ＴＬＲ９阻害活性を有するピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体
【課題】ＴＬＲ９を阻害し、自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶および移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の予防及び治療効果に優れた治療剤の提供。
【解決手段】次の一般式（１）：
［式中、Ｒ1は、酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員複素環基を示し、Ｒ2、Ｒ3は、Ｃ1-10アルキル基を示し、Ｒ4、Ｒ5は、ハロゲン原子、アミノ基、水酸基及びＣ1-10アルキル基を示すか、あるいはＲ4とＲ5が、一緒になって酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員飽和複素環基を形成してもよく、ｎは、１〜６から選ばれる整数を示す。］で表される化合物を有効成分とする、ＴＬＲ９阻害剤。
【解決手段】次の一般式（１）：
［式中、Ｒ1は、酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員複素環基を示し、Ｒ2、Ｒ3は、Ｃ1-10アルキル基を示し、Ｒ4、Ｒ5は、ハロゲン原子、アミノ基、水酸基及びＣ1-10アルキル基を示すか、あるいはＲ4とＲ5が、一緒になって酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員飽和複素環基を形成してもよく、ｎは、１〜６から選ばれる整数を示す。］で表される化合物を有効成分とする、ＴＬＲ９阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はＴｏｌｌ様受容体（Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ＴＬＲ）９阻害作用を有し、ＴＬＲ９シグナルの活性化に起因する疾患、例えば関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群、血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶および移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の予防及び／又は治療剤として有用な新規化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
病原体が生体に進入すると、免疫系はそれらの病原体をすみやかに識別し排除する。哺乳類では免疫系は大きく自然免疫と獲得免疫に分けることが出来る。獲得免疫では、遺伝子再構成という方法で無数の個々に異なる抗原特異性を有する受容体がＴ細胞やＢ細胞表面に発現され、あらゆる未知の外来抗原に対処する（非特許文献１）。
【０００３】
一方で、マクロファージや樹状細胞などによって担われる自然免疫系は非特異的な免疫応答で微生物の排除が行われると考えられていたが、Ｔｏｌｌ様受容体（Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ＴＬＲ）の発見や樹状細胞を中心とした諸研究の急速な進展により、適応免疫系における抗原認識ほどの親和性や特異性は高くない、特徴的な微生物認識機構が存在していることが明らかになってきた（非特許文献２）。とくにＴＬＲに代表される細胞内にシグナルを伝達する認識受容体は、感染をいち早く前線においてキャッチするという役割のみならず、その後、細胞内にシグナルを伝え、自然免疫系活性化のスイッチをオンにする重要な役割がある。その意味において、これまで知られていた自然免疫系の活性化によって誘導されるＩ型インターフェロン等のサイトカインやケモカイン、そして抗原提示に関与する分子群の遺伝子発現誘導と、その後の適応免疫系の活性化へと連携させて特異的な免疫応答発動へと導くという経路が明らかとなった（非特許文献２）。
【０００４】
ＴＬＲ９は細菌のＣｐＧ ＤＮＡを認識して活性化される。ＣｐＧ ＤＮＡは細菌のゲノムＤＮＡの特徴的な配列で、メチル化されてないＣｐＧ配列がある頻度で繰り返されている。哺乳類のゲノムＤＮＡではＣｐＧ配列の頻度が少なく高頻度にメチル化されているため、免疫賦活作用はない（非特許文献３）。
【０００５】
これまでＤＮＡセンサーの一つとして知られていたＴＬＲ９に関しては多くの研究がなされ、その詳細がかなり明らかになってきている。ＴＬＲ９はエンドソームやライソソームにおいて細胞外に存在するＤＮＡを認識する受容体として機能し、Ｉ型インターフェロンや炎症性サイトカインの遺伝子発現を誘導する。この両者ともＭｙＤ８８依存性のシグナル伝達経路を介するが、前者がＩＲＡＫ１／ＩＫＫα−ＩＲＦ−７が関与するのに対し、後者では、ＮＦ−κＢやＩＲＦ−５やＭＡＰキナーゼの経路が関与する。ＭｙＤ８８にはＩＲＦ−７やＩＲＦ−５の他に、ＩＲＦ−１やＩＲＦ−４が会合することが知られているが（非特許文献４、５、６）、ＴＬＲ９下流で関与するＩＲＦ転写因子の種類や役割は細胞の種類によって異なっている。
【０００６】
上記に示したようにＴＬＲ９はＤＮＡをリガンドとして認識するが、正常な状態では自己ＤＮＡはリガンドとして認識されず、自然免疫を活性化しない。これは細胞死により放出された自己ＤＮＡは血清中のヌクレアーゼによりＴＬＲにより認識される前に分解されるからである。またＴＬＲ９の細胞表面ではなく、エンドソームでの細胞内局在も自己ＤＮＡを認識しない機構として考えられている。
【０００７】
しかしながら、自己免疫反応や炎症が起こっている状況下ではこのような防御機構が破綻し、内在性のタンパク質と複合体を形成し、ＴＬＲ９シグナルを活性化することが考えられる（非特許文献７）。
【０００８】
これらのことからＴＬＲ９を阻害することにより、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群、血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶および移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）を改善することが可能であると考えられる。
【０００９】
関節リウマチ（ＲＡ）についてはＴＬＲ９阻害作用を有する核酸配列を用いて、ＴＬＲ９を阻害することによりプリスタン誘導性ラット関節炎モデルにおいて発症と病態が抑制されたことが報告されている（非特許文献８）。また抗マラリア薬であるヒドロキシクロロキンはエンドソームの酸性化抑制によりＴＬＲ７、９の阻害作用を有していることが知られ、日本を除くほとんどの国で関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の治療薬として承認されている（非特許文献９）。
【００１０】
ＳＬＥについてはＴＬＲ９ノックアウトマウスにおいてＳＬＥ様の病体において見られる抗核抗体の減弱が報告されており（非特許文献１０）、ＴＬＲ９阻害作用を有する核酸を用いた実験においても同様の結果が報告されている（非特許文献１１）。さらに同様の結果を有する低分子化合物についても報告されている（ＣＰＧ５２３６４：特許文献１）。
【００１１】
ヒドロキシクロロキンはＴＬＲ９阻害作用としてはそれほど強くなく、さらに強いＴＬＲ９阻害作用を有する薬剤により、より強力な薬効が期待できる。またヒドロキシクロロキンにはクロロキン網膜症などの副作用が知られているが、異なる骨格の化合物により、このような副作用の懸念は払拭できる可能性も考えられる。したがって、強いＴＬＲ９阻害作用を示し、経口投与可能な低分子性の薬剤が、今後の関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群、血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶および移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の治療において有用であると考えられる。
【００１２】
一方、ピラゾロピリミジン誘導体としては、例えば、ＣＤＫ阻害作用を有し癌、炎症、関節炎、アルツハイマー病などの治療薬としての効果が知られている(特許文献２、３、４、５、６、７)。また、ＣＣＲ４機能調節作用を有し、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、関節炎リウマチ、全身性エリテマトーデスなどの治療薬としての効果も知られている（特許文献８、９）。また、Ｒａｆキナーゼ阻害能を有し癌疾患や炎症性疾患の治療効果をもつこと（特許文献１０）や、毛髪染料としての用途（特許文献１１）、一酸化窒素合成酵素阻害能を有し、鎮痛剤や敗血症、リウマチ等の治療効果を持つこと（特許文献１２）が知られている。しかしながら、これらの文献に開示されている化合物は、ピラゾロピリミジン環上の置換様式が本発明の化合物と異なる。また、いずれの文献においてもＴＬＲ９阻害能に関する記載や示唆はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】ＷＯ２００８／１５２４７１パンフレット
【特許文献２】ＷＯ２００４／０２２５６１号パンフレット
【特許文献３】ＷＯ２００５／０７７９５４号パンフレット
【特許文献４】特表２００９−５１１４８７号公報
【特許文献５】ＷＯ２０１０／１１８２０７号パンフレット
【特許文献６】ＷＯ２００８／１３０５７０号パンフレット
【特許文献７】ＷＯ２００８／１３０５６９号パンフレット
【特許文献８】ＷＯ２００７／０６３９３４号パンフレット
【特許文献９】特開２００９−００７３４１号公報
【特許文献１０】特表２０１１−５１３３３４号公報
【特許文献１１】特表２００２−５３５３３３号公報
【特許文献１２】特開平１１−２７９１７８号公報
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】植松智ら ウイルス，５４：１４５−１５２（２００４）
【非特許文献２】高岡晃教ら ウイルス，５８：３７−４６（２００８）
【非特許文献３】Ｔａｋｅｄａ Ｋ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２１：３３５−３７６（２００３）
【非特許文献４】Ｈｏｎｄａ Ｋ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０１：１５４１６−１５４２１（２００４）
【非特許文献５】Ｎｅｇｉｓｈｉ Ｈ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０２：１５９８９−１５９９４（２００５）
【非特許文献６】Ｎｅｇｉｓｈｉ Ｈ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：１５１３６−１５１４１（２００６）
【非特許文献７】Ｋｉｍ，Ｙ．Ｍ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４５２：２３４−２３８（２００８）
【非特許文献８】Ｓ Ｈｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．，７０ ：Ａ３９ ｄｏｉ：１０．１１３６／ａｒｄ．２０１０．１４８９７３．８（２０１１）
【非特許文献９】横川直人，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｈｅｒａｐｙ，２８：８５−９１（２０１０）
【非特許文献１０】Ｓｅａｎ Ｒ．Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，２０２：３２１−３３１（２００５）
【非特許文献１１】Ｒａｈｕｌ Ｄ．Ｐａｗａｒｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ １８：１７２１-１７３１（２００７）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明の目的は、低分子性のＴＬＲ９阻害作用を有する新規化合物を提供することにある。さらに詳細には、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群、血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶および移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の予防及び／又は治療に有用な医薬を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
上記実情に鑑み、本発明者らは、鋭意ＴＬＲ９阻害作用を持つ化合物を探索した結果、下記一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体が、ヒトＴＬＲ９を発現させたヒト胎児腎臓細胞由来のＨＥＫ２９３細胞を用いた試験においてＴＬＲ９阻害作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１７】
すなわち本発明は、次の一般式（１）：
【００１８】
【化１】
【００１９】
［式中、Ｒ1は、Ｃ1-10アルキル基で置換されていてもよい、酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員複素環基を示し、
Ｒ2、Ｒ3は、互いに同一又は異なっていてもよい、Ｃ1-10アルキル基を示し、
Ｒ4、Ｒ5は、互いに同一又は異なっていてもよい、ハロゲン原子、アミノ基、水酸基及びＣ6-10アリール基からなる群から選ばれる置換基を有していてもよいＣ1-10アルキル基を示すか、あるいはＲ4とＲ5が、一緒になって酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員飽和複素環基を形成してもよく、
ｎは、１〜６から選ばれる整数を示す］
で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物に関する。また、前記一般式（１）に記載の化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とするＴＬＲ９阻害剤に関する。さらに、前記一般式（１）に記載の化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物、及び製薬上許容される担体を含有してなる医薬組成物に関する。
【００２０】
さらに詳細には、本発明は、前記一般式（１）が、
N1-ベンジル-N3-(5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル)- N1-エチルプロパン-1,3-ジアミン、
N1-(5,6-ジメチル-2-(2-メチルフラン-3-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル)-N3,N3-ジエチルプロパン-1,3-ジアミン、
N-(3-(アゼパン-1-イル)プロピル)-6-エチル-5-メチル-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル) ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミン、又は、
N-(3-(アゼパン-1-イル)プロピル)-5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル) ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミン、
である化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物に関する。
【００２１】
また、本発明は、
N1-ベンジル-N3-(5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル)- N1-エチルプロパン-1,3-ジアミン、
N1-(5、6-ジメチル-2-(2-メチルフラン-3-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル)-N3,N3-ジエチルプロパン-1,3-ジアミン、
N-(3-(アゼパン-1-イル)プロピル)-6-エチル-5-メチル-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル) ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミン、及び、
N-(3-(アゼパン-1-イル)プロピル)-5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル) ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミン
からなる群から選択される少なくとも１つの化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有してなる医薬組成物又はＴＬＲ９阻害剤に関する。
【００２２】
また、本発明は、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とするＴＬＲ９シグナルの活性化に起因する疾患の予防及び／又は治療剤に関する。より詳細には、本発明は、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とする関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群若しくは血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の予防及び／又は治療剤に関する。
【００２３】
また、本発明は、ＴＬＲ９シグナルの活性化に起因する疾患、例えば、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群若しくは血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）等の予防及び／又は治療剤の製造のための、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の使用に関する。
【００２４】
また、本発明は、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の有効量を患者に投与する、ＴＬＲ９シグナルの活性化に起因する疾患、例えば、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群若しくは血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）等の予防及び／又は治療方法に関する。
【発明の効果】
【００２５】
本発明のＴＬＲ９阻害剤の有効成分である、一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物は、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群、血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）等の予防及び／又は治療剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】化合物１の1Ｈ−ＮＭＲのチャートである。
【図２】化合物２の1Ｈ−ＮＭＲのチャートである。
【図３】化合物３の1Ｈ−ＮＭＲのチャートである。
【図４】化合物４の1Ｈ−ＮＭＲのチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
以下、本発明について詳細に説明する。本発明における用語の定義は以下のとおりである。
【００２８】
本発明において、「ハロゲン原子」としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
【００２９】
本発明において、「Ｃ1-10アルキル基」とは、直鎖又は分岐鎖の炭素数１〜１０の飽和炭化水素基を意味する。「Ｃ1-10アルキル基」としては、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｎ−ヘキシル基、イソヘキシル基等が挙げられる。
【００３０】
本発明において、「Ｃ1-6アルキル基」とは、直鎖又は分岐鎖の炭素数１〜６の飽和炭化水素基を意味する。「Ｃ1-6アルキル基」としては、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｎ−ヘキシル基、イソヘキシル基等が挙げられる。
【００３１】
本発明において、「Ｃ1-3アルキル基」とは、直鎖又は分岐鎖の炭素数１〜３の飽和炭化水素基を意味する。「Ｃ1-3アルキル基」としては、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基等が挙げられる。
【００３２】
本発明において、「Ｃ6-10アリール基」とは、単環式又は縮合環式の芳香族炭化水素基を意味する。具体的には、例えば、フェニル基、アズレニル基、ナフチル基等が挙げられる。
【００３３】
本発明において、「酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員複素環基」とは、１個以上の酸素原子又は窒素原子を環内に含有する、飽和又は不飽和の５〜７員複素環基を意味する。ここで、「不飽和の５〜７員複素環基」には、５〜７員芳香族複素環基等が含まれる。「酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員複素環基」としては、例えば、アゼチジニル基、ピロリジニル基、ピペリジニル基、アゼパニル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、チオモルホリニル−Ｓ−オキシド基、チオモルホリニル−Ｓ,Ｓ−ジオキシド基、ピペラジニル基、Ｎ−メチルピペラジニル基、ピリジル基、ピリミジニル基、ピリダジニル基、ピラジニル基、ピロリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、チアゾリル基、オキサゾリル基等が挙げられる。
【００３４】
本発明において、「酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員飽和複素環基」とは、１個以上の酸素原子又は窒素原子を環内に含有する、飽和の５〜７員複素環基を意味する。「酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員飽和複素環基」としては、例えば、２−オキセパニル基、３−オキセパニル基、４−オキセパニル基、２−ピラニル基、３−ピラニル基、４−ピラニル基、２−テトラヒドロフラニル基、３−テトラヒドロフラニル基、オキサゾリジニル基、モルホリニル基等が挙げられる。
【００３５】
本発明において、「酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員芳香族複素環基」とは、１個以上の酸素原子又は窒素原子を環内に含有する、芳香族の５〜７員複素環基を意味する。「酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員芳香族複素環基」としては、例えば、フラニル基、オキサゾリニル基、オキサジアゾリニル基等が挙げられる。
【００３６】
一般式（１）中、Ｒ1における「酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員複素環基」は、「酸素原子を含む５〜７員複素環基」又は「酸素原子又は窒素原子を含む５又は６員複素環基」が好ましく、「酸素原子を含む５又は６員複素環基」がより好ましい。さらに、例えば、テトラヒドロピラニル基等の「酸素原子を含む５又は６員飽和複素環基」又はフラニル基等の「酸素原子を含む５又は６員芳香族複素環基」が最も好ましい。
【００３７】
一般式（１）中、Ｒ1における置換基である「Ｃ1-10アルキル基」は、好ましくは「Ｃ1-6アルキル基」であり、より好ましくは「Ｃ1-3アルキル基」であり、最も好ましくはメチル基である。
【００３８】
一般式（１）中、Ｒ2又はＲ3における「Ｃ1-10アルキル基」としては、好ましくは「Ｃ1-6アルキル基」であり、より好ましくは「Ｃ1-3アルキル基」であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基である。
【００３９】
一般式（１）中、Ｒ4又はＲ5におけるＣ1-10アルキル基としては、好ましくは「Ｃ1-6アルキル基」であり、より好ましくは「Ｃ1-3アルキル基」であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基である。一般式（１）中、Ｒ4又はＲ5における「Ｃ1-3アルキル基の置換基」としては、フェニル基が好ましい。一般式（１）中、Ｒ4又はＲ5が一緒になって形成する「酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員飽和複素環基」としては、アゼパニル基が好ましい。
【００４０】
一般式（１）中、ｎは、２〜４が好ましく、３が好ましい。
【００４１】
本発明の一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体の具体例として、下記化合物を挙げることができる。
【００４２】
【表１】
【００４３】
本発明の一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物は、本発明のピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体のみならず、その医薬として許容される塩、それらの各種の水和物や溶媒和物、及び結晶多形を有する物質、及びこれらの物質のプロドラッグとなる物質を包含している。
【００４４】
本発明の一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体の許容される塩としては、具体的には、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等）や有機酸（例えば、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等）との酸付加塩等が挙げられる。
【００４５】
本発明の一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体やその医薬として許容される塩の溶媒和物としては、水和物や各種の溶媒和物（例えば、エタノール等のアルコールとの溶媒和物等）が挙げられる。
【００４６】
本発明の一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体は、公知の方法により製造することができる。ピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体の製造方法を下記反応工程図に示すが、製造法はこれに限定されるものではない。
【００４７】
【化２】
【００４８】
［式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、ｎは、前記定義と同じものを示し、Ｒは低級アルキル基を示し、Ｘ1、Ｘ2は脱離基を示す。］
【００４９】
［工程１］オキソ体（ＩＩ）とアセトニトリルとを塩基存在下に反応させ、オキソプロパノニトリル誘導体（ＩＩＩ）を製造することができる。本工程で用いる塩基としては、特に制限はないが、例えば、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、コリジン、ルチジン、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン（ＤＢＮ）、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ジイソプロピルペンチルアミン、トリメチルアミン等の有機塩基類；ナトリウムメトキシド、カリウムメトキシド、ナトリウムｔ−ブトキシド、カリウムｔ−ブトキシド等のアルコラート類；水素化リチウム、水素化ナトリウム、水素化カリウム、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等の無機塩基類等が挙げられる。本工程で用いる溶媒としては、反応を阻害しないものであれば特に制限はないが、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド等のアミド類；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールジメチルエーテル等のエーテル類；ジメチルスルホキシド、スルホラン等のスルホキシド類；ジクロロメタン、１、２−ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類等が挙げられる。本工程における反応温度は、使用する原料、溶媒によって異なるが、通常、０〜１２０℃、好ましくは２０℃〜１００℃であり、反応時間は、通常、１時間〜３日間、好ましくは３時間〜２４時間である。
【００５０】
［工程２］オキソプロパノニトリル誘導体（ＩＩＩ）とヒドラジン（ＩＶ）を反応させ、ピラゾール誘導体（Ｖ）を製造することができる。ヒドラジンが塩である場合には、塩基を添加することができ、用いられる塩基としては、特に制限はないが、例えば、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、コリジン、ルチジン、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン（ＤＢＮ）、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ジイソプロピルペンチルアミン、トリメチルアミン等の有機塩基類；水素化リチウム、水素化ナトリウム、水素化カリウム、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等の無機塩基類等が挙げられる。本工程で用いる溶媒としては、反応を阻害しないものであれば特に制限はないが、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド等のアミド類；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールジメチルエーテル等のエーテル類；ジメチルスルホキシド、スルホラン等のスルホキシド類；ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類；メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｔ−ブタノール等のアルコール類等が挙げられる。本工程における反応温度は、使用する原料、溶媒によって異なるが、通常、室温〜１２０℃、好ましくは５０℃〜１００℃であり、反応時間は、通常、３０分〜３日間、好ましくは１時間〜２４時間である。
【００５１】
［工程３］ピラゾール誘導体（Ｖ）と３−オキソエステル誘導体（VI）を反応させ、ピラゾロピリミジン誘導体（VII）を製造することができる。このとき、酸又は塩基を反応促進剤として添加してもよい。酸としては、塩化水素、臭化水素、ｐ−トルエンスルホン酸、酢酸等のブレンステッド酸類；塩化アンモニウム、ヘキサフルオロアンチモン酸ピリジニウム等のアンモニウム塩類；トリメチルシリルトリフラート、三フッ化ホウ素エーテラート、四塩化チタン、スカンジウムトリフラート等のルイス酸類等が挙げられる。塩基としては、水素化リチウム、水素化ナトリウム、水素化カリウムなどの無機塩基やナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウムメトキシド、カリウムエトキシドなどのアルコールアルカリ金属塩を用いることができる。本工程で用いる溶媒としては、反応を阻害しないものであれば特に制限はないが、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド等のアミド類；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールジメチルエーテル等のエーテル類；ジメチルスルホキシド、スルホラン等のスルホキシド類；ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類；トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類；酢酸等が挙げられる。本工程における反応温度は、使用する原料、溶媒によって異なるが、通常、室温〜１５０℃、好ましくは５０℃〜１２０℃であり、反応時間は、通常、３０分〜３日間、好ましくは１時間〜２４時間である。
【００５２】
［工程４］ピラゾロピリミジン誘導体（VII）の水酸基を脱離基（Ｘ2）に変換することで、化合物（VIII）を製造することができる。Ｘ2で示される脱離基としては、例えば、ハロゲン原子（塩素原子、臭素原子等）、置換スルホニルオキシ基（メタンスルホニルオキシ基、エタンスルホニルオキシ基、ベンゼンスルホニルオキシ基、ｐ−トルエンスルホニルオキシ基等）、複素環基あるいはアリール基で置換されたオキシ基（コハク酸イミドオキシ基、ベンゾトリアゾールオキシ基、キノリルオキシ基、４−ニトロフェノキシ基等）等が挙げられる。例えば、Ｘ2がベンゾトリアゾールオキシの場合、ピラゾロピリミジン誘導体（VII）とヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾール-1-イルオキシトリス(ジメチルアミノ)ホスホニウム（ＢＯＰ）を塩基の存在下に反応することにより製造することができる。塩基としては、特に制限はないが、例えば、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、コリジン、ルチジン、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン（ＤＢＮ）、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ジイソプロピルペンチルアミン、トリメチルアミン等の有機塩基類；ナトリウムメトキシド、カリウムメトキシド、ナトリウムｔ−ブトキシド、カリウムｔ−ブトキシド等のアルコラート類；水素化リチウム、水素化ナトリウム、水素化カリウム、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等の無機塩基類等が挙げられる。溶媒としては、反応を阻害しないものであれば特に制限はないが、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド等のアミド類；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールジメチルエーテル等のエーテル類；ジメチルスルホキシド、スルホラン等のスルホキシド類；ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類、アセトニトリル等のニトリル類等が挙げられる。本工程における反応温度は、使用する原料、溶媒によって異なるが、通常、０〜１５０℃、好ましくは５０℃〜１００℃であり、反応時間は、通常、３０分〜３日間、好ましくは１時間〜２４時間である。
【００５３】
［工程５］化合物（VIII）を塩基存在下、アミン（IX）を反応させピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体（I）を製造することができる。アミン（IX）は市販品を用いてもよいが、入手困難な場合は公知の手法を用い製造してもよい。本工程で用いる塩基としては、特に制限はないが、例えば、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、コリジン、ルチジン、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン（ＤＢＮ）、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ジイソプロピルペンチルアミン、トリメチルアミン等の有機塩基類；水素化リチウム、水素化ナトリウム、水素化カリウム、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等の無機塩基類等が挙げられる。本工程で用いる溶媒としては、反応を阻害しないものであれば特に制限はないが、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド等のアミド類；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールジメチルエーテル等のエーテル類；ジメチルスルホキシド、スルホラン等のスルホキシド類；ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類；アセトニトリル等のニトリル類等が挙げられる。本工程における反応温度は、使用する原料、溶媒によって異なるが、通常、室温〜１２０℃、好ましくは２０℃〜１００℃であり、反応時間は、通常、３０分〜３日間、好ましくは１時間〜２４時間である。
【００５４】
前記の各反応で得られた中間体及び目的物は、有機合成化学で常用されている精製法、例えば、ろ過、抽出、洗浄、乾燥、濃縮、再結晶、各種クロマトグラフィー等に付して必要に応じて単離、精製することができる。また、中間体においては、特に精製することなく次反応に供することもできる。
【００５５】
さらに、各種の異性体は異性体間の物理化学的性質の差を利用した常法を適用して単離できる。例えば、ラセミ混合物は、例えば、酒石酸等の一般的な光学活性酸とのジアステレオマー塩に導き光学分割する方法、又は、光学活性カラムクロマトグラフィーを用いた方法等の一般的ラセミ分割法により、光学的に純粋な異性体に導くことができる。また、ジアステレオマー混合物は、例えば、分別結晶化又は各種クロマトグラフィー等により分割できる。また、光学活性な化合物は適当な光学活性な原料を用いることにより製造することもできる。
【００５６】
本発明のＴＬＲ９阻害剤、あるいは自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の予防及び／又は治療剤は、一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体、その塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有するものであって、医薬組成物として使用することができる。その場合、本発明の化合物を単独で用いてもよいが、通常は医薬として許容される担体、及び／又は希釈剤を配合して使用される。
【００５７】
投与経路は、特に限定されないが、治療目的に応じて適宜選択することができる。例えば、経口剤、注射剤、坐剤、吸入剤等のいずれでもよい。これらの投与形態に適した医薬組成物は、公知の製剤方法を利用することによって製造できる。
【００５８】
経口用固形製剤を調製する場合は、一般式（１）で表される化合物に医薬として許容される賦形剤、更に必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を加えた後、常法を利用して、錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等を製造することができる。添加剤は、当該分野で一般的に使用されているものでよい。例えば、賦形剤としては、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、珪酸等が挙げられる。結合剤としては、例えば、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。崩壊剤としては、例えば、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖等が挙げられる。滑沢剤としては、例えば、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコール等が挙げられる。矯味剤としては、例えば、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等が挙げられる。
【００５９】
経口用液体製剤を調製する場合は、一般式（１）で表される化合物に、矯味剤、緩衝剤、安定化剤、矯臭剤等を加えて常法を利用して内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等を製造することができる。矯味剤としては上記に挙げられたものでよく、緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウム等が、安定化剤としては、例えば、トラガント、アラビアゴム、ゼラチン等が挙げられる。
【００６０】
注射剤を調製する場合は、一般式（１）で表される化合物にｐＨ調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤等を添加し、常法を利用して皮下、筋肉及び静脈内注射剤を製造することができる。ｐＨ調製剤及び緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム等が挙げられる。安定化剤としては、例えば、ピロ亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡ（エデト酸ナトリウム）、チオグリコール酸、チオ乳酸等が挙げられる。局所麻酔剤としては、例えば、塩酸プロカイン、塩酸リドカイン等が挙げられる。等張化剤としては、例えば、塩化ナトリウム、ブドウ糖等が挙げられる。
【００６１】
坐剤を調製する場合は、一般式（１）で表される化合物に公知の坐剤用担体、例えば、ポリエチレングリコール、ラノリン、カカオ脂、脂肪酸トリグリセライド等、更に必要に応じて界面活性剤（例えば、ツイーン（登録商標））等を加えた後、常法を利用して製造することができる。
【００６２】
上記以外に、常法を利用して適宜好ましい製剤とすることもできる。
【００６３】
本発明の一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体の投与量は年齢、体重、症状、投与形態及び投与回数等によって異なるが、通常は成人に対して一般式（１）で表わされる化合物として１日あたり０．１ｍｇ〜１０００ｍｇ、好ましくは１ｍｇ〜１０００ｍｇ、より好ましくは１ｍｇ〜５００ｍｇを、１回又は数回に分けて経口投与又は非経口投与するのが好ましい。
【実施例】
【００６４】
以下に実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、下記実施例中で用いられている略号は下記の意味を示す。
Ｈｚ：ヘルツ（Ｈｅｒｔｚ）
ＣＤＣｌ3：重クロロホルム
ＤＭＳＯ−ｄ６：重ジメチルスルホキシド
ＣＤ3ＯＤ：重メタノール
1Ｈ-ＮＭＲ：プロトン核磁気共鳴
ＩＲ：赤外線吸収スペクトル
【００６５】
また、本明細書中で使用する「Ｒｔ」との用語は、その化合物に関連した液体クロマトグラフ質量分析（ＬＣ−ＭＳ）の保持時間（単位：分間）を意味する。特に明記しない限り、報告された保持時間を得るのに使用されるＬＣ−ＭＳ方法は、以下の通りである：
使用機器：Surveyor MSQ (Thermo Finnigan、USA)
カラム： Waters SunFire C18 culumn （２．１ｘ３０ｍｍ、３．５μｍ）
勾配：１００％［水＋０．１％ギ酸］（０．１分）〜（３分）〜１００％アセトニトリル（０．９分）計４．０分
流速： １．５ｍＬ／分
検出： フォトダイオードアレイ検出器１９０〜８００ｎｍ
イオン化法：大気圧化学イオン化法
検出法：蒸発光散乱検出
ＭＳ検出範囲：４５〜１０００Ｄ
注入量：３μＬ
【００６６】
［実施例１］N1-ベンジル-N3-(5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル)- N1-エチルプロパン-1,3-ジアミン（化合物１）の製造法
【００６７】
工程１：3-オキソ-3-(テトラヒドロピラン-4-イル)プロピオニトリルの製造
メチル テトラヒドロ-2H-ピラン-4-カルボキシレート（５０．０ｇ，０．３４７ｍｏｌ）とアセトニトリル（５４．６７ｍＬ，１．０４０ｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）に加え、氷冷下撹拌しながらカリウムt-ブトキシド（１１６ｇ，１．０４ｍｏｌ）を加え、室温へ昇温した。反応終了後、ｐＨ５−６になるまで飽和クエン酸水溶液を加え、減圧下溶媒を留去した。残渣をジクロロメタンに溶解し、水を加え抽出後、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、3-オキソ-3-(テトラヒドロピラン-4-イル)プロピオニトリルの粗結晶（４７．８ｇ）を得た。
【００６８】
工程２：5-(テトラヒドロピラン-4-イル)-2H-ピラゾール-3-イルアミンの製造
粗3-オキソ-3-(テトラヒドロピラン-4-イル)プロピオニトリル（４７．８ｇ，０．３１２ｍｏｌ）をイソプロパノール（２００ｍＬ）に溶解後、ヒドラジン（７８．０ｇ，１．５６ｍｏｌ）を少量ずつ添加し、反応溶液を３時間加熱還流した。冷却後、反応溶液に水を加え希釈し、酢酸を加えた後、ジクロロメタンを加え抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、5-(テトラヒドロピラン-4-イル)-2H-ピラゾール-3-イルアミンの粗結晶（４１．７ｇ）を得た。
【００６９】
工程３：5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロピラン-4-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-オールの製造
粗5-(テトラヒドロピラン-4-イル)-2H-ピラゾール-3-イルアミン（４１．７ｇ，０．２５０ｍｏｌ）を酢酸（１５０ｍＬ）に溶解し、2-メチル-3-オキソ酪酸メチルエステル（３２．５ｇ，０．２５ｍｏｌ）を加えた。反応溶液を６０〜６５℃に昇温し、８時間反応させた。冷却後、反応溶液に水を加え、粗結晶を濾過し、水で洗浄した。得られた粗結晶を６０℃（１ｍｍＨｇ）で８時間乾燥し、5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロピラン-4-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-オールの粗結晶（３７．１ｇ）を得た。
【００７０】
工程４：1-[5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロピラン-4-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イルオキシ]-1H-ベンゾトリアゾールの製造法
粗5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロピラン-4-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-オール（２１．０ｇ，０．０８５ｍｏｌ）をアセトニトリル（２００ｍＬ）に溶解し、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ-7-エン（１４．３ｇ，０．０９４ｍｏｌ）とヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾール-1-イルオキシトリス(ジメチルアミノ)ホスホニウム（４１．６ｇ，０．０９４ｍｏｌ）を加え、３時間加熱還流した。冷却後、減圧下溶媒を留去し、残渣をジクロロメタンに溶解し、水を加え抽出後、有機層を炭酸カリウム水溶液で洗浄後、減圧下溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、1-[5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロピラン-4-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イルオキシ]-1H-ベンゾトリアゾールの粗結晶（２６．３ｇ）を得た。
【００７１】
工程５：N1-ベンジル-N3-(5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル)- N1-エチルプロパン-1,3-ジアミンの製造法
粗1-[5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロピラン-4-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イルオキシ]-1H-ベンゾトリアゾール（２６．２ｇ，０．０７２ｍｏｌ）をジオキサン（１００ｍＬ）に溶解し、N1-ベンジル-N1-エチルプロパン-1,3-ジアミンを加え、５０℃で３時間撹拌した。冷却後、減圧下溶媒を留去し、残渣をジクロロメタンを加え溶解し、５％水酸化ナトリウム水溶液を加え抽出し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下溶媒を留去した。生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物１（１８．８ｇ，０．０４４６ｍｏｌ，６２％）を得た。
【００７２】
Ｒｔ＝２．３０ｍｉｎ
ＭＳ 実測値 ［Ｍ＋Ｈ］+＝４２２
【００７３】
N1-(5,6-ジメチル-2-(2-メチルフラン-3-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル)-N3,N3-ジエチルプロパン-1,3-ジアミン（化合物２）も実施例１と同様の手法で製造した。
【００７４】
Ｒｔ＝２．２０ｍｉｎ
ＭＳ 実測値 ［Ｍ＋Ｈ］+＝３５６
【００７５】
N-(3-(アゼパン-1-イル)プロピル)-6-エチル-5-メチル-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル) ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミン（化合物３）も実施例１と同様の手法で製造した。
【００７６】
Ｒｔ＝１．８３ｍｉｎ
ＭＳ 実測値 ［Ｍ＋Ｈ］+＝４００
【００７７】
N-(3-(アゼパン-1-イル)プロピル)-5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル) ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミン（化合物４）も実施例１と同様の手法で製造した。
【００７８】
Ｒｔ＝２．２０ｍｉｎ
ＭＳ 実測値 ［Ｍ＋Ｈ］+＝３８６
【００７９】
［実施例２］ＴＬＲ９発現レポーター細胞を用いたＴＬＲ９活性化阻害試験
１）ＴＬＲ９発現レポーター細胞の樹立
ヒトＴＬＲ９発現細胞は、ヒト胎児腎臓細胞株であるＨＥＫ２９３にヒトＴＬＲ９を発現させた細胞をＩｎｖｉｖｏｇｅｎ社より購入した（ｈＴＬＲ９／２９３ｘＬ）。ｈＴＬＲ９／２９３ｘＬは１０％ウシ胎仔血清、ペニシリン、ストレプトマイシンを含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ（ｓｉｇｍａ社））を用いて継代培養した。ＮＦκＢ認識配列の４回繰り返しにホタルルシフェラーゼ遺伝子を連結したｐＧＬ４．２８（Ｐｒｏｍｅｇａ社）をＦｕｇｅｎｅ６（Ｒｏｃｈｅ社）を用いてリポフェクションにより遺伝子導入した。ハイグロマイシン、ブラストサイジン耐性細胞クローンを選択し、ＴＬＲ９発現レポーター細胞とした（ｈＴＬＲ９ ＮＦκＢ−ｌｕｃ／２９３ｘＬ）。
【００８０】
２）ＴＬＲ９活性化阻害試験
ｈＴＬＲ９ ＮＦκＢ−ｌｕｃ／２９３ｘＬを９６ウェルホワイトマイクロタイタープレートに１．０×１０4／８０μＬで播き、ＣＯ2インキュベータ中で３７℃、１晩培養した。ＤＭＥＭにより希釈した被検化合物（１０μＬ）を添加し、終濃度０．０１、０．０３、０．１、０．３、１μＭとした。１時間後にＴＬＲ９リガンドであるＣｐＧ−Ｂ ＤＮＡ（ＯＤＮ２００６）（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ社）を終濃度１μＭとなるように添加した（１０μＬ）。合計１００μＬとして４時間ＣＯ2インキュベータ中でインキュベート後にルシフェラーゼ活性をＴＬＲ９活性として測定した。ルシフェラーゼ活性はＢｒｉｇｈｔ Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を６０μＬ添加し、マルチマイクロプレートリーダーＡＲＶＯ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ社）により発光量を測定した。被検化合物を添加していない場合のルシフェラーゼ活性を１００％として、各被検化合物の５０％阻害濃度（ＩＣ50値）を計算した。また、被験化合物として用いた各ピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体はＡｓｉｎｅｘ社より入手可能であり、本試験においては同社より購入したものをそのまま用いた。
【００８１】
３）結果
化合物１は０．９１μＭ、化合物２は０．５３μＭ、化合物３は０．９３μＭ、化合物４は０．９５μＭのＩＣ50値を示した。以上より、本発明の化合物は強いＴＬＲ９阻害作用を有していることが確認された。したがって、本発明の一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体は、ＴＬＲ９阻害剤として、ＴＬＲ９シグナルの活性化に関連する疾患、例えば、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群、血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶および移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の予防剤や治療剤の有効成分として有用であることがわかった。
【産業上の利用可能性】
【００８２】
本発明は、一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物が、優れたＴＬＲ９阻害作用を有していることを初めて見出したものであり、自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶および移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の予防及び／又は治療剤を提供するものである。本発明は、自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶および移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の予防及び／又は治療剤を提供し、製薬工業において有用であり、産業上の利用可能性を有している。
【技術分野】
【０００１】
本発明はＴｏｌｌ様受容体（Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ＴＬＲ）９阻害作用を有し、ＴＬＲ９シグナルの活性化に起因する疾患、例えば関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群、血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶および移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の予防及び／又は治療剤として有用な新規化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
病原体が生体に進入すると、免疫系はそれらの病原体をすみやかに識別し排除する。哺乳類では免疫系は大きく自然免疫と獲得免疫に分けることが出来る。獲得免疫では、遺伝子再構成という方法で無数の個々に異なる抗原特異性を有する受容体がＴ細胞やＢ細胞表面に発現され、あらゆる未知の外来抗原に対処する（非特許文献１）。
【０００３】
一方で、マクロファージや樹状細胞などによって担われる自然免疫系は非特異的な免疫応答で微生物の排除が行われると考えられていたが、Ｔｏｌｌ様受容体（Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ＴＬＲ）の発見や樹状細胞を中心とした諸研究の急速な進展により、適応免疫系における抗原認識ほどの親和性や特異性は高くない、特徴的な微生物認識機構が存在していることが明らかになってきた（非特許文献２）。とくにＴＬＲに代表される細胞内にシグナルを伝達する認識受容体は、感染をいち早く前線においてキャッチするという役割のみならず、その後、細胞内にシグナルを伝え、自然免疫系活性化のスイッチをオンにする重要な役割がある。その意味において、これまで知られていた自然免疫系の活性化によって誘導されるＩ型インターフェロン等のサイトカインやケモカイン、そして抗原提示に関与する分子群の遺伝子発現誘導と、その後の適応免疫系の活性化へと連携させて特異的な免疫応答発動へと導くという経路が明らかとなった（非特許文献２）。
【０００４】
ＴＬＲ９は細菌のＣｐＧ ＤＮＡを認識して活性化される。ＣｐＧ ＤＮＡは細菌のゲノムＤＮＡの特徴的な配列で、メチル化されてないＣｐＧ配列がある頻度で繰り返されている。哺乳類のゲノムＤＮＡではＣｐＧ配列の頻度が少なく高頻度にメチル化されているため、免疫賦活作用はない（非特許文献３）。
【０００５】
これまでＤＮＡセンサーの一つとして知られていたＴＬＲ９に関しては多くの研究がなされ、その詳細がかなり明らかになってきている。ＴＬＲ９はエンドソームやライソソームにおいて細胞外に存在するＤＮＡを認識する受容体として機能し、Ｉ型インターフェロンや炎症性サイトカインの遺伝子発現を誘導する。この両者ともＭｙＤ８８依存性のシグナル伝達経路を介するが、前者がＩＲＡＫ１／ＩＫＫα−ＩＲＦ−７が関与するのに対し、後者では、ＮＦ−κＢやＩＲＦ−５やＭＡＰキナーゼの経路が関与する。ＭｙＤ８８にはＩＲＦ−７やＩＲＦ−５の他に、ＩＲＦ−１やＩＲＦ−４が会合することが知られているが（非特許文献４、５、６）、ＴＬＲ９下流で関与するＩＲＦ転写因子の種類や役割は細胞の種類によって異なっている。
【０００６】
上記に示したようにＴＬＲ９はＤＮＡをリガンドとして認識するが、正常な状態では自己ＤＮＡはリガンドとして認識されず、自然免疫を活性化しない。これは細胞死により放出された自己ＤＮＡは血清中のヌクレアーゼによりＴＬＲにより認識される前に分解されるからである。またＴＬＲ９の細胞表面ではなく、エンドソームでの細胞内局在も自己ＤＮＡを認識しない機構として考えられている。
【０００７】
しかしながら、自己免疫反応や炎症が起こっている状況下ではこのような防御機構が破綻し、内在性のタンパク質と複合体を形成し、ＴＬＲ９シグナルを活性化することが考えられる（非特許文献７）。
【０００８】
これらのことからＴＬＲ９を阻害することにより、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群、血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶および移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）を改善することが可能であると考えられる。
【０００９】
関節リウマチ（ＲＡ）についてはＴＬＲ９阻害作用を有する核酸配列を用いて、ＴＬＲ９を阻害することによりプリスタン誘導性ラット関節炎モデルにおいて発症と病態が抑制されたことが報告されている（非特許文献８）。また抗マラリア薬であるヒドロキシクロロキンはエンドソームの酸性化抑制によりＴＬＲ７、９の阻害作用を有していることが知られ、日本を除くほとんどの国で関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の治療薬として承認されている（非特許文献９）。
【００１０】
ＳＬＥについてはＴＬＲ９ノックアウトマウスにおいてＳＬＥ様の病体において見られる抗核抗体の減弱が報告されており（非特許文献１０）、ＴＬＲ９阻害作用を有する核酸を用いた実験においても同様の結果が報告されている（非特許文献１１）。さらに同様の結果を有する低分子化合物についても報告されている（ＣＰＧ５２３６４：特許文献１）。
【００１１】
ヒドロキシクロロキンはＴＬＲ９阻害作用としてはそれほど強くなく、さらに強いＴＬＲ９阻害作用を有する薬剤により、より強力な薬効が期待できる。またヒドロキシクロロキンにはクロロキン網膜症などの副作用が知られているが、異なる骨格の化合物により、このような副作用の懸念は払拭できる可能性も考えられる。したがって、強いＴＬＲ９阻害作用を示し、経口投与可能な低分子性の薬剤が、今後の関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群、血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶および移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の治療において有用であると考えられる。
【００１２】
一方、ピラゾロピリミジン誘導体としては、例えば、ＣＤＫ阻害作用を有し癌、炎症、関節炎、アルツハイマー病などの治療薬としての効果が知られている(特許文献２、３、４、５、６、７)。また、ＣＣＲ４機能調節作用を有し、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、関節炎リウマチ、全身性エリテマトーデスなどの治療薬としての効果も知られている（特許文献８、９）。また、Ｒａｆキナーゼ阻害能を有し癌疾患や炎症性疾患の治療効果をもつこと（特許文献１０）や、毛髪染料としての用途（特許文献１１）、一酸化窒素合成酵素阻害能を有し、鎮痛剤や敗血症、リウマチ等の治療効果を持つこと（特許文献１２）が知られている。しかしながら、これらの文献に開示されている化合物は、ピラゾロピリミジン環上の置換様式が本発明の化合物と異なる。また、いずれの文献においてもＴＬＲ９阻害能に関する記載や示唆はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】ＷＯ２００８／１５２４７１パンフレット
【特許文献２】ＷＯ２００４／０２２５６１号パンフレット
【特許文献３】ＷＯ２００５／０７７９５４号パンフレット
【特許文献４】特表２００９−５１１４８７号公報
【特許文献５】ＷＯ２０１０／１１８２０７号パンフレット
【特許文献６】ＷＯ２００８／１３０５７０号パンフレット
【特許文献７】ＷＯ２００８／１３０５６９号パンフレット
【特許文献８】ＷＯ２００７／０６３９３４号パンフレット
【特許文献９】特開２００９−００７３４１号公報
【特許文献１０】特表２０１１−５１３３３４号公報
【特許文献１１】特表２００２−５３５３３３号公報
【特許文献１２】特開平１１−２７９１７８号公報
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】植松智ら ウイルス，５４：１４５−１５２（２００４）
【非特許文献２】高岡晃教ら ウイルス，５８：３７−４６（２００８）
【非特許文献３】Ｔａｋｅｄａ Ｋ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２１：３３５−３７６（２００３）
【非特許文献４】Ｈｏｎｄａ Ｋ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０１：１５４１６−１５４２１（２００４）
【非特許文献５】Ｎｅｇｉｓｈｉ Ｈ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０２：１５９８９−１５９９４（２００５）
【非特許文献６】Ｎｅｇｉｓｈｉ Ｈ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：１５１３６−１５１４１（２００６）
【非特許文献７】Ｋｉｍ，Ｙ．Ｍ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４５２：２３４−２３８（２００８）
【非特許文献８】Ｓ Ｈｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．，７０ ：Ａ３９ ｄｏｉ：１０．１１３６／ａｒｄ．２０１０．１４８９７３．８（２０１１）
【非特許文献９】横川直人，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｈｅｒａｐｙ，２８：８５−９１（２０１０）
【非特許文献１０】Ｓｅａｎ Ｒ．Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，２０２：３２１−３３１（２００５）
【非特許文献１１】Ｒａｈｕｌ Ｄ．Ｐａｗａｒｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ １８：１７２１-１７３１（２００７）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明の目的は、低分子性のＴＬＲ９阻害作用を有する新規化合物を提供することにある。さらに詳細には、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群、血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶および移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の予防及び／又は治療に有用な医薬を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
上記実情に鑑み、本発明者らは、鋭意ＴＬＲ９阻害作用を持つ化合物を探索した結果、下記一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体が、ヒトＴＬＲ９を発現させたヒト胎児腎臓細胞由来のＨＥＫ２９３細胞を用いた試験においてＴＬＲ９阻害作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１７】
すなわち本発明は、次の一般式（１）：
【００１８】
【化１】
【００１９】
［式中、Ｒ1は、Ｃ1-10アルキル基で置換されていてもよい、酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員複素環基を示し、
Ｒ2、Ｒ3は、互いに同一又は異なっていてもよい、Ｃ1-10アルキル基を示し、
Ｒ4、Ｒ5は、互いに同一又は異なっていてもよい、ハロゲン原子、アミノ基、水酸基及びＣ6-10アリール基からなる群から選ばれる置換基を有していてもよいＣ1-10アルキル基を示すか、あるいはＲ4とＲ5が、一緒になって酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員飽和複素環基を形成してもよく、
ｎは、１〜６から選ばれる整数を示す］
で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物に関する。また、前記一般式（１）に記載の化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とするＴＬＲ９阻害剤に関する。さらに、前記一般式（１）に記載の化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物、及び製薬上許容される担体を含有してなる医薬組成物に関する。
【００２０】
さらに詳細には、本発明は、前記一般式（１）が、
N1-ベンジル-N3-(5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル)- N1-エチルプロパン-1,3-ジアミン、
N1-(5,6-ジメチル-2-(2-メチルフラン-3-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル)-N3,N3-ジエチルプロパン-1,3-ジアミン、
N-(3-(アゼパン-1-イル)プロピル)-6-エチル-5-メチル-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル) ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミン、又は、
N-(3-(アゼパン-1-イル)プロピル)-5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル) ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミン、
である化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物に関する。
【００２１】
また、本発明は、
N1-ベンジル-N3-(5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル)- N1-エチルプロパン-1,3-ジアミン、
N1-(5、6-ジメチル-2-(2-メチルフラン-3-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル)-N3,N3-ジエチルプロパン-1,3-ジアミン、
N-(3-(アゼパン-1-イル)プロピル)-6-エチル-5-メチル-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル) ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミン、及び、
N-(3-(アゼパン-1-イル)プロピル)-5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル) ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミン
からなる群から選択される少なくとも１つの化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有してなる医薬組成物又はＴＬＲ９阻害剤に関する。
【００２２】
また、本発明は、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とするＴＬＲ９シグナルの活性化に起因する疾患の予防及び／又は治療剤に関する。より詳細には、本発明は、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とする関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群若しくは血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の予防及び／又は治療剤に関する。
【００２３】
また、本発明は、ＴＬＲ９シグナルの活性化に起因する疾患、例えば、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群若しくは血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）等の予防及び／又は治療剤の製造のための、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の使用に関する。
【００２４】
また、本発明は、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の有効量を患者に投与する、ＴＬＲ９シグナルの活性化に起因する疾患、例えば、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群若しくは血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）等の予防及び／又は治療方法に関する。
【発明の効果】
【００２５】
本発明のＴＬＲ９阻害剤の有効成分である、一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物は、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群、血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）等の予防及び／又は治療剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】化合物１の1Ｈ−ＮＭＲのチャートである。
【図２】化合物２の1Ｈ−ＮＭＲのチャートである。
【図３】化合物３の1Ｈ−ＮＭＲのチャートである。
【図４】化合物４の1Ｈ−ＮＭＲのチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
以下、本発明について詳細に説明する。本発明における用語の定義は以下のとおりである。
【００２８】
本発明において、「ハロゲン原子」としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
【００２９】
本発明において、「Ｃ1-10アルキル基」とは、直鎖又は分岐鎖の炭素数１〜１０の飽和炭化水素基を意味する。「Ｃ1-10アルキル基」としては、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｎ−ヘキシル基、イソヘキシル基等が挙げられる。
【００３０】
本発明において、「Ｃ1-6アルキル基」とは、直鎖又は分岐鎖の炭素数１〜６の飽和炭化水素基を意味する。「Ｃ1-6アルキル基」としては、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｎ−ヘキシル基、イソヘキシル基等が挙げられる。
【００３１】
本発明において、「Ｃ1-3アルキル基」とは、直鎖又は分岐鎖の炭素数１〜３の飽和炭化水素基を意味する。「Ｃ1-3アルキル基」としては、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基等が挙げられる。
【００３２】
本発明において、「Ｃ6-10アリール基」とは、単環式又は縮合環式の芳香族炭化水素基を意味する。具体的には、例えば、フェニル基、アズレニル基、ナフチル基等が挙げられる。
【００３３】
本発明において、「酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員複素環基」とは、１個以上の酸素原子又は窒素原子を環内に含有する、飽和又は不飽和の５〜７員複素環基を意味する。ここで、「不飽和の５〜７員複素環基」には、５〜７員芳香族複素環基等が含まれる。「酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員複素環基」としては、例えば、アゼチジニル基、ピロリジニル基、ピペリジニル基、アゼパニル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、チオモルホリニル−Ｓ−オキシド基、チオモルホリニル−Ｓ,Ｓ−ジオキシド基、ピペラジニル基、Ｎ−メチルピペラジニル基、ピリジル基、ピリミジニル基、ピリダジニル基、ピラジニル基、ピロリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、チアゾリル基、オキサゾリル基等が挙げられる。
【００３４】
本発明において、「酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員飽和複素環基」とは、１個以上の酸素原子又は窒素原子を環内に含有する、飽和の５〜７員複素環基を意味する。「酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員飽和複素環基」としては、例えば、２−オキセパニル基、３−オキセパニル基、４−オキセパニル基、２−ピラニル基、３−ピラニル基、４−ピラニル基、２−テトラヒドロフラニル基、３−テトラヒドロフラニル基、オキサゾリジニル基、モルホリニル基等が挙げられる。
【００３５】
本発明において、「酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員芳香族複素環基」とは、１個以上の酸素原子又は窒素原子を環内に含有する、芳香族の５〜７員複素環基を意味する。「酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員芳香族複素環基」としては、例えば、フラニル基、オキサゾリニル基、オキサジアゾリニル基等が挙げられる。
【００３６】
一般式（１）中、Ｒ1における「酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員複素環基」は、「酸素原子を含む５〜７員複素環基」又は「酸素原子又は窒素原子を含む５又は６員複素環基」が好ましく、「酸素原子を含む５又は６員複素環基」がより好ましい。さらに、例えば、テトラヒドロピラニル基等の「酸素原子を含む５又は６員飽和複素環基」又はフラニル基等の「酸素原子を含む５又は６員芳香族複素環基」が最も好ましい。
【００３７】
一般式（１）中、Ｒ1における置換基である「Ｃ1-10アルキル基」は、好ましくは「Ｃ1-6アルキル基」であり、より好ましくは「Ｃ1-3アルキル基」であり、最も好ましくはメチル基である。
【００３８】
一般式（１）中、Ｒ2又はＲ3における「Ｃ1-10アルキル基」としては、好ましくは「Ｃ1-6アルキル基」であり、より好ましくは「Ｃ1-3アルキル基」であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基である。
【００３９】
一般式（１）中、Ｒ4又はＲ5におけるＣ1-10アルキル基としては、好ましくは「Ｃ1-6アルキル基」であり、より好ましくは「Ｃ1-3アルキル基」であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基である。一般式（１）中、Ｒ4又はＲ5における「Ｃ1-3アルキル基の置換基」としては、フェニル基が好ましい。一般式（１）中、Ｒ4又はＲ5が一緒になって形成する「酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員飽和複素環基」としては、アゼパニル基が好ましい。
【００４０】
一般式（１）中、ｎは、２〜４が好ましく、３が好ましい。
【００４１】
本発明の一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体の具体例として、下記化合物を挙げることができる。
【００４２】
【表１】
【００４３】
本発明の一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物は、本発明のピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体のみならず、その医薬として許容される塩、それらの各種の水和物や溶媒和物、及び結晶多形を有する物質、及びこれらの物質のプロドラッグとなる物質を包含している。
【００４４】
本発明の一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体の許容される塩としては、具体的には、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等）や有機酸（例えば、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等）との酸付加塩等が挙げられる。
【００４５】
本発明の一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体やその医薬として許容される塩の溶媒和物としては、水和物や各種の溶媒和物（例えば、エタノール等のアルコールとの溶媒和物等）が挙げられる。
【００４６】
本発明の一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体は、公知の方法により製造することができる。ピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体の製造方法を下記反応工程図に示すが、製造法はこれに限定されるものではない。
【００４７】
【化２】
【００４８】
［式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、ｎは、前記定義と同じものを示し、Ｒは低級アルキル基を示し、Ｘ1、Ｘ2は脱離基を示す。］
【００４９】
［工程１］オキソ体（ＩＩ）とアセトニトリルとを塩基存在下に反応させ、オキソプロパノニトリル誘導体（ＩＩＩ）を製造することができる。本工程で用いる塩基としては、特に制限はないが、例えば、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、コリジン、ルチジン、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン（ＤＢＮ）、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ジイソプロピルペンチルアミン、トリメチルアミン等の有機塩基類；ナトリウムメトキシド、カリウムメトキシド、ナトリウムｔ−ブトキシド、カリウムｔ−ブトキシド等のアルコラート類；水素化リチウム、水素化ナトリウム、水素化カリウム、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等の無機塩基類等が挙げられる。本工程で用いる溶媒としては、反応を阻害しないものであれば特に制限はないが、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド等のアミド類；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールジメチルエーテル等のエーテル類；ジメチルスルホキシド、スルホラン等のスルホキシド類；ジクロロメタン、１、２−ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類等が挙げられる。本工程における反応温度は、使用する原料、溶媒によって異なるが、通常、０〜１２０℃、好ましくは２０℃〜１００℃であり、反応時間は、通常、１時間〜３日間、好ましくは３時間〜２４時間である。
【００５０】
［工程２］オキソプロパノニトリル誘導体（ＩＩＩ）とヒドラジン（ＩＶ）を反応させ、ピラゾール誘導体（Ｖ）を製造することができる。ヒドラジンが塩である場合には、塩基を添加することができ、用いられる塩基としては、特に制限はないが、例えば、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、コリジン、ルチジン、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン（ＤＢＮ）、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ジイソプロピルペンチルアミン、トリメチルアミン等の有機塩基類；水素化リチウム、水素化ナトリウム、水素化カリウム、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等の無機塩基類等が挙げられる。本工程で用いる溶媒としては、反応を阻害しないものであれば特に制限はないが、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド等のアミド類；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールジメチルエーテル等のエーテル類；ジメチルスルホキシド、スルホラン等のスルホキシド類；ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類；メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｔ−ブタノール等のアルコール類等が挙げられる。本工程における反応温度は、使用する原料、溶媒によって異なるが、通常、室温〜１２０℃、好ましくは５０℃〜１００℃であり、反応時間は、通常、３０分〜３日間、好ましくは１時間〜２４時間である。
【００５１】
［工程３］ピラゾール誘導体（Ｖ）と３−オキソエステル誘導体（VI）を反応させ、ピラゾロピリミジン誘導体（VII）を製造することができる。このとき、酸又は塩基を反応促進剤として添加してもよい。酸としては、塩化水素、臭化水素、ｐ−トルエンスルホン酸、酢酸等のブレンステッド酸類；塩化アンモニウム、ヘキサフルオロアンチモン酸ピリジニウム等のアンモニウム塩類；トリメチルシリルトリフラート、三フッ化ホウ素エーテラート、四塩化チタン、スカンジウムトリフラート等のルイス酸類等が挙げられる。塩基としては、水素化リチウム、水素化ナトリウム、水素化カリウムなどの無機塩基やナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウムメトキシド、カリウムエトキシドなどのアルコールアルカリ金属塩を用いることができる。本工程で用いる溶媒としては、反応を阻害しないものであれば特に制限はないが、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド等のアミド類；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールジメチルエーテル等のエーテル類；ジメチルスルホキシド、スルホラン等のスルホキシド類；ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類；トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類；酢酸等が挙げられる。本工程における反応温度は、使用する原料、溶媒によって異なるが、通常、室温〜１５０℃、好ましくは５０℃〜１２０℃であり、反応時間は、通常、３０分〜３日間、好ましくは１時間〜２４時間である。
【００５２】
［工程４］ピラゾロピリミジン誘導体（VII）の水酸基を脱離基（Ｘ2）に変換することで、化合物（VIII）を製造することができる。Ｘ2で示される脱離基としては、例えば、ハロゲン原子（塩素原子、臭素原子等）、置換スルホニルオキシ基（メタンスルホニルオキシ基、エタンスルホニルオキシ基、ベンゼンスルホニルオキシ基、ｐ−トルエンスルホニルオキシ基等）、複素環基あるいはアリール基で置換されたオキシ基（コハク酸イミドオキシ基、ベンゾトリアゾールオキシ基、キノリルオキシ基、４−ニトロフェノキシ基等）等が挙げられる。例えば、Ｘ2がベンゾトリアゾールオキシの場合、ピラゾロピリミジン誘導体（VII）とヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾール-1-イルオキシトリス(ジメチルアミノ)ホスホニウム（ＢＯＰ）を塩基の存在下に反応することにより製造することができる。塩基としては、特に制限はないが、例えば、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、コリジン、ルチジン、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン（ＤＢＮ）、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ジイソプロピルペンチルアミン、トリメチルアミン等の有機塩基類；ナトリウムメトキシド、カリウムメトキシド、ナトリウムｔ−ブトキシド、カリウムｔ−ブトキシド等のアルコラート類；水素化リチウム、水素化ナトリウム、水素化カリウム、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等の無機塩基類等が挙げられる。溶媒としては、反応を阻害しないものであれば特に制限はないが、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド等のアミド類；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールジメチルエーテル等のエーテル類；ジメチルスルホキシド、スルホラン等のスルホキシド類；ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類、アセトニトリル等のニトリル類等が挙げられる。本工程における反応温度は、使用する原料、溶媒によって異なるが、通常、０〜１５０℃、好ましくは５０℃〜１００℃であり、反応時間は、通常、３０分〜３日間、好ましくは１時間〜２４時間である。
【００５３】
［工程５］化合物（VIII）を塩基存在下、アミン（IX）を反応させピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体（I）を製造することができる。アミン（IX）は市販品を用いてもよいが、入手困難な場合は公知の手法を用い製造してもよい。本工程で用いる塩基としては、特に制限はないが、例えば、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、コリジン、ルチジン、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン（ＤＢＮ）、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ジイソプロピルペンチルアミン、トリメチルアミン等の有機塩基類；水素化リチウム、水素化ナトリウム、水素化カリウム、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等の無機塩基類等が挙げられる。本工程で用いる溶媒としては、反応を阻害しないものであれば特に制限はないが、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド等のアミド類；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、エチレングリコールジメチルエーテル等のエーテル類；ジメチルスルホキシド、スルホラン等のスルホキシド類；ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類；アセトニトリル等のニトリル類等が挙げられる。本工程における反応温度は、使用する原料、溶媒によって異なるが、通常、室温〜１２０℃、好ましくは２０℃〜１００℃であり、反応時間は、通常、３０分〜３日間、好ましくは１時間〜２４時間である。
【００５４】
前記の各反応で得られた中間体及び目的物は、有機合成化学で常用されている精製法、例えば、ろ過、抽出、洗浄、乾燥、濃縮、再結晶、各種クロマトグラフィー等に付して必要に応じて単離、精製することができる。また、中間体においては、特に精製することなく次反応に供することもできる。
【００５５】
さらに、各種の異性体は異性体間の物理化学的性質の差を利用した常法を適用して単離できる。例えば、ラセミ混合物は、例えば、酒石酸等の一般的な光学活性酸とのジアステレオマー塩に導き光学分割する方法、又は、光学活性カラムクロマトグラフィーを用いた方法等の一般的ラセミ分割法により、光学的に純粋な異性体に導くことができる。また、ジアステレオマー混合物は、例えば、分別結晶化又は各種クロマトグラフィー等により分割できる。また、光学活性な化合物は適当な光学活性な原料を用いることにより製造することもできる。
【００５６】
本発明のＴＬＲ９阻害剤、あるいは自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の予防及び／又は治療剤は、一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体、その塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有するものであって、医薬組成物として使用することができる。その場合、本発明の化合物を単独で用いてもよいが、通常は医薬として許容される担体、及び／又は希釈剤を配合して使用される。
【００５７】
投与経路は、特に限定されないが、治療目的に応じて適宜選択することができる。例えば、経口剤、注射剤、坐剤、吸入剤等のいずれでもよい。これらの投与形態に適した医薬組成物は、公知の製剤方法を利用することによって製造できる。
【００５８】
経口用固形製剤を調製する場合は、一般式（１）で表される化合物に医薬として許容される賦形剤、更に必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を加えた後、常法を利用して、錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等を製造することができる。添加剤は、当該分野で一般的に使用されているものでよい。例えば、賦形剤としては、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、珪酸等が挙げられる。結合剤としては、例えば、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。崩壊剤としては、例えば、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖等が挙げられる。滑沢剤としては、例えば、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコール等が挙げられる。矯味剤としては、例えば、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等が挙げられる。
【００５９】
経口用液体製剤を調製する場合は、一般式（１）で表される化合物に、矯味剤、緩衝剤、安定化剤、矯臭剤等を加えて常法を利用して内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等を製造することができる。矯味剤としては上記に挙げられたものでよく、緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウム等が、安定化剤としては、例えば、トラガント、アラビアゴム、ゼラチン等が挙げられる。
【００６０】
注射剤を調製する場合は、一般式（１）で表される化合物にｐＨ調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤等を添加し、常法を利用して皮下、筋肉及び静脈内注射剤を製造することができる。ｐＨ調製剤及び緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム等が挙げられる。安定化剤としては、例えば、ピロ亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡ（エデト酸ナトリウム）、チオグリコール酸、チオ乳酸等が挙げられる。局所麻酔剤としては、例えば、塩酸プロカイン、塩酸リドカイン等が挙げられる。等張化剤としては、例えば、塩化ナトリウム、ブドウ糖等が挙げられる。
【００６１】
坐剤を調製する場合は、一般式（１）で表される化合物に公知の坐剤用担体、例えば、ポリエチレングリコール、ラノリン、カカオ脂、脂肪酸トリグリセライド等、更に必要に応じて界面活性剤（例えば、ツイーン（登録商標））等を加えた後、常法を利用して製造することができる。
【００６２】
上記以外に、常法を利用して適宜好ましい製剤とすることもできる。
【００６３】
本発明の一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体の投与量は年齢、体重、症状、投与形態及び投与回数等によって異なるが、通常は成人に対して一般式（１）で表わされる化合物として１日あたり０．１ｍｇ〜１０００ｍｇ、好ましくは１ｍｇ〜１０００ｍｇ、より好ましくは１ｍｇ〜５００ｍｇを、１回又は数回に分けて経口投与又は非経口投与するのが好ましい。
【実施例】
【００６４】
以下に実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、下記実施例中で用いられている略号は下記の意味を示す。
Ｈｚ：ヘルツ（Ｈｅｒｔｚ）
ＣＤＣｌ3：重クロロホルム
ＤＭＳＯ−ｄ６：重ジメチルスルホキシド
ＣＤ3ＯＤ：重メタノール
1Ｈ-ＮＭＲ：プロトン核磁気共鳴
ＩＲ：赤外線吸収スペクトル
【００６５】
また、本明細書中で使用する「Ｒｔ」との用語は、その化合物に関連した液体クロマトグラフ質量分析（ＬＣ−ＭＳ）の保持時間（単位：分間）を意味する。特に明記しない限り、報告された保持時間を得るのに使用されるＬＣ−ＭＳ方法は、以下の通りである：
使用機器：Surveyor MSQ (Thermo Finnigan、USA)
カラム： Waters SunFire C18 culumn （２．１ｘ３０ｍｍ、３．５μｍ）
勾配：１００％［水＋０．１％ギ酸］（０．１分）〜（３分）〜１００％アセトニトリル（０．９分）計４．０分
流速： １．５ｍＬ／分
検出： フォトダイオードアレイ検出器１９０〜８００ｎｍ
イオン化法：大気圧化学イオン化法
検出法：蒸発光散乱検出
ＭＳ検出範囲：４５〜１０００Ｄ
注入量：３μＬ
【００６６】
［実施例１］N1-ベンジル-N3-(5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル)- N1-エチルプロパン-1,3-ジアミン（化合物１）の製造法
【００６７】
工程１：3-オキソ-3-(テトラヒドロピラン-4-イル)プロピオニトリルの製造
メチル テトラヒドロ-2H-ピラン-4-カルボキシレート（５０．０ｇ，０．３４７ｍｏｌ）とアセトニトリル（５４．６７ｍＬ，１．０４０ｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）に加え、氷冷下撹拌しながらカリウムt-ブトキシド（１１６ｇ，１．０４ｍｏｌ）を加え、室温へ昇温した。反応終了後、ｐＨ５−６になるまで飽和クエン酸水溶液を加え、減圧下溶媒を留去した。残渣をジクロロメタンに溶解し、水を加え抽出後、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、3-オキソ-3-(テトラヒドロピラン-4-イル)プロピオニトリルの粗結晶（４７．８ｇ）を得た。
【００６８】
工程２：5-(テトラヒドロピラン-4-イル)-2H-ピラゾール-3-イルアミンの製造
粗3-オキソ-3-(テトラヒドロピラン-4-イル)プロピオニトリル（４７．８ｇ，０．３１２ｍｏｌ）をイソプロパノール（２００ｍＬ）に溶解後、ヒドラジン（７８．０ｇ，１．５６ｍｏｌ）を少量ずつ添加し、反応溶液を３時間加熱還流した。冷却後、反応溶液に水を加え希釈し、酢酸を加えた後、ジクロロメタンを加え抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、5-(テトラヒドロピラン-4-イル)-2H-ピラゾール-3-イルアミンの粗結晶（４１．７ｇ）を得た。
【００６９】
工程３：5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロピラン-4-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-オールの製造
粗5-(テトラヒドロピラン-4-イル)-2H-ピラゾール-3-イルアミン（４１．７ｇ，０．２５０ｍｏｌ）を酢酸（１５０ｍＬ）に溶解し、2-メチル-3-オキソ酪酸メチルエステル（３２．５ｇ，０．２５ｍｏｌ）を加えた。反応溶液を６０〜６５℃に昇温し、８時間反応させた。冷却後、反応溶液に水を加え、粗結晶を濾過し、水で洗浄した。得られた粗結晶を６０℃（１ｍｍＨｇ）で８時間乾燥し、5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロピラン-4-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-オールの粗結晶（３７．１ｇ）を得た。
【００７０】
工程４：1-[5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロピラン-4-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イルオキシ]-1H-ベンゾトリアゾールの製造法
粗5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロピラン-4-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-オール（２１．０ｇ，０．０８５ｍｏｌ）をアセトニトリル（２００ｍＬ）に溶解し、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ-7-エン（１４．３ｇ，０．０９４ｍｏｌ）とヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾール-1-イルオキシトリス(ジメチルアミノ)ホスホニウム（４１．６ｇ，０．０９４ｍｏｌ）を加え、３時間加熱還流した。冷却後、減圧下溶媒を留去し、残渣をジクロロメタンに溶解し、水を加え抽出後、有機層を炭酸カリウム水溶液で洗浄後、減圧下溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、1-[5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロピラン-4-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イルオキシ]-1H-ベンゾトリアゾールの粗結晶（２６．３ｇ）を得た。
【００７１】
工程５：N1-ベンジル-N3-(5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル)- N1-エチルプロパン-1,3-ジアミンの製造法
粗1-[5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロピラン-4-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イルオキシ]-1H-ベンゾトリアゾール（２６．２ｇ，０．０７２ｍｏｌ）をジオキサン（１００ｍＬ）に溶解し、N1-ベンジル-N1-エチルプロパン-1,3-ジアミンを加え、５０℃で３時間撹拌した。冷却後、減圧下溶媒を留去し、残渣をジクロロメタンを加え溶解し、５％水酸化ナトリウム水溶液を加え抽出し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下溶媒を留去した。生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物１（１８．８ｇ，０．０４４６ｍｏｌ，６２％）を得た。
【００７２】
Ｒｔ＝２．３０ｍｉｎ
ＭＳ 実測値 ［Ｍ＋Ｈ］+＝４２２
【００７３】
N1-(5,6-ジメチル-2-(2-メチルフラン-3-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル)-N3,N3-ジエチルプロパン-1,3-ジアミン（化合物２）も実施例１と同様の手法で製造した。
【００７４】
Ｒｔ＝２．２０ｍｉｎ
ＭＳ 実測値 ［Ｍ＋Ｈ］+＝３５６
【００７５】
N-(3-(アゼパン-1-イル)プロピル)-6-エチル-5-メチル-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル) ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミン（化合物３）も実施例１と同様の手法で製造した。
【００７６】
Ｒｔ＝１．８３ｍｉｎ
ＭＳ 実測値 ［Ｍ＋Ｈ］+＝４００
【００７７】
N-(3-(アゼパン-1-イル)プロピル)-5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル) ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミン（化合物４）も実施例１と同様の手法で製造した。
【００７８】
Ｒｔ＝２．２０ｍｉｎ
ＭＳ 実測値 ［Ｍ＋Ｈ］+＝３８６
【００７９】
［実施例２］ＴＬＲ９発現レポーター細胞を用いたＴＬＲ９活性化阻害試験
１）ＴＬＲ９発現レポーター細胞の樹立
ヒトＴＬＲ９発現細胞は、ヒト胎児腎臓細胞株であるＨＥＫ２９３にヒトＴＬＲ９を発現させた細胞をＩｎｖｉｖｏｇｅｎ社より購入した（ｈＴＬＲ９／２９３ｘＬ）。ｈＴＬＲ９／２９３ｘＬは１０％ウシ胎仔血清、ペニシリン、ストレプトマイシンを含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ（ｓｉｇｍａ社））を用いて継代培養した。ＮＦκＢ認識配列の４回繰り返しにホタルルシフェラーゼ遺伝子を連結したｐＧＬ４．２８（Ｐｒｏｍｅｇａ社）をＦｕｇｅｎｅ６（Ｒｏｃｈｅ社）を用いてリポフェクションにより遺伝子導入した。ハイグロマイシン、ブラストサイジン耐性細胞クローンを選択し、ＴＬＲ９発現レポーター細胞とした（ｈＴＬＲ９ ＮＦκＢ−ｌｕｃ／２９３ｘＬ）。
【００８０】
２）ＴＬＲ９活性化阻害試験
ｈＴＬＲ９ ＮＦκＢ−ｌｕｃ／２９３ｘＬを９６ウェルホワイトマイクロタイタープレートに１．０×１０4／８０μＬで播き、ＣＯ2インキュベータ中で３７℃、１晩培養した。ＤＭＥＭにより希釈した被検化合物（１０μＬ）を添加し、終濃度０．０１、０．０３、０．１、０．３、１μＭとした。１時間後にＴＬＲ９リガンドであるＣｐＧ−Ｂ ＤＮＡ（ＯＤＮ２００６）（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ社）を終濃度１μＭとなるように添加した（１０μＬ）。合計１００μＬとして４時間ＣＯ2インキュベータ中でインキュベート後にルシフェラーゼ活性をＴＬＲ９活性として測定した。ルシフェラーゼ活性はＢｒｉｇｈｔ Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を６０μＬ添加し、マルチマイクロプレートリーダーＡＲＶＯ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ社）により発光量を測定した。被検化合物を添加していない場合のルシフェラーゼ活性を１００％として、各被検化合物の５０％阻害濃度（ＩＣ50値）を計算した。また、被験化合物として用いた各ピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体はＡｓｉｎｅｘ社より入手可能であり、本試験においては同社より購入したものをそのまま用いた。
【００８１】
３）結果
化合物１は０．９１μＭ、化合物２は０．５３μＭ、化合物３は０．９３μＭ、化合物４は０．９５μＭのＩＣ50値を示した。以上より、本発明の化合物は強いＴＬＲ９阻害作用を有していることが確認された。したがって、本発明の一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体は、ＴＬＲ９阻害剤として、ＴＬＲ９シグナルの活性化に関連する疾患、例えば、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群、血管炎などの自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶および移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の予防剤や治療剤の有効成分として有用であることがわかった。
【産業上の利用可能性】
【００８２】
本発明は、一般式（１）で表されるピラゾロピリミジン−７−アミン誘導体若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物が、優れたＴＬＲ９阻害作用を有していることを初めて見出したものであり、自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶および移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の予防及び／又は治療剤を提供するものである。本発明は、自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶および移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の予防及び／又は治療剤を提供し、製薬工業において有用であり、産業上の利用可能性を有している。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の一般式（１）：
【化１】
［式中、
Ｒ1は、Ｃ1-10アルキル基で置換されていてもよい、酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員複素環基を示し、
Ｒ2、Ｒ3は、互いに同一又は異なっていてもよい、Ｃ1-10アルキル基を示し、
Ｒ4、Ｒ5は、互いに同一又は異なっていてもよい、ハロゲン原子、アミノ基、水酸基及びＣ6-10アリール基からなる群から選ばれる置換基を有していてもよいＣ1-10アルキル基を示すか、あるいはＲ4とＲ5が、一緒になって酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員飽和複素環基を形成してもよく、
ｎは、１〜６から選ばれる整数を示す］
で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とする、ＴＬＲ９阻害剤。
【請求項２】
一般式（１）で表される化合物が、
N1-ベンジル-N3-(5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル)- N1-エチルプロパン-1,3-ジアミン、
N1-(5,6-ジメチル-2-(2-メチルフラン-3-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル)-N3,N3-ジエチルプロパン-1,3-ジアミン、
N-(3-(アゼパン-1-イル)プロピル)-6-エチル-5-メチル-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル) ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミン、又は
N-(3-(アゼパン-1-イル)プロピル)-5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル) ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミン、
である請求項１に記載の阻害剤。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とする、自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病の予防及び／又は治療剤。
【請求項４】
自己免疫疾患が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、多発性硬化症、炎症性腸疾患、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群又は血管炎である、請求項３に記載の予防及び／又は治療剤。
【請求項１】
次の一般式（１）：
【化１】
［式中、
Ｒ1は、Ｃ1-10アルキル基で置換されていてもよい、酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員複素環基を示し、
Ｒ2、Ｒ3は、互いに同一又は異なっていてもよい、Ｃ1-10アルキル基を示し、
Ｒ4、Ｒ5は、互いに同一又は異なっていてもよい、ハロゲン原子、アミノ基、水酸基及びＣ6-10アリール基からなる群から選ばれる置換基を有していてもよいＣ1-10アルキル基を示すか、あるいはＲ4とＲ5が、一緒になって酸素原子又は窒素原子を含む５〜７員飽和複素環基を形成してもよく、
ｎは、１〜６から選ばれる整数を示す］
で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とする、ＴＬＲ９阻害剤。
【請求項２】
一般式（１）で表される化合物が、
N1-ベンジル-N3-(5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル)- N1-エチルプロパン-1,3-ジアミン、
N1-(5,6-ジメチル-2-(2-メチルフラン-3-イル)ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-イル)-N3,N3-ジエチルプロパン-1,3-ジアミン、
N-(3-(アゼパン-1-イル)プロピル)-6-エチル-5-メチル-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル) ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミン、又は
N-(3-(アゼパン-1-イル)プロピル)-5,6-ジメチル-2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル) ピラゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミン、
である請求項１に記載の阻害剤。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とする、自己免疫疾患、炎症、アレルギー、喘息、移植片拒絶又は移植片対宿主病の予防及び／又は治療剤。
【請求項４】
自己免疫疾患が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、多発性硬化症、炎症性腸疾患、乾癬性関節炎、ベーチェット症候群又は血管炎である、請求項３に記載の予防及び／又は治療剤。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公開番号】特開２０１３−７５８３４（Ｐ２０１３−７５８３４Ａ）
【公開日】平成２５年４月２５日（２０１３．４．２５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−２１５１１２（Ｐ２０１１−２１５１１２）
【出願日】平成２３年９月２９日（２０１１．９．２９）
【出願人】（０００１６３００６）興和株式会社 (618)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２５年４月２５日（２０１３．４．２５）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年９月２９日（２０１１．９．２９）
【出願人】（０００１６３００６）興和株式会社 (618)
【Ｆターム（参考）】
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