抗アレルギー剤
【課題】ＩｇＥ抗体産生抑制による抗アレルギー作用を有する、安全な天然由来の乳酸菌を利用した抗アレルギー剤を提供すること。
【解決手段】高いＩｇＥ抗体産生抑制作用を有し、抗アレルギー作用をもつロイコノストック・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）に属する乳酸菌、好ましくは受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−２１１１０として寄託されている乳酸菌ロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株を有効成分として含有する抗アレルギー剤。
【解決手段】高いＩｇＥ抗体産生抑制作用を有し、抗アレルギー作用をもつロイコノストック・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）に属する乳酸菌、好ましくは受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−２１１１０として寄託されている乳酸菌ロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株を有効成分として含有する抗アレルギー剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＩｇＥ抗体産生を抑制することによる抗アレルギー作用を有する、乳酸菌ロイコノストック・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）を含有する抗アレルギー剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
免疫系は、人間の体内に侵入する細菌やウイルスなど、或いは体内で発生する腫瘍などから生体を守るシステムである。一方、食品などの生体に必要な栄養成分は免疫寛容を起こし積極的に生体内に取り込むことができる。しかし、免疫系が必要以上に過敏な応答を行なった結果、アレルギー反応を起こすようになる。アレルギー疾患は作用機序によりＩ型〜IV型と大きく４タイプに分類されている。季節性鼻炎である花粉症、通年性鼻炎や、気管支喘息などは免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）が介在するＩ型アレルギーといわれている。アトピー性皮膚炎もＩ型とIV型の複合型と呼ばれている。また、食物アレルギーの発症にはＩ型、II型、IV型が関与するとされており、わが国でもＩ型に関連するアレルギー疾患が増加しているのが現状である。
【０００３】
Ｉ型のアレルギー症状は、花粉などの抗原の侵入に対応して抗原提示細胞がＴ細胞の分化に偏りを起こさしめ、Ｂ細胞によるＩｇＥ抗体産生が誘導されることがきっかけになり発症する。その後、抗体が結合したマスト細胞など特定の細胞が再び抗原の侵入を受けると、これらの細胞から顆粒が放出されヒスタミンなどの炎症物質が遊離することによりアレルギー症状が起こると考えられている。従って、アレルギーの予防、治療を目的とした場合、ターゲットとする作用点は初期の抗原提示の段階から最終的な脱顆粒の段階まで幅広く存在し、それぞれの作用点に着眼した抗アレルギー剤が提案されている。抗原提示の抑制をターゲットとしたものにはサンザシの熱水抽出物（特許文献１参照）がある。また、ヘルパーＴ細胞の分化バランス改善（Ｔｈ１／Ｔｈ２バランス改善）を作用点としたものには初乳（特許文献２参照）、乳酸菌ＫＷ３１１０株（特許文献３参照）などを代表とした多数の飲食物が提案されている。さらにＩｇＥクラススイッチを抑制する素材として茶葉成分のストリクチニン（特許文献４参照）が提案されている。これらは、いずれも結果的にＩｇＥ抗体産生を抑制することによりアレルギー反応を抑制することを目的としたものである。しかしながら、いずれも直接生体でのＩｇＥ抗体産生能の評価にまで至っていないか、評価しているとしても統計的な評価を行っていないので、最終的な目的を達成したのか確認ができていない。乳酸菌ＫＷ３１１０株については、生体でのＩｇＥ産生抑制を統計的に評価しており有意な効果を示しているが、通常マウスでは１００日以上というかなり長期間の経口投与を前提としており、さらに効果的な素材が切望されている。
【０００４】
【特許文献１】特開平０９−１４３０９０号公報
【特許文献２】特開２００６−９６７５２号公報
【特許文献３】特開２００５−１３７３５７号公報
【特許文献４】特開２００５−１９８６６４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、ＩｇＥ抗体産生抑制による抗アレルギー作用を有する、安全な天然由来の乳酸菌（植物性乳酸菌）を有効成分として含有する抗アレルギー剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記目的を達成すべく種々検討した結果、鉄砲漬けから分離したロイコノストック・メセンテロイデスに属する乳酸菌を含有する抗アレルギー剤が、高いＩｇＥ抗体産生抑制作用を有し、上記目的を達成するものであることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、高いＩｇＥ抗体産生抑制作用を有し、抗アレルギー作用をもつロイコノストック・メセンテロイデスに属する乳酸菌を有効成分として含有する抗アレルギー剤を提供するものである。
また、本発明は、前記乳酸菌がロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株（受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−２１１１０）である抗アレルギー剤を提供するものである。
【発明の効果】
【０００７】
本発明の抗アレルギー剤が含有するロイコノストック・メセンテロイデスに属する乳酸菌は、高いＩｇＥ抗体産生抑制作用を有し、この作用によって抗アレルギー作用をもたらす。それゆえ、該乳酸菌を含有する製剤を摂取することにより、アレルギー疾患の予防、治療が達成できる。該乳酸菌は、食経験のある天然食品素材から分離したものであるので安全性にも優れている。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
前記乳酸菌ロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株は、独立行政法人産業技術総合研究所、特許生物寄託センターに寄託されており、その受託番号はＦＥＲＭ Ｐ−２１１１０である。
【０００９】
乳酸菌ロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株の菌学的性質を以下に示す。
ＭＲＳ液体培地（ＤＩＦＣＯ社）を用いて、３０℃、１８時間培養したときの菌の形態（１）菌の形態 球菌
（２）グラム染色 陽性
（３）運動性 なし
（４）胞子 なし
（５）カタラーゼ なし
（６）通性嫌気性
（７）ブドウ糖の代謝 ５０％以上乳酸に転換する
（８）生育温度範囲 １５〜４５℃で生育を認める
（９）乳酸発酵 ヘテロ型
（１０）乳酸の旋光性 Ｄ
（１１）炭水化物の発酵性 グリセロールは陰性、Ｄ−アラビノースは陰性、Ｌ−アラビノースは陽性、リボースは陽性、Ｄ−キシロースは陽性、ガラクトースは陽性、グルコースは陽性、フルクトースは陽性、マンノースは陽性、ラムノースは陰性、マンニトールは陽性、ソルビトールは陰性、αメチルＤグルコシドは陽性、アミグダリンは陽性、エスクリンは陽性、サリシンは陽性、セロビオースは陽性、マルトースは陽性、ラクトースは陽性、メリビオースは陽性、シュクロースは陽性、トレハロースは陽性、イヌリンは陰性、メレジトースは陰性、ラフィノースは陽性、スターチは陰性、グルコン酸は陽性。
【００１０】
乳酸菌ロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株は、食経験が豊富な素材（鉄砲漬け）から分離したものであるため、安全に抗アレルギー剤に利用することができる。
【００１１】
乳酸菌ロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株は、そのままあるいは必要に応じて薬学的に許容される種々の担体、賦形剤、その他の添加剤、その他の成分を配合して製剤化することによって、抗アレルギー剤とすることができる。また、該アレルギー剤は、乳酸菌ロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株を用いて発酵させた種々の動植物性物質をベースとしてもよい。
【００１２】
本発明の抗アレルギー剤は、高いＩｇＥ抗体産生抑制作用を有するロイコノストック・メセンテロイデスに属する乳酸菌、特に好ましくは上記のロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株を有効成分として含有するものである。
【００１３】
ＩｇＥ抗体産生抑制は、例えば抗原提示細胞のアレルゲンの認識能を低下させたり、Ｔｈ２産生側に偏っている免疫担当細胞であるヘルパーＴ細胞の分化のバランス（Ｔｈ１／Ｔｈ２バランス）を改善することや、Ｂ細胞上のレセプターに働きかけＴ細胞からＢ細胞への情報伝達を阻害することなどにより達成できるが、本発明の抗アレルギー剤で用いられる上記の高いＩｇＥ抗体産生抑制作用を有するロイコノストック・メセンテロイデスに属する乳酸菌においては、その作用メカニズムは特に限定されず、結果的にＩｇＥ抗体産生を抑制し、該ＩｇＥ抗体産生抑制による抗アレルギー作用を有するものであればよい。 ここで、「高いＩｇＥ抗体産生抑制作用を有する」とは、好ましくは、抗アレルギー剤を摂取しない群と比較して、統計的に有意水準５％でＩｇＥ抗体産生が抑制される状態をいう。
【００１４】
乳酸菌のＩｇＥ抗体産生抑制作用の評価は、以下の方法により評価することが好ましい。
乳酸菌をＭＲＳ培地等で培養し、この培養した乳酸菌を０．１〜２０質量％含む飼料をＯＶＡ（卵白アルブミン）で感作させて作成したアレルギーモデル動物に一定期間摂取させ、乳酸菌を含まない飼料を摂取させたアレルギーモデル動物（乳酸菌無添加群）と比較してＩｇＥ抗体産生の抑制効果を評価する。アレルギー発症時には、血中ＩｇＥ含有量が通常より上昇することが知られている。
【００１５】
本発明の抗アレルギー剤中の乳酸菌含有量は、ＩｇＥ抗体産生量の上昇を抑制しうる量であればいかなる量であってもよく、使用形態、抗アレルギー剤の剤形や投与又は摂取する者の症状や年齢性別などによって適宜変化させることができる。本発明の抗アレルギー剤を経口投与又は摂取させる場合には、１人１日当たりの投与量又は摂取量が１ｍｇ〜２０ｇとなるように含有させることが好ましい。
【実施例】
【００１６】
次に本発明をさらに具体的に説明するために実施例を挙げるが、本発明は、以下の実施例に制限されるものではない。
【００１７】
実施例１及び比較例１〜４
（使用した乳酸菌）
鉄砲漬け、ゴーヤ漬け、キムチなどの漬物やイーストなど、日本人の食経験が豊富な植物性素材から単離された植物性乳酸菌の中から、桿菌又は球菌であること、同様の性状をもたらすものが複数菌株見つかること、通常の培地で増殖性が高いことなどを基準に、表１に示す代表的な５菌株を選抜した。表１に示すＲＩＥは、本発明のロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株である。
【００１８】
【表１】
【００１９】
（乳酸菌試料の調製）
１０μｇ／ｍｌシクロヘキシミドを含むＭＲＳ培地を用いて３７℃で４８時間培養した表１に示した各乳酸菌株を、遠心分離によって集菌し、滅菌水で３回洗浄した後、滅菌水に懸濁させ、１２１℃で３０分間オートクレーブ処理した。これらを凍結乾燥して乳酸菌試料をそれぞれ得た。
【００２０】
試験例１
（乳酸菌群のアレルギーモデルマウスでのＩｇＥ抗体産生抑制作用の評価）
１．飼料の調製
実施例１及び比較例１〜４で調製した乳酸菌試料を下記に示す基礎飼料〔ＡＩＮ−９３（米国国立栄養研究所によるマウス・ラットを用いた栄養研究のための標準精製飼料）をベースとした飼料〕に５質量％になるように混合し、乳酸菌入り飼料をそれぞれ調製した。対照群として乳酸菌無添加の基礎飼料も調製した。基礎飼料の原料は、全てオリエンタル酵母工業株式会社製のものを使用した。飼料は、乳酸菌試料の混合後、加水し筒状に成形することで得た。
２．動物実験スケジュール
５週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスの体重を測定し、体重を指標として層別連続無作為化法を用いて、各群６匹ずつの群分けを行なった。群分け後、上記１で調製した基礎飼料及び乳酸菌入り飼料の摂取を開始した。なお、体重測定に先立ち順化処理（１週間）を行なったが、この間はいずれのマウスにも基礎飼料を自由摂取させた。
全てのマウスに対して、飼料摂取開始後１４日目及び２８日目に、ＯＶＡ−ａｌｕｍ（ＯＶＡ５０μｇ、水酸化アルミニウム１ｍｇ／匹）を腹腔内投与し、アレルギー状態を誘発させた。飼料摂取開始後１４日目を感作０日目とした。
感作後０日後、２２日後、２８日後及び３５日後に眼窩静脈叢より１００μｌの採血を行なった。採血後、１２，０００ｒｐｍ、５〜１０分間遠心分離を行い、血清を分取した。
３．抗体定量
ＥＬＩＳＡ法により、回収した血清中のＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体量及び総ＩｇＥ抗体量を定量した。
４．実験結果
感作後２２日目のＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体産生量を図１に示す。図１の縦軸のＩｇＥ抗体産生量とは、自作した標準抗体に対する相対的な抗体産生量を示したものである。図２に感作後２２日目の総ＩｇＥ抗体産生量を示す。図２の縦軸のｕｎｉｔとは、１．０ｎｇ／ｍｌ＝１ｕｎｉｔとして抗体量を換算した単位である。ダネット法により統計解析を行った結果、ＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体は、実施例１で調製した乳酸菌ＲＩＥ入り飼料及び比較例１で調製した乳酸菌ＡＹＢ入り飼料を摂食した群で有意に産生抑制されている（有意水準５％）ことが明らかになった。また、総ＩｇＥ抗体は、実施例１で調製した乳酸菌ＲＩＥ入り飼料を摂食した群で有意に産生抑制されている（有意水準５％）ことが明らかになった。このことから、ロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株を含有する抗アレルギー剤が、高いＩｇＥ抗体産生抑制作用を有することが証明された。
【００２１】
（基本飼料の配合）
カゼイン ２０．０質量％
コーンスターチ ５０．５質量％
シュークロース １０．０質量％
ラード １０．０質量％
セルロースパウダー ５．０質量％
ＡＩＮ−９３ミネラル混合 ３．５質量％
ＡＩＮ−９３ビタミン混合 １．０質量％
【００２２】
試験例２
（乳酸菌群摂食によるアレルギー性鼻炎モデルモルモットの鼻汁量抑制作用の評価）
１．動物実験スケジュール
４週齢の雄モルモット２０匹の体重を測定し、無作為抽出法により各群１０匹の平均体重及び分散がほぼ等しくなるように群分けを行なった。群分け後、製造後５ヵ月以内の固形飼料ＬＲＣ４（オリエンタル酵母工業株式会社製）を給餌器に入れ、自由に摂取させた。乳酸菌投与群には、実施例１で調製した乳酸菌試料を群分け翌日から１日２回計２８日連続（１０００ｍｇ／ｋｇ／日）で経口投与した。
また、全モルモットの両側鼻前庭に、１０％ＴＤＩ溶液に浸した細軸綿棒を１０秒間接触させて塗布し、この操作を１日１回、群分け翌日から５日間繰り返し実施して感作を行なった。それ以降は感作を行なわず飼育を続け、最終感作の４週間後に鼻汁の誘発を行った。鼻汁の誘発は、５％ＴＤＩ溶液に浸した細軸綿棒を両鼻前庭に１０秒間接触させ塗布することにより行なった。
２．鼻汁量測定
鼻汁誘発開始から１５分間の鼻汁を脱脂綿に吸収させ、密栓マイクロチューブにいれてその重量を測定した。
３．実験結果
図３に示すように、ロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株投与群は、対照群と比較してアレルギー性鼻炎発症に伴う鼻汁の量が有意（有意水準１％）に低下していることが確認され、ロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株を含有する抗アレルギー剤は、経口投与によりアレルギー症状を緩和する効果があること、すなわち、抗アレルギー作用を示すことが確認された。
【００２３】
試験例３
（乳酸菌摂取によるヒトでの花粉症症状の改善効果の評価）
１．被験剤の調製
実施例１で調製した乳酸菌試料を用い、表２に示す組成及び形状の被験剤１（低用量）、被験剤２（高用量）及びプラセボをそれぞれ調製した。
【００２４】
【表２】
【００２５】
２．試験方法
スギＩｇＥクラスが２（血中ＩｇＥ濃度０．７０〜３．４９ＵＡ／ｍｌ）又は３（血中ＩｇＥ濃度３．５０〜１７．４９ＵＡ／ｍｌ）の患者４４名を被験者とした。これら被験者について、医師により処方された薬剤の他に、無作為に上記の被験剤１（低用量）、被験剤２（高用量）又はプラセボを摂取させた。被験剤１（低用量）、被験剤２（高用量）又はプラセボを摂取した被験者の人数及びスギＩｇＥクラスは下記の通りであった。但し、被験者にはどの被験剤を摂取しているかは不明な状態で摂取させた。
被験剤１（低用量）を摂取した患者：計１２名（クラス２：６名、クラス３：６名）
被験剤２（高用量）を摂取した患者：計１４名（クラス２：７名、クラス３：７名）
プラセボを摂取した患者 ：計１８名（クラス２：８名、クラス３：１０名） 被験剤の摂取期間は、スギ花粉飛散開始日より１２週間（８４日間）とした。
３．評価方法
症状重症度スコア（ｓｙｍｐｔｏｍ ｓｃｏｒｅ：以下ＳＳという）及び使用薬剤スコア（ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ ｓｃｏｒｅ：以下ＭＳという）により評価した。
ＳＳは、各被験者に、くしゃみ発作・鼻汁・鼻閉・日常生活の支障度について、表３に示す基準により評価させた。各群について、１週間毎に評価点の平均値を算出してＳＳとした。
また、ＭＳは、各被験者が被験剤の摂取期間中に服用した薬剤（被験剤を除く）について、「２００５年鼻アレルギー診察ガイドライン」に従い、表４に示す通り各薬剤に点数を与えた。各群について、１週間毎に服用された薬剤の点数の平均値を算出してＭＳとした。
上記のＳＳ及びＭＳを合算した値をＳＭＳ（ｓｙｍｐｔｏｍ ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ
ｓｃｏｒｅ）とし、１週目のＳＭＳの値を基準として、被験剤摂取期間中のＳＭＳ変動量を算出し、被験剤摂取による花粉症症状の改善効果を評価した。
【００２６】
【表３】
【００２７】
【表４】
【００２８】
４．試験結果
各被験剤摂取期間中のＳＭＳ変動量の推移を図４に示す。図４中のグラフＡは、被験地におけるスギ花粉飛散量の推移を示すグラフであり、右側の縦軸の目盛は、花粉飛散量を示す。図４から明らかなように、被験剤２（高用量）摂取群は、被験剤の摂取期間の全期間内において、プラセボ摂取群と比較してＳＭＳの値が有意に低かった。また、被験剤１（低用量）摂取群は、スギ花粉飛散ピーク（スギ花粉飛散開始日より５週目）前後の２週間を除き、プラセボ摂取群と比較してＳＭＳの値が有意に低いか、少なくとも低下傾向を示した。このことから、ロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株を含有する抗アレルギー剤は、花粉症症状の改善効果があることが確認された。さらには、本発明の抗アレルギー剤には、花粉症のみならずアトピー性皮膚炎、通年性アレルギー性鼻炎、気管支喘息等の免疫疾患における症状改善効果が期待される。
【００２９】
試験例４
（乳酸菌試料の安定性試験）
試験例３で使用した被験剤１（低用量）、被験剤２（高用量）及びプラセボについて、８０℃で８週間保存した場合及び４５℃，湿度７５％で８週間保存した場合の保存安定性を、以下の試験方法により、保存後の試料のＴｈ１細胞のマーカーとなるＩＦＮ−γの産生量及びＴｈ２細胞のマーカーであるＩＬ−４の産生量を測定して評価した。測定結果を図５及び図６に示す。
【００３０】
試験方法
オボアルブミン（ＯＶＡ）特異的Ｔ細胞レセプター発現マウス（ＤＯ１１．１０マウス）から脾臓を採取し、磨砕してセルストレイナーを通し脾臓細胞浮遊液を得た後、塩化アンモニウム溶液で赤血球を溶解させた。この脾臓細胞を、ウシ胎児血清：ＦＣＳ（Ｆｅｔａｌ Ｃａｌｆ Ｓｅｒｕｍ）を５％添加した日本水産製ＲＰＭＩ培地１０ｍｌで２回洗浄し、最終的に５％ＦＣＳ入りＲＰＭＩ培地１ｍｌに懸濁した。懸濁液中の細胞数を計測し、２．５×１０6 ｃｅｌｌｓ／ｍｌになるように、５％ＦＣＳ入りＲＰＭＩ培地で希釈し、各ウエル１００μｌずつ９６穴プレートにまいた。
５％ＦＣＳ入りＲＰＭＩ培地で試料を４０μｇ／ｍｌになるように調製し、その内５０μｌを上記９６穴プレートに加え、さらにＯＶＡを２ｍｇ／ｍｌ含有するＲＰＭＩ培地を５０μｌずつ加え、ＣＯ２ インキュベーターで７日間培養した。
対照区として５％ＦＣＳ入りＲＰＭＩ培地５０μｌとＯＶＡを２ｍｇ／ｍｌ含有するＲＰＭＩ培地を５０μｌずつ対照ウエルに加え、同様に処理した。
培養上清を回収し、ＥＬＩＳＡ法によりＩＦＮ−γ抗体量を定量し、ＩＦＮ−γの産生量を調べ、対照区の値と比較した。また、ＩＬ−４抗体量を定量し、ＩＬ−４の産生量を調べ、対照区の値と比較した。
【００３１】
図５及び図６から明らかなように、保存後も、被験剤１（低用量）及び被験剤２（高用量）は、何れも、ＩＦＮ−γの産生量が高く、一方ＩＬ−４の産生量は低かった。このことから、保存後も、被験剤１（低用量）及び被験剤２（高用量）は、何れも、優れたＴｈ１／Ｔｈ２バランス改善活性を有すること、すなわち保存安定性を有することが確認された。
【００３２】
次に、本発明の抗アレルギー剤の実施例を挙げるが、本発明は以下の実施例に制限されるものではない。
【００３３】
実施例２（錠剤）
実施例１で調製した乳酸菌試料 ５ ｇ
トウモロコシデンプン １０ ｇ
乳糖 ４０ ｇ
カルボキシメチルセルロースカルシウム ８ ｇ
微結晶セルロース ２７ ｇ
ポリビニルピロリドン ７ ｇ
ステアリン酸マグネシウム ３ ｇ
合計 １００ ｇ
乳酸菌試料に微結晶セルロース、トウモロコシデンプン、乳糖、カルボキシメチルセルロースカルシウムを混合し、次いでポリビニルピロリドンの水溶液を結合剤として加えて常法により顆粒化する。これに滑沢剤としてステアリン酸マグネシウムを加えて混合した後、１錠１００ｍｇの錠剤に打錠する。
【００３４】
実施例３（硬カプセル剤）
実施例１で調製した乳酸菌試料 １０ ｇ
微結晶セルロース ５５ ｇ
トウモロコシデンプン ２５ ｇ
乳糖 ３０ ｇ
ポリビニルピロリドン ４ ｇ
ステアリン酸マグネシウム １ ｇ
合計 １２５ ｇ
上記成分を常法により顆粒化した後、ゼラチン硬カプセルに充填する。
【００３５】
実施例４（散剤）
実施例１で調製した乳酸菌試料 ５０ ｇ
微結晶セルロース ６００ ｇ
トウモロコシデンプン ３００ ｇ
ポリビニルピロリドン ５０ ｇ
合計 １０００ ｇ
上記成分を混合し、常法により散剤とする。
【００３６】
実施例５（顆粒剤）
実施例１で調製した乳酸菌試料 １０ ｇ
乳糖 １３０ ｇ
トウモロコシデンプン ８７ ｇ
ポリビニルピロリドン ８ ｇ
Ｌ−メントール １５ ｇ
軽質無水ケイ酸 ５ ｇ
合計 ２５５ ｇ
上記の処方で、乳酸菌試料、乳糖、トウモロコシデンプン及びポリビニルピロリドン水溶液を混合し、造粒機にて攪拌下加熱造粒する。冷却後、粒度５００μｍ以下に篩分けし、Ｌ−メントールを加えた後、無水ケイ酸を加え、混合し分包（１. ０ｇ）して顆粒剤とする。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】試験例１における感作後２２日目の血清中のＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体産生量を示す図である。
【図２】試験例１における感作後２２日目の血清中の総ＩｇＥ抗体産生量を示す図である。
【図３】試験例２における２８日間ＲＩＥ株を経口投与したアレルギー性鼻炎を誘発したモルモットの鼻汁量を示す図である。
【図４】試験例３における各被験剤摂取期間中のＳＭＳ変動量の推移を示す図である。
【図５】試験例４における保存後の各被験剤のＩＦＮ−γ（Ｔｈ１細胞マーカーサイトカイン）産生量を示した図である。
【図６】試験例４における保存後の各被験剤のＩＬ−４（Ｔｈ２細胞マーカーサイトカイン）産生量を示した図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＩｇＥ抗体産生を抑制することによる抗アレルギー作用を有する、乳酸菌ロイコノストック・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）を含有する抗アレルギー剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
免疫系は、人間の体内に侵入する細菌やウイルスなど、或いは体内で発生する腫瘍などから生体を守るシステムである。一方、食品などの生体に必要な栄養成分は免疫寛容を起こし積極的に生体内に取り込むことができる。しかし、免疫系が必要以上に過敏な応答を行なった結果、アレルギー反応を起こすようになる。アレルギー疾患は作用機序によりＩ型〜IV型と大きく４タイプに分類されている。季節性鼻炎である花粉症、通年性鼻炎や、気管支喘息などは免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）が介在するＩ型アレルギーといわれている。アトピー性皮膚炎もＩ型とIV型の複合型と呼ばれている。また、食物アレルギーの発症にはＩ型、II型、IV型が関与するとされており、わが国でもＩ型に関連するアレルギー疾患が増加しているのが現状である。
【０００３】
Ｉ型のアレルギー症状は、花粉などの抗原の侵入に対応して抗原提示細胞がＴ細胞の分化に偏りを起こさしめ、Ｂ細胞によるＩｇＥ抗体産生が誘導されることがきっかけになり発症する。その後、抗体が結合したマスト細胞など特定の細胞が再び抗原の侵入を受けると、これらの細胞から顆粒が放出されヒスタミンなどの炎症物質が遊離することによりアレルギー症状が起こると考えられている。従って、アレルギーの予防、治療を目的とした場合、ターゲットとする作用点は初期の抗原提示の段階から最終的な脱顆粒の段階まで幅広く存在し、それぞれの作用点に着眼した抗アレルギー剤が提案されている。抗原提示の抑制をターゲットとしたものにはサンザシの熱水抽出物（特許文献１参照）がある。また、ヘルパーＴ細胞の分化バランス改善（Ｔｈ１／Ｔｈ２バランス改善）を作用点としたものには初乳（特許文献２参照）、乳酸菌ＫＷ３１１０株（特許文献３参照）などを代表とした多数の飲食物が提案されている。さらにＩｇＥクラススイッチを抑制する素材として茶葉成分のストリクチニン（特許文献４参照）が提案されている。これらは、いずれも結果的にＩｇＥ抗体産生を抑制することによりアレルギー反応を抑制することを目的としたものである。しかしながら、いずれも直接生体でのＩｇＥ抗体産生能の評価にまで至っていないか、評価しているとしても統計的な評価を行っていないので、最終的な目的を達成したのか確認ができていない。乳酸菌ＫＷ３１１０株については、生体でのＩｇＥ産生抑制を統計的に評価しており有意な効果を示しているが、通常マウスでは１００日以上というかなり長期間の経口投与を前提としており、さらに効果的な素材が切望されている。
【０００４】
【特許文献１】特開平０９−１４３０９０号公報
【特許文献２】特開２００６−９６７５２号公報
【特許文献３】特開２００５−１３７３５７号公報
【特許文献４】特開２００５−１９８６６４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、ＩｇＥ抗体産生抑制による抗アレルギー作用を有する、安全な天然由来の乳酸菌（植物性乳酸菌）を有効成分として含有する抗アレルギー剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記目的を達成すべく種々検討した結果、鉄砲漬けから分離したロイコノストック・メセンテロイデスに属する乳酸菌を含有する抗アレルギー剤が、高いＩｇＥ抗体産生抑制作用を有し、上記目的を達成するものであることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、高いＩｇＥ抗体産生抑制作用を有し、抗アレルギー作用をもつロイコノストック・メセンテロイデスに属する乳酸菌を有効成分として含有する抗アレルギー剤を提供するものである。
また、本発明は、前記乳酸菌がロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株（受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−２１１１０）である抗アレルギー剤を提供するものである。
【発明の効果】
【０００７】
本発明の抗アレルギー剤が含有するロイコノストック・メセンテロイデスに属する乳酸菌は、高いＩｇＥ抗体産生抑制作用を有し、この作用によって抗アレルギー作用をもたらす。それゆえ、該乳酸菌を含有する製剤を摂取することにより、アレルギー疾患の予防、治療が達成できる。該乳酸菌は、食経験のある天然食品素材から分離したものであるので安全性にも優れている。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
前記乳酸菌ロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株は、独立行政法人産業技術総合研究所、特許生物寄託センターに寄託されており、その受託番号はＦＥＲＭ Ｐ−２１１１０である。
【０００９】
乳酸菌ロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株の菌学的性質を以下に示す。
ＭＲＳ液体培地（ＤＩＦＣＯ社）を用いて、３０℃、１８時間培養したときの菌の形態（１）菌の形態 球菌
（２）グラム染色 陽性
（３）運動性 なし
（４）胞子 なし
（５）カタラーゼ なし
（６）通性嫌気性
（７）ブドウ糖の代謝 ５０％以上乳酸に転換する
（８）生育温度範囲 １５〜４５℃で生育を認める
（９）乳酸発酵 ヘテロ型
（１０）乳酸の旋光性 Ｄ
（１１）炭水化物の発酵性 グリセロールは陰性、Ｄ−アラビノースは陰性、Ｌ−アラビノースは陽性、リボースは陽性、Ｄ−キシロースは陽性、ガラクトースは陽性、グルコースは陽性、フルクトースは陽性、マンノースは陽性、ラムノースは陰性、マンニトールは陽性、ソルビトールは陰性、αメチルＤグルコシドは陽性、アミグダリンは陽性、エスクリンは陽性、サリシンは陽性、セロビオースは陽性、マルトースは陽性、ラクトースは陽性、メリビオースは陽性、シュクロースは陽性、トレハロースは陽性、イヌリンは陰性、メレジトースは陰性、ラフィノースは陽性、スターチは陰性、グルコン酸は陽性。
【００１０】
乳酸菌ロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株は、食経験が豊富な素材（鉄砲漬け）から分離したものであるため、安全に抗アレルギー剤に利用することができる。
【００１１】
乳酸菌ロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株は、そのままあるいは必要に応じて薬学的に許容される種々の担体、賦形剤、その他の添加剤、その他の成分を配合して製剤化することによって、抗アレルギー剤とすることができる。また、該アレルギー剤は、乳酸菌ロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株を用いて発酵させた種々の動植物性物質をベースとしてもよい。
【００１２】
本発明の抗アレルギー剤は、高いＩｇＥ抗体産生抑制作用を有するロイコノストック・メセンテロイデスに属する乳酸菌、特に好ましくは上記のロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株を有効成分として含有するものである。
【００１３】
ＩｇＥ抗体産生抑制は、例えば抗原提示細胞のアレルゲンの認識能を低下させたり、Ｔｈ２産生側に偏っている免疫担当細胞であるヘルパーＴ細胞の分化のバランス（Ｔｈ１／Ｔｈ２バランス）を改善することや、Ｂ細胞上のレセプターに働きかけＴ細胞からＢ細胞への情報伝達を阻害することなどにより達成できるが、本発明の抗アレルギー剤で用いられる上記の高いＩｇＥ抗体産生抑制作用を有するロイコノストック・メセンテロイデスに属する乳酸菌においては、その作用メカニズムは特に限定されず、結果的にＩｇＥ抗体産生を抑制し、該ＩｇＥ抗体産生抑制による抗アレルギー作用を有するものであればよい。 ここで、「高いＩｇＥ抗体産生抑制作用を有する」とは、好ましくは、抗アレルギー剤を摂取しない群と比較して、統計的に有意水準５％でＩｇＥ抗体産生が抑制される状態をいう。
【００１４】
乳酸菌のＩｇＥ抗体産生抑制作用の評価は、以下の方法により評価することが好ましい。
乳酸菌をＭＲＳ培地等で培養し、この培養した乳酸菌を０．１〜２０質量％含む飼料をＯＶＡ（卵白アルブミン）で感作させて作成したアレルギーモデル動物に一定期間摂取させ、乳酸菌を含まない飼料を摂取させたアレルギーモデル動物（乳酸菌無添加群）と比較してＩｇＥ抗体産生の抑制効果を評価する。アレルギー発症時には、血中ＩｇＥ含有量が通常より上昇することが知られている。
【００１５】
本発明の抗アレルギー剤中の乳酸菌含有量は、ＩｇＥ抗体産生量の上昇を抑制しうる量であればいかなる量であってもよく、使用形態、抗アレルギー剤の剤形や投与又は摂取する者の症状や年齢性別などによって適宜変化させることができる。本発明の抗アレルギー剤を経口投与又は摂取させる場合には、１人１日当たりの投与量又は摂取量が１ｍｇ〜２０ｇとなるように含有させることが好ましい。
【実施例】
【００１６】
次に本発明をさらに具体的に説明するために実施例を挙げるが、本発明は、以下の実施例に制限されるものではない。
【００１７】
実施例１及び比較例１〜４
（使用した乳酸菌）
鉄砲漬け、ゴーヤ漬け、キムチなどの漬物やイーストなど、日本人の食経験が豊富な植物性素材から単離された植物性乳酸菌の中から、桿菌又は球菌であること、同様の性状をもたらすものが複数菌株見つかること、通常の培地で増殖性が高いことなどを基準に、表１に示す代表的な５菌株を選抜した。表１に示すＲＩＥは、本発明のロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株である。
【００１８】
【表１】
【００１９】
（乳酸菌試料の調製）
１０μｇ／ｍｌシクロヘキシミドを含むＭＲＳ培地を用いて３７℃で４８時間培養した表１に示した各乳酸菌株を、遠心分離によって集菌し、滅菌水で３回洗浄した後、滅菌水に懸濁させ、１２１℃で３０分間オートクレーブ処理した。これらを凍結乾燥して乳酸菌試料をそれぞれ得た。
【００２０】
試験例１
（乳酸菌群のアレルギーモデルマウスでのＩｇＥ抗体産生抑制作用の評価）
１．飼料の調製
実施例１及び比較例１〜４で調製した乳酸菌試料を下記に示す基礎飼料〔ＡＩＮ−９３（米国国立栄養研究所によるマウス・ラットを用いた栄養研究のための標準精製飼料）をベースとした飼料〕に５質量％になるように混合し、乳酸菌入り飼料をそれぞれ調製した。対照群として乳酸菌無添加の基礎飼料も調製した。基礎飼料の原料は、全てオリエンタル酵母工業株式会社製のものを使用した。飼料は、乳酸菌試料の混合後、加水し筒状に成形することで得た。
２．動物実験スケジュール
５週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスの体重を測定し、体重を指標として層別連続無作為化法を用いて、各群６匹ずつの群分けを行なった。群分け後、上記１で調製した基礎飼料及び乳酸菌入り飼料の摂取を開始した。なお、体重測定に先立ち順化処理（１週間）を行なったが、この間はいずれのマウスにも基礎飼料を自由摂取させた。
全てのマウスに対して、飼料摂取開始後１４日目及び２８日目に、ＯＶＡ−ａｌｕｍ（ＯＶＡ５０μｇ、水酸化アルミニウム１ｍｇ／匹）を腹腔内投与し、アレルギー状態を誘発させた。飼料摂取開始後１４日目を感作０日目とした。
感作後０日後、２２日後、２８日後及び３５日後に眼窩静脈叢より１００μｌの採血を行なった。採血後、１２，０００ｒｐｍ、５〜１０分間遠心分離を行い、血清を分取した。
３．抗体定量
ＥＬＩＳＡ法により、回収した血清中のＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体量及び総ＩｇＥ抗体量を定量した。
４．実験結果
感作後２２日目のＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体産生量を図１に示す。図１の縦軸のＩｇＥ抗体産生量とは、自作した標準抗体に対する相対的な抗体産生量を示したものである。図２に感作後２２日目の総ＩｇＥ抗体産生量を示す。図２の縦軸のｕｎｉｔとは、１．０ｎｇ／ｍｌ＝１ｕｎｉｔとして抗体量を換算した単位である。ダネット法により統計解析を行った結果、ＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体は、実施例１で調製した乳酸菌ＲＩＥ入り飼料及び比較例１で調製した乳酸菌ＡＹＢ入り飼料を摂食した群で有意に産生抑制されている（有意水準５％）ことが明らかになった。また、総ＩｇＥ抗体は、実施例１で調製した乳酸菌ＲＩＥ入り飼料を摂食した群で有意に産生抑制されている（有意水準５％）ことが明らかになった。このことから、ロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株を含有する抗アレルギー剤が、高いＩｇＥ抗体産生抑制作用を有することが証明された。
【００２１】
（基本飼料の配合）
カゼイン ２０．０質量％
コーンスターチ ５０．５質量％
シュークロース １０．０質量％
ラード １０．０質量％
セルロースパウダー ５．０質量％
ＡＩＮ−９３ミネラル混合 ３．５質量％
ＡＩＮ−９３ビタミン混合 １．０質量％
【００２２】
試験例２
（乳酸菌群摂食によるアレルギー性鼻炎モデルモルモットの鼻汁量抑制作用の評価）
１．動物実験スケジュール
４週齢の雄モルモット２０匹の体重を測定し、無作為抽出法により各群１０匹の平均体重及び分散がほぼ等しくなるように群分けを行なった。群分け後、製造後５ヵ月以内の固形飼料ＬＲＣ４（オリエンタル酵母工業株式会社製）を給餌器に入れ、自由に摂取させた。乳酸菌投与群には、実施例１で調製した乳酸菌試料を群分け翌日から１日２回計２８日連続（１０００ｍｇ／ｋｇ／日）で経口投与した。
また、全モルモットの両側鼻前庭に、１０％ＴＤＩ溶液に浸した細軸綿棒を１０秒間接触させて塗布し、この操作を１日１回、群分け翌日から５日間繰り返し実施して感作を行なった。それ以降は感作を行なわず飼育を続け、最終感作の４週間後に鼻汁の誘発を行った。鼻汁の誘発は、５％ＴＤＩ溶液に浸した細軸綿棒を両鼻前庭に１０秒間接触させ塗布することにより行なった。
２．鼻汁量測定
鼻汁誘発開始から１５分間の鼻汁を脱脂綿に吸収させ、密栓マイクロチューブにいれてその重量を測定した。
３．実験結果
図３に示すように、ロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株投与群は、対照群と比較してアレルギー性鼻炎発症に伴う鼻汁の量が有意（有意水準１％）に低下していることが確認され、ロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株を含有する抗アレルギー剤は、経口投与によりアレルギー症状を緩和する効果があること、すなわち、抗アレルギー作用を示すことが確認された。
【００２３】
試験例３
（乳酸菌摂取によるヒトでの花粉症症状の改善効果の評価）
１．被験剤の調製
実施例１で調製した乳酸菌試料を用い、表２に示す組成及び形状の被験剤１（低用量）、被験剤２（高用量）及びプラセボをそれぞれ調製した。
【００２４】
【表２】
【００２５】
２．試験方法
スギＩｇＥクラスが２（血中ＩｇＥ濃度０．７０〜３．４９ＵＡ／ｍｌ）又は３（血中ＩｇＥ濃度３．５０〜１７．４９ＵＡ／ｍｌ）の患者４４名を被験者とした。これら被験者について、医師により処方された薬剤の他に、無作為に上記の被験剤１（低用量）、被験剤２（高用量）又はプラセボを摂取させた。被験剤１（低用量）、被験剤２（高用量）又はプラセボを摂取した被験者の人数及びスギＩｇＥクラスは下記の通りであった。但し、被験者にはどの被験剤を摂取しているかは不明な状態で摂取させた。
被験剤１（低用量）を摂取した患者：計１２名（クラス２：６名、クラス３：６名）
被験剤２（高用量）を摂取した患者：計１４名（クラス２：７名、クラス３：７名）
プラセボを摂取した患者 ：計１８名（クラス２：８名、クラス３：１０名） 被験剤の摂取期間は、スギ花粉飛散開始日より１２週間（８４日間）とした。
３．評価方法
症状重症度スコア（ｓｙｍｐｔｏｍ ｓｃｏｒｅ：以下ＳＳという）及び使用薬剤スコア（ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ ｓｃｏｒｅ：以下ＭＳという）により評価した。
ＳＳは、各被験者に、くしゃみ発作・鼻汁・鼻閉・日常生活の支障度について、表３に示す基準により評価させた。各群について、１週間毎に評価点の平均値を算出してＳＳとした。
また、ＭＳは、各被験者が被験剤の摂取期間中に服用した薬剤（被験剤を除く）について、「２００５年鼻アレルギー診察ガイドライン」に従い、表４に示す通り各薬剤に点数を与えた。各群について、１週間毎に服用された薬剤の点数の平均値を算出してＭＳとした。
上記のＳＳ及びＭＳを合算した値をＳＭＳ（ｓｙｍｐｔｏｍ ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ
ｓｃｏｒｅ）とし、１週目のＳＭＳの値を基準として、被験剤摂取期間中のＳＭＳ変動量を算出し、被験剤摂取による花粉症症状の改善効果を評価した。
【００２６】
【表３】
【００２７】
【表４】
【００２８】
４．試験結果
各被験剤摂取期間中のＳＭＳ変動量の推移を図４に示す。図４中のグラフＡは、被験地におけるスギ花粉飛散量の推移を示すグラフであり、右側の縦軸の目盛は、花粉飛散量を示す。図４から明らかなように、被験剤２（高用量）摂取群は、被験剤の摂取期間の全期間内において、プラセボ摂取群と比較してＳＭＳの値が有意に低かった。また、被験剤１（低用量）摂取群は、スギ花粉飛散ピーク（スギ花粉飛散開始日より５週目）前後の２週間を除き、プラセボ摂取群と比較してＳＭＳの値が有意に低いか、少なくとも低下傾向を示した。このことから、ロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株を含有する抗アレルギー剤は、花粉症症状の改善効果があることが確認された。さらには、本発明の抗アレルギー剤には、花粉症のみならずアトピー性皮膚炎、通年性アレルギー性鼻炎、気管支喘息等の免疫疾患における症状改善効果が期待される。
【００２９】
試験例４
（乳酸菌試料の安定性試験）
試験例３で使用した被験剤１（低用量）、被験剤２（高用量）及びプラセボについて、８０℃で８週間保存した場合及び４５℃，湿度７５％で８週間保存した場合の保存安定性を、以下の試験方法により、保存後の試料のＴｈ１細胞のマーカーとなるＩＦＮ−γの産生量及びＴｈ２細胞のマーカーであるＩＬ−４の産生量を測定して評価した。測定結果を図５及び図６に示す。
【００３０】
試験方法
オボアルブミン（ＯＶＡ）特異的Ｔ細胞レセプター発現マウス（ＤＯ１１．１０マウス）から脾臓を採取し、磨砕してセルストレイナーを通し脾臓細胞浮遊液を得た後、塩化アンモニウム溶液で赤血球を溶解させた。この脾臓細胞を、ウシ胎児血清：ＦＣＳ（Ｆｅｔａｌ Ｃａｌｆ Ｓｅｒｕｍ）を５％添加した日本水産製ＲＰＭＩ培地１０ｍｌで２回洗浄し、最終的に５％ＦＣＳ入りＲＰＭＩ培地１ｍｌに懸濁した。懸濁液中の細胞数を計測し、２．５×１０6 ｃｅｌｌｓ／ｍｌになるように、５％ＦＣＳ入りＲＰＭＩ培地で希釈し、各ウエル１００μｌずつ９６穴プレートにまいた。
５％ＦＣＳ入りＲＰＭＩ培地で試料を４０μｇ／ｍｌになるように調製し、その内５０μｌを上記９６穴プレートに加え、さらにＯＶＡを２ｍｇ／ｍｌ含有するＲＰＭＩ培地を５０μｌずつ加え、ＣＯ２ インキュベーターで７日間培養した。
対照区として５％ＦＣＳ入りＲＰＭＩ培地５０μｌとＯＶＡを２ｍｇ／ｍｌ含有するＲＰＭＩ培地を５０μｌずつ対照ウエルに加え、同様に処理した。
培養上清を回収し、ＥＬＩＳＡ法によりＩＦＮ−γ抗体量を定量し、ＩＦＮ−γの産生量を調べ、対照区の値と比較した。また、ＩＬ−４抗体量を定量し、ＩＬ−４の産生量を調べ、対照区の値と比較した。
【００３１】
図５及び図６から明らかなように、保存後も、被験剤１（低用量）及び被験剤２（高用量）は、何れも、ＩＦＮ−γの産生量が高く、一方ＩＬ−４の産生量は低かった。このことから、保存後も、被験剤１（低用量）及び被験剤２（高用量）は、何れも、優れたＴｈ１／Ｔｈ２バランス改善活性を有すること、すなわち保存安定性を有することが確認された。
【００３２】
次に、本発明の抗アレルギー剤の実施例を挙げるが、本発明は以下の実施例に制限されるものではない。
【００３３】
実施例２（錠剤）
実施例１で調製した乳酸菌試料 ５ ｇ
トウモロコシデンプン １０ ｇ
乳糖 ４０ ｇ
カルボキシメチルセルロースカルシウム ８ ｇ
微結晶セルロース ２７ ｇ
ポリビニルピロリドン ７ ｇ
ステアリン酸マグネシウム ３ ｇ
合計 １００ ｇ
乳酸菌試料に微結晶セルロース、トウモロコシデンプン、乳糖、カルボキシメチルセルロースカルシウムを混合し、次いでポリビニルピロリドンの水溶液を結合剤として加えて常法により顆粒化する。これに滑沢剤としてステアリン酸マグネシウムを加えて混合した後、１錠１００ｍｇの錠剤に打錠する。
【００３４】
実施例３（硬カプセル剤）
実施例１で調製した乳酸菌試料 １０ ｇ
微結晶セルロース ５５ ｇ
トウモロコシデンプン ２５ ｇ
乳糖 ３０ ｇ
ポリビニルピロリドン ４ ｇ
ステアリン酸マグネシウム １ ｇ
合計 １２５ ｇ
上記成分を常法により顆粒化した後、ゼラチン硬カプセルに充填する。
【００３５】
実施例４（散剤）
実施例１で調製した乳酸菌試料 ５０ ｇ
微結晶セルロース ６００ ｇ
トウモロコシデンプン ３００ ｇ
ポリビニルピロリドン ５０ ｇ
合計 １０００ ｇ
上記成分を混合し、常法により散剤とする。
【００３６】
実施例５（顆粒剤）
実施例１で調製した乳酸菌試料 １０ ｇ
乳糖 １３０ ｇ
トウモロコシデンプン ８７ ｇ
ポリビニルピロリドン ８ ｇ
Ｌ−メントール １５ ｇ
軽質無水ケイ酸 ５ ｇ
合計 ２５５ ｇ
上記の処方で、乳酸菌試料、乳糖、トウモロコシデンプン及びポリビニルピロリドン水溶液を混合し、造粒機にて攪拌下加熱造粒する。冷却後、粒度５００μｍ以下に篩分けし、Ｌ−メントールを加えた後、無水ケイ酸を加え、混合し分包（１. ０ｇ）して顆粒剤とする。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】試験例１における感作後２２日目の血清中のＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体産生量を示す図である。
【図２】試験例１における感作後２２日目の血清中の総ＩｇＥ抗体産生量を示す図である。
【図３】試験例２における２８日間ＲＩＥ株を経口投与したアレルギー性鼻炎を誘発したモルモットの鼻汁量を示す図である。
【図４】試験例３における各被験剤摂取期間中のＳＭＳ変動量の推移を示す図である。
【図５】試験例４における保存後の各被験剤のＩＦＮ−γ（Ｔｈ１細胞マーカーサイトカイン）産生量を示した図である。
【図６】試験例４における保存後の各被験剤のＩＬ−４（Ｔｈ２細胞マーカーサイトカイン）産生量を示した図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
高いＩｇＥ抗体産生抑制作用を有し、抗アレルギー作用をもつロイコノストック・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）に属する乳酸菌を有効成分として含有する抗アレルギー剤。
【請求項２】
上記乳酸菌が、ロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株（受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−２１１１０）である請求項１に記載の抗アレルギー剤。
【請求項１】
高いＩｇＥ抗体産生抑制作用を有し、抗アレルギー作用をもつロイコノストック・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）に属する乳酸菌を有効成分として含有する抗アレルギー剤。
【請求項２】
上記乳酸菌が、ロイコノストック・メセンテロイデスＲＩＥ株（受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−２１１１０）である請求項１に記載の抗アレルギー剤。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【公開番号】特開２００８−２３１０９４（Ｐ２００８−２３１０９４Ａ）
【公開日】平成２０年１０月２日（２００８．１０．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−１３４０９（Ｐ２００８−１３４０９）
【出願日】平成２０年１月２４日（２００８．１．２４）
【出願人】（５０４１３７９１２）国立大学法人 東京大学 (1,942)
【出願人】（０００１０３８４０）オリエンタル酵母工業株式会社 (60)
【出願人】（０００２２６９９８）株式会社日清製粉グループ本社 (125)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年１０月２日（２００８．１０．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１月２４日（２００８．１．２４）
【出願人】（５０４１３７９１２）国立大学法人 東京大学 (1,942)
【出願人】（０００１０３８４０）オリエンタル酵母工業株式会社 (60)
【出願人】（０００２２６９９８）株式会社日清製粉グループ本社 (125)
【Ｆターム（参考）】
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