難治性ウイルス感染症の治療剤
【課題】ＩＬ２８Ｂ遺伝子の遺伝子多型のメジャーとマイナーいずれのバリアントに対してもＩＦＮ−λを十分に誘導し、ＰＥＧ化ＩＦＮ−αでは難治性であった肝炎ウイルス感染症に対して有効な抗肝炎ウイルス活性を示す、難治性肝炎ウイルス感染症治療剤等を提供する。さらに、難治性の各種ウイルス感染症に対して有効な抗ウイルス活性を示す、難治性ウイルス感染症治療剤等を提供する。
【解決手段】本発明にかかる難治性ウイルス感染症治療剤は、薬物を細胞内に移送するのに有用な薬物担体に、ポリＩ若しくはポリＩアナログ及びポリＣ若しくはポリＣアナログ、又は、ポリＡ若しくはポリＡアナログ及びポリＵ若しくはポリＵアナログを包含する複合体を含有することを特徴とする。
【解決手段】本発明にかかる難治性ウイルス感染症治療剤は、薬物を細胞内に移送するのに有用な薬物担体に、ポリＩ若しくはポリＩアナログ及びポリＣ若しくはポリＣアナログ、又は、ポリＡ若しくはポリＡアナログ及びポリＵ若しくはポリＵアナログを包含する複合体を含有することを特徴とする。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、難治性ウイルス感染症治療剤及びインターフェロン−λ誘導剤等に関する。
【背景技術】
【０００２】
ポリイノシン酸（ポリＩ）・ポリシチジル酸（ポリＣ）やポリアデニル酸（ポリＡ）・ポリウリジル酸（ポリＵ）に代表される合成ＲＮＡは、自然免疫を誘導する作用が知られている。例えば、自然免疫誘導作用の指標の一つとして、Ｉ型インターフェロン（以下、「Ｉ型ＩＦＮ」という。）に属するＩＦＮ−αやＩＦＮ−βの誘導作用が挙げられる。ポリＩ・ポリＣやポリＡ・ポリＵに代表される合成ＲＮＡは、マウスやウサギ等の生体内に投与したり、ヒト細胞の単層培養系に添加したりすると、Ｉ型ＩＦＮを誘導し、かかるＩ型ＩＦＮによりウイルスの増殖を抑制することが知られている。しかしながら、合成ＲＮＡ等の核酸物質はアニオン性であり、同じくアニオン性物質である細胞膜とは静電的に反発するため、合成ＲＮＡ単独での細胞内取込み効率は著しく悪い。そこで、合成ＲＮＡ単独ではなく、合成ＲＮＡと、いわゆるカチオン性リポソームとで複合体を形成することで、細胞内取込み効率を改善し、この複合体により肝炎ウイルスによる感染症を治療することが提案されている（例えば、特許文献１参照。）。かかる複合体は、マウス生体に投与されると肝臓に特異的に集積し、そこでＩ型ＩＦＮを誘導して、その結果、血中ＩＦＮは、長時間に渡り臨床上の有効性が十分に期待されるレベルとなることから、ウイルス性肝炎の治療効果が期待された。しかしながら、特許文献１には、当該複合体のＩ型ＩＦＮ誘導を介した作用のみ開示されているに過ぎず、ウイルス性肝炎の治療効果については開示されていない。
【０００３】
当時は、ウイルス性肝炎モデルの利用に限界があり、かかる複合体の抗肝炎ウイルス活性については未確認であった。例えば、Ｃ型肝炎ウイルス（以下、「ＨＣＶ」という。）やＢ型肝炎ウイルス（以下、「ＨＢＶ」という。）は、ヒトとチンパンジーの肝細胞にしか感染しない性質を持つため、かかる複合体がどの程度の抗ＨＣＶ活性や抗ＨＢＶ活性を有しているのかを、ＨＣＶ又はＨＢＶに感染した動物モデルで証明することは事実上不可能であった。
しかしその後、ＨＣＶ又はＨＢＶに感染する特性を有するヒト正常肝細胞を肝臓に持つキメラマウスが開発された。ＨＣＶ又はＨＢＶに感染させたヒト肝臓キメラマウスに、かかる複合体を投与したところ、かかる複合体が抗肝炎ウイルス活性を有することが実際に確認された（特許文献２参照。）。かかる複合体の抗肝炎ウイルス活性は、現在抗ＨＣＶ薬として最も多く使われているポリエチレングリコール（ＰＥＧ）化インターフェロン−α（以下、「ＰＥＧ化ＩＦＮ−α」という。）や、現在抗ＨＢＶ薬として最も治療効果が高いとされているヌクレオシド系逆転写阻害剤エンテカビル（以下、「ＥＴＶ」という。）よりも強い抗ＨＣＶ活性又は抗ＨＢＶ活性を示した。さらに、特許文献２では、かかる複合体が、Ｉ型ＩＦＮの誘導とは関係のない新たな抗ウイルスメカニズムを誘導することが示されているが、その新たな抗ウイルスメカニズムについては、これまで具体的には明らかにされていなかった。
【０００４】
２００９年の８月以降、複数の研究グループにより、肝炎ウイルス感染症の治療抵抗性（いわゆる難治性肝炎ウイルス感染症）の指標として注目されているＩＬ２８Ｂ遺伝子（ＩＬ−２８Ｂ（別名：ＩＦＮ−λ３）をコードする遺伝子）の遺伝子多型が、ＨＣＶ慢性感染に対する治療法であるＰＥＧ化ＩＦＮ−αとリバビリンとの併用療法の奏効率と強く関っていることが明らかにされた。ＩＬ２８Ｂ遺伝子近傍のＳＮＰｓとしてｒｓ８０９９９１７にＴアリル又はｒｓ１２９７９８６０にＣアリル等を有するバリアント（以下、「メジャーバリアント」という。）に対しては、ＰＥＧ化ＩＦＮ−αとリバビリンとの併用療法の奏効が期待できるが、ＩＬ２８Ｂ遺伝子近傍のＳＮＰｓとしてｒｓ８０９９９１７にＧアリル又はｒｓ１２９７９８６０にＴアリル等を有するバリアント（以下、「マイナーバリアント」という。）に対しては奏効が期待できない。これは、ＩＬ２８Ｂ遺伝子のマイナーバリアントではＩＦＮ−λの誘導量がメジャーバリアントよりも低いことに起因していると考えられている。現在のところ、ＩＬ２８Ｂ遺伝子のマイナーバリアントに対するＰＥＧ化ＩＦＮ−αの不応答問題を解決する方法は存在しない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第９９／４８５３１号公報
【特許文献２】国際公開第２００８／１１４７８７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
このような状況下において、前記ＩＬ２８Ｂ遺伝子の遺伝子多型のメジャーとマイナーいずれのバリアントに対してもＩＦＮ−λを十分に誘導し、ＰＥＧ化ＩＦＮ−αでは難治性であった肝炎ウイルス感染症に対して有効な抗肝炎ウイルス活性を示す、難治性肝炎ウイルス感染症の治療剤の開発が望まれていた。さらには、肝炎ウイルス感染症以外の難治性の各種ウイルス感染症に対しても有効な抗ウイルス活性を示す、難治性ウイルス感染症の治療剤の開発も望まれていた。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、上記状況を考慮してなされたもので、以下に示す、難治性ウイルス感染症治療剤、ＩＦＮ−λ誘導剤、ＩＦＮ−λ誘導方法等を提供するものである。
【０００８】
（１）薬物を細胞内に移送するのに有用な薬物担体に、ポリＩ若しくはポリＩアナログ及びポリＣ若しくはポリＣアナログを包含する複合体、又は薬物を細胞内に移送するのに有用な薬物担体に、ポリＡ若しくはポリＡアナログ及びポリＵ若しくはポリＵアナログを包含する複合体を含有することを特徴とする、難治性ウイルス感染症治療剤。
上記(1)の治療剤において、薬物担体としては、例えば、カチオン性リポソーム、アテロコラーゲン及びナノ粒子からなる群より選ばれる少なくとも１種が挙げられる。ここで、カチオン性リポソームとしては、例えば、下記一般式[Ｉ]で示される化合物及びリン脂質を必須構成成分として形成されるものが挙げられる。
【０００９】
【化１】
〔式[Ｉ]中、Ｒ１、Ｒ２は、異なって、ＯＹ、又は、−Ａ−(ＣＨ２)ｎ−Ｅを表す。ｎは０〜４の整数を表す。ここで、Ｅは、ピロリジノ、ピペリジノ、置換若しくは無置換のピペラジノ、モルホリノ、置換若しくは無置換のグアニジノ、又は下記式：
【００１０】
【化２】
（式中、Ｒ3、Ｒ4は、同一又は異なって、水素、炭素数１〜４の低級アルキル、炭素数１〜４のヒドロキシ低級アルキル、又はモノ若しくはジ低級アルキルアミノアルキル（炭素数２〜８）を表す。）で示される基を表し、Ａは、下記式：
【００１１】
【化３】
で示されるいずれかの基を表す。また、Ｒ、Ｙは、同一又は異なって、炭素数１０〜３０の飽和若しくは不飽和の脂肪族炭化水素基、又は炭素数１０〜３０の飽和若しくは不飽和の脂肪酸残基を表す。〕
【００１２】
上記一般式[Ｉ]で表される化合物の具体例としては、例えば、２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール、３−Ｏ−（４−ジメチルアミノブタノイル）-１，２−Ｏ−ジオレイルグリセロール、３−Ｏ−（２−ジメチルアミノエチル）カルバモイル-１，２−Ｏ−ジオレイルグリセロール、又は３−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，２−Ｏ−ジオレイルグリセロールが挙げられる。
【００１３】
（２）２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール及びリン脂質を必須構成成分として形成されるカチオン性リポソームに、ポリＩ若しくはポリＩアナログ及びポリＣ若しくはポリＣアナログを包含する複合体、又は２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール及びリン脂質を必須構成成分として形成されるカチオン性リポソームに、ポリＡ若しくはポリＡアナログ及びポリＵ若しくはポリＵアナログを包含する複合体を含有することを特徴とする、難治性ウイルス感染症治療剤。
上記(1)及び(2)の治療剤は、例えば、ポリＩ、ポリＩアナログ、ポリＣ、ポリＣアナログ、ポリＡ、ポリＡアナログ、ポリＵ、ポリＵアナログの各鎖長が、各々独立して１００〜６００塩基数の範囲内であるものが挙げられる。
【００１４】
（３）２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール及びリン脂質を必須構成成分として形成されるカチオン性リポソームに、鎖長が１００〜６００塩基数の範囲内にあるポリＩ及び鎖長が１００〜６００塩基数の範囲内にあるポリＣを包含する複合体を含有することを特徴とする、難治性ウイルス感染症治療剤。
上記(1)〜(3)の治療剤において、リン脂質としては、例えばレシチンが挙げられる。
上記(1)〜(3)の治療剤において、ウイルスとしては、例えば肝炎ウイルス、具体的にはＣ型肝炎ウイルス又はＢ型肝炎ウイルスが挙げられる。Ｃ型肝炎ウイルスの遺伝子型としては、例えば１ａ型又は１ｂ型が挙げられ、Ｂ型肝炎ウイルスの遺伝子型としては、例えばＣ型が挙げられる。
【００１５】
（４）薬物を細胞内に移送するのに有用な薬物担体に、ポリＩ若しくはポリＩアナログ及びポリＣ若しくはポリＣアナログを包含する複合体、又は薬物を細胞内に移送するのに有用な薬物担体に、ポリＡ若しくはポリＡアナログ及びポリＵ若しくはポリＵアナログを包含する複合体を含有することを特徴とする、ＩＦＮ−λ誘導剤。
（５）２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール及びリン脂質を必須構成成分として形成されるカチオン性リポソームに、ポリＩ若しくはポリＩアナログ及びポリＣ若しくはポリＣアナログを包含する複合体、又は２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール及びリン脂質を必須構成成分として形成されるカチオン性リポソームに、ポリＡ若しくはポリＡアナログ及びポリＵ若しくはポリＵアナログを包含する複合体を含有することを特徴とする、ＩＦＮ−λ誘導剤。
上記(4)及び(5)の誘導剤は、例えば、ポリＩ、ポリＩアナログ、ポリＣ、ポリＣアナログ、ポリＡ、ポリＡアナログ、ポリＵ、ポリＵアナログの各鎖長が、各々独立して１００〜６００塩基数の範囲内であるものが挙げられる。
【００１６】
（６）２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール及びリン脂質を必須構成成分として形成されるカチオン性リポソームに、鎖長が１００〜６００塩基数の範囲内にあるポリＩ及び鎖長が１００〜６００塩基数の範囲内にあるポリＣを包含する複合体を含有することを特徴とする、ＩＦＮ−λ誘導剤。
（７）肝細胞に対して、上記(4)〜(6)に記載の誘導剤を作用させる工程を含む、ＩＦＮ−λ誘導方法。
【発明の効果】
【００１７】
本発明によれば、ＩＬ２８Ｂ遺伝子の遺伝子多型のメジャーとマイナーいずれのバリアントに対してもＩＦＮ−λを十分に誘導し得るＩＦＮ−λ誘導剤を提供することができる。当該誘導剤は、ＰＥＧ化ＩＦＮ−αでは難治性であった肝炎ウイルス感染症に対して有効な抗肝炎ウイルス活性を示し、難治性肝炎ウイルス感染症の治療剤として用いることができる点で、極めて有用なものである。さらに、当該誘導剤は、肝炎ウイルス感染症以外の各種難治性ウイルス感染症に対しても有効な抗ウイルス活性を示し、各種難治性ウイルス感染症の治療剤としても用いることができる点で、極めて有用なものである。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１ａは、ＨＣＶ（1ｂ型）感染キメラマウスの血清中ＨＣＶゲノムＲＮＡ数を表す。図１ｂは、ＨＣＶ（1ａ型）感染キメラマウスの血清中ＨＣＶゲノムＲＮＡ数を表す。図１ｃは投与開始後４日目における肝臓中ＨＣＶゲノムＲＮＡ数を表す。図１ｄは、ＨＢＶ（Ｃ型）感染キメラマウスの血清中ＨＢＶゲノムＤＮＡ数を表す。図１ｅは、肝臓中ＨＢＶゲノムＤＮＡ数を表す。
【図２】図２ａは、ＨＣＶ感染ヒト肝臓キメラマウスに対する本発明の治療剤の投与と、血清又は肝臓の採取スケジュールを表す。図２ｂは、血清中ＩＦＮ−βおよびＩＦＮ−α濃度を表す。図２ｃは、肝臓中のＩＦＮＢ１遺伝子、ＩＦＮＡ２遺伝子、ＩＦＮＧ遺伝子のｍＲＮＡ量を表す。
【図３】図３ａは、ＨＢＶ感染ヒト肝臓キメラマウスに対する本発明の治療剤の投与と、血清又は肝臓の採取スケジュールを表す。図３ｂは、血清中ＩＦＮ−βおよびＩＦＮ−α濃度を表す。図３ｃは、肝臓中のＩＦＮＢ１遺伝子、ＩＦＮＡ２遺伝子、ＩＦＮＧ遺伝子のｍＲＮＡ量を表す。
【００１９】
【図４】図４ａは、ヒト肝臓キメラマウスの肝臓におけるＤＮＡマイクロアレイの結果を表す。ＨＣＶに感染しているだけで何も投与していないキメラマウス対する各実験群の発現量を表示している。図４ｂは、肝臓中のＩＬ２９遺伝子、ＩＬ２８Ａ遺伝子、ＩＬ２８Ｂ遺伝子のｍＲＮＡ量を表す。図４ｃは、肝臓中ＩＦＮ−λ量のウェスタンブロッティングの結果を表す。
【図５】図５ａ〜ｃは、組換えＩＦＮ−λで刺激したＨＣＶレプリコン細胞のＨＣＶレプリコン数および細胞数を表す。図５ｄは、ＨＣＶ感染キメラマウスの血清中ＨＣＶゲノムＲＮＡ数を表す。図５ｅは、本発明の治療剤と抗ＩＦＮ−λ２中和抗体との同時投与時の血清中ＨＣＶゲノムＲＮＡ量を表す。図５ｆは、本発明の治療剤と抗ＩＦＮ−λ２中和抗体との同時投与時の肝臓中ＨＣＶゲノムＲＮＡ量を表す。
【図６】図６ａは、ＨＣＶ感染キメラマウスの肝臓中のＩＬ２９遺伝子、ＩＬ２８Ａ遺伝子、ＩＬ２８Ｂ遺伝子のｍＲＮＡ量を表す。図６ｂは、ＨＣＶ感染キメラマウスの血清中ＨＣＶゲノムＲＮＡ数を表す。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
以下、本発明を詳細に説明する。本発明の範囲はこれらの説明に拘束されることはなく、以下の例示以外についても、本発明の趣旨を損なわない範囲で適宜変更し実施することができる。なお、本明細書において引用された全ての刊行物、例えば先行技術文献、及び公開公報、特許公報その他の特許文献は、参照として本明細書に組み込まれる。
【００２１】
１．本発明の概要
本発明者らは、肝炎ウイルスに感染させたヒト肝臓キメラマウスを用い、カチオン性リポソームやアテロコラーゲン等の薬物を細胞内に移送するのに有用な薬物担体と、二本鎖を形成し得る２種の合成ＲＮＡ（ポリＩ・ポリＣ又はポリＡ・ポリＵ等）との複合体による強力な抗ウイルス活性の作用機序を解析した。その結果、かかる複合体は、ＩＦＮ−αやＩＦＮ−βといったＩ型インターフェロン（ＩＦＮ）ではなく、III型ＩＦＮに属するＩＬ−２９(別名ＩＦＮ−λ１)、ＩＬ−２８Ａ(別名ＩＦＮ−λ２)、ＩＬ−２８Ｂ(別名ＩＦＮ−λ３)をヒト肝細胞特異的に誘導することにより、抗ウイルス活性を発揮することが示された。さらに、かかる複合体は、ＩＬ２８Ｂ遺伝子のメジャーバリアントとマイナーバリアントのいずれに対しても、ＩＦＮ−λを強く誘導することが示された。以上のことから、かかる複合体が、従来ＰＥＧ化ＩＦＮ−αでは難治性であった肝炎ウイルス感染症に対しても有効な抗肝炎ウイルス活性を示し、難治性肝炎ウイルス感染症の治療剤として用い得ることが見出された。さらに、かかる複合体が、肝炎ウイルス感染症以外の難治性の各種ウイルス感染症に対しても有効な抗ウイルス活性を示し、その治療剤として用い得ることが見出された。本発明はこのようにして完成されるに至ったものである。
【００２２】
なお、本発明において、「Ｉ」はイノシン酸、「Ｃ」はシチジル酸、「Ａ」はアデニル酸、「Ｕ」はウリジル酸を、それぞれ意味する。また、ポリＩアナログ、ポリＣアナログ、ポリＡアナログ及びポリＵアナログは、当業者には周知であるが、各々、効果の増強や安定性の向上などを目的として、核酸を構成する糖、核酸塩基又はリン酸バックボーンの全部又は一部が改変されたものを意味する。
【００２３】
２．難治性ウイルス感染症治療剤
本発明に係る難治性ウイルス感染症治療剤（「難治性ウイルス感染症治療用医薬組成物」ともいう。以下、総称して「本発明の治療剤」という。）は、前述のとおり、薬物を細胞内に移送するのに有用な薬物担体（以下、単に「薬物担体」という。）に、ポリＩ若しくはポリＩアナログ及びポリＣ若しくはポリＣアナログ、又は、ポリＡ若しくはポリＡアナログ及びポリＵ若しくはポリＵアナログを包含する複合体（以下、「本複合体」ということがある。）を含有することを特徴とするものである。
本発明の治療剤において、治療対象となる難治性ウイルス感染症としては、当該ウイルス感染により直接発症する炎症、症状及び疾患に限らず、その後これら炎症に起因して発症する各種症状及び疾患等も含まれる。難治性ウイルス感染症としては、限定はされないが、例えば、肝炎ウイルス感染症等が好ましく挙げられ、具体的には、肝炎に包含される各種炎症、症状、疾患や、さらには肝硬変及び各種肝癌が挙げられる。ここで、肝炎ウイルスとしては、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）及びＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）等が挙げられ、詳しくは、ＨＣＶの遺伝子型としては１ａ型及び１ｂ型が、ＨＢＶの遺伝子型としてはＣ型が、代表的なものとして挙げられる。
【００２４】
本発明に用いられる「薬物担体」としては、医薬上許容され、合成ＲＮＡを包含することができ、包含された合成ＲＮＡを細胞内に移送することができるものであれば、特に限定されない。かかる薬物担体として、例えば、カチオン性リポソーム、アテロコラーゲン、ナノ粒子を挙げることができる。
具体的には、当該カチオン性リポソームとして、例えば、オリゴフェクトアミン（登録商標）、リポフェクチン（登録商標）、リポフェクトアミン（登録商標）、リポフェクトアミン２０００（登録商標）、リポフェクトエース（登録商標）、ＤＭＲＩＥ−Ｃ（登録商標）、ＧｅｎｅＳｉｌｅｎｃｅｒ（登録商標）、ＴｒａｎｓＭｅｓｓｅｎｇｅｒ（登録商標）、ＴｒａｎｓＩＴ ＴＫＯ（登録商標）や、国際公開第９４／１９３１４号公報に開示されている薬物担体、即ち、以下の一般式[Ｉ]で表される化合物［例えば、２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール（以下、「化合物Ｘ」という。）、３−Ｏ−（４−ジメチルアミノブタノイル）-１，２−Ｏ−ジオレイルグリセロール、３−Ｏ−（２−ジメチルアミノエチル）カルバモイル-１，２−Ｏ−ジオレイルグリセロール及び３−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，２−Ｏ−ジオレイルグリセロール等］とリン脂質とを必須構成成分として形成される薬物担体（以下、「本グリセロール担体」という。）を挙げることができる。
【００２５】
【化４】
〔式[Ｉ]中、Ｒ１、Ｒ２は、異なって、ＯＹ、又は、−Ａ−(ＣＨ２)ｎ−Ｅを表す。ｎは０〜４の整数を表す。ここで、Ｅは、ピロリジノ、ピペリジノ、置換若しくは無置換のピペラジノ、モルホリノ、置換若しくは無置換のグアニジノ、又は下記式：
【００２６】
【化５】
（式中、Ｒ3、Ｒ4は、同一又は異なって、水素、炭素数１〜４の低級アルキル、炭素数１〜４のヒドロキシ低級アルキル、又はモノ若しくはジ低級アルキルアミノアルキル（炭素数２〜８）を表す。）で示される基を表し、Ａは、下記式：
【００２７】
【化６】
で示されるいずれかの基((i))〜(vii)で示されるいずれかの基）を表す。また、Ｒ、Ｙは、同一又は異なって、炭素数１０〜３０の飽和若しくは不飽和の脂肪族炭化水素基、又は炭素数１０〜３０の飽和若しくは不飽和の脂肪酸残基を表す。〕
【００２８】
本発明において好ましいカチオン性リポソームとしては、化合物Ｘとリン脂質とを必須構成成分として形成される薬物担体（以下、「本グリセロール担体Ｘ」という。）を挙げることができる。
ポリＩアナログ、ポリＣアナログ、ポリＡアナログ、ポリＵアナログは、もとの核酸（例えばポリＩアナログならポリＩ）の機能を著しく損なわないものであれば特に限定されないが、具体例としては、ポリ（７−デアザイノシン酸）、ポリ（２’−アジドイノシン酸）、ポリ（シチジン−５’−チオリン酸）、ポリ（１−ビニルシチジル酸）、ポリ（シチジル酸、ウリジル酸）コポリマー、ポリ（シチジル酸、４−チオウリジル酸）コポリマー、ポリ（アデニル酸、ウリジル酸）コポリマーを挙げることができる。
【００２９】
ポリＩ、ポリＩアナログ、ポリＣ、ポリＣアナログ、ポリＡ、ポリＡアナログ、ポリＵ、及びポリＵアナログの各鎖長は、特に限定されないが、各々独立して、５０〜２，０００塩基数の範囲内にあるものが適当であり、１００〜６００塩基数の範囲内にあるものが好ましく、２００〜５００塩基数の範囲内にあるものがより好ましい。５０塩基数未満でも、また２，０００塩基数より長くても本発明の効果を奏し得るが、場合により、５０塩基数未満では有効性に問題が生じるおそれがあり、２，０００塩基数より長いと毒性が生じるおそれがある。
なお、ポリＩやポリＣ等の合成ＲＮＡは、通常様々な鎖長からなる一定の分布をもって存在するので、前記各鎖長は最大分布の塩基数を意味する。
【００３０】
本グリセロール担体中のリン脂質としては、医薬上許容されるリン脂質であれば特に限定されないが、具体例としては、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、スフィンゴミエリン、レシチン等を挙げることができる。また、水素添加されたリン脂質も挙げることができる。好ましいリン脂質としては、卵黄ホスファチジルコリン、卵黄レシチン、大豆レシチン、卵黄ホスファチドを挙げることができる。これらの１種又は２種以上のリン脂質を用いることができる。なお、本グリセロール担体Ｘについても上記と同様のリン脂質を挙げることができる。本グリセロール担体Ｘにおける好ましいリン脂質についても同様に、卵黄ホスファチジルコリン、卵黄レシチン、大豆レシチン、卵黄ホスファチドを挙げることができる。同様にこれらの１種又は２種以上のリン脂質を用いることができる。
【００３１】
本発明の治療剤の好ましい態様としては、リン脂質がレシチンである本グリセロール担体Ｘに、各合成ＲＮＡの鎖長が１００〜６００塩基数（好ましくは２００〜５００塩基数）の範囲内にある、ポリＩ若しくはポリＩアナログ及びポリＣ若しくはポリＣアナログを包含する複合体、又はリン脂質がレシチンである本グリセロール担体Ｘに、各合成ＲＮＡの鎖長が１００〜６００塩基数（好ましくは２００〜５００塩基数）の範囲内にある、ポリＡ若しくはポリＡアナログ及びポリＵ若しくはポリＵアナログを包含する複合体を含有するものを挙げることができる。特に好ましい態様としては、リン脂質がレシチンである本グリセロール担体Ｘに、各合成ＲＮＡの鎖長が２００〜５００塩基数の範囲内にある、ポリＩ及びポリＣを包含する複合体を含有するものを挙げることができる。
【００３２】
本複合体中における薬物担体とポリＩ及びポリＣ等の合成ＲＮＡとの構成比率は、用いる薬物担体や合成ＲＮＡの種類や鎖長、ウイルスの種類や増殖程度等によって異なるが、薬物担体１０重量部に対して、合成ＲＮＡ ０．０５〜１０重量部が適当であり、０．１〜４重量部が好ましく、０．３〜２重量部がより好ましい。
本グリセロール担体Ｘ中における化合物Ｘとリン脂質との構成比率は、合成ＲＮＡの種類や鎖長、使用量、またリン脂質の種類等によって異なるが、化合物Ｘ １重量部に対して、リン脂質０．１〜１０重量部が適当であり、０．５〜５重量部が好ましく、１〜２重量部がより好ましい。
【００３３】
３．ＩＮＦ−λ誘導剤
本発明に係るＩＮＦ−λ誘導剤（以下、「本発明の誘導剤」という。）は、前述のとおり、薬物を細胞内に移送するのに有用な薬物担体（以下、単に「薬物担体」という。）に、ポリＩ若しくはポリＩアナログとポリＣ若しくはポリＣアナログとを包含する複合体、又は、ポリＡ若しくはポリＡアナログとポリＵ若しくはポリＵアナログとを包含する複合体を含有することを特徴とするものである。
ここで、本発明の誘導剤の各構成成分等については、上記２.項に記載の本発明の治療剤に関する説明が全て適用できる。
【００３４】
４．本発明の治療剤及び誘導剤の使用形態
本発明の治療剤及び誘導剤は、例えば、液剤（注射剤、点滴剤等）やその凍結乾燥製剤の形態をとることができる。
本発明の治療剤及び誘導剤は、医薬上許容される任意の添加剤、例えば、乳化補助剤、安定化剤、等張化剤、ｐＨ調整剤を適当量含有していてもよい。具体的には、炭素数６〜２２の脂肪酸（例、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、アラキドン酸、ドコサヘキサエン酸）やその医薬上許容される塩（例、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩）、アルブミン、デキストラン等の乳化補助剤、コレステロール、ホスファチジン酸等の安定化剤、塩化ナトリウム、グルコース、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース等の等張化剤、塩酸、硫酸、リン酸、酢酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、トリエタノールアミン等のｐＨ調整剤などを挙げることができる。
【００３５】
本発明の治療剤及び誘導剤は、薬物担体ないしその原料化合物と合成ＲＮＡとを、常法により混合、攪拌、分散等を行うことにより製造することができる。薬物担体がカチオン性リポソームである本発明の治療剤及び誘導剤の場合には、例えば、リポソームの一般的な製法と同様な方法により製造することができる。具体的には、カチオン性リポソーム又はその原料化合物（例えば、化合物Ｘとリン脂質）と、例えば二本鎖ポリＩ・ポリＣないしは一本鎖ポリＩと一本鎖ポリＣとを、水溶液中で適当な分散機により分散処理することにより製造することができる。水溶液としては、注射用水、注射用蒸留水、生理食塩水等の電解質液、ブドウ糖液等を挙げることができる。適当な分散機としては、例えば、ホモミキサー、ホモジナイザー、超音波分散器、超音波ホモジナイザー、高圧乳化分散機、マイクロフルイダイザー（商品名）、ナノマイザー（商品名）、アルティマイザー（商品名）、デビー（商品名）、マントン−ガウリン型高圧ホモジナイザーを挙げることができる。また、当該分散処理は、粗分散を経るなど数段階に分けて行うこともできる。
薬物担体は、市販のものをその指示に従って用いることができ、また適当に加工して用いることもできる。
【００３６】
カチオン性リポソームの原料化合物から本発明の治療剤及び誘導剤を製造する場合には、当該原料化合物に、例えば二本鎖ポリＩ・ポリＣないしは一本鎖ポリＩと一本鎖ポリＣとを加え、一緒に分散処理して製造することができるほか、当該原料化合物をまず分散処理してカチオン性リポソームを形成し、続いて例えば二本鎖ポリＩ・ポリＣないしは一本鎖ポリＩと一本鎖ポリＣとを加え再度分散処理して製造することもできる。
医薬上（薬理学上）許容される任意の添加剤は、分散前でも分散後でも適当な工程で添加することができる。
本発明の治療剤及び誘導剤の凍結乾燥製剤は、常法により製造することができる。例えば、液状である本発明の治療剤及び誘導剤を滅菌し、所定量をバイアル瓶に分注する。次いで、約−４０℃〜−２０℃の条件で予備凍結を約２時間程度行い、約０℃〜１０℃で減圧下に一次乾燥を行い、さらに約１５℃〜２５℃で減圧下に二次乾燥して凍結乾燥する。その後、一般的にはバイアル内部を窒素ガスで置換し、打栓して本発明の治療剤及び誘導剤の凍結乾燥製剤を得ることができる。
【００３７】
本発明の治療剤及び誘導剤の凍結乾燥製剤は、一般には任意の適当な溶液（再溶解液）の添加によって再溶解し使用することができる。このような再溶解液としては、注射用水、生理食塩水等の電解質液、ブドウ糖液、その他一般輸液を挙げることができる。この再溶解液の液量は、用途等によって異なり特に制限されないが、凍結乾燥前の液量の０．５〜２倍量、又は５００ｍＬ以下が適当である。
本発明の治療剤は、限定はされず、難治性のウイルス感染症を引き起こし得る各種ウイルス、例えば、Ａ型、Ｂ型及びＣ型等の肝炎ウイルスや、インフルエンザウイルス、ＲＳウイルスなどへの使用が考えられる。本発明の治療剤による抗ウイルス効果は、投与期間中を通して持続した。後述する実施例から明らかな通り、本発明の治療剤は、Ｉ型ＩＦＮを初回投与後に単回だけ誘導するのに対して、ＩＦＮ−λは投与期間中、投与毎に何度も繰返し誘導した。さらに、本発明の治療剤は、ＩＬ２８Ｂ遺伝子のメジャーバリアントとマイナーバリアントのいずれに対しても、ＩＦＮ−λを強く誘導した。これらのことから、本発明の治療剤によれば、ＩＬ２８Ｂ遺伝子のマイナーバリアントにおけるＰＥＧ化ＩＦＮ−α不応答問題も解決されることが期待される。
【００３８】
本発明の治療剤及び誘導剤は、ヒトを含む動物に対して有効であり、特に肝細胞に対して作用させる場合に有効である。
本発明の治療剤及び誘導剤の投与方法としては、例えば、静脈内投与、皮下投与、肝動脈内投与、局所投与（例、経粘膜投与、経鼻投与、吸入投与）を挙げることができる。
本発明の治療剤及び誘導剤の投与量は、用いる薬物担体、合成ＲＮＡの種類や組成及び鎖長、ウイルスの種類や進行状況、患者の年齢、動物種差、投与経路、投与方法等によって異なるが、ポリＩ及びポリＣ等の合成ＲＮＡの投与量として、１回当たり通常１μｇ〜５０ｍｇ／ヒトが適当であり、１０μｇ〜１０ｍｇ／ヒトが好ましい。本発明の治療剤及び誘導剤は、１日１〜３回を、連日、隔日、１週毎又は２週毎等に、１ショット投与や点滴投与等することができる。
【００３９】
本発明においては、前述した本発明の治療剤を難治性ウイルス感染症の患者に投与することを含む難治性ウイルス感染症の治療方法や、難治性ウイルス感染症を治療するための本発明の治療剤の使用や、難治性ウイルス感染症を治療するための薬剤を製造するための本複合体の使用についても提供することができる。本発明の治療剤は、難治性ウイルス感染症の予防剤（予防用医薬組成物）としても用いることができる。
また本発明においては、肝細胞に本発明の誘導剤を作用させることを含む、ＩＮＦ−λ誘導方法や、肝細胞からＩＮＦ−λ誘導するための本発明の誘導剤の使用や、ＩＮＦ−λ誘導剤を製造するための複合体の使用についても提供することができる。
【００４０】
以下に、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例１】
【００４１】
難治性肝炎ウイルス感染症治療剤（ＩＮＦ−λ誘導剤）の製造
前記化合物Ｘ（２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール）１２４ｇ、精製卵黄レシチン２００ｇ、及びマルトース２ｋｇを容器にとり、これに注射用水１０．２Ｌを加え攪拌混合し、ホモジナイザーで粗乳化した後、高圧乳化分散機（マイクロフルイダイザー（登録商標））で微細乳化した。これに約３００塩基数のポリＩと約３００塩基数のポリＣとを溶解した注射用水（全量８Ｌ）を徐々に添加し、再度前記高圧乳化分散機で分散し、この分散液を０．２μｍのメンブランフィルターでろ過滅菌して、本発明の治療剤を得た。次いで、かかる治療剤をバイアル瓶に５ｍＬずつ充填した後、常法に従って凍結乾燥した。
【００４２】
抗肝炎ウイルス効果の確認
（１）方法
ジェノタイプ１ｂ型ＨＣＶ、ジェノタイプ１ａ型ＨＣＶ、またはジェノタイプＣ型ＨＢＶを感染させたヒト肝キメラマウス（フェニックスバイオ社製、以下同じ。）を用いた。試験液（投与液）としては、上述の凍結乾燥した本発明の治療剤に４．６ｍＬの注射用水を加え再構築し、これに５％ブドウ糖液を加えて適宜希釈したものを用いた。試験液は上記キメラマウスの尾静脈または眼窩静脈叢から投与した。対照薬としてＰＥＧ化ＩＦＮ−α（ペガシス（登録商標）、中外製薬社製、以下同じ。）を皮下投与した。また別の対照薬としてエンテカビル（ＥＴＶ）（バラクルード（登録商標）、ブリストルマイヤーズ社製、以下同じ。）を経口投与した。適時、血清または肝臓を採取し、その中に含まれるＨＣＶゲノムＲＮＡ量またはＨＢＶゲノムＤＮＡ量を、それぞれ定量ＲＴ−ＰＣＲまたは定量ＰＣＲで測定した。
【００４３】
（２）結果
上記測定の結果を図１に示す。
本発明の治療剤（０．１ｍｇ／ｋｇ×１回／日または０．１ｍｇ／ｋｇ×３回／日）は、血清中のジェノタイプ１ｂ型ＨＣＶゲノムＲＮＡ量を用量依存的に減少させた（図１ａ）。その効果は臨床用量２０倍のＰＥＧ化ＩＦＮ−α(３０μｇ／ｋｇ×２回／週)よりも強かった。本発明の治療剤（０．０１〜０．１ｍｇ／ｋｇ×１回／日）は、血清中のジェノタイプ１ａ型ＨＣＶゲノムＲＮＡ量を用量依存的に減少させた（図１ｂ）。その効果は臨床用量２０倍のＰＥＧ化ＩＦＮ−α(３０μｇ／ｋｇ×２回／週)よりも強かった。また、本発明の治療剤（０．１ｍｇ／ｋｇ×１回／日）は、肝臓中のＨＣＶゲノムＲＮＡ量を減少させた（図１ｃ）。
本発明の治療剤（０．１ｍｇ／ｋｇ×１回／日）は、血清中のジェノタイプＣ型ＨＢＶゲノムＤＮＡ量を減少させた（図１ｄ）。その効果は臨床用量２０倍のＰＥＧ化ＩＦＮ−α(３０μｇ／ｋｇ×２回／週)または臨床用量のＥＴＶ（０．０１７ｍｇ／ｋｇ×１回／日）よりも強かった。また、本発明の治療剤（０．１ｍｇ／ｋｇ×１回／日）は、肝臓中のＨＢＶゲノムＤＮＡ量を減少させた（図１ｅ）
【実施例２】
【００４４】
インターフェロン（ＩＮＦ）の誘導効果の確認
１．Ｉ型ＩＦＮおよびII型ＩＦＮの誘導
（１）方法
ジェノタイプ１ｂ型ＨＣＶ、ジェノタイプ１ａ型ＨＣＶ、またはジェノタイプＣ型ＨＢＶを感染させたヒト肝キメラマウスを用いた。試験液（投与液）としては、実施例１で製造した凍結乾燥した本発明の治療剤に４．６ｍＬの注射用水を加え再構築し、これに５％ブドウ糖液を加えて適宜希釈したものを用いた。試験液は上記キメラマウスの尾静脈または眼窩静脈叢から投与した。図２ａまたは図３ａに示す投与スケジュールに従って、血清または肝臓を採取した。血清中のＩＦＮ−βまたはＩＦＮ−αはELISAで定量した。肝臓中のＩＦＮＢ１、ＩＦＮＡ２及びＩＦＮＧ遺伝子発現量は定量ＲＴ−ＰＣＲで測定した。
【００４５】
（２）結果
上記測定の結果を図２及び図３に示す。
本発明の治療剤（０．１ｍｇ／ｋｇ×１回／日）は、初回の投与後では血清中のヒトＩＦＮ−βの濃度を上昇させたが、その量はわずかであった。また、初回投与時に見られた血清中ヒトＩＦＮ−β濃度の上昇は、５回目の投与後以降では消失した（図２ｂ、図３ｂ）。血清中ヒトＩＦＮ−αは、全投与期間を通じて検出されなかった（図２ｂ、図３ｂ）。なお、本発明の治療剤の投与時の血清中Ｉ型ＩＦＮとは対照的に、ＰＥＧ化ＩＦＮ−α(３０μｇ／ｋｇ×２回／週)を投与したヒト肝キメラマウスの血清中ＩＦＮ−αは非常に高い濃度が維持されていた（図２ｂ）。
本発明の治療剤（０．１ｍｇ／ｋｇ×１回／日）は、初回の投与後では肝臓中のＩＦＮＢ１遺伝子の発現を誘導したが、その量はわずかであった。また、初回投与時に見られた肝臓中のＩＦＮＢ１遺伝子の発現誘導は、５回目の投与後以降では消失した（図２ｃ、図３ｃ）。肝臓中のＩＦＮＡ２、ＩＦＮＧ遺伝子の発現誘導は、全投与期間を通じて検出されなかった（図２ｃ、図３ｃ）。
【００４６】
２．III型ＩＦＮ（ＩＦＮ−λ）誘導
（１）方法
ジェノタイプ１ｂ型ＨＣＶを感染させたヒト肝キメラマウスを用いた。試験液（投与液）としては、実施例１で製造した凍結乾燥した本発明の治療剤に４．６ｍＬの注射用水を加え再構築し、これに５％ブドウ糖液を加えて適宜希釈したものを用いた。試験液は上記キメラマウスの尾静脈または眼窩静脈叢から投与した。適時、肝臓を採取し、ＩＦＮ発現量をＤＮＡマイクロアレイにより解析した。また、ＩＦＮ−λ遺伝子発現量は定量ＲＴ−ＰＣＲで測定した。肝臓中のＩＦＮ−λ量はウェスタンブロッティングで測定した。
【００４７】
（２）結果
上記測定の結果を図４に示す。
本発明の治療剤（０．１ｍｇ／ｋｇ×１回／日）によって誘導される抗ウイルス活性と発現挙動が相関する遺伝子をＤＮＡマイクロアレイにより探索したところ、ＩＬ２９遺伝子（ＩＬ−２９（別名：ＩＦＮ−λ１）をコード）、ＩＬ２８Ａ遺伝子（ＩＬ−２８Ａ（別名：ＩＦＮ−λ２）をコード）、ＩＬ２８Ｂ遺伝子（ＩＬ−２８Ｂ（別名：ＩＦＮ−λ３）をコード）が同定された（図４ａ）。これら３つのＩＦＮ−λ遺伝子は、Ｉ型ＩＦＮ遺伝子と異なり、５回目の投与後においても繰返し誘導された（図４ｂ）。また、本発明の治療剤の投与期間を通して、ＩＦＮ−λが肝臓中存在していることが示された（図４ｃ）。
【実施例３】
【００４８】
ＩＦＮ−λを介する抗ウイルス効果の確認
（１）方法
培養ＨＣＶレプリコン細胞に組換えＩＦＮ−λを添加し、ＨＣＶレプリコン数と細胞数を測定した。ジェノタイプ１ｂ型ＨＣＶを感染させたヒト肝キメラマウスに、組換えＩＦＮ−λを投与（１ｍｇ／ｋｇ×１回／日）し、適時、血清を採取して、その中に含まれるＨＣＶゲノムＲＮＡ量を定量ＲＴ−ＰＣＲで測定した。また、ジェノタイプ１ｂ型ＨＣＶを感染させたヒト肝キメラマウスに、実施例１で製造した本発明の治療剤（０．１ｍｇ／ｋｇ×１回／日）を抗ＩＦＮ−λ２中和抗体またはコントロール抗体（１ｍｇ／ｋｇ×１回／日）と共に投与し、３日目の血清と肝臓中のＨＣＶゲノムＲＮＡ量を定量ＲＴ−ＰＣＲで測定した。
【００４９】
（２）結果
上記測定の結果を図５に示す。
組換えＩＦＮ−λは、濃度依存的にＨＣＶレプリコンの複製を抑制した（図５ａ〜ｃ）。また、組換えＩＦＮ−λは、血清中のＨＣＶゲノムＲＮＡ量を減少させた（図５ｄ）。さらに、抗ＩＦＮ−λ２中和抗体は、本発明の治療剤による血清中および肝臓中でのＨＣＶゲノムＲＮＡ量の減少を減弱させた（図５ｅ〜ｆ）。
【実施例４】
【００５０】
ＩＬ２８Ｂ遺伝子の各バリアントに対するＩＦＮ−λ誘導効果と抗ウイルス効果の確認
（１）方法
ＩＬ２８Ｂ遺伝子のメジャーバリアントまたはマイナーバリアントのドナーのヒト肝細胞を移植したヒト肝キメラマウスを、ジェノタイプ１ｂ型ＨＣＶを感染させた。試験液（投与液）としては、実施例１で製造した凍結乾燥した本発明の治療剤に４．６ｍＬの注射用水を加え再構築し、これに５％ブドウ糖液を加えて適宜希釈したものを用いた。試験液は上記キメラマウスの尾静脈または眼窩静脈叢から投与した。適時、肝臓または血清を採取し、肝臓中のＩＦＮ−λ遺伝子発現量または血清中のＨＣＶゲノムＲＮＡ量を定量ＲＴ−ＰＣＲで測定した。
【００５１】
（２）結果
上記測定の結果を図６に示す。
本発明の治療剤（０．１ｍｇ／ｋｇ×１回／日）は、ＩＬ２８Ｂ遺伝子のメジャーバリアントとマイナーバリアントのいずれのドナー肝細胞を移植して作製したヒト肝臓キメラマウスに対しても、ＩＬ２９遺伝子、ＩＬ２８Ａ遺伝子、ＩＬ２８Ｂ遺伝子の３つのＩＦＮ−λ遺伝子を、投与期間中を通じて繰返し誘導した（図６ａ）。また、本発明の治療剤（０．１ｍｇ／ｋｇ×１回／日）は、ＩＬ２８Ｂ遺伝子のメジャーバリアントとマイナーバリアントのいずれのドナー肝細胞を移植して作製したヒト肝臓キメラマウスに対しても、血清中ＨＣＶゲノムＲＮＡ量を減少させた。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、難治性ウイルス感染症治療剤及びインターフェロン−λ誘導剤等に関する。
【背景技術】
【０００２】
ポリイノシン酸（ポリＩ）・ポリシチジル酸（ポリＣ）やポリアデニル酸（ポリＡ）・ポリウリジル酸（ポリＵ）に代表される合成ＲＮＡは、自然免疫を誘導する作用が知られている。例えば、自然免疫誘導作用の指標の一つとして、Ｉ型インターフェロン（以下、「Ｉ型ＩＦＮ」という。）に属するＩＦＮ−αやＩＦＮ−βの誘導作用が挙げられる。ポリＩ・ポリＣやポリＡ・ポリＵに代表される合成ＲＮＡは、マウスやウサギ等の生体内に投与したり、ヒト細胞の単層培養系に添加したりすると、Ｉ型ＩＦＮを誘導し、かかるＩ型ＩＦＮによりウイルスの増殖を抑制することが知られている。しかしながら、合成ＲＮＡ等の核酸物質はアニオン性であり、同じくアニオン性物質である細胞膜とは静電的に反発するため、合成ＲＮＡ単独での細胞内取込み効率は著しく悪い。そこで、合成ＲＮＡ単独ではなく、合成ＲＮＡと、いわゆるカチオン性リポソームとで複合体を形成することで、細胞内取込み効率を改善し、この複合体により肝炎ウイルスによる感染症を治療することが提案されている（例えば、特許文献１参照。）。かかる複合体は、マウス生体に投与されると肝臓に特異的に集積し、そこでＩ型ＩＦＮを誘導して、その結果、血中ＩＦＮは、長時間に渡り臨床上の有効性が十分に期待されるレベルとなることから、ウイルス性肝炎の治療効果が期待された。しかしながら、特許文献１には、当該複合体のＩ型ＩＦＮ誘導を介した作用のみ開示されているに過ぎず、ウイルス性肝炎の治療効果については開示されていない。
【０００３】
当時は、ウイルス性肝炎モデルの利用に限界があり、かかる複合体の抗肝炎ウイルス活性については未確認であった。例えば、Ｃ型肝炎ウイルス（以下、「ＨＣＶ」という。）やＢ型肝炎ウイルス（以下、「ＨＢＶ」という。）は、ヒトとチンパンジーの肝細胞にしか感染しない性質を持つため、かかる複合体がどの程度の抗ＨＣＶ活性や抗ＨＢＶ活性を有しているのかを、ＨＣＶ又はＨＢＶに感染した動物モデルで証明することは事実上不可能であった。
しかしその後、ＨＣＶ又はＨＢＶに感染する特性を有するヒト正常肝細胞を肝臓に持つキメラマウスが開発された。ＨＣＶ又はＨＢＶに感染させたヒト肝臓キメラマウスに、かかる複合体を投与したところ、かかる複合体が抗肝炎ウイルス活性を有することが実際に確認された（特許文献２参照。）。かかる複合体の抗肝炎ウイルス活性は、現在抗ＨＣＶ薬として最も多く使われているポリエチレングリコール（ＰＥＧ）化インターフェロン−α（以下、「ＰＥＧ化ＩＦＮ−α」という。）や、現在抗ＨＢＶ薬として最も治療効果が高いとされているヌクレオシド系逆転写阻害剤エンテカビル（以下、「ＥＴＶ」という。）よりも強い抗ＨＣＶ活性又は抗ＨＢＶ活性を示した。さらに、特許文献２では、かかる複合体が、Ｉ型ＩＦＮの誘導とは関係のない新たな抗ウイルスメカニズムを誘導することが示されているが、その新たな抗ウイルスメカニズムについては、これまで具体的には明らかにされていなかった。
【０００４】
２００９年の８月以降、複数の研究グループにより、肝炎ウイルス感染症の治療抵抗性（いわゆる難治性肝炎ウイルス感染症）の指標として注目されているＩＬ２８Ｂ遺伝子（ＩＬ−２８Ｂ（別名：ＩＦＮ−λ３）をコードする遺伝子）の遺伝子多型が、ＨＣＶ慢性感染に対する治療法であるＰＥＧ化ＩＦＮ−αとリバビリンとの併用療法の奏効率と強く関っていることが明らかにされた。ＩＬ２８Ｂ遺伝子近傍のＳＮＰｓとしてｒｓ８０９９９１７にＴアリル又はｒｓ１２９７９８６０にＣアリル等を有するバリアント（以下、「メジャーバリアント」という。）に対しては、ＰＥＧ化ＩＦＮ−αとリバビリンとの併用療法の奏効が期待できるが、ＩＬ２８Ｂ遺伝子近傍のＳＮＰｓとしてｒｓ８０９９９１７にＧアリル又はｒｓ１２９７９８６０にＴアリル等を有するバリアント（以下、「マイナーバリアント」という。）に対しては奏効が期待できない。これは、ＩＬ２８Ｂ遺伝子のマイナーバリアントではＩＦＮ−λの誘導量がメジャーバリアントよりも低いことに起因していると考えられている。現在のところ、ＩＬ２８Ｂ遺伝子のマイナーバリアントに対するＰＥＧ化ＩＦＮ−αの不応答問題を解決する方法は存在しない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第９９／４８５３１号公報
【特許文献２】国際公開第２００８／１１４７８７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
このような状況下において、前記ＩＬ２８Ｂ遺伝子の遺伝子多型のメジャーとマイナーいずれのバリアントに対してもＩＦＮ−λを十分に誘導し、ＰＥＧ化ＩＦＮ−αでは難治性であった肝炎ウイルス感染症に対して有効な抗肝炎ウイルス活性を示す、難治性肝炎ウイルス感染症の治療剤の開発が望まれていた。さらには、肝炎ウイルス感染症以外の難治性の各種ウイルス感染症に対しても有効な抗ウイルス活性を示す、難治性ウイルス感染症の治療剤の開発も望まれていた。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、上記状況を考慮してなされたもので、以下に示す、難治性ウイルス感染症治療剤、ＩＦＮ−λ誘導剤、ＩＦＮ−λ誘導方法等を提供するものである。
【０００８】
（１）薬物を細胞内に移送するのに有用な薬物担体に、ポリＩ若しくはポリＩアナログ及びポリＣ若しくはポリＣアナログを包含する複合体、又は薬物を細胞内に移送するのに有用な薬物担体に、ポリＡ若しくはポリＡアナログ及びポリＵ若しくはポリＵアナログを包含する複合体を含有することを特徴とする、難治性ウイルス感染症治療剤。
上記(1)の治療剤において、薬物担体としては、例えば、カチオン性リポソーム、アテロコラーゲン及びナノ粒子からなる群より選ばれる少なくとも１種が挙げられる。ここで、カチオン性リポソームとしては、例えば、下記一般式[Ｉ]で示される化合物及びリン脂質を必須構成成分として形成されるものが挙げられる。
【０００９】
【化１】
〔式[Ｉ]中、Ｒ１、Ｒ２は、異なって、ＯＹ、又は、−Ａ−(ＣＨ２)ｎ−Ｅを表す。ｎは０〜４の整数を表す。ここで、Ｅは、ピロリジノ、ピペリジノ、置換若しくは無置換のピペラジノ、モルホリノ、置換若しくは無置換のグアニジノ、又は下記式：
【００１０】
【化２】
（式中、Ｒ3、Ｒ4は、同一又は異なって、水素、炭素数１〜４の低級アルキル、炭素数１〜４のヒドロキシ低級アルキル、又はモノ若しくはジ低級アルキルアミノアルキル（炭素数２〜８）を表す。）で示される基を表し、Ａは、下記式：
【００１１】
【化３】
で示されるいずれかの基を表す。また、Ｒ、Ｙは、同一又は異なって、炭素数１０〜３０の飽和若しくは不飽和の脂肪族炭化水素基、又は炭素数１０〜３０の飽和若しくは不飽和の脂肪酸残基を表す。〕
【００１２】
上記一般式[Ｉ]で表される化合物の具体例としては、例えば、２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール、３−Ｏ−（４−ジメチルアミノブタノイル）-１，２−Ｏ−ジオレイルグリセロール、３−Ｏ−（２−ジメチルアミノエチル）カルバモイル-１，２−Ｏ−ジオレイルグリセロール、又は３−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，２−Ｏ−ジオレイルグリセロールが挙げられる。
【００１３】
（２）２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール及びリン脂質を必須構成成分として形成されるカチオン性リポソームに、ポリＩ若しくはポリＩアナログ及びポリＣ若しくはポリＣアナログを包含する複合体、又は２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール及びリン脂質を必須構成成分として形成されるカチオン性リポソームに、ポリＡ若しくはポリＡアナログ及びポリＵ若しくはポリＵアナログを包含する複合体を含有することを特徴とする、難治性ウイルス感染症治療剤。
上記(1)及び(2)の治療剤は、例えば、ポリＩ、ポリＩアナログ、ポリＣ、ポリＣアナログ、ポリＡ、ポリＡアナログ、ポリＵ、ポリＵアナログの各鎖長が、各々独立して１００〜６００塩基数の範囲内であるものが挙げられる。
【００１４】
（３）２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール及びリン脂質を必須構成成分として形成されるカチオン性リポソームに、鎖長が１００〜６００塩基数の範囲内にあるポリＩ及び鎖長が１００〜６００塩基数の範囲内にあるポリＣを包含する複合体を含有することを特徴とする、難治性ウイルス感染症治療剤。
上記(1)〜(3)の治療剤において、リン脂質としては、例えばレシチンが挙げられる。
上記(1)〜(3)の治療剤において、ウイルスとしては、例えば肝炎ウイルス、具体的にはＣ型肝炎ウイルス又はＢ型肝炎ウイルスが挙げられる。Ｃ型肝炎ウイルスの遺伝子型としては、例えば１ａ型又は１ｂ型が挙げられ、Ｂ型肝炎ウイルスの遺伝子型としては、例えばＣ型が挙げられる。
【００１５】
（４）薬物を細胞内に移送するのに有用な薬物担体に、ポリＩ若しくはポリＩアナログ及びポリＣ若しくはポリＣアナログを包含する複合体、又は薬物を細胞内に移送するのに有用な薬物担体に、ポリＡ若しくはポリＡアナログ及びポリＵ若しくはポリＵアナログを包含する複合体を含有することを特徴とする、ＩＦＮ−λ誘導剤。
（５）２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール及びリン脂質を必須構成成分として形成されるカチオン性リポソームに、ポリＩ若しくはポリＩアナログ及びポリＣ若しくはポリＣアナログを包含する複合体、又は２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール及びリン脂質を必須構成成分として形成されるカチオン性リポソームに、ポリＡ若しくはポリＡアナログ及びポリＵ若しくはポリＵアナログを包含する複合体を含有することを特徴とする、ＩＦＮ−λ誘導剤。
上記(4)及び(5)の誘導剤は、例えば、ポリＩ、ポリＩアナログ、ポリＣ、ポリＣアナログ、ポリＡ、ポリＡアナログ、ポリＵ、ポリＵアナログの各鎖長が、各々独立して１００〜６００塩基数の範囲内であるものが挙げられる。
【００１６】
（６）２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール及びリン脂質を必須構成成分として形成されるカチオン性リポソームに、鎖長が１００〜６００塩基数の範囲内にあるポリＩ及び鎖長が１００〜６００塩基数の範囲内にあるポリＣを包含する複合体を含有することを特徴とする、ＩＦＮ−λ誘導剤。
（７）肝細胞に対して、上記(4)〜(6)に記載の誘導剤を作用させる工程を含む、ＩＦＮ−λ誘導方法。
【発明の効果】
【００１７】
本発明によれば、ＩＬ２８Ｂ遺伝子の遺伝子多型のメジャーとマイナーいずれのバリアントに対してもＩＦＮ−λを十分に誘導し得るＩＦＮ−λ誘導剤を提供することができる。当該誘導剤は、ＰＥＧ化ＩＦＮ−αでは難治性であった肝炎ウイルス感染症に対して有効な抗肝炎ウイルス活性を示し、難治性肝炎ウイルス感染症の治療剤として用いることができる点で、極めて有用なものである。さらに、当該誘導剤は、肝炎ウイルス感染症以外の各種難治性ウイルス感染症に対しても有効な抗ウイルス活性を示し、各種難治性ウイルス感染症の治療剤としても用いることができる点で、極めて有用なものである。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１ａは、ＨＣＶ（1ｂ型）感染キメラマウスの血清中ＨＣＶゲノムＲＮＡ数を表す。図１ｂは、ＨＣＶ（1ａ型）感染キメラマウスの血清中ＨＣＶゲノムＲＮＡ数を表す。図１ｃは投与開始後４日目における肝臓中ＨＣＶゲノムＲＮＡ数を表す。図１ｄは、ＨＢＶ（Ｃ型）感染キメラマウスの血清中ＨＢＶゲノムＤＮＡ数を表す。図１ｅは、肝臓中ＨＢＶゲノムＤＮＡ数を表す。
【図２】図２ａは、ＨＣＶ感染ヒト肝臓キメラマウスに対する本発明の治療剤の投与と、血清又は肝臓の採取スケジュールを表す。図２ｂは、血清中ＩＦＮ−βおよびＩＦＮ−α濃度を表す。図２ｃは、肝臓中のＩＦＮＢ１遺伝子、ＩＦＮＡ２遺伝子、ＩＦＮＧ遺伝子のｍＲＮＡ量を表す。
【図３】図３ａは、ＨＢＶ感染ヒト肝臓キメラマウスに対する本発明の治療剤の投与と、血清又は肝臓の採取スケジュールを表す。図３ｂは、血清中ＩＦＮ−βおよびＩＦＮ−α濃度を表す。図３ｃは、肝臓中のＩＦＮＢ１遺伝子、ＩＦＮＡ２遺伝子、ＩＦＮＧ遺伝子のｍＲＮＡ量を表す。
【００１９】
【図４】図４ａは、ヒト肝臓キメラマウスの肝臓におけるＤＮＡマイクロアレイの結果を表す。ＨＣＶに感染しているだけで何も投与していないキメラマウス対する各実験群の発現量を表示している。図４ｂは、肝臓中のＩＬ２９遺伝子、ＩＬ２８Ａ遺伝子、ＩＬ２８Ｂ遺伝子のｍＲＮＡ量を表す。図４ｃは、肝臓中ＩＦＮ−λ量のウェスタンブロッティングの結果を表す。
【図５】図５ａ〜ｃは、組換えＩＦＮ−λで刺激したＨＣＶレプリコン細胞のＨＣＶレプリコン数および細胞数を表す。図５ｄは、ＨＣＶ感染キメラマウスの血清中ＨＣＶゲノムＲＮＡ数を表す。図５ｅは、本発明の治療剤と抗ＩＦＮ−λ２中和抗体との同時投与時の血清中ＨＣＶゲノムＲＮＡ量を表す。図５ｆは、本発明の治療剤と抗ＩＦＮ−λ２中和抗体との同時投与時の肝臓中ＨＣＶゲノムＲＮＡ量を表す。
【図６】図６ａは、ＨＣＶ感染キメラマウスの肝臓中のＩＬ２９遺伝子、ＩＬ２８Ａ遺伝子、ＩＬ２８Ｂ遺伝子のｍＲＮＡ量を表す。図６ｂは、ＨＣＶ感染キメラマウスの血清中ＨＣＶゲノムＲＮＡ数を表す。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
以下、本発明を詳細に説明する。本発明の範囲はこれらの説明に拘束されることはなく、以下の例示以外についても、本発明の趣旨を損なわない範囲で適宜変更し実施することができる。なお、本明細書において引用された全ての刊行物、例えば先行技術文献、及び公開公報、特許公報その他の特許文献は、参照として本明細書に組み込まれる。
【００２１】
１．本発明の概要
本発明者らは、肝炎ウイルスに感染させたヒト肝臓キメラマウスを用い、カチオン性リポソームやアテロコラーゲン等の薬物を細胞内に移送するのに有用な薬物担体と、二本鎖を形成し得る２種の合成ＲＮＡ（ポリＩ・ポリＣ又はポリＡ・ポリＵ等）との複合体による強力な抗ウイルス活性の作用機序を解析した。その結果、かかる複合体は、ＩＦＮ−αやＩＦＮ−βといったＩ型インターフェロン（ＩＦＮ）ではなく、III型ＩＦＮに属するＩＬ−２９(別名ＩＦＮ−λ１)、ＩＬ−２８Ａ(別名ＩＦＮ−λ２)、ＩＬ−２８Ｂ(別名ＩＦＮ−λ３)をヒト肝細胞特異的に誘導することにより、抗ウイルス活性を発揮することが示された。さらに、かかる複合体は、ＩＬ２８Ｂ遺伝子のメジャーバリアントとマイナーバリアントのいずれに対しても、ＩＦＮ−λを強く誘導することが示された。以上のことから、かかる複合体が、従来ＰＥＧ化ＩＦＮ−αでは難治性であった肝炎ウイルス感染症に対しても有効な抗肝炎ウイルス活性を示し、難治性肝炎ウイルス感染症の治療剤として用い得ることが見出された。さらに、かかる複合体が、肝炎ウイルス感染症以外の難治性の各種ウイルス感染症に対しても有効な抗ウイルス活性を示し、その治療剤として用い得ることが見出された。本発明はこのようにして完成されるに至ったものである。
【００２２】
なお、本発明において、「Ｉ」はイノシン酸、「Ｃ」はシチジル酸、「Ａ」はアデニル酸、「Ｕ」はウリジル酸を、それぞれ意味する。また、ポリＩアナログ、ポリＣアナログ、ポリＡアナログ及びポリＵアナログは、当業者には周知であるが、各々、効果の増強や安定性の向上などを目的として、核酸を構成する糖、核酸塩基又はリン酸バックボーンの全部又は一部が改変されたものを意味する。
【００２３】
２．難治性ウイルス感染症治療剤
本発明に係る難治性ウイルス感染症治療剤（「難治性ウイルス感染症治療用医薬組成物」ともいう。以下、総称して「本発明の治療剤」という。）は、前述のとおり、薬物を細胞内に移送するのに有用な薬物担体（以下、単に「薬物担体」という。）に、ポリＩ若しくはポリＩアナログ及びポリＣ若しくはポリＣアナログ、又は、ポリＡ若しくはポリＡアナログ及びポリＵ若しくはポリＵアナログを包含する複合体（以下、「本複合体」ということがある。）を含有することを特徴とするものである。
本発明の治療剤において、治療対象となる難治性ウイルス感染症としては、当該ウイルス感染により直接発症する炎症、症状及び疾患に限らず、その後これら炎症に起因して発症する各種症状及び疾患等も含まれる。難治性ウイルス感染症としては、限定はされないが、例えば、肝炎ウイルス感染症等が好ましく挙げられ、具体的には、肝炎に包含される各種炎症、症状、疾患や、さらには肝硬変及び各種肝癌が挙げられる。ここで、肝炎ウイルスとしては、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）及びＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）等が挙げられ、詳しくは、ＨＣＶの遺伝子型としては１ａ型及び１ｂ型が、ＨＢＶの遺伝子型としてはＣ型が、代表的なものとして挙げられる。
【００２４】
本発明に用いられる「薬物担体」としては、医薬上許容され、合成ＲＮＡを包含することができ、包含された合成ＲＮＡを細胞内に移送することができるものであれば、特に限定されない。かかる薬物担体として、例えば、カチオン性リポソーム、アテロコラーゲン、ナノ粒子を挙げることができる。
具体的には、当該カチオン性リポソームとして、例えば、オリゴフェクトアミン（登録商標）、リポフェクチン（登録商標）、リポフェクトアミン（登録商標）、リポフェクトアミン２０００（登録商標）、リポフェクトエース（登録商標）、ＤＭＲＩＥ−Ｃ（登録商標）、ＧｅｎｅＳｉｌｅｎｃｅｒ（登録商標）、ＴｒａｎｓＭｅｓｓｅｎｇｅｒ（登録商標）、ＴｒａｎｓＩＴ ＴＫＯ（登録商標）や、国際公開第９４／１９３１４号公報に開示されている薬物担体、即ち、以下の一般式[Ｉ]で表される化合物［例えば、２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール（以下、「化合物Ｘ」という。）、３−Ｏ−（４−ジメチルアミノブタノイル）-１，２−Ｏ−ジオレイルグリセロール、３−Ｏ−（２−ジメチルアミノエチル）カルバモイル-１，２−Ｏ−ジオレイルグリセロール及び３−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，２−Ｏ−ジオレイルグリセロール等］とリン脂質とを必須構成成分として形成される薬物担体（以下、「本グリセロール担体」という。）を挙げることができる。
【００２５】
【化４】
〔式[Ｉ]中、Ｒ１、Ｒ２は、異なって、ＯＹ、又は、−Ａ−(ＣＨ２)ｎ−Ｅを表す。ｎは０〜４の整数を表す。ここで、Ｅは、ピロリジノ、ピペリジノ、置換若しくは無置換のピペラジノ、モルホリノ、置換若しくは無置換のグアニジノ、又は下記式：
【００２６】
【化５】
（式中、Ｒ3、Ｒ4は、同一又は異なって、水素、炭素数１〜４の低級アルキル、炭素数１〜４のヒドロキシ低級アルキル、又はモノ若しくはジ低級アルキルアミノアルキル（炭素数２〜８）を表す。）で示される基を表し、Ａは、下記式：
【００２７】
【化６】
で示されるいずれかの基((i))〜(vii)で示されるいずれかの基）を表す。また、Ｒ、Ｙは、同一又は異なって、炭素数１０〜３０の飽和若しくは不飽和の脂肪族炭化水素基、又は炭素数１０〜３０の飽和若しくは不飽和の脂肪酸残基を表す。〕
【００２８】
本発明において好ましいカチオン性リポソームとしては、化合物Ｘとリン脂質とを必須構成成分として形成される薬物担体（以下、「本グリセロール担体Ｘ」という。）を挙げることができる。
ポリＩアナログ、ポリＣアナログ、ポリＡアナログ、ポリＵアナログは、もとの核酸（例えばポリＩアナログならポリＩ）の機能を著しく損なわないものであれば特に限定されないが、具体例としては、ポリ（７−デアザイノシン酸）、ポリ（２’−アジドイノシン酸）、ポリ（シチジン−５’−チオリン酸）、ポリ（１−ビニルシチジル酸）、ポリ（シチジル酸、ウリジル酸）コポリマー、ポリ（シチジル酸、４−チオウリジル酸）コポリマー、ポリ（アデニル酸、ウリジル酸）コポリマーを挙げることができる。
【００２９】
ポリＩ、ポリＩアナログ、ポリＣ、ポリＣアナログ、ポリＡ、ポリＡアナログ、ポリＵ、及びポリＵアナログの各鎖長は、特に限定されないが、各々独立して、５０〜２，０００塩基数の範囲内にあるものが適当であり、１００〜６００塩基数の範囲内にあるものが好ましく、２００〜５００塩基数の範囲内にあるものがより好ましい。５０塩基数未満でも、また２，０００塩基数より長くても本発明の効果を奏し得るが、場合により、５０塩基数未満では有効性に問題が生じるおそれがあり、２，０００塩基数より長いと毒性が生じるおそれがある。
なお、ポリＩやポリＣ等の合成ＲＮＡは、通常様々な鎖長からなる一定の分布をもって存在するので、前記各鎖長は最大分布の塩基数を意味する。
【００３０】
本グリセロール担体中のリン脂質としては、医薬上許容されるリン脂質であれば特に限定されないが、具体例としては、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、スフィンゴミエリン、レシチン等を挙げることができる。また、水素添加されたリン脂質も挙げることができる。好ましいリン脂質としては、卵黄ホスファチジルコリン、卵黄レシチン、大豆レシチン、卵黄ホスファチドを挙げることができる。これらの１種又は２種以上のリン脂質を用いることができる。なお、本グリセロール担体Ｘについても上記と同様のリン脂質を挙げることができる。本グリセロール担体Ｘにおける好ましいリン脂質についても同様に、卵黄ホスファチジルコリン、卵黄レシチン、大豆レシチン、卵黄ホスファチドを挙げることができる。同様にこれらの１種又は２種以上のリン脂質を用いることができる。
【００３１】
本発明の治療剤の好ましい態様としては、リン脂質がレシチンである本グリセロール担体Ｘに、各合成ＲＮＡの鎖長が１００〜６００塩基数（好ましくは２００〜５００塩基数）の範囲内にある、ポリＩ若しくはポリＩアナログ及びポリＣ若しくはポリＣアナログを包含する複合体、又はリン脂質がレシチンである本グリセロール担体Ｘに、各合成ＲＮＡの鎖長が１００〜６００塩基数（好ましくは２００〜５００塩基数）の範囲内にある、ポリＡ若しくはポリＡアナログ及びポリＵ若しくはポリＵアナログを包含する複合体を含有するものを挙げることができる。特に好ましい態様としては、リン脂質がレシチンである本グリセロール担体Ｘに、各合成ＲＮＡの鎖長が２００〜５００塩基数の範囲内にある、ポリＩ及びポリＣを包含する複合体を含有するものを挙げることができる。
【００３２】
本複合体中における薬物担体とポリＩ及びポリＣ等の合成ＲＮＡとの構成比率は、用いる薬物担体や合成ＲＮＡの種類や鎖長、ウイルスの種類や増殖程度等によって異なるが、薬物担体１０重量部に対して、合成ＲＮＡ ０．０５〜１０重量部が適当であり、０．１〜４重量部が好ましく、０．３〜２重量部がより好ましい。
本グリセロール担体Ｘ中における化合物Ｘとリン脂質との構成比率は、合成ＲＮＡの種類や鎖長、使用量、またリン脂質の種類等によって異なるが、化合物Ｘ １重量部に対して、リン脂質０．１〜１０重量部が適当であり、０．５〜５重量部が好ましく、１〜２重量部がより好ましい。
【００３３】
３．ＩＮＦ−λ誘導剤
本発明に係るＩＮＦ−λ誘導剤（以下、「本発明の誘導剤」という。）は、前述のとおり、薬物を細胞内に移送するのに有用な薬物担体（以下、単に「薬物担体」という。）に、ポリＩ若しくはポリＩアナログとポリＣ若しくはポリＣアナログとを包含する複合体、又は、ポリＡ若しくはポリＡアナログとポリＵ若しくはポリＵアナログとを包含する複合体を含有することを特徴とするものである。
ここで、本発明の誘導剤の各構成成分等については、上記２.項に記載の本発明の治療剤に関する説明が全て適用できる。
【００３４】
４．本発明の治療剤及び誘導剤の使用形態
本発明の治療剤及び誘導剤は、例えば、液剤（注射剤、点滴剤等）やその凍結乾燥製剤の形態をとることができる。
本発明の治療剤及び誘導剤は、医薬上許容される任意の添加剤、例えば、乳化補助剤、安定化剤、等張化剤、ｐＨ調整剤を適当量含有していてもよい。具体的には、炭素数６〜２２の脂肪酸（例、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、アラキドン酸、ドコサヘキサエン酸）やその医薬上許容される塩（例、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩）、アルブミン、デキストラン等の乳化補助剤、コレステロール、ホスファチジン酸等の安定化剤、塩化ナトリウム、グルコース、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース等の等張化剤、塩酸、硫酸、リン酸、酢酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、トリエタノールアミン等のｐＨ調整剤などを挙げることができる。
【００３５】
本発明の治療剤及び誘導剤は、薬物担体ないしその原料化合物と合成ＲＮＡとを、常法により混合、攪拌、分散等を行うことにより製造することができる。薬物担体がカチオン性リポソームである本発明の治療剤及び誘導剤の場合には、例えば、リポソームの一般的な製法と同様な方法により製造することができる。具体的には、カチオン性リポソーム又はその原料化合物（例えば、化合物Ｘとリン脂質）と、例えば二本鎖ポリＩ・ポリＣないしは一本鎖ポリＩと一本鎖ポリＣとを、水溶液中で適当な分散機により分散処理することにより製造することができる。水溶液としては、注射用水、注射用蒸留水、生理食塩水等の電解質液、ブドウ糖液等を挙げることができる。適当な分散機としては、例えば、ホモミキサー、ホモジナイザー、超音波分散器、超音波ホモジナイザー、高圧乳化分散機、マイクロフルイダイザー（商品名）、ナノマイザー（商品名）、アルティマイザー（商品名）、デビー（商品名）、マントン−ガウリン型高圧ホモジナイザーを挙げることができる。また、当該分散処理は、粗分散を経るなど数段階に分けて行うこともできる。
薬物担体は、市販のものをその指示に従って用いることができ、また適当に加工して用いることもできる。
【００３６】
カチオン性リポソームの原料化合物から本発明の治療剤及び誘導剤を製造する場合には、当該原料化合物に、例えば二本鎖ポリＩ・ポリＣないしは一本鎖ポリＩと一本鎖ポリＣとを加え、一緒に分散処理して製造することができるほか、当該原料化合物をまず分散処理してカチオン性リポソームを形成し、続いて例えば二本鎖ポリＩ・ポリＣないしは一本鎖ポリＩと一本鎖ポリＣとを加え再度分散処理して製造することもできる。
医薬上（薬理学上）許容される任意の添加剤は、分散前でも分散後でも適当な工程で添加することができる。
本発明の治療剤及び誘導剤の凍結乾燥製剤は、常法により製造することができる。例えば、液状である本発明の治療剤及び誘導剤を滅菌し、所定量をバイアル瓶に分注する。次いで、約−４０℃〜−２０℃の条件で予備凍結を約２時間程度行い、約０℃〜１０℃で減圧下に一次乾燥を行い、さらに約１５℃〜２５℃で減圧下に二次乾燥して凍結乾燥する。その後、一般的にはバイアル内部を窒素ガスで置換し、打栓して本発明の治療剤及び誘導剤の凍結乾燥製剤を得ることができる。
【００３７】
本発明の治療剤及び誘導剤の凍結乾燥製剤は、一般には任意の適当な溶液（再溶解液）の添加によって再溶解し使用することができる。このような再溶解液としては、注射用水、生理食塩水等の電解質液、ブドウ糖液、その他一般輸液を挙げることができる。この再溶解液の液量は、用途等によって異なり特に制限されないが、凍結乾燥前の液量の０．５〜２倍量、又は５００ｍＬ以下が適当である。
本発明の治療剤は、限定はされず、難治性のウイルス感染症を引き起こし得る各種ウイルス、例えば、Ａ型、Ｂ型及びＣ型等の肝炎ウイルスや、インフルエンザウイルス、ＲＳウイルスなどへの使用が考えられる。本発明の治療剤による抗ウイルス効果は、投与期間中を通して持続した。後述する実施例から明らかな通り、本発明の治療剤は、Ｉ型ＩＦＮを初回投与後に単回だけ誘導するのに対して、ＩＦＮ−λは投与期間中、投与毎に何度も繰返し誘導した。さらに、本発明の治療剤は、ＩＬ２８Ｂ遺伝子のメジャーバリアントとマイナーバリアントのいずれに対しても、ＩＦＮ−λを強く誘導した。これらのことから、本発明の治療剤によれば、ＩＬ２８Ｂ遺伝子のマイナーバリアントにおけるＰＥＧ化ＩＦＮ−α不応答問題も解決されることが期待される。
【００３８】
本発明の治療剤及び誘導剤は、ヒトを含む動物に対して有効であり、特に肝細胞に対して作用させる場合に有効である。
本発明の治療剤及び誘導剤の投与方法としては、例えば、静脈内投与、皮下投与、肝動脈内投与、局所投与（例、経粘膜投与、経鼻投与、吸入投与）を挙げることができる。
本発明の治療剤及び誘導剤の投与量は、用いる薬物担体、合成ＲＮＡの種類や組成及び鎖長、ウイルスの種類や進行状況、患者の年齢、動物種差、投与経路、投与方法等によって異なるが、ポリＩ及びポリＣ等の合成ＲＮＡの投与量として、１回当たり通常１μｇ〜５０ｍｇ／ヒトが適当であり、１０μｇ〜１０ｍｇ／ヒトが好ましい。本発明の治療剤及び誘導剤は、１日１〜３回を、連日、隔日、１週毎又は２週毎等に、１ショット投与や点滴投与等することができる。
【００３９】
本発明においては、前述した本発明の治療剤を難治性ウイルス感染症の患者に投与することを含む難治性ウイルス感染症の治療方法や、難治性ウイルス感染症を治療するための本発明の治療剤の使用や、難治性ウイルス感染症を治療するための薬剤を製造するための本複合体の使用についても提供することができる。本発明の治療剤は、難治性ウイルス感染症の予防剤（予防用医薬組成物）としても用いることができる。
また本発明においては、肝細胞に本発明の誘導剤を作用させることを含む、ＩＮＦ−λ誘導方法や、肝細胞からＩＮＦ−λ誘導するための本発明の誘導剤の使用や、ＩＮＦ−λ誘導剤を製造するための複合体の使用についても提供することができる。
【００４０】
以下に、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例１】
【００４１】
難治性肝炎ウイルス感染症治療剤（ＩＮＦ−λ誘導剤）の製造
前記化合物Ｘ（２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール）１２４ｇ、精製卵黄レシチン２００ｇ、及びマルトース２ｋｇを容器にとり、これに注射用水１０．２Ｌを加え攪拌混合し、ホモジナイザーで粗乳化した後、高圧乳化分散機（マイクロフルイダイザー（登録商標））で微細乳化した。これに約３００塩基数のポリＩと約３００塩基数のポリＣとを溶解した注射用水（全量８Ｌ）を徐々に添加し、再度前記高圧乳化分散機で分散し、この分散液を０．２μｍのメンブランフィルターでろ過滅菌して、本発明の治療剤を得た。次いで、かかる治療剤をバイアル瓶に５ｍＬずつ充填した後、常法に従って凍結乾燥した。
【００４２】
抗肝炎ウイルス効果の確認
（１）方法
ジェノタイプ１ｂ型ＨＣＶ、ジェノタイプ１ａ型ＨＣＶ、またはジェノタイプＣ型ＨＢＶを感染させたヒト肝キメラマウス（フェニックスバイオ社製、以下同じ。）を用いた。試験液（投与液）としては、上述の凍結乾燥した本発明の治療剤に４．６ｍＬの注射用水を加え再構築し、これに５％ブドウ糖液を加えて適宜希釈したものを用いた。試験液は上記キメラマウスの尾静脈または眼窩静脈叢から投与した。対照薬としてＰＥＧ化ＩＦＮ−α（ペガシス（登録商標）、中外製薬社製、以下同じ。）を皮下投与した。また別の対照薬としてエンテカビル（ＥＴＶ）（バラクルード（登録商標）、ブリストルマイヤーズ社製、以下同じ。）を経口投与した。適時、血清または肝臓を採取し、その中に含まれるＨＣＶゲノムＲＮＡ量またはＨＢＶゲノムＤＮＡ量を、それぞれ定量ＲＴ−ＰＣＲまたは定量ＰＣＲで測定した。
【００４３】
（２）結果
上記測定の結果を図１に示す。
本発明の治療剤（０．１ｍｇ／ｋｇ×１回／日または０．１ｍｇ／ｋｇ×３回／日）は、血清中のジェノタイプ１ｂ型ＨＣＶゲノムＲＮＡ量を用量依存的に減少させた（図１ａ）。その効果は臨床用量２０倍のＰＥＧ化ＩＦＮ−α(３０μｇ／ｋｇ×２回／週)よりも強かった。本発明の治療剤（０．０１〜０．１ｍｇ／ｋｇ×１回／日）は、血清中のジェノタイプ１ａ型ＨＣＶゲノムＲＮＡ量を用量依存的に減少させた（図１ｂ）。その効果は臨床用量２０倍のＰＥＧ化ＩＦＮ−α(３０μｇ／ｋｇ×２回／週)よりも強かった。また、本発明の治療剤（０．１ｍｇ／ｋｇ×１回／日）は、肝臓中のＨＣＶゲノムＲＮＡ量を減少させた（図１ｃ）。
本発明の治療剤（０．１ｍｇ／ｋｇ×１回／日）は、血清中のジェノタイプＣ型ＨＢＶゲノムＤＮＡ量を減少させた（図１ｄ）。その効果は臨床用量２０倍のＰＥＧ化ＩＦＮ−α(３０μｇ／ｋｇ×２回／週)または臨床用量のＥＴＶ（０．０１７ｍｇ／ｋｇ×１回／日）よりも強かった。また、本発明の治療剤（０．１ｍｇ／ｋｇ×１回／日）は、肝臓中のＨＢＶゲノムＤＮＡ量を減少させた（図１ｅ）
【実施例２】
【００４４】
インターフェロン（ＩＮＦ）の誘導効果の確認
１．Ｉ型ＩＦＮおよびII型ＩＦＮの誘導
（１）方法
ジェノタイプ１ｂ型ＨＣＶ、ジェノタイプ１ａ型ＨＣＶ、またはジェノタイプＣ型ＨＢＶを感染させたヒト肝キメラマウスを用いた。試験液（投与液）としては、実施例１で製造した凍結乾燥した本発明の治療剤に４．６ｍＬの注射用水を加え再構築し、これに５％ブドウ糖液を加えて適宜希釈したものを用いた。試験液は上記キメラマウスの尾静脈または眼窩静脈叢から投与した。図２ａまたは図３ａに示す投与スケジュールに従って、血清または肝臓を採取した。血清中のＩＦＮ−βまたはＩＦＮ−αはELISAで定量した。肝臓中のＩＦＮＢ１、ＩＦＮＡ２及びＩＦＮＧ遺伝子発現量は定量ＲＴ−ＰＣＲで測定した。
【００４５】
（２）結果
上記測定の結果を図２及び図３に示す。
本発明の治療剤（０．１ｍｇ／ｋｇ×１回／日）は、初回の投与後では血清中のヒトＩＦＮ−βの濃度を上昇させたが、その量はわずかであった。また、初回投与時に見られた血清中ヒトＩＦＮ−β濃度の上昇は、５回目の投与後以降では消失した（図２ｂ、図３ｂ）。血清中ヒトＩＦＮ−αは、全投与期間を通じて検出されなかった（図２ｂ、図３ｂ）。なお、本発明の治療剤の投与時の血清中Ｉ型ＩＦＮとは対照的に、ＰＥＧ化ＩＦＮ−α(３０μｇ／ｋｇ×２回／週)を投与したヒト肝キメラマウスの血清中ＩＦＮ−αは非常に高い濃度が維持されていた（図２ｂ）。
本発明の治療剤（０．１ｍｇ／ｋｇ×１回／日）は、初回の投与後では肝臓中のＩＦＮＢ１遺伝子の発現を誘導したが、その量はわずかであった。また、初回投与時に見られた肝臓中のＩＦＮＢ１遺伝子の発現誘導は、５回目の投与後以降では消失した（図２ｃ、図３ｃ）。肝臓中のＩＦＮＡ２、ＩＦＮＧ遺伝子の発現誘導は、全投与期間を通じて検出されなかった（図２ｃ、図３ｃ）。
【００４６】
２．III型ＩＦＮ（ＩＦＮ−λ）誘導
（１）方法
ジェノタイプ１ｂ型ＨＣＶを感染させたヒト肝キメラマウスを用いた。試験液（投与液）としては、実施例１で製造した凍結乾燥した本発明の治療剤に４．６ｍＬの注射用水を加え再構築し、これに５％ブドウ糖液を加えて適宜希釈したものを用いた。試験液は上記キメラマウスの尾静脈または眼窩静脈叢から投与した。適時、肝臓を採取し、ＩＦＮ発現量をＤＮＡマイクロアレイにより解析した。また、ＩＦＮ−λ遺伝子発現量は定量ＲＴ−ＰＣＲで測定した。肝臓中のＩＦＮ−λ量はウェスタンブロッティングで測定した。
【００４７】
（２）結果
上記測定の結果を図４に示す。
本発明の治療剤（０．１ｍｇ／ｋｇ×１回／日）によって誘導される抗ウイルス活性と発現挙動が相関する遺伝子をＤＮＡマイクロアレイにより探索したところ、ＩＬ２９遺伝子（ＩＬ−２９（別名：ＩＦＮ−λ１）をコード）、ＩＬ２８Ａ遺伝子（ＩＬ−２８Ａ（別名：ＩＦＮ−λ２）をコード）、ＩＬ２８Ｂ遺伝子（ＩＬ−２８Ｂ（別名：ＩＦＮ−λ３）をコード）が同定された（図４ａ）。これら３つのＩＦＮ−λ遺伝子は、Ｉ型ＩＦＮ遺伝子と異なり、５回目の投与後においても繰返し誘導された（図４ｂ）。また、本発明の治療剤の投与期間を通して、ＩＦＮ−λが肝臓中存在していることが示された（図４ｃ）。
【実施例３】
【００４８】
ＩＦＮ−λを介する抗ウイルス効果の確認
（１）方法
培養ＨＣＶレプリコン細胞に組換えＩＦＮ−λを添加し、ＨＣＶレプリコン数と細胞数を測定した。ジェノタイプ１ｂ型ＨＣＶを感染させたヒト肝キメラマウスに、組換えＩＦＮ−λを投与（１ｍｇ／ｋｇ×１回／日）し、適時、血清を採取して、その中に含まれるＨＣＶゲノムＲＮＡ量を定量ＲＴ−ＰＣＲで測定した。また、ジェノタイプ１ｂ型ＨＣＶを感染させたヒト肝キメラマウスに、実施例１で製造した本発明の治療剤（０．１ｍｇ／ｋｇ×１回／日）を抗ＩＦＮ−λ２中和抗体またはコントロール抗体（１ｍｇ／ｋｇ×１回／日）と共に投与し、３日目の血清と肝臓中のＨＣＶゲノムＲＮＡ量を定量ＲＴ−ＰＣＲで測定した。
【００４９】
（２）結果
上記測定の結果を図５に示す。
組換えＩＦＮ−λは、濃度依存的にＨＣＶレプリコンの複製を抑制した（図５ａ〜ｃ）。また、組換えＩＦＮ−λは、血清中のＨＣＶゲノムＲＮＡ量を減少させた（図５ｄ）。さらに、抗ＩＦＮ−λ２中和抗体は、本発明の治療剤による血清中および肝臓中でのＨＣＶゲノムＲＮＡ量の減少を減弱させた（図５ｅ〜ｆ）。
【実施例４】
【００５０】
ＩＬ２８Ｂ遺伝子の各バリアントに対するＩＦＮ−λ誘導効果と抗ウイルス効果の確認
（１）方法
ＩＬ２８Ｂ遺伝子のメジャーバリアントまたはマイナーバリアントのドナーのヒト肝細胞を移植したヒト肝キメラマウスを、ジェノタイプ１ｂ型ＨＣＶを感染させた。試験液（投与液）としては、実施例１で製造した凍結乾燥した本発明の治療剤に４．６ｍＬの注射用水を加え再構築し、これに５％ブドウ糖液を加えて適宜希釈したものを用いた。試験液は上記キメラマウスの尾静脈または眼窩静脈叢から投与した。適時、肝臓または血清を採取し、肝臓中のＩＦＮ−λ遺伝子発現量または血清中のＨＣＶゲノムＲＮＡ量を定量ＲＴ−ＰＣＲで測定した。
【００５１】
（２）結果
上記測定の結果を図６に示す。
本発明の治療剤（０．１ｍｇ／ｋｇ×１回／日）は、ＩＬ２８Ｂ遺伝子のメジャーバリアントとマイナーバリアントのいずれのドナー肝細胞を移植して作製したヒト肝臓キメラマウスに対しても、ＩＬ２９遺伝子、ＩＬ２８Ａ遺伝子、ＩＬ２８Ｂ遺伝子の３つのＩＦＮ−λ遺伝子を、投与期間中を通じて繰返し誘導した（図６ａ）。また、本発明の治療剤（０．１ｍｇ／ｋｇ×１回／日）は、ＩＬ２８Ｂ遺伝子のメジャーバリアントとマイナーバリアントのいずれのドナー肝細胞を移植して作製したヒト肝臓キメラマウスに対しても、血清中ＨＣＶゲノムＲＮＡ量を減少させた。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬物を細胞内に移送するのに有用な薬物担体に、ポリＩ若しくはポリＩアナログ及びポリＣ若しくはポリＣアナログを包含する複合体、又は薬物を細胞内に移送するのに有用な薬物担体に、ポリＡ若しくはポリＡアナログ及びポリＵ若しくはポリＵアナログを包含する複合体を含有することを特徴とする、難治性ウイルス感染症治療剤。
【請求項２】
薬物担体が、カチオン性リポソーム、アテロコラーゲン及びナノ粒子からなる群より選ばれる少なくとも１種である、請求項１記載の治療剤。
【請求項３】
カチオン性リポソームが、下記一般式[Ｉ]で示される化合物及びリン脂質を必須構成成分として形成されるものである、請求項２記載の治療剤。
【化７】
〔式[Ｉ]中、Ｒ１、Ｒ２は、異なって、ＯＹ、又は、−Ａ−(ＣＨ２)ｎ−Ｅを表す。ｎは０〜４の整数を表す。ここで、Ｅは、ピロリジノ、ピペリジノ、置換若しくは無置換のピペラジノ、モルホリノ、置換若しくは無置換のグアニジノ、又は下記式：
【化８】
（式中、Ｒ3、Ｒ4は、同一又は異なって、水素、炭素数１〜４の低級アルキル、炭素数１〜４のヒドロキシ低級アルキル、又はモノ若しくはジ低級アルキルアミノアルキル（炭素数２〜８）を表す。）で示される基を表し、Ａは、下記式：
【化９】
で示されるいずれかの基を表す。また、Ｒ、Ｙは、同一又は異なって、炭素数１０〜３０の飽和若しくは不飽和の脂肪族炭化水素基、又は炭素数１０〜３０の飽和若しくは不飽和の脂肪酸残基を表す。〕
【請求項４】
一般式[Ｉ]で表される化合物が、２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール、３−Ｏ−（４−ジメチルアミノブタノイル）-１，２−Ｏ−ジオレイルグリセロール、３−Ｏ−（２−ジメチルアミノエチル）カルバモイル-１，２−Ｏ−ジオレイルグリセロール、又は３−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，２−Ｏ−ジオレイルグリセロールである、請求項３記載の治療剤。
【請求項５】
２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール及びリン脂質を必須構成成分として形成されるカチオン性リポソームに、ポリＩ若しくはポリＩアナログ及びポリＣ若しくはポリＣアナログを包含する複合体、又は２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール及びリン脂質を必須構成成分として形成されるカチオン性リポソームに、ポリＡ若しくはポリＡアナログ及びポリＵ若しくはポリＵアナログを包含する複合体を含有することを特徴とする、難治性ウイルス感染症治療剤。
【請求項６】
ポリＩ、ポリＩアナログ、ポリＣ、ポリＣアナログ、ポリＡ、ポリＡアナログ、ポリＵ、ポリＵアナログの各鎖長が、各々独立して１００〜６００塩基数の範囲内である、請求項１又は５記載の治療剤。
【請求項７】
２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール及びリン脂質を必須構成成分として形成されるカチオン性リポソームに、鎖長が１００〜６００塩基数の範囲内にあるポリＩ及び鎖長が１００〜６００塩基数の範囲内にあるポリＣを包含する複合体を含有することを特徴とする、難治性ウイルス感染症治療剤。
【請求項８】
リン脂質がレシチンである、請求項３、５又は７記載の治療剤。
【請求項９】
ウイルスが肝炎ウイルスである、請求項１〜８のいずれかに記載の治療剤。
【請求項１０】
肝炎ウイルスが、Ｃ型肝炎ウイルス又はＢ型肝炎ウイルスである、請求項９記載の治療剤。
【請求項１１】
Ｃ型肝炎ウイルスの遺伝子型が、１ａ型又は１ｂ型である、請求項１０記載の治療剤。
【請求項１２】
Ｂ型肝炎ウイルスの遺伝子型が、Ｃ型である、請求項１０記載の治療剤。
【請求項１３】
薬物を細胞内に移送するのに有用な薬物担体に、ポリＩ若しくはポリＩアナログ及びポリＣ若しくはポリＣアナログを包含する複合体、又は薬物を細胞内に移送するのに有用な薬物担体に、ポリＡ若しくはポリＡアナログ及びポリＵ若しくはポリＵアナログを包含する複合体を含有することを特徴とする、ＩＦＮ−λ誘導剤。
【請求項１４】
２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール及びリン脂質を必須構成成分として形成されるカチオン性リポソームに、ポリＩ若しくはポリＩアナログ及びポリＣ若しくはポリＣアナログを包含する複合体、又は２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール及びリン脂質を必須構成成分として形成されるカチオン性リポソームに、ポリＡ若しくはポリＡアナログ及びポリＵ若しくはポリＵアナログを包含する複合体を含有することを特徴とする、ＩＦＮ−λ誘導剤。
【請求項１５】
ポリＩ、ポリＩアナログ、ポリＣ、ポリＣアナログ、ポリＡ、ポリＡアナログ、ポリＵ、ポリＵアナログの各鎖長が、各々独立して１００〜６００塩基数の範囲内である、請求項１３又は１４記載の誘導剤。
【請求項１６】
２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール及びリン脂質を必須構成成分として形成されるカチオン性リポソームに、鎖長が１００〜６００塩基数の範囲内にあるポリＩ及び鎖長が１００〜６００塩基数の範囲内にあるポリＣを包含する複合体を含有することを特徴とする、ＩＦＮ−λ誘導剤。
【請求項１７】
肝細胞に対して、請求項１３〜１６のいずれか１種の誘導剤を作用させる工程を含む、ＩＦＮ−λ誘導方法。
【請求項１】
薬物を細胞内に移送するのに有用な薬物担体に、ポリＩ若しくはポリＩアナログ及びポリＣ若しくはポリＣアナログを包含する複合体、又は薬物を細胞内に移送するのに有用な薬物担体に、ポリＡ若しくはポリＡアナログ及びポリＵ若しくはポリＵアナログを包含する複合体を含有することを特徴とする、難治性ウイルス感染症治療剤。
【請求項２】
薬物担体が、カチオン性リポソーム、アテロコラーゲン及びナノ粒子からなる群より選ばれる少なくとも１種である、請求項１記載の治療剤。
【請求項３】
カチオン性リポソームが、下記一般式[Ｉ]で示される化合物及びリン脂質を必須構成成分として形成されるものである、請求項２記載の治療剤。
【化７】
〔式[Ｉ]中、Ｒ１、Ｒ２は、異なって、ＯＹ、又は、−Ａ−(ＣＨ２)ｎ−Ｅを表す。ｎは０〜４の整数を表す。ここで、Ｅは、ピロリジノ、ピペリジノ、置換若しくは無置換のピペラジノ、モルホリノ、置換若しくは無置換のグアニジノ、又は下記式：
【化８】
（式中、Ｒ3、Ｒ4は、同一又は異なって、水素、炭素数１〜４の低級アルキル、炭素数１〜４のヒドロキシ低級アルキル、又はモノ若しくはジ低級アルキルアミノアルキル（炭素数２〜８）を表す。）で示される基を表し、Ａは、下記式：
【化９】
で示されるいずれかの基を表す。また、Ｒ、Ｙは、同一又は異なって、炭素数１０〜３０の飽和若しくは不飽和の脂肪族炭化水素基、又は炭素数１０〜３０の飽和若しくは不飽和の脂肪酸残基を表す。〕
【請求項４】
一般式[Ｉ]で表される化合物が、２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール、３−Ｏ−（４−ジメチルアミノブタノイル）-１，２−Ｏ−ジオレイルグリセロール、３−Ｏ−（２−ジメチルアミノエチル）カルバモイル-１，２−Ｏ−ジオレイルグリセロール、又は３−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，２−Ｏ−ジオレイルグリセロールである、請求項３記載の治療剤。
【請求項５】
２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール及びリン脂質を必須構成成分として形成されるカチオン性リポソームに、ポリＩ若しくはポリＩアナログ及びポリＣ若しくはポリＣアナログを包含する複合体、又は２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール及びリン脂質を必須構成成分として形成されるカチオン性リポソームに、ポリＡ若しくはポリＡアナログ及びポリＵ若しくはポリＵアナログを包含する複合体を含有することを特徴とする、難治性ウイルス感染症治療剤。
【請求項６】
ポリＩ、ポリＩアナログ、ポリＣ、ポリＣアナログ、ポリＡ、ポリＡアナログ、ポリＵ、ポリＵアナログの各鎖長が、各々独立して１００〜６００塩基数の範囲内である、請求項１又は５記載の治療剤。
【請求項７】
２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール及びリン脂質を必須構成成分として形成されるカチオン性リポソームに、鎖長が１００〜６００塩基数の範囲内にあるポリＩ及び鎖長が１００〜６００塩基数の範囲内にあるポリＣを包含する複合体を含有することを特徴とする、難治性ウイルス感染症治療剤。
【請求項８】
リン脂質がレシチンである、請求項３、５又は７記載の治療剤。
【請求項９】
ウイルスが肝炎ウイルスである、請求項１〜８のいずれかに記載の治療剤。
【請求項１０】
肝炎ウイルスが、Ｃ型肝炎ウイルス又はＢ型肝炎ウイルスである、請求項９記載の治療剤。
【請求項１１】
Ｃ型肝炎ウイルスの遺伝子型が、１ａ型又は１ｂ型である、請求項１０記載の治療剤。
【請求項１２】
Ｂ型肝炎ウイルスの遺伝子型が、Ｃ型である、請求項１０記載の治療剤。
【請求項１３】
薬物を細胞内に移送するのに有用な薬物担体に、ポリＩ若しくはポリＩアナログ及びポリＣ若しくはポリＣアナログを包含する複合体、又は薬物を細胞内に移送するのに有用な薬物担体に、ポリＡ若しくはポリＡアナログ及びポリＵ若しくはポリＵアナログを包含する複合体を含有することを特徴とする、ＩＦＮ−λ誘導剤。
【請求項１４】
２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール及びリン脂質を必須構成成分として形成されるカチオン性リポソームに、ポリＩ若しくはポリＩアナログ及びポリＣ若しくはポリＣアナログを包含する複合体、又は２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール及びリン脂質を必須構成成分として形成されるカチオン性リポソームに、ポリＡ若しくはポリＡアナログ及びポリＵ若しくはポリＵアナログを包含する複合体を含有することを特徴とする、ＩＦＮ−λ誘導剤。
【請求項１５】
ポリＩ、ポリＩアナログ、ポリＣ、ポリＣアナログ、ポリＡ、ポリＡアナログ、ポリＵ、ポリＵアナログの各鎖長が、各々独立して１００〜６００塩基数の範囲内である、請求項１３又は１４記載の誘導剤。
【請求項１６】
２−Ｏ−（２−ジエチルアミノエチル）カルバモイル-１，３−Ｏ−ジオレオイルグリセロール及びリン脂質を必須構成成分として形成されるカチオン性リポソームに、鎖長が１００〜６００塩基数の範囲内にあるポリＩ及び鎖長が１００〜６００塩基数の範囲内にあるポリＣを包含する複合体を含有することを特徴とする、ＩＦＮ−λ誘導剤。
【請求項１７】
肝細胞に対して、請求項１３〜１６のいずれか１種の誘導剤を作用させる工程を含む、ＩＦＮ−λ誘導方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【公開番号】特開２０１２−５６８９６（Ｐ２０１２−５６８９６Ａ）
【公開日】平成２４年３月２２日（２０１２．３．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−２０２３５５（Ｐ２０１０−２０２３５５）
【出願日】平成２２年９月９日（２０１０．９．９）
【出願人】（５９１０６３３９４）財団法人 東京都医学総合研究所 (69)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年３月２２日（２０１２．３．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年９月９日（２０１０．９．９）
【出願人】（５９１０６３３９４）財団法人 東京都医学総合研究所 (69)
【Ｆターム（参考）】
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