キナーゼ阻害剤としてのアリール尿素
【課題】ｒａｆ仲介病、ｐ３８仲介病およびＶＥＧＦ仲介病の処置に有用なアリール尿素化合物の提供。
【解決手段】式（Ｉ）の化合物、またはその塩、または単離されたその立体異性体：
式中、ＹはＯＲ1またはＮＨＲ2，Ｈａｌは塩素または臭素，Ｒ1はＨまたはＣ1−Ｃ6アルキル，Ｒ2はＨ，ＯＨ，Ｚ1およびＺ2は各自ＨまたはＯＨであり、Ｚ1またはＺ2の一つだけがＯＨであることができ、Ｘ1ないしＸ7は各自独立にＨ，ＯＨまたはＯ（ＣＯ）Ｃ1−Ｃ4アルキルであり、そしてｎは１である。ただし、以下の条件の少なくとも一つを満たすことを条件とする。ａ）Ｚ1またはＺ2はＯＨ，ｂ）Ｒ2はＯＨ
【解決手段】式（Ｉ）の化合物、またはその塩、または単離されたその立体異性体：
式中、ＹはＯＲ1またはＮＨＲ2，Ｈａｌは塩素または臭素，Ｒ1はＨまたはＣ1−Ｃ6アルキル，Ｒ2はＨ，ＯＨ，Ｚ1およびＺ2は各自ＨまたはＯＨであり、Ｚ1またはＺ2の一つだけがＯＨであることができ、Ｘ1ないしＸ7は各自独立にＨ，ＯＨまたはＯ（ＣＯ）Ｃ1−Ｃ4アルキルであり、そしてｎは１である。ただし、以下の条件の少なくとも一つを満たすことを条件とする。ａ）Ｚ1またはＺ2はＯＨ，ｂ）Ｒ2はＯＨ
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アリール尿素およびそれらの合成方法に関する。本発明化合物は、
（ｉ）ｒａｆ仲介病、例えばがん
（ｉｉ）炎症および骨粗しょう症のようなｐ３８仲介病、および
（ｉｉｉ）脈管形成障害のようなＶＥＧＦ仲介病
の処置において有用である。
【背景技術】
【０００２】
Ｒａｓ信号形質導入経路の活性化は、細胞の増殖、分化および形質転換に深いインパクトを有する出来事のカスケードを指示する。Ｒａｓの下流エフェクターであるＲａｆキナーゼは、細胞表面から細胞核へのこれらの信号のキーメディエーターである（Ｌｏｗｙ，Ｄ．Ｒ．；Ｗｉｌｌｕｍｓｅｎ，Ｂ．Ｍ．Ａｎｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９９３，６２，５８１；Ｂｉｏ，Ｊ．Ｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９８９，４９，４６８２）。ｒａｆキナーゼに対する脱活性抗体の投与による、または優生ネガティブｒａｆキナーゼもしくはｒａｆキナーゼの基質である優性ネガティブＭＥＫの同時発現によってｒａｆキナーゼ信号経路を阻害することによる活性ｒａｓの効果の阻害は、形質転換された細胞の正常発現プロトタイプへの逆転へ導くことが示されている（Ｄａｕｍ ｅｔ ａｌ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１９９４，１９，４７８−８０；Ｆｒｉｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９４，２６９，３０１０５−８を見よ）。Ｋｏｌｃｈ ｅｔ ａｌ．（Ｎａｔｕｒｅ １９９１，３４９，４２６−２８）は、アンチセンスＲＮＡによるｒａｆ発現の阻害は膜関連がん遺伝子中の細胞増殖をブロックすることをさらに示した。同様に、ｒａｆキナーゼの阻害（アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドによる）は種々のヒト腫瘍タイプの発育の阻害とインビトロおよびインビボにおいて相関していた（Ｍｏｎｉａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１９９６，２，６６８−７５）。このように、Ｒａｆキナーゼ活性の小分子阻害剤はがん処置のための重要な剤である（Ｎａｕｍａｎｎ，Ｕ；Ｅｉｓｅｎｍａｎｎ−Ｔａｐｐｅ，Ｉ；Ｒａｐｐ，Ｕ．Ｒ．Ｒｅｃｅｎｔ Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９７，１４３，２３７；Ｍｏｎｉａ，Ｂ．Ｐ．；Ｊｏｈｓｏｎ，Ｊ．Ｆ．；Ｇｅｉｇｅｒ，Ｔ．；Ｍｊｕｌｌｅｒ，Ｍ．；Ｆａｂｂｒｏ，Ｄ．Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １９９６，２，６６８）。
【０００３】
ｐ３８の阻害は、サイトカイン生産（例えばＴＮＦα，ＩＬ−１，ＩＬ−６，ＩＬ−８）およびタンパク分解酵素生産（例えばＭＭＰ−１，ＭＭＰ−３）をインビトロおよび／またはインビボにおいて阻害することが示されている。マイトジェン活性化タンパク（ＭＡＰ）キナーゼｐ３８はＩＬ−１およびＴＮＦ信号経路に含まれている（Ｌｅｅ，Ｊ．Ｃ．；Ｌａｙｄｏｎ，Ｊ．Ｔ．；ＭｃＤｏｎｎｅｌｌ，Ｐ．Ｃ．；Ｇａｌｌａｇｈｅｒ，Ｔ．Ｆ．；Ｋｕｍａｒ，Ｓ．；Ｇｒｅｅｎ，Ｄ．，ＭｃＮｕｌｔｙ，Ｄ．；Ｂｌｕｍｅｎｔｈａｌ，Ｍ．Ｊ．；Ｈｅｙｓ，Ｊ．Ｒ．；Ｌａｎｄｖａｔｔｅｒ，Ｓ．Ｗ．；Ｓｔｒｉｃｋｅｒ，Ｊ．Ｅ．；ＭｃＬａｕｇｈｉｎ，Ｍ．Ｍ．；Ｓｉｅｍｅｎｓ，Ｉ．Ｒ．；Ｆｉｓｈｅｒ，Ｓ．Ｍ．；Ｌｉｖｉ，Ｇ．Ｐ．；Ｗｈｉｔｅ，Ｊ．Ｒ．；Ａｄａｍｓ，Ｊ．Ｌ．；Ｙｏｕｎｄ，Ｐ．Ｒ．Ｎａｔｕｒｅ １９９４，３７２，７３９）。
【０００４】
臨床研究は、ＴＮＦα生産および／またはシグナリングをリウマチ性関節炎を含む多数の病気へリンクさせた（Ｍａｉｎｉ，Ｊ．Ｒｏｙａｌ Ｃｏｌｌ．Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ Ｌｏｎｄｏｎ １９９６，３０，３４４）。加えて、ＴＮＦαの過剰レベルは、急性リウマチ熱（Ｙｅｇｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｌａｎｃｅｔ １９９７，３４９，１７０），骨吸収（Ｐａｃｉｆｉｃｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｏｎｅ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂｏｌ．１９９６，１１，１０４３），閉経後骨粗しょう症（Ｐａｃｉｆｉｃｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒａｌ Ｒｅｓ．１９９６，１１，１０４３），敗血症（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．Ｂｒ．Ｊ．Ａｎａｅｓｔｈ．１９９６，７７，１１０），グラム陰性敗血症（Ｄｅｂｅｔｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｇ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓ．１９８９，３０８，４６３），敗血症ショック（Ｔｒａｃｅｙ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ １９８７，３３０，６６２；Ｇｉｒａｒｄｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊ．Ｍｅｄ．１９８８，３１９，３９７），エンドトキシンショック（Ｂｅｕｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８５，２２９，８６９；Ａｓｈｋｅｎａｓｉ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９９１，８８，１０５３５），毒性ショック症候群（Ｓａｈａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６，１５７，３８６９；Ｌｉｎａ ｅｔ ａｌ．ＦＥＭＳ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９９６，１３，８１），全身炎症応答症候群（Ａｎｏｎ，Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ．Ｍｅｄ．１９９２，２０，８６４），クローン病（ｖａｎ Ｄｕｌｌｅｍｅｎ ｅｔ ａｌ．Ａｌｉｍｅｎｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒａｐｌｕ．１９９６，１０（Ｓｕｐｐｌ．２），１０７；ｖａｎ Ｄｕｌｌｅｍｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｇｙ １９９５，１０９，１２９）および潰瘍性大腸炎（Ｍａｓｕｄａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９５，４６，１１１）を含む炎症性腸病（Ｓｔｏｋｅｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｎｆｌａｍｍ．１９９５−６，４７，９７），Ｊａｒｉｓｃｈ−Ｈｅｒｘｈｅｉｍｅｒ 反応（Ｆｅｋａｄｅ ｅｔ ａｌ．Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊ．Ｍｅｄ．１９９６，３３５，３１１），喘息（Ａｍｒａｎｉ ｅｔ ａｌ．Ｒｅｖ．Ｍａｌａｄ．Ｒｅｓｐｉｒ．１９９６，１３，５３９），成人呼吸器窮迫症候群（Ｒｏｔｅｎ ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．１９９１，１４３，５９０；Ｓｕｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．１９９２，１４５，１０１６），急性肺線維症（Ｐａｎ ｅｔ ａｌ．Ｐａｔｈｏｌ．Ｉｎｔ．１９９６，４６，９１），肺サルコイド−シス（Ｉｓｈｉｏｋａ ｅｔ ａｌ．Ｓａｒｃｏｉｄｏｓｉｓ Ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ Ｄｉｆｆｕｓｅ Ｌｕｎｇ Ｄｉｓ．１９９６，１３）１３９；アレルギー性呼吸器病（Ｃａｓａｌｅ ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ Ｍｅｌ．Ｂｉｏｌ．１９９６，１５，３５），ケイ肺病（Ｇｏｓｓａｒｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６，１５６，１５４０；Ｖａｎｈｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．１９９５，８，８３４）；炭鉱労働者じん肺病（Ｂｏｒｍ ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．１９８８，１３８，１５８９），肺胞傷害（Ｈｏｒｉｎｏｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９９６，１４，１０４４），肺不全（Ｇａｎｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｄｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒａｐ．１９９７．２８０．５３），急性炎症中の肝臓病（Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９７，２７２，１４０２），重症アルコール性肝炎（Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎ Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．１９９０，１１２，９１７），Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍマラリア（Ｐｅｒｌｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎｉｔ．１９９７，６５，１１６）および脳性マラリア（Ｒｕｄｉｎ ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１９９７，１５０，２５７）を含むマラリア（Ｇｒａｕ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１９８９，１１２，４９；Ｔａｖｅｎｅ ｅｔ ａｌ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌ．Ｔｏｄａｙ １９９６，１２，２０９），インスリン非依存性真性糖尿病（ＮＩＤＤＭ；Ｓｔｅｐｈｅｎｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９７，２７２，９７１；Ｏｆｅｉ ｅｔ ａｌ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ １９９６，４５，８８１），うつ血性心不全（Ｄｏｙａｍａ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．１９９６，５４，２１７；ＭｃＭｕｒｒａｙ ｅｔ ａｌ．Ｂｒ．Ｈｅａｒｔ Ｊ．１９９１，６６，３５６），心臓病後の損傷（Ｍａｌｋｉｅｌ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．Ｔｏｄａｙ １９９６，２，３３６），動脈硬化（Ｐａｒｕｍｕｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１９９６，１７９，Ａ４６），アルツハイマー病（Ｆｒａｇａｒａｓａｎ ｅｔ ａｌ．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．１９９６，７２３，２３１；Ａｉｓｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ １９９７，４３，１４３），急性脳炎（Ｉｃｈｉｙａｍａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．１９９６，２４３，４５７），脳傷害（Ｃａｎｎｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１９９２，２０，１４１４；Ｈａｎｓｂｒｏｕｇｈ ｅｔ ａｌ．Ｓｕｒｇ．Ｃｌｉｎ，Ｎ．Ａｍ．１９８７，６７，６９）；Ｍａｒａｎｏ ｅｔ ａｌ．Ｓｕｒｇ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｏｂｓｔｅｔｒ．１９９０，１７０，３２），多発性硬化症における脱髄および稀突起細胞損失（Ｂｒｏｓｎａｎ ｅｔ ａｌ．Ｂｒａｉｎ Ｐａｔｈｏｌ．１９９６，６，２４３）を含む多発性硬化症（Ｍ．Ｓ．；Ｃｏｙｌｅ．Ａｄｖ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６，６，１４３；Ｍａｔｕｓｅｖｉｃｉｕｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６，６６，１１５），進行がん（ＭｕｃＷｉｅｚｇｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ Ｒｅｇｕｌａｔｅｒｓ Ｈｏｍｅｏｓｔａｔｉｃ Ａｇｅｎｔｓ １９９６，１０，２５），リンパ悪性疾患（Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６，１６，３１），急性膵炎中の全身合併症（ＭｃＫａｙ ｅｔ ａｌ．Ｂｒ．Ｊ．Ｓａｒｇ．１９９６，８３，９１９）を含む膵炎（Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６，１６，３１），感染炎症およびがんにおける創傷治癒障害（Ｂｕｃｋ ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１９９６，１４９，１９５），脊髄形成異常症候群（Ｍａｕｒｙ ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．１９８９，３２，１４６），胆汁性肝硬変（Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｇａｓｔｅｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇ．１９９２，８７，４６５），腸壊死（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９８８，８１，１３２８），乾癬（Ｃｈｒｉｏｔｏｐｈｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１９９６，３７，Ｓ４），放射線傷害（Ｒｅｄｌｉｓｈ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６，１７０５）およびＯＫＴ３のようなモノクローナル抗体投与後の毒性（Ｂｒｏｄ ｅｔ ａｌ．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ １９９６，４６，１６３３）を含む、多種類の炎症および／または免疫調節病にかかわっている。ＴＮＦαレベルは、虚血性灌流障害（Ｃｏｌｌｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９８９，８５，１３３３）を含むホスト対グラフト反応（Ｐｉｇｕｅｔ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｓｅｒ．１９９２，５６，４０９）および腎臓（Ｍａｕｒｙ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９８７，１６６，１１３２）、肝臓（Ｉｍａｇａｗａ ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ １９９０，５０，２１９），心臓（Ｂｏｌｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ １９９２，５３，２８３）および皮膚（Ｓｔｅｖｅｎｓ ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｐｒｏｃ．１９９０，２２，１９２４）を含むアログラフト反応、慢性肺アログラフト拒絶(閉塞性気管支炎；ＬｏＣｉｃｅｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｔｈｏｒａｃ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｅ Ｓｕｒｇ．１９９０，９９，１０５９）を含む肺アログラフト拒絶（Ｇｒｏｓｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｈｎ ．Ｎ．Ａｍ．１９８９，９，１５３），それに全股関節置換による合併症（Ｃｉｒｉｎｏ ｅｔ ａｌ．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．１９９６，５９，８６）にも関係している。ＴＮＦαは、結核（Ｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｄ．Ｍａｌａｄ．Ｉｎｆｅｃｔ．１９９６，２６，９０４），消化性潰瘍中のヘリコバクターピロリ感染（Ｂｅａｌｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ １９９７，１１２，１３６），Ｔｒｙｐａｎｏｓａｍａ ｃｒｕｚｉ 感染から発生するチャガ病（Ｃｈａｎｄｒａｓｅｋａｒ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９９６，２２３，３６５），Ｅ．ｃｏｌｉ感染から発生するシガ様トキシンの影響（Ｈａｒｅｌ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９９２，５６，４０），Ｓｔａｐｈｙｒｏｃｏｃｃｕｓ感染から発生するエンテロトキシンＡの影響（Ｆｉｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９０，１４４，４６６３），ｍｅｍｉｎｇｏｃｏｃｃａｌ感染（Ｗａａｇｅ ｅｔ ａｌ．Ｌａｎｃｅｔ １９８７，３５５；Ｏｓｓｅｇｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌｇ．Ｓｃｉ．１９９６，１４４，１），そしてＢｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｇｅｒｉ（Ｂｒａｎｄｔ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９０，５８，９３８），Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ（Ｃｈｅｍｂｅｒｌｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８９，５７，２８７２），サイトメガロウイルス（ＣＭＶ；Ｇｅｉｓｔ ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９９７，１６，３１），インフルエンザウイルス（Ｂｅｕｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ．Ｒｅｓ．１９８６，３４，４９１ａ），センダイウイルス（Ｇｏｌｄｆｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９８９，８７，１４９０），タイラー脳脊髄炎（Ｓｉｅｒｒａ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １９９３，７８，３９９），およびヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ；Ｐｏｌｉ，Ｐｒｏ．Ｎａｔ’ｌ ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９９０，８７，７８２；Ｖｙａｋａｒａｍ ｅｔ ａｌ．ＡＩＤＳ １９９０，４，ｆ２１；Ｂａｄｌｅｙ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９７，１８５，５５）からの感染を含む、感染病にリンクしている（ｒｅｖｉｅｗ：Ｂｅｕｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１９９３，２１，５４２３；Ｄｅｇｒｅ，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ １９９６，８，２１９）。
【０００５】
多数の病気は過剰または望ましくないマトリックス破壊メタロプロテアーゼ（ＭＮＰ）活性により、またはメタロプロテアーゼの組織阻害剤（ＴＩＭＰ）に対するＭＭＰの不均衡によって仲介されるものと考えられる。これらは変形性関節症（Ｗｏｅｓｓｎｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９８４，２５９，３６３３），リウマチ性関節炎（Ｍｕｌｌｉｎｓ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １９８３，６９５，１１７；Ｗｏｏｌｌｅｙ ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．１９７７，２０，１２３１；Ｇｒａｖａｌｌｅｓｅ ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｎｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．１９９１，３４，１０７６），敗血症関節炎（Ｗｉｌｌｉａｍｓ ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｂｅｕｍ．１９９０，３３，５３３），腫瘍転移（Ｒｅｉｃｈ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９８８，４８，３３０７；Ｍａｔｒｉｓｉａｎ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ １９８６ ８６，９４１３），歯周病（Ｏｖｅｒａｌｌ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｐｅｒｉｄｏｎｔａｌ Ｒｅｓ．１９８７，２２，８１），角膜潰瘍化（Ｂｕｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．１９８９，３０，１５６９），タンパク尿（Ｂａｒｉｃｏｓ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１９８８，２５４，６０９），動脈硬化プラック破裂からの冠血栓（Ｈｅｎｎｙ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９９１，８８，８１５４），動脈瘤大動脈病（Ｖｉｎｅ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ．Ｓｃｉ．１９９１，８１，２３３），産児制限（Ｗｏｅｓｓｎｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｓｔｅｒｏｉｄｏｓ １９８９，５４，４９１），ジストロフィー上皮剥離水疱（Ｋｒｏｎｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１９８２，７９，２０８），外傷関節傷害後の退化的軟骨損失、ＭＭＰ活性によって仲介される骨減少症、下顎関節病、および神経系の脱脊髄病（Ｃｈａｎｔｒｙ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．１９８８，５０，６８８）を含む。ｐ３８の阻害はＴＮＦα生産およびＭＭＰ生産阻害へ導くので、マイトジェン活性化タンパク（ＭＡＰ）キナーゼｐ３８酵素の阻害は、骨粗しょう症、リウマチ性関節炎およびＣＯＰＤのような炎症障害を含む上に掲げた病気の処置へのアプローチを提供する（Ｂａｄｇｅｒ，Ａ．Ｍ．；Ｂｒａｄｂｅｅｒ，Ｊ．Ｎ．；Ｖｏｔｔａ，Ｂ；Ｌｅｅ，Ｊ．Ｃ．；Ａｄａｍｓ，Ｊ．Ｌ．；Ｇｒｉｓｗｏｌｄ，Ｄ．Ｅ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｅｘｐｅｒ．Ｔｈｅｒ．１９９６，２７９，１４５３）。
【０００６】
脈管新成は内皮細胞前駆体もしくは血管芽細胞からの血管の新生を含んでいる。胎芽中の最初の脈管構造は脈管新成によって形成される。脈管形成は既存の血管からの毛細血管の発達を含み、そして脳および腎臓のような器官が血管化される原理機構である。脈管新生は胎芽発達に限られるが、脈管形成は例えば妊娠、女性サイクルまたは創傷治癒の間成人に発生し得る。胎芽発達およびある種の脈管形成依存病における脈管形成および脈管新生の主要な調節剤の一つは脈管内皮成長因子（ＶＥＧＦ，脈管透過性因子，ＶＰＦとも呼ばれる）である。ＶＥＧＦは、代替ＲＮＡスプライシングによるホモダイマー形において存在するマイドジェンのイソフォームのファミリーを代表する。ＶＥＧＦイソフォームは脈管内皮細胞に対して高度に特異性である（レビューについては、Ｆａｒｒａｎａ ｅｔ ａｌ．Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｖ．１９９２，１３，１８；Ｎｅｒｆｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ．ＦＡＳＥＢ Ｊ．１９９９，１３，９を見よ）。
【０００７】
ＶＥＧＦ発現は低酸素症（Ｓｈｗｅｉｋｅ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ １９９２，３５９，８４３）により、そしてインターロイキン−１，インターロイキン６，上皮成長因子および形質転換成長因子αおよびβのような種々のサイトカインおよび成長因子によって誘発される。
【０００８】
今日までＶＥＧＦおよびＶＥＧＦファミリーメンバーは３種の膜横断レセプターチロシンキナーゼの１種以上（Ｍｕｓｔｏｎｅｎ ｅｔ．ａｌ．Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１９９５，１２９，８９５），ＶＥＧＦレセプター１（ｆ１ｔ−１（ｆｍｓ様チロシンキナーゼ−１）としても知られる、ＶＥＧＦレセプター２（キナーゼ挿入ドメイン含有レセプター（ＫＤＲ）としても知られており、ＫＤＲのネズミ類縁体は胎児肝臓キナーゼ（ｆ１ｋ−１）として知られている）、およびＶＥＧＦＲ−３（ｆ１ｔ−４としても知られている）へ結合することが報告されている。ＫＤＲとｆ１ｔ−１は異なる信号形質導入性質を有することが示されている（Ｗａｌｔｅｎｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９４，２６９，２６９８８；Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １９９５，１０，１３５）。このようにＫＤＲはインタクトな細胞中で強いリガンド依存性チロシンホスフォリル化を受けるのに対し、ｆ１ｔ−１は弱い応答を示す。このためＫＤＲへの結合はＶＥＧＦ仲介生物学的応答の全スペクトルの誘発にとって決定的要件である。
【０００９】
インビボでは、ＶＥＧＦは脈管新生において中心的役割を果し、そして脈管形成および血管の透過性化を誘発する。調節を失ったＶＥＧＦ発現は異常脈管形成および／または高透過性プロセスによって特徴付けられる多数の疾病の発展へ貢献する。その故ＶＥＧＦ仲介信号形質導入カスケードの調節は異常な血管形成および／または高透過性プロセスのコントロールのための有用なモードを提供するであろう。
【００１０】
血管形成は約１〜２ｍｍをこえる腫瘍成長にとって絶対的な必要条件であると考えられる。酸素および栄養はこの限度より小さい細胞中へは拡散を通じて補給され得る。しかしながらすべての腫瘍はそれが一定のサイズに到達した後に続いて成長するためには脈管形成に依存する。腫瘍の低酸素区域内の腫瘍原細胞はＶＥＧＦ生産の刺激によって応答し、これが新しい血管の形成を刺激するように静止している内皮細胞の活性化を引き金する（Ｓｈｗｅｉｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’１．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９９５，９２，７６８）。加えて、脈管形成が存在しない腫瘍区域におけるＶＥＧＦ生産はｒａｓ信号形質導入経路を通って進行し得る（Ｇｒｕｇｅｌ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９５，２７０，２５９１５；Ｒａｋ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９５，５５，４５７５）。その場のハイブリダイゼーション研究はＶＥＧＦ ｍＲＮＡが多種類のヒト腫瘍において強く上方調節されることを示した。これらは肺（Ｍａｔｔｅｒｎ ｅｔ ａｌ．Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １９９６，７３，９３１），甲状腺（Ｖｉｇｌｉｅｔｔｏ ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １９９５，１１，１５６９），乳房（Ｂｒｏｕｎ ｅｔ ａｌ．Ｈｕｍａｎ Ｐａｔｈｏｌ．１９９５，２６，２８），胃腸管（Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９３，５３，４７２７；Ｓｕｚｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９６，５６，３００４），腎臓および膀胱（Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１９９３，１４３１，１２５５），卵巣（Ｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９４，５４，１２５５），頸部がん（Ｇｕｉｄｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｎａｔ’１ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．１９９５，８７，１２１３７）、それに血管肉腫（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９９５，７３，８５９）およびいくつかの頭内腫瘍（Ｐｌａｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ １９９２，３５９，８４５；Ｐｈｉｌｌｉｐｓ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．１９９３，２，９１３；Ｂｅｒｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１９９３，９１，１５３）を含む。ＫＤＲに対する抗体の中和は腫瘍脈管形成のブロッキングに有効であることを示した（Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ １９９３，３６２，８４１；Ｒｏｃｋｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｄｉｆｆｅｒ．１９９５，３，３１５）。
【００１１】
例えば極端な低酸素条件のもとでのＶＥＧＦの過剰発現は血管の高増殖をもたらす眼内脈管形成へ導くことができ、最終的には失明へ導く。そのような出来事のカスケードは、糖尿性網膜症、虚血性網膜静脈塞栓、未熟児網膜症（Ａｉｅｌｌｏ ｅｔ ａｌ．Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．１９９４，３３１，１４８０；Ｐｅｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９９５，７２，６３８）、そして年令関連斑状退化（ＡＭＤ；Ｌｏｐｅｚ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．１９９６，３７，８５５を見よ）を含む多数の網膜症において観察されている。
【００１２】
リュウマチ性関節炎（ＲＡ）においては、脈管パンヌスの内方成長は脈管成長因子の生産によって仲介され得る。免疫反応性ＶＥＧＦのレベルはＲＡ患者の滑液中では高いが、退化的関節病を持つ他の形の関節炎の患者の滑液中では低い（Ｋｏｃｈ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４，１５２，４１４９）。形管形成阻害剤ＡＧＭ−１７０はラットコラーゲン関節炎モデルにおいて関節の新生血管化を防止することを示した（Ｐｅａｃｏｃｋ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｅｘｐｅｒ．Ｍｅｄ．１９９２，１７５，１３５）。
【００１３】
増大したＶＥＧＦ発現は、乾癬皮膚、それに水疱性類天疱瘡、多形性紅斑、疱疹状皮膚炎のような皮下水疱形成に関連した水疱性障害にも示された（Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏ１．１９９５，１０４，７４４）。
【００１４】
ＫＤＲの阻害はＶＥＧＦ仲介脈管形成および透過性化の阻害へ導くので、ＫＤＲ阻害剤は、上に挙げた疾病を含む、異常脈管形成および／または高透過性プロセスによって特徴付けられる病気の処置に有用であろう。
【発明の開示】
【００１５】
本発明は、式（Ｉ）の化合物、またはその塩例えば薬学的に許容し得るその塩、または単離されたその立体異性体（以後集合的に本発明の化合物という）に関する。
【００１６】
【化１】
【００１７】
式中、
ＹはＯＲ1またはＮＨＲ2 ，
Ｈａｌは塩素または臭素，
Ｒ1 はＨまたはＣ1−Ｃ6アルキル，
Ｒ2 はＨ，ＯＨ，ＣＨ3 またはＣＨ2 ＯＨ，
Ｚ1 およびＺ2 は各自ＨまたはＯＨであり、Ｚ1 またはＺ2 の一つだけがＯＨであることができ、
Ｘ1ないしＸ7は各自独立にＨ，ＯＨまたはＯ（ＣＯ）Ｃ1−Ｃ4アルキルであり、そして
ｎは０または１である。
ただし、以下の条件ａないしｃの少なくとも一つを満たすことを条件とする。
ａ）Ｚ1またはＺ2 はＯＨ，
ｂ）Ｒ2はＯＨ，
ｃ）ｎは１
術語立体異性体はジアステレオマー、エナンチオマー、幾何異性体等を包含するものと理解される。
【００１８】
当業者は、式Ｉの化合物のいくつかは異なる幾何異性体形で存在できることを認識するであろう。式Ｉの化合物は１以上の不斉炭素を有し、それ故ラセミおよび光学活性形で、そのラセミまたは非ラセミ混合物の形で、さらにジアステレオマーおよびジアステレオマー混合物の形で存在することができる。シス異性体、トランス異性体、ジアステレオマー混合物、ラセミ体、エナンチオマーの非ラセミ混合物、実質的に純粋および純粋なエナンチオマーは本発明の範囲内であると考えられ、ここでは実質に純粋なエナンチオマーは、対応する反対のエナンチオマーの５％ｗ／ｗ以下が存在することを意味することを意図する。
【００１９】
光学異性体は、慣用のプロセスに従って、例えば光学活性酸または塩基を使用してジアスステレオマー塩の形成によって、ラセミ体混合物の分割により得ることができる。適切な酸の例は酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、ジトルオイル酒石酸、およびカンファースルホン酸である。ジアステレオマーの混合物は、それらの物理学的相違を基にして当業者に既知の方法により、例えばクロマトグラフィーまたは分別結晶によってそれらの個々のジアステレオマーに分離することができる。光学活性塩基または酸は分離されたジアステレオマー塩から遊離される。
【００２０】
光学異性体の分離のための他のプロセスは、エナンチオマーの分離を最大にするように最適に選んだキラールクロマトグラフィーカラム（例えばキラールＨＰＬＣカラム）の使用を含む。好適なキラールＨＰＬＣカラムはダイセルによって製造されたＣｈｉｒａｃｅｌ ＯＪである。式Ｉの光学活性化合物は光学活性出発物質を利用して同様に得ることができる。
【００２１】
本発明は本発明の化合物の類縁体をも含む。
【００２２】
優先性はｎが１である時の本発明の化合物へ与えられる。これら化合物は特に、式（Ｉ）においてｎが１であり、ＹがＮＨＲ2であり、Ｒ2がＨまたはＣＨ3である本発明の化合物；式（Ｉ）においてｎが１，そしてＸ1ないしＸ7が各自Ｈである本発明の化合物；式（Ｉ）においてｎが１，そしてＺ1およびＺ2が各自Ｈである本発明の化合物；式（Ｉ）においてｎが１，Ｚ1がＨ，そしてＺ2がＯＨであるか、またはＺ1がＯＨ，そしてＺ2がＨである本発明の化合物；式（Ｉ）においてｎが１，そしてＸ1ないしＸ7の少なくとも１つがＯＨまたはＯ（ＣＯ）Ｃ1−Ｃ4アルキルである本発明の化合物；式（Ｉ）においてｎが１，ＹがＮＨＲ2，そしてＲ2がＣＨ2ＯＨである本発明の化合物；式（Ｉ）においてｎが１，ＹがＮＨＲ2，そしてＲ2がＯＨである本発明の化合物；そして式（Ｉ）においてｎが１，そしてＹがＯＨである本発明の化合物を含む。
【００２３】
関心ある他の本発明の化合物は、式（Ｉ）においてＺ1がＨ，そしてＺ2がＯＨか、またはＺ1がＯＨ，そしてＺ2がＨである本発明の化合物である。これらは特に、式（Ｉ）においてＺ1がＨそしてＺ2がＯＨ、またはＺ1がＯＨそしてＺ2がＨで、ｎが０である本発明の化合物；式（Ｉ）においてＺ1がＨそしてＺ2がＯＨ、またはＺ1がＯＨそしてＺ2がＨで、ｎが０，ＹがＮＨＲ2，そしてＲ2がＨまたはＣＨ3である本発明の化合物；式（Ｉ）においてＺ1がＨそしてＺ2がＯＨ、またはＺ1がＯＨそしてＺ2がＨで、ｎが０、Ｘ1ないしＸ7が各自Ｈである本発明の化合物；式（Ｉ）においてＺ1がＨで、Ｚ2がＯＨ、またはＺ1がＯＨそしてＺ2がＨ、そしてｎが０で、Ｘ1ないしＸ7の少なくとも１つがＯＨまたはＯ（ＣＯ）Ｃ1−Ｃ4アルキルである本発明の化合物；式（Ｉ）においてＺ1がＨで、Ｚ2がＯＨ，またはＺ1がＯＨで、Ｚ2がＨ、そしてｎが０で、ＹがＮＨＲ2で、Ｒ2がＣＨ2ＯＨである本発明の化合物；式（Ｉ）においてＺ1がＨで、Ｚ2がＯＨ，またはＺ1がＯＨで、Ｚ2がＨ、そしてｎが０、ＹがＮＨＲ2で、Ｒ2がＯＨである本発明の化合物、そして式（Ｉ）においてＺ1がＨで、Ｚ2がＯＨ、またはＺ1がＯＨ，Ｚ2がＨ，ｎが０、そしてＹがＯＨである本発明の化合物である。
【００２４】
関心あるさらなる本発明の化合物は、式（Ｉ）においてＹがＮＨＲ2であり、Ｒ2がＯＨである本発明の化合物である。これらの化合物は特に、式（Ｉ）においてＹがＮＨＲ2，Ｒ2がＯＨ，ｎが０である本発明の化合物；式（Ｉ）においてＹがＮＨＲ2，Ｒ2がＯＨ，ｎが０，そしてＸ1ないしＸ7が各自Ｈである本発明の化合物；式（Ｉ）においてＹがＮＨＲ2，Ｒ2がＯＨ，ｎが０，そしてＺ1およびＺ2が各自Ｈである本発明の化合物；式（Ｉ）においてＹがＮＨＲ2，Ｒ2がＯＨ，ｎが０、そしてＺ1がＨ，Ｚ2がＯＨか、またはＺ1がＯＨ，Ｚ2がＨである本発明の化合物；そして式（Ｉ）においてＹがＮＨＲ2，Ｒ2がＯＨ，ｎが０，そしてＸ1ないしＸ7の少なくとも１つがＯＨまたはＯ（ＣＯ）Ｃ1−Ｃ4アルキルである本発明の化合物を含む。
【００２５】
関心ある本発明の化合物はまた、式（Ｉ）においてＹがＯＨである化合物である。これらの化合物は特に、式（Ｉ）においてＹがＯＨ，ｎが０である本発明の化合物；式（Ｉ）においてＹがＯＨ，ｎが０、そしてＸ1ないしＸ7が各自Ｈである本発明の化合物；式（Ｉ）においてＹがＯＨ，ｎが０、そしてＺ1およびＺ2が各自Ｈである本発明の化合物；式（Ｉ）においてＹがＯＨ，ｎが０、そしてＺ1がＨ，Ｚ2がＯＨか、またはＺ1がＯＨ，Ｚ2がＨである本発明の化合物；および式（Ｉ）においてＹがＯＨ，ｎが０、そしてＸ1ないしＸ7の少なくとも１つがＯＨまたはＯ（ＣＯ）Ｃ1−Ｃ4アルキルである本発明の化合物を含む。
【００２６】
特に好ましい化合物は以下の化合物を含む。
４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド；
４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド；
４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド；
４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド；
４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−ヒドロキシメチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド；
４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−ヒドロキシメチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド；およびそれらの塩、立体異性体およびプロドラッグ。
【００２７】
関心ある本発明の化合物のサブグループは、式（ＩＩ）の化合物、またはその塩もしくは立体異性体を含む。
【００２８】
【化２】
【００２９】
式中、
ＹはＯＲ1またはＮＨＲ2，
Ｈａｌは塩素または臭素，
Ｒ1はＨまたはＣ1−Ｃ6アルキル，
Ｒ2はＨ，ＯＨ，ＣＨ3またはＣＨ2ＯＨ，
Ｚ1およびＺ2は各自ＨまたはＯＨであり、Ｚ1またはＺ2の１つだけがＯＨであることができ、
Ｘ4ないしＸ7は各自独立にＨ，ＯＨまたはＯ（ＣＯ）Ｃ1−Ｃ4アルキルであり、そして
ｎは０または１である。
ただし、以下の条件ａないしｃの少なくとも１つを満たすことを条件とする。
ａ）Ｚ1またはＺ2はＯＨ，
ｂ）Ｒ2はＯＨ，
ｃ）ｎは１
【００３０】
これらは、式（ＩＩ）においてｎが１の本発明の化合物；式（ＩＩ）においてｎが１，そしてＺ1およびＺ2が各自Ｈである本発明の化合物；式（ＩＩ）においてｎが１，Ｚ1およびＺ2がＨ，そしてＸ4ないしＸ7の少なくとも１つがＯＨである本発明の化合物；式（ＩＩ）においてｎが１，Ｚ1およびＺ2がＨ，ＹがＮＨＲ2、そしてＲ2がＨまたはＣＨ3である本発明の化合物；式（ＩＩ）においてｎが０である本発明の化合物；式（ＩＩ）においてｎが０，そしてＺ1がＨ，Ｚ2がＯＨ、またはＺ1がＯＨ，Ｚ2がＨである本発明の化合物；式（ＩＩ）においてｎが０，Ｚ1およびＺ2が各自Ｈ，そしてＸ4ないしＸ7の少なくとも１つがＯＨである本発明の化合物；式（ＩＩ）においてｎが０，Ｚ1がＨ，Ｚ2がＯＨ、またはＺ1がＯＨ，Ｚ2がＨ，そしてＸ4ないしＸ7の少なくとも１つがＯＨである本発明の化合物；式（ＩＩ）においてｎが０，Ｚ1がＨ，Ｚ2がＯＨ、またはＺ1がＯＨ，Ｚ2がＨ，ＹがＮＨＲ2そしてＲ2がＨまたはＣＨ3である本発明の化合物；式（ＩＩ）においてｎが０，Ｚ1がＨ，Ｚ2がＯＨまたはＺ1がＯＨ，Ｚ2がＨ，そしてＹがＮＨＲ2，Ｒ2がＯＨである本発明の化合物；および式（ＩＩ）においてｎが０，ＹがＮＨＲ2，Ｒ2がＯＨそしてＸ4ないしＸ7の少なくとも１つがＯＨである本発明の化合物を含む。
【００３１】
関心ある本発明の化合物の他のサブグループは、式（ＩＩＩ）の化合物、またはその塩もしくは立体異性体を含む。
【００３２】
【化３】
【００３３】
式中、
ＹはＯＲ1またはＮＨＲ2，
Ｈａｌは塩素または臭素，
Ｒ1はＨまたはＣ1−Ｃ6アルキル，
Ｒ2はＨ，ＯＨ，ＣＨ3またはＣＨ2 ＯＨ，
Ｚ1およびＺ2は各自ＨまたはＯＨであり、Ｚ1またはＺ2の１つだけがＯＨであることができ、そして
ｎは０または１である。
ただし、以下の条件ａないしｃの少なくとも１つを満たすことを条件とする。
ａ）Ｚ1またはＺ2はＯＨ，
ｂ）Ｒ2はＯＨ，
ｃ）ｎは１
【００３４】
これらは、式（III）においてｎが１，そしてＺ1およびＺ2が各自Ｈである本発明の化合物；式（III）においてｎが１，そしてＺ1およびＺ2が各自Ｈ，そしてＹがＮＨＲ2、Ｒ2がＨまたはＣＨ3である本発明の化合物；式（III）においてｎが０，Ｚ1がＨ，Ｚ2がＯＨ，Ｚ2がＨである本発明の化合物；式（III）においてｎが０，Ｚ1がＨ，Ｚ2がＯＨまたはＺ1がＯＨ，Ｚ2がＨ，そしてＹがＮＨＲ2、Ｒ2がＨまたはＣＨ3である本発明の化合物；および式（III）においてＹがＯＨである本発明の化合物を含む。
【００３５】
本発明はさらに本発明の新規化合物を製造する方法に関する。そのような方法は限定でなく、４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド、および４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイドのピリジル環のそれらの対応するピリジン−１−オキサイドへの酸化；本発明のどれかの化合物の尿素窒素のＮ−ヒドロキシ尿素への酸化；本発明の化合物のＸ1ないしＸ7で表わされる位置を水素原子がヒドロキシル基に置換されるように酸化；４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイドおよび４−｛〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイドのＮ−メチルアミドの対応するヒドロキシメチルアミドへのヒドロキシル化；前記Ｎ−メチルアミドのヒドロキサム酸へのヒドロキシル化；前記Ｎ−メチルアミドの未置換アミドへの脱メチル化；前記Ｎ−メチルアミドのカルボキシル酸への加水分解；およびこれらの組合わせを含む。さらに本発明は、Ｘ1ないしＸ7位置のヒドロキシル基の例えばアセテートへのエステル化に関する。
【００３６】
関心ある方法は、４−４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイドおよび４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイドを対応するピリジン−１−オキサイドして酸化することよりなる、４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、または４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、それらの薬学的に許容し得る塩、または単離された立体異性体の製造方法、および４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイドまたは４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイドを対応するピリジン−１−オキサイドへ酸化することになる、４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、それらの薬学的に許容し得る塩、または単離された立体異性体の製造方法を含む。
【００３７】
これらの方法によって製造された化合物は本発明に含まれる。また、４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド、または４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイドを、
ａ）フェニル水素の１以上をヒドロキシル基で置換、
ｂ）Ｎ−メチルアミドをヒドロキシメチルアミドもしくはヒドロキサム酸へヒドロキシル化、
ｃ）Ｎ−メチルアミドを未置換アミドへ脱メチル化、
ｄ）尿素窒素の１以上を＝ＮＨから＝ＮＯＨへ酸化、
ｅ）Ｎ−メチルアミドをカルボキシル酸へ加水分解、
ｆ）ピリジン窒素をピリジン−１−オキサイドへ酸化、または
ｇ）ａないしｆの組合わせ、
を実行するように代謝変換を含む変換によって得る（ただし、ステップｂ），ｄ）およびｆ）の少なくとも１つが実行されることが条件）ことも本発明に含まれる。
【００３８】
特に関心があるのは、４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド、または４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイドを、
ａ）Ｎ−メチルアミドをヒドロキシメチルアミドもしくはヒドロキサム酸へヒドロキシル化、
ｂ）Ｎ−メチルアミドを未置換アミドへ脱メチル化、
ｃ）１以上の尿素窒素を＝ＮＨから＝ＮＯＨへ酸化、
ｄ）Ｎ−メチルアミドをカルボキシル酸へ加水分解、
ｅ）ピリジン窒素をピリジン−１−オキサイドへ酸化、または
ｆ）ａないしｆの組合わせ、
を実行するように代謝変換を含む変換によって（ただし、ａ），ｃ）およびｅ）の少なくとも１つが実行されることが条件）得られる化合物である。
【００３９】
本明細書全体を通じ、術語「ピリジン−１−オキサイド」は、１−オキソ−ピリジンおよび１−ヒドロキシピリジンを含み、そして本明細書の目的のためこれらすべての３術語は互換可能であると理解すべきである。例えば、Ｃｈｅｍ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．ＮｏｍｅｎｃｈａｔｏｒTMｖ．３．０１はＣｈｅｍ Ｄｒａｗにおいて引かれた、Ｙ＝ＮＨＣＨ3，Ｈａｌ＝Ｃｌ，Ｚ1およびＺ2＝１、そしてｎ＝１である式IIIの化合物を、Ｎ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕（｛４−〔１−ヒドロシキ−２−（Ｎ−メチルカルバモイル）（４−ピリジルオキシ）〕フェニル｝アミノ）カルボキサマイドと同定する。
【００４０】
本発明は１以上の本発明の化合物を含む薬剤組成物をさらに含む。これらは少なくとも１つの本発明の化合物の有効量と、生理学的に許容し得る担体を含んでいる組成物を含む。優先性は、４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、それらの薬学的に許容し得る塩、または単離された立体異性体の有効量と、そして生理学的に許容し得る担体を含んでいる薬剤組成物に与えられる。
【００４１】
これらの化合物の薬学的に許容し得る塩も本発明の範囲内である。
【００４２】
塩は特に、式Ｉの化合物の薬学的に許容し得る塩、または例えば式Ｉの化合物の有機または無機酸付加塩である。好適な無機酸は、限定なしでハロゲン酸（塩酸のような）、硫酸またはリン酸を含む。好適な有機酸は、限定なしでカルボン酸、ホスフォン酸、スルホン酸またはスルファミン酸を含み、その例は酢酸、プロピオン酸、オクタン酸、デカン酸、ドデカン酸、グリコール酸、乳酸、２−または３−ヒドロキシ酪酸、γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）、グルコン酸、グルコースモノカルボキシル酸、フマル酸、コハク酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、グルカル酸、ガラクタール酸、アミノ酸（グルタミン酸、アスパラギン酸、Ｎ−メチルグリシン、アセチルアミノ酢酸、Ｎ−アセチルアスパラギンまたはＮ−アセチルシステインのような）、ピルビン酸、アセト酢酸、メタンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ホスフォセリン、および２−または３−グリセロリン酸を含む。
【００４３】
プロドラッグの形成は親化合物の性質を増強するためのこの分野では良く知られている。そのような性質は、溶解度、吸収、バイオアベイラビリティおよび放出時間を含む（Ｐｈａｍａｃｅｃｃｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｓｉｘｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ），ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ａｎｃｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｐｕｂｉｓｈｅｄ ｂｙ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，ｐａｇｅｓ ２７−２９（１９５５）参照。これは参照としてここに取り入れる）。開示されたオキサゾリル−フェニル−２，４−ジアミノピリミジン化合物の普通に使用されるプロドラッグは、主要な薬物バイオトランスフォーメーション反応の利益を得るために設計され、そして本発明の範囲内であると考えるべきである。主要な薬物バイオトランスフォーメーション反応は、Ｎ−デアルキル化、Ｏーデアルキル化、脂肪族ヒドロキシル化、芳香族ヒドロキシル化、Ｎ−酸化、Ｓ−酸化、デアミノ化、加水分解反応、、グルクロナイド化、サルフェート化およびアセチル化を含む（Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｎｉｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ），ｅｄｉｔｅｄ Ｍｏｌｉｎｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，ｐａｇｅｓ １１−１３（１９９６）を見よ。これを参照としてここに取れ入れる）。
【００４４】
本発明は、本発明の化合物、または本発明の化合物を含む薬剤組成物を投与することによって、哺乳類における病気、例えば炎症および脈管形成障害および骨粗しょう症を処置および予防する方法にも関する。
【００４５】
これらは、本発明の化合物を哺乳類へ投与することにより、哺乳類における骨粗しょう症、炎症および脈管形成障害（がん以外の）処置または予防する方法を含む。優先性は、４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、それらの薬学的に許容し得る塩、または単離された立体異性体もしくはその混合物の有効量を投与することにより、哺乳類における骨粗しょう症、炎症、および脈管形成に（がん以外の）を処置または予防する方法に与えられる。
【００４６】
本発明はまた、１以上の本発明の化合物を含む薬剤組成物を、細胞毒剤と組合わせて投与することによって、がんおよび他の高増殖障害を処置および予防する方法にも関する。
【００４７】
これらは、本発明の化合物の有効量を哺乳類へ投与することによって哺乳類の高増殖障害を処置または防止する方法を含む。優先性は、４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、それらの薬学的に許容し得る塩、単離された立体異性体もしくはその混合物の有効量を哺乳類へ投与することにより、哺乳類における骨粗しょう症、炎症、および脈管形成障害（がん以外）を処置または予防する方法に与えられる。
【００４８】
本発明の化合物の有効量を投与することによる哺乳類の高増殖障害を処置または予防する方法において、１以上の追加的化合物もしくは組成物は、好ましくは細胞毒化合物もしくは組成物である本発明による化合物もしくは組成物ではない例えば抗がん化合物もしくは組成物を哺乳類へ投与することができる。
【００４９】
哺乳類における高増殖障害を処置または予防する方法は、細胞毒化合物もしくは組成物と共に、４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、それらの薬学的に許容し得る塩、または単離された立体異性体もしくはその混合物を哺乳類へ投与することを含む。
【００５０】
組成物へ加えることができる任意的抗増殖剤は、限定ではないが、アスパラギナーゼ、ブレオマイシン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、コラスパーゼ、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、エピルビシン、エポトシド、５−フロロウラシル、ヘキサメチルメラミン、ヒドロキシ尿素、イフオスファミド、イリノテカン、リユーコボリン、ロムスチン、メクロレサミン、６−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキセート、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、プロカルバジン、ラロキシフェン、ストレプトゾシン、タモキシフェン、チオグアニン、トポテカン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、およびビンデシンのような、メルクインデックス第１２版（１９９６）にがん化学療法薬物療法に掲げられている化合物を含んでいる。
【００５１】
本発明の組成物と共に使用するのに適した他の抗増殖剤は、限定でなく、アミノグルテチミド、Ｌ−アスパラギナーゼ、アザチオプリン、５−アザシチジン、クラドリビン、ブスルファン、ジエチルスチルベストロール、２’−２’−ジフロロデオキシシチジン、ドセタクセル、エリスロヒドロキシノニルアデニン、エチニルエストラジオール、５−フロロデオキシウリジン、５−クロロデオキシウリジンモノリン酸、フルダラビンホスフェート、フルオキシメステロン、フルタミド、ヒドロキシプロゲステロンカプロエート、イダルビシン、インターフェロン、メドロキシプロゲステロンアセテート、メゲステロールアセテート、メルファラン、ミトタン、パクリタクセル、ペントスタチン、Ｎ−ホスフォノアセチル−Ｌ−アスパルテート（ＰＡＬＡ）、プリカマイシン、セムスチン、テニポシド、テストステロンプロピオネート、チオテパ、トリメチルメラミン、ウリジン、およびビノレルビンのような、Ｇｏｏｄｎａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｎｔｉｓ（Ｎｉｎｔｈ Ｅｄ．），ｅｄｉｔｅｄ Ｍｏｌｉｎｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，ｐｕｂｉｓｈｅｄ ｂｙ ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，ｐａｇｅｓ １２２５−１２８７（１９９６）において腫瘍性病に使用するために認知された化合物を含む。
【００５２】
本発明の組成物と共に使用するのに適した他の抗増殖剤は、限定でなく、オキサプラチン、ゲムシタボン、ゲフィニチブ、タキソテレ、ＢＣＮＵ，ＣＣＮＵ，ＤＴＩＣ，ａｒａ Ａ，ａｒａ Ｃ，ヘルセプチン、アクチノマイシンＤ、エポチロン、イリノテカン、ラロキシフェン、およびトポテカンを含む。
【００５３】
高増殖性障害の処置の説明
がんおよび高増殖障害は以下のように定義される。これらの障害は、限定でなく、乳房、呼吸管、脳、生殖器、消化管, 泌尿管、眼、肝臓、皮膚、頭および頸部、甲状腺、上皮小体のがんおよびそれらの遠隔転移のような固形腫瘍を含む。これらの障害はリンパ腫、内腫および白血病も含む。
【００５４】
乳がんの例は、限定でなく、浸襲性管悪性腫瘍、浸襲性小葉悪性腫瘍、その場の管悪性腫瘍およびその場の小葉悪性腫瘍を含む。
【００５５】
呼吸器官のがんの例は、限定でなく、小細胞および非小細胞肺悪性腫瘍、それに気管支アデノーマおよび胸膜肺ブラストーマを含む。
【００５６】
脳がんの例は、限定でなく、脳幹および視床下部グリオーマ、小脳および大脳マストロサイトーマ、髄質プラストーマ、脳室上衣腫、それに神経外胚葉および松果体腫瘍を含む。
【００５７】
男性生殖器の腫瘍は、限定でなく、前立腺および睾丸がんを含む。
【００５８】
女性生殖器の腫瘍は、限定でなく、子宮内膜、頸管、卵巣、膣、外陰部がん、それに子宮筋腫を含む。
【００５９】
消化器官の腫瘍は、限定でなく、肛門、結腸、結直腸、食道、胆のう、胃、膵臓、直腸、小腸、および唾液腺がんを含む。
【００６０】
泌尿器の腫瘍は、限定でなく、膀胱、陰茎、腎臓、腎孟、尿管および尿道がんを含む。
【００６１】
眼のがんは、限定でなく、眼内メラノーマおよび網膜芽腫を含む。
【００６２】
肝臓がんの例は、限定でなく、肝細胞悪性腫瘍（線維層状変種ありなし）、胆管がん（肝内胆管がん）、および混合肝細胞および胆管がんを含む。
【００６３】
皮膚がん、限定でなく、鱗細胞がん、カポン肉腫、悪性メラノーマ、メルケル皮膚がん、および非メラノーマ皮膚がんを含む。
【００６４】
頭頸部がんは、限定でなく、上顎／下顎／咽頭下部／鼻咽頭／口腔咽頭がん、および唇と口腔がんを含む。リンパ腫は、限定でなく、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ホジキン病、および中枢神経系のリンパ腫を含む。
【００６５】
肉腫は、限定でなく、軟組織の肉腫、骨肉腫、悪性線維性組織腫瘍、リンパ肉腫、および横紋筋肉腫を含む。白血病は、限定でなく、急性骨髄白血病、急性リンパ芽白血病、慢性リンパ細胞白血病、慢性骨髄白血病、および毛状細胞白血病を含む。
【００６６】
これらの障害はヒトにおいて良く特徴付けられているが、しかし他の哺乳類において同様な病因を持って存在し、本発明の薬剤組成物によって処置することができる。
【００６７】
一般的に、細胞毒剤および／または細胞増殖抑制剤のｒａｆキナーゼ阻害剤との組合わせの使用は、（１）どちらかの剤単独の投与に比較して、腫瘍の成長を減らすかまたは腫瘍をなくすより良い効果を得る、（２）単一剤化学療法および或る種の他の組合わせ療法よりもより少ない有害な薬理学的合併症をもって患者が良く耐えられる化学療法処置を提供する、（３）投与される化学療法剤のより少ない量を提供する、（４）哺乳類特にヒトにおいて、異なるがんタイプのより広いスペクトルの処置を提供する、（５）処置される患者の間により高い応答率を提供する、（６）標準的化学療法処置に比較して処置される患者の間により長い生存時間を提供する、（７）腫瘍進行のためのより長い時間を提供する、および／または（８）他の抗がん剤組合わせが拮抗効果を生ずる既知の場合に比較して、単独で使用されるそれらの剤と少なくとも同程度に良好な効果および耐性を得るために役立つであろう。
【００６８】
本発明は、（ａ）本発明化合物、（ｂ）少なくとも１つの他の化学療法用細胞毒剤または細胞増殖抑制剤、または成分（ａ）または（ｂ）の薬学的に許容し得る塩を含む組合わせに関する。
【００６９】
本発明はまた、（１）（ａ）本発明による化合物と、（ｂ）がんの処置に共同して有効な量において少なくとも１つの他の細胞毒剤または細胞増殖抑制剤（もし、少なくとも１つの塩形成基が存在するならば成分（ａ）または（ｂ）は薬学的に許容し得る塩の形で存在することができる）と、そして（２）１以上の薬学的に許容し得る担体分子を含んでいる薬学的製剤に関する。
【００７０】
また本発明は、本発明による化合物と、細胞毒剤または細胞増殖抑制剤である少なくとも１つの他の化学療法剤の投与によって処置することができるがんを処置する方法に関する。本発明による化合物および細胞毒剤または細胞増殖抑制剤は、上で規定した高増殖病に対して合同して有効な量において哺乳類へ投与される。このように、本発明による化合物はｒａｆキナーゼ仲介がんに対して有効である。しかしながらこれら化合物はｒａｆキナーゼによって仲介されないがんに対しても有効である。
【００７１】
好ましい具体例において、本発明は、任意にＤＮＡトポイソメラーゼＩおよびＩＩ阻害剤、ＤＮＡインターカレーター、アルキル化剤、微小管分裂剤、ホルモンおよび成長因子レセプターアゴニストまたはアンタゴニスト、他のキナーゼ阻害剤および抗代謝物を含むがこれに限らない細胞毒剤または細胞増殖抑制剤との組合わせにおいて、本発明による化合物を哺乳類特にヒトのがんを処置する方法を提供する。
【００７２】
他の具体例において、本発明による化合物および細胞毒剤および細胞増殖抑制剤を含む化学療法剤を、経口送達により、または静脈内注射もしくは注入によって患者へ投与する方法が開示される。
【００７３】
他の具体例において、本発明による化合物または細胞毒剤もしくは細胞増殖抑制剤は、錠剤、液剤、局所ゲル、吸入剤または徐放性製剤の形で患者へ投与することができる。
【００７４】
本発明の他の具体例において、本発明による化合物は、同じ製剤において、またはもっと典型的には別々の製剤において、そしてしばしば異なる投与ルートを用いて細胞毒剤もしくは細胞増殖抑制剤と同時にがん患者へ投与することができる。投与は任意の順序において逐次的であることもできる。
【００７５】
他の具体例において、本発明による化合物は細胞毒剤もしくは細胞増殖抑制剤とタンデムに投与することができ、この場合本発明の化合物は２８連続日まで１日１回以上患者へ投与することができ、細胞毒剤もしくは細胞増殖抑制剤は同じ総期間にわたって同時または間歇的に投与される。
【００７６】
本発明の他の具体例において、本発明による化合物は、約０．１ないし２００ｍｇ／ｋｇ総体重の範囲であることができる経口、静脈内、筋肉内、皮下または非経口投与量において患者へ投与することができる。
【００７７】
他の具体例において、細胞毒剤もしくは細胞増殖抑制剤は、約０．１ないし２００ｍｇ／ｋｇ総体重の範囲であることができる静脈内、筋肉内、皮下または非経口投与量において患者へ投与することができる。
【００７８】
さらに本発明は、がん細胞を本発明の薬学的製剤もしくは製品と接触させることを含むがん細胞の増殖を阻害する方法に、特にがんを持っていることを疑われる対象、その細胞、組織または体液を本発明の薬剤組成物または製品と接解させることを含む増殖病の処置方法に関する。
【００７９】
本発明はまた、本発明による化合物と、そして他の細胞毒剤もしくは細胞増殖抑制剤の両方を本発明の量において含む組成物に関する。
【００８０】
本発明はさらに、言及した２つの化学療法剤の別々の投与量を別々の容器内に含むキットに関する。本発明の組合わせはインビボ、例えば患者の体内で生成されることができる。
【００８１】
術語「細胞毒」は、がん細胞を殺滅もしくはなくすために投与することができる剤を意味する。術語「細胞増殖抑制」は、細胞毒的細胞減少を誘発するのではなく、腫瘍増殖を抑制し、患者の総生存細胞集団からがん細胞の排除を得るために投与することができる剤を意味する。ここに記載した化学療法剤、例えばイリノテカン、ビノレルビン、ゲムシタビン、およびパクリタクセルは細胞毒剤と考えられる。これらの細胞毒剤および細胞増殖抑制剤は種々のがんタイプの処置における化学療法剤として広範囲の使用を得ており、そして良く知られている。
【００８２】
一般的製造方法
本発明の化合物は、既知の化学反応および操作の使用によって製造することができる。にもかかわらず以下の一般的製造方法は、読者を本発明の化合物の合成において助けるために提供され、もっと詳しい特定実施例は後で実施例を記載する実験の部に提供される。
【００８３】
これらの方法においてすべての可変基は、もしそれらが以下に特定的に記載されていなければ、一般的説明の中に記載されているとおりである。与えられた記号を有する可変基または置換基が与えられた構造中に２回以上使用されている時は、これら基または置換基は該記号の定義の範囲内で各自独立して可変であり得ることを理解すべきである。クレームした任意の官能基を有する本発明の化合物は、以下に掲げた方法の各自では製造することができないことが認識される。各方法の範囲内で、反応条件に対して安定な任意的な基が使用されるか、または反応に参加し得る官能基は必要な場合保護された形で存在し、そしてそのような保護基の除去は当業者に良く知られた方法により適当な段階で完了される。
【００８４】
本発明の化合物は、商業的に入手し得るか、または日常的な慣用化学的方法に従って製造することができる出発物質から、慣用の化学的方法に従い、および／または以後開示するとおりに製造することができる。化合物の一般的製造方法は以下に与えられ、そして代表的化合物の製造は実施例１および２に特定的に示されている。
【００８５】
式（Ｉ）尿素およびヒドロキシ尿素は、この分野で既知の種々の簡単な方法によって製造することができる。これらの化合物の生成のための一般的アプローチは、“Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ”，ｂｙ Ｊ．Ｍａｒｃｈ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９８５，および“Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ”，ｂｙ Ｒ．Ｃ．Ｌａｒｏｃｋ，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９８９に見ることができる。これらを参照としてここに取り入れる。
【００８６】
もっと詳しくは、本発明のピリジン−１−オキサイド（式（Ｉ）においてｎ＝１）は、対応するピリジンからのこの分野で既知の酸化条件を使用して製造することができる。いくつかの例は次のとおりである。
【００８７】
−ジクロロメタン、ジクロロエタンまたはクロロホルムのような塩基化溶媒中のメタクロロ過安息香酸のような過酸（Ｍａｒｋｇｒａｆ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９９１，４７，１８３）、−ジクロロメタンのような塩基化溶媒中の触媒量の過レニウム酸の存在下（Ｍｅ3ＳｉＯ）2（Ｃｏｐｅｒｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．１９９８，３８，７６１）、−ハロゲン化溶媒のいくつかの組合わせにおいてペルフロロ−シス−２−ブチル−３−プロピルオキサゾリジン（Ａｍｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９９８，５４，７８３１）、
−クロロホルム中次亜フッ素酸−アセトニトリル錯体（Ｄａｙａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ １９９９，１４２７）、
−水中、ＫＯＨのような塩基の存在下オキソン（Ｒｏｂｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．Ｓｙｎｏｐ．１９９３，１０，４１２）、
−氷酢酸の存在下モノペルオキシフタル酸マグネシウム（Ｋｌｅｍｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍ．１９９０，６，１５３７）、
−水および酢酸の存在下過酸化水素（Ｌｉｎ Ａ．Ｊ．，Ｏｒｇ．Ｐｒｅｐ．Ｐｒｏｃｅｄ．Ｉｎｔ．１９９１，２３（１），１１４）、
−アセトン中ジメチルジオキシラン（Ｂｏｙｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．１９９１，９，２１８９）
【００８８】
上述の酸化のための出発物質はそれらの側鎖中に２−アシルピリジンを含んでいるビスアリール尿素である。これらの尿素の特定的製造は特許文献に既に記載されており、そして本発明の化合物に適応させることができる。例えばリードルら、“ｒａｆキナーゼ阻害剤としてＯ−カルボキシアリール置換ジフェニル尿素”，ＷＯ００／４２０１２；リードルら”、ｐ３８キナーゼ阻害剤としてのＯ−カルボキシアリル置換ジフェニル尿素”，ＷＯ００／４１６９８。
【００８９】
Ｚ1 がＯＨ，そしてＺ2 がＨである式（Ｉ）のヒドロキシ尿素は以下のように製造することができる。
【００９０】
【化４】
【００９１】
この分野で既知の式（ＩＩ）の置換ニトロベンゼンは、この分野で既知の条件、例えば遷移金属触媒の存在下水素化ホウ素ナトリウム（Ｙａｍａｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１９８９，９５１およびそれに引用されている参考文献）、または過塩素酸の存在下Ｎ−メチルジヒドロアクリジン（Ｆｕｋｕｚｕｍｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．II １９９１，９，１３９３および引用参考文献）を使用し、式（III）のヒドロキシアニリンへ変換される。
【００９２】
第２のステップにおいて、式（III）のヒドロキシアニリンはイソシアネート、または均等に尿素が製造されるのと同じ方法において対応するヒドロキシ尿素へ変換される。そのような反応の例はこの分野に見られる（Ｈｏｆｆｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９６４，７，６６５；Ｓｔｏｆｆｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｅｒ．Ｄｔｓｃｈ．Ｃｈｅｍ．Ｇｅｓ．１９７２，１０５，３１１５）。
【００９３】
同様に、Ｚ1 がＨでＺ2 がＯＨである式（Ｉ）の化合物は、適切な態様で試薬を交換することによって同じ方法によって製造することができる。
【００９４】
両方の場合、アリールアミンフラグメントの製造は特許文献に詳細に例証されている。例えば、ミラーら、“対称および非対称ジフェニル尿素を使用するｐ３８キナーゼの阻害”，ＷＯ９９／３２４６３；ミラーら、“対称および非対称ジフェニル尿素を使用するｒａｆキナーゼの阻害”，ＷＯ９９／３２４３６；デュマら、“置換複素環尿素を使用するｐ３８キナーゼ活性の阻害”，ＷＯ９９／３２１１１；デュマら、“Ｎ−ヘテロアリール−Ｎ’−（ヘテロ）アリール尿素を使用するｒａｆキナーゼの使用による新生物の処置方法”，ＷＯ９９／３２１０６；デュマら，“アリールおよびヘテロアリール置換複素環尿素を使用するｐ３８キナーゼ活性の阻害”，ＷＯ９９／３２１１０；デュマら、“アリールおよびヘテロアリール置換複素環尿素を使用するｒａｆキナーゼの阻害”，ＷＯ９９／３２４５５；リードルら、“ｒａｆキナーゼ阻害剤としてのＯ−カルボキシアリール置換ジフェニル尿素”，ＷＯ００／４２０１２；リードら、“ｐ３８キナーゼ阻害剤としてのＯ−カルボキシアリール置換ジフェニル尿素”，ＷＯ００／４１６９８。
【００９５】
ＹがＮＨＣＨ2 ＯＨである式（Ｉ）のヒドロキシメチルアミドは、この分野で既知の種々の方法、例えばエタノールおよび水酸化ナトリウムの存在下の水性ホルムアルデヒド（Ｗｅａｖｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９５１，１６，１１１１）または炭酸カリウムの存在下水性ホルムアルデヒド（Ｈａｗｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｕｃ．１９４６，１００３）により、対応する未置換アミドのヒドロキシル化によって製造することができる。
【００９６】
ＹがＮＨＯＨである式（Ｉ）のヒドロキサム酸はこの分野で既知の各種方法、例えば酢酸および水の存在下ヒドロキシルアミン（Ｂｏｓｈａｇｅｎ，Ｈ．Ｂｅｒ．Ｄｔｓｃｈ．Ｃｈｅｍ．Ｇｅｓ．１９６７，１００，９５４）によって対応するエステル（Ｙ＝Ｏあるキル）のアミド化によって製造することができる。同じ化合物は、対応する酸（Ｙ＝ＯＨ）からクロロギ酸エチルとの酸の１ポット活性化、次いでメタノール中ヒドロキシルアミンとの反応（Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．２０００，４１（３３），６２８５）により、または酸の１−アシルイミダゾールへの活性化、次いで、ヒドロキシルアミン塩酸塩との反応（Ｓｔａａｂ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍ．１９６２，７４，４０７）によって製造することができる。
【００９７】
最後に、尿素は当業者に親密な方法を使用してさらに処理することができる。
【００９８】
本発明は、本発明の化合物と、生理学的に許容し得る担体を含んでいる薬剤組成物を含む。
【００９９】
化合物は、経口的、局所的、非経口的、吸入もしくはスプレーにより、経膣的、経直腸的または経皮的に投与単位製剤において投与することができる。注射による投与は、静脈内、筋肉内、皮下および非経口注射、および注入技術の使用を含む。皮膚投与は局所適用および経皮投与を含むことができる。一以上の化合物は一以上の薬学的に許容し得る担体およびもし望むならば他の活性成分と組合せて存在することができる。
【０１００】
経口使用を意図する組成物は、薬剤組成物の製造のための当業者に知られた適当な方法に従って調製することができる。そのような組成物は希釈剤、甘味剤、香味剤、着色剤および保存剤よりなる群から選ばれた一以上の剤を服用可能な製剤を調製するために含むことができる。錠剤は錠剤の製造に適した非毒性の薬学的に許容し得る補助剤との混合物中の活性成分を含有する。これら補助剤は、例えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、乳糖、リン酸カルシウムもしくはリン酸ナトリウムのような不活性希釈剤；例えばコーンスターチまたはアルギン酸のような顆粒化および崩壊剤；および例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクのような結合剤であることができる。錠剤は未被覆か、またはそれらは胃腸管において崩壊および吸収を遅らせ、それにより長期間にわたって持続作用を提供するため公知技術によって被覆されることができる。例えばグリセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレートのような時間遅延材料を使用することができる。これらの化合物は固形の速放形に調製することもできる。
【０１０１】
経口使用のための製剤は、活性成分が例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウムもしくはカオリンのような不活性個体希釈剤と混合された硬化ゼラチンカプセルとして、または活性成分が水または油性媒体、例えばピーナッツオイル、流状パラフィンもしくはオリーブ油と混合された軟ゼラチンカプセルとして提供することもできる。
【０１０２】
水性懸濁液の製造に適した補助剤との混合物中の活性成分を含有する水性懸濁液も使用し得る。そのような補助剤は懸濁剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガントガム、アカシアガムであり、分散または湿潤剤は天然に存在するフォスファチド、例えばレシチン、または長鎖脂肪族アルコールとのエチレンオキシドの縮合物、例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール、またはポリオキシエチレンソルビトールモノオレエートのような脂肪酸とヘキシトールから得られた部分エステルとのエチレンオキシドの縮合生成物、または脂肪酸と無水ヘキシトールから得られた部分エステルとのエチレンオキシドの縮合生成物例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートであることができる。水性懸濁液は一以上の保存剤、例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルもしくはｎ−プロピル；一以上の着色剤；一以上の香味剤、およびショ糖もしくはサッカリンのような一以上の甘味剤を含むことができる。
【０１０３】
水の添加により水性懸濁液の調製に適した分散し得る粉末および顆粒は、分散または湿潤剤、懸濁剤および一以上の保存剤との混合物の活性成分を提供する。適切な分散もしくは湿潤剤および分散剤は既に上述したものによって例示されている。追加の補助剤、例えば甘味剤、香味剤および着色剤も存在することができる。
【０１０４】
化合物は非水性液体製剤の形、例えば活性成分を植物油、例えばアラキス油、オリーブ油もしくはピーナッツ油中に、または液状パラフィンのような鉱油中に分散することによって製剤化することができる油性懸濁液の形であってもよい。油性懸濁液は増粘剤、例えば蜜ロウ、硬パラフィンまたはセチルアルコールを含有することができる。服用し得る経口製剤を提供するため、上で述べたような甘味剤および香味剤を加えることができる。これら組成物はアスコルビン酸のような抗酸化剤の添加によって保存することができる。
【０１０５】
本発明の薬剤組成物は水中油型のエマルジョンの形にあることができる。油相は植物油例えばオリーブ油もしくはアラキス油、または鉱油例えば液状パラフィン、またはこれらの混合物でよい。好適な乳化剤は天然ガム例えばアカシアガムもしくはトラガントガム、天然フォスファチド例えば大豆レシチン、および脂肪酸と無水ヘキシトールから誘導されたエステルもしくは部分エステル例えばソルビタンモノオレエート、および前記エステルのエチレンオキシドとの縮合生成物例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートを含む。エマルジョンは甘味剤および香味剤を含むことができる。
【０１０６】
シロップおよびエリキサーは甘味剤例えばグリセロース、プロピレングリコール、ソクビトールもしくはショ糖で処方することができる。そのような処方は緩和剤、保存剤、香味剤および着色剤を含有することができる。
【０１０７】
化合物は薬物の直腸投与のための坐剤の形で投与することもできる。これらの組成物は、薬物を常温で固体であるがしかし直腸または膣温度では液体であり、そして直腸または膣内で溶融して薬物を放出する適当な非刺激性補助剤と混合することによって調製することができる。そのような材料はココアバターおよびポリエチレングリコールを含む。
【０１０８】
本発明の化合物のためここに記載したすべての療法のため、１日当りの経口投与療法は好ましくは０．０１ないし２００ｍｇ／ｋｇ全体重であろう。静脈内、筋肉内、皮下および非経口的、および注入技術の使用を含む注射投与のための１日当りの投与量は０．０１ないし２００ｍｇ／ｋｇ全体重であろう。１日当りの経膣投与療法は好ましくは０．０１ないし２００ｍｇ／ｋｇ全体重であろう。１日当りの経直腸投与療法は好ましくは０．０１ないし２００ｍｇ／ｋｇ全体重であろう。１日当りの局所投与療法は好ましくは１日１ないし４回投与される０．１ないし２００ｍｇであろう。経皮濃度は、好ましくは１日当り０．０１ないし２００ｍｇ／ｋｇの投与量を維持するのに要する濃度であろう。１日当りの吸入投与量は好ましくは０．０１ないし１０ｍｇ／ｋｇ全体重であろう。これらの投与療法は１日で、または週または月ベースのような延長投与において多数回投与によって達成することができる。
【０１０９】
当業者には、特定の投与方法は種々のファクターに依存し、そのすべての治療剤を投与する時日常的に考慮されるものであることが認められるであろう。しかしながら、与えられた患者に対する特定の投与量レベルは、投与される化合物の特定の活性、患者の年令、患者の体重、患者の一般的健康、患者の性別、患者の食事、投与時間、投与ルート、排泄速度、薬物併用、および治療を受ける症状の重篤度等を含む、種々のファクターに依存することが理解されるであろう。さらに当業者には、最適の治療コース、すなわち処置モードおよび限られた日数について本発明の化合物の日毎の投与回数は慣用の処置テストコースを使用して当業者により確かめることができることが認められるであろう。
【０１１０】
本発明の化合物は、既知化合物から（または既知化合物から製造することができる出発物質から）、例えばここに記載した一般的製造方法によって製造することができる。与えられた化合物のｒａｆ，ｐ３８またはＫＤＲ（ＶＥＧＦＲ２）キナーゼを阻害する活性は、例えばここに記載した操作に従って日常的にアッセイすることができる。
【０１１１】
１９９９年１０月２２日出願の米国特許出願Ｎｏ．０９／４２５，２２８および２００１年１月１２日出願の米国特許出願Ｎｏ．０９／４５８，５４８を含む、以上および以下で引用したすべての出願、特許および発表の全体の記載をここに参照として取入れる。
【０１１２】
さらに考究することなく、当業者は以上の説明を使用して本発明をその全範囲において利用することができるものと信じられる。従って以下の実施例は単に例証と考えるべきであり、開示の残部の限定と考えるべきではない。以下の実施例は例証目的であって、本発明をいかなる態様において限定を意図せず、またはそのように解すべきではない。
【０１１３】
実施例：
すべての反応は乾燥アルゴンまたは乾燥窒素の陽圧のもとで炎乾燥またはオーブン乾燥されたガラス器具内で実施され、そして特記しない限り磁気的に攪拌された。敏感な液体および溶液はシリンジまたはカニューレにより移され、そしてゴム栓を通って反応容器へ導入された。特記しない限り、「減圧下の濃縮」の用語は約１５ｍｍＨｇにおけるＢｕｃｈｉロータリエバポレーターの使用を指す。
【０１１４】
すべての温度は未補正の摂氏（℃）で報告される。特記しない限り、すべての部およびパーセントは重量による市販グレードの試薬および溶媒がさらに精製することなく使用された。
【０１１５】
薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）はＷｈａｔｍａｎプレコートガラスバックシリカゲル６０Ａ Ｆ−２５４の２５０μｍプレートを使用して実施した。プレートの可視化は次の技術の一以上によって実施された。（ａ）紫外線照射、（ｂ）ヨウ素蒸気へ曝露、（ｃ）エタノール中リンモリブデン酸１０％溶液中プレートの浸漬および続いて加熱、（ｄ）硫酸セリウム溶液中プレートの浸漬および続いて加熱、（ｅ）２，４−ジニトロフェニルヒドラジンの酸性エタノール溶液中プレートの浸漬および続いて加熱。カラムクロマトグラフィー（フラッシュクロマトグラフィー）は２３０−４００メッシュＥＭサイエンスシリカゲルを使用して実施された。
【０１１６】
融点（ｍｐ）は、Ｔｈｏｍａｓ−Ｈｏｏｖｅｒ融点装置またはＭｅｔｔｌｅｒＦＰ６６自動融点装置を使用して決定され、補正しなかった。フーリエ変換赤外スペクトルはＭａｔｔｓｏｎ ４０２０ Ｇａｌａｘｙシリーズ分光光度計を使用して得られた。プロトン（1Ｈ）核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルは、Ｇｅｎｅｒａｌ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ ＧＮ−オメガ３００（３００ＭＨｚ）スペクトロメータにより、標準としてＭｅ4Ｓｉ（δ０．００）またはプロトン化溶媒（ＣＨＣｌ3δ７．２６；ＭｅＯＨ δ３．３０；ＤＭＳＯ δ２．４９）で測定された。炭素（13Ｃ）ＮＭＲスペクトルはＧｅｎｅｒａｌ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ ＧＮ−オメガ３００（７５ＭＨｚ）スペクトロメータと、標準として溶媒（ＣＤＣｌ3δ７７．０；ＭｅＯＤ−ｄ3；δ４９．０；ＤＭＳＯ−ｄ6δ３９．５）で測定された。低解像質量スペクトル（ＭＳ）および高解像質量スペクトル（ＨＲＭＳ）は、電子インパクト（ＥＩ）質量スペクトルとして、または高速原子衝撃（ＦＡＢ）質量スペクトルとして得られた。電子インパクト質量スペクトル（ＥＩ−ＭＳ）はサンプル導入のためＶａｃｕｍｅｔｒｉｃ脱着化学的イオン化プローブを備えたヒューレット−パッカード５９８９Ａ質量スペクトル計で得られた。イオン源は２５０℃に維持された。電子インパクトイオン化は電子エネルギー７０ｅＶおよびトラップ電流３００μＡで実施された。液体セシウム二次イオン質量スペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）すなわち高速原子衝撃の最新型はＫｒａｔｏｓ Ｃｏｎｃｅｐｔ １−Ｈスペクトル計を用いて得られた。化学的イオン化質量スペクトル（ＣＩ−ＭＳ）は試薬ガスとして（１×１０-4トルないし２．５×１０-4トル）メタンまたはアンモニアを使用し、ヒューレット−パッカードＭＳ−エンジン（５９８９Ａ）を使用して得られた。直接挿入脱着化学的イオン化（ＤＣＩ）プローブ（Ｖａｃｕｍｅｔｒｉｃｓ，Ｉｎｃ）は１０秒で０〜１５Ａから立ち上げられ、サンプルの痕跡すべてが消失するまで（〜１〜２分）１０Ａに保たれた。スペクトルは２秒／走査において５０〜８００ａｍｕから走査された。ＨＰＬＣエレクトロスプレー質量スペクトル（ＨＰＬＣ ＥＳ−ＭＳ）は、四級ポンプ、可変波長検出器、Ｃ−１８カラム、およびエレクトロスプレーイオン化を有するＦｉｎｎｉｇａｎ ＬＣＱイオントラップ質量スペクトル計を備えたヒューレット−パッカード１１００ＨＰＬＣを使用して得られた。スペクトルはソースのイオンの数に従って可変イオン時間を使用して１２０〜８００ａｍｕから走査された。ガスクロマトグラフィー／イオン選択性質量スペクトル（ＧＣ−ＭＳ）は、ＨＰ−１メチルシリコーンカラム（０．３３ｍＭコーティング；２５ｍ×０．２ｍｍ）を備えたヒューレット−パッカード５８９０ガスクロマトグラフ、およびヒューレット−パッカード５９７１質量選択性検出器（イオン化エネルギー７０ｅＶ）で得られた。元素分析はＲｏｂｅｒｔｓｏｎ Ｍｉｃｒｏｌｉｔ Ｌａｂｓ．Ｍａｄｉｓｏｎ ＭＪによって実施された。
【０１１７】
すべての化合物は、帰属された構造と一致するＮＭＲスペクトル、ＬＲＭＳおよび元素分析もしくはＨＲＭＳをディスプレーした。
【０１１８】
〔実施例１〕
Ｎ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕−Ｎ’−｛４−〔２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−１−オキソ−（４−ピリジルオキシ）〕フェニル｝尿素の製造：
【０１１９】
【化５】
【０１２０】
無水ＣＨ2Ｃｌ2（２．２ｍｌ）と無水テトラヒドロフラン（２．２ｍｌ）の混液中のかきまぜたＮ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕−Ｎ’−｛４−〔２−（Ｎ−メチルカルバモイル）（４−ピリジルオキシフェニル）｝尿素（５００ｍｇ，１．０８ｍｍｏｌ）の混合物へ、３−クロロ過安息香酸（純度７７％，１．０９ｇ，４．８６ｍｍｏｌ，４．５当量）を加え、生成した混合物を４０℃で３３時間加熱した。生成した混合物を減圧濃縮し、そして粗生成物をＭＰＬＣ（ＢｉｏｔａｇｅTM；２０％アセトン／ヘキサンから５０％アセトン／ヘキサンまでの勾配）により精製した。ＥｔＯＡｃからの再結晶は白色固体としてＮ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕−Ｎ’−｛４−〔２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−１−オキソ−（４−ピリジルオキシ）〕フェニル｝尿素（２９３ｍｇ，５７％）を与えた。ｍｐ（未補正）２３２−２３４℃；ＴＬＣ（５０％アセトン／ヘキサン）Ｒｆ０．１３；1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．４８（ｂｒｏａｄ，ｓ，１Ｈ），９．１９（ｓ，１Ｈ），８．９８（ｓ，１Ｈ），８．３８（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１０（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｄｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），２．８６（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，３Ｈ）；ＨＰＬＣ ＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ４８１（（Ｍ＋Ｈ）+）；元素分析Ｃ21Ｈ16ＣｌＦ3Ｎ4Ｏ4，計算値Ｃ５２．４６％，Ｈ３．３３％，Ｎ１１．６５％；実験値Ｃ５２．２２％，Ｈ３．３９％，Ｎ１１．４９％
【０１２１】
〔実施例２〕
Ｎ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕−Ｎ’−｛４−カルバモイル−１−オキソ−（４−ピリジルオキシ）フェニル｝尿素の製造：
ステップ１：４−クロロ−２−ピリジンカルボキサマイドの製造
【０１２２】
【化６】
【０１２３】
濃アンモニア水（３２ｍｌ）に溶解した４−クロロ−２−ピリジンカルボキル酸メチル塩酸塩（１．０ｇ，４．８１ｍｍｏｌ）へ、塩化アンモニウム（９６．２ｍｇ，１．８ｍｍｏｌ，０．３７当量）を加え、不均質反応混合物を室温で１６時間攪拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）と水（３００ｍｌ）中へ注いだ。有機層を水（２×３００ｍｌ）と飽和食塩水（１×３００ｍｌ）で洗い、乾燥（ＭｇＳＯ4）、減圧濃縮し、ベージュ色の固体として４−クロロ−２−ピリジンカルボキサマイド（６０４．３ｍｇ，８０．３％）を得た。ＴＬＣ（５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）Ｒｆ０．２０；Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ８．６１（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），８．２０（Ｄｒｏａｄ，ｓ，１Ｈ），８．０２（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），７．７６（−７．７３（ｍ，１Ｈ）
【０１２４】
ステップ２：４−（４−アミノフェノキシ）−２−ピリジンカルボキサイドの製造
【０１２５】
【化７】
【０１２６】
無水ＤＭＦ（７．７ｍｌ）中の４−アミノフェノール（４１８ｍｇ，３．８３ｍｍｏｌ）へカリウムｔ−ブトキサイド（４４７ｍｇ，３．９８ｍｍｏｌ，１．０４当量）を一度に加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌し、そして４−クロロ−２−ピリジンカルボキサマイド（６００ｍｇ，３．８３ｍｍｏｌ，１．０当量）の無水ＤＭＦ（４ｍｌ）溶液を加えた。反応混合物を８０℃で３日攪拌し、ＥｔＯＡｃと飽和食塩水の混液中へ注いだ。有機層を飽和ＮＨ4Ｃｌ溶液および飽和食塩水で順次洗い、乾燥（ＭｇＳＯ4）、そして減圧濃縮した。粗生成物をＭＰＬＣクロマトグラフィー（ＢｉｏｔａｇｅTM；１００％ＥｔＯＡｃから１００％ＭｅＯＨ／５０％ＥｔＯＡｃ／４０％ヘキサンまでの勾配）を使用して精製し、褐色固体として４−クロロ−５−トリフロロメチルアニリン（５１０ｍｇ，５８％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ８．４３（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．０７（ｂｒｓ，１Ｈ），７．６６（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（ｄｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），６．６２（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），５．１７（ｂｒ，ｓ，２Ｈ）；ＨＰＬＣ ＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ２３０（（Ｍ＋Ｈ）+）
【０１２７】
ステップ３：Ｎ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕−Ｎ’−｛４−〔２−カルバモイル−（４−ピリジルオキシ）〕フェニル｝尿素の製造
【０１２８】
【化８】
【０１２９】
無水ジクロロエタン（５．５ｍｌ）中の４−クロロ−５−トリメチルアニリン（４５１ｍｇ，２．３１ｍｍｏｌ，１．１当量）と、１，１’−カルボニルジイミダゾール（４１９ｍｇ，２．５４ｍｍｏｌ，１．２当量の混合物をアルゴン下６５℃で１６時間攪拌した。一旦室温へ冷却し、無水ＴＨＦ（４．０ｍｌ）中の４−（４−アミノフェノキシ）−２−ピリジンカルボキサマイド（４８０ｍｇ，２．０９ｍｍｏｌ）の溶液を加え、反応混合物を６０℃で４時間攪拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ中へ注ぎ、有機層を水（２×）と飽和食塩水（１×）で洗い、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濾過し、そして減圧濃縮した。ＭＰＬＣクロマトグラフィー（ＢｉｏｔａｇｅTM；１００％ＥｔＯＡｃから２％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃまでの勾配）は、白色固体としてＮ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕−Ｎ’−｛４−〔２−カルバモイル−（４−ピリジルオキシ）〕フェニル｝尿素（７７０ｍｇ，８２％）を与えた。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）Ｒｆ０．１１（１００％ＥｔＯＡｃ）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ９．２１（ｓ，１Ｈ），８．９９（ｓ，１Ｈ），８．５０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．１１（ｓ，１Ｈ），８．１０（ｓ，１Ｈ），７．６９（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），７．６４（ｄｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．１４（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ ＬＣ−ＭＳ（ＭＨ+＝４５１）；元素分析Ｃ20Ｈ14ＣｌＦ3Ｎ4Ｏ3に対する計算値：Ｃ５３．２９％，Ｈ３．１３％；実験値Ｃ５３．３３％，Ｈ３．２１％，Ｎ１２．６０％
【０１３０】
ステップ４：Ｎ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕−Ｎ’−｛４−〔２−カルバモイル−１−オキソ−（４−ピリジルオキシ）〕フェニル｝尿素の製造
【０１３１】
【化９】
【０１３２】
Ｎ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕−Ｎ’−｛４−〔２−カルバモイル−１−オキソ−（４−ピリジルオキシ）〕フェニル｝尿素（１２５．６ｍｇ，５１％）は、Ｎ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕−Ｎ’−｛４−〔２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−１−オキソ−（４−ピリジルオキシ）〕フェニル｝尿素について記載した態様で、Ｎ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕−Ｎ’−｛４−〔２−カルバモイル−（４−ピリジルオキシ）〕フェニル｝尿素（２４０．０ｍｇ，０．５３ｍｍｏｌ）から白色固体として製造された。ＴＬＣ（５％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）Ｒｆ０．１７；1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０．７２（ｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，１Ｈ），９．２１（ｓ，１Ｈ），８．９９（ｓ，１Ｈ），８．３６（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），８．３１（ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，１Ｈ），８．１０（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｄｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｄｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ）；ＨＰＬＣ ＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ４６７（（Ｍ＋Ｈ）+）；元素分析Ｃ20Ｈ14ＣｌＦ3Ｎ4Ｏ4に対する計算値：Ｃ５０．４９％，Ｈ３．１８％，Ｎ１１．７８％；実験値Ｃ５０．６９％，Ｈ２．８６％，Ｎ１１．４７％
【０１３３】
生物学的実施例
ｐ３８キナーゼインビトロアッセイ：
化合物のインビトロ阻害性は、ｐ３８キナーゼ阻害アッセイを用いて決定された。ｐ３８活性は９６ウエルマイクロタータープレート中のインビトロキナーゼアッセイ実験を用いて検出された。組換えヒトｐ３８（０．５μｇ／ｍｌ）が、キナーゼバッファー（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ，２０ｍＭ ＭｇＣｌ2 および１５０ｍＭ ＮａＣｌの基質（ミエリン塩基性タンパク、５μｇ／ｍｌ）および化合物と混合された。３３ｐ標識ＡＴＰ（１０μＭ）が最終容積１００μｌまで加えられた。反応は３２℃で３０分間行われ、そして１Ｍ ＨＣｌ溶液で停止された。基質へ取り込まれた放射活性の量が１％リン酸溶液を用いて負に帯電したガラス繊維フィルター上に標識基質をトラップすることによって決定され、そしてシンチレーションカウンターで読み取られた。陰性対照は基質プラスＡＴＰ単独を含んでいる。
【０１３４】
マウス中のＬＰＳ誘発ＴＮＦα生産：
選択された化合物のインビボ阻害性質はインビボモデルにおいてネズミＬＰＳ誘発ＴＮＦα生産を用いて決定することができる。１０群のＢＡＬＢ／ｃ（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｎ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｋｉｎｇｓｔｏｎ，ＮＹ）が記録されたルートによってビヒクルまたは化合物で処理された。１時間後エンドトキシン（Ｅ．ｃｏｌｉ リポポリサッカライド（ＬＰＳ）１００μｇ）が腹腔内（ｉ．ｐ．）投与された。９０分後動物を二酸化炭素窒息により安楽死させ、そして個々の動物から心臓穿刺によりヘパリン化チューブ中へ血漿を採取した。サンプルは１２，５００×ｇにおいて５分間４℃で遠心することにより清澄化した。上清を新しいチューブへ傾斜し、必要な時−２０℃で貯蔵した。血清中のＴＮＦαレベルは市販のネズミＴＮＦ ＥＬＩＳＡキット（Ｇｅｎｚｙｍｅ）を用いて測定した。
【０１３５】
上の２つの生物学的実施例は、化合物がインビトロおよびインビボにおいてｐ３８キナーゼを阻害することを証明するために用いることができ、それ故炎症および骨粗しょう症のようなｐ３８仲介病の処置におけるそれらの有用性を確立する。
【０１３６】
Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ｒａｆキナーゼアッセイ：
ｉｎ ｖｉｔｒｏでのキナーゼアッセイにつき、ｒａｆを２ｍＭ ２−メルカプトエタノールおよび１００ｍＭ ＮａＣｌを含有する２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ中ＭＥＫ、ｐＨ８．２を用いてインキュベートした。このタンパク質溶液（２０μＬ）を水（５μＬ）またはＤＭＳＯに溶解した化合物の１０ｍＭ ストック溶液から蒸留水で希釈した化合物とともに混合した。８０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ中の２５μＬ［γ−33Ｐ］ＡＴＰ（１０００〜３０００ｄｐｍ／ｐｍｏｌ）、ｐＨ７．５、１２０ｍＭ ＮａＣｌ、１．６ｍＭ ＤＴＴ、１６ｍＭ ＭｇＣｌ2を加えることによりキナーゼ反応を開始した。反応混合物を３２℃で、通常２２分間インキュベートした。33Ｐのタンパク質への取り込みを、ホスホセルロ−スマット上に反応物をおき、１％リン酸溶液で遊離のカウントを洗浄除去し、液体シンチレーションカウンターによりリン酸化をはかることによりアッセイした。高処理量スクリーニングについては、１０μＭ ＡＴＰおよび０．４μＭ ＭＥＫを用いた。いくつかの実施例においては、Ｌａｅｍｍｌｉ試料緩衝液を当量加えることによりキナーゼ反応を止めた。試料を３分間沸騰させ、タンパク質を７．５％Ｌａｅｍｍｌｉゲル上で電気泳動して分けた。ゲルを固定、乾燥し、イメージングプレート（Ｆｕｊｉ）にさらした。電気泳動はＦｕｊｉｘ Ｂｉｏ−Ｉｍａｇｉｎｇ Ａｎａｌｙｚｅｒ Ｓｙｓｔｅｍを用いて解析した。このアッセイにおいて、実施例１および２の化合物は１０μＭにおいて＞５０％阻害を示し、インビトロにおいてｒａｆキナーゼの著しい阻害を示した。
【０１３７】
腫瘍細胞増殖アッセイ：
ｉｎ ｖｉｔｒｏ成長アッセイのために、変異Ｋ−ｒａｓ遺伝子を含有する、ＨＣＴ１１６およびＤＬＤ−１といった、しかしこれらに限定されないヒト腫瘍細胞系について、プラスチック上での足場依存性成長または軟質寒天における足場依存性成長の標準的増殖アッセイに用いた。ヒト腫瘍細胞系をＡＴＣＣ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ ＭＤ）から入手し、１０％熱不活性化仔ウシ血清および２００ｍＭグルタミンを有するＲＰＭＩにて維持した。仔ウシ血清（ＪＲＨ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｌｅｎｅｘａ， ＫＳ）以外の、細胞培養培地および添加剤はＧｉｂｃｏ／ＢＲＬ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ， ＭＤ）から入手した。足場依存性成長についての標準的増殖アッセイでは、３×１０3個の細胞を９６ウェル組織培養プレートにまき、一晩３７℃で５％ＣＯ2インキュベーターにおいて付着させた。化合物を希釈系の培地に砕き、９６ウェル細胞培養に加えた。３日ごとに新鮮な培地含有化合物を与え、細胞を５日間典型的に成長させた。ＯＤ４９０／５６０で標準的ＥＬＩＳＡプレートリーダーにより測定し、標準的ＸＴＴ比色アッセイ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）で代謝活性を測定しながら、または細胞収集具を用いてガラス繊維マット上に細胞をおき、液体シンチレーションカウンターにより3Ｈ−チミジンの取り込みを測定することにより、１μＣｕ3Ｈ−チミジンを用いた８時間培養後の3Ｈ−チミジンのＤＮＡへの取り込みを測定し、増殖をモニターした。
【０１３８】
足場依存性細胞成長について、ＲＰＭＩ完全培地を用いた０．４％Ｓｅａｐｌａｑｕｅアガロ−スに細胞を１×１０3〜３×１０3でまき、２４ウェル組織培養プレートでＲＰＭＩ完全培地に０．６４％寒天のみを含有する底の層を重ねた。完全培地と化合物の希釈系とをウェルに加え、３７℃で５％ＣＯ2インキュベーター中１０〜１４日間インキュベートし、３〜４日間隔で化合物を含有する新鮮培地を繰り返し与えた。コロニー形成をモニターし、細胞塊の総和、平均コロニーサイズおよびコロニー数を、イメージ表現技術およびイメージ解析ソフトウェアを用いてはかった（Ｉｍａｇｅ Ｐｒｏ Ｐｌｕｓ， ｍｅｄｉａ ｂｙ Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ）。
【０１３９】
これらのアッセイは、式Ｉで示される化合物がＲａｆキナーゼ活性を阻害し、がん遺伝子細胞成長を阻害することを立証する。
【０１４０】
ＫＤＲ（ＶＥＧＦＲ２）アッセイ：
ＫＤＲキナーゼのサイトゾルキナーゼドメインはＳｆ９昆虫細胞内に６Ｈｉｓ融合タンパクとして発現される。このＫＤＲキナーゼドメイン融合タンパクをＮｉ++キレーティングカラム上で精製した。９６ウエルＥＬＩＳＡプレートを１００μｌ ＨＥＰＥＳバッファー（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ，０．１％ＢＳＡ，ｐＨ７．５，１５０ｍＭ ＮａＣｌ，０．０２％チメロサール）中のＨＥＰＥＳバッファー（２０ｍＭポリ（Ｇｌｕ４；Ｔｙｒ１）（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で４℃で一夜コートした。使用前、プレートはＨＥＰＥＳ，ＮａＣｌバッファーで洗い、そしてプレートを１％ＢＳＡ，ＨＥＰＥＳ中の１％Ｔｗｅｅｎ２０，ＮａＣｌバッファーでブロックした。
【０１４１】
テスト化合物は１００％ＤＭＳＯ中に４ｍＭから０．１２μＭまで半対数希釈において系統的に希釈された。これら希釈液は５％ＤＭＳＯ中の化合物溶液を得るため水中に２０倍にさらに希釈された。アッセイプレートを８５μｌのアッセイバッファー（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．５，１００ｍＭ ＫＣｌ，１０ｍＭ ＭｇＣｌ2，３ｍＭ ＭｎＣｌ2，０．０５％グリセロール，０．００５％トリトンＸ−１００，１ｍＭメルカプトエタノール、３．３μＭ ＡＴＰありまたはなし）でローデング後、希釈した化合物５μｌを最終アッセイ体積１００μｌまで加えた。アッセイは１０μｌ（３０ｎｇ）のＫＤＲキナーゼドメインの添加によって開始された。
【０１４２】
アッセイは、テスト化合物またはビヒクル単独について緩かな攪拌のもとで室温で６０分間インキュベートされた。ウエルは洗浄され、そしてホスフォチロシン（ＰＹ）が抗ホスフォチロシン（ＰＹ）ｍＡｂクローン４Ｇ１０（Ｕｐｓｔａｔｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｌａｋｅ Ｐｌａｃｉｄ，ＮＹ）と共にプローブされた。ＰＹ／抗ＰＹ複合体を抗マウスＩｇＧ／ＨＲＰ接合体（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｐｌｃ，Ｂｕｃｋｉｎｇａｍｓｈｉｒｅ，Ｅｎｇｌａｎｄ）で検出した。ホスフォチロシンは１００μｌの３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン溶液（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ ａｎｄ Ｐｅｒｒｙ，ＴＭＢ Ｍｉｃｒｏｗｅｌｌ １ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ペルオキシダーゼ基）とインキュベートすることにより定量された。発色はＨＣｌ系停止液１００μｌ（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ ａｎｄ Ｐｅｒｒｙ，ＴＭＢ １ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ停止液）の添加によって停止された。光学密度は４５０ｎｍにおいて９６ウエルリーダーＳｐｅｃｔｒａ Ｍａｘ ２５０（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅ）中で分光測光法的に決定された。バックグラウンドＯＤ（アッセイ中ＡＴＰなし）がすべてのＯＤから差引かれ、そして％阻害が下記式に従って計算された。
【０１４３】
％阻害＝（ＯＤ（ビヒクル対照）−ＯＤ（化合物））／（ＯＤ（ビヒクル対照）−ＯＤ
（ＡＴＰなし）×１００
【０１４４】
ＩＣ50値は化合物濃度対％阻害を用いて最小自乗プログラムで決定された。
【０１４５】
細胞機械的アッセイ−３Ｔ３ＫＤＲホスフォリール化の阻害：
ＫＤＲレセプターの全長を発現するＮＩＨ３Ｔ３を１０％新生ウシ血清、低グルコース、２５ｍＭ／Ｌピルジン酸ナトリウム、塩酸ピリドキシンおよび０．２ｍｇ／ｍｌのＧ４１８（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）で補足したＤＭＥＭ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）中で生育させる。細胞はコラーゲン−ＩをコートしたＴ７５フラスコ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｏｃｋｉｎｓｏｎ Ｌａｂｗａｒｅ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）中で加湿した５％ＣＯ2雰囲気中３７℃で維持する。
細胞１５，０００個はＤＭＥＭ生育媒地中のコラーゲンＩをコートした９６ウエルプレートの各ウエル中へプレートされる。６時間後、細胞を洗い、そして培地を血清なしのＤＭＥＭで交換する。細胞を静止させるため一夜培養した後、培地は０．１％ウシアルブミン（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を加えたＤｕｌｂｅｃｃｏ リン酸緩衝化食塩水（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）により交換する。種々の濃度（０−３００ｍＭ）のデスト化合物をＤＭＳＯの１％最終濃度において細胞へ加えた後、細胞を室温で３０分インキュベートする。ＶＥＧＦ刺激の後、バッファーを除去し、細胞は抽出バッファー（１０％グリセロール，５０ｍＭ ＢＧＰ，２ｍＭ ＥＤＴＡ，１０ｍＭ ＮａＦ，０．５ｍＭ ＮａＶＯ4，０．３％ ＴＸ−１００を補足した９０ｍＭ トリス，ｐＨ７．８）の１５０μｌの添加により、４℃で３０分溶解する。
レセプターホスフォリール化を評価するため、各細胞溶解液の１００μｌを抗体Ｃ２０（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ，ＣＡ）３００ｎｇでプレコートしたＥＬＩＳＡプレートのウエルへ加える。６０分間のインキュベーション後、プレートを洗い、結合ＫＤＲを抗ホスホチロシンｍＡｂクローン４Ｇ１０（Ｕｐｓｔａｔｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｌａｋｅ Ｐｌａｃｉｄ，ＮＹ）を用いてホスフォチロシンについてプローブする。ウエルを洗い、そして抗マウスＩｇＧ／ＨＲＰ接合体（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｐｌｅ，Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｅｒｅ，Ｅｎｇｌａｎｄ）と６０分間インキュベートする。ウエルを洗浄し、そしてホスフォチロシンを１００μｌ／ウエルの３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ ａｎｄ Ｐｅｒｒｙ，ＴＭＢ １コンポーネント停止溶液）の添加によって定量する。
光学密度（ＯＤ）を４５０ｎｍにおいて９６ウエルリーダー（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ２５０，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅ）中で分光測光法的に決定する。バックグラウンドＯＤ（ＶＥＧＦ 添加なし）はすべてのＯＤから差引かれ、そして％阻害が下記式に従って計算される。
【０１４６】
％阻害＝（ＯＤ（ＶＥＧＦ対照）−ＯＤ（テスト化合物））／（ＯＤ（ＶＥＧＦ対照）−ＯＤ（ＶＥＧＦ無添加））×１００
【０１４７】
ＩＣ50値は化合物濃度対阻害を用いていくつかの実験材料について最小自乗プログラムによって決定される。
【０１４８】
ＶＥＧＦＲ阻害のインビボアッイセ：
ＭａｔｒｉｇｅｌTM脈管形成モデル
Ｍａｔｒｉｇｅｌプラグの調製およびインビボフェーズ：
ＭａｔｒｉｇｅｌTM（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｂｅｄｏｒｄ，ＭＡ）は、主としてラミニン、コラーゲンＩＶおよびヘパランサルフェートプロテオグリカンより構成されるネズミ腫瘍からの基底膜抽出物である。それは４℃において無菌液として提供されるが、しかし３７℃において固体ゲルを容易に生成する。
４℃のＭａｔｒｉｇｅｌを、選別できるマーカーを有するネズミＶＥＧＦ遺伝子を含むプラスミドで形質転換したＳＫ−ＭＥＬ２ ヒト腫瘍細胞と混合する。腫瘍細胞は選別下インビトロで生育され、そして細胞は２×１０6／０．５ｍｌの比で冷Ｍａｔｒｉｇｅｌ液と混合される。２５ゲージ針を用いて１／２ｍｌを腹中央線近くに皮下移植する。テスト化合物は、移植日から出発して１日１回３０，１００および３００ｍｇ／ｋｇＰＯにおいてエタノール／Ｃｅｒｅｍａｐｈｏｒ ＥＬ／食塩水（１２．５％：１２．５％：７５％）中の溶液として投与される。移植後１２日にマウスを安楽死させ、そしてＭａｔｒｉｇｅｌペレットをヘモグロビン含量の分析のために収穫する。
ヘモグロビンアッセイ：
Ｍａｔｒｉｇｅｌペレットは、４℃の溶解バッファー（２０ｍＭトリスｐＨ７．５，１ｍＭ ＥＧＴＡ，１ｍＭ ＥＤＴＡ，１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００（ＥＭ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ，ＮＪ）、および完全ＥＤＴＡ フリープロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ））の４容積中に入れ、４℃でホモジネートされる。ホモジネートは氷の上で振とうしながら３０分間インキュベートされ、４℃で３０分１４Ｋ×ｇにおいて遠心される。上清は冷たいマイクロ遠心チューブに移され、そしてヘモグロビンアッセイのために４℃で貯蔵される。
マウスヘモグロビン（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）はオートクレーブ滅菌水（Ｂｉｏ Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｉｎｃ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌ，ＭＤ）に５ｍｇ／ｍｌに懸濁する。標準曲線は溶解バッファー（上述）中で５００μｇ／ｍｌから３０μｇ／ｍｌまで作成される。標準曲線および溶解物サンプルはポリスチレン９６ウエルプレートへ５μｌ／ウエルにおいて二重に加えられる。Ｓｉｇｍａ血漿ヘモグロビンキット（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を用い、ＴＭＳ基質を室温酢酸溶液５０ｍｌ中に復元する。基質１００μｌを各ウエルへ加え、次に室温で過酸化水素溶液１００μｌ／ウエルを加える。
光学密度は６００ｎｍにおいて９６ウエルリーダー（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ２５０マイクロプレート分光光度計システム、Ｍｏｌｅｃｎｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）を用いて分光測光法で決定される。バックグラウンド溶解物バッファーの読みはすべてウエルから差引かれる。
総サンプルヘモグロビン含量は以下の式に従って計算される。
【０１４９】
総ヘモグロビン＝（サンプル溶解物容積）×（ヘモグロビン濃度）
【０１５０】
細胞なしのＭａｔｒｉｇｅｌサンプルの平均総ヘモグロビンは細胞ありの総ヘモグロビンＭａｔｒｉｇｅｌサンプルの各自から差し引かれる。％阻害は以下の式に従って計算される。
【０１５１】
％阻害＝（平均総ヘモグロビン薬物処置腫瘍溶解物）／（平均総ヘモグロビン非処置腫瘍溶解物）×１００
【０１５２】
ｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍アッセイ：
ｒａｆキナーゼによって媒介される腫瘍（例えば充実性癌）に対する化合物の阻害作用のｉｎ ｖｉｖｏアッセイは、次のように実施する：
ＣＤＩ ｎｕ／ｎｕマウス（６−８週齢）の側腹部に、ヒト結腸腺癌細胞系を１×１０6細胞の割合で皮下注射する。腫瘍の大きさが５０−１００ｍｇとなるおよそ１０日間から、マウスに１０，３０，１００又は３００ｍｇ／Ｋｇを腹腔内、静脈内又は経口投与する。１日１回、連続１４日間動物に投与する；腫瘍の大きさを週に２回カリパスでモニターする。Ｍｏｎｉａら（Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１９９６，２，６６８−７５）の手法に従ってｒａｆキナーゼによって媒介される腫瘍（例えば充実性癌）に対する化合物の阻害作用をｉｎ ｖｉｖｏでさらに明らかにすることができる。
【０１５３】
前記の実施例は、前記の実施例で使用したものを一般的にあるいは特定して述べの反応物質に置き換える、及び／あるいは本発明の条件を操作することによって反復し、同様の成功を収めることができる。
【０１５４】
上記の説明から、当業者は本発明の本質的特性を容易に確認し、その精神と範囲から逸脱することなく、様々な用途及び条件に適合するように本発明に様々な変更及び修正を加えることができる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アリール尿素およびそれらの合成方法に関する。本発明化合物は、
（ｉ）ｒａｆ仲介病、例えばがん
（ｉｉ）炎症および骨粗しょう症のようなｐ３８仲介病、および
（ｉｉｉ）脈管形成障害のようなＶＥＧＦ仲介病
の処置において有用である。
【背景技術】
【０００２】
Ｒａｓ信号形質導入経路の活性化は、細胞の増殖、分化および形質転換に深いインパクトを有する出来事のカスケードを指示する。Ｒａｓの下流エフェクターであるＲａｆキナーゼは、細胞表面から細胞核へのこれらの信号のキーメディエーターである（Ｌｏｗｙ，Ｄ．Ｒ．；Ｗｉｌｌｕｍｓｅｎ，Ｂ．Ｍ．Ａｎｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９９３，６２，５８１；Ｂｉｏ，Ｊ．Ｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９８９，４９，４６８２）。ｒａｆキナーゼに対する脱活性抗体の投与による、または優生ネガティブｒａｆキナーゼもしくはｒａｆキナーゼの基質である優性ネガティブＭＥＫの同時発現によってｒａｆキナーゼ信号経路を阻害することによる活性ｒａｓの効果の阻害は、形質転換された細胞の正常発現プロトタイプへの逆転へ導くことが示されている（Ｄａｕｍ ｅｔ ａｌ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１９９４，１９，４７８−８０；Ｆｒｉｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９４，２６９，３０１０５−８を見よ）。Ｋｏｌｃｈ ｅｔ ａｌ．（Ｎａｔｕｒｅ １９９１，３４９，４２６−２８）は、アンチセンスＲＮＡによるｒａｆ発現の阻害は膜関連がん遺伝子中の細胞増殖をブロックすることをさらに示した。同様に、ｒａｆキナーゼの阻害（アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドによる）は種々のヒト腫瘍タイプの発育の阻害とインビトロおよびインビボにおいて相関していた（Ｍｏｎｉａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１９９６，２，６６８−７５）。このように、Ｒａｆキナーゼ活性の小分子阻害剤はがん処置のための重要な剤である（Ｎａｕｍａｎｎ，Ｕ；Ｅｉｓｅｎｍａｎｎ−Ｔａｐｐｅ，Ｉ；Ｒａｐｐ，Ｕ．Ｒ．Ｒｅｃｅｎｔ Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９７，１４３，２３７；Ｍｏｎｉａ，Ｂ．Ｐ．；Ｊｏｈｓｏｎ，Ｊ．Ｆ．；Ｇｅｉｇｅｒ，Ｔ．；Ｍｊｕｌｌｅｒ，Ｍ．；Ｆａｂｂｒｏ，Ｄ．Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １９９６，２，６６８）。
【０００３】
ｐ３８の阻害は、サイトカイン生産（例えばＴＮＦα，ＩＬ−１，ＩＬ−６，ＩＬ−８）およびタンパク分解酵素生産（例えばＭＭＰ−１，ＭＭＰ−３）をインビトロおよび／またはインビボにおいて阻害することが示されている。マイトジェン活性化タンパク（ＭＡＰ）キナーゼｐ３８はＩＬ−１およびＴＮＦ信号経路に含まれている（Ｌｅｅ，Ｊ．Ｃ．；Ｌａｙｄｏｎ，Ｊ．Ｔ．；ＭｃＤｏｎｎｅｌｌ，Ｐ．Ｃ．；Ｇａｌｌａｇｈｅｒ，Ｔ．Ｆ．；Ｋｕｍａｒ，Ｓ．；Ｇｒｅｅｎ，Ｄ．，ＭｃＮｕｌｔｙ，Ｄ．；Ｂｌｕｍｅｎｔｈａｌ，Ｍ．Ｊ．；Ｈｅｙｓ，Ｊ．Ｒ．；Ｌａｎｄｖａｔｔｅｒ，Ｓ．Ｗ．；Ｓｔｒｉｃｋｅｒ，Ｊ．Ｅ．；ＭｃＬａｕｇｈｉｎ，Ｍ．Ｍ．；Ｓｉｅｍｅｎｓ，Ｉ．Ｒ．；Ｆｉｓｈｅｒ，Ｓ．Ｍ．；Ｌｉｖｉ，Ｇ．Ｐ．；Ｗｈｉｔｅ，Ｊ．Ｒ．；Ａｄａｍｓ，Ｊ．Ｌ．；Ｙｏｕｎｄ，Ｐ．Ｒ．Ｎａｔｕｒｅ １９９４，３７２，７３９）。
【０００４】
臨床研究は、ＴＮＦα生産および／またはシグナリングをリウマチ性関節炎を含む多数の病気へリンクさせた（Ｍａｉｎｉ，Ｊ．Ｒｏｙａｌ Ｃｏｌｌ．Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ Ｌｏｎｄｏｎ １９９６，３０，３４４）。加えて、ＴＮＦαの過剰レベルは、急性リウマチ熱（Ｙｅｇｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｌａｎｃｅｔ １９９７，３４９，１７０），骨吸収（Ｐａｃｉｆｉｃｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｏｎｅ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂｏｌ．１９９６，１１，１０４３），閉経後骨粗しょう症（Ｐａｃｉｆｉｃｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒａｌ Ｒｅｓ．１９９６，１１，１０４３），敗血症（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．Ｂｒ．Ｊ．Ａｎａｅｓｔｈ．１９９６，７７，１１０），グラム陰性敗血症（Ｄｅｂｅｔｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｇ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓ．１９８９，３０８，４６３），敗血症ショック（Ｔｒａｃｅｙ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ １９８７，３３０，６６２；Ｇｉｒａｒｄｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊ．Ｍｅｄ．１９８８，３１９，３９７），エンドトキシンショック（Ｂｅｕｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８５，２２９，８６９；Ａｓｈｋｅｎａｓｉ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９９１，８８，１０５３５），毒性ショック症候群（Ｓａｈａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６，１５７，３８６９；Ｌｉｎａ ｅｔ ａｌ．ＦＥＭＳ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９９６，１３，８１），全身炎症応答症候群（Ａｎｏｎ，Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ．Ｍｅｄ．１９９２，２０，８６４），クローン病（ｖａｎ Ｄｕｌｌｅｍｅｎ ｅｔ ａｌ．Ａｌｉｍｅｎｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒａｐｌｕ．１９９６，１０（Ｓｕｐｐｌ．２），１０７；ｖａｎ Ｄｕｌｌｅｍｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｇｙ １９９５，１０９，１２９）および潰瘍性大腸炎（Ｍａｓｕｄａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９５，４６，１１１）を含む炎症性腸病（Ｓｔｏｋｅｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｎｆｌａｍｍ．１９９５−６，４７，９７），Ｊａｒｉｓｃｈ−Ｈｅｒｘｈｅｉｍｅｒ 反応（Ｆｅｋａｄｅ ｅｔ ａｌ．Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊ．Ｍｅｄ．１９９６，３３５，３１１），喘息（Ａｍｒａｎｉ ｅｔ ａｌ．Ｒｅｖ．Ｍａｌａｄ．Ｒｅｓｐｉｒ．１９９６，１３，５３９），成人呼吸器窮迫症候群（Ｒｏｔｅｎ ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．１９９１，１４３，５９０；Ｓｕｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．１９９２，１４５，１０１６），急性肺線維症（Ｐａｎ ｅｔ ａｌ．Ｐａｔｈｏｌ．Ｉｎｔ．１９９６，４６，９１），肺サルコイド−シス（Ｉｓｈｉｏｋａ ｅｔ ａｌ．Ｓａｒｃｏｉｄｏｓｉｓ Ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ Ｄｉｆｆｕｓｅ Ｌｕｎｇ Ｄｉｓ．１９９６，１３）１３９；アレルギー性呼吸器病（Ｃａｓａｌｅ ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ Ｍｅｌ．Ｂｉｏｌ．１９９６，１５，３５），ケイ肺病（Ｇｏｓｓａｒｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６，１５６，１５４０；Ｖａｎｈｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．１９９５，８，８３４）；炭鉱労働者じん肺病（Ｂｏｒｍ ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．１９８８，１３８，１５８９），肺胞傷害（Ｈｏｒｉｎｏｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９９６，１４，１０４４），肺不全（Ｇａｎｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｄｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒａｐ．１９９７．２８０．５３），急性炎症中の肝臓病（Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９７，２７２，１４０２），重症アルコール性肝炎（Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎ Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．１９９０，１１２，９１７），Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍマラリア（Ｐｅｒｌｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎｉｔ．１９９７，６５，１１６）および脳性マラリア（Ｒｕｄｉｎ ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１９９７，１５０，２５７）を含むマラリア（Ｇｒａｕ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１９８９，１１２，４９；Ｔａｖｅｎｅ ｅｔ ａｌ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌ．Ｔｏｄａｙ １９９６，１２，２０９），インスリン非依存性真性糖尿病（ＮＩＤＤＭ；Ｓｔｅｐｈｅｎｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９７，２７２，９７１；Ｏｆｅｉ ｅｔ ａｌ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ １９９６，４５，８８１），うつ血性心不全（Ｄｏｙａｍａ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．１９９６，５４，２１７；ＭｃＭｕｒｒａｙ ｅｔ ａｌ．Ｂｒ．Ｈｅａｒｔ Ｊ．１９９１，６６，３５６），心臓病後の損傷（Ｍａｌｋｉｅｌ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．Ｔｏｄａｙ １９９６，２，３３６），動脈硬化（Ｐａｒｕｍｕｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１９９６，１７９，Ａ４６），アルツハイマー病（Ｆｒａｇａｒａｓａｎ ｅｔ ａｌ．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．１９９６，７２３，２３１；Ａｉｓｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ １９９７，４３，１４３），急性脳炎（Ｉｃｈｉｙａｍａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．１９９６，２４３，４５７），脳傷害（Ｃａｎｎｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１９９２，２０，１４１４；Ｈａｎｓｂｒｏｕｇｈ ｅｔ ａｌ．Ｓｕｒｇ．Ｃｌｉｎ，Ｎ．Ａｍ．１９８７，６７，６９）；Ｍａｒａｎｏ ｅｔ ａｌ．Ｓｕｒｇ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｏｂｓｔｅｔｒ．１９９０，１７０，３２），多発性硬化症における脱髄および稀突起細胞損失（Ｂｒｏｓｎａｎ ｅｔ ａｌ．Ｂｒａｉｎ Ｐａｔｈｏｌ．１９９６，６，２４３）を含む多発性硬化症（Ｍ．Ｓ．；Ｃｏｙｌｅ．Ａｄｖ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６，６，１４３；Ｍａｔｕｓｅｖｉｃｉｕｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６，６６，１１５），進行がん（ＭｕｃＷｉｅｚｇｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ Ｒｅｇｕｌａｔｅｒｓ Ｈｏｍｅｏｓｔａｔｉｃ Ａｇｅｎｔｓ １９９６，１０，２５），リンパ悪性疾患（Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６，１６，３１），急性膵炎中の全身合併症（ＭｃＫａｙ ｅｔ ａｌ．Ｂｒ．Ｊ．Ｓａｒｇ．１９９６，８３，９１９）を含む膵炎（Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６，１６，３１），感染炎症およびがんにおける創傷治癒障害（Ｂｕｃｋ ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１９９６，１４９，１９５），脊髄形成異常症候群（Ｍａｕｒｙ ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．１９８９，３２，１４６），胆汁性肝硬変（Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｇａｓｔｅｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇ．１９９２，８７，４６５），腸壊死（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９８８，８１，１３２８），乾癬（Ｃｈｒｉｏｔｏｐｈｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１９９６，３７，Ｓ４），放射線傷害（Ｒｅｄｌｉｓｈ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６，１７０５）およびＯＫＴ３のようなモノクローナル抗体投与後の毒性（Ｂｒｏｄ ｅｔ ａｌ．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ １９９６，４６，１６３３）を含む、多種類の炎症および／または免疫調節病にかかわっている。ＴＮＦαレベルは、虚血性灌流障害（Ｃｏｌｌｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９８９，８５，１３３３）を含むホスト対グラフト反応（Ｐｉｇｕｅｔ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｓｅｒ．１９９２，５６，４０９）および腎臓（Ｍａｕｒｙ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９８７，１６６，１１３２）、肝臓（Ｉｍａｇａｗａ ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ １９９０，５０，２１９），心臓（Ｂｏｌｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ １９９２，５３，２８３）および皮膚（Ｓｔｅｖｅｎｓ ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｐｒｏｃ．１９９０，２２，１９２４）を含むアログラフト反応、慢性肺アログラフト拒絶(閉塞性気管支炎；ＬｏＣｉｃｅｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｔｈｏｒａｃ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｅ Ｓｕｒｇ．１９９０，９９，１０５９）を含む肺アログラフト拒絶（Ｇｒｏｓｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｈｎ ．Ｎ．Ａｍ．１９８９，９，１５３），それに全股関節置換による合併症（Ｃｉｒｉｎｏ ｅｔ ａｌ．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．１９９６，５９，８６）にも関係している。ＴＮＦαは、結核（Ｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｄ．Ｍａｌａｄ．Ｉｎｆｅｃｔ．１９９６，２６，９０４），消化性潰瘍中のヘリコバクターピロリ感染（Ｂｅａｌｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ １９９７，１１２，１３６），Ｔｒｙｐａｎｏｓａｍａ ｃｒｕｚｉ 感染から発生するチャガ病（Ｃｈａｎｄｒａｓｅｋａｒ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９９６，２２３，３６５），Ｅ．ｃｏｌｉ感染から発生するシガ様トキシンの影響（Ｈａｒｅｌ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９９２，５６，４０），Ｓｔａｐｈｙｒｏｃｏｃｃｕｓ感染から発生するエンテロトキシンＡの影響（Ｆｉｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９０，１４４，４６６３），ｍｅｍｉｎｇｏｃｏｃｃａｌ感染（Ｗａａｇｅ ｅｔ ａｌ．Ｌａｎｃｅｔ １９８７，３５５；Ｏｓｓｅｇｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌｇ．Ｓｃｉ．１９９６，１４４，１），そしてＢｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｇｅｒｉ（Ｂｒａｎｄｔ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９０，５８，９３８），Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ（Ｃｈｅｍｂｅｒｌｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８９，５７，２８７２），サイトメガロウイルス（ＣＭＶ；Ｇｅｉｓｔ ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９９７，１６，３１），インフルエンザウイルス（Ｂｅｕｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ．Ｒｅｓ．１９８６，３４，４９１ａ），センダイウイルス（Ｇｏｌｄｆｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９８９，８７，１４９０），タイラー脳脊髄炎（Ｓｉｅｒｒａ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １９９３，７８，３９９），およびヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ；Ｐｏｌｉ，Ｐｒｏ．Ｎａｔ’ｌ ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９９０，８７，７８２；Ｖｙａｋａｒａｍ ｅｔ ａｌ．ＡＩＤＳ １９９０，４，ｆ２１；Ｂａｄｌｅｙ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９７，１８５，５５）からの感染を含む、感染病にリンクしている（ｒｅｖｉｅｗ：Ｂｅｕｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１９９３，２１，５４２３；Ｄｅｇｒｅ，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ １９９６，８，２１９）。
【０００５】
多数の病気は過剰または望ましくないマトリックス破壊メタロプロテアーゼ（ＭＮＰ）活性により、またはメタロプロテアーゼの組織阻害剤（ＴＩＭＰ）に対するＭＭＰの不均衡によって仲介されるものと考えられる。これらは変形性関節症（Ｗｏｅｓｓｎｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９８４，２５９，３６３３），リウマチ性関節炎（Ｍｕｌｌｉｎｓ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １９８３，６９５，１１７；Ｗｏｏｌｌｅｙ ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．１９７７，２０，１２３１；Ｇｒａｖａｌｌｅｓｅ ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｎｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．１９９１，３４，１０７６），敗血症関節炎（Ｗｉｌｌｉａｍｓ ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｂｅｕｍ．１９９０，３３，５３３），腫瘍転移（Ｒｅｉｃｈ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９８８，４８，３３０７；Ｍａｔｒｉｓｉａｎ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ １９８６ ８６，９４１３），歯周病（Ｏｖｅｒａｌｌ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｐｅｒｉｄｏｎｔａｌ Ｒｅｓ．１９８７，２２，８１），角膜潰瘍化（Ｂｕｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．１９８９，３０，１５６９），タンパク尿（Ｂａｒｉｃｏｓ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１９８８，２５４，６０９），動脈硬化プラック破裂からの冠血栓（Ｈｅｎｎｙ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９９１，８８，８１５４），動脈瘤大動脈病（Ｖｉｎｅ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ．Ｓｃｉ．１９９１，８１，２３３），産児制限（Ｗｏｅｓｓｎｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｓｔｅｒｏｉｄｏｓ １９８９，５４，４９１），ジストロフィー上皮剥離水疱（Ｋｒｏｎｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１９８２，７９，２０８），外傷関節傷害後の退化的軟骨損失、ＭＭＰ活性によって仲介される骨減少症、下顎関節病、および神経系の脱脊髄病（Ｃｈａｎｔｒｙ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．１９８８，５０，６８８）を含む。ｐ３８の阻害はＴＮＦα生産およびＭＭＰ生産阻害へ導くので、マイトジェン活性化タンパク（ＭＡＰ）キナーゼｐ３８酵素の阻害は、骨粗しょう症、リウマチ性関節炎およびＣＯＰＤのような炎症障害を含む上に掲げた病気の処置へのアプローチを提供する（Ｂａｄｇｅｒ，Ａ．Ｍ．；Ｂｒａｄｂｅｅｒ，Ｊ．Ｎ．；Ｖｏｔｔａ，Ｂ；Ｌｅｅ，Ｊ．Ｃ．；Ａｄａｍｓ，Ｊ．Ｌ．；Ｇｒｉｓｗｏｌｄ，Ｄ．Ｅ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｅｘｐｅｒ．Ｔｈｅｒ．１９９６，２７９，１４５３）。
【０００６】
脈管新成は内皮細胞前駆体もしくは血管芽細胞からの血管の新生を含んでいる。胎芽中の最初の脈管構造は脈管新成によって形成される。脈管形成は既存の血管からの毛細血管の発達を含み、そして脳および腎臓のような器官が血管化される原理機構である。脈管新生は胎芽発達に限られるが、脈管形成は例えば妊娠、女性サイクルまたは創傷治癒の間成人に発生し得る。胎芽発達およびある種の脈管形成依存病における脈管形成および脈管新生の主要な調節剤の一つは脈管内皮成長因子（ＶＥＧＦ，脈管透過性因子，ＶＰＦとも呼ばれる）である。ＶＥＧＦは、代替ＲＮＡスプライシングによるホモダイマー形において存在するマイドジェンのイソフォームのファミリーを代表する。ＶＥＧＦイソフォームは脈管内皮細胞に対して高度に特異性である（レビューについては、Ｆａｒｒａｎａ ｅｔ ａｌ．Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｖ．１９９２，１３，１８；Ｎｅｒｆｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ．ＦＡＳＥＢ Ｊ．１９９９，１３，９を見よ）。
【０００７】
ＶＥＧＦ発現は低酸素症（Ｓｈｗｅｉｋｅ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ １９９２，３５９，８４３）により、そしてインターロイキン−１，インターロイキン６，上皮成長因子および形質転換成長因子αおよびβのような種々のサイトカインおよび成長因子によって誘発される。
【０００８】
今日までＶＥＧＦおよびＶＥＧＦファミリーメンバーは３種の膜横断レセプターチロシンキナーゼの１種以上（Ｍｕｓｔｏｎｅｎ ｅｔ．ａｌ．Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１９９５，１２９，８９５），ＶＥＧＦレセプター１（ｆ１ｔ−１（ｆｍｓ様チロシンキナーゼ−１）としても知られる、ＶＥＧＦレセプター２（キナーゼ挿入ドメイン含有レセプター（ＫＤＲ）としても知られており、ＫＤＲのネズミ類縁体は胎児肝臓キナーゼ（ｆ１ｋ−１）として知られている）、およびＶＥＧＦＲ−３（ｆ１ｔ−４としても知られている）へ結合することが報告されている。ＫＤＲとｆ１ｔ−１は異なる信号形質導入性質を有することが示されている（Ｗａｌｔｅｎｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９４，２６９，２６９８８；Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １９９５，１０，１３５）。このようにＫＤＲはインタクトな細胞中で強いリガンド依存性チロシンホスフォリル化を受けるのに対し、ｆ１ｔ−１は弱い応答を示す。このためＫＤＲへの結合はＶＥＧＦ仲介生物学的応答の全スペクトルの誘発にとって決定的要件である。
【０００９】
インビボでは、ＶＥＧＦは脈管新生において中心的役割を果し、そして脈管形成および血管の透過性化を誘発する。調節を失ったＶＥＧＦ発現は異常脈管形成および／または高透過性プロセスによって特徴付けられる多数の疾病の発展へ貢献する。その故ＶＥＧＦ仲介信号形質導入カスケードの調節は異常な血管形成および／または高透過性プロセスのコントロールのための有用なモードを提供するであろう。
【００１０】
血管形成は約１〜２ｍｍをこえる腫瘍成長にとって絶対的な必要条件であると考えられる。酸素および栄養はこの限度より小さい細胞中へは拡散を通じて補給され得る。しかしながらすべての腫瘍はそれが一定のサイズに到達した後に続いて成長するためには脈管形成に依存する。腫瘍の低酸素区域内の腫瘍原細胞はＶＥＧＦ生産の刺激によって応答し、これが新しい血管の形成を刺激するように静止している内皮細胞の活性化を引き金する（Ｓｈｗｅｉｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’１．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９９５，９２，７６８）。加えて、脈管形成が存在しない腫瘍区域におけるＶＥＧＦ生産はｒａｓ信号形質導入経路を通って進行し得る（Ｇｒｕｇｅｌ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９５，２７０，２５９１５；Ｒａｋ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９５，５５，４５７５）。その場のハイブリダイゼーション研究はＶＥＧＦ ｍＲＮＡが多種類のヒト腫瘍において強く上方調節されることを示した。これらは肺（Ｍａｔｔｅｒｎ ｅｔ ａｌ．Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １９９６，７３，９３１），甲状腺（Ｖｉｇｌｉｅｔｔｏ ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １９９５，１１，１５６９），乳房（Ｂｒｏｕｎ ｅｔ ａｌ．Ｈｕｍａｎ Ｐａｔｈｏｌ．１９９５，２６，２８），胃腸管（Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９３，５３，４７２７；Ｓｕｚｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９６，５６，３００４），腎臓および膀胱（Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１９９３，１４３１，１２５５），卵巣（Ｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９４，５４，１２５５），頸部がん（Ｇｕｉｄｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｎａｔ’１ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．１９９５，８７，１２１３７）、それに血管肉腫（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９９５，７３，８５９）およびいくつかの頭内腫瘍（Ｐｌａｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ １９９２，３５９，８４５；Ｐｈｉｌｌｉｐｓ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．１９９３，２，９１３；Ｂｅｒｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１９９３，９１，１５３）を含む。ＫＤＲに対する抗体の中和は腫瘍脈管形成のブロッキングに有効であることを示した（Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ １９９３，３６２，８４１；Ｒｏｃｋｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｄｉｆｆｅｒ．１９９５，３，３１５）。
【００１１】
例えば極端な低酸素条件のもとでのＶＥＧＦの過剰発現は血管の高増殖をもたらす眼内脈管形成へ導くことができ、最終的には失明へ導く。そのような出来事のカスケードは、糖尿性網膜症、虚血性網膜静脈塞栓、未熟児網膜症（Ａｉｅｌｌｏ ｅｔ ａｌ．Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．１９９４，３３１，１４８０；Ｐｅｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９９５，７２，６３８）、そして年令関連斑状退化（ＡＭＤ；Ｌｏｐｅｚ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．１９９６，３７，８５５を見よ）を含む多数の網膜症において観察されている。
【００１２】
リュウマチ性関節炎（ＲＡ）においては、脈管パンヌスの内方成長は脈管成長因子の生産によって仲介され得る。免疫反応性ＶＥＧＦのレベルはＲＡ患者の滑液中では高いが、退化的関節病を持つ他の形の関節炎の患者の滑液中では低い（Ｋｏｃｈ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４，１５２，４１４９）。形管形成阻害剤ＡＧＭ−１７０はラットコラーゲン関節炎モデルにおいて関節の新生血管化を防止することを示した（Ｐｅａｃｏｃｋ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｅｘｐｅｒ．Ｍｅｄ．１９９２，１７５，１３５）。
【００１３】
増大したＶＥＧＦ発現は、乾癬皮膚、それに水疱性類天疱瘡、多形性紅斑、疱疹状皮膚炎のような皮下水疱形成に関連した水疱性障害にも示された（Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏ１．１９９５，１０４，７４４）。
【００１４】
ＫＤＲの阻害はＶＥＧＦ仲介脈管形成および透過性化の阻害へ導くので、ＫＤＲ阻害剤は、上に挙げた疾病を含む、異常脈管形成および／または高透過性プロセスによって特徴付けられる病気の処置に有用であろう。
【発明の開示】
【００１５】
本発明は、式（Ｉ）の化合物、またはその塩例えば薬学的に許容し得るその塩、または単離されたその立体異性体（以後集合的に本発明の化合物という）に関する。
【００１６】
【化１】
【００１７】
式中、
ＹはＯＲ1またはＮＨＲ2 ，
Ｈａｌは塩素または臭素，
Ｒ1 はＨまたはＣ1−Ｃ6アルキル，
Ｒ2 はＨ，ＯＨ，ＣＨ3 またはＣＨ2 ＯＨ，
Ｚ1 およびＺ2 は各自ＨまたはＯＨであり、Ｚ1 またはＺ2 の一つだけがＯＨであることができ、
Ｘ1ないしＸ7は各自独立にＨ，ＯＨまたはＯ（ＣＯ）Ｃ1−Ｃ4アルキルであり、そして
ｎは０または１である。
ただし、以下の条件ａないしｃの少なくとも一つを満たすことを条件とする。
ａ）Ｚ1またはＺ2 はＯＨ，
ｂ）Ｒ2はＯＨ，
ｃ）ｎは１
術語立体異性体はジアステレオマー、エナンチオマー、幾何異性体等を包含するものと理解される。
【００１８】
当業者は、式Ｉの化合物のいくつかは異なる幾何異性体形で存在できることを認識するであろう。式Ｉの化合物は１以上の不斉炭素を有し、それ故ラセミおよび光学活性形で、そのラセミまたは非ラセミ混合物の形で、さらにジアステレオマーおよびジアステレオマー混合物の形で存在することができる。シス異性体、トランス異性体、ジアステレオマー混合物、ラセミ体、エナンチオマーの非ラセミ混合物、実質的に純粋および純粋なエナンチオマーは本発明の範囲内であると考えられ、ここでは実質に純粋なエナンチオマーは、対応する反対のエナンチオマーの５％ｗ／ｗ以下が存在することを意味することを意図する。
【００１９】
光学異性体は、慣用のプロセスに従って、例えば光学活性酸または塩基を使用してジアスステレオマー塩の形成によって、ラセミ体混合物の分割により得ることができる。適切な酸の例は酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、ジトルオイル酒石酸、およびカンファースルホン酸である。ジアステレオマーの混合物は、それらの物理学的相違を基にして当業者に既知の方法により、例えばクロマトグラフィーまたは分別結晶によってそれらの個々のジアステレオマーに分離することができる。光学活性塩基または酸は分離されたジアステレオマー塩から遊離される。
【００２０】
光学異性体の分離のための他のプロセスは、エナンチオマーの分離を最大にするように最適に選んだキラールクロマトグラフィーカラム（例えばキラールＨＰＬＣカラム）の使用を含む。好適なキラールＨＰＬＣカラムはダイセルによって製造されたＣｈｉｒａｃｅｌ ＯＪである。式Ｉの光学活性化合物は光学活性出発物質を利用して同様に得ることができる。
【００２１】
本発明は本発明の化合物の類縁体をも含む。
【００２２】
優先性はｎが１である時の本発明の化合物へ与えられる。これら化合物は特に、式（Ｉ）においてｎが１であり、ＹがＮＨＲ2であり、Ｒ2がＨまたはＣＨ3である本発明の化合物；式（Ｉ）においてｎが１，そしてＸ1ないしＸ7が各自Ｈである本発明の化合物；式（Ｉ）においてｎが１，そしてＺ1およびＺ2が各自Ｈである本発明の化合物；式（Ｉ）においてｎが１，Ｚ1がＨ，そしてＺ2がＯＨであるか、またはＺ1がＯＨ，そしてＺ2がＨである本発明の化合物；式（Ｉ）においてｎが１，そしてＸ1ないしＸ7の少なくとも１つがＯＨまたはＯ（ＣＯ）Ｃ1−Ｃ4アルキルである本発明の化合物；式（Ｉ）においてｎが１，ＹがＮＨＲ2，そしてＲ2がＣＨ2ＯＨである本発明の化合物；式（Ｉ）においてｎが１，ＹがＮＨＲ2，そしてＲ2がＯＨである本発明の化合物；そして式（Ｉ）においてｎが１，そしてＹがＯＨである本発明の化合物を含む。
【００２３】
関心ある他の本発明の化合物は、式（Ｉ）においてＺ1がＨ，そしてＺ2がＯＨか、またはＺ1がＯＨ，そしてＺ2がＨである本発明の化合物である。これらは特に、式（Ｉ）においてＺ1がＨそしてＺ2がＯＨ、またはＺ1がＯＨそしてＺ2がＨで、ｎが０である本発明の化合物；式（Ｉ）においてＺ1がＨそしてＺ2がＯＨ、またはＺ1がＯＨそしてＺ2がＨで、ｎが０，ＹがＮＨＲ2，そしてＲ2がＨまたはＣＨ3である本発明の化合物；式（Ｉ）においてＺ1がＨそしてＺ2がＯＨ、またはＺ1がＯＨそしてＺ2がＨで、ｎが０、Ｘ1ないしＸ7が各自Ｈである本発明の化合物；式（Ｉ）においてＺ1がＨで、Ｚ2がＯＨ、またはＺ1がＯＨそしてＺ2がＨ、そしてｎが０で、Ｘ1ないしＸ7の少なくとも１つがＯＨまたはＯ（ＣＯ）Ｃ1−Ｃ4アルキルである本発明の化合物；式（Ｉ）においてＺ1がＨで、Ｚ2がＯＨ，またはＺ1がＯＨで、Ｚ2がＨ、そしてｎが０で、ＹがＮＨＲ2で、Ｒ2がＣＨ2ＯＨである本発明の化合物；式（Ｉ）においてＺ1がＨで、Ｚ2がＯＨ，またはＺ1がＯＨで、Ｚ2がＨ、そしてｎが０、ＹがＮＨＲ2で、Ｒ2がＯＨである本発明の化合物、そして式（Ｉ）においてＺ1がＨで、Ｚ2がＯＨ、またはＺ1がＯＨ，Ｚ2がＨ，ｎが０、そしてＹがＯＨである本発明の化合物である。
【００２４】
関心あるさらなる本発明の化合物は、式（Ｉ）においてＹがＮＨＲ2であり、Ｒ2がＯＨである本発明の化合物である。これらの化合物は特に、式（Ｉ）においてＹがＮＨＲ2，Ｒ2がＯＨ，ｎが０である本発明の化合物；式（Ｉ）においてＹがＮＨＲ2，Ｒ2がＯＨ，ｎが０，そしてＸ1ないしＸ7が各自Ｈである本発明の化合物；式（Ｉ）においてＹがＮＨＲ2，Ｒ2がＯＨ，ｎが０，そしてＺ1およびＺ2が各自Ｈである本発明の化合物；式（Ｉ）においてＹがＮＨＲ2，Ｒ2がＯＨ，ｎが０、そしてＺ1がＨ，Ｚ2がＯＨか、またはＺ1がＯＨ，Ｚ2がＨである本発明の化合物；そして式（Ｉ）においてＹがＮＨＲ2，Ｒ2がＯＨ，ｎが０，そしてＸ1ないしＸ7の少なくとも１つがＯＨまたはＯ（ＣＯ）Ｃ1−Ｃ4アルキルである本発明の化合物を含む。
【００２５】
関心ある本発明の化合物はまた、式（Ｉ）においてＹがＯＨである化合物である。これらの化合物は特に、式（Ｉ）においてＹがＯＨ，ｎが０である本発明の化合物；式（Ｉ）においてＹがＯＨ，ｎが０、そしてＸ1ないしＸ7が各自Ｈである本発明の化合物；式（Ｉ）においてＹがＯＨ，ｎが０、そしてＺ1およびＺ2が各自Ｈである本発明の化合物；式（Ｉ）においてＹがＯＨ，ｎが０、そしてＺ1がＨ，Ｚ2がＯＨか、またはＺ1がＯＨ，Ｚ2がＨである本発明の化合物；および式（Ｉ）においてＹがＯＨ，ｎが０、そしてＸ1ないしＸ7の少なくとも１つがＯＨまたはＯ（ＣＯ）Ｃ1−Ｃ4アルキルである本発明の化合物を含む。
【００２６】
特に好ましい化合物は以下の化合物を含む。
４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド；
４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド；
４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド；
４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド；
４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−ヒドロキシメチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド；
４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−ヒドロキシメチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド；およびそれらの塩、立体異性体およびプロドラッグ。
【００２７】
関心ある本発明の化合物のサブグループは、式（ＩＩ）の化合物、またはその塩もしくは立体異性体を含む。
【００２８】
【化２】
【００２９】
式中、
ＹはＯＲ1またはＮＨＲ2，
Ｈａｌは塩素または臭素，
Ｒ1はＨまたはＣ1−Ｃ6アルキル，
Ｒ2はＨ，ＯＨ，ＣＨ3またはＣＨ2ＯＨ，
Ｚ1およびＺ2は各自ＨまたはＯＨであり、Ｚ1またはＺ2の１つだけがＯＨであることができ、
Ｘ4ないしＸ7は各自独立にＨ，ＯＨまたはＯ（ＣＯ）Ｃ1−Ｃ4アルキルであり、そして
ｎは０または１である。
ただし、以下の条件ａないしｃの少なくとも１つを満たすことを条件とする。
ａ）Ｚ1またはＺ2はＯＨ，
ｂ）Ｒ2はＯＨ，
ｃ）ｎは１
【００３０】
これらは、式（ＩＩ）においてｎが１の本発明の化合物；式（ＩＩ）においてｎが１，そしてＺ1およびＺ2が各自Ｈである本発明の化合物；式（ＩＩ）においてｎが１，Ｚ1およびＺ2がＨ，そしてＸ4ないしＸ7の少なくとも１つがＯＨである本発明の化合物；式（ＩＩ）においてｎが１，Ｚ1およびＺ2がＨ，ＹがＮＨＲ2、そしてＲ2がＨまたはＣＨ3である本発明の化合物；式（ＩＩ）においてｎが０である本発明の化合物；式（ＩＩ）においてｎが０，そしてＺ1がＨ，Ｚ2がＯＨ、またはＺ1がＯＨ，Ｚ2がＨである本発明の化合物；式（ＩＩ）においてｎが０，Ｚ1およびＺ2が各自Ｈ，そしてＸ4ないしＸ7の少なくとも１つがＯＨである本発明の化合物；式（ＩＩ）においてｎが０，Ｚ1がＨ，Ｚ2がＯＨ、またはＺ1がＯＨ，Ｚ2がＨ，そしてＸ4ないしＸ7の少なくとも１つがＯＨである本発明の化合物；式（ＩＩ）においてｎが０，Ｚ1がＨ，Ｚ2がＯＨ、またはＺ1がＯＨ，Ｚ2がＨ，ＹがＮＨＲ2そしてＲ2がＨまたはＣＨ3である本発明の化合物；式（ＩＩ）においてｎが０，Ｚ1がＨ，Ｚ2がＯＨまたはＺ1がＯＨ，Ｚ2がＨ，そしてＹがＮＨＲ2，Ｒ2がＯＨである本発明の化合物；および式（ＩＩ）においてｎが０，ＹがＮＨＲ2，Ｒ2がＯＨそしてＸ4ないしＸ7の少なくとも１つがＯＨである本発明の化合物を含む。
【００３１】
関心ある本発明の化合物の他のサブグループは、式（ＩＩＩ）の化合物、またはその塩もしくは立体異性体を含む。
【００３２】
【化３】
【００３３】
式中、
ＹはＯＲ1またはＮＨＲ2，
Ｈａｌは塩素または臭素，
Ｒ1はＨまたはＣ1−Ｃ6アルキル，
Ｒ2はＨ，ＯＨ，ＣＨ3またはＣＨ2 ＯＨ，
Ｚ1およびＺ2は各自ＨまたはＯＨであり、Ｚ1またはＺ2の１つだけがＯＨであることができ、そして
ｎは０または１である。
ただし、以下の条件ａないしｃの少なくとも１つを満たすことを条件とする。
ａ）Ｚ1またはＺ2はＯＨ，
ｂ）Ｒ2はＯＨ，
ｃ）ｎは１
【００３４】
これらは、式（III）においてｎが１，そしてＺ1およびＺ2が各自Ｈである本発明の化合物；式（III）においてｎが１，そしてＺ1およびＺ2が各自Ｈ，そしてＹがＮＨＲ2、Ｒ2がＨまたはＣＨ3である本発明の化合物；式（III）においてｎが０，Ｚ1がＨ，Ｚ2がＯＨ，Ｚ2がＨである本発明の化合物；式（III）においてｎが０，Ｚ1がＨ，Ｚ2がＯＨまたはＺ1がＯＨ，Ｚ2がＨ，そしてＹがＮＨＲ2、Ｒ2がＨまたはＣＨ3である本発明の化合物；および式（III）においてＹがＯＨである本発明の化合物を含む。
【００３５】
本発明はさらに本発明の新規化合物を製造する方法に関する。そのような方法は限定でなく、４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド、および４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイドのピリジル環のそれらの対応するピリジン−１−オキサイドへの酸化；本発明のどれかの化合物の尿素窒素のＮ−ヒドロキシ尿素への酸化；本発明の化合物のＸ1ないしＸ7で表わされる位置を水素原子がヒドロキシル基に置換されるように酸化；４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイドおよび４−｛〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイドのＮ−メチルアミドの対応するヒドロキシメチルアミドへのヒドロキシル化；前記Ｎ−メチルアミドのヒドロキサム酸へのヒドロキシル化；前記Ｎ−メチルアミドの未置換アミドへの脱メチル化；前記Ｎ−メチルアミドのカルボキシル酸への加水分解；およびこれらの組合わせを含む。さらに本発明は、Ｘ1ないしＸ7位置のヒドロキシル基の例えばアセテートへのエステル化に関する。
【００３６】
関心ある方法は、４−４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイドおよび４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイドを対応するピリジン−１−オキサイドして酸化することよりなる、４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、または４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、それらの薬学的に許容し得る塩、または単離された立体異性体の製造方法、および４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイドまたは４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイドを対応するピリジン−１−オキサイドへ酸化することになる、４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、それらの薬学的に許容し得る塩、または単離された立体異性体の製造方法を含む。
【００３７】
これらの方法によって製造された化合物は本発明に含まれる。また、４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド、または４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイドを、
ａ）フェニル水素の１以上をヒドロキシル基で置換、
ｂ）Ｎ−メチルアミドをヒドロキシメチルアミドもしくはヒドロキサム酸へヒドロキシル化、
ｃ）Ｎ−メチルアミドを未置換アミドへ脱メチル化、
ｄ）尿素窒素の１以上を＝ＮＨから＝ＮＯＨへ酸化、
ｅ）Ｎ−メチルアミドをカルボキシル酸へ加水分解、
ｆ）ピリジン窒素をピリジン−１−オキサイドへ酸化、または
ｇ）ａないしｆの組合わせ、
を実行するように代謝変換を含む変換によって得る（ただし、ステップｂ），ｄ）およびｆ）の少なくとも１つが実行されることが条件）ことも本発明に含まれる。
【００３８】
特に関心があるのは、４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド、または４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイドを、
ａ）Ｎ−メチルアミドをヒドロキシメチルアミドもしくはヒドロキサム酸へヒドロキシル化、
ｂ）Ｎ−メチルアミドを未置換アミドへ脱メチル化、
ｃ）１以上の尿素窒素を＝ＮＨから＝ＮＯＨへ酸化、
ｄ）Ｎ−メチルアミドをカルボキシル酸へ加水分解、
ｅ）ピリジン窒素をピリジン−１−オキサイドへ酸化、または
ｆ）ａないしｆの組合わせ、
を実行するように代謝変換を含む変換によって（ただし、ａ），ｃ）およびｅ）の少なくとも１つが実行されることが条件）得られる化合物である。
【００３９】
本明細書全体を通じ、術語「ピリジン−１−オキサイド」は、１−オキソ−ピリジンおよび１−ヒドロキシピリジンを含み、そして本明細書の目的のためこれらすべての３術語は互換可能であると理解すべきである。例えば、Ｃｈｅｍ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．ＮｏｍｅｎｃｈａｔｏｒTMｖ．３．０１はＣｈｅｍ Ｄｒａｗにおいて引かれた、Ｙ＝ＮＨＣＨ3，Ｈａｌ＝Ｃｌ，Ｚ1およびＺ2＝１、そしてｎ＝１である式IIIの化合物を、Ｎ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕（｛４−〔１−ヒドロシキ−２−（Ｎ−メチルカルバモイル）（４−ピリジルオキシ）〕フェニル｝アミノ）カルボキサマイドと同定する。
【００４０】
本発明は１以上の本発明の化合物を含む薬剤組成物をさらに含む。これらは少なくとも１つの本発明の化合物の有効量と、生理学的に許容し得る担体を含んでいる組成物を含む。優先性は、４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、それらの薬学的に許容し得る塩、または単離された立体異性体の有効量と、そして生理学的に許容し得る担体を含んでいる薬剤組成物に与えられる。
【００４１】
これらの化合物の薬学的に許容し得る塩も本発明の範囲内である。
【００４２】
塩は特に、式Ｉの化合物の薬学的に許容し得る塩、または例えば式Ｉの化合物の有機または無機酸付加塩である。好適な無機酸は、限定なしでハロゲン酸（塩酸のような）、硫酸またはリン酸を含む。好適な有機酸は、限定なしでカルボン酸、ホスフォン酸、スルホン酸またはスルファミン酸を含み、その例は酢酸、プロピオン酸、オクタン酸、デカン酸、ドデカン酸、グリコール酸、乳酸、２−または３−ヒドロキシ酪酸、γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）、グルコン酸、グルコースモノカルボキシル酸、フマル酸、コハク酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、グルカル酸、ガラクタール酸、アミノ酸（グルタミン酸、アスパラギン酸、Ｎ−メチルグリシン、アセチルアミノ酢酸、Ｎ−アセチルアスパラギンまたはＮ−アセチルシステインのような）、ピルビン酸、アセト酢酸、メタンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ホスフォセリン、および２−または３−グリセロリン酸を含む。
【００４３】
プロドラッグの形成は親化合物の性質を増強するためのこの分野では良く知られている。そのような性質は、溶解度、吸収、バイオアベイラビリティおよび放出時間を含む（Ｐｈａｍａｃｅｃｃｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｓｉｘｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ），ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ａｎｃｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｐｕｂｉｓｈｅｄ ｂｙ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，ｐａｇｅｓ ２７−２９（１９５５）参照。これは参照としてここに取り入れる）。開示されたオキサゾリル−フェニル−２，４−ジアミノピリミジン化合物の普通に使用されるプロドラッグは、主要な薬物バイオトランスフォーメーション反応の利益を得るために設計され、そして本発明の範囲内であると考えるべきである。主要な薬物バイオトランスフォーメーション反応は、Ｎ−デアルキル化、Ｏーデアルキル化、脂肪族ヒドロキシル化、芳香族ヒドロキシル化、Ｎ−酸化、Ｓ−酸化、デアミノ化、加水分解反応、、グルクロナイド化、サルフェート化およびアセチル化を含む（Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｎｉｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ），ｅｄｉｔｅｄ Ｍｏｌｉｎｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，ｐａｇｅｓ １１−１３（１９９６）を見よ。これを参照としてここに取れ入れる）。
【００４４】
本発明は、本発明の化合物、または本発明の化合物を含む薬剤組成物を投与することによって、哺乳類における病気、例えば炎症および脈管形成障害および骨粗しょう症を処置および予防する方法にも関する。
【００４５】
これらは、本発明の化合物を哺乳類へ投与することにより、哺乳類における骨粗しょう症、炎症および脈管形成障害（がん以外の）処置または予防する方法を含む。優先性は、４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、それらの薬学的に許容し得る塩、または単離された立体異性体もしくはその混合物の有効量を投与することにより、哺乳類における骨粗しょう症、炎症、および脈管形成に（がん以外の）を処置または予防する方法に与えられる。
【００４６】
本発明はまた、１以上の本発明の化合物を含む薬剤組成物を、細胞毒剤と組合わせて投与することによって、がんおよび他の高増殖障害を処置および予防する方法にも関する。
【００４７】
これらは、本発明の化合物の有効量を哺乳類へ投与することによって哺乳類の高増殖障害を処置または防止する方法を含む。優先性は、４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、それらの薬学的に許容し得る塩、単離された立体異性体もしくはその混合物の有効量を哺乳類へ投与することにより、哺乳類における骨粗しょう症、炎症、および脈管形成障害（がん以外）を処置または予防する方法に与えられる。
【００４８】
本発明の化合物の有効量を投与することによる哺乳類の高増殖障害を処置または予防する方法において、１以上の追加的化合物もしくは組成物は、好ましくは細胞毒化合物もしくは組成物である本発明による化合物もしくは組成物ではない例えば抗がん化合物もしくは組成物を哺乳類へ投与することができる。
【００４９】
哺乳類における高増殖障害を処置または予防する方法は、細胞毒化合物もしくは組成物と共に、４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−Ｎ−メチル−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、４−｛４−〔（｛〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、４−｛４−〔（｛〔４−ブロモ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕アミノ｝カルボニル）アミノ〕フェノキシ｝−２−ピリジンカルボキサマイド−１−オキサイド、それらの薬学的に許容し得る塩、または単離された立体異性体もしくはその混合物を哺乳類へ投与することを含む。
【００５０】
組成物へ加えることができる任意的抗増殖剤は、限定ではないが、アスパラギナーゼ、ブレオマイシン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、コラスパーゼ、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、エピルビシン、エポトシド、５−フロロウラシル、ヘキサメチルメラミン、ヒドロキシ尿素、イフオスファミド、イリノテカン、リユーコボリン、ロムスチン、メクロレサミン、６−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキセート、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、プロカルバジン、ラロキシフェン、ストレプトゾシン、タモキシフェン、チオグアニン、トポテカン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、およびビンデシンのような、メルクインデックス第１２版（１９９６）にがん化学療法薬物療法に掲げられている化合物を含んでいる。
【００５１】
本発明の組成物と共に使用するのに適した他の抗増殖剤は、限定でなく、アミノグルテチミド、Ｌ−アスパラギナーゼ、アザチオプリン、５−アザシチジン、クラドリビン、ブスルファン、ジエチルスチルベストロール、２’−２’−ジフロロデオキシシチジン、ドセタクセル、エリスロヒドロキシノニルアデニン、エチニルエストラジオール、５−フロロデオキシウリジン、５−クロロデオキシウリジンモノリン酸、フルダラビンホスフェート、フルオキシメステロン、フルタミド、ヒドロキシプロゲステロンカプロエート、イダルビシン、インターフェロン、メドロキシプロゲステロンアセテート、メゲステロールアセテート、メルファラン、ミトタン、パクリタクセル、ペントスタチン、Ｎ−ホスフォノアセチル−Ｌ−アスパルテート（ＰＡＬＡ）、プリカマイシン、セムスチン、テニポシド、テストステロンプロピオネート、チオテパ、トリメチルメラミン、ウリジン、およびビノレルビンのような、Ｇｏｏｄｎａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｎｔｉｓ（Ｎｉｎｔｈ Ｅｄ．），ｅｄｉｔｅｄ Ｍｏｌｉｎｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，ｐｕｂｉｓｈｅｄ ｂｙ ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，ｐａｇｅｓ １２２５−１２８７（１９９６）において腫瘍性病に使用するために認知された化合物を含む。
【００５２】
本発明の組成物と共に使用するのに適した他の抗増殖剤は、限定でなく、オキサプラチン、ゲムシタボン、ゲフィニチブ、タキソテレ、ＢＣＮＵ，ＣＣＮＵ，ＤＴＩＣ，ａｒａ Ａ，ａｒａ Ｃ，ヘルセプチン、アクチノマイシンＤ、エポチロン、イリノテカン、ラロキシフェン、およびトポテカンを含む。
【００５３】
高増殖性障害の処置の説明
がんおよび高増殖障害は以下のように定義される。これらの障害は、限定でなく、乳房、呼吸管、脳、生殖器、消化管, 泌尿管、眼、肝臓、皮膚、頭および頸部、甲状腺、上皮小体のがんおよびそれらの遠隔転移のような固形腫瘍を含む。これらの障害はリンパ腫、内腫および白血病も含む。
【００５４】
乳がんの例は、限定でなく、浸襲性管悪性腫瘍、浸襲性小葉悪性腫瘍、その場の管悪性腫瘍およびその場の小葉悪性腫瘍を含む。
【００５５】
呼吸器官のがんの例は、限定でなく、小細胞および非小細胞肺悪性腫瘍、それに気管支アデノーマおよび胸膜肺ブラストーマを含む。
【００５６】
脳がんの例は、限定でなく、脳幹および視床下部グリオーマ、小脳および大脳マストロサイトーマ、髄質プラストーマ、脳室上衣腫、それに神経外胚葉および松果体腫瘍を含む。
【００５７】
男性生殖器の腫瘍は、限定でなく、前立腺および睾丸がんを含む。
【００５８】
女性生殖器の腫瘍は、限定でなく、子宮内膜、頸管、卵巣、膣、外陰部がん、それに子宮筋腫を含む。
【００５９】
消化器官の腫瘍は、限定でなく、肛門、結腸、結直腸、食道、胆のう、胃、膵臓、直腸、小腸、および唾液腺がんを含む。
【００６０】
泌尿器の腫瘍は、限定でなく、膀胱、陰茎、腎臓、腎孟、尿管および尿道がんを含む。
【００６１】
眼のがんは、限定でなく、眼内メラノーマおよび網膜芽腫を含む。
【００６２】
肝臓がんの例は、限定でなく、肝細胞悪性腫瘍（線維層状変種ありなし）、胆管がん（肝内胆管がん）、および混合肝細胞および胆管がんを含む。
【００６３】
皮膚がん、限定でなく、鱗細胞がん、カポン肉腫、悪性メラノーマ、メルケル皮膚がん、および非メラノーマ皮膚がんを含む。
【００６４】
頭頸部がんは、限定でなく、上顎／下顎／咽頭下部／鼻咽頭／口腔咽頭がん、および唇と口腔がんを含む。リンパ腫は、限定でなく、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ホジキン病、および中枢神経系のリンパ腫を含む。
【００６５】
肉腫は、限定でなく、軟組織の肉腫、骨肉腫、悪性線維性組織腫瘍、リンパ肉腫、および横紋筋肉腫を含む。白血病は、限定でなく、急性骨髄白血病、急性リンパ芽白血病、慢性リンパ細胞白血病、慢性骨髄白血病、および毛状細胞白血病を含む。
【００６６】
これらの障害はヒトにおいて良く特徴付けられているが、しかし他の哺乳類において同様な病因を持って存在し、本発明の薬剤組成物によって処置することができる。
【００６７】
一般的に、細胞毒剤および／または細胞増殖抑制剤のｒａｆキナーゼ阻害剤との組合わせの使用は、（１）どちらかの剤単独の投与に比較して、腫瘍の成長を減らすかまたは腫瘍をなくすより良い効果を得る、（２）単一剤化学療法および或る種の他の組合わせ療法よりもより少ない有害な薬理学的合併症をもって患者が良く耐えられる化学療法処置を提供する、（３）投与される化学療法剤のより少ない量を提供する、（４）哺乳類特にヒトにおいて、異なるがんタイプのより広いスペクトルの処置を提供する、（５）処置される患者の間により高い応答率を提供する、（６）標準的化学療法処置に比較して処置される患者の間により長い生存時間を提供する、（７）腫瘍進行のためのより長い時間を提供する、および／または（８）他の抗がん剤組合わせが拮抗効果を生ずる既知の場合に比較して、単独で使用されるそれらの剤と少なくとも同程度に良好な効果および耐性を得るために役立つであろう。
【００６８】
本発明は、（ａ）本発明化合物、（ｂ）少なくとも１つの他の化学療法用細胞毒剤または細胞増殖抑制剤、または成分（ａ）または（ｂ）の薬学的に許容し得る塩を含む組合わせに関する。
【００６９】
本発明はまた、（１）（ａ）本発明による化合物と、（ｂ）がんの処置に共同して有効な量において少なくとも１つの他の細胞毒剤または細胞増殖抑制剤（もし、少なくとも１つの塩形成基が存在するならば成分（ａ）または（ｂ）は薬学的に許容し得る塩の形で存在することができる）と、そして（２）１以上の薬学的に許容し得る担体分子を含んでいる薬学的製剤に関する。
【００７０】
また本発明は、本発明による化合物と、細胞毒剤または細胞増殖抑制剤である少なくとも１つの他の化学療法剤の投与によって処置することができるがんを処置する方法に関する。本発明による化合物および細胞毒剤または細胞増殖抑制剤は、上で規定した高増殖病に対して合同して有効な量において哺乳類へ投与される。このように、本発明による化合物はｒａｆキナーゼ仲介がんに対して有効である。しかしながらこれら化合物はｒａｆキナーゼによって仲介されないがんに対しても有効である。
【００７１】
好ましい具体例において、本発明は、任意にＤＮＡトポイソメラーゼＩおよびＩＩ阻害剤、ＤＮＡインターカレーター、アルキル化剤、微小管分裂剤、ホルモンおよび成長因子レセプターアゴニストまたはアンタゴニスト、他のキナーゼ阻害剤および抗代謝物を含むがこれに限らない細胞毒剤または細胞増殖抑制剤との組合わせにおいて、本発明による化合物を哺乳類特にヒトのがんを処置する方法を提供する。
【００７２】
他の具体例において、本発明による化合物および細胞毒剤および細胞増殖抑制剤を含む化学療法剤を、経口送達により、または静脈内注射もしくは注入によって患者へ投与する方法が開示される。
【００７３】
他の具体例において、本発明による化合物または細胞毒剤もしくは細胞増殖抑制剤は、錠剤、液剤、局所ゲル、吸入剤または徐放性製剤の形で患者へ投与することができる。
【００７４】
本発明の他の具体例において、本発明による化合物は、同じ製剤において、またはもっと典型的には別々の製剤において、そしてしばしば異なる投与ルートを用いて細胞毒剤もしくは細胞増殖抑制剤と同時にがん患者へ投与することができる。投与は任意の順序において逐次的であることもできる。
【００７５】
他の具体例において、本発明による化合物は細胞毒剤もしくは細胞増殖抑制剤とタンデムに投与することができ、この場合本発明の化合物は２８連続日まで１日１回以上患者へ投与することができ、細胞毒剤もしくは細胞増殖抑制剤は同じ総期間にわたって同時または間歇的に投与される。
【００７６】
本発明の他の具体例において、本発明による化合物は、約０．１ないし２００ｍｇ／ｋｇ総体重の範囲であることができる経口、静脈内、筋肉内、皮下または非経口投与量において患者へ投与することができる。
【００７７】
他の具体例において、細胞毒剤もしくは細胞増殖抑制剤は、約０．１ないし２００ｍｇ／ｋｇ総体重の範囲であることができる静脈内、筋肉内、皮下または非経口投与量において患者へ投与することができる。
【００７８】
さらに本発明は、がん細胞を本発明の薬学的製剤もしくは製品と接触させることを含むがん細胞の増殖を阻害する方法に、特にがんを持っていることを疑われる対象、その細胞、組織または体液を本発明の薬剤組成物または製品と接解させることを含む増殖病の処置方法に関する。
【００７９】
本発明はまた、本発明による化合物と、そして他の細胞毒剤もしくは細胞増殖抑制剤の両方を本発明の量において含む組成物に関する。
【００８０】
本発明はさらに、言及した２つの化学療法剤の別々の投与量を別々の容器内に含むキットに関する。本発明の組合わせはインビボ、例えば患者の体内で生成されることができる。
【００８１】
術語「細胞毒」は、がん細胞を殺滅もしくはなくすために投与することができる剤を意味する。術語「細胞増殖抑制」は、細胞毒的細胞減少を誘発するのではなく、腫瘍増殖を抑制し、患者の総生存細胞集団からがん細胞の排除を得るために投与することができる剤を意味する。ここに記載した化学療法剤、例えばイリノテカン、ビノレルビン、ゲムシタビン、およびパクリタクセルは細胞毒剤と考えられる。これらの細胞毒剤および細胞増殖抑制剤は種々のがんタイプの処置における化学療法剤として広範囲の使用を得ており、そして良く知られている。
【００８２】
一般的製造方法
本発明の化合物は、既知の化学反応および操作の使用によって製造することができる。にもかかわらず以下の一般的製造方法は、読者を本発明の化合物の合成において助けるために提供され、もっと詳しい特定実施例は後で実施例を記載する実験の部に提供される。
【００８３】
これらの方法においてすべての可変基は、もしそれらが以下に特定的に記載されていなければ、一般的説明の中に記載されているとおりである。与えられた記号を有する可変基または置換基が与えられた構造中に２回以上使用されている時は、これら基または置換基は該記号の定義の範囲内で各自独立して可変であり得ることを理解すべきである。クレームした任意の官能基を有する本発明の化合物は、以下に掲げた方法の各自では製造することができないことが認識される。各方法の範囲内で、反応条件に対して安定な任意的な基が使用されるか、または反応に参加し得る官能基は必要な場合保護された形で存在し、そしてそのような保護基の除去は当業者に良く知られた方法により適当な段階で完了される。
【００８４】
本発明の化合物は、商業的に入手し得るか、または日常的な慣用化学的方法に従って製造することができる出発物質から、慣用の化学的方法に従い、および／または以後開示するとおりに製造することができる。化合物の一般的製造方法は以下に与えられ、そして代表的化合物の製造は実施例１および２に特定的に示されている。
【００８５】
式（Ｉ）尿素およびヒドロキシ尿素は、この分野で既知の種々の簡単な方法によって製造することができる。これらの化合物の生成のための一般的アプローチは、“Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ”，ｂｙ Ｊ．Ｍａｒｃｈ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９８５，および“Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ”，ｂｙ Ｒ．Ｃ．Ｌａｒｏｃｋ，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９８９に見ることができる。これらを参照としてここに取り入れる。
【００８６】
もっと詳しくは、本発明のピリジン−１−オキサイド（式（Ｉ）においてｎ＝１）は、対応するピリジンからのこの分野で既知の酸化条件を使用して製造することができる。いくつかの例は次のとおりである。
【００８７】
−ジクロロメタン、ジクロロエタンまたはクロロホルムのような塩基化溶媒中のメタクロロ過安息香酸のような過酸（Ｍａｒｋｇｒａｆ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９９１，４７，１８３）、−ジクロロメタンのような塩基化溶媒中の触媒量の過レニウム酸の存在下（Ｍｅ3ＳｉＯ）2（Ｃｏｐｅｒｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．１９９８，３８，７６１）、−ハロゲン化溶媒のいくつかの組合わせにおいてペルフロロ−シス−２−ブチル−３−プロピルオキサゾリジン（Ａｍｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９９８，５４，７８３１）、
−クロロホルム中次亜フッ素酸−アセトニトリル錯体（Ｄａｙａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ １９９９，１４２７）、
−水中、ＫＯＨのような塩基の存在下オキソン（Ｒｏｂｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．Ｓｙｎｏｐ．１９９３，１０，４１２）、
−氷酢酸の存在下モノペルオキシフタル酸マグネシウム（Ｋｌｅｍｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍ．１９９０，６，１５３７）、
−水および酢酸の存在下過酸化水素（Ｌｉｎ Ａ．Ｊ．，Ｏｒｇ．Ｐｒｅｐ．Ｐｒｏｃｅｄ．Ｉｎｔ．１９９１，２３（１），１１４）、
−アセトン中ジメチルジオキシラン（Ｂｏｙｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．１９９１，９，２１８９）
【００８８】
上述の酸化のための出発物質はそれらの側鎖中に２−アシルピリジンを含んでいるビスアリール尿素である。これらの尿素の特定的製造は特許文献に既に記載されており、そして本発明の化合物に適応させることができる。例えばリードルら、“ｒａｆキナーゼ阻害剤としてＯ−カルボキシアリール置換ジフェニル尿素”，ＷＯ００／４２０１２；リードルら”、ｐ３８キナーゼ阻害剤としてのＯ−カルボキシアリル置換ジフェニル尿素”，ＷＯ００／４１６９８。
【００８９】
Ｚ1 がＯＨ，そしてＺ2 がＨである式（Ｉ）のヒドロキシ尿素は以下のように製造することができる。
【００９０】
【化４】
【００９１】
この分野で既知の式（ＩＩ）の置換ニトロベンゼンは、この分野で既知の条件、例えば遷移金属触媒の存在下水素化ホウ素ナトリウム（Ｙａｍａｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１９８９，９５１およびそれに引用されている参考文献）、または過塩素酸の存在下Ｎ−メチルジヒドロアクリジン（Ｆｕｋｕｚｕｍｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．II １９９１，９，１３９３および引用参考文献）を使用し、式（III）のヒドロキシアニリンへ変換される。
【００９２】
第２のステップにおいて、式（III）のヒドロキシアニリンはイソシアネート、または均等に尿素が製造されるのと同じ方法において対応するヒドロキシ尿素へ変換される。そのような反応の例はこの分野に見られる（Ｈｏｆｆｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９６４，７，６６５；Ｓｔｏｆｆｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｅｒ．Ｄｔｓｃｈ．Ｃｈｅｍ．Ｇｅｓ．１９７２，１０５，３１１５）。
【００９３】
同様に、Ｚ1 がＨでＺ2 がＯＨである式（Ｉ）の化合物は、適切な態様で試薬を交換することによって同じ方法によって製造することができる。
【００９４】
両方の場合、アリールアミンフラグメントの製造は特許文献に詳細に例証されている。例えば、ミラーら、“対称および非対称ジフェニル尿素を使用するｐ３８キナーゼの阻害”，ＷＯ９９／３２４６３；ミラーら、“対称および非対称ジフェニル尿素を使用するｒａｆキナーゼの阻害”，ＷＯ９９／３２４３６；デュマら、“置換複素環尿素を使用するｐ３８キナーゼ活性の阻害”，ＷＯ９９／３２１１１；デュマら、“Ｎ−ヘテロアリール−Ｎ’−（ヘテロ）アリール尿素を使用するｒａｆキナーゼの使用による新生物の処置方法”，ＷＯ９９／３２１０６；デュマら，“アリールおよびヘテロアリール置換複素環尿素を使用するｐ３８キナーゼ活性の阻害”，ＷＯ９９／３２１１０；デュマら、“アリールおよびヘテロアリール置換複素環尿素を使用するｒａｆキナーゼの阻害”，ＷＯ９９／３２４５５；リードルら、“ｒａｆキナーゼ阻害剤としてのＯ−カルボキシアリール置換ジフェニル尿素”，ＷＯ００／４２０１２；リードら、“ｐ３８キナーゼ阻害剤としてのＯ−カルボキシアリール置換ジフェニル尿素”，ＷＯ００／４１６９８。
【００９５】
ＹがＮＨＣＨ2 ＯＨである式（Ｉ）のヒドロキシメチルアミドは、この分野で既知の種々の方法、例えばエタノールおよび水酸化ナトリウムの存在下の水性ホルムアルデヒド（Ｗｅａｖｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９５１，１６，１１１１）または炭酸カリウムの存在下水性ホルムアルデヒド（Ｈａｗｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｕｃ．１９４６，１００３）により、対応する未置換アミドのヒドロキシル化によって製造することができる。
【００９６】
ＹがＮＨＯＨである式（Ｉ）のヒドロキサム酸はこの分野で既知の各種方法、例えば酢酸および水の存在下ヒドロキシルアミン（Ｂｏｓｈａｇｅｎ，Ｈ．Ｂｅｒ．Ｄｔｓｃｈ．Ｃｈｅｍ．Ｇｅｓ．１９６７，１００，９５４）によって対応するエステル（Ｙ＝Ｏあるキル）のアミド化によって製造することができる。同じ化合物は、対応する酸（Ｙ＝ＯＨ）からクロロギ酸エチルとの酸の１ポット活性化、次いでメタノール中ヒドロキシルアミンとの反応（Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．２０００，４１（３３），６２８５）により、または酸の１−アシルイミダゾールへの活性化、次いで、ヒドロキシルアミン塩酸塩との反応（Ｓｔａａｂ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍ．１９６２，７４，４０７）によって製造することができる。
【００９７】
最後に、尿素は当業者に親密な方法を使用してさらに処理することができる。
【００９８】
本発明は、本発明の化合物と、生理学的に許容し得る担体を含んでいる薬剤組成物を含む。
【００９９】
化合物は、経口的、局所的、非経口的、吸入もしくはスプレーにより、経膣的、経直腸的または経皮的に投与単位製剤において投与することができる。注射による投与は、静脈内、筋肉内、皮下および非経口注射、および注入技術の使用を含む。皮膚投与は局所適用および経皮投与を含むことができる。一以上の化合物は一以上の薬学的に許容し得る担体およびもし望むならば他の活性成分と組合せて存在することができる。
【０１００】
経口使用を意図する組成物は、薬剤組成物の製造のための当業者に知られた適当な方法に従って調製することができる。そのような組成物は希釈剤、甘味剤、香味剤、着色剤および保存剤よりなる群から選ばれた一以上の剤を服用可能な製剤を調製するために含むことができる。錠剤は錠剤の製造に適した非毒性の薬学的に許容し得る補助剤との混合物中の活性成分を含有する。これら補助剤は、例えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、乳糖、リン酸カルシウムもしくはリン酸ナトリウムのような不活性希釈剤；例えばコーンスターチまたはアルギン酸のような顆粒化および崩壊剤；および例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクのような結合剤であることができる。錠剤は未被覆か、またはそれらは胃腸管において崩壊および吸収を遅らせ、それにより長期間にわたって持続作用を提供するため公知技術によって被覆されることができる。例えばグリセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレートのような時間遅延材料を使用することができる。これらの化合物は固形の速放形に調製することもできる。
【０１０１】
経口使用のための製剤は、活性成分が例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウムもしくはカオリンのような不活性個体希釈剤と混合された硬化ゼラチンカプセルとして、または活性成分が水または油性媒体、例えばピーナッツオイル、流状パラフィンもしくはオリーブ油と混合された軟ゼラチンカプセルとして提供することもできる。
【０１０２】
水性懸濁液の製造に適した補助剤との混合物中の活性成分を含有する水性懸濁液も使用し得る。そのような補助剤は懸濁剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガントガム、アカシアガムであり、分散または湿潤剤は天然に存在するフォスファチド、例えばレシチン、または長鎖脂肪族アルコールとのエチレンオキシドの縮合物、例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール、またはポリオキシエチレンソルビトールモノオレエートのような脂肪酸とヘキシトールから得られた部分エステルとのエチレンオキシドの縮合生成物、または脂肪酸と無水ヘキシトールから得られた部分エステルとのエチレンオキシドの縮合生成物例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートであることができる。水性懸濁液は一以上の保存剤、例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルもしくはｎ−プロピル；一以上の着色剤；一以上の香味剤、およびショ糖もしくはサッカリンのような一以上の甘味剤を含むことができる。
【０１０３】
水の添加により水性懸濁液の調製に適した分散し得る粉末および顆粒は、分散または湿潤剤、懸濁剤および一以上の保存剤との混合物の活性成分を提供する。適切な分散もしくは湿潤剤および分散剤は既に上述したものによって例示されている。追加の補助剤、例えば甘味剤、香味剤および着色剤も存在することができる。
【０１０４】
化合物は非水性液体製剤の形、例えば活性成分を植物油、例えばアラキス油、オリーブ油もしくはピーナッツ油中に、または液状パラフィンのような鉱油中に分散することによって製剤化することができる油性懸濁液の形であってもよい。油性懸濁液は増粘剤、例えば蜜ロウ、硬パラフィンまたはセチルアルコールを含有することができる。服用し得る経口製剤を提供するため、上で述べたような甘味剤および香味剤を加えることができる。これら組成物はアスコルビン酸のような抗酸化剤の添加によって保存することができる。
【０１０５】
本発明の薬剤組成物は水中油型のエマルジョンの形にあることができる。油相は植物油例えばオリーブ油もしくはアラキス油、または鉱油例えば液状パラフィン、またはこれらの混合物でよい。好適な乳化剤は天然ガム例えばアカシアガムもしくはトラガントガム、天然フォスファチド例えば大豆レシチン、および脂肪酸と無水ヘキシトールから誘導されたエステルもしくは部分エステル例えばソルビタンモノオレエート、および前記エステルのエチレンオキシドとの縮合生成物例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートを含む。エマルジョンは甘味剤および香味剤を含むことができる。
【０１０６】
シロップおよびエリキサーは甘味剤例えばグリセロース、プロピレングリコール、ソクビトールもしくはショ糖で処方することができる。そのような処方は緩和剤、保存剤、香味剤および着色剤を含有することができる。
【０１０７】
化合物は薬物の直腸投与のための坐剤の形で投与することもできる。これらの組成物は、薬物を常温で固体であるがしかし直腸または膣温度では液体であり、そして直腸または膣内で溶融して薬物を放出する適当な非刺激性補助剤と混合することによって調製することができる。そのような材料はココアバターおよびポリエチレングリコールを含む。
【０１０８】
本発明の化合物のためここに記載したすべての療法のため、１日当りの経口投与療法は好ましくは０．０１ないし２００ｍｇ／ｋｇ全体重であろう。静脈内、筋肉内、皮下および非経口的、および注入技術の使用を含む注射投与のための１日当りの投与量は０．０１ないし２００ｍｇ／ｋｇ全体重であろう。１日当りの経膣投与療法は好ましくは０．０１ないし２００ｍｇ／ｋｇ全体重であろう。１日当りの経直腸投与療法は好ましくは０．０１ないし２００ｍｇ／ｋｇ全体重であろう。１日当りの局所投与療法は好ましくは１日１ないし４回投与される０．１ないし２００ｍｇであろう。経皮濃度は、好ましくは１日当り０．０１ないし２００ｍｇ／ｋｇの投与量を維持するのに要する濃度であろう。１日当りの吸入投与量は好ましくは０．０１ないし１０ｍｇ／ｋｇ全体重であろう。これらの投与療法は１日で、または週または月ベースのような延長投与において多数回投与によって達成することができる。
【０１０９】
当業者には、特定の投与方法は種々のファクターに依存し、そのすべての治療剤を投与する時日常的に考慮されるものであることが認められるであろう。しかしながら、与えられた患者に対する特定の投与量レベルは、投与される化合物の特定の活性、患者の年令、患者の体重、患者の一般的健康、患者の性別、患者の食事、投与時間、投与ルート、排泄速度、薬物併用、および治療を受ける症状の重篤度等を含む、種々のファクターに依存することが理解されるであろう。さらに当業者には、最適の治療コース、すなわち処置モードおよび限られた日数について本発明の化合物の日毎の投与回数は慣用の処置テストコースを使用して当業者により確かめることができることが認められるであろう。
【０１１０】
本発明の化合物は、既知化合物から（または既知化合物から製造することができる出発物質から）、例えばここに記載した一般的製造方法によって製造することができる。与えられた化合物のｒａｆ，ｐ３８またはＫＤＲ（ＶＥＧＦＲ２）キナーゼを阻害する活性は、例えばここに記載した操作に従って日常的にアッセイすることができる。
【０１１１】
１９９９年１０月２２日出願の米国特許出願Ｎｏ．０９／４２５，２２８および２００１年１月１２日出願の米国特許出願Ｎｏ．０９／４５８，５４８を含む、以上および以下で引用したすべての出願、特許および発表の全体の記載をここに参照として取入れる。
【０１１２】
さらに考究することなく、当業者は以上の説明を使用して本発明をその全範囲において利用することができるものと信じられる。従って以下の実施例は単に例証と考えるべきであり、開示の残部の限定と考えるべきではない。以下の実施例は例証目的であって、本発明をいかなる態様において限定を意図せず、またはそのように解すべきではない。
【０１１３】
実施例：
すべての反応は乾燥アルゴンまたは乾燥窒素の陽圧のもとで炎乾燥またはオーブン乾燥されたガラス器具内で実施され、そして特記しない限り磁気的に攪拌された。敏感な液体および溶液はシリンジまたはカニューレにより移され、そしてゴム栓を通って反応容器へ導入された。特記しない限り、「減圧下の濃縮」の用語は約１５ｍｍＨｇにおけるＢｕｃｈｉロータリエバポレーターの使用を指す。
【０１１４】
すべての温度は未補正の摂氏（℃）で報告される。特記しない限り、すべての部およびパーセントは重量による市販グレードの試薬および溶媒がさらに精製することなく使用された。
【０１１５】
薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）はＷｈａｔｍａｎプレコートガラスバックシリカゲル６０Ａ Ｆ−２５４の２５０μｍプレートを使用して実施した。プレートの可視化は次の技術の一以上によって実施された。（ａ）紫外線照射、（ｂ）ヨウ素蒸気へ曝露、（ｃ）エタノール中リンモリブデン酸１０％溶液中プレートの浸漬および続いて加熱、（ｄ）硫酸セリウム溶液中プレートの浸漬および続いて加熱、（ｅ）２，４−ジニトロフェニルヒドラジンの酸性エタノール溶液中プレートの浸漬および続いて加熱。カラムクロマトグラフィー（フラッシュクロマトグラフィー）は２３０−４００メッシュＥＭサイエンスシリカゲルを使用して実施された。
【０１１６】
融点（ｍｐ）は、Ｔｈｏｍａｓ−Ｈｏｏｖｅｒ融点装置またはＭｅｔｔｌｅｒＦＰ６６自動融点装置を使用して決定され、補正しなかった。フーリエ変換赤外スペクトルはＭａｔｔｓｏｎ ４０２０ Ｇａｌａｘｙシリーズ分光光度計を使用して得られた。プロトン（1Ｈ）核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルは、Ｇｅｎｅｒａｌ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ ＧＮ−オメガ３００（３００ＭＨｚ）スペクトロメータにより、標準としてＭｅ4Ｓｉ（δ０．００）またはプロトン化溶媒（ＣＨＣｌ3δ７．２６；ＭｅＯＨ δ３．３０；ＤＭＳＯ δ２．４９）で測定された。炭素（13Ｃ）ＮＭＲスペクトルはＧｅｎｅｒａｌ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ ＧＮ−オメガ３００（７５ＭＨｚ）スペクトロメータと、標準として溶媒（ＣＤＣｌ3δ７７．０；ＭｅＯＤ−ｄ3；δ４９．０；ＤＭＳＯ−ｄ6δ３９．５）で測定された。低解像質量スペクトル（ＭＳ）および高解像質量スペクトル（ＨＲＭＳ）は、電子インパクト（ＥＩ）質量スペクトルとして、または高速原子衝撃（ＦＡＢ）質量スペクトルとして得られた。電子インパクト質量スペクトル（ＥＩ−ＭＳ）はサンプル導入のためＶａｃｕｍｅｔｒｉｃ脱着化学的イオン化プローブを備えたヒューレット−パッカード５９８９Ａ質量スペクトル計で得られた。イオン源は２５０℃に維持された。電子インパクトイオン化は電子エネルギー７０ｅＶおよびトラップ電流３００μＡで実施された。液体セシウム二次イオン質量スペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）すなわち高速原子衝撃の最新型はＫｒａｔｏｓ Ｃｏｎｃｅｐｔ １−Ｈスペクトル計を用いて得られた。化学的イオン化質量スペクトル（ＣＩ−ＭＳ）は試薬ガスとして（１×１０-4トルないし２．５×１０-4トル）メタンまたはアンモニアを使用し、ヒューレット−パッカードＭＳ−エンジン（５９８９Ａ）を使用して得られた。直接挿入脱着化学的イオン化（ＤＣＩ）プローブ（Ｖａｃｕｍｅｔｒｉｃｓ，Ｉｎｃ）は１０秒で０〜１５Ａから立ち上げられ、サンプルの痕跡すべてが消失するまで（〜１〜２分）１０Ａに保たれた。スペクトルは２秒／走査において５０〜８００ａｍｕから走査された。ＨＰＬＣエレクトロスプレー質量スペクトル（ＨＰＬＣ ＥＳ−ＭＳ）は、四級ポンプ、可変波長検出器、Ｃ−１８カラム、およびエレクトロスプレーイオン化を有するＦｉｎｎｉｇａｎ ＬＣＱイオントラップ質量スペクトル計を備えたヒューレット−パッカード１１００ＨＰＬＣを使用して得られた。スペクトルはソースのイオンの数に従って可変イオン時間を使用して１２０〜８００ａｍｕから走査された。ガスクロマトグラフィー／イオン選択性質量スペクトル（ＧＣ−ＭＳ）は、ＨＰ−１メチルシリコーンカラム（０．３３ｍＭコーティング；２５ｍ×０．２ｍｍ）を備えたヒューレット−パッカード５８９０ガスクロマトグラフ、およびヒューレット−パッカード５９７１質量選択性検出器（イオン化エネルギー７０ｅＶ）で得られた。元素分析はＲｏｂｅｒｔｓｏｎ Ｍｉｃｒｏｌｉｔ Ｌａｂｓ．Ｍａｄｉｓｏｎ ＭＪによって実施された。
【０１１７】
すべての化合物は、帰属された構造と一致するＮＭＲスペクトル、ＬＲＭＳおよび元素分析もしくはＨＲＭＳをディスプレーした。
【０１１８】
〔実施例１〕
Ｎ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕−Ｎ’−｛４−〔２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−１−オキソ−（４−ピリジルオキシ）〕フェニル｝尿素の製造：
【０１１９】
【化５】
【０１２０】
無水ＣＨ2Ｃｌ2（２．２ｍｌ）と無水テトラヒドロフラン（２．２ｍｌ）の混液中のかきまぜたＮ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕−Ｎ’−｛４−〔２−（Ｎ−メチルカルバモイル）（４−ピリジルオキシフェニル）｝尿素（５００ｍｇ，１．０８ｍｍｏｌ）の混合物へ、３−クロロ過安息香酸（純度７７％，１．０９ｇ，４．８６ｍｍｏｌ，４．５当量）を加え、生成した混合物を４０℃で３３時間加熱した。生成した混合物を減圧濃縮し、そして粗生成物をＭＰＬＣ（ＢｉｏｔａｇｅTM；２０％アセトン／ヘキサンから５０％アセトン／ヘキサンまでの勾配）により精製した。ＥｔＯＡｃからの再結晶は白色固体としてＮ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕−Ｎ’−｛４−〔２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−１−オキソ−（４−ピリジルオキシ）〕フェニル｝尿素（２９３ｍｇ，５７％）を与えた。ｍｐ（未補正）２３２−２３４℃；ＴＬＣ（５０％アセトン／ヘキサン）Ｒｆ０．１３；1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．４８（ｂｒｏａｄ，ｓ，１Ｈ），９．１９（ｓ，１Ｈ），８．９８（ｓ，１Ｈ），８．３８（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．１０（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｄｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），２．８６（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，３Ｈ）；ＨＰＬＣ ＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ４８１（（Ｍ＋Ｈ）+）；元素分析Ｃ21Ｈ16ＣｌＦ3Ｎ4Ｏ4，計算値Ｃ５２．４６％，Ｈ３．３３％，Ｎ１１．６５％；実験値Ｃ５２．２２％，Ｈ３．３９％，Ｎ１１．４９％
【０１２１】
〔実施例２〕
Ｎ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕−Ｎ’−｛４−カルバモイル−１−オキソ−（４−ピリジルオキシ）フェニル｝尿素の製造：
ステップ１：４−クロロ−２−ピリジンカルボキサマイドの製造
【０１２２】
【化６】
【０１２３】
濃アンモニア水（３２ｍｌ）に溶解した４−クロロ−２−ピリジンカルボキル酸メチル塩酸塩（１．０ｇ，４．８１ｍｍｏｌ）へ、塩化アンモニウム（９６．２ｍｇ，１．８ｍｍｏｌ，０．３７当量）を加え、不均質反応混合物を室温で１６時間攪拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）と水（３００ｍｌ）中へ注いだ。有機層を水（２×３００ｍｌ）と飽和食塩水（１×３００ｍｌ）で洗い、乾燥（ＭｇＳＯ4）、減圧濃縮し、ベージュ色の固体として４−クロロ−２−ピリジンカルボキサマイド（６０４．３ｍｇ，８０．３％）を得た。ＴＬＣ（５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）Ｒｆ０．２０；Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ８．６１（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），８．２０（Ｄｒｏａｄ，ｓ，１Ｈ），８．０２（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），７．７６（−７．７３（ｍ，１Ｈ）
【０１２４】
ステップ２：４−（４−アミノフェノキシ）−２−ピリジンカルボキサイドの製造
【０１２５】
【化７】
【０１２６】
無水ＤＭＦ（７．７ｍｌ）中の４−アミノフェノール（４１８ｍｇ，３．８３ｍｍｏｌ）へカリウムｔ−ブトキサイド（４４７ｍｇ，３．９８ｍｍｏｌ，１．０４当量）を一度に加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌し、そして４−クロロ−２−ピリジンカルボキサマイド（６００ｍｇ，３．８３ｍｍｏｌ，１．０当量）の無水ＤＭＦ（４ｍｌ）溶液を加えた。反応混合物を８０℃で３日攪拌し、ＥｔＯＡｃと飽和食塩水の混液中へ注いだ。有機層を飽和ＮＨ4Ｃｌ溶液および飽和食塩水で順次洗い、乾燥（ＭｇＳＯ4）、そして減圧濃縮した。粗生成物をＭＰＬＣクロマトグラフィー（ＢｉｏｔａｇｅTM；１００％ＥｔＯＡｃから１００％ＭｅＯＨ／５０％ＥｔＯＡｃ／４０％ヘキサンまでの勾配）を使用して精製し、褐色固体として４−クロロ−５−トリフロロメチルアニリン（５１０ｍｇ，５８％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ８．４３（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．０７（ｂｒｓ，１Ｈ），７．６６（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（ｄｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），６．６２（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），５．１７（ｂｒ，ｓ，２Ｈ）；ＨＰＬＣ ＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ２３０（（Ｍ＋Ｈ）+）
【０１２７】
ステップ３：Ｎ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕−Ｎ’−｛４−〔２−カルバモイル−（４−ピリジルオキシ）〕フェニル｝尿素の製造
【０１２８】
【化８】
【０１２９】
無水ジクロロエタン（５．５ｍｌ）中の４−クロロ−５−トリメチルアニリン（４５１ｍｇ，２．３１ｍｍｏｌ，１．１当量）と、１，１’−カルボニルジイミダゾール（４１９ｍｇ，２．５４ｍｍｏｌ，１．２当量の混合物をアルゴン下６５℃で１６時間攪拌した。一旦室温へ冷却し、無水ＴＨＦ（４．０ｍｌ）中の４−（４−アミノフェノキシ）−２−ピリジンカルボキサマイド（４８０ｍｇ，２．０９ｍｍｏｌ）の溶液を加え、反応混合物を６０℃で４時間攪拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ中へ注ぎ、有機層を水（２×）と飽和食塩水（１×）で洗い、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濾過し、そして減圧濃縮した。ＭＰＬＣクロマトグラフィー（ＢｉｏｔａｇｅTM；１００％ＥｔＯＡｃから２％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃまでの勾配）は、白色固体としてＮ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕−Ｎ’−｛４−〔２−カルバモイル−（４−ピリジルオキシ）〕フェニル｝尿素（７７０ｍｇ，８２％）を与えた。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）Ｒｆ０．１１（１００％ＥｔＯＡｃ）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ９．２１（ｓ，１Ｈ），８．９９（ｓ，１Ｈ），８．５０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．１１（ｓ，１Ｈ），８．１０（ｓ，１Ｈ），７．６９（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），７．６４（ｄｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．１４（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ ＬＣ−ＭＳ（ＭＨ+＝４５１）；元素分析Ｃ20Ｈ14ＣｌＦ3Ｎ4Ｏ3に対する計算値：Ｃ５３．２９％，Ｈ３．１３％；実験値Ｃ５３．３３％，Ｈ３．２１％，Ｎ１２．６０％
【０１３０】
ステップ４：Ｎ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕−Ｎ’−｛４−〔２−カルバモイル−１−オキソ−（４−ピリジルオキシ）〕フェニル｝尿素の製造
【０１３１】
【化９】
【０１３２】
Ｎ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕−Ｎ’−｛４−〔２−カルバモイル−１−オキソ−（４−ピリジルオキシ）〕フェニル｝尿素（１２５．６ｍｇ，５１％）は、Ｎ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕−Ｎ’−｛４−〔２−（Ｎ−メチルカルバモイル）−１−オキソ−（４−ピリジルオキシ）〕フェニル｝尿素について記載した態様で、Ｎ−〔４−クロロ−３−（トリフロロメチル）フェニル〕−Ｎ’−｛４−〔２−カルバモイル−（４−ピリジルオキシ）〕フェニル｝尿素（２４０．０ｍｇ，０．５３ｍｍｏｌ）から白色固体として製造された。ＴＬＣ（５％ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）Ｒｆ０．１７；1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０．７２（ｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，１Ｈ），９．２１（ｓ，１Ｈ），８．９９（ｓ，１Ｈ），８．３６（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），８．３１（ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，１Ｈ），８．１０（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｄｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｄｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ）；ＨＰＬＣ ＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ４６７（（Ｍ＋Ｈ）+）；元素分析Ｃ20Ｈ14ＣｌＦ3Ｎ4Ｏ4に対する計算値：Ｃ５０．４９％，Ｈ３．１８％，Ｎ１１．７８％；実験値Ｃ５０．６９％，Ｈ２．８６％，Ｎ１１．４７％
【０１３３】
生物学的実施例
ｐ３８キナーゼインビトロアッセイ：
化合物のインビトロ阻害性は、ｐ３８キナーゼ阻害アッセイを用いて決定された。ｐ３８活性は９６ウエルマイクロタータープレート中のインビトロキナーゼアッセイ実験を用いて検出された。組換えヒトｐ３８（０．５μｇ／ｍｌ）が、キナーゼバッファー（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ，２０ｍＭ ＭｇＣｌ2 および１５０ｍＭ ＮａＣｌの基質（ミエリン塩基性タンパク、５μｇ／ｍｌ）および化合物と混合された。３３ｐ標識ＡＴＰ（１０μＭ）が最終容積１００μｌまで加えられた。反応は３２℃で３０分間行われ、そして１Ｍ ＨＣｌ溶液で停止された。基質へ取り込まれた放射活性の量が１％リン酸溶液を用いて負に帯電したガラス繊維フィルター上に標識基質をトラップすることによって決定され、そしてシンチレーションカウンターで読み取られた。陰性対照は基質プラスＡＴＰ単独を含んでいる。
【０１３４】
マウス中のＬＰＳ誘発ＴＮＦα生産：
選択された化合物のインビボ阻害性質はインビボモデルにおいてネズミＬＰＳ誘発ＴＮＦα生産を用いて決定することができる。１０群のＢＡＬＢ／ｃ（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｎ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｋｉｎｇｓｔｏｎ，ＮＹ）が記録されたルートによってビヒクルまたは化合物で処理された。１時間後エンドトキシン（Ｅ．ｃｏｌｉ リポポリサッカライド（ＬＰＳ）１００μｇ）が腹腔内（ｉ．ｐ．）投与された。９０分後動物を二酸化炭素窒息により安楽死させ、そして個々の動物から心臓穿刺によりヘパリン化チューブ中へ血漿を採取した。サンプルは１２，５００×ｇにおいて５分間４℃で遠心することにより清澄化した。上清を新しいチューブへ傾斜し、必要な時−２０℃で貯蔵した。血清中のＴＮＦαレベルは市販のネズミＴＮＦ ＥＬＩＳＡキット（Ｇｅｎｚｙｍｅ）を用いて測定した。
【０１３５】
上の２つの生物学的実施例は、化合物がインビトロおよびインビボにおいてｐ３８キナーゼを阻害することを証明するために用いることができ、それ故炎症および骨粗しょう症のようなｐ３８仲介病の処置におけるそれらの有用性を確立する。
【０１３６】
Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ｒａｆキナーゼアッセイ：
ｉｎ ｖｉｔｒｏでのキナーゼアッセイにつき、ｒａｆを２ｍＭ ２−メルカプトエタノールおよび１００ｍＭ ＮａＣｌを含有する２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ中ＭＥＫ、ｐＨ８．２を用いてインキュベートした。このタンパク質溶液（２０μＬ）を水（５μＬ）またはＤＭＳＯに溶解した化合物の１０ｍＭ ストック溶液から蒸留水で希釈した化合物とともに混合した。８０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ中の２５μＬ［γ−33Ｐ］ＡＴＰ（１０００〜３０００ｄｐｍ／ｐｍｏｌ）、ｐＨ７．５、１２０ｍＭ ＮａＣｌ、１．６ｍＭ ＤＴＴ、１６ｍＭ ＭｇＣｌ2を加えることによりキナーゼ反応を開始した。反応混合物を３２℃で、通常２２分間インキュベートした。33Ｐのタンパク質への取り込みを、ホスホセルロ−スマット上に反応物をおき、１％リン酸溶液で遊離のカウントを洗浄除去し、液体シンチレーションカウンターによりリン酸化をはかることによりアッセイした。高処理量スクリーニングについては、１０μＭ ＡＴＰおよび０．４μＭ ＭＥＫを用いた。いくつかの実施例においては、Ｌａｅｍｍｌｉ試料緩衝液を当量加えることによりキナーゼ反応を止めた。試料を３分間沸騰させ、タンパク質を７．５％Ｌａｅｍｍｌｉゲル上で電気泳動して分けた。ゲルを固定、乾燥し、イメージングプレート（Ｆｕｊｉ）にさらした。電気泳動はＦｕｊｉｘ Ｂｉｏ−Ｉｍａｇｉｎｇ Ａｎａｌｙｚｅｒ Ｓｙｓｔｅｍを用いて解析した。このアッセイにおいて、実施例１および２の化合物は１０μＭにおいて＞５０％阻害を示し、インビトロにおいてｒａｆキナーゼの著しい阻害を示した。
【０１３７】
腫瘍細胞増殖アッセイ：
ｉｎ ｖｉｔｒｏ成長アッセイのために、変異Ｋ−ｒａｓ遺伝子を含有する、ＨＣＴ１１６およびＤＬＤ−１といった、しかしこれらに限定されないヒト腫瘍細胞系について、プラスチック上での足場依存性成長または軟質寒天における足場依存性成長の標準的増殖アッセイに用いた。ヒト腫瘍細胞系をＡＴＣＣ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ ＭＤ）から入手し、１０％熱不活性化仔ウシ血清および２００ｍＭグルタミンを有するＲＰＭＩにて維持した。仔ウシ血清（ＪＲＨ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｌｅｎｅｘａ， ＫＳ）以外の、細胞培養培地および添加剤はＧｉｂｃｏ／ＢＲＬ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ， ＭＤ）から入手した。足場依存性成長についての標準的増殖アッセイでは、３×１０3個の細胞を９６ウェル組織培養プレートにまき、一晩３７℃で５％ＣＯ2インキュベーターにおいて付着させた。化合物を希釈系の培地に砕き、９６ウェル細胞培養に加えた。３日ごとに新鮮な培地含有化合物を与え、細胞を５日間典型的に成長させた。ＯＤ４９０／５６０で標準的ＥＬＩＳＡプレートリーダーにより測定し、標準的ＸＴＴ比色アッセイ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）で代謝活性を測定しながら、または細胞収集具を用いてガラス繊維マット上に細胞をおき、液体シンチレーションカウンターにより3Ｈ−チミジンの取り込みを測定することにより、１μＣｕ3Ｈ−チミジンを用いた８時間培養後の3Ｈ−チミジンのＤＮＡへの取り込みを測定し、増殖をモニターした。
【０１３８】
足場依存性細胞成長について、ＲＰＭＩ完全培地を用いた０．４％Ｓｅａｐｌａｑｕｅアガロ−スに細胞を１×１０3〜３×１０3でまき、２４ウェル組織培養プレートでＲＰＭＩ完全培地に０．６４％寒天のみを含有する底の層を重ねた。完全培地と化合物の希釈系とをウェルに加え、３７℃で５％ＣＯ2インキュベーター中１０〜１４日間インキュベートし、３〜４日間隔で化合物を含有する新鮮培地を繰り返し与えた。コロニー形成をモニターし、細胞塊の総和、平均コロニーサイズおよびコロニー数を、イメージ表現技術およびイメージ解析ソフトウェアを用いてはかった（Ｉｍａｇｅ Ｐｒｏ Ｐｌｕｓ， ｍｅｄｉａ ｂｙ Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ）。
【０１３９】
これらのアッセイは、式Ｉで示される化合物がＲａｆキナーゼ活性を阻害し、がん遺伝子細胞成長を阻害することを立証する。
【０１４０】
ＫＤＲ（ＶＥＧＦＲ２）アッセイ：
ＫＤＲキナーゼのサイトゾルキナーゼドメインはＳｆ９昆虫細胞内に６Ｈｉｓ融合タンパクとして発現される。このＫＤＲキナーゼドメイン融合タンパクをＮｉ++キレーティングカラム上で精製した。９６ウエルＥＬＩＳＡプレートを１００μｌ ＨＥＰＥＳバッファー（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ，０．１％ＢＳＡ，ｐＨ７．５，１５０ｍＭ ＮａＣｌ，０．０２％チメロサール）中のＨＥＰＥＳバッファー（２０ｍＭポリ（Ｇｌｕ４；Ｔｙｒ１）（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で４℃で一夜コートした。使用前、プレートはＨＥＰＥＳ，ＮａＣｌバッファーで洗い、そしてプレートを１％ＢＳＡ，ＨＥＰＥＳ中の１％Ｔｗｅｅｎ２０，ＮａＣｌバッファーでブロックした。
【０１４１】
テスト化合物は１００％ＤＭＳＯ中に４ｍＭから０．１２μＭまで半対数希釈において系統的に希釈された。これら希釈液は５％ＤＭＳＯ中の化合物溶液を得るため水中に２０倍にさらに希釈された。アッセイプレートを８５μｌのアッセイバッファー（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．５，１００ｍＭ ＫＣｌ，１０ｍＭ ＭｇＣｌ2，３ｍＭ ＭｎＣｌ2，０．０５％グリセロール，０．００５％トリトンＸ−１００，１ｍＭメルカプトエタノール、３．３μＭ ＡＴＰありまたはなし）でローデング後、希釈した化合物５μｌを最終アッセイ体積１００μｌまで加えた。アッセイは１０μｌ（３０ｎｇ）のＫＤＲキナーゼドメインの添加によって開始された。
【０１４２】
アッセイは、テスト化合物またはビヒクル単独について緩かな攪拌のもとで室温で６０分間インキュベートされた。ウエルは洗浄され、そしてホスフォチロシン（ＰＹ）が抗ホスフォチロシン（ＰＹ）ｍＡｂクローン４Ｇ１０（Ｕｐｓｔａｔｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｌａｋｅ Ｐｌａｃｉｄ，ＮＹ）と共にプローブされた。ＰＹ／抗ＰＹ複合体を抗マウスＩｇＧ／ＨＲＰ接合体（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｐｌｃ，Ｂｕｃｋｉｎｇａｍｓｈｉｒｅ，Ｅｎｇｌａｎｄ）で検出した。ホスフォチロシンは１００μｌの３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン溶液（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ ａｎｄ Ｐｅｒｒｙ，ＴＭＢ Ｍｉｃｒｏｗｅｌｌ １ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ペルオキシダーゼ基）とインキュベートすることにより定量された。発色はＨＣｌ系停止液１００μｌ（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ ａｎｄ Ｐｅｒｒｙ，ＴＭＢ １ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ停止液）の添加によって停止された。光学密度は４５０ｎｍにおいて９６ウエルリーダーＳｐｅｃｔｒａ Ｍａｘ ２５０（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅ）中で分光測光法的に決定された。バックグラウンドＯＤ（アッセイ中ＡＴＰなし）がすべてのＯＤから差引かれ、そして％阻害が下記式に従って計算された。
【０１４３】
％阻害＝（ＯＤ（ビヒクル対照）−ＯＤ（化合物））／（ＯＤ（ビヒクル対照）−ＯＤ
（ＡＴＰなし）×１００
【０１４４】
ＩＣ50値は化合物濃度対％阻害を用いて最小自乗プログラムで決定された。
【０１４５】
細胞機械的アッセイ−３Ｔ３ＫＤＲホスフォリール化の阻害：
ＫＤＲレセプターの全長を発現するＮＩＨ３Ｔ３を１０％新生ウシ血清、低グルコース、２５ｍＭ／Ｌピルジン酸ナトリウム、塩酸ピリドキシンおよび０．２ｍｇ／ｍｌのＧ４１８（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）で補足したＤＭＥＭ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）中で生育させる。細胞はコラーゲン−ＩをコートしたＴ７５フラスコ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｏｃｋｉｎｓｏｎ Ｌａｂｗａｒｅ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）中で加湿した５％ＣＯ2雰囲気中３７℃で維持する。
細胞１５，０００個はＤＭＥＭ生育媒地中のコラーゲンＩをコートした９６ウエルプレートの各ウエル中へプレートされる。６時間後、細胞を洗い、そして培地を血清なしのＤＭＥＭで交換する。細胞を静止させるため一夜培養した後、培地は０．１％ウシアルブミン（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を加えたＤｕｌｂｅｃｃｏ リン酸緩衝化食塩水（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）により交換する。種々の濃度（０−３００ｍＭ）のデスト化合物をＤＭＳＯの１％最終濃度において細胞へ加えた後、細胞を室温で３０分インキュベートする。ＶＥＧＦ刺激の後、バッファーを除去し、細胞は抽出バッファー（１０％グリセロール，５０ｍＭ ＢＧＰ，２ｍＭ ＥＤＴＡ，１０ｍＭ ＮａＦ，０．５ｍＭ ＮａＶＯ4，０．３％ ＴＸ−１００を補足した９０ｍＭ トリス，ｐＨ７．８）の１５０μｌの添加により、４℃で３０分溶解する。
レセプターホスフォリール化を評価するため、各細胞溶解液の１００μｌを抗体Ｃ２０（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ，ＣＡ）３００ｎｇでプレコートしたＥＬＩＳＡプレートのウエルへ加える。６０分間のインキュベーション後、プレートを洗い、結合ＫＤＲを抗ホスホチロシンｍＡｂクローン４Ｇ１０（Ｕｐｓｔａｔｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｌａｋｅ Ｐｌａｃｉｄ，ＮＹ）を用いてホスフォチロシンについてプローブする。ウエルを洗い、そして抗マウスＩｇＧ／ＨＲＰ接合体（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｐｌｅ，Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｅｒｅ，Ｅｎｇｌａｎｄ）と６０分間インキュベートする。ウエルを洗浄し、そしてホスフォチロシンを１００μｌ／ウエルの３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ ａｎｄ Ｐｅｒｒｙ，ＴＭＢ １コンポーネント停止溶液）の添加によって定量する。
光学密度（ＯＤ）を４５０ｎｍにおいて９６ウエルリーダー（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ２５０，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅ）中で分光測光法的に決定する。バックグラウンドＯＤ（ＶＥＧＦ 添加なし）はすべてのＯＤから差引かれ、そして％阻害が下記式に従って計算される。
【０１４６】
％阻害＝（ＯＤ（ＶＥＧＦ対照）−ＯＤ（テスト化合物））／（ＯＤ（ＶＥＧＦ対照）−ＯＤ（ＶＥＧＦ無添加））×１００
【０１４７】
ＩＣ50値は化合物濃度対阻害を用いていくつかの実験材料について最小自乗プログラムによって決定される。
【０１４８】
ＶＥＧＦＲ阻害のインビボアッイセ：
ＭａｔｒｉｇｅｌTM脈管形成モデル
Ｍａｔｒｉｇｅｌプラグの調製およびインビボフェーズ：
ＭａｔｒｉｇｅｌTM（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｂｅｄｏｒｄ，ＭＡ）は、主としてラミニン、コラーゲンＩＶおよびヘパランサルフェートプロテオグリカンより構成されるネズミ腫瘍からの基底膜抽出物である。それは４℃において無菌液として提供されるが、しかし３７℃において固体ゲルを容易に生成する。
４℃のＭａｔｒｉｇｅｌを、選別できるマーカーを有するネズミＶＥＧＦ遺伝子を含むプラスミドで形質転換したＳＫ−ＭＥＬ２ ヒト腫瘍細胞と混合する。腫瘍細胞は選別下インビトロで生育され、そして細胞は２×１０6／０．５ｍｌの比で冷Ｍａｔｒｉｇｅｌ液と混合される。２５ゲージ針を用いて１／２ｍｌを腹中央線近くに皮下移植する。テスト化合物は、移植日から出発して１日１回３０，１００および３００ｍｇ／ｋｇＰＯにおいてエタノール／Ｃｅｒｅｍａｐｈｏｒ ＥＬ／食塩水（１２．５％：１２．５％：７５％）中の溶液として投与される。移植後１２日にマウスを安楽死させ、そしてＭａｔｒｉｇｅｌペレットをヘモグロビン含量の分析のために収穫する。
ヘモグロビンアッセイ：
Ｍａｔｒｉｇｅｌペレットは、４℃の溶解バッファー（２０ｍＭトリスｐＨ７．５，１ｍＭ ＥＧＴＡ，１ｍＭ ＥＤＴＡ，１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００（ＥＭ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ，ＮＪ）、および完全ＥＤＴＡ フリープロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ））の４容積中に入れ、４℃でホモジネートされる。ホモジネートは氷の上で振とうしながら３０分間インキュベートされ、４℃で３０分１４Ｋ×ｇにおいて遠心される。上清は冷たいマイクロ遠心チューブに移され、そしてヘモグロビンアッセイのために４℃で貯蔵される。
マウスヘモグロビン（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）はオートクレーブ滅菌水（Ｂｉｏ Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｉｎｃ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌ，ＭＤ）に５ｍｇ／ｍｌに懸濁する。標準曲線は溶解バッファー（上述）中で５００μｇ／ｍｌから３０μｇ／ｍｌまで作成される。標準曲線および溶解物サンプルはポリスチレン９６ウエルプレートへ５μｌ／ウエルにおいて二重に加えられる。Ｓｉｇｍａ血漿ヘモグロビンキット（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を用い、ＴＭＳ基質を室温酢酸溶液５０ｍｌ中に復元する。基質１００μｌを各ウエルへ加え、次に室温で過酸化水素溶液１００μｌ／ウエルを加える。
光学密度は６００ｎｍにおいて９６ウエルリーダー（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ２５０マイクロプレート分光光度計システム、Ｍｏｌｅｃｎｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）を用いて分光測光法で決定される。バックグラウンド溶解物バッファーの読みはすべてウエルから差引かれる。
総サンプルヘモグロビン含量は以下の式に従って計算される。
【０１４９】
総ヘモグロビン＝（サンプル溶解物容積）×（ヘモグロビン濃度）
【０１５０】
細胞なしのＭａｔｒｉｇｅｌサンプルの平均総ヘモグロビンは細胞ありの総ヘモグロビンＭａｔｒｉｇｅｌサンプルの各自から差し引かれる。％阻害は以下の式に従って計算される。
【０１５１】
％阻害＝（平均総ヘモグロビン薬物処置腫瘍溶解物）／（平均総ヘモグロビン非処置腫瘍溶解物）×１００
【０１５２】
ｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍アッセイ：
ｒａｆキナーゼによって媒介される腫瘍（例えば充実性癌）に対する化合物の阻害作用のｉｎ ｖｉｖｏアッセイは、次のように実施する：
ＣＤＩ ｎｕ／ｎｕマウス（６−８週齢）の側腹部に、ヒト結腸腺癌細胞系を１×１０6細胞の割合で皮下注射する。腫瘍の大きさが５０−１００ｍｇとなるおよそ１０日間から、マウスに１０，３０，１００又は３００ｍｇ／Ｋｇを腹腔内、静脈内又は経口投与する。１日１回、連続１４日間動物に投与する；腫瘍の大きさを週に２回カリパスでモニターする。Ｍｏｎｉａら（Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１９９６，２，６６８−７５）の手法に従ってｒａｆキナーゼによって媒介される腫瘍（例えば充実性癌）に対する化合物の阻害作用をｉｎ ｖｉｖｏでさらに明らかにすることができる。
【０１５３】
前記の実施例は、前記の実施例で使用したものを一般的にあるいは特定して述べの反応物質に置き換える、及び／あるいは本発明の条件を操作することによって反復し、同様の成功を収めることができる。
【０１５４】
上記の説明から、当業者は本発明の本質的特性を容易に確認し、その精神と範囲から逸脱することなく、様々な用途及び条件に適合するように本発明に様々な変更及び修正を加えることができる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物、またはその塩、または単離されたその立体異性体：
【化１】
式中、
ＹはＯＲ1またはＮＨＲ2，
Ｈａｌは塩素または臭素，
Ｒ1はＨまたはＣ1−Ｃ6アルキル，
Ｒ2はＨ，ＯＨ，
Ｚ1およびＺ2 は各自ＨまたはＯＨであり、Ｚ1またはＺ2の一つだけがＯＨであることができ、
Ｘ1ないしＸ7は各自独立にＨ，ＯＨまたはＯ（ＣＯ）Ｃ1−Ｃ4アルキルであり、そして
ｎは１である。
ただし、以下の条件の少なくとも一つを満たすことを条件とする。
ａ）Ｚ1またはＺ2はＯＨ，
ｂ）Ｒ2はＯＨ
【請求項２】
式（ＩＩ）の化合物、またはその塩もしくは立体異性体：
【化２】
式中、
ＹはＯＲ1またはＮＨＲ2，
Ｈａｌは塩素または臭素，
Ｒ1はＨまたはＣ1−Ｃ6アルキル，
Ｒ2はＯＨ，
Ｚ1およびＺ2は各自ＨまたはＯＨであり、Ｚ1またはＺ2の１つだけがＯＨであることができ、
Ｘ4ないしＸ7は各自独立にＨ，ＯＨまたはＯ（ＣＯ）Ｃ1−Ｃ4アルキルであり、そして
ｎは１である。
ただし、以下の条件の少なくとも１つを満たすことを条件とする。
ａ）Ｚ1またはＺ2はＯＨ，
ｂ）Ｒ2はＯＨ
【請求項３】
式（III）の化合物、またはその塩もしくは立体異性体：
【化３】
式中、
ＹはＯＲ1 またはＮＨＲ2 ，
Ｈａｌは塩素または臭素，
Ｒ1 はＨまたはＣ1 −Ｃ6 アルキル，
Ｒ2 はＨ，ＯＨ，
Ｚ1 およびＺ2 は各自ＨまたはＯＨであり、Ｚ1 またはＺ2 の１つだけがＯＨであることができ、そして
ｎは１である。
ただし、以下の条件の少なくとも１つを満たすことを条件とする。
ａ）Ｚ1 またはＺ2 はＯＨ，
ｂ）Ｒ2 はＯＨ
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物、またはその塩、または単離されたその立体異性体：
【化１】
式中、
ＹはＯＲ1またはＮＨＲ2，
Ｈａｌは塩素または臭素，
Ｒ1はＨまたはＣ1−Ｃ6アルキル，
Ｒ2はＨ，ＯＨ，
Ｚ1およびＺ2 は各自ＨまたはＯＨであり、Ｚ1またはＺ2の一つだけがＯＨであることができ、
Ｘ1ないしＸ7は各自独立にＨ，ＯＨまたはＯ（ＣＯ）Ｃ1−Ｃ4アルキルであり、そして
ｎは１である。
ただし、以下の条件の少なくとも一つを満たすことを条件とする。
ａ）Ｚ1またはＺ2はＯＨ，
ｂ）Ｒ2はＯＨ
【請求項２】
式（ＩＩ）の化合物、またはその塩もしくは立体異性体：
【化２】
式中、
ＹはＯＲ1またはＮＨＲ2，
Ｈａｌは塩素または臭素，
Ｒ1はＨまたはＣ1−Ｃ6アルキル，
Ｒ2はＯＨ，
Ｚ1およびＺ2は各自ＨまたはＯＨであり、Ｚ1またはＺ2の１つだけがＯＨであることができ、
Ｘ4ないしＸ7は各自独立にＨ，ＯＨまたはＯ（ＣＯ）Ｃ1−Ｃ4アルキルであり、そして
ｎは１である。
ただし、以下の条件の少なくとも１つを満たすことを条件とする。
ａ）Ｚ1またはＺ2はＯＨ，
ｂ）Ｒ2はＯＨ
【請求項３】
式（III）の化合物、またはその塩もしくは立体異性体：
【化３】
式中、
ＹはＯＲ1 またはＮＨＲ2 ，
Ｈａｌは塩素または臭素，
Ｒ1 はＨまたはＣ1 −Ｃ6 アルキル，
Ｒ2 はＨ，ＯＨ，
Ｚ1 およびＺ2 は各自ＨまたはＯＨであり、Ｚ1 またはＺ2 の１つだけがＯＨであることができ、そして
ｎは１である。
ただし、以下の条件の少なくとも１つを満たすことを条件とする。
ａ）Ｚ1 またはＺ2 はＯＨ，
ｂ）Ｒ2 はＯＨ
【公開番号】特開２０１０−１９５８０６（Ｐ２０１０−１９５８０６Ａ）
【公開日】平成２２年９月９日（２０１０．９．９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−８９１１８（Ｐ２０１０−８９１１８）
【出願日】平成２２年４月８日（２０１０．４．８）
【分割の表示】特願２００３−５６７８７７（Ｐ２００３−５６７８７７）の分割
【原出願日】平成１５年２月１１日（２００３．２．１１）
【出願人】（５０４２１０６１７）バイエル、ファーマシューテイカルズ、コーポレイション (11)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年９月９日（２０１０．９．９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年４月８日（２０１０．４．８）
【分割の表示】特願２００３−５６７８７７（Ｐ２００３−５６７８７７）の分割
【原出願日】平成１５年２月１１日（２００３．２．１１）
【出願人】（５０４２１０６１７）バイエル、ファーマシューテイカルズ、コーポレイション (11)
【Ｆターム（参考）】
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