で異なる新規ミニ染色体を保持するものであり、リサーチツールとして、セントロメア等の機能要素解析を含む植物の染色体機能解析に有用である。また、将来人工染色体を作り出す元材料にもなると考えられ、植物人工染色体の開発に利用可能である。
【０００９】
さらに、後述のミニ染色体２Ｓｇｋを保持する本発明のミニ染色体保持系統は、ＧＦＰ遺伝子およびカナマイシン耐性遺伝子がミニ染色体２Ｓｇｋに挿入されているため、選抜が容易であるという利点を持っている。このミニ染色体２Ｓｇｋが２つ伝わると、ジーンサイレンシングが引き起こされると考えられることから、本発明のミニ染色体保持系統は、この現象を解析するための材料としても利用できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下、本発明の具体的態様等について更に詳しく説明する。
本発明に係るシロイヌナズナ由来のミニ染色体保持系統は、例えば、第２番染色体短腕由来のミニ染色体２Ｓを保持する。そして、このミニ染色体保持系統は、シロイヌナズナ第４番染色体短腕由来のミニ染色体４Ｓを保持するＴｒ４ＳＣｏ５個体（シロイヌナズナのコロンビア株）に、マーカー遺伝子を組み込んだベクターを導入することにより作出することができる。
【００１１】
上記Ｔｒ４ＳＣｏ５個体は、特開２００３−３１０２６３号公報の記載にしたがって、エコタイプのＬａｎｄｂｅｒｇ ｅｒｅｃｔａ由来のＴｒ４Ｓに、エコタイプ コロンビア（Ｃｏｌｕｍｂｉａ）の花粉をかけ、戻し交配することにより作出することができる。即ち、Ｔｒ４Ｓにエコタイプ コロンビア（Ｃｏｌｕｍｂｉａ）の花粉を交配し、得られた種子からの個体について自殖させ、ついで、得られた種子からの個体に、再度コロンビアの花粉をかけ、その後、５世代にわたってコロンビアの花粉をかけることにより、上記Ｔｒ４ＳＣｏ５個体を得ることができる。
【００１２】
また、上記マーカー遺伝子を組み込んだベクターは、後述のように、アグロバクテリウム形質転換用のｐＢＩ系バイナリーベクターであるｐＢＩ１０１ベクターにＧＦＰ遺伝子をサブクローニングすることにより作製することができる。図１には、実際に本発明のミニ染色体保持系統の作出に使用したｐＢＧＦ１０１ベクター（Ｔ−ＤＮＡ挿入ベクター）の構造が模式的に示される。図中、「ＮＰＴＩＩ（ＫａｎＲ）」はカナマイシン耐性遺伝子、「ＮＯＳ−Ｐｒｏ」はアグロバクテリウム由来のプロモーター、「ＮＯＳ−ｔｅｒ」はアグロバクテリウム由来のターミネーター、「ＣａＭＶ３５ＳΩ」はカリフラワーモザイクウイルス由来のプロモーター、「ＮＯＳ３’」はアグロバクテリウム由来のターミネーター、「ＲＢ」「ＬＢ」はＴ−ＤＮＡ両端の境界配列、「ＨｉｎｄＩＩＩ」「ＥｃｏＲＩ」は制限酵素切断部位、をそれぞれ示す。また、「ｓＧＦＰ」はＧＦＰ遺伝子（S65T-type, Niwa et al., Plant J. 1999, 18(4):455-63.参照）を組み込んだものである。
【００１３】
上記バイナリーベクターｐＢＧＦ１０１は、アグロバクテリム法により上記Ｔｒ４ＳＣｏ５に導入することができる。後述の実施例では、上記ｐＢＧＦ１０１をアグロバクテリム（Ｃ５８Ｃｉ株）にエレクトロポレーション法で導入し、カナマイシン耐性を示すコロニーをスクリーニングした。そして、耐性菌を選抜後、増殖させ、in plant vacuum in filtration法で、Ｔｒ４ＳＣｏ５個体の形質転換に使用した。尚、各実験手順は、通常のアグロバクテリウム法に従って行うことができる。
【００１４】
上記の方法によりアグロバクテリウムを感染させた個体の自殖種子（Ｔ1）を集め、カナマイシン（５０ｍｇ／Ｌ）を含む寒天培地に播種し、２２度で発芽させたところ、数十個体のカナマイシン耐性植物が得られた。これらをさらに室内（２２度）で生育させ、それらの花芽から染色体を調べた（方法は、Murata & Motoyoshi, 1995, Chromosoma 104:39-43参照）。蛍光 in situ ハイブリダイゼイション（ＦＩＳＨ）法（Murata et al., 1997, Plant J. 12:31-37参照）による解析の結果、１個体（Ｇ４０）に染色体の異常が発見された。この個体（Ｇ４０）の染色体数は、２ｎ＝１４であり（図２参照）、そのうちの一つの小さな染色体（図中矢印２Ｓ）は、ＧＦＰ遺伝子を含むＴ−ＤＮＡが挿入されていた。
【００１５】
解析の結果、上記ミニ染色体２Ｓは、シロイヌナズナ第２番染色体の短腕（２Ｓ）に由来することが明らかになった。また、上記個体（Ｇ４０）は、（１）２本あるべき正常の２番染色体が１本しか存在しておらず、（２）ミニ染色体４Ｓ以外に、上記ミニ染色体２Ｓを含む新たな４つのミニ染色体を保持し、染色体構成は２ｎ＝９＋１（４Ｓ）＋４（２Ｓ等）となっており、（３）そのうち１つのミニ染色体（２Ｌ１）は、２番染色体の長腕から由来していると考えられる（図２（ａ）参照）。
【００１６】
なお、上記個体（Ｇ４０）については、シロイヌナズナＧ４０（１８−５）系統（受領番号ＦＥＲＭ ＡＰ−２０１９１）として特許生物寄託センターに寄託されている。
【００１７】
このように、ミニ染色体保持系統である上記個体（Ｇ４０）には、いろいろな染色体が混じっているため、この個体の自殖種子を集めた。幸いに、染色体の異常があるにもかかわらず、雌雄ともに稔性があった。得られた種子（Ｔ2世代）を播き、その染色体を調べたが、多くが親のＧ４０とその構成が同じであった。
【００１８】
そこで、いくつかの個体を選び、これらの花粉を正常のコロンビア株（Ｃｏｌ−０）と交配した。その結果得られた種子（Ｔ3）について解析を行った結果、１１本の染色体を持つ個体を得た（図３（ａ）参照）。即ち、この個体の染色体構成は、２ｎ＝１０＋１であり、余分な染色体は上記ミニ染色体２Ｓである。また、この２Ｓには、ＧＦＰ遺伝子およびカナマイシン耐性遺伝子が挿入されているため、このミニ染色体保持系統はカナマイシンで選抜することができるし、緑色の蛍光を発する。
【００１９】
ＧＦＰ遺伝子およびカナマイシン耐性遺伝子を有する上記ミニ染色体２Ｓを、便宜上「２Ｓｇｋ」と呼びことにした。そして、この２Ｓｇｋを１つ余分に含む上記個体を自殖させることにより、後代（Ｔ4）において、２Ｓｇｋを２つ余分に含む個体を得た（図３（ｂ）参照）。即ち、この個体の染色体構成は、２ｎ＝１０+２であり、通常の染色体数に加えてミニ染色体２Ｓｇｋを２つ余分に含む。このミニ染色体保持系統では、ジーンサイレンシングを受けるためか、カナマイシン耐性も緑色蛍光もなくなる。他方、上述のように、２Ｓｇｋを１つ余分に含むミニ染色体保持系統では、両遺伝子が働く。
【００２０】
このように、上記ミニ染色体２Ｓｇｋには、ＧＦＰ遺伝子およびカナマイシン耐性遺伝子が挿入されているため、２Ｓｇｋを１つ余分に含む本発明のミニ染色体保持系統は、選抜が容易であるという利点を持っている。さらに、このミニ染色体２Ｓｇｋを２つ余分に含む本発明のミニ染色体保持系統では、ジーンサイレンシングが引き起こされることから、この現象を解析する良い材料ともなる。
【００２１】
以上の方法により、本発明のミニ染色体保持系統を作出できるが、勿論、上記方法に種々の変更を加えて、本発明のミニ染色体保持系統を作出してもよい。例えば、ベクターに組み込まれる薬剤耐性遺伝子として、カナマイシン耐性遺伝子を使用したが、ハイグロマイシン耐性遺伝子などの他の薬剤耐性遺伝子を使用してもよい。各遺伝子のプロモーターおよびターミネーターについても特に限定されるものではない。ベクターについても、上記ｐＢＧＦ１０１ベクターと同様に、ｐＢＩ１２１、ｐＢＩ１０１、ｐＢＩ１０１．２、ｐＢＩ１０１．３などのｐＢＩ系バイナリーベクターに蛍光蛋白遺伝子を組み込んだベクターを作製し、これを使用して形質転換を行うことによって、本発明のミニ染色体保持系統を作出できると考えられる。
【００２２】
本発明のミニ染色体保持系統は、上記のように、既知のミニ染色体とは由来・性質等の点で異なる新規ミニ染色体２Ｓｇｋを保持するものであり、このミニ染色体２Ｓｇｋの供給材料として有用であるほか、リサーチツールとして、セントロメア等の機能要素解析を含む植物の染色体機能解析に有用である。また、将来人工染色体を作り出す元材料にもなると考えられ、植物人工染色体の開発に利用可能である。
【００２３】
本発明のミニ染色体保持系統は、シロイヌナズナ由来であり、シロイヌナズナはゲノムサイズが他の植物に比べて極めて小さいなどモデル植物として数多くの利点を有しているので、このような染色体機能解析、植物人工染色体の開発に好適な材料といえる。
【００２４】
さらに、本発明のミニ染色体保持系統は、このような染色体機能解析における利用、植物人工染色体の開発における利用を通じて、作物の改良や新たな形質を持った植物の開発などに貢献し得るものである。
【００２５】
なお、本発明の「ミニ染色体保持系統」の範疇には、植物個体のほか、根、茎、葉、生殖器官（花器官および種子を含む）などの各種器官、各種組織、細胞、などが含まれ、さらにはプロトプラスト、スフェロプラスト、誘導カルス、再生個体およびその子孫、なども含まれるものとする。
【実施例】
【００２６】
以下、図面を参照しながら本発明の実施例について説明するが、本発明はこれら実施例によって何ら限定されるものではない。
【００２７】
形質転換に用いたバイナリーベクターｐＢＧＦ１０１の構造が図１に模式的に示される。このｐＢＧＦ１０１は、ＧＦＰ遺伝子（S65T-type, Niwa et al., Plant J. 1999, 18(4):455-63.参照）を、アグロバクテリウム形質転換用のｐＢＩ１０１ベクターにサブクローニングすることにより作製した。
【００２８】
上記ｐＢＧＦ１０１をアグロバクテリム（Ｃ５８Ｃｉ株）にエレクトロポレーション法で導入し、カナマイシン耐性を示すコロニーをスクリーニングした。耐性菌を選抜後、増殖させ、in plant vacuum in filtration法で、４Ｓ染色体を保持するＴｒ４ＳＣｏ５個体（シロイヌナズナのコロンビア株）の形質転換に使用した。アグロバクテリウムを感染させた個体の自殖種子（Ｔ1）を集め、カナマイシン（５０ｍｇ／Ｌ）を含む寒天培地に播種し、２２度で発芽させた。
【００２９】
上記実験の結果、数十個体のカナマイシン耐性植物が得られたので、これらを室内（２２度）で生育させ、それらの花芽から染色体を調べた（方法は、Murata & Motoyoshi, 1995, Chromosoma 104:39-43参照）。蛍光 in situ ハイブリダイゼイション（ＦＩＳＨ）法（Murata et al., 1997, Plant J. 12:31-37参照）による解析の結果、１個体（Ｇ４０）に染色体の異常が発見された。この個体（Ｇ４０）の染色体数は、２ｎ＝１４であり（図２参照）、そのうちの一つの小さな染色体（図中矢印２Ｓ）は、ＧＦＰ遺伝子を含むＴ−ＤＮＡが挿入されていた。
【００３０】
上記ミニ染色体２Ｓが、２番染色体の短腕（２Ｓ）に由来することは、図２（ｂ）の結果からも推定された。何故ならミニ染色体２Ｓには、１８Ｓ ｒＤＮＡのシグナルが検出される一方、５Ｓ ｒＤＮＡのシグナルは検出されなかったからである。即ち、１８ＳリボソームＲＮＡ遺伝子（１８Ｓ ｒＤＮＡ）クラスターは、２番と４番の染色体にしか座乗しておらず、４番染色体には、５ＳリボソームＲＮＡ（５Ｓ ｒＤＮＡ）も座乗しているため、このミニ染色体２Ｓは２番染色体由来と判断された。また、この個体（Ｇ４０）には、２本あるべき正常の２番染色体が１本しか存在しなかった。さらに、このミニ染色体２Ｓが２番染色体短腕起源であることは、マーカーＤＮＡ（ＢＡＣクローンなど）を用いても確かめられた。
【００３１】
ミニ染色体保持系統である上記個体（Ｇ４０）には、いろいろな染色体が混じっているため、この個体の自殖種子を集めた。幸いに、染色体の異常があるにもかかわらず、雌雄ともに稔性があった。得られた種子（Ｔ2世代）を播き、その染色体を調べたが、多くが親のＧ４０とその構成が同じであった。
【００３２】
そこで、いくつかの個体を選び、これらの花粉を正常のコロンビア株（Ｃｏｌ−０）に交配した。その結果得られた種子（Ｔ3）について解析を行った結果、１１本の染色体を持つ個体を得た（図３（ａ）参照）。即ち、この個体の染色体構成は、２ｎ＝１０＋１であり、余分な染色体は上記ミニ染色体２Ｓである。また、この２Ｓには、ＧＦＰ遺伝子およびカナマイシン耐性遺伝子が挿入されているため、このミニ染色体保持系統はカナマイシンで選抜することができるし、緑色の蛍光を発する。
【００３３】
ＧＦＰ遺伝子およびカナマイシン耐性遺伝子を有する上記ミニ染色体２Ｓを、便宜上「２Ｓｇｋ」と呼びことにした。そして、この２Ｓｇｋを１つ余分に含む上記個体を自殖させることにより、後代（Ｔ4）において、２Ｓｇｋを２つ余分に含む個体を得た（図３（ｂ）参照）。即ち、この個体の染色体構成は、２ｎ＝１０+２であり、通常の染色体数に加えてミニ染色体２Ｓｇｋを２つ余分に含む。このミニ染色体保持系統では、ジーンサイレンシングを受けるためか、カナマイシン耐性も緑色蛍光もなくなる。他方、上述のように、２Ｓｇｋを１つ余分に含むミニ染色体保持系統では、両遺伝子が働く。
【００３４】
上記ミニ染色体２Ｓｇｋは、大きなリボソーム遺伝子クラスター（約３．５Ｍｂ）を含んでいるので、６−７Ｍｂほどのサイズであると考えられる。セントロメア（１８０−ｂｐ反復配列ファミリー）のサイズについては、減数分裂パキテン期のＦＩＳＨによる１８０−ｂｐ反復配列のシグナルを正常の染色体と比較すると、約２／５ほどであった（図３（ｃ）参照）。正常染色体の１８０−ｂｐコア領域は、約３Ｍｂであると推定されているため、上記ミニ染色体２Ｓｇｋのセントロメア（１８０−ｂｐクラスター）サイズは、１．２Ｍｂほどであると考えられる。
【００３５】
また、上記ミニ染色体２Ｓｇｋには、ＧＦＰ遺伝子およびカナマイシン耐性遺伝子が挿入されているため、選抜が容易であるという利点を持っている。さらに、このミニ染色体２Ｓｇｋが２つ伝わると、ジーンサイレンシングが引き起こされることから、この現象を解析する良い材料ともなる。
【００３６】
なお、前記個体（Ｇ４０）には、上記ミニ染色体２Ｓｇｋ以外にも、新たな３つのミニ染色体が存在したが、このうち１つのミニ染色体（２Ｌ１）は、２番染色体の長腕から由来していると考えられる（図２（ａ）参照）。
【産業上の利用可能性】
【００３７】
以上のように、本発明は、シロイヌナズナ由来の新規ミニ染色体保持系統に関するものであり、前述したとおり、リサーチツールとして、染色体機能解析に有用であるほか、将来人工染色体を作り出す元材料にもなると考えられ、植物人工染色体の開発に利用可能であるなど、種々の利用可能性を有するものである。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】ミニ染色体４Ｓを保持する系統（Ｔｒ４ＳＣｏ５）の形質転換に用いたバイナリーベクターｐＢＧＦ１０１の構成を模式的に示す図である。
【図２】（ａ）（ｂ）は、上記ｐＢＧＦ１０１のＴ−ＤＮＡを導入したシロイヌナズナ（Ｔｒ４ＳＣｏ５）Ｔ１個体の染色体を可視化した図である。原図はカラーであり、分図（ａ）では、ＦＩＳＨ（蛍光 in situ ハイブリダイゼイション）シグナルにより、ベクターのＴ−ＤＮＡの挿入部位は緑色に、１８０−ｂｐ反復配列はピンク色に表示される。また、分図（ｂ）では、ＦＩＳＨシグナルにより、１８Ｓ ｒＤＮＡは緑色に、５Ｓ ｒＤＮＡはピンク色に表示される。４Ｓ染色体以外に、２Ｓおよび２Ｌ１を含む４つの小型染色体が観察された（それぞれ矢印で示される）。
【図３】（ａ）〜（ｃ）は、本発明のミニ染色体保持系統における染色体を可視化した図である。原図はカラーであり、ＦＩＳＨシグナルにより、Ｔ−ＤＮＡ挿入部位は赤色に、１８０−ｂｐ反復配列は緑色に、５Ｓ ｒＤＮＡは紫色に、１８Ｓ ｒＤＮＡは赤色に表示される。（ａ）は、正常の染色体構成（２ｎ＝１０）に加えて、ミニ染色体２Ｓｇｋを１つ余分に持つ個体の体細胞、（ｂ）は、正常の染色体構成（２ｎ＝１０）に加えて、ミニ染色体２Ｓｇｋを２つ余分に持つ個体の体細胞、（ｃ）は、正常の染色体構成（２ｎ＝１０）に加えて、ミニ染色体２Ｓｇｋを１つ余分に持つ個体の減数分裂パキテン期の細胞、をそれぞれ示す。各分図において、矢印はミニ染色体２Ｓｇｋの位置を示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
シロイヌナズナ第２番染色体由来のミニ染色体を保持することを特徴とする、シロイヌナズナ由来のミニ染色体保持系統。
【請求項２】
上記ミニ染色体は、第２番染色体短腕由来のミニ染色体２Ｓである、請求項１記載のミニ染色体保持系統。
【請求項３】
シロイヌナズナ第４番染色体短腕由来のミニ染色体４Ｓを保持する系統に、マーカー遺伝子を組み込んだベクターを導入することにより作出される、請求項１又は２記載のミニ染色体保持系統。
【請求項４】
上記ベクターに組み込まれたマーカー遺伝子は、蛍光蛋白遺伝子および薬物耐性遺伝子である、請求項３記載のミニ染色体保持系統。
【請求項５】
上記蛍光蛋白遺伝子はＧＦＰ遺伝子であり、上記薬物耐性遺伝子はカナマイシン耐性遺伝子である、請求項４記載のミニ染色体保持系統。
【請求項６】
上記ミニ染色体２Ｓ上に、ＧＦＰ遺伝子とカナマイシン耐性遺伝子とが座乗することを特徴とする、請求項２記載のミニ染色体保持系統。
【請求項７】
請求項３記載のミニ染色体保持系統を正常の染色体数を有するシロイヌナズナと交配させることにより得られ、その染色体構成が通常の染色体数２ｎ＝１０に加えてミニ染色体２Ｓを１つ余分に含む２ｎ＝１０＋１であることを特徴とする、ミニ染色体保持系統。
【請求項８】
請求項７記載のミニ染色体保持系統を自殖させることにより得られ、その染色体構成が通常の染色体数２ｎ＝１０に加えてミニ染色体２Ｓを２つ余分に含む２ｎ＝１０＋２であることを特徴とする、ミニ染色体保持系統。
【請求項９】
シロイヌナズナＧ４０（１８−５）系統（ＦＥＲＭ ＡＰ−２０１９１）
【請求項１】
シロイヌナズナ第２番染色体由来のミニ染色体を保持することを特徴とする、シロイヌナズナ由来のミニ染色体保持系統。
【請求項２】
上記ミニ染色体は、第２番染色体短腕由来のミニ染色体２Ｓである、請求項１記載のミニ染色体保持系統。
【請求項３】
シロイヌナズナ第４番染色体短腕由来のミニ染色体４Ｓを保持する系統に、マーカー遺伝子を組み込んだベクターを導入することにより作出される、請求項１又は２記載のミニ染色体保持系統。
【請求項４】
上記ベクターに組み込まれたマーカー遺伝子は、蛍光蛋白遺伝子および薬物耐性遺伝子である、請求項３記載のミニ染色体保持系統。
【請求項５】
上記蛍光蛋白遺伝子はＧＦＰ遺伝子であり、上記薬物耐性遺伝子はカナマイシン耐性遺伝子である、請求項４記載のミニ染色体保持系統。
【請求項６】
上記ミニ染色体２Ｓ上に、ＧＦＰ遺伝子とカナマイシン耐性遺伝子とが座乗することを特徴とする、請求項２記載のミニ染色体保持系統。
【請求項７】
請求項３記載のミニ染色体保持系統を正常の染色体数を有するシロイヌナズナと交配させることにより得られ、その染色体構成が通常の染色体数２ｎ＝１０に加えてミニ染色体２Ｓを１つ余分に含む２ｎ＝１０＋１であることを特徴とする、ミニ染色体保持系統。
【請求項８】
請求項７記載のミニ染色体保持系統を自殖させることにより得られ、その染色体構成が通常の染色体数２ｎ＝１０に加えてミニ染色体２Ｓを２つ余分に含む２ｎ＝１０＋２であることを特徴とする、ミニ染色体保持系統。
【請求項９】
シロイヌナズナＧ４０（１８−５）系統（ＦＥＲＭ ＡＰ−２０１９１）
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２００６−６７８２１（Ｐ２００６−６７８２１Ａ）
【公開日】平成１８年３月１６日（２００６．３．１６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−２５２０３９（Ｐ２００４−２５２０３９）
【出願日】平成１６年８月３１日（２００４．８．３１）
【出願人】（５０３３６０１１５）独立行政法人科学技術振興機構 (1,734)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年３月１６日（２００６．３．１６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年８月３１日（２００４．８．３１）
【出願人】（５０３３６０１１５）独立行政法人科学技術振興機構 (1,734)
【Ｆターム（参考）】
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