脂質代謝異常治療剤
【課題】脂質代謝異常を正常化するための治療剤の提供。
【解決手段】ヒト線維芽細胞由来の公知蛋白質であるＴＣＦ−II（アミノ酸数：７２３個、非還元下での分子量７８，０００±２，０００、又は７４，０００±２，０００）を有効成分とする脂質代謝異常の治療剤。
【効果】レシチン−コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）活性上昇効果および胆汁鬱滞により引き起こされる高トリアシルグリセロール血症の治療効果がある。
【解決手段】ヒト線維芽細胞由来の公知蛋白質であるＴＣＦ−II（アミノ酸数：７２３個、非還元下での分子量７８，０００±２，０００、又は７４，０００±２，０００）を有効成分とする脂質代謝異常の治療剤。
【効果】レシチン−コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）活性上昇効果および胆汁鬱滞により引き起こされる高トリアシルグリセロール血症の治療効果がある。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＴＣＦ−IIを有効成分とする脂質代謝異常治療剤に関する。
本発明は、糖尿病、甲状腺および副腎機能不全等の内分泌疾患、慢性代謝性疾患、ネフローゼを含む慢性腎臓疾患および尿毒症、癌、悪液質、制癌剤の副作用、消化器（肝および膵機能を含む）障害等を原因とした、高コレステロール血症、低脂質血症、低ＨＤＬ血症等の脂質代謝異常の治療剤として有用である。
【背景技術】
【０００２】
現在、日本人の６０％以上が高血圧、動脈硬化、糖尿病などの成人病のために命を失っている。一般に成人病は内分泌機能や脂質代謝機能の減退などの内的要因が主要な役割を演じているが、それらの調節機構は未だ不明な点が多い。現在考えられている高脂血症治療剤を作用機序別に分けてみるとコレステロールや胆汁酸の吸収阻害、コレステロール合成阻害、超低比重リポ蛋白（ＶＬＤＬ）の代謝に対する影響を介して作用する高脂血症治療剤に分類される。高比重リポ蛋白（ＨＤＬ）−コレステロールの低下を伴う高脂血症は、動脈硬化性疾患である虚血性心疾患、高血圧、虚血性脳障害などの重要なリスクファクターとなっている。高脂血症治療剤の薬効については単に血清脂質を下げるばかりでなく、高脂血症の増悪要因であるＨＤＬ−コレステロールの低下やレシチン−コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）活性の低下した状態を改善し、代謝過程の停滞を除去することで、高脂血症から動脈硬化性疾患への進展を防ぐことが分かってきた。
【０００３】
しかしながら脂質代謝を合目的に改善する脂質代謝改善剤は現在開発されていない。現
在、臨床で用いられる脂質代謝異常に関する治療薬として、高脂血症には３−ヒドロキシ
−３−メチル−グルタリル−ＣｏＡ（ＨＭＧ−ＣｏＡ）還元酵素を阻害するプラバスタチ
ンナトリウムや血清脂質清澄化作用を有するクロフィブラート等、又、低脂血症には高カ
ロリー輸液等の栄養補給が挙げられるが、原発疾患に限らず症状に応じた別々の治療剤が
使われており、脂質及び糖質代謝に関連した内分泌機能異常等による両者のバランス異常
による脂質代謝異常を改善及び／又は治療する薬剤は無かった。糖尿病では種々の成因の
結果として、インスリンとグルカゴンのバランス、膵機能を含む内分泌機能の障害により
肝臓、脂肪、筋肉、皮膚、腎臓などの代謝に異常が生じ、病態を示している。脂肪組織の
役割はエネルギーが過剰のときは脂質として貯蔵し、必要に応じて脂肪を分解しエネルギ
ー源として体内に供給することである。糖尿病ではインスリンの欠乏およびグルカゴンの
過剰があるために、脂肪組織では合成が阻害され、分解が促進される。即ちインスリン作
用の低下により脂肪細胞のブドウ糖摂取は減少するので、α−グリセロリン酸、ＮＡＤＨ
、ＮＡＤＰＨの産生は減少し、脂肪酸の合成、再エステル化が減少する。一方、インスリ
ンの欠乏およびグルカゴンの増加はホルモン感受性リパーゼの活性を上昇させて脂肪を分
解させる。また、脂肪肝の発症機序は肝におけるトリグリセリド合成及びＶＬＤＬの合成
・分泌のいずれかの過程で障害が生じることにより発症すると考えられる。
【０００４】
具体的には肝における脂肪酸合成の促進、末梢脂肪組織から肝への脂肪酸動員の増加、肝における脂肪酸酸化能の低下、肝でのリポ蛋白の合成・分泌の低下等が考えられる。例えば、肥満に伴う脂肪肝では末梢脂肪組織量の増大により末梢脂肪組織からの脂肪酸動員が増加している。最近では、内臓脂肪蓄積による門脈血中脂肪酸の増加と脂肪肝発生の関連が注目されている。また、肝における脂肪酸の de novo合成の律速酵素であるアセチルＣｏＡカルボキシラーゼ活性が肥満症で上昇しており、肝での脂肪酸合成の亢進が示唆されている。一方、肥満症では、末梢脂肪組織でのインスリン抵抗性の増大を代償するため、高インスリン血症が招来される。正常インスリン分泌を示す肥満症に比較し、高インスリン血症を伴う肥満症に脂肪肝が高率に合併することが知られている。このように、糖と脂質の連動する代謝異常に対し、血中で脂質を運搬する血清リポ蛋白の合成を促し脂質の組成への転送や代謝を改善する作用、エステル化に関わるＬＣＡＴ活性を増加させ、遊離コレステロールレベルを下げＨＤＬ−コレステロールレベルを増加させる作用、胆汁排泄を促進させ血清脂質レベルを低下させる作用、肝細胞に蓄積したトリグリセリドの汲み出しを促進し脂肪肝をも改善する統合的脂質代謝改善薬は存在していなかった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
このような状況に鑑み、本発明者らは糖と脂質の連動する代謝異常に対する治療剤につ
いて鋭意研究した結果、ＴＣＦ−IIが脂質代謝において、血中で脂質を運搬する血清リポ
蛋白の脂質の組成への転送や代謝と特異的に関係していることを見出した。すなわち、そ
の合成障害、エステル化に関わるＬＣＡＴ活性の低下、及びそれらに伴うＨＤＬの減少が
高脂血症、動脈硬化症等の脂質代謝異常を伴う成人病のリスクファクターとして重要視さ
れており、これらに対しＴＣＦ−IIが ｉｎ ｖｉｖｏにおいて強力なＬＣＡＴの上昇作
用と低ＨＤＬ血症の改善効果を示し、さらに血清リポ蛋白を増加させることにより脂質の
転送を促進し血清脂質レベルを正常化させることを見出した。従って、本発明はＴＣＦ−
IIを有効成分とする脂質代謝異常を正常化する効果を有する治療剤を提供することを課題
とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、ＴＣＦ−IIを有効成分とする脂質代謝異常治療剤に関する。本発明は、糖尿
病、甲状腺および副腎機能不全等の内分泌疾患、慢性代謝性疾患、ネフローゼを含む慢性
腎臓疾患および尿毒症、癌、悪液質、制癌剤の副作用、消化器（肝および膵機能を含む）
障害等を原因とした脂質代謝異常の治療剤として有用である。このような脂質代謝異常症
としては、高コレステロール血症、低脂血症あるいは低ＨＤＬ血症などを挙げることがで
きる。また、高脂血症、胆汁鬱血により生ずる高脂血症を挙げることができる。さらに、
高比重リポ蛋白（ＨＤＬ）コレステロール増加、レシチンコレステロールアシルトランス
フェラーゼ（ＬＣＡＴ）活性の促進、肝臓からのトリアシルグリセロール排泄促進、胆汁
排泄促進等のために用いることもできる。
【０００７】
本発明の有効成分であるＴＣＦ−IIは、ヒト線維芽細胞由来の公知の蛋白質であり、ヒト線維芽細胞由来のものは下記の特性を有する。
ｉ) 分子量（ＳＤＳ電気泳動法）
非還元下 ： 78,000±2,000 又は74,000±2,000
還元下 ： 52,000±2,000 （共通バンドＡ)
30,000±2,000 （バンドＢ）
26,000±2000（バンドＣ）
ii) 等電点 ： 7.4 〜 8.6
iii)アミノ酸 ： 723 個
上記ＴＣＦ−IIは、ヒト線維芽細胞培養液を濃縮しイオン交換体に吸着させ、その溶出液をアフィニティークロマトグラフィーを用いて精製する方法（ＷＯ９０／１０６５１号公報）、或いは遺伝子工学的手法（ＷＯ９２／０１０５３号公報）によって得られる。
【０００８】
本発明の有効成分であるＴＣＦ−IIは、線維芽細胞由来のものを用いることが可能であり、又、ＷＯ９０／１０６５１号公報に記載された遺伝子配列に基づいて、微生物や他の細胞により遺伝子組換え操作により生産されたものでもよい。又、ＷＯ９２／０１０５３号公報に開示された遺伝子工学的手法により得られたものを用いてもよい。この時、宿主細胞又は微生物の違いによる糖鎖の異なったものや、糖鎖の結合していないものであっても使用可能である。しかし、糖鎖は生体内の代謝速度に関係しているため、糖鎖の結合しているものを用いることが望ましい。これらの方法により得られたＴＣＦ−IIは、通常の単離精製法によってさらに濃縮、精製することができる。例えば、有機溶媒による沈殿法、塩析、ゲル濾過、モノクローナル抗体を用いたアフィニティークロマト、電気泳動法等が挙げられる。モノクローナル抗体を用いたアフィニティークロマトによる精製は、特開平５−９７号公報に開示されているモノクローナル抗体を用いて精製することができる。得られた精製ＴＣＦ−IIは、凍結乾燥或いは凍結保存することができる。
【０００９】
本発明の脂質及び糖質代謝異常治療剤は、注射剤として静脈、筋肉内、及び皮下より投与することができる。これらの製剤は公知の製剤学的製法に準じ製造され、必要に応じｐＨ調整剤、緩衝剤、安定化剤等を添加することができる。本発明の製剤を患者に投与する場合、投与患者の症状の程度、健康状態、年齢、体重等の条件によって異なり、特に限定されないが、成人１日当たり精製ＴＣＦ−IIとして ０．６ｍｇ〜 ６００ｍｇ、好ましくは ６ｍｇ〜 ６０ｍｇ を含有する製剤を１日１回若しくはそれ以上投与すれば良い。
【発明の効果】
【００１０】
本発明により、ＴＣＦ−IIを有効成分とする脂質代謝異常の治療剤が提供される。本発明治療剤は、高血清脂質を低下させ、低脂血症を正常化させる作用を有する。又、脂肪肝を改善する効果を有している。
[実施例]
【００１１】
以下に実施例を挙げて本発明を更に詳しく説明する。しかし、これらは単に例示するのみであり、本発明はこれらにより限定されるものではない。
【実施例１】
【００１２】
ＴＣＦ−IIの精製
ＷＯ９０／１０６５１号公報に開示された方法及び東尾らの方法（Higashio,K. et al,B.B.R.C., vol.170, pp397-404 (1990))に準じて細胞を培養し、精製ＴＣＦ−IIを得た。ヒト繊維芽細胞ＩＭＲ−９０（ＡＴＣＣ ＣＣＬ １８６）細胞を５％仔牛血清を含むＤＭＥＭ培地１００ｍｌをいれたローラーボトルに３×１０６ 個移植し、０．５〜２回転／分の回転速度で回転させながら７日間培養を続けた。総細胞数が１×１０７ 個になったところでトリプシンにより細胞を剥離し細胞をボトル底面に集め、５〜９メッシュのセラミック１００ｇ（東芝セラミック社製）を殺菌して投入し、２４時間静置して培養した。その後、上記培養液を５００ｍｌ加え、培養を継続した。７〜１０日ごとに培地を全量回収し、新鮮培地を補給した。このようにして２ヵ月間生産を継続し、ローラーボトル一本当たり４ｌの培養液を回収した。このようにして得た培養液当たりの比活性は３２μ／ｍｌであった。培養液７５０ｌをメンブランフィルター（ＭＷ６０００カット；アミコン社製）処理によりＵＦ濃縮し、ＣＭセファデックスＣ−５０（ファルマシア社製）、ＣｏｎＡセファロース（ファルマシア社製）、ＭｏｎｏＳカラム（ファルマシア社製）、ヘパリンセファロース（ファルマシア社製）による５段階のクロマト精製を行い、精製ＴＣＦ−IIを得た。
【実施例２】
【００１３】
遺伝子組換ＴＣＦ−IIの生産
ＷＯ９２／０１０５３号公報に開示された方法に従い、ＴＣＦ−II遺伝子を組み込んだ細胞を培養し、精製ＴＣＦ−IIを得た。形質転換ナマルワ（Ｎａｍａｌｗａ）細胞を培養し、培養液２０ｌを得た。この培養液をＣＭ−セファデックスＣ−５０クロマト（ファルマシア社製）、Ｃｏｎ−ＡセファロースＣＬ−６Ｂクロマト（ファルマシア社製）、ＭｏｎｏＳカラム（ファルマシア社製）を装着したＨＰＬＣの順に処理を行い、約１１ｍｇの活性ＴＣＦ−IIを得た。
【実施例３】
【００１４】
ＴＣＦ−II製剤の製造
前記実施例２により得られた遺伝子組換えＴＣＦ−IIの注射剤の製造例を示す。
(1) ＴＣＦ−II ２０μｇ
ヒト血清アルブミン １００ｍｇ
上記組成をｐＨ７．０の０．０１Ｍリン酸緩衝液（ＰＢＳ）に溶解し全量を２０ｍｌに調製し、滅菌後バイアル瓶に２ｍｌづつ分注したものを凍結乾燥後密封した。
【００１５】
(2) ＴＣＦ−II ４０μｇ
ツイーン８０ １ｍｇ
ヒト血清アルブミン １００ｍｇ
上記組成を注射用生理食塩水に溶解し全量を２０ｍｌに調製し、滅菌後バイアル瓶に２ｍｌづつ分注したものを凍結乾燥後密封した。
【００１６】
(3) ＴＣＦ−II ２０μｇ
ツイーン８０ ２ｍｇ
ソルビトール ４ｇ
上記組成をｐＨ７．０の０．０１Ｍ ＰＢＳに溶解し全量を２０ｍｌに調製し、滅菌後バイアル瓶に２ｍｌづつ分注したものを凍結乾燥後密封した。
【００１７】
(4) ＴＣＦ−II ４０μｇ
ツイーン８０ １ｍｇ
グリシン ２ｇ
上記組成を注射用生理食塩水に溶解し全量を２０ｍｌに調製し、滅菌後バイアル瓶に２ｍｌづつ分注したものを凍結乾燥後密封した。
【００１８】
(5) ＴＣＦ−II ４０μｇ
ツイーン８０ １ｍｇ
ソルビトール ２ｇ
グリシン １ｇ
上記組成を注射用生理食塩水に溶解し全量を２０ｍｌに調製し、滅菌後バイアル瓶に２ｍｌづつ分注したものを凍結乾燥後密封した。
【００１９】
(6) ＴＣＦ−II ２０μｇ
ソルビトール ４ｇ
ヒト血清アルブミン ５０ｍｇ
上記組成をｐＨ７．０の０．０１Ｍ ＰＢＳに溶解し全量を２０ｍｌに調製し、滅菌後バイアル瓶に２ｍｌづつ分注したものを凍結乾燥後密封した。
【００２０】
(7) ＴＣＦ−II ４０μｇ
グリシン ２ｇ
ヒト血清アルブミン ５０ｍｇ
上記組成を注射用生理食塩水に溶解し全量を２０ｍｌに調製し、滅菌後バイアル瓶に２ｍｌづつ分注したものを凍結乾燥後密封した。
【００２１】
(8) ＴＣＦ−II ４０μｇ
ヒト血清アルブミン ５０ｍｇ
上記組成をｐＨ７．０の０．０１Ｍ ＰＢＳに溶解し全量を２０ｍｌに調製し、滅菌後バイアル瓶に２ｍｌづつ分注したものを凍結乾燥後密封した。
【実施例４】
【００２２】
正常ラットに対するＴＣＦ−IIのリポタンパク質分泌促進作用と血中レシチン−コレス
テロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）活性上昇作用
８週齢のＷｉｓｔａｒ系雄ラット（３００ｇ、一群５匹）に対し、ＴＣＦ−IIを５００
μｇ／ｋｇの用量で１日２回（１０００μｇ／ｋｇ／ｄａｙ）、及び対照群として溶媒の
みを４日間静脈内に投与した。試験５日目に各群のラットをエーテル麻酔下で後大静脈よ
り採血して血清を採取し、リポタンパク質の分画を行った。リポタンパク質の分画は、先
ずＷｉｌｓｏｎらの方法（ Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．， ｖｏｌ．２０， ｐ３９４ （１
９７４））に従ってＶＬＤＬ画分を分離し、次にＧｉｂｅｚ らの方法（ Ｊ．Ｌｉｐｉ
ｄ．Ｒｅｓ．， ｖｏｌ．２３， ｐ１２０６ （１９８２） ）に従ってＨＤＬ２ 画
分及びＨＤＬ３ 画分を分離した。これらの操作の模式図を図１及び図２に示す。これら
の画分に含まれるトリアシルグリセロール濃度を、トリグリセライドＥ−テストワコー（
和光純薬工業社製）を用いて測定した。その結果を図３に示す。さらにＨＤＬ３ 、ＨＤ
Ｌ２ 画分に含まれる遊離コレステロール（Ｆ−Ｃｈｏｌ）及び総コレステロール濃度を
遊離コレステロールＥ−テストワコー、コレステロールＥ−テストワコー（和光純薬工業
社製）を用いてそれぞれ測定した。又、求められた値より計算式（〔総コレステロール濃
度〕−〔遊離コレステロール濃度〕）を用いてエステル化コレステロール（Ｅ−Ｃｈｏｌ
）濃度を求めた。又、同時に後大静脈より採血したＥＤＴＡ加血液より血漿を採取し、Ｇ
ｌｏｍｓｅｔ−Ｗｒｉｇｈｔ法（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ
．１５，ｐ５４３（１９６９））に従って血中ＬＣＡＴ活性を測定した。これらの結果を
図４に示す。
【００２３】
この結果、溶媒投与群に比べてＴＣＦ−II投与群ではＶＬＤＬ画分中のトリアシルグリ
セロール濃度が顕著に増加した（図３）。これより、ＴＣＦ−IIは肝臓からのＶＬＤＬ分
泌を促進し、肝組織から血中へのトリアシルグリセロールの移行をもたらすことが示され
た。又、ＴＣＦ−II投与群では血中ＬＣＡＴ活性が有意に上昇するとともにＨＤＬ２ 、
ＨＤＬ３ 画分中のコレステロール、特にエステル化コレステロール濃度が有意に増加し
た（図４）。このことから、ＴＣＦ−IIは肝臓からのＬＣＡＴ分泌を促進し、それによっ
てＨＤＬの生成が起こることが示された。
【実施例５】
【００２４】
アルコール性脂肪肝ラットに対するＴＣＦ−IIの肝組織トリアシルグリセロール含量低下作用
Liber らの方法に（Trans.assoc.Am.Physician., vol.76, p289 (1963)）に従ってコントロール食摂取群及びアルコール食摂取群に与える液体飼料を作成し、７週齢のＷｉｓｔａｒ系雄ラット（２８０ｇ、一群１０〜１３匹）に対し１００ｍｌ／ｄａｙで５週間にわたり摂食させた。ＴＣＦ−IIはアルコール食摂取群に対してアルコール食摂取開始４週間後より５０及び５００μｇ／ｋｇの用量で１日２回（１００及び１０００μｇ／ｋｇ／ｄａｙ）７日間静脈内に投与した。投与スケジュールを図５に示す。８日目に試験ラットを解剖し肝臓を摘出した。肝組織をクロロホルム／メタノール（２：１）で抽出し、組織中のトリアシルグリセロール、リン脂質及び総コレステロール含量をトリグリセライドＥ−テストワコー、リン脂質Ｃ−テストワコー、コレステロールＥ−テストワコー（和光純薬工業社製）を用いてそれぞれ測定した。この結果を図６に示す。
【００２５】
この結果、コントロール食摂取群に比べてアルコール食摂取溶媒投与群では肝組織中のトリアシルグリセロール含量が有意に増加し（図６）、顕著な脂肪肝が認められた。これに対して、アルコール食摂取ＴＣＦ−II投与群では用量依存的な血清脂質の上昇及び肝組織中のトリアシルグリセロール含量の低下がみられた（図６）。このことから、肝臓からの脂質分泌増加によるＴＣＦ−IIの脂肪肝改善効果が示された。
【実施例６】
【００２６】
α−ナフチルイソチオシアネート（ＡＮＩＴ）胆汁鬱滞肝障害ラットに対するＴＣＦ−IIの血清コレステロール濃度低下作用
７週齢のＷｉｓｔａｒ系雄ラット（２８０ｇ、一群１０匹）にα−ナフチルイソチオシアネート（ＡＮＩＴ）を１００ｍｇ／ｋｇの用量で経口投与した。ＴＣＦ−IIはＡＮＩＴ投与直後より５０、１５０、５００及び１５００μｇ／ｋｇの用量で１日２回（１００、３００、１０００及び３０００μｇ／ｋｇ／ｄａｙ）３日間静脈内に投与した。４日目にエーテル麻酔下で後大静脈より採血して血清を採取し、日立７１５０型自動分析装置により血清アルブミン、トリアシルグリセロール、遊離コレステロール及び総コレステロール濃度を測定した。結果を図７に示す。
【００２７】
この結果、正常ラットに比べてＡＮＩＴ肝障害ラット溶媒投与群では血清トリアシルグリセロール、遊離コレステロール及び総コレステロール濃度が有意に増加した。これに対してＡＮＩＴ肝障害ラットＴＣＦ−II投与群では用量依存的に血清アルブミン濃度が上昇するとともに、血清トリアシルグリセロール、総コレステロール及び遊離コレステロール濃度の低下がみられた。このことから、ＴＣＦ−IIの胆汁鬱滞に伴う高脂血症の改善効果が確認された。
【実施例７】
【００２８】
正常イヌに対するＴＣＦ−IIの血中ＬＣＡＴ活性上昇作用
ビーグル犬（雌雄、１〜５才、１０ｋｇ前後、一群５匹）にＴＣＦ−IIを５０、１５０、５００μｇ／ｋｇの用量で１日２回（１００、３００及び１０００μｇ／ｋｇ／ｄａｙ）７日間静脈内に投与した。投与スケジュールを図８に示す。ＴＣＦ−II投与開始前及び投与中に前肢静脈から採血し、ＥＤＴＡを添加して血漿を分離し、Glomset-Wright法（Methods in Enzymology, vol.15, p543 (1969)）に従って血中ＬＣＡＴ活性を測定した。結果を図９に示す。
この結果、ＴＣＦ−II投与によって、正常イヌの血中ＬＣＡＴ活性が有意に上昇し、血中の脂質代謝が促進されていることが確認された。
【実施例８】
【００２９】
ジメチルニトロソアミン（ＤＭＮ）肝硬変ラットに対するＴＣＦ−IIのコレステロール
エステルおよびＨＤＬコレステロール上昇作用
８週齢のＷｉｓｔａｒ系雄ラット（３００ｇ）にジメチルニトロソアミン（ＤＭＮ）を
毎週火、水、木曜日に１０μｌ／ｋｇの用量で４週間にわたり腹腔内投与した。ＴＣＦ−
IIはＤＭＮ初回投与時より５、５０及び５００μｇ／ｋｇの用量で１日２回（１０、１０
０及び１０００μｇ／ｋｇ／ｄａｙ）２８日間静脈内に投与した。投与スケジュールを図
１０に示す。２９日目にエーテル麻酔下で後大静脈より採血して血清を採取し、日立７１
５０型自動分析装置により血糖値、血清ＨＤＬコレステロール、遊離コレステロール及び
総コレステロール濃度を測定した。又、求められた値より計算式（〔総コレステロール濃
度〕−〔遊離コレステロール濃度〕）を用いてエステル化コレステロール濃度を求めた。
血清コレステロール濃度の測定結果を図１１に示す。
【００３０】
この結果、正常ラットに比べてＤＭＮ肝硬変ラット溶媒投与群では血中ＬＣＡＴ活性の低下により血清ＨＤＬコレステロール、エステル化コレステロール濃度が有意に減少し、逆に遊離コレステロール濃度が有意に増加した。これに対して、ＤＭＮ肝硬変ラットＴＣＦ−II投与群では用量依存的なＨＤＬコレステロール、エステル化コレステロール濃度の上昇及び遊離コレステロール濃度の低下がみられた（図１１）。このことから、ＴＣＦ−IIの肝硬変に伴う低脂血症及び低ＨＤＬ血症の改善効果が確認された。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】実施例４における、血清ＶＬＤＬ画分の分画方法を示す。
【図２】実施例４における、血清ＨＤＬ画分及びＨＤＬ3画分の分画方法を示す。
【図３】実施例４における、各リポタンパク分画中の血清トリアシルグリセロール濃度を示す。
【図４】実施例４における、ＨＤＬ2及びＨＤＬ3画分血清エステル型コレステロール濃度、ＨＤＬ2及びＨＤＬ3画分血清遊離コレステロール濃度及び血中ＬＣＡＴ活性を示す。
【図５】実施例５における、投与スケジュールを示す。
【図６】実施例５における、組織及び血清中のトリアシルグリセロール、リン脂質及び総コレステロール含量を示す。
【図７】実施例６における、血清アルブミン、ＨＤＬコレステロール、遊離コレステロール及び総コレステロール濃度を示す。
【図８】実施例７における、投与スケジュールを示す。
【図９】実施例７における、血中ＬＣＡＴ活性を示す。
【図１０】実施例８における、投与スケジュールを示す。
【図１１】実施例８における、血清ＨＤＬコレステロール、遊離コレステロール及び総コレステロール濃度を示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＴＣＦ−IIを有効成分とする脂質代謝異常治療剤に関する。
本発明は、糖尿病、甲状腺および副腎機能不全等の内分泌疾患、慢性代謝性疾患、ネフローゼを含む慢性腎臓疾患および尿毒症、癌、悪液質、制癌剤の副作用、消化器（肝および膵機能を含む）障害等を原因とした、高コレステロール血症、低脂質血症、低ＨＤＬ血症等の脂質代謝異常の治療剤として有用である。
【背景技術】
【０００２】
現在、日本人の６０％以上が高血圧、動脈硬化、糖尿病などの成人病のために命を失っている。一般に成人病は内分泌機能や脂質代謝機能の減退などの内的要因が主要な役割を演じているが、それらの調節機構は未だ不明な点が多い。現在考えられている高脂血症治療剤を作用機序別に分けてみるとコレステロールや胆汁酸の吸収阻害、コレステロール合成阻害、超低比重リポ蛋白（ＶＬＤＬ）の代謝に対する影響を介して作用する高脂血症治療剤に分類される。高比重リポ蛋白（ＨＤＬ）−コレステロールの低下を伴う高脂血症は、動脈硬化性疾患である虚血性心疾患、高血圧、虚血性脳障害などの重要なリスクファクターとなっている。高脂血症治療剤の薬効については単に血清脂質を下げるばかりでなく、高脂血症の増悪要因であるＨＤＬ−コレステロールの低下やレシチン−コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）活性の低下した状態を改善し、代謝過程の停滞を除去することで、高脂血症から動脈硬化性疾患への進展を防ぐことが分かってきた。
【０００３】
しかしながら脂質代謝を合目的に改善する脂質代謝改善剤は現在開発されていない。現
在、臨床で用いられる脂質代謝異常に関する治療薬として、高脂血症には３−ヒドロキシ
−３−メチル−グルタリル−ＣｏＡ（ＨＭＧ−ＣｏＡ）還元酵素を阻害するプラバスタチ
ンナトリウムや血清脂質清澄化作用を有するクロフィブラート等、又、低脂血症には高カ
ロリー輸液等の栄養補給が挙げられるが、原発疾患に限らず症状に応じた別々の治療剤が
使われており、脂質及び糖質代謝に関連した内分泌機能異常等による両者のバランス異常
による脂質代謝異常を改善及び／又は治療する薬剤は無かった。糖尿病では種々の成因の
結果として、インスリンとグルカゴンのバランス、膵機能を含む内分泌機能の障害により
肝臓、脂肪、筋肉、皮膚、腎臓などの代謝に異常が生じ、病態を示している。脂肪組織の
役割はエネルギーが過剰のときは脂質として貯蔵し、必要に応じて脂肪を分解しエネルギ
ー源として体内に供給することである。糖尿病ではインスリンの欠乏およびグルカゴンの
過剰があるために、脂肪組織では合成が阻害され、分解が促進される。即ちインスリン作
用の低下により脂肪細胞のブドウ糖摂取は減少するので、α−グリセロリン酸、ＮＡＤＨ
、ＮＡＤＰＨの産生は減少し、脂肪酸の合成、再エステル化が減少する。一方、インスリ
ンの欠乏およびグルカゴンの増加はホルモン感受性リパーゼの活性を上昇させて脂肪を分
解させる。また、脂肪肝の発症機序は肝におけるトリグリセリド合成及びＶＬＤＬの合成
・分泌のいずれかの過程で障害が生じることにより発症すると考えられる。
【０００４】
具体的には肝における脂肪酸合成の促進、末梢脂肪組織から肝への脂肪酸動員の増加、肝における脂肪酸酸化能の低下、肝でのリポ蛋白の合成・分泌の低下等が考えられる。例えば、肥満に伴う脂肪肝では末梢脂肪組織量の増大により末梢脂肪組織からの脂肪酸動員が増加している。最近では、内臓脂肪蓄積による門脈血中脂肪酸の増加と脂肪肝発生の関連が注目されている。また、肝における脂肪酸の de novo合成の律速酵素であるアセチルＣｏＡカルボキシラーゼ活性が肥満症で上昇しており、肝での脂肪酸合成の亢進が示唆されている。一方、肥満症では、末梢脂肪組織でのインスリン抵抗性の増大を代償するため、高インスリン血症が招来される。正常インスリン分泌を示す肥満症に比較し、高インスリン血症を伴う肥満症に脂肪肝が高率に合併することが知られている。このように、糖と脂質の連動する代謝異常に対し、血中で脂質を運搬する血清リポ蛋白の合成を促し脂質の組成への転送や代謝を改善する作用、エステル化に関わるＬＣＡＴ活性を増加させ、遊離コレステロールレベルを下げＨＤＬ−コレステロールレベルを増加させる作用、胆汁排泄を促進させ血清脂質レベルを低下させる作用、肝細胞に蓄積したトリグリセリドの汲み出しを促進し脂肪肝をも改善する統合的脂質代謝改善薬は存在していなかった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
このような状況に鑑み、本発明者らは糖と脂質の連動する代謝異常に対する治療剤につ
いて鋭意研究した結果、ＴＣＦ−IIが脂質代謝において、血中で脂質を運搬する血清リポ
蛋白の脂質の組成への転送や代謝と特異的に関係していることを見出した。すなわち、そ
の合成障害、エステル化に関わるＬＣＡＴ活性の低下、及びそれらに伴うＨＤＬの減少が
高脂血症、動脈硬化症等の脂質代謝異常を伴う成人病のリスクファクターとして重要視さ
れており、これらに対しＴＣＦ−IIが ｉｎ ｖｉｖｏにおいて強力なＬＣＡＴの上昇作
用と低ＨＤＬ血症の改善効果を示し、さらに血清リポ蛋白を増加させることにより脂質の
転送を促進し血清脂質レベルを正常化させることを見出した。従って、本発明はＴＣＦ−
IIを有効成分とする脂質代謝異常を正常化する効果を有する治療剤を提供することを課題
とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、ＴＣＦ−IIを有効成分とする脂質代謝異常治療剤に関する。本発明は、糖尿
病、甲状腺および副腎機能不全等の内分泌疾患、慢性代謝性疾患、ネフローゼを含む慢性
腎臓疾患および尿毒症、癌、悪液質、制癌剤の副作用、消化器（肝および膵機能を含む）
障害等を原因とした脂質代謝異常の治療剤として有用である。このような脂質代謝異常症
としては、高コレステロール血症、低脂血症あるいは低ＨＤＬ血症などを挙げることがで
きる。また、高脂血症、胆汁鬱血により生ずる高脂血症を挙げることができる。さらに、
高比重リポ蛋白（ＨＤＬ）コレステロール増加、レシチンコレステロールアシルトランス
フェラーゼ（ＬＣＡＴ）活性の促進、肝臓からのトリアシルグリセロール排泄促進、胆汁
排泄促進等のために用いることもできる。
【０００７】
本発明の有効成分であるＴＣＦ−IIは、ヒト線維芽細胞由来の公知の蛋白質であり、ヒト線維芽細胞由来のものは下記の特性を有する。
ｉ) 分子量（ＳＤＳ電気泳動法）
非還元下 ： 78,000±2,000 又は74,000±2,000
還元下 ： 52,000±2,000 （共通バンドＡ)
30,000±2,000 （バンドＢ）
26,000±2000（バンドＣ）
ii) 等電点 ： 7.4 〜 8.6
iii)アミノ酸 ： 723 個
上記ＴＣＦ−IIは、ヒト線維芽細胞培養液を濃縮しイオン交換体に吸着させ、その溶出液をアフィニティークロマトグラフィーを用いて精製する方法（ＷＯ９０／１０６５１号公報）、或いは遺伝子工学的手法（ＷＯ９２／０１０５３号公報）によって得られる。
【０００８】
本発明の有効成分であるＴＣＦ−IIは、線維芽細胞由来のものを用いることが可能であり、又、ＷＯ９０／１０６５１号公報に記載された遺伝子配列に基づいて、微生物や他の細胞により遺伝子組換え操作により生産されたものでもよい。又、ＷＯ９２／０１０５３号公報に開示された遺伝子工学的手法により得られたものを用いてもよい。この時、宿主細胞又は微生物の違いによる糖鎖の異なったものや、糖鎖の結合していないものであっても使用可能である。しかし、糖鎖は生体内の代謝速度に関係しているため、糖鎖の結合しているものを用いることが望ましい。これらの方法により得られたＴＣＦ−IIは、通常の単離精製法によってさらに濃縮、精製することができる。例えば、有機溶媒による沈殿法、塩析、ゲル濾過、モノクローナル抗体を用いたアフィニティークロマト、電気泳動法等が挙げられる。モノクローナル抗体を用いたアフィニティークロマトによる精製は、特開平５−９７号公報に開示されているモノクローナル抗体を用いて精製することができる。得られた精製ＴＣＦ−IIは、凍結乾燥或いは凍結保存することができる。
【０００９】
本発明の脂質及び糖質代謝異常治療剤は、注射剤として静脈、筋肉内、及び皮下より投与することができる。これらの製剤は公知の製剤学的製法に準じ製造され、必要に応じｐＨ調整剤、緩衝剤、安定化剤等を添加することができる。本発明の製剤を患者に投与する場合、投与患者の症状の程度、健康状態、年齢、体重等の条件によって異なり、特に限定されないが、成人１日当たり精製ＴＣＦ−IIとして ０．６ｍｇ〜 ６００ｍｇ、好ましくは ６ｍｇ〜 ６０ｍｇ を含有する製剤を１日１回若しくはそれ以上投与すれば良い。
【発明の効果】
【００１０】
本発明により、ＴＣＦ−IIを有効成分とする脂質代謝異常の治療剤が提供される。本発明治療剤は、高血清脂質を低下させ、低脂血症を正常化させる作用を有する。又、脂肪肝を改善する効果を有している。
[実施例]
【００１１】
以下に実施例を挙げて本発明を更に詳しく説明する。しかし、これらは単に例示するのみであり、本発明はこれらにより限定されるものではない。
【実施例１】
【００１２】
ＴＣＦ−IIの精製
ＷＯ９０／１０６５１号公報に開示された方法及び東尾らの方法（Higashio,K. et al,B.B.R.C., vol.170, pp397-404 (1990))に準じて細胞を培養し、精製ＴＣＦ−IIを得た。ヒト繊維芽細胞ＩＭＲ−９０（ＡＴＣＣ ＣＣＬ １８６）細胞を５％仔牛血清を含むＤＭＥＭ培地１００ｍｌをいれたローラーボトルに３×１０６ 個移植し、０．５〜２回転／分の回転速度で回転させながら７日間培養を続けた。総細胞数が１×１０７ 個になったところでトリプシンにより細胞を剥離し細胞をボトル底面に集め、５〜９メッシュのセラミック１００ｇ（東芝セラミック社製）を殺菌して投入し、２４時間静置して培養した。その後、上記培養液を５００ｍｌ加え、培養を継続した。７〜１０日ごとに培地を全量回収し、新鮮培地を補給した。このようにして２ヵ月間生産を継続し、ローラーボトル一本当たり４ｌの培養液を回収した。このようにして得た培養液当たりの比活性は３２μ／ｍｌであった。培養液７５０ｌをメンブランフィルター（ＭＷ６０００カット；アミコン社製）処理によりＵＦ濃縮し、ＣＭセファデックスＣ−５０（ファルマシア社製）、ＣｏｎＡセファロース（ファルマシア社製）、ＭｏｎｏＳカラム（ファルマシア社製）、ヘパリンセファロース（ファルマシア社製）による５段階のクロマト精製を行い、精製ＴＣＦ−IIを得た。
【実施例２】
【００１３】
遺伝子組換ＴＣＦ−IIの生産
ＷＯ９２／０１０５３号公報に開示された方法に従い、ＴＣＦ−II遺伝子を組み込んだ細胞を培養し、精製ＴＣＦ−IIを得た。形質転換ナマルワ（Ｎａｍａｌｗａ）細胞を培養し、培養液２０ｌを得た。この培養液をＣＭ−セファデックスＣ−５０クロマト（ファルマシア社製）、Ｃｏｎ−ＡセファロースＣＬ−６Ｂクロマト（ファルマシア社製）、ＭｏｎｏＳカラム（ファルマシア社製）を装着したＨＰＬＣの順に処理を行い、約１１ｍｇの活性ＴＣＦ−IIを得た。
【実施例３】
【００１４】
ＴＣＦ−II製剤の製造
前記実施例２により得られた遺伝子組換えＴＣＦ−IIの注射剤の製造例を示す。
(1) ＴＣＦ−II ２０μｇ
ヒト血清アルブミン １００ｍｇ
上記組成をｐＨ７．０の０．０１Ｍリン酸緩衝液（ＰＢＳ）に溶解し全量を２０ｍｌに調製し、滅菌後バイアル瓶に２ｍｌづつ分注したものを凍結乾燥後密封した。
【００１５】
(2) ＴＣＦ−II ４０μｇ
ツイーン８０ １ｍｇ
ヒト血清アルブミン １００ｍｇ
上記組成を注射用生理食塩水に溶解し全量を２０ｍｌに調製し、滅菌後バイアル瓶に２ｍｌづつ分注したものを凍結乾燥後密封した。
【００１６】
(3) ＴＣＦ−II ２０μｇ
ツイーン８０ ２ｍｇ
ソルビトール ４ｇ
上記組成をｐＨ７．０の０．０１Ｍ ＰＢＳに溶解し全量を２０ｍｌに調製し、滅菌後バイアル瓶に２ｍｌづつ分注したものを凍結乾燥後密封した。
【００１７】
(4) ＴＣＦ−II ４０μｇ
ツイーン８０ １ｍｇ
グリシン ２ｇ
上記組成を注射用生理食塩水に溶解し全量を２０ｍｌに調製し、滅菌後バイアル瓶に２ｍｌづつ分注したものを凍結乾燥後密封した。
【００１８】
(5) ＴＣＦ−II ４０μｇ
ツイーン８０ １ｍｇ
ソルビトール ２ｇ
グリシン １ｇ
上記組成を注射用生理食塩水に溶解し全量を２０ｍｌに調製し、滅菌後バイアル瓶に２ｍｌづつ分注したものを凍結乾燥後密封した。
【００１９】
(6) ＴＣＦ−II ２０μｇ
ソルビトール ４ｇ
ヒト血清アルブミン ５０ｍｇ
上記組成をｐＨ７．０の０．０１Ｍ ＰＢＳに溶解し全量を２０ｍｌに調製し、滅菌後バイアル瓶に２ｍｌづつ分注したものを凍結乾燥後密封した。
【００２０】
(7) ＴＣＦ−II ４０μｇ
グリシン ２ｇ
ヒト血清アルブミン ５０ｍｇ
上記組成を注射用生理食塩水に溶解し全量を２０ｍｌに調製し、滅菌後バイアル瓶に２ｍｌづつ分注したものを凍結乾燥後密封した。
【００２１】
(8) ＴＣＦ−II ４０μｇ
ヒト血清アルブミン ５０ｍｇ
上記組成をｐＨ７．０の０．０１Ｍ ＰＢＳに溶解し全量を２０ｍｌに調製し、滅菌後バイアル瓶に２ｍｌづつ分注したものを凍結乾燥後密封した。
【実施例４】
【００２２】
正常ラットに対するＴＣＦ−IIのリポタンパク質分泌促進作用と血中レシチン−コレス
テロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）活性上昇作用
８週齢のＷｉｓｔａｒ系雄ラット（３００ｇ、一群５匹）に対し、ＴＣＦ−IIを５００
μｇ／ｋｇの用量で１日２回（１０００μｇ／ｋｇ／ｄａｙ）、及び対照群として溶媒の
みを４日間静脈内に投与した。試験５日目に各群のラットをエーテル麻酔下で後大静脈よ
り採血して血清を採取し、リポタンパク質の分画を行った。リポタンパク質の分画は、先
ずＷｉｌｓｏｎらの方法（ Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．， ｖｏｌ．２０， ｐ３９４ （１
９７４））に従ってＶＬＤＬ画分を分離し、次にＧｉｂｅｚ らの方法（ Ｊ．Ｌｉｐｉ
ｄ．Ｒｅｓ．， ｖｏｌ．２３， ｐ１２０６ （１９８２） ）に従ってＨＤＬ２ 画
分及びＨＤＬ３ 画分を分離した。これらの操作の模式図を図１及び図２に示す。これら
の画分に含まれるトリアシルグリセロール濃度を、トリグリセライドＥ−テストワコー（
和光純薬工業社製）を用いて測定した。その結果を図３に示す。さらにＨＤＬ３ 、ＨＤ
Ｌ２ 画分に含まれる遊離コレステロール（Ｆ−Ｃｈｏｌ）及び総コレステロール濃度を
遊離コレステロールＥ−テストワコー、コレステロールＥ−テストワコー（和光純薬工業
社製）を用いてそれぞれ測定した。又、求められた値より計算式（〔総コレステロール濃
度〕−〔遊離コレステロール濃度〕）を用いてエステル化コレステロール（Ｅ−Ｃｈｏｌ
）濃度を求めた。又、同時に後大静脈より採血したＥＤＴＡ加血液より血漿を採取し、Ｇ
ｌｏｍｓｅｔ−Ｗｒｉｇｈｔ法（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ
．１５，ｐ５４３（１９６９））に従って血中ＬＣＡＴ活性を測定した。これらの結果を
図４に示す。
【００２３】
この結果、溶媒投与群に比べてＴＣＦ−II投与群ではＶＬＤＬ画分中のトリアシルグリ
セロール濃度が顕著に増加した（図３）。これより、ＴＣＦ−IIは肝臓からのＶＬＤＬ分
泌を促進し、肝組織から血中へのトリアシルグリセロールの移行をもたらすことが示され
た。又、ＴＣＦ−II投与群では血中ＬＣＡＴ活性が有意に上昇するとともにＨＤＬ２ 、
ＨＤＬ３ 画分中のコレステロール、特にエステル化コレステロール濃度が有意に増加し
た（図４）。このことから、ＴＣＦ−IIは肝臓からのＬＣＡＴ分泌を促進し、それによっ
てＨＤＬの生成が起こることが示された。
【実施例５】
【００２４】
アルコール性脂肪肝ラットに対するＴＣＦ−IIの肝組織トリアシルグリセロール含量低下作用
Liber らの方法に（Trans.assoc.Am.Physician., vol.76, p289 (1963)）に従ってコントロール食摂取群及びアルコール食摂取群に与える液体飼料を作成し、７週齢のＷｉｓｔａｒ系雄ラット（２８０ｇ、一群１０〜１３匹）に対し１００ｍｌ／ｄａｙで５週間にわたり摂食させた。ＴＣＦ−IIはアルコール食摂取群に対してアルコール食摂取開始４週間後より５０及び５００μｇ／ｋｇの用量で１日２回（１００及び１０００μｇ／ｋｇ／ｄａｙ）７日間静脈内に投与した。投与スケジュールを図５に示す。８日目に試験ラットを解剖し肝臓を摘出した。肝組織をクロロホルム／メタノール（２：１）で抽出し、組織中のトリアシルグリセロール、リン脂質及び総コレステロール含量をトリグリセライドＥ−テストワコー、リン脂質Ｃ−テストワコー、コレステロールＥ−テストワコー（和光純薬工業社製）を用いてそれぞれ測定した。この結果を図６に示す。
【００２５】
この結果、コントロール食摂取群に比べてアルコール食摂取溶媒投与群では肝組織中のトリアシルグリセロール含量が有意に増加し（図６）、顕著な脂肪肝が認められた。これに対して、アルコール食摂取ＴＣＦ−II投与群では用量依存的な血清脂質の上昇及び肝組織中のトリアシルグリセロール含量の低下がみられた（図６）。このことから、肝臓からの脂質分泌増加によるＴＣＦ−IIの脂肪肝改善効果が示された。
【実施例６】
【００２６】
α−ナフチルイソチオシアネート（ＡＮＩＴ）胆汁鬱滞肝障害ラットに対するＴＣＦ−IIの血清コレステロール濃度低下作用
７週齢のＷｉｓｔａｒ系雄ラット（２８０ｇ、一群１０匹）にα−ナフチルイソチオシアネート（ＡＮＩＴ）を１００ｍｇ／ｋｇの用量で経口投与した。ＴＣＦ−IIはＡＮＩＴ投与直後より５０、１５０、５００及び１５００μｇ／ｋｇの用量で１日２回（１００、３００、１０００及び３０００μｇ／ｋｇ／ｄａｙ）３日間静脈内に投与した。４日目にエーテル麻酔下で後大静脈より採血して血清を採取し、日立７１５０型自動分析装置により血清アルブミン、トリアシルグリセロール、遊離コレステロール及び総コレステロール濃度を測定した。結果を図７に示す。
【００２７】
この結果、正常ラットに比べてＡＮＩＴ肝障害ラット溶媒投与群では血清トリアシルグリセロール、遊離コレステロール及び総コレステロール濃度が有意に増加した。これに対してＡＮＩＴ肝障害ラットＴＣＦ−II投与群では用量依存的に血清アルブミン濃度が上昇するとともに、血清トリアシルグリセロール、総コレステロール及び遊離コレステロール濃度の低下がみられた。このことから、ＴＣＦ−IIの胆汁鬱滞に伴う高脂血症の改善効果が確認された。
【実施例７】
【００２８】
正常イヌに対するＴＣＦ−IIの血中ＬＣＡＴ活性上昇作用
ビーグル犬（雌雄、１〜５才、１０ｋｇ前後、一群５匹）にＴＣＦ−IIを５０、１５０、５００μｇ／ｋｇの用量で１日２回（１００、３００及び１０００μｇ／ｋｇ／ｄａｙ）７日間静脈内に投与した。投与スケジュールを図８に示す。ＴＣＦ−II投与開始前及び投与中に前肢静脈から採血し、ＥＤＴＡを添加して血漿を分離し、Glomset-Wright法（Methods in Enzymology, vol.15, p543 (1969)）に従って血中ＬＣＡＴ活性を測定した。結果を図９に示す。
この結果、ＴＣＦ−II投与によって、正常イヌの血中ＬＣＡＴ活性が有意に上昇し、血中の脂質代謝が促進されていることが確認された。
【実施例８】
【００２９】
ジメチルニトロソアミン（ＤＭＮ）肝硬変ラットに対するＴＣＦ−IIのコレステロール
エステルおよびＨＤＬコレステロール上昇作用
８週齢のＷｉｓｔａｒ系雄ラット（３００ｇ）にジメチルニトロソアミン（ＤＭＮ）を
毎週火、水、木曜日に１０μｌ／ｋｇの用量で４週間にわたり腹腔内投与した。ＴＣＦ−
IIはＤＭＮ初回投与時より５、５０及び５００μｇ／ｋｇの用量で１日２回（１０、１０
０及び１０００μｇ／ｋｇ／ｄａｙ）２８日間静脈内に投与した。投与スケジュールを図
１０に示す。２９日目にエーテル麻酔下で後大静脈より採血して血清を採取し、日立７１
５０型自動分析装置により血糖値、血清ＨＤＬコレステロール、遊離コレステロール及び
総コレステロール濃度を測定した。又、求められた値より計算式（〔総コレステロール濃
度〕−〔遊離コレステロール濃度〕）を用いてエステル化コレステロール濃度を求めた。
血清コレステロール濃度の測定結果を図１１に示す。
【００３０】
この結果、正常ラットに比べてＤＭＮ肝硬変ラット溶媒投与群では血中ＬＣＡＴ活性の低下により血清ＨＤＬコレステロール、エステル化コレステロール濃度が有意に減少し、逆に遊離コレステロール濃度が有意に増加した。これに対して、ＤＭＮ肝硬変ラットＴＣＦ−II投与群では用量依存的なＨＤＬコレステロール、エステル化コレステロール濃度の上昇及び遊離コレステロール濃度の低下がみられた（図１１）。このことから、ＴＣＦ−IIの肝硬変に伴う低脂血症及び低ＨＤＬ血症の改善効果が確認された。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】実施例４における、血清ＶＬＤＬ画分の分画方法を示す。
【図２】実施例４における、血清ＨＤＬ画分及びＨＤＬ3画分の分画方法を示す。
【図３】実施例４における、各リポタンパク分画中の血清トリアシルグリセロール濃度を示す。
【図４】実施例４における、ＨＤＬ2及びＨＤＬ3画分血清エステル型コレステロール濃度、ＨＤＬ2及びＨＤＬ3画分血清遊離コレステロール濃度及び血中ＬＣＡＴ活性を示す。
【図５】実施例５における、投与スケジュールを示す。
【図６】実施例５における、組織及び血清中のトリアシルグリセロール、リン脂質及び総コレステロール含量を示す。
【図７】実施例６における、血清アルブミン、ＨＤＬコレステロール、遊離コレステロール及び総コレステロール濃度を示す。
【図８】実施例７における、投与スケジュールを示す。
【図９】実施例７における、血中ＬＣＡＴ活性を示す。
【図１０】実施例８における、投与スケジュールを示す。
【図１１】実施例８における、血清ＨＤＬコレステロール、遊離コレステロール及び総コレステロール濃度を示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＴＣＦ−IIを有効成分とする、ＬＣＡＴ活性上昇剤。
【請求項２】
ＴＣＦ−IIを有効成分とする、胆汁鬱滞により引き起こされる高トリアシルグリセロール血症の治療剤。
【請求項１】
ＴＣＦ−IIを有効成分とする、ＬＣＡＴ活性上昇剤。
【請求項２】
ＴＣＦ−IIを有効成分とする、胆汁鬱滞により引き起こされる高トリアシルグリセロール血症の治療剤。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【公開番号】特開２００６−１６０７５７（Ｐ２００６−１６０７５７Ａ）
【公開日】平成１８年６月２２日（２００６．６．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−２５５１１（Ｐ２００６−２５５１１）
【出願日】平成１８年２月２日（２００６．２．２）
【分割の表示】特願平６−３３７８８４の分割
【原出願日】平成６年１２月２７日（１９９４．１２．２７）
【出願人】（０００００２８３１）第一製薬株式会社 (129)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年６月２２日（２００６．６．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年２月２日（２００６．２．２）
【分割の表示】特願平６−３３７８８４の分割
【原出願日】平成６年１２月２７日（１９９４．１２．２７）
【出願人】（０００００２８３１）第一製薬株式会社 (129)
【Ｆターム（参考）】
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