ラクトフェリン組成物
【課題】９０℃以上の高温加熱処理及び１２０℃以上のレトルト殺菌処理においても広いｐＨ範囲で高い耐熱性を有するラクトフェリン組成物を提供する。また、ＬＦ類を失活させずに様々な飲食品や飼料、医薬に通常用いられる原材料等を混合してなるラクトフェリン組成物を提供する。
【解決手段】ラクトフェリン類とグリセリン脂肪酸エステル、カゼインナトリウム、レシチンの少なくとも１種の安定剤を含有させたラクトフェリン組成物にすると、ラクトフェリン類の耐熱性が格段に向上する。本発明においては、ラクトフェリン類を失活させることなく、ラクトフェリン組成物および当該組成物からなる飲食品や飼料、医薬を９０℃以上で加熱処理することが可能である。
【解決手段】ラクトフェリン類とグリセリン脂肪酸エステル、カゼインナトリウム、レシチンの少なくとも１種の安定剤を含有させたラクトフェリン組成物にすると、ラクトフェリン類の耐熱性が格段に向上する。本発明においては、ラクトフェリン類を失活させることなく、ラクトフェリン組成物および当該組成物からなる飲食品や飼料、医薬を９０℃以上で加熱処理することが可能である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ラクトフェリン類と安定剤を含有させることで、高い耐熱性を有するラクトフェリン組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ラクトフェリン（以下ＬＦという）は、鉄吸収促進作用、抗炎症作用、過酸化脂質生成抑制作用、免疫系の制御作用等様々な生理機能を有していることが報告されている。また、これらの生理機能を有効に利用するためにＬＦを含む様々な飲食品や飼料、医薬が開発されている。しかし、ＬＦは中性域において加熱に対して不安定であり、６２．５℃、３０分の加熱によりほぼ失活し、７０℃、１５分の加熱により完全に失活することが知られている（例えば、非特許文献１参照）。このことから、ＬＦを酸性領域において加熱処理する方法が一般的に行われている。この方法を用いれば天然のＬＦ は、加熱処理しても抗菌活性や鉄結合性等が殆ど変化しないことが報告されている（例えば、特許文献１参照）。また、イオン強度が低い状態でＬＦ を加熱した場合に、その生理活性を維持することも知られている。しかし、実際には、イオン強度が低い状態でＬＦ が利用されることは少ないため、イオン強度とｐＨを最適化して加熱安定性を付与する方法（例えば、特許文献２参照）や、ＬＦ に鉄を十分結合吸着させることで耐熱性を付与する方法（例えば、特許文献３参照）が開発された。
【０００３】
しかし、これらの方法でも、９０℃を超える殺菌、特にレトルト殺菌処理に対して、ラクトフェリン類（以下ＬＦ類という）の熱安定性は低く、下記に示す欠点を有していた。
（１）加熱耐性が十分でないため、９０℃以上の加熱殺菌ではＬＦ類が凝集・沈殿しやすい。
（２）特に、中性域（ｐＨ７程度）以上の環境下で加熱殺菌するとＬＦ類は失活しやすい。
従ってＬＦ類含有液を加熱処理する場合（特に９０℃以上）には、ＬＦ類が失活する可能性があり、レトルト殺菌処理等の超高温加熱処理を採用できないのが実状であり、ＬＦ類を失活させずに飲食品や飼料、医薬に配合する場合には制限があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特許第２６８８０９８号公報
【特許文献２】特開平４−８２６９号公報
【特許文献３】特開平６−２３９９００号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】ジェー・イー・フォードら（Ｆｏｒｄ， Ｊ． Ｅ． ｅｔ ａｌ）、「ザ・ジャーナル・オブ・ペディアトリクス（ Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ）、９０巻、１号、 ２９−３５ページ、 １９７７年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明はＬＦ類の持つ上記のような欠点を解決するべく、さらにＬＦ類の熱安定化について鋭意検討を重ねた結果、ＬＦ類と大豆多糖類やキサンタンガム等の安定剤を含有させたラクトフェリン組成物（以下ＬＦ組成物という）にすると、ＬＦ類の耐熱性が格段に向上することを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は酸性から中性、アルカリ性の広いｐＨ範囲で、９０℃以上の高温加熱処理及び１２０℃以上のレトルト殺菌処理においても高い耐熱性を有するＬＦ組成物を提供することを課題とする。また、本発明は、ＬＦ類を失活させずに、飲食品や飼料、医薬に通常用いられる原材料等を混合してなるＬＦ組成物や、様々な飲食品や飼料、医薬へ配合するためのＬＦ組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明はＬＦ類と安定剤を含有する高い耐熱性を有するＬＦ組成物に関する。本発明においては、ＬＦ類を失活させることなく、ＬＦ組成物を９０℃以上で加熱することが可能である。
【発明の効果】
【０００８】
本発明のＬＦ組成物は、酸性域から中性、アルカリ性域の幅広い範囲で加熱安定性が高く、飲食品、飼料及び医薬の製造に通常使用される高温加熱処理やレトルト殺菌処理が可能であり、粉末状であっても乾熱殺菌も可能である。従って、本発明のＬＦ組成物からなるＬＦ類を含有する液状、ゲル状、粉末状、顆粒状等様々な形態の飲食品や飼料、医薬を調製することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明のＬＦ組成物には、ウシ、山羊、羊、ヒト等の哺乳類の初乳、移行乳、常乳、末期乳、または、これらの乳の処理物である脱脂乳、乳清等からイオン交換クロマトグラフィー等により分離されたままのラクトフェリン、ラクトフェリンを塩酸、クエン酸等により脱鉄したアポラクトフェリン、ラクトフェリンを鉄、銅、亜鉛、マンガン、セレン等の金属で飽和した金属飽和ラクトフェリン（特許第２８８４０４５号公報、特許第３２２３９５８号公報）等を用いる。また、これらのＬＦ類 の２つ以上を任意の割合で配合した混合物であってもよく、その他の物質との混合物であることを妨げない。
【００１０】
本発明のＬＦ組成物を構成する安定剤に特に制限はないが、次の性質を有する成分を主成分とする安定剤がより望ましい。
（１）大豆多糖類等のように分子量が大きく、被膜性のある安定剤。
（２）キサンタンガム等のようにグルコース主鎖にマンノースとグルクロン酸が結合しているような、直鎖に対して側鎖の割合が大きい安定剤。
（３）ショ糖のヒドロキシル基に脂肪酸が反応してできるショ糖脂肪酸エステル等のように疎水基と親水基を持ち、多分子層吸着性を有する安定剤。
これらの性質を有する安定剤は、加熱時のＬＦ類の凝集・沈澱による失活を防ぎ、ＬＦ類の耐熱性を高める。
一方、本発明のＬＦ組成物に好ましくない安定剤としては次の性質を有するものがあげられる。
（１）ジェランガムのように直鎖状の構造をなす安定剤又はグアガムのように直鎖に対して側鎖の割合が大きくない安定剤。
これらの安定剤を使用すると加熱時のＬＦ類の耐熱性はそれほど向上しない。しかし、これらの安定剤を一部含む物はその限りでは無い。
【００１１】
したがって、本発明でＬＦ類と混合してＬＦ組成物を構成する安定剤としては、大豆多糖類、キサンタンガム、ローカストビーンガム、カラギナン、タマリンドガム、ショ糖脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、カゼインナトリウム、レシチン、ペクチン、カルボキシメチルセルロースが好ましく、これらの安定剤の少なくとも１種をＬＦ類と混合してＬＦ組成物を構成する。ここでいう安定剤とはＬＦ類の加熱安定性を高めるために使用される。また、これらの安定剤の中には乳化剤としての機能等、その他様々な機能を有している場合もあるが、全く問題なく使用できる。
【００１２】
また、本発明のＬＦ組成物中のＬＦ類と安定剤の含有量比に関しては、特に制限はないが、安定剤をＬＦ類に対して０．５〜１００（重量／重量）、好ましくは１〜４０（重量／重量）含有していることが好ましい。
【００１３】
本発明のＬＦ類と安定剤を混合してなるＬＦ組成物を調製する方法に特に制限はないが、例えば、溶液中で調製するには、ＬＦ類と安定剤を脱イオン水にそれぞれ懸濁あるいは溶解し、撹拌混合した後、飲食品や飼料、医薬の形態に調製して使用する。撹拌混合の条件としては、ＬＦ類と安定剤が十分に混合されればよく、必要に応じて４０〜８０℃程度に加熱しながら、ウルトラディスパーサー等を使用して撹拌混合することも可能である。また、このＬＦ組成物の溶液は、飲食品、飼料及び医薬に使用しやすいように、必要に応じて、ＵＦ膜等で濃縮したり、凍結乾燥等により乾燥して使用することができる。
【００１４】
本発明のＬＦ組成物は、酸性域から、中性、アルカリ性域の幅広い範囲で加熱安定性が高く、飲食品、飼料及び医薬の製造に通常使用される高温加熱処理やレトルト殺菌処理が可能であり、粉末状であっても乾熱殺菌も可能である。従って、本発明のＬＦ組成物からなる、ＬＦ類を含有する液状、ゲル状、粉末状、顆粒状等様々な形態の飲食品や飼料、医薬を調製することができる。
【００１５】
本発明のＬＦ組成物においては、塩酸やリン酸等の無機酸およびクエン酸や酢酸等の有機酸、あるいは苛性ソーダや重曹等のアルカリ剤を使用し、ｐＨを調整する。また、ＬＦ組成物を取り巻く環境が当該ＬＦ組成物の加熱安定性を維持するｐＨであれば、特にｐＨを調整することなく高温加熱処理やレトルト殺菌処理が可能であるが、ＬＦ組成物からなる飲食品や飼料、医薬が求められる品質に応じて、加熱殺菌条件とｐＨを選択することができる。
【００１６】
本発明のＬＦ組成物からなる飲食品や飼料、医薬とは、このＬＦ類と安定剤のみを含むＬＦ組成物からなる飲食品、飼料及び、医薬や、ＬＦ類と安定剤の他に糖類や脂質、フレーバー等、他の飲食品、飼料及び医薬に通常含まれる原材料等を含有するＬＦ組成物からなる飲食品、飼料及び医薬である。
【００１７】
ＬＦ類の熱安定性は低く、９０℃を超える殺菌、特にレトルト殺菌処理をするとＬＦ類は凝集・沈殿し、また、中性域（ｐＨ７程度）以上の環境下で加熱殺菌するとＬＦ類は失活しやすいという従来の欠点を、本発明のＬＦ組成物を使用することにより解消することができるという予測出来ない程の格別の効果があった。
以下に、実施例及び試験例を示して本発明を詳細に説明するが、これらは単に本発明の実施態様を例示するのみであり、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。
【００１８】
［試験例１］
鉄飽和ラクトフェリンを２０ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液）。安定剤として大豆多糖類０．４重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液）。Ａ液とＢ液を混合し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、５０℃、８０００ｒｐｍで３分間撹拌混合してＬＦ組成物を調製した。次いで、このＬＦ組成物を乳酸または水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨ１〜１０の１０試料に調整した。これをアンプル管に２ｍｌずつ分注し、９０℃、１００℃、１１０℃、１２０℃、１３０℃にて４分間加熱した。比較として安定剤を含まない鉄飽和ラクトフェリンのみの溶液を上記と同様の方法で、ｐＨを調整して１１０℃にて４分間加熱した。
加熱処理後の各試料の凝集・沈殿状態を目視により判定し、その後、以下に示したポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により、ＬＦ類のバンドパターンの解析を行った。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる解析は、これにより加熱処理後のＬＦ類の分解を確認するためである。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ：各試料１５μｌをサンプルバッファー１５μｌ（０．５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８） １．２５ｍｌ、グリセロール１．０ｍｌ、１０％ＳＤＳ ２．０ｍｌ、２−メルカプトエタノール０．５ｍｌ、０．１％ＢＰＢ ０．２５ｍｌ）にて希釈し、１００℃で５分間加熱した。その後各試料を１５μｌずつ１４％ポリアクリルアミドゲル（ＴＥＦＣＯ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ ｍｉｎｉ）にて電気泳動した。分子量マーカーとしてはＫａｌｅｉｄｏｓｃｏｐｅ Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄｓを用いた。
【００１９】
この試験の結果を表１に示した。表１から分かるようにＬＦ組成物を含有する溶液は、ｐＨ ２〜９において目視による凝集・沈殿を生じず、また、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりＬＦ類のバンドを確認することができた。従って、このＬＦ組成物は、酸性側で安定なだけでなく、中性及びアルカリ性側でも加熱安定性が極めて高いことが分かった。さらに、加熱時間を延長して、ＬＦ類が確認できるかを検査したところ、ｐＨ ２〜９では、１２０℃で１０分間加熱しても凝集・沈殿せず、また、ＬＦ類のバンドが確認できた。この試験結果からみて、このＬＦ組成物は、レトルト殺菌処理することが十分に可能であることが明らかとなった。一方、鉄飽和ラクトフェリンのみを含む溶液は、ｐＨ ２〜９においてＬＦ類のバンドを全く確認することができなかった。
【００２０】
【表１】
【００２１】
［試験例２］
ＬＦを１６ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液）。安定剤としてキサンタンガムを０．０８％（重量％）を脱イオン水に溶解した（Ｂ液）。Ａ液とＢ液を混合し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、５０℃、９５００ｒｐｍで３分間撹拌混合してＬＦ組成物を調製した。次いで、このＬＦ組成物を乳酸または水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨ１〜１０の１０試料に調整した。これをアンプル管に２ｍｌずつ分注し、９０℃、１００℃、１１０℃、１２０℃、１３０℃にて４分間加熱した。加熱処理後の各試料の凝集・沈殿状態を目視により判定し、その後、以下に示したポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により、ＬＦ類のバンドパターンの解析を行った。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる解析は、これにより加熱処理後のＬＦ類の分解を確認するためである。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ：各試料１５μｌをサンプルバッファー１５μｌ（０．５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８） １．２５ｍｌ、グリセロール１．０ｍｌ、１０％ＳＤＳ ２．０ｍｌ、２−メルカプトエタノール０．５ｍｌ、０．１％ＢＰＢ ０．２５ｍｌ）にて希釈し、１００℃で５分間加熱した。その後各試料を１５μｌずつ１４％ポリアクリルアミドゲル（ＴＥＦＣＯ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ ｍｉｎｉ）にて電気泳動した。分子量マーカーとしてはＫａｌｅｉｄｏｓｃｏｐｅ Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄｓを用いた。
【００２２】
この試験の結果を表２に示した。表２から分かるようにＬＦ組成物を含有する溶液は、ｐＨ ２〜９において目視による凝集・沈殿を生じず、また、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりＬＦ類のバンドを確認することができた。従って、このＬＦ組成物は、酸性側で安定なだけでなく、中性及びアルカリ性側でも加熱安定性が極めて高いことが分かった。さらに、加熱時間を延長して、ＬＦ類が確認できるかを検査したところ、ｐＨ ２〜９では、１３０℃で１０分間加熱しても凝集・沈殿せず、また、ＬＦ類のバンドが確認できた。この試験結果からみて、このＬＦ組成物は、レトルト殺菌処理することが十分に可能であることが明らかとなった。
【００２３】
【表２】
【００２４】
［試験例３］
塩酸で脱鉄したアポラクトフェリンを１０ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液）。安定剤としてショ糖脂肪酸エステル０．２重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液）。Ａ液とＢ液を混合し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、４０℃、８０００ｒｐｍで３分間撹拌混合してＬＦ組成物を調製した。次いで、このＬＦ組成物を乳酸または水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨ１〜１０の１０試料に調整した。これをアンプル管に２ｍｌずつ分注し、９０℃、１００℃、１１０℃、１２０℃、１３０℃にて４分間加熱した。
加熱処理後の各試料の凝集・沈殿状態を目視により判定し、その後、以下に示したポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により、ＬＦ類のバンドパターンの解析を行った。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる解析は、これにより加熱処理後のＬＦ類の分解を確認するためである。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ：各試料１５μｌをサンプルバッファー１５μｌ（０．５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８） １．２５ｍｌ、グリセロール１．０ｍｌ、１０％ＳＤＳ ２．０ｍｌ、２−メルカプトエタノール０．５ｍｌ、０．１％ＢＰＢ ０．２５ｍｌ）にて希釈し、１００℃で５分間加熱した。その後各試料を１５μｌずつ１４％ポリアクリルアミドゲル（ＴＥＦＣＯ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ ｍｉｎｉ）にて電気泳動した。分子量マーカーとしてはＫａｌｅｉｄｏｓｃｏｐｅ Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄｓを用いた。
【００２５】
この試験の結果を表３に示した。表３から分かるようにＬＦ組成物を含有する溶液は、ｐＨ ２〜９において目視による凝集・沈殿を生じず、また、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりＬＦ類のバンドを確認することができた。従って、このＬＦ組成物は、酸性側で安定なだけでなく、中性及びアルカリ性側でも加熱安定性が極めて高いことが分かった。さらに、加熱時間を延長して、ＬＦ類が確認できるかを検査したところ、ｐＨ ２〜９では、１２０℃で８分間加熱しても凝集・沈殿せず、また、ＬＦ類のバンドが確認できた。この試験結果からみて、このＬＦ組成物は、レトルト殺菌処理することが十分に可能であることが明らかとなった。
【００２６】
【表３】
【００２７】
［試験例４］
塩酸で脱鉄したアポラクトフェリンを１２ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液）。安定剤としてローカストビーンガム０．１５重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液）。Ａ液とＢ液を混合し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、４０℃、８０００ｒｐｍで４分間撹拌混合してＬＦ組成物を調製した。次いで、このＬＦ組成物を乳酸または水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨ １〜１０の１０試料に調整した。これをアンプル管に２ｍｌずつ分注し、９０℃、１００℃、１１０℃、１２０℃、１３０℃にて４分間加熱した。
加熱処理後の各試料の凝集・沈殿状態を目視により判定し、その後、以下に示したポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により、ＬＦ類のバンドパターンの解析を行った。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる解析は、これにより加熱処理後のＬＦ類の分解を確認するためである。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ：各試料１５μｌをサンプルバッファー１５μｌ（０．５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８） １．２５ｍｌ、グリセロール１．０ｍｌ、１０％ＳＤＳ ２．０ｍｌ、２−メルカプトエタノール０．５ｍｌ、０．１％ＢＰＢ ０．２５ｍｌ）にて希釈し、１００℃で５分間加熱した。その後各試料を１５μｌずつ１４％ポリアクリルアミドゲル（ＴＥＦＣＯ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ ｍｉｎｉ）にて電気泳動した。分子量マーカーとしてはＫａｌｅｉｄｏｓｃｏｐｅ Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄｓを用いた。
【００２８】
この試験の結果、ＬＦ組成物を含有する溶液は、ｐＨ３〜８において目視による凝集・沈殿を生じず、また、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりＬＦ類のバンドを確認することができた。従って、このＬＦ組成物は、酸性側で安定なだけでなく、中性及びアルカリ性側でも加熱安定性が極めて高いことが分かった。さらに、加熱時間を延長して、ＬＦ類が確認できるかを検査したところ、ｐＨ３〜８では、１２０℃で７分間加熱しても凝集・沈殿せず、また、ＬＦ類のバンドが確認できた。この試験結果からみて、このＬＦ組成物は、レトルト殺菌処理することが十分に可能であることが明らかとなった。
【００２９】
［試験例５］
鉄飽和ラクトフェリンを１８ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液）。安定剤としてカラギナン０．１５重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液）。Ａ液とＢ液を混合し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、４０℃、８０００ｒｐｍで３分間撹拌混合してＬＦ組成物を調製した。次いで、このＬＦ組成物を乳酸または水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨ１〜１０の１０試料に調整した。これをアンプル管に２ｍｌずつ分注し、９０℃、１００℃、１１０℃、１２０℃、１３０℃にて４分間加熱した。
加熱処理後の各試料の凝集・沈殿状態を目視により判定し、その後、以下に示したポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により、ＬＦ類のバンドパターンの解析を行った。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる解析は、これにより加熱処理後のＬＦ類の分解を確認するためである。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ：各試料１５μｌをサンプルバッファー１５μｌ（０．５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８） １．２５ｍｌ、グリセロール１．０ｍｌ、１０％ＳＤＳ ２．０ｍｌ、２−メルカプトエタノール０．５ｍｌ、０．１％ＢＰＢ ０．２５ｍｌ）にて希釈し、１００℃で５分間加熱した。その後各試料を１５μｌずつ１４％ポリアクリルアミドゲル（ＴＥＦＣＯ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ ｍｉｎｉ）にて電気泳動した。分子量マーカーとしてはＫａｌｅｉｄｏｓｃｏｐｅ Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄｓを用いた。
【００３０】
この試験の結果、ＬＦ組成物を含有する溶液は、ｐＨ４〜８において目視による凝集・沈殿を生じず、また、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりＬＦ類のバンドを確認することができた。従って、このＬＦ組成物は、酸性側で安定なだけでなく、中性及びアルカリ性側でも加熱安定性が極めて高いことが分かった。さらに、加熱時間を延長して、ＬＦ類が確認できるかを検査したところ、ｐＨ４〜８では、１２０℃で６分間加熱しても凝集・沈殿せず、また、ＬＦ類のバンドが確認できた。この試験結果からみて、このＬＦ組成物は、レトルト殺菌処理することが十分に可能であることが明らかとなった。
【００３１】
［試験例６］
ＬＦを２０ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液）。安定剤としてタマリンドガム０．１５重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液）。Ａ液とＢ液を混合し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、４０℃、８０００ｒｐｍで３分間撹拌混合してＬＦ組成物を調製した。次いで、このＬＦ組成物を乳酸または水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨ１〜１０の１０試料に調整した。これをアンプル管に２ｍｌずつ分注し、９０℃、１００℃、１１０℃、１２０℃、１３０℃にて４分間加熱した。
加熱処理後の各試料の凝集・沈殿状態を目視により判定し、その後、以下に示したポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により、ＬＦ類のバンドパターンの解析を行った。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる解析は、これにより加熱処理後のＬＦ類の分解を確認するためである。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ：各試料１５μｌをサンプルバッファー１５μｌ（０．５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８） １．２５ｍｌ、グリセロール１．０ｍｌ、１０％ＳＤＳ ２．０ｍｌ、２−メルカプトエタノール０．５ｍｌ、０．１％ＢＰＢ ０．２５ｍｌ）にて希釈し、１００℃で５分間加熱した。その後各試料を１５μｌずつ１４％ポリアクリルアミドゲル（ＴＥＦＣＯ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ ｍｉｎｉ）にて電気泳動した。分子量マーカーとしてはＫａｌｅｉｄｏｓｃｏｐｅ Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄｓを用いた。
【００３２】
この試験の結果、ＬＦ組成物を含有する溶液は、ｐＨ４〜７において目視による凝集・沈殿を生じず、また、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりＬＦ類のバンドを確認することができた。従って、このＬＦ組成物は、酸性側で安定なだけでなく、中性側でも加熱安定性が極めて高いことが分かった。さらに、加熱時間を延長して、ＬＦ類が確認できるかを検査したところ、ｐＨ４〜７では、１２０℃で５分間加熱しても凝集・沈殿せず、また、ＬＦ類のバンドが確認できた。この試験結果からみて、このＬＦ組成物は、レトルト殺菌処理することが十分に可能であることが明らかとなった。
【００３３】
［試験例７］
塩酸で脱鉄したアポラクトフェリンを１０ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液）。安定剤としてグリセリン脂肪酸エステル０．１５重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液）。Ａ液とＢ液を混合し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、４０℃、８０００ｒｐｍで３分間撹拌混合してＬＦ組成物を調製した。次いで、このＬＦ組成物を乳酸または水酸化ナトリウム溶液を用いて〜１０の１０試料に調整した。これをアンプル管に２ｍｌずつ分注し、９０℃、１００℃、１１０℃、１２０℃、１３０℃にて４分間加熱した。
加熱処理後の各試料の凝集・沈殿状態を目視により判定し、その後、以下に示したポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により、ＬＦ類のバンドパターンの解析を行った。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる解析は、これにより加熱処理後のＬＦ類の分解を確認するためである。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ：各試料１５μｌをサンプルバッファー１５μｌ（０．５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８） １．２５ｍｌ、グリセロール１．０ｍｌ、１０％ＳＤＳ ２．０ｍｌ、２−メルカプトエタノール０．５ｍｌ、０．１％ＢＰＢ ０．２５ｍｌ）にて希釈し、１００℃で５分間加熱した。その後各試料を１５μｌずつ１４％ポリアクリルアミドゲル（ＴＥＦＣＯ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ ｍｉｎｉ）にて電気泳動した。分子量マーカーとしてはＫａｌｅｉｄｏｓｃｏｐｅ Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄｓを用いた。
【００３４】
この試験の結果、ＬＦ組成物を含有する溶液は、ｐＨ３〜７において目視による凝集・沈殿を生じず、また、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりＬＦ類のバンドを確認することができた。従って、このＬＦ組成物は、酸性側で安定なだけでなく、中性側でも加熱安定性が極めて高いことが分かった。さらに、加熱時間を延長して、ＬＦ類が確認できるかを検査したところ、ｐＨ３〜７では、１２０℃で６分間加熱しても凝集・沈殿せず、また、ＬＦ類のバンドが確認できた。この試験結果からみて、このＬＦ組成物は、レトルト殺菌処理することが十分に可能であることが明らかとなった。
【００３５】
［試験例８］
鉄飽和ラクトフェリンを１０ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液）。安定剤としてカゼインナトリウム ０．１５重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液）。Ａ液とＢ液を混合し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、４０℃、９５００ｒｐｍで３分間撹拌混合してＬＦ組成物を調製した。次いで、このＬＦ組成物を乳酸または水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨ １〜１０の１０試料に調整した。これをアンプル管に２ｍｌずつ分注し、９０℃、１００℃、１１０℃、１２０℃、１３０℃にて４分間加熱した。
加熱処理後の各試料の凝集・沈殿状態を目視により判定し、その後、以下に示したポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により、ＬＦ類のバンドパターンの解析を行った。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる解析は、これにより加熱処理後のＬＦ類の分解を確認するためである。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ：各試料１５μｌをサンプルバッファー１５μｌ（０．５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８） １．２５ｍｌ、グリセロール１．０ｍｌ、１０％ＳＤＳ ２．０ｍｌ、２−メルカプトエタノール０．５ｍｌ、０．１％ＢＰＢ ０．２５ｍｌ）にて希釈し、１００℃で５分間加熱した。その後各試料を１５μｌずつ１４％ポリアクリルアミドゲル（ＴＥＦＣＯ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ ｍｉｎｉ）にて電気泳動した。分子量マーカーとしてはＫａｌｅｉｄｏｓｃｏｐｅ Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄｓを用いた。
【００３６】
この試験の結果、ＬＦ組成物を含有する溶液は、ｐＨ５〜９において目視による凝集・沈殿を生じず、また、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりＬＦ類のバンドを確認することができた。従って、このＬＦ組成物は、酸性側で安定なだけでなく、中性及びアルカリ性側でも加熱安定性が極めて高いことが分かった。さらに、加熱時間を延長して、ＬＦ類が確認できるかを検査したところ、ｐＨ５〜９では、１２０℃で５分間加熱しても凝集・沈殿せず、また、ＬＦ類のバンドが確認できた。この試験結果からみて、このＬＦ組成物は、レトルト殺菌処理することが十分に可能であることが明らかとなった。
【００３７】
［試験例９］
ＬＦを１６ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液）。安定剤としてレシチン０．２５重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液）。Ａ液とＢ液を混合し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、４０℃、８０００ｒｐｍで３分間撹拌混合してＬＦ組成物を調製した。次いで、このＬＦ組成物を乳酸または水酸化ナトリウム溶液を用いて〜１０の１０試料に調整した。これをアンプル管に２ｍｌずつ分注し、９０℃、１００℃、１１０℃、１２０℃、１３０℃にて４分間加熱した。
加熱処理後の各試料の凝集・沈殿状態を目視により判定し、その後、以下に示したポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により、ＬＦ類のバンドパターンの解析を行った。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる解析は、これにより加熱処理後のＬＦ類の分解を確認するためである。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ：各試料１５μｌをサンプルバッファー１５μｌ（０．５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８） １．２５ｍｌ、グリセロール１．０ｍｌ、１０％ＳＤＳ ２．０ｍｌ、２−メルカプトエタノール０．５ｍｌ、０．１％ＢＰＢ ０．２５ｍｌ）にて希釈し、１００℃で５分間加熱した。その後各試料を１５μｌずつ１４％ポリアクリルアミドゲル（ＴＥＦＣＯ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ ｍｉｎｉ）にて電気泳動した。分子量マーカーとしてはＫａｌｅｉｄｏｓｃｏｐｅ Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄｓを用いた。
【００３８】
この試験の結果、ＬＦ組成物を含有する溶液は、ｐＨ３〜８において目視による凝集・沈殿を生じず、また、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりＬＦ類のバンドを確認することができた。従って、このＬＦ組成物は、酸性側で安定なだけでなく、中性及びアルカリ性側でも加熱安定性が極めて高いことが分かった。さらに、加熱時間を延長して、ＬＦ類が確認できるかを検査したところ、ｐＨ３〜８では、１２０℃で６分間加熱しても凝集・沈殿せず、また、ＬＦ類のバンドが確認できた。この試験結果からみて、このＬＦ組成物は、レトルト殺菌処理することが十分に可能であることが明らかとなった。
【００３９】
［試験例１０］
鉄飽和ラクトフェリンを１５ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液）。安定剤としてペクチン０．６重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液）。Ａ液とＢ液を混合し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、４０℃、８０００ｒｐｍで３分間撹拌混合してＬＦ組成物を調製した。次いで、このＬＦ組成物を乳酸または水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨ １〜１０の１０試料に調整した。これをアンプル管に２ｍｌずつ分注し、９０℃、１００℃、１１０℃、１２０℃、１３０℃にて４分間加熱した。
加熱処理後の各試料の凝集・沈殿状態を目視により判定し、その後、以下に示したポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により、ＬＦ類のバンドパターンの解析を行った。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる解析は、これにより加熱処理後のＬＦ類の分解を確認するためである。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ：各試料１５μｌをサンプルバッファー１５μｌ（０．５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８） １．２５ｍｌ、グリセロール１．０ｍｌ、１０％ＳＤＳ ２．０ｍｌ、２−メルカプトエタノール０．５ｍｌ、０．１％ＢＰＢ ０．２５ｍｌ）にて希釈し、１００℃で５分間加熱した。その後各試料を１５μｌずつ１４％ポリアクリルアミドゲル（ＴＥＦＣＯ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ ｍｉｎｉ）にて電気泳動した。分子量マーカーとしてはＫａｌｅｉｄｏｓｃｏｐｅ Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄｓを用いた。
【００４０】
この試験の結果、ＬＦ組成物を含有する溶液は、ｐＨ３〜５において目視による凝集・沈殿を生じず、また、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりＬＦ類のバンドを確認することができた。従って、このＬＦ組成物は、酸性側で加熱安定性が極めて高いことが分かった。さらに、加熱時間を延長して、ＬＦ類が確認できるかを検査したところ、ｐＨ３〜５では、１２０℃で７分間加熱しても凝集・沈殿せず、また、ＬＦ類のバンドが確認できた。この試験結果からみて、このＬＦ組成物は、レトルト殺菌処理することが十分に可能であることが明らかとなった。
【００４１】
［試験例１１］
ＬＦを１０ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液）。安定剤としてカルボキシメチルセルロース０．１５重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液）。Ａ液とＢ液を混合し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、４０℃、８０００ｒｐｍで３分間撹拌混合してＬＦ組成物を調製した。次いで、このＬＦ組成物を乳酸または水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨ １〜１０の１０試料に調整した。これをアンプル管に２ｍｌずつ分注し、９０℃、１００℃、１１０℃、１２０℃、１３０℃にて４分間加熱した。
加熱処理後の各試料の凝集・沈殿状態を目視により判定し、その後、以下に示したポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により、ＬＦ類のバンドパターンの解析を行った。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる解析は、これにより加熱処理後のＬＦ類の分解を確認するためである。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ：各試料１５μｌをサンプルバッファー１５μｌ（０．５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８） １．２５ｍｌ、グリセロール１．０ｍｌ、１０％ＳＤＳ ２．０ｍｌ、２−メルカプトエタノール０．５ｍｌ、０．１％ＢＰＢ ０．２５ｍｌ）にて希釈し、１００℃で５分間加熱した。その後各試料を１５μｌずつ１４％ポリアクリルアミドゲル（ＴＥＦＣＯ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ ｍｉｎｉ）にて電気泳動した。分子量マーカーとしてはＫａｌｅｉｄｏｓｃｏｐｅ Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄｓを用いた。
【００４２】
この試験の結果、ＬＦ組成物を含有する溶液は、ｐＨ３〜７において目視による凝集・沈殿を生じず、また、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりＬＦ類のバンドを確認することができた。従って、このＬＦ組成物は、酸性側で安定なだけでなく、中性側でも加熱安定性が極めて高いことが分かった。さらに、加熱時間を延長して、ＬＦ類が確認できるかを検査したところ、ｐＨ３〜７では、１２０℃で６分間加熱しても凝集・沈殿せず、また、ＬＦ類のバンドが確認できた。この試験結果からみて、このＬＦ組成物は、レトルト殺菌処理することが十分に可能であることが明らかとなった。
【００４３】
［試験例１２］
試験例１で調製した試料を用いて、その抗原性を競合ＥＬＩＳＡ法により測定した。未加熱のＬＦ組成物の抗体との反応性に対する加熱処理したＬＦ組成物の抗体との反応性を百分率（％）で算出した。
【００４４】
その結果を表４に示した。表４から、未加熱のＬＦ組成物の抗体との反応性に対する加熱処理したＬＦ組成物の抗体との反応性は、１３０℃までであれば５０％以上を維持していることが判明した。従って、本発明におけるＬＦ組成物はｐＨ２〜９の範囲であれば、１３０℃という超高温加熱処理に対して安定である。
【００４５】
【表４】
【００４６】
［試験例１３］
試験例２と同様の方法で調製したＬＦ組成物（ＬＦ８ｍｇ％、キサンタンガム０．０４重量％）を含有する溶液をｐＨ ２〜９に調整し、１５０ｍｌずつレトルトパウチに充填し、密封した。対照としてＬＦのみを含む溶液をｐＨ２〜９に調整したものを１５０ｍｌずつレトルトパウチに充填し、密封した。これらの溶液を レトルト殺菌機（第１種圧力容器、ＴＹＰＥ： ＲＣＳ−４ＣＲＴＧＮ、日阪製作所製）により１２０℃、４分間加熱した。加熱後のそれぞれの試料を２５℃で保存して、経時的に凝集・沈殿の有無を目視により観察し、また、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によりＬＦ類のバンドパターンの解析を行った。
その結果、対照としたＬＦのみを含む溶液をｐＨ２〜９に調整したものは、１日目で凝集・沈澱が確認できたが、ＬＦ組成物を含有する溶液をｐＨ ２〜９に調整したものは、保存後１ヶ月経っても凝集・沈澱は認められなかった。また、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにてＬＦ類のバンドパターンを解析したところ、ＬＦ組成物を含む溶液をｐＨ ２〜９に調整したものは保存開始時から保存後１ヶ月においてもＬＦ類のバンドが確認でき、他の変化は認められなかった。この試験結果により、本発明によるＬＦ組成物はレトルト殺菌処理の場合に大変有効であることが判明した。
【００４７】
［試験例１４］
試験例２と同様の方法で調製したＬＦ組成物２００ｇ（ＬＦ８ｍｇ％、キサンタンガム０．０４重量％）に還元脱脂粉乳溶液（脱脂粉乳３重量％）８００ｇを混合し、ＬＦ組成物を含有する溶液（１）を調製した。対照としてＬＦ溶液（ＬＦ８ｍｇ％溶液）２００ｇに還元脱脂粉乳溶液（脱脂粉乳３重量％）８００ｇを混合した溶液（２）、及び還元脱脂粉乳溶液（脱脂粉乳３重量％）１０００ｇのみの溶液（３）を調製した。各溶液を１５０ｍｌずつレトルトパウチに充填し、密封した。これらの溶液をレトルト殺菌機 （第１種圧力容器、ＴＹＰＥ： ＲＣＳ−４ＣＲＴＧＮ、日阪製作所製）により１２０℃、２０分加熱した。その結果、溶液（１）、（３）においては凝集・沈殿は認められず、風味も良好であったが、（２）の溶液では凝集・沈殿が認められた。この試験結果により、本発明によるＬＦ組成物はレトルト殺菌処理の場合に大変有効であることが判明した。
【００４８】
［比較例１］
安定剤として大豆多糖類、キサンタンガム、ジェランガム及びグアガムを選択し、試験例１と同様の方法でＬＦ組成物を調製した。なお、各安定剤は大豆多糖類０．４重量％、キサンタンガム０．０４重量％、ジェランガム０．０５重量％及びグアガム０．０５重量％にて試験を行った。これらのＬＦ組成物をｐＨ６．５に調整し、１２０℃で４分間加熱した。加熱された各試料の凝集・沈澱状態を目視により判定し、また、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によりＬＦ類のバンドパターンの解析を行った。
【００４９】
試験結果を表５に示した。加熱前のＬＦ組成物はいずれも凝集・沈殿せず、透明であり、ＬＦ類のバンドも確認できた。加熱後は大豆多糖類及びキサンタンガム含有ＬＦ組成物は透明であり、また、ＬＦ類のバンドも確認できたが、ジェランガム及びグアガム含有ＬＦ組成物は、いずれも半透明か、あるいは凝集・沈殿し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにてＬＦ類のバンドも確認できなかった。
【００５０】
【表５】
【実施例１】
【００５１】
鉄飽和ラクトフェリンを２０ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液、３００ｇ）。安定剤として大豆多糖類０．８重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液、３００ｇ）。Ａ液とＢ液を混合し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、５０℃、９５００ｒｐｍで３分間撹拌混合して本発明のＬＦ組成物６００ｇを調製した。
【実施例２】
【００５２】
ＬＦを１６ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液、１０ｋｇ）。安定剤としてキサンタンガムを０．１６重量％で脱イオン水に溶解した（Ｂ液、１０ｋｇ）。Ａ液とＢ液を混合し、ＴＫホモミクサー（ＭＡＲＫ ＩＩ １６０型、特殊機化工業製）にて、３６００ｒｐｍで３０分間撹拌混合し、さらに分画分子量１０ｋＤａのＵＦ膜にて濃縮して、本発明のＬＦ組成物１０ｋｇを調製した。
【実施例３】
【００５３】
塩酸で脱鉄したアポラクトフェリンを１０ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液、１０００ｋｇ）。安定剤としてショ糖脂肪酸エステル０．４重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液、１０００ｋｇ）。Ａ液とＢ液を混合し、ＴＫホモミクサー（ＭＡＲＫ ＩＩ ２５００型、特殊機化工業製）にて、４０℃、３６００ｒｐｍで４０分間撹拌混合し、さらに凍結乾燥して本発明のＬＦ組成物３．９ｋｇを調製した。
【実施例４】
【００５４】
鉄飽和ラクトフェリンを２０ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液、５００ｇ）。安定剤として大豆多糖類０．４重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液、５００ｇ）。Ａ液とＢ液を混合し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、４０℃、９５００ｒｐｍで３分間撹拌混合した。その後、上記の溶液に、ソルビトール８０ｇ、酸味料４ｇ、香料４ｇ、ペクチン１０ｇ、乳清タンパク質濃縮物１０ｇ、乳酸カルシウム２ｇ、水８９０ｇを添加して、撹拌混合し、本発明のＬＦ組成物を調製した。２００ｍｌのチアパックに充填し、８５℃、２０分間殺菌後、密栓し、本発明のＬＦ組成物からなるゲル状食品１０袋を調製した。調製したゲル状食品は、すべて沈殿等は認められず、風味に異常は感じられなかった。
【実施例５】
【００５５】
鉄飽和ラクトフェリンを１００ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液、２００ｇ）。安定剤として大豆多糖類４重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液、２００ｇ）。マルチトール１００ｇ、還元水飴２０ｇ、酸味料２ｇ、香料２ｇ、前記Ａ液２００ｇ、前記Ｂ液２００ｇ、及び水４７６ｇを混合し、本発明のＬＦ組成物を調製した。このＬＦ組成物を５０ｍｌのガラス瓶に充填し、９０℃、１５分間殺菌後、密栓し、本発明ＬＦ組成物を含有する飲料２０本を調製した。調製した飲料は、すべて沈殿は認められず、風味に異常は感じられなかった。
【実施例６】
【００５６】
実施例２で調製したＬＦ組成物０．２ｋｇ（ラクトフェリン８ｍｇ％、キサンタンガム０．０８重量％）に大豆粕１２ｋｇ、脱脂粉乳１４ｋｇ、大豆油４ｋｇ、コーン油２ｋｇ、パーム油２８ｋｇ、トウモロコシ澱粉１５ｋｇ、小麦粉９ｋｇ、ふすま２ｋｇ、ビタミン混合物９ｋｇ、セルロース２．８ｋｇ、ミネラル混合物２ｋｇを配合し、１２０℃、４分間殺菌して、イヌ飼育用飼料１００ｋｇを調製した。
【実施例７】
【００５７】
実施例３で調製したＬＦ組成物３ｋｇ（アポラクトフェリン５ｍｇ％、ショ糖脂肪酸エステル０．２重量％）に、カゼイン５ｋｇ、大豆タンパク質５ｋｇ、魚油１ｋｇ、シソ油３ｋｇ、デキストリン１９ｋｇ、ミネラル混合物６ｋｇ、ビタミン混合物１．９５ｋｇ、乳化剤２ｋｇ、安定剤４ｋｇ、香料０．０５ｋｇを配合し、２００ｍｌのレトルトパウチに充填し、レトルト殺菌機 （第１種圧力容器、ＴＹＰＥ： ＲＣＳ−４ＣＲＴＧＮ、日阪製作所製）で１２１℃、２０分間殺菌して、経腸栄養剤５０ｋｇを調製した。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ラクトフェリン類と安定剤を含有させることで、高い耐熱性を有するラクトフェリン組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ラクトフェリン（以下ＬＦという）は、鉄吸収促進作用、抗炎症作用、過酸化脂質生成抑制作用、免疫系の制御作用等様々な生理機能を有していることが報告されている。また、これらの生理機能を有効に利用するためにＬＦを含む様々な飲食品や飼料、医薬が開発されている。しかし、ＬＦは中性域において加熱に対して不安定であり、６２．５℃、３０分の加熱によりほぼ失活し、７０℃、１５分の加熱により完全に失活することが知られている（例えば、非特許文献１参照）。このことから、ＬＦを酸性領域において加熱処理する方法が一般的に行われている。この方法を用いれば天然のＬＦ は、加熱処理しても抗菌活性や鉄結合性等が殆ど変化しないことが報告されている（例えば、特許文献１参照）。また、イオン強度が低い状態でＬＦ を加熱した場合に、その生理活性を維持することも知られている。しかし、実際には、イオン強度が低い状態でＬＦ が利用されることは少ないため、イオン強度とｐＨを最適化して加熱安定性を付与する方法（例えば、特許文献２参照）や、ＬＦ に鉄を十分結合吸着させることで耐熱性を付与する方法（例えば、特許文献３参照）が開発された。
【０００３】
しかし、これらの方法でも、９０℃を超える殺菌、特にレトルト殺菌処理に対して、ラクトフェリン類（以下ＬＦ類という）の熱安定性は低く、下記に示す欠点を有していた。
（１）加熱耐性が十分でないため、９０℃以上の加熱殺菌ではＬＦ類が凝集・沈殿しやすい。
（２）特に、中性域（ｐＨ７程度）以上の環境下で加熱殺菌するとＬＦ類は失活しやすい。
従ってＬＦ類含有液を加熱処理する場合（特に９０℃以上）には、ＬＦ類が失活する可能性があり、レトルト殺菌処理等の超高温加熱処理を採用できないのが実状であり、ＬＦ類を失活させずに飲食品や飼料、医薬に配合する場合には制限があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特許第２６８８０９８号公報
【特許文献２】特開平４−８２６９号公報
【特許文献３】特開平６−２３９９００号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】ジェー・イー・フォードら（Ｆｏｒｄ， Ｊ． Ｅ． ｅｔ ａｌ）、「ザ・ジャーナル・オブ・ペディアトリクス（ Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ）、９０巻、１号、 ２９−３５ページ、 １９７７年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明はＬＦ類の持つ上記のような欠点を解決するべく、さらにＬＦ類の熱安定化について鋭意検討を重ねた結果、ＬＦ類と大豆多糖類やキサンタンガム等の安定剤を含有させたラクトフェリン組成物（以下ＬＦ組成物という）にすると、ＬＦ類の耐熱性が格段に向上することを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は酸性から中性、アルカリ性の広いｐＨ範囲で、９０℃以上の高温加熱処理及び１２０℃以上のレトルト殺菌処理においても高い耐熱性を有するＬＦ組成物を提供することを課題とする。また、本発明は、ＬＦ類を失活させずに、飲食品や飼料、医薬に通常用いられる原材料等を混合してなるＬＦ組成物や、様々な飲食品や飼料、医薬へ配合するためのＬＦ組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明はＬＦ類と安定剤を含有する高い耐熱性を有するＬＦ組成物に関する。本発明においては、ＬＦ類を失活させることなく、ＬＦ組成物を９０℃以上で加熱することが可能である。
【発明の効果】
【０００８】
本発明のＬＦ組成物は、酸性域から中性、アルカリ性域の幅広い範囲で加熱安定性が高く、飲食品、飼料及び医薬の製造に通常使用される高温加熱処理やレトルト殺菌処理が可能であり、粉末状であっても乾熱殺菌も可能である。従って、本発明のＬＦ組成物からなるＬＦ類を含有する液状、ゲル状、粉末状、顆粒状等様々な形態の飲食品や飼料、医薬を調製することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明のＬＦ組成物には、ウシ、山羊、羊、ヒト等の哺乳類の初乳、移行乳、常乳、末期乳、または、これらの乳の処理物である脱脂乳、乳清等からイオン交換クロマトグラフィー等により分離されたままのラクトフェリン、ラクトフェリンを塩酸、クエン酸等により脱鉄したアポラクトフェリン、ラクトフェリンを鉄、銅、亜鉛、マンガン、セレン等の金属で飽和した金属飽和ラクトフェリン（特許第２８８４０４５号公報、特許第３２２３９５８号公報）等を用いる。また、これらのＬＦ類 の２つ以上を任意の割合で配合した混合物であってもよく、その他の物質との混合物であることを妨げない。
【００１０】
本発明のＬＦ組成物を構成する安定剤に特に制限はないが、次の性質を有する成分を主成分とする安定剤がより望ましい。
（１）大豆多糖類等のように分子量が大きく、被膜性のある安定剤。
（２）キサンタンガム等のようにグルコース主鎖にマンノースとグルクロン酸が結合しているような、直鎖に対して側鎖の割合が大きい安定剤。
（３）ショ糖のヒドロキシル基に脂肪酸が反応してできるショ糖脂肪酸エステル等のように疎水基と親水基を持ち、多分子層吸着性を有する安定剤。
これらの性質を有する安定剤は、加熱時のＬＦ類の凝集・沈澱による失活を防ぎ、ＬＦ類の耐熱性を高める。
一方、本発明のＬＦ組成物に好ましくない安定剤としては次の性質を有するものがあげられる。
（１）ジェランガムのように直鎖状の構造をなす安定剤又はグアガムのように直鎖に対して側鎖の割合が大きくない安定剤。
これらの安定剤を使用すると加熱時のＬＦ類の耐熱性はそれほど向上しない。しかし、これらの安定剤を一部含む物はその限りでは無い。
【００１１】
したがって、本発明でＬＦ類と混合してＬＦ組成物を構成する安定剤としては、大豆多糖類、キサンタンガム、ローカストビーンガム、カラギナン、タマリンドガム、ショ糖脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、カゼインナトリウム、レシチン、ペクチン、カルボキシメチルセルロースが好ましく、これらの安定剤の少なくとも１種をＬＦ類と混合してＬＦ組成物を構成する。ここでいう安定剤とはＬＦ類の加熱安定性を高めるために使用される。また、これらの安定剤の中には乳化剤としての機能等、その他様々な機能を有している場合もあるが、全く問題なく使用できる。
【００１２】
また、本発明のＬＦ組成物中のＬＦ類と安定剤の含有量比に関しては、特に制限はないが、安定剤をＬＦ類に対して０．５〜１００（重量／重量）、好ましくは１〜４０（重量／重量）含有していることが好ましい。
【００１３】
本発明のＬＦ類と安定剤を混合してなるＬＦ組成物を調製する方法に特に制限はないが、例えば、溶液中で調製するには、ＬＦ類と安定剤を脱イオン水にそれぞれ懸濁あるいは溶解し、撹拌混合した後、飲食品や飼料、医薬の形態に調製して使用する。撹拌混合の条件としては、ＬＦ類と安定剤が十分に混合されればよく、必要に応じて４０〜８０℃程度に加熱しながら、ウルトラディスパーサー等を使用して撹拌混合することも可能である。また、このＬＦ組成物の溶液は、飲食品、飼料及び医薬に使用しやすいように、必要に応じて、ＵＦ膜等で濃縮したり、凍結乾燥等により乾燥して使用することができる。
【００１４】
本発明のＬＦ組成物は、酸性域から、中性、アルカリ性域の幅広い範囲で加熱安定性が高く、飲食品、飼料及び医薬の製造に通常使用される高温加熱処理やレトルト殺菌処理が可能であり、粉末状であっても乾熱殺菌も可能である。従って、本発明のＬＦ組成物からなる、ＬＦ類を含有する液状、ゲル状、粉末状、顆粒状等様々な形態の飲食品や飼料、医薬を調製することができる。
【００１５】
本発明のＬＦ組成物においては、塩酸やリン酸等の無機酸およびクエン酸や酢酸等の有機酸、あるいは苛性ソーダや重曹等のアルカリ剤を使用し、ｐＨを調整する。また、ＬＦ組成物を取り巻く環境が当該ＬＦ組成物の加熱安定性を維持するｐＨであれば、特にｐＨを調整することなく高温加熱処理やレトルト殺菌処理が可能であるが、ＬＦ組成物からなる飲食品や飼料、医薬が求められる品質に応じて、加熱殺菌条件とｐＨを選択することができる。
【００１６】
本発明のＬＦ組成物からなる飲食品や飼料、医薬とは、このＬＦ類と安定剤のみを含むＬＦ組成物からなる飲食品、飼料及び、医薬や、ＬＦ類と安定剤の他に糖類や脂質、フレーバー等、他の飲食品、飼料及び医薬に通常含まれる原材料等を含有するＬＦ組成物からなる飲食品、飼料及び医薬である。
【００１７】
ＬＦ類の熱安定性は低く、９０℃を超える殺菌、特にレトルト殺菌処理をするとＬＦ類は凝集・沈殿し、また、中性域（ｐＨ７程度）以上の環境下で加熱殺菌するとＬＦ類は失活しやすいという従来の欠点を、本発明のＬＦ組成物を使用することにより解消することができるという予測出来ない程の格別の効果があった。
以下に、実施例及び試験例を示して本発明を詳細に説明するが、これらは単に本発明の実施態様を例示するのみであり、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。
【００１８】
［試験例１］
鉄飽和ラクトフェリンを２０ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液）。安定剤として大豆多糖類０．４重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液）。Ａ液とＢ液を混合し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、５０℃、８０００ｒｐｍで３分間撹拌混合してＬＦ組成物を調製した。次いで、このＬＦ組成物を乳酸または水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨ１〜１０の１０試料に調整した。これをアンプル管に２ｍｌずつ分注し、９０℃、１００℃、１１０℃、１２０℃、１３０℃にて４分間加熱した。比較として安定剤を含まない鉄飽和ラクトフェリンのみの溶液を上記と同様の方法で、ｐＨを調整して１１０℃にて４分間加熱した。
加熱処理後の各試料の凝集・沈殿状態を目視により判定し、その後、以下に示したポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により、ＬＦ類のバンドパターンの解析を行った。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる解析は、これにより加熱処理後のＬＦ類の分解を確認するためである。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ：各試料１５μｌをサンプルバッファー１５μｌ（０．５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８） １．２５ｍｌ、グリセロール１．０ｍｌ、１０％ＳＤＳ ２．０ｍｌ、２−メルカプトエタノール０．５ｍｌ、０．１％ＢＰＢ ０．２５ｍｌ）にて希釈し、１００℃で５分間加熱した。その後各試料を１５μｌずつ１４％ポリアクリルアミドゲル（ＴＥＦＣＯ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ ｍｉｎｉ）にて電気泳動した。分子量マーカーとしてはＫａｌｅｉｄｏｓｃｏｐｅ Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄｓを用いた。
【００１９】
この試験の結果を表１に示した。表１から分かるようにＬＦ組成物を含有する溶液は、ｐＨ ２〜９において目視による凝集・沈殿を生じず、また、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりＬＦ類のバンドを確認することができた。従って、このＬＦ組成物は、酸性側で安定なだけでなく、中性及びアルカリ性側でも加熱安定性が極めて高いことが分かった。さらに、加熱時間を延長して、ＬＦ類が確認できるかを検査したところ、ｐＨ ２〜９では、１２０℃で１０分間加熱しても凝集・沈殿せず、また、ＬＦ類のバンドが確認できた。この試験結果からみて、このＬＦ組成物は、レトルト殺菌処理することが十分に可能であることが明らかとなった。一方、鉄飽和ラクトフェリンのみを含む溶液は、ｐＨ ２〜９においてＬＦ類のバンドを全く確認することができなかった。
【００２０】
【表１】
【００２１】
［試験例２］
ＬＦを１６ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液）。安定剤としてキサンタンガムを０．０８％（重量％）を脱イオン水に溶解した（Ｂ液）。Ａ液とＢ液を混合し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、５０℃、９５００ｒｐｍで３分間撹拌混合してＬＦ組成物を調製した。次いで、このＬＦ組成物を乳酸または水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨ１〜１０の１０試料に調整した。これをアンプル管に２ｍｌずつ分注し、９０℃、１００℃、１１０℃、１２０℃、１３０℃にて４分間加熱した。加熱処理後の各試料の凝集・沈殿状態を目視により判定し、その後、以下に示したポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により、ＬＦ類のバンドパターンの解析を行った。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる解析は、これにより加熱処理後のＬＦ類の分解を確認するためである。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ：各試料１５μｌをサンプルバッファー１５μｌ（０．５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８） １．２５ｍｌ、グリセロール１．０ｍｌ、１０％ＳＤＳ ２．０ｍｌ、２−メルカプトエタノール０．５ｍｌ、０．１％ＢＰＢ ０．２５ｍｌ）にて希釈し、１００℃で５分間加熱した。その後各試料を１５μｌずつ１４％ポリアクリルアミドゲル（ＴＥＦＣＯ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ ｍｉｎｉ）にて電気泳動した。分子量マーカーとしてはＫａｌｅｉｄｏｓｃｏｐｅ Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄｓを用いた。
【００２２】
この試験の結果を表２に示した。表２から分かるようにＬＦ組成物を含有する溶液は、ｐＨ ２〜９において目視による凝集・沈殿を生じず、また、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりＬＦ類のバンドを確認することができた。従って、このＬＦ組成物は、酸性側で安定なだけでなく、中性及びアルカリ性側でも加熱安定性が極めて高いことが分かった。さらに、加熱時間を延長して、ＬＦ類が確認できるかを検査したところ、ｐＨ ２〜９では、１３０℃で１０分間加熱しても凝集・沈殿せず、また、ＬＦ類のバンドが確認できた。この試験結果からみて、このＬＦ組成物は、レトルト殺菌処理することが十分に可能であることが明らかとなった。
【００２３】
【表２】
【００２４】
［試験例３］
塩酸で脱鉄したアポラクトフェリンを１０ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液）。安定剤としてショ糖脂肪酸エステル０．２重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液）。Ａ液とＢ液を混合し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、４０℃、８０００ｒｐｍで３分間撹拌混合してＬＦ組成物を調製した。次いで、このＬＦ組成物を乳酸または水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨ１〜１０の１０試料に調整した。これをアンプル管に２ｍｌずつ分注し、９０℃、１００℃、１１０℃、１２０℃、１３０℃にて４分間加熱した。
加熱処理後の各試料の凝集・沈殿状態を目視により判定し、その後、以下に示したポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により、ＬＦ類のバンドパターンの解析を行った。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる解析は、これにより加熱処理後のＬＦ類の分解を確認するためである。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ：各試料１５μｌをサンプルバッファー１５μｌ（０．５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８） １．２５ｍｌ、グリセロール１．０ｍｌ、１０％ＳＤＳ ２．０ｍｌ、２−メルカプトエタノール０．５ｍｌ、０．１％ＢＰＢ ０．２５ｍｌ）にて希釈し、１００℃で５分間加熱した。その後各試料を１５μｌずつ１４％ポリアクリルアミドゲル（ＴＥＦＣＯ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ ｍｉｎｉ）にて電気泳動した。分子量マーカーとしてはＫａｌｅｉｄｏｓｃｏｐｅ Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄｓを用いた。
【００２５】
この試験の結果を表３に示した。表３から分かるようにＬＦ組成物を含有する溶液は、ｐＨ ２〜９において目視による凝集・沈殿を生じず、また、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりＬＦ類のバンドを確認することができた。従って、このＬＦ組成物は、酸性側で安定なだけでなく、中性及びアルカリ性側でも加熱安定性が極めて高いことが分かった。さらに、加熱時間を延長して、ＬＦ類が確認できるかを検査したところ、ｐＨ ２〜９では、１２０℃で８分間加熱しても凝集・沈殿せず、また、ＬＦ類のバンドが確認できた。この試験結果からみて、このＬＦ組成物は、レトルト殺菌処理することが十分に可能であることが明らかとなった。
【００２６】
【表３】
【００２７】
［試験例４］
塩酸で脱鉄したアポラクトフェリンを１２ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液）。安定剤としてローカストビーンガム０．１５重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液）。Ａ液とＢ液を混合し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、４０℃、８０００ｒｐｍで４分間撹拌混合してＬＦ組成物を調製した。次いで、このＬＦ組成物を乳酸または水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨ １〜１０の１０試料に調整した。これをアンプル管に２ｍｌずつ分注し、９０℃、１００℃、１１０℃、１２０℃、１３０℃にて４分間加熱した。
加熱処理後の各試料の凝集・沈殿状態を目視により判定し、その後、以下に示したポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により、ＬＦ類のバンドパターンの解析を行った。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる解析は、これにより加熱処理後のＬＦ類の分解を確認するためである。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ：各試料１５μｌをサンプルバッファー１５μｌ（０．５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８） １．２５ｍｌ、グリセロール１．０ｍｌ、１０％ＳＤＳ ２．０ｍｌ、２−メルカプトエタノール０．５ｍｌ、０．１％ＢＰＢ ０．２５ｍｌ）にて希釈し、１００℃で５分間加熱した。その後各試料を１５μｌずつ１４％ポリアクリルアミドゲル（ＴＥＦＣＯ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ ｍｉｎｉ）にて電気泳動した。分子量マーカーとしてはＫａｌｅｉｄｏｓｃｏｐｅ Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄｓを用いた。
【００２８】
この試験の結果、ＬＦ組成物を含有する溶液は、ｐＨ３〜８において目視による凝集・沈殿を生じず、また、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりＬＦ類のバンドを確認することができた。従って、このＬＦ組成物は、酸性側で安定なだけでなく、中性及びアルカリ性側でも加熱安定性が極めて高いことが分かった。さらに、加熱時間を延長して、ＬＦ類が確認できるかを検査したところ、ｐＨ３〜８では、１２０℃で７分間加熱しても凝集・沈殿せず、また、ＬＦ類のバンドが確認できた。この試験結果からみて、このＬＦ組成物は、レトルト殺菌処理することが十分に可能であることが明らかとなった。
【００２９】
［試験例５］
鉄飽和ラクトフェリンを１８ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液）。安定剤としてカラギナン０．１５重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液）。Ａ液とＢ液を混合し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、４０℃、８０００ｒｐｍで３分間撹拌混合してＬＦ組成物を調製した。次いで、このＬＦ組成物を乳酸または水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨ１〜１０の１０試料に調整した。これをアンプル管に２ｍｌずつ分注し、９０℃、１００℃、１１０℃、１２０℃、１３０℃にて４分間加熱した。
加熱処理後の各試料の凝集・沈殿状態を目視により判定し、その後、以下に示したポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により、ＬＦ類のバンドパターンの解析を行った。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる解析は、これにより加熱処理後のＬＦ類の分解を確認するためである。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ：各試料１５μｌをサンプルバッファー１５μｌ（０．５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８） １．２５ｍｌ、グリセロール１．０ｍｌ、１０％ＳＤＳ ２．０ｍｌ、２−メルカプトエタノール０．５ｍｌ、０．１％ＢＰＢ ０．２５ｍｌ）にて希釈し、１００℃で５分間加熱した。その後各試料を１５μｌずつ１４％ポリアクリルアミドゲル（ＴＥＦＣＯ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ ｍｉｎｉ）にて電気泳動した。分子量マーカーとしてはＫａｌｅｉｄｏｓｃｏｐｅ Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄｓを用いた。
【００３０】
この試験の結果、ＬＦ組成物を含有する溶液は、ｐＨ４〜８において目視による凝集・沈殿を生じず、また、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりＬＦ類のバンドを確認することができた。従って、このＬＦ組成物は、酸性側で安定なだけでなく、中性及びアルカリ性側でも加熱安定性が極めて高いことが分かった。さらに、加熱時間を延長して、ＬＦ類が確認できるかを検査したところ、ｐＨ４〜８では、１２０℃で６分間加熱しても凝集・沈殿せず、また、ＬＦ類のバンドが確認できた。この試験結果からみて、このＬＦ組成物は、レトルト殺菌処理することが十分に可能であることが明らかとなった。
【００３１】
［試験例６］
ＬＦを２０ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液）。安定剤としてタマリンドガム０．１５重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液）。Ａ液とＢ液を混合し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、４０℃、８０００ｒｐｍで３分間撹拌混合してＬＦ組成物を調製した。次いで、このＬＦ組成物を乳酸または水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨ１〜１０の１０試料に調整した。これをアンプル管に２ｍｌずつ分注し、９０℃、１００℃、１１０℃、１２０℃、１３０℃にて４分間加熱した。
加熱処理後の各試料の凝集・沈殿状態を目視により判定し、その後、以下に示したポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により、ＬＦ類のバンドパターンの解析を行った。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる解析は、これにより加熱処理後のＬＦ類の分解を確認するためである。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ：各試料１５μｌをサンプルバッファー１５μｌ（０．５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８） １．２５ｍｌ、グリセロール１．０ｍｌ、１０％ＳＤＳ ２．０ｍｌ、２−メルカプトエタノール０．５ｍｌ、０．１％ＢＰＢ ０．２５ｍｌ）にて希釈し、１００℃で５分間加熱した。その後各試料を１５μｌずつ１４％ポリアクリルアミドゲル（ＴＥＦＣＯ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ ｍｉｎｉ）にて電気泳動した。分子量マーカーとしてはＫａｌｅｉｄｏｓｃｏｐｅ Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄｓを用いた。
【００３２】
この試験の結果、ＬＦ組成物を含有する溶液は、ｐＨ４〜７において目視による凝集・沈殿を生じず、また、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりＬＦ類のバンドを確認することができた。従って、このＬＦ組成物は、酸性側で安定なだけでなく、中性側でも加熱安定性が極めて高いことが分かった。さらに、加熱時間を延長して、ＬＦ類が確認できるかを検査したところ、ｐＨ４〜７では、１２０℃で５分間加熱しても凝集・沈殿せず、また、ＬＦ類のバンドが確認できた。この試験結果からみて、このＬＦ組成物は、レトルト殺菌処理することが十分に可能であることが明らかとなった。
【００３３】
［試験例７］
塩酸で脱鉄したアポラクトフェリンを１０ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液）。安定剤としてグリセリン脂肪酸エステル０．１５重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液）。Ａ液とＢ液を混合し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、４０℃、８０００ｒｐｍで３分間撹拌混合してＬＦ組成物を調製した。次いで、このＬＦ組成物を乳酸または水酸化ナトリウム溶液を用いて〜１０の１０試料に調整した。これをアンプル管に２ｍｌずつ分注し、９０℃、１００℃、１１０℃、１２０℃、１３０℃にて４分間加熱した。
加熱処理後の各試料の凝集・沈殿状態を目視により判定し、その後、以下に示したポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により、ＬＦ類のバンドパターンの解析を行った。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる解析は、これにより加熱処理後のＬＦ類の分解を確認するためである。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ：各試料１５μｌをサンプルバッファー１５μｌ（０．５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８） １．２５ｍｌ、グリセロール１．０ｍｌ、１０％ＳＤＳ ２．０ｍｌ、２−メルカプトエタノール０．５ｍｌ、０．１％ＢＰＢ ０．２５ｍｌ）にて希釈し、１００℃で５分間加熱した。その後各試料を１５μｌずつ１４％ポリアクリルアミドゲル（ＴＥＦＣＯ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ ｍｉｎｉ）にて電気泳動した。分子量マーカーとしてはＫａｌｅｉｄｏｓｃｏｐｅ Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄｓを用いた。
【００３４】
この試験の結果、ＬＦ組成物を含有する溶液は、ｐＨ３〜７において目視による凝集・沈殿を生じず、また、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりＬＦ類のバンドを確認することができた。従って、このＬＦ組成物は、酸性側で安定なだけでなく、中性側でも加熱安定性が極めて高いことが分かった。さらに、加熱時間を延長して、ＬＦ類が確認できるかを検査したところ、ｐＨ３〜７では、１２０℃で６分間加熱しても凝集・沈殿せず、また、ＬＦ類のバンドが確認できた。この試験結果からみて、このＬＦ組成物は、レトルト殺菌処理することが十分に可能であることが明らかとなった。
【００３５】
［試験例８］
鉄飽和ラクトフェリンを１０ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液）。安定剤としてカゼインナトリウム ０．１５重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液）。Ａ液とＢ液を混合し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、４０℃、９５００ｒｐｍで３分間撹拌混合してＬＦ組成物を調製した。次いで、このＬＦ組成物を乳酸または水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨ １〜１０の１０試料に調整した。これをアンプル管に２ｍｌずつ分注し、９０℃、１００℃、１１０℃、１２０℃、１３０℃にて４分間加熱した。
加熱処理後の各試料の凝集・沈殿状態を目視により判定し、その後、以下に示したポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により、ＬＦ類のバンドパターンの解析を行った。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる解析は、これにより加熱処理後のＬＦ類の分解を確認するためである。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ：各試料１５μｌをサンプルバッファー１５μｌ（０．５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８） １．２５ｍｌ、グリセロール１．０ｍｌ、１０％ＳＤＳ ２．０ｍｌ、２−メルカプトエタノール０．５ｍｌ、０．１％ＢＰＢ ０．２５ｍｌ）にて希釈し、１００℃で５分間加熱した。その後各試料を１５μｌずつ１４％ポリアクリルアミドゲル（ＴＥＦＣＯ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ ｍｉｎｉ）にて電気泳動した。分子量マーカーとしてはＫａｌｅｉｄｏｓｃｏｐｅ Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄｓを用いた。
【００３６】
この試験の結果、ＬＦ組成物を含有する溶液は、ｐＨ５〜９において目視による凝集・沈殿を生じず、また、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりＬＦ類のバンドを確認することができた。従って、このＬＦ組成物は、酸性側で安定なだけでなく、中性及びアルカリ性側でも加熱安定性が極めて高いことが分かった。さらに、加熱時間を延長して、ＬＦ類が確認できるかを検査したところ、ｐＨ５〜９では、１２０℃で５分間加熱しても凝集・沈殿せず、また、ＬＦ類のバンドが確認できた。この試験結果からみて、このＬＦ組成物は、レトルト殺菌処理することが十分に可能であることが明らかとなった。
【００３７】
［試験例９］
ＬＦを１６ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液）。安定剤としてレシチン０．２５重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液）。Ａ液とＢ液を混合し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、４０℃、８０００ｒｐｍで３分間撹拌混合してＬＦ組成物を調製した。次いで、このＬＦ組成物を乳酸または水酸化ナトリウム溶液を用いて〜１０の１０試料に調整した。これをアンプル管に２ｍｌずつ分注し、９０℃、１００℃、１１０℃、１２０℃、１３０℃にて４分間加熱した。
加熱処理後の各試料の凝集・沈殿状態を目視により判定し、その後、以下に示したポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により、ＬＦ類のバンドパターンの解析を行った。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる解析は、これにより加熱処理後のＬＦ類の分解を確認するためである。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ：各試料１５μｌをサンプルバッファー１５μｌ（０．５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８） １．２５ｍｌ、グリセロール１．０ｍｌ、１０％ＳＤＳ ２．０ｍｌ、２−メルカプトエタノール０．５ｍｌ、０．１％ＢＰＢ ０．２５ｍｌ）にて希釈し、１００℃で５分間加熱した。その後各試料を１５μｌずつ１４％ポリアクリルアミドゲル（ＴＥＦＣＯ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ ｍｉｎｉ）にて電気泳動した。分子量マーカーとしてはＫａｌｅｉｄｏｓｃｏｐｅ Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄｓを用いた。
【００３８】
この試験の結果、ＬＦ組成物を含有する溶液は、ｐＨ３〜８において目視による凝集・沈殿を生じず、また、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりＬＦ類のバンドを確認することができた。従って、このＬＦ組成物は、酸性側で安定なだけでなく、中性及びアルカリ性側でも加熱安定性が極めて高いことが分かった。さらに、加熱時間を延長して、ＬＦ類が確認できるかを検査したところ、ｐＨ３〜８では、１２０℃で６分間加熱しても凝集・沈殿せず、また、ＬＦ類のバンドが確認できた。この試験結果からみて、このＬＦ組成物は、レトルト殺菌処理することが十分に可能であることが明らかとなった。
【００３９】
［試験例１０］
鉄飽和ラクトフェリンを１５ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液）。安定剤としてペクチン０．６重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液）。Ａ液とＢ液を混合し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、４０℃、８０００ｒｐｍで３分間撹拌混合してＬＦ組成物を調製した。次いで、このＬＦ組成物を乳酸または水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨ １〜１０の１０試料に調整した。これをアンプル管に２ｍｌずつ分注し、９０℃、１００℃、１１０℃、１２０℃、１３０℃にて４分間加熱した。
加熱処理後の各試料の凝集・沈殿状態を目視により判定し、その後、以下に示したポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により、ＬＦ類のバンドパターンの解析を行った。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる解析は、これにより加熱処理後のＬＦ類の分解を確認するためである。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ：各試料１５μｌをサンプルバッファー１５μｌ（０．５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８） １．２５ｍｌ、グリセロール１．０ｍｌ、１０％ＳＤＳ ２．０ｍｌ、２−メルカプトエタノール０．５ｍｌ、０．１％ＢＰＢ ０．２５ｍｌ）にて希釈し、１００℃で５分間加熱した。その後各試料を１５μｌずつ１４％ポリアクリルアミドゲル（ＴＥＦＣＯ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ ｍｉｎｉ）にて電気泳動した。分子量マーカーとしてはＫａｌｅｉｄｏｓｃｏｐｅ Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄｓを用いた。
【００４０】
この試験の結果、ＬＦ組成物を含有する溶液は、ｐＨ３〜５において目視による凝集・沈殿を生じず、また、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりＬＦ類のバンドを確認することができた。従って、このＬＦ組成物は、酸性側で加熱安定性が極めて高いことが分かった。さらに、加熱時間を延長して、ＬＦ類が確認できるかを検査したところ、ｐＨ３〜５では、１２０℃で７分間加熱しても凝集・沈殿せず、また、ＬＦ類のバンドが確認できた。この試験結果からみて、このＬＦ組成物は、レトルト殺菌処理することが十分に可能であることが明らかとなった。
【００４１】
［試験例１１］
ＬＦを１０ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液）。安定剤としてカルボキシメチルセルロース０．１５重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液）。Ａ液とＢ液を混合し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、４０℃、８０００ｒｐｍで３分間撹拌混合してＬＦ組成物を調製した。次いで、このＬＦ組成物を乳酸または水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨ １〜１０の１０試料に調整した。これをアンプル管に２ｍｌずつ分注し、９０℃、１００℃、１１０℃、１２０℃、１３０℃にて４分間加熱した。
加熱処理後の各試料の凝集・沈殿状態を目視により判定し、その後、以下に示したポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により、ＬＦ類のバンドパターンの解析を行った。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる解析は、これにより加熱処理後のＬＦ類の分解を確認するためである。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ：各試料１５μｌをサンプルバッファー１５μｌ（０．５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８） １．２５ｍｌ、グリセロール１．０ｍｌ、１０％ＳＤＳ ２．０ｍｌ、２−メルカプトエタノール０．５ｍｌ、０．１％ＢＰＢ ０．２５ｍｌ）にて希釈し、１００℃で５分間加熱した。その後各試料を１５μｌずつ１４％ポリアクリルアミドゲル（ＴＥＦＣＯ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ ｍｉｎｉ）にて電気泳動した。分子量マーカーとしてはＫａｌｅｉｄｏｓｃｏｐｅ Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄｓを用いた。
【００４２】
この試験の結果、ＬＦ組成物を含有する溶液は、ｐＨ３〜７において目視による凝集・沈殿を生じず、また、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりＬＦ類のバンドを確認することができた。従って、このＬＦ組成物は、酸性側で安定なだけでなく、中性側でも加熱安定性が極めて高いことが分かった。さらに、加熱時間を延長して、ＬＦ類が確認できるかを検査したところ、ｐＨ３〜７では、１２０℃で６分間加熱しても凝集・沈殿せず、また、ＬＦ類のバンドが確認できた。この試験結果からみて、このＬＦ組成物は、レトルト殺菌処理することが十分に可能であることが明らかとなった。
【００４３】
［試験例１２］
試験例１で調製した試料を用いて、その抗原性を競合ＥＬＩＳＡ法により測定した。未加熱のＬＦ組成物の抗体との反応性に対する加熱処理したＬＦ組成物の抗体との反応性を百分率（％）で算出した。
【００４４】
その結果を表４に示した。表４から、未加熱のＬＦ組成物の抗体との反応性に対する加熱処理したＬＦ組成物の抗体との反応性は、１３０℃までであれば５０％以上を維持していることが判明した。従って、本発明におけるＬＦ組成物はｐＨ２〜９の範囲であれば、１３０℃という超高温加熱処理に対して安定である。
【００４５】
【表４】
【００４６】
［試験例１３］
試験例２と同様の方法で調製したＬＦ組成物（ＬＦ８ｍｇ％、キサンタンガム０．０４重量％）を含有する溶液をｐＨ ２〜９に調整し、１５０ｍｌずつレトルトパウチに充填し、密封した。対照としてＬＦのみを含む溶液をｐＨ２〜９に調整したものを１５０ｍｌずつレトルトパウチに充填し、密封した。これらの溶液を レトルト殺菌機（第１種圧力容器、ＴＹＰＥ： ＲＣＳ−４ＣＲＴＧＮ、日阪製作所製）により１２０℃、４分間加熱した。加熱後のそれぞれの試料を２５℃で保存して、経時的に凝集・沈殿の有無を目視により観察し、また、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によりＬＦ類のバンドパターンの解析を行った。
その結果、対照としたＬＦのみを含む溶液をｐＨ２〜９に調整したものは、１日目で凝集・沈澱が確認できたが、ＬＦ組成物を含有する溶液をｐＨ ２〜９に調整したものは、保存後１ヶ月経っても凝集・沈澱は認められなかった。また、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにてＬＦ類のバンドパターンを解析したところ、ＬＦ組成物を含む溶液をｐＨ ２〜９に調整したものは保存開始時から保存後１ヶ月においてもＬＦ類のバンドが確認でき、他の変化は認められなかった。この試験結果により、本発明によるＬＦ組成物はレトルト殺菌処理の場合に大変有効であることが判明した。
【００４７】
［試験例１４］
試験例２と同様の方法で調製したＬＦ組成物２００ｇ（ＬＦ８ｍｇ％、キサンタンガム０．０４重量％）に還元脱脂粉乳溶液（脱脂粉乳３重量％）８００ｇを混合し、ＬＦ組成物を含有する溶液（１）を調製した。対照としてＬＦ溶液（ＬＦ８ｍｇ％溶液）２００ｇに還元脱脂粉乳溶液（脱脂粉乳３重量％）８００ｇを混合した溶液（２）、及び還元脱脂粉乳溶液（脱脂粉乳３重量％）１０００ｇのみの溶液（３）を調製した。各溶液を１５０ｍｌずつレトルトパウチに充填し、密封した。これらの溶液をレトルト殺菌機 （第１種圧力容器、ＴＹＰＥ： ＲＣＳ−４ＣＲＴＧＮ、日阪製作所製）により１２０℃、２０分加熱した。その結果、溶液（１）、（３）においては凝集・沈殿は認められず、風味も良好であったが、（２）の溶液では凝集・沈殿が認められた。この試験結果により、本発明によるＬＦ組成物はレトルト殺菌処理の場合に大変有効であることが判明した。
【００４８】
［比較例１］
安定剤として大豆多糖類、キサンタンガム、ジェランガム及びグアガムを選択し、試験例１と同様の方法でＬＦ組成物を調製した。なお、各安定剤は大豆多糖類０．４重量％、キサンタンガム０．０４重量％、ジェランガム０．０５重量％及びグアガム０．０５重量％にて試験を行った。これらのＬＦ組成物をｐＨ６．５に調整し、１２０℃で４分間加熱した。加熱された各試料の凝集・沈澱状態を目視により判定し、また、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によりＬＦ類のバンドパターンの解析を行った。
【００４９】
試験結果を表５に示した。加熱前のＬＦ組成物はいずれも凝集・沈殿せず、透明であり、ＬＦ類のバンドも確認できた。加熱後は大豆多糖類及びキサンタンガム含有ＬＦ組成物は透明であり、また、ＬＦ類のバンドも確認できたが、ジェランガム及びグアガム含有ＬＦ組成物は、いずれも半透明か、あるいは凝集・沈殿し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにてＬＦ類のバンドも確認できなかった。
【００５０】
【表５】
【実施例１】
【００５１】
鉄飽和ラクトフェリンを２０ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液、３００ｇ）。安定剤として大豆多糖類０．８重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液、３００ｇ）。Ａ液とＢ液を混合し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、５０℃、９５００ｒｐｍで３分間撹拌混合して本発明のＬＦ組成物６００ｇを調製した。
【実施例２】
【００５２】
ＬＦを１６ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液、１０ｋｇ）。安定剤としてキサンタンガムを０．１６重量％で脱イオン水に溶解した（Ｂ液、１０ｋｇ）。Ａ液とＢ液を混合し、ＴＫホモミクサー（ＭＡＲＫ ＩＩ １６０型、特殊機化工業製）にて、３６００ｒｐｍで３０分間撹拌混合し、さらに分画分子量１０ｋＤａのＵＦ膜にて濃縮して、本発明のＬＦ組成物１０ｋｇを調製した。
【実施例３】
【００５３】
塩酸で脱鉄したアポラクトフェリンを１０ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液、１０００ｋｇ）。安定剤としてショ糖脂肪酸エステル０．４重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液、１０００ｋｇ）。Ａ液とＢ液を混合し、ＴＫホモミクサー（ＭＡＲＫ ＩＩ ２５００型、特殊機化工業製）にて、４０℃、３６００ｒｐｍで４０分間撹拌混合し、さらに凍結乾燥して本発明のＬＦ組成物３．９ｋｇを調製した。
【実施例４】
【００５４】
鉄飽和ラクトフェリンを２０ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液、５００ｇ）。安定剤として大豆多糖類０．４重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液、５００ｇ）。Ａ液とＢ液を混合し、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、４０℃、９５００ｒｐｍで３分間撹拌混合した。その後、上記の溶液に、ソルビトール８０ｇ、酸味料４ｇ、香料４ｇ、ペクチン１０ｇ、乳清タンパク質濃縮物１０ｇ、乳酸カルシウム２ｇ、水８９０ｇを添加して、撹拌混合し、本発明のＬＦ組成物を調製した。２００ｍｌのチアパックに充填し、８５℃、２０分間殺菌後、密栓し、本発明のＬＦ組成物からなるゲル状食品１０袋を調製した。調製したゲル状食品は、すべて沈殿等は認められず、風味に異常は感じられなかった。
【実施例５】
【００５５】
鉄飽和ラクトフェリンを１００ｍｇ％濃度で脱イオン水に溶解した（Ａ液、２００ｇ）。安定剤として大豆多糖類４重量％を脱イオン水に溶解した（Ｂ液、２００ｇ）。マルチトール１００ｇ、還元水飴２０ｇ、酸味料２ｇ、香料２ｇ、前記Ａ液２００ｇ、前記Ｂ液２００ｇ、及び水４７６ｇを混合し、本発明のＬＦ組成物を調製した。このＬＦ組成物を５０ｍｌのガラス瓶に充填し、９０℃、１５分間殺菌後、密栓し、本発明ＬＦ組成物を含有する飲料２０本を調製した。調製した飲料は、すべて沈殿は認められず、風味に異常は感じられなかった。
【実施例６】
【００５６】
実施例２で調製したＬＦ組成物０．２ｋｇ（ラクトフェリン８ｍｇ％、キサンタンガム０．０８重量％）に大豆粕１２ｋｇ、脱脂粉乳１４ｋｇ、大豆油４ｋｇ、コーン油２ｋｇ、パーム油２８ｋｇ、トウモロコシ澱粉１５ｋｇ、小麦粉９ｋｇ、ふすま２ｋｇ、ビタミン混合物９ｋｇ、セルロース２．８ｋｇ、ミネラル混合物２ｋｇを配合し、１２０℃、４分間殺菌して、イヌ飼育用飼料１００ｋｇを調製した。
【実施例７】
【００５７】
実施例３で調製したＬＦ組成物３ｋｇ（アポラクトフェリン５ｍｇ％、ショ糖脂肪酸エステル０．２重量％）に、カゼイン５ｋｇ、大豆タンパク質５ｋｇ、魚油１ｋｇ、シソ油３ｋｇ、デキストリン１９ｋｇ、ミネラル混合物６ｋｇ、ビタミン混合物１．９５ｋｇ、乳化剤２ｋｇ、安定剤４ｋｇ、香料０．０５ｋｇを配合し、２００ｍｌのレトルトパウチに充填し、レトルト殺菌機 （第１種圧力容器、ＴＹＰＥ： ＲＣＳ−４ＣＲＴＧＮ、日阪製作所製）で１２１℃、２０分間殺菌して、経腸栄養剤５０ｋｇを調製した。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラクトフェリン類と、グリセリン脂肪酸エステル、カゼインナトリウム、レシチンの少なくとも１種の安定化剤からなる加熱安定性のあるラクトフェリン組成物。
【請求項２】
飲食品や飼料、医薬に通常用いられる原材料等を混合してなる請求項１に記載の組成物
【請求項３】
請求項１または２に記載の組成物を配合した飲食品、飼料及び医薬。
【請求項４】
ラクトフェリン類に、ショ糖脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、カゼインナトリウム、レシチンの少なくとも１種の安定化剤含有させ、９０℃以上の温度で加熱することを特徴とするラクトフェリン類を含む組成物の加熱処理方法。
【請求項１】
ラクトフェリン類と、グリセリン脂肪酸エステル、カゼインナトリウム、レシチンの少なくとも１種の安定化剤からなる加熱安定性のあるラクトフェリン組成物。
【請求項２】
飲食品や飼料、医薬に通常用いられる原材料等を混合してなる請求項１に記載の組成物
【請求項３】
請求項１または２に記載の組成物を配合した飲食品、飼料及び医薬。
【請求項４】
ラクトフェリン類に、ショ糖脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、カゼインナトリウム、レシチンの少なくとも１種の安定化剤含有させ、９０℃以上の温度で加熱することを特徴とするラクトフェリン類を含む組成物の加熱処理方法。
【公開番号】特開２０１０−１８０２１９（Ｐ２０１０−１８０２１９Ａ）
【公開日】平成２２年８月１９日（２０１０．８．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−４７６０８（Ｐ２０１０−４７６０８）
【出願日】平成２２年３月４日（２０１０．３．４）
【分割の表示】特願２００３−１５３３１７（Ｐ２００３−１５３３１７）の分割
【原出願日】平成１５年５月２９日（２００３．５．２９）
【出願人】（０００００６６９９）雪印乳業株式会社 (155)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年８月１９日（２０１０．８．１９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年３月４日（２０１０．３．４）
【分割の表示】特願２００３−１５３３１７（Ｐ２００３−１５３３１７）の分割
【原出願日】平成１５年５月２９日（２００３．５．２９）
【出願人】（０００００６６９９）雪印乳業株式会社 (155)
【Ｆターム（参考）】
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