植物抽出物を含有するアトピー性皮膚炎改善用組成物
【課題】植物抽出物を含有するアトピー性皮膚炎改善用組成物、これを含む健康増進用食品及びアトピー性皮膚炎改善用組成物を製造する方法を提供すること。
【解決手段】本発明の組成物は、アトピー性皮膚炎改善用組成物は、楡根皮、決明子、蒲公英、及びスモモ抽出物を含む。前記各抽出物は、全て同一の固形分含量を有するように濃縮されたものを基準に、１〜６０重量部の楡根皮抽出物、１〜６０重量部の決明子抽出物、１〜６０重量部の蒲公英抽出物、及び１〜６０重量部のスモモ抽出物を含んでいてもよい。
【解決手段】本発明の組成物は、アトピー性皮膚炎改善用組成物は、楡根皮、決明子、蒲公英、及びスモモ抽出物を含む。前記各抽出物は、全て同一の固形分含量を有するように濃縮されたものを基準に、１〜６０重量部の楡根皮抽出物、１〜６０重量部の決明子抽出物、１〜６０重量部の蒲公英抽出物、及び１〜６０重量部のスモモ抽出物を含んでいてもよい。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アトピー性皮膚炎の症状を改善させる植物混合抽出物を含有する組成物に係り、より詳細には、このような組成物、これを含む健康増進用食品及びアトピー性皮膚改善用組成物を製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
アトピー性皮膚炎は、増悪と寛解とが繰り返される慢性の炎症性皮膚疾患であって、そう痒症とアレルギー性鼻炎や喘息などにも関連する。
【０００３】
アトピー性皮膚炎は、その原因が十分には解明されていないが、下記のような原因によるとされている。即ち、アレルギーに係る免疫グロブリンであるＩｇＥの増加による免疫過敏反応またはＴリンパ球の機能不全によるものとされている。
【０００４】
ＩｇＥは、粘膜や皮膚の肥満細胞(ｍａｓｔ ｃｅｌｌ)に結合し、その濃度が高いと、肥満細胞からヒスタミン（ｈｉｓｔａｍｉｎｅ）が分泌されて炎症を生じさせる。多くのアトピー性皮膚炎患者において、血清ＩｇＥの値が上昇しており、その数値とアトピー性皮膚炎の臨床的重症度が正の相関があることに明らかになっている。
【０００５】
肥満細胞により、ＩｇＥの産生を誘導するＩＬ−４、ＩｇＥの生成を促進するＩＬ−５、ＩｇＥの生成を増幅させるＩＬ−６などのサイトカインを分泌するとされている。アトピー性皮膚炎の更に他の因子として、活性酸素を含むフリーラジカル（ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ）が考えられていて、活性酸素の発生が多すぎると皮膚細胞のコレステロールや中性脂肪などと反応して過酸化脂質が生成され、これによって皮膚角質層の保湿機能が低下することによってダニなど接触性の刺激に敏感になりアトピー性皮膚炎が発生するとされる。
【０００６】
このような免疫過敏反応と活性酸素の過剰発生は根本的な発生原因が明確ではないが、遺伝的原因の他、主に環境汚染によるダイオキシンのような環境ホルモンの人体内への流入など、外因的ストレスによる免疫系の機能悪化や障害によって発生すると考えられている。そして、アトピー性皮膚炎に伴い、二次的な細菌感染、薬物の副作用による感受性の上昇、真菌やウイルスなどの感染による抵抗力の低下なども現れる。
【０００７】
アトピー性皮膚炎を治療する方法としては、アレルギー源を除去するか免疫系を改善させる方法が行われているが、アレルギー源は除去しにくいため、主に免疫にかかわる治療と、肥満細胞からのヒスタミンの放出を減少させるための薬物治療を受けるのが一般的な方法である。現在行われている治療方法としては、免疫抑制剤を用いてアトピー性皮膚炎によって発生する各種症状を緩和させるか、もしくはアトピー性皮膚炎の患者の皮膚の乾燥を防ぐために保湿剤を塗布すると同時に、炎症を治療するために、外用合成副腎皮質ホルモン剤などを塗布している。
【０００８】
しかし、外用合成副腎皮質ホルモン剤を長期間用いる場合、皮膚の萎縮及び血管拡張など多様な皮膚の副作用を誘発するので、このような副作用を起こすことなく抗炎症効果を有する天然素材を開発するための研究が活発に進行されつつある。
【０００９】
アトピー性皮膚炎の症状緩和のための抗菌性及びフリーラジカル消去能を活用した天然物由来の先行技術としては、アトピー性皮膚炎の二次的な疾患である、皮膚炎をさらに悪化させる炎症を誘発する細菌等の増殖を抑制する抗菌成分を含有したアロエベラ、緑茶、及びオウゴン抽出物などを含有した化粧品（特許文献１）が開発され、霊芝、及び楡根皮、決明子、蒲公英などを用いて皮膚組織の角質化と感染した細菌の増殖を抑制しうる漢方化粧品（特許文献２）がある。
【００１０】
また、殺菌効果を有する桂枝抽出物を含有するアトピー性皮膚炎の緩和及び予防用化粧料（特許文献３）、苦参及び白きゅう、知母、小葉麦門冬（ジャノヒゲ）などの混合抽出物を有効成分にして抗菌及びフリーラジカルの消去、抗炎症、保湿効果を有してアトピー性皮膚炎を改善する化粧品（特許文献４）、白きゅう及び紫蘇、エキナシア、醗酵大豆抽出物を一定の割合で混合して抗菌効果及び保湿効果、抗炎症効果、フリーラジカル除去効果などがあってアトピー性皮膚炎の治癒改善効能を有する化粧品（特許文献５）、グアバ抽出物を醗酵して抗酸化及び抗菌、抗炎症効果を有するアトピー改善組成物（特許文献６）などが知られている。
【００１１】
そして、アロエ及び竹などに存在するイソオリエンチン（ｉｓｏｏｒｉｅｎｔｉｎ）を含み、過剰のヒスタミンによって惹起された疾患の予防あるいは治療用薬学組成物（特許文献７）が報告されている。
【００１２】
免疫過敏反応の抑制を通してアトピー性皮膚炎を治療する先行技術としては、三白草（ｓａｕｒｕｒｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）抽出物、あるいはこれから分離された（−）−ソーサーネオール（ｓａｕｃｅｒｎｅｏｌ）、ソーサーネオールＣ、マナサンチンＡまたはＢを有効成分として含有する免疫抑制用組成物であって、正常でないＢ細胞及びＴ細胞の増殖を効果的に抑制して、優れた免疫抑制効果を有するため、臓器移植拒否反応、自己免疫疾患、アレルギー、アトピーなどのような免疫過敏反応によって惹起される疾患の予防及び治療のための薬学組成物及び食品添加物（特許文献８）と、地楡（ｓａｎｕｉｓｏｒｂａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）抽出物を有効成分に含有する過敏性皮膚疾患治療剤で、ＩｇＥを減少させる効果及びフリーラジカル消去及び免疫細胞の増殖を促進する効果がり、細胞毒性の少ないアトピー性皮膚炎治療剤（特許文献９）が報告されている。
【００１３】
なお、蓁ぎょう（Ｇｅｎｔｉａｎａｅ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａｅ ｒａｄｉｘ）抽出物も地楡抽出物と同様の効果を有している皮膚疾患治療剤（特許文献１０）として知られていて、樺皮及び生地おう、玄参、当帰、桂枝、蒼朮、麻黄、羌活、荊芥、防風、細辛、川烏、川きゅう、甘草、何首烏、石雄黄を用いてＩｇＥ及びＩＬ−４などサイトカイン分泌を調節してアトピー性皮膚炎に役立つ漢薬組成物（特許文献１１）が報告されている。
【００１４】
しかし、アトピー性皮膚炎の発生原因のうち、ダイオキシンのような環境ホルモンによる免疫系の障害がもっとも深刻な発病原因と判断され、体内に吸収された環境ホルモンを解毒するとともに免疫過敏反応を起こすＩｇＥを減少させ、ＩＬ−６などのサイトカインの分泌を抑制させる物質を探索して適正割合で混合した新規な組成物の製造が要求されている。
【特許文献１】韓国特許出願第２００１−１６１６２号
【特許文献２】韓国特許出願第２００３−２８２７号
【特許文献３】韓国特許出願第２００２−６０２８６号
【特許文献４】韓国特許出願第２００３−５３３７０号
【特許文献５】韓国特許出願第２００３−３８８５１号
【特許文献６】韓国特許出願第２００６−１１６２７９号
【特許文献７】韓国特許出願第２００５−２２７７２号
【特許文献８】韓国特許出願第２００５−１３０６０１号
【特許文献９】韓国特許出願第２００５−２４４３０号
【特許文献１０】韓国特許出願第２００５−２４４２９号
【特許文献１１】韓国特許出願第２００５−２６５５１号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明の目的は、体内への環境ホルモンの流入による免疫系の混乱によって発生するアトピー性皮膚炎の予防及び治療に有用なアトピー性皮膚炎改善用組成物を提供することにある。また、本発明の目的は、前記組成物を含む健康増進用食品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
このような課題を実施するために本発明の一実施例によるアトピー性皮膚改善用組成物は、楡根皮、決明子、蒲公英、及びスモモ抽出物を含む。例えば、前記各抽出物は、全て同一の固形分含量を有するように濃縮されたものを基準に、１〜６０重量部の楡根皮抽出物、１〜６０重量部の決明子抽出物、１〜６０重量部の蒲公英抽出物、及び１〜６０重量部のスモモ抽出物を含んでいてもよい。
【００１７】
例えば、前記の各植物抽出物は、抽出液を乾燥させた粉末状態であってもよい。
【００１８】
本発明の一実施例による健康増進用食品は、前記の組成物を含有する。前記食品は、散剤、錠剤、カプセル剤、禅食、チューインガム、キャンディ、ビスケット、健康飲料などの形態に製造してもよい。
【００１９】
本発明の一実施例によるアトピー性皮膚炎予防及び治療用組成物の製造方法は、楡根皮、決明子、蒲公英、及びスモモにそれぞれ１０〜３０倍の有機溶媒を加え、有機溶媒が加えられたそれぞれの楡根皮、決明子、蒲公英、及びスモモを１０℃〜３０℃で２〜５日間抽出して濾過し、前記濾過後の結果物の減圧濃縮する、前記減圧濃縮の結果物を乾燥すること、を含む。
【００２０】
例えば、前記有機溶媒としては、４０〜９０％のエタノール水溶液を用いることができる。また、前記アトピー性皮膚炎及び治療用組成物の製造方法は、前記各楡根皮、決明子、蒲公英、及びスモモ抽出物は、全て同一の固形分含量を有するように濃縮されたものを基準に、１〜６０重量部の楡根皮抽出物、１〜６０重量部の決明子抽出物、１〜６０重量部の蒲公英抽出物、及び１〜６０重量部のスモモ抽出物を混合することを更に含むようにしてもよい。
【発明の効果】
【００２１】
本発明による組成物は、周辺で容易に得ることができる人体に無害な植物であって、過剰量服用しても副作用なしにアトピー性皮膚炎に代表される過敏性皮膚疾患の予防及び治療に優れる効果を有する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
前記目的を達成するために、本発明では、免疫調節活性のみならず炎症抑制効果を有する４種の植物抽出物を含有することを特徴とする天然物素材を提供する。例えば、前記各抽出物は、いずれも同一の固形分含量を有するように濃縮されたものを基準に、１〜６０重量部の楡根皮抽出物、１〜６０重量部の決明子抽出物、１〜６０重量部の蒲公英抽出物、及び１〜６０重量部のスモモ抽出物を含むことができる。以下、本発明をより詳細に説明する。
【００２３】
（実施例1）本発明から選別された４種の植物抽出物の製法
本発明から得られた４種の植物に対する抽出方法を整理すると下記のようである。
楡根皮抽出物の製法
楡根皮（Ｕｌｍｕｓ ｄａｖｉｄｉａｎａ ｖａｒ．）、すなわち、陰乾したニレの根の皮を粉砕機で細切してその体積に対して２〜２００倍、望ましくは１０〜３０倍の有機溶媒を加えて、１０〜５０℃で１〜１０日間、望ましくは２〜５日間抽出して濾過したした後、減圧濃縮して乾燥する工程によって製造することができる。このとき、抽出溶媒としてはエタノール及びメタノール、ジクロロメタンなどを用いることができ、４０〜９０％のエタノール水溶液が望ましい。
【００２４】
決明子抽出物の製法
決明子（Ｃａｓｓｉａ ｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａ）を粉砕した後、その体積に対して２〜２００倍、望ましくは１０〜３０倍の有機溶媒を加えて、１０〜３０℃で１〜１０日間、望ましくは２〜５日間抽出して濾過した後、減圧濃縮して乾燥する工程によって製造することができる。ここで、抽出溶媒としては、エタノール及びメタノール、ジクロロメタンなどを用いることができ、４０〜９０％のエタノール水溶液が望ましい。
【００２５】
蒲公英抽出物の製法
蒲公英（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｐｌａｔｙｃａｒｐｕｍ）を粉砕した後、その体積に対して２〜２００倍、望ましくは１０〜３０倍の有機溶媒を加えて、１０〜３０℃で１〜１０日間、望ましくは２〜５日間抽出して濾過した後、減圧濃縮して乾燥する工程によって製造することができる。ここで、抽出溶媒としては、エタノール及びメタノール、ジクロロメタンなどを用いることができ、４０〜９０％のエタノール水溶液が望ましい。
【００２６】
スモモ抽出物の製法
スモモ（Ｐｒｕｎｕｓ ｓａｌｉｃｉｎａ）の核を除去して４等分して５０℃以下の熱風乾燥または凍結乾燥した後、その体積に対して２〜２００倍、望ましくは１０〜３０倍の有機溶媒を加えて、１０〜３０℃で１〜１０日間、望ましくは２〜５日間抽出して濾過した後、減圧濃縮して乾燥する工程で製造することができる。ここで、抽出溶媒としては、エタノール及びメタノール、ジクロロメタンなどを用いることができ、４０〜９０％のエタノール水溶液が望ましい。
【００２７】
具体的に、本発明の望ましい実施例では、還流装置が接続された抽出機を用いて楡根皮及び決明子、蒲公英、スモモまたはそれの乾燥物に対して１０倍の７０％エタノール水溶液を用いて７２時間攪拌しながら抽出してから濾過し、濾液を減圧濃縮してエタノール抽出物を得、この抽出物に必要に応じてはマルトデキストリンのような賦形剤を添加して凍結乾燥するか、あるいは噴霧乾燥して抽出物粉末を得る。
【００２８】
（実施例２）脱顆粒抑制の効果
β−ヘキソサミニダーゼ（β−ｈｅｘｏｓａｍｉｎｉｄａｓｅ）は、ヒト肥満細胞（ｈｕｍａｎ ｍａｓｔ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ−１（ＨＭＣ−１））中の顆粒内にヒスタミン（ｈｉｓｔａｍｉｎｅ）のように存在する炎症前駆物質である。抗原が、肥満細胞（ｍａｓｔ ｃｅｌｌ）の細胞膜の表面に存在するＦｃ受容体と結合しているIｇＥ抗体との間に架橋結合（ｃｒｏｓｓ ｌｉｋｉｎｇ）を形成すると、細胞膜が活性化され、酵素反応を経て短時間に脱顆粒されてβ−ヘキソサミニダーゼとヒスタミンが分泌される。ヒスタミンは、肥満細胞内に低い濃度で存在し、その測定には多数の段階を経るため、分析偏差が大きい。そのため、比較的誤差が少なく、安定的に測定されるβ−ヘキソサミニダーゼアッセイ（β−ｈｅｘｏｓａｍｉｎｉｄａｓｅ ａｓｓａｙ）を用いた。
【００２９】
ＨＭＣ−１を培養した後、遠心分離して細胞を集め、サイロイドバッファー（ｔｈｙｒｏｉｄ ｂｕｆｆｅｒ）に２×１０６ｃｅｌｌ／ｍｌに濃度を合わせて９００μｌずつ４８ウェルプレート（４８ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ）に分取した。サイロイドバッファーに最終濃度が１０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌとなるように希釈された楡根皮及び決明子、蒲公英、スモモ抽出物を各ウェルに添加した後、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーター（ｉｎｃｕｂａｔｏｒ）で３０分間培養した後、脱顆粒誘発物質であるコンパウンド４８／８０（ｃｏｍｐｏｕｎｄ ４８／８０）を６μｇ／ｍｌの濃度になるように添加して、再び３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターで３０分間培養した。
【００３０】
４８ウェルプレートを１０分間アイスバス（ｉｃｅ ｂａｔｈ）に置いて反応を終結させた後、遠心分離して細胞を沈め、上澄液３０μｌを９６ウェルプレートに移した後、各ウェルに基質として１ｎＭ ｐ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ−Ｎ−ａｃｅｔｙｌ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｄｅの３０μｌを添加して３７℃で１時間反応させた後、１２０μｌの反応停止液（ｓｏｄｉｕｍ ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ、ｐＨ １０．２）を入れてエライザマイクロプレートリーダー（ＥＬＩＳＡ ｍｉｃｒｏ ｒｅａｄｅｒ）を用いて４０５ｎｍで吸光度を測定した。
β−ヘキソサミニダーゼ（β−ｈｅｘｏｓａｍｉｎｉｄａｓｅ）の分泌量は、下記の数式（１）を用いて求めた。
【００３１】
【数１】
【００３２】
前記式において、Ａはポジティブコントロール（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ）吸光度であり、Ｂは試料で処理したサンプルの吸光度を示す。
その結果を図１に示す。
【００３３】
即ち、コンパウンド４８／８０（ｃｏｍｐｏｕｎｄ ４８／８０）を単独処理したポジティブコントロールに比べて決明子及び楡根皮、蒲公英、スモモ抽出物を１０μｇ／ｍｌ処理した場合、９５％のレベルの有意差がある脱顆粒の抑制を示し、１００μｇ／ｍｌ処理時に全ての処理サンプルで、９９％のレベルの有意差がある脱顆粒の抑制を示した。
【００３４】
（実施例３）皮膚疾患の症状改善用混合抽出物（ＡＦ−３４３）の組成比
外部抗原に対する反応としてヒト肥満細胞（ｈｕｍａｎ ｍａｓｔ ｃｅｌｌ）の脱顆粒によるβ−ヘキソサミニダーゼとヒスタミンの分泌を抑制して、皮膚疾患に有用な４種の植物抽出物、即ち、楡根皮及び決明子、蒲公英、スモモ抽出物などをそれぞれ同一の成分割合に混合して天然物製剤（ＡＦ−３４３）を完成した。ＡＦ−３４３を用いてβ−ヘキソサミニダーゼ分泌抑制能を測定した結果、各植物の抽出物を単独に用いるよりも優れた効果を示した（図２）。即ち、１μｇ／ｍｌのレベルにおいても９５％レベルの有意差が認められ、処理濃度が増加するほど脱顆粒抑制効果が強く現れた。
【００３５】
（実施例４）免疫活性（ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ分泌量の抑制効果）
多くのアトピー性皮膚炎患者において、免疫過敏の反応として血清ＩｇＥ値が増加していて、ＩｇＥの生成を増幅させるＩＬ−６などのサイトカインを分泌することが知られている。よって、実施例３で、脱顆粒を抑制する効能が明らかになったＡＦ−３４３を用いて免疫活性にかかわるサイトカインの分泌量を確認した。
【００３６】
即ち、ＨＭＣ−１をＩＭＤＭに３×１０６ｃｅｌｌ／ｍｌの濃度で２４ウェルプレート（２４ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ）に分取し、混合抽出物１μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌの濃度に希釈された試料を添加して３７℃、５％のＣＯ２インキュベーターで３０分間培養した後、４０ｎＭのホルボール（ｐｈｏｒｂｏｌ）１２−ｍｙｒｉｓｔａｔｅ １３−ａｃｅｔａｔと１ｕＭのＣａｌｃｉｕｍ ｉｏｎｏｐｈｏｒｅ Ａ２３１８７Ｉを添加して３７℃、５％のＣＯ２インキュベーターで４時間培養した後、１２００ｒｐｍで５分間遠心分離して上澄液を得た。
【００３７】
この上澄液を用いてＴＮＦ−αとＩＬ−６、ＩＬ−８の定量はＱｕａｎｔｉｋｉｎｅ ｋｉｔ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、ｃａｔ．ＤＴＡ００Ｃ）を用いて定量し、ＲＴ−ＰＣＲ（Ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｅｓ−ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ）を用いて確認した。結果は、図３、図４、及び図５のようである。即ち、図３に示すＴＮＦ−αの場合、９５％の有意差レベルで１μｇ／ｍｌの濃度以上での処理時、有意に低下することに示されたが、濃度が増加してもその抑制力には大きな差異がないことがわかった。
【００３８】
また、ＩＬ−６の場合、図４のように９５％の有意差レベルで１μｇ／ｍｌの濃度以上での処理時、有意に低下することが示されたが、１０μｇ／ｍｌでは濃度増加による差はなく、１００μｇ／ｍｌ処理時に大きく減少することが示された。図５に示すＩＬ−８の場合、ＴＮＦ−αと類似に９５％の有意差レベルで１μｇ／ｍｌの濃度以上での処理時に有意に低下することが示されたが、濃度が増加してもその抑制力には大きな差異がないことがわかった。
【００３９】
（実施例５）抗炎症効能評価
アトピー性皮膚炎誘発モデルとしてよく知られている６週齢の雄のマウスＮＣ／Ｎｇａを用いて７日間、実験環境に適応させるため飼育した後、４週間の実験を行った。無処理群とアトピー性皮膚炎の誘発物質処理群、及びアトピー性皮膚炎誘発物質処理群にＡＦ−３４３を１．６６７ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ（体重６０ｋｇである場合１日０．１ｇ）、１６．６７ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ，１６６．７ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ経口投与した実験群に区分して実験した。
【００４０】
各試料は、同一時間に毎日経口投与し、対照群は１％のＤＭＳＯの含まれたＰＢＳ試料を投与したマウスに同様の方法で体重に合わせて投与した。また、アトピー性皮膚炎誘発のためにコナヒョウヒダニ（Ｄｅｒｍａｔｏ−ｐｈａｇｏｉｄｅｓ ｆａｒｉｎａｅ（ＤＦ））を抗原として用いて、二日に一度ずつ両耳に５ｍｇ／ｍｌの濃度で１０μｌずつ塗布した。炎症の発症現像を測定するために二日に一度ずつ抗原を塗布する前に、ノギス(ｖｅｒｎｉｅｒ ｃａｌｉｐｅｒｓ)を用いて耳の厚さを測定した。実験結果は、図６に示したとおりである。
【００４１】
即ち、１．６６７ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ以上、４週間経口投与時、アトピー性皮膚炎誘発物質処理群に比べて９５％のレベルの有意差で炎症が抑制されることがわかり、処理濃度が増加するほど炎症抑制効果が強く現れた。
【００４２】
図７〜図１１は、アトピー性皮膚炎誘発物質処理後、ＡＦ−３４３の投与が耳の組織に及ぼす影響を確認するために、耳組織をｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ ａｎｄ ｅｏｓｉｎ染色をして組織を観察した結果である。より詳細には、図７は正常群（ＮＣ）、図８はアトピー性皮膚炎誘発物質処理群（ＰＣ）、図９は１．６６７ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙを投与した群、図１０は、１６．６７ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙを投与した群、図１１は、１６６．７ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙを投与した群の耳組織の写真である。
【００４３】
図７〜図１１の顕微鏡写真でも確認できるように、正常群（ＮＣ）に比べてアトピー性皮膚炎誘発物質処理群（ＰＣ）では、浮腫が発生して組織が厚くなって破壊されることがわかった。そして、ＡＦ−３４３処理濃度が増加するに応じて耳の厚さが薄くなり、組織も正常化することがわかった。
【００４４】
(実施例６)実験動物の血中ＩｇＥの測定
図１２は、４週間試験飼育したＮＣ／Ｎｇａマウスの血清を採取してアトピー性皮膚炎の誘発にかかわるＩｇＥの濃度を測定した結果である。即ち、アトピー性皮膚炎誘発物質のみを処理したＰＣ群に比べて、アトピー性皮膚炎誘発物質で処理しＡＦ−３４３を１．６６７ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙずつ経口投与した場合、９５％の有意差レベルでＩｇＥの低下効果が示され、１６．６７ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ以上では、アトピー性皮膚炎誘発物質を処理しない正常群のＩｇＥの濃度とは差があるものの、９９％のレベルでＰＣ群に比べて有意差のあるＩｇＥの分泌を抑制することが示された。
【００４５】
(実施例７)臨床実験
アトピー性皮膚炎の一般人３０名を対象として、４週間、ＡＦ−３４３を５００ｍｇ／ｄａｙ投与した後、その治療効果を確認した質問の結果である（図１３）。質問の番号は下記の内容で、７点尺度法を用いて、最も深刻な場合７点、全然そうでない場合１点にして評価した。
【００４６】
１．石けんまたは化粧品の使用後、痒くてちくちくする程度がどれくらいですか。
２．花粉の飛ぶ季節には他の季節に比べて痒いかあるいは赤くなる程度がどれくらいですか。
３．腕の内側や首しわなど折られる部分に汗が出ると、痒いかあるいは赤くなる程度はどれくらいですか。
４．皮膚が乾燥しており、特に皮膚が更に乾燥した場合、痒いですか。
５．平素に患部の痒みの程度はどれくらいですか。
６．皮膚を掻いた後、痒いかあるいは赤く腫れる程度がどれくらいですか。
７．皮膚を掻いた後、掻いた部位に炎症が生じる程度どれくらいですか。
８．皮膚を掻いた後、掻いた部位に角質が生じる程度どれくらいですか。
９．寝ているとき、患部を掻いて血が出るか、あるいは痒みで目が覚めたことがありますか。
１０．ほこりの多い日に外出した後、患部の痒みや炎症が更にひどくなりますか。
【００４７】
図１３で示したように、アトピー性皮膚炎である一般人に１日にＡＦ−３４３ ５００ｍｇを４週間摂取させたとき、全ての項目でアトピー性皮膚炎にかかわる症状が緩和したことがわかった。
【００４８】
［製造例１］散剤
楡根皮及び決明子、蒲公英、スモモ抽出物 ２ｇ
乳糖 １ｇ
前記の成分を混合し、包装用袋に充填して散剤を製造する。
【００４９】
［製造例２］錠剤
楡根皮及び決明子、蒲公英、スモモ抽出物 １００mｇ
乳糖 １００mｇ
トウモロコシでんぷん １００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ２ｍｇ
前記の成分を混合した後、通常の錠剤の製造方法によって打錠して錠剤を製造する。
【００５０】
［製造例３］カプセル剤
楡根皮及び決明子、蒲公英、スモモ抽出物 １００mｇ
乳糖 １００mｇ
トウモロコシでんぷん １００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ２ｍｇ
前記の成分を混合した後、通常のカプセルの剤製造方法によってゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造する。
【００５１】
［製造例４］禅食
玄米４０％、麦３０％、はと麦２０％、アルファ米粉１０％を焙煎した後、粉砕機で粒度６０メッシュの穀類粉末を作る。
黒豆４０％、黒ゴマ３０％、エゴマ３０％を焙煎した後、粉砕機で粒度６０メッシュの種実類粉末を作る。
【００５２】
本発明の楡根皮及び決明子、蒲公英、スモモ抽出物を、噴霧乾燥機を用いて乾燥粉末を作る。
前記製造した穀類７５％、種実類２０％、及び楡根皮及び決明子、蒲公英、スモモ抽出物の乾燥粉末５％を配合した後、顆粒化して禅食を製造する。
【００５３】
［製造例５］チューインガム
ガムベース２０％、砂糖７６％、香料１．５％、及び水２％と本発明の楡根皮及び決明子、蒲公英、スモモ抽出物０．５％を配合して通常の方法でチューインガムを製造する。
【００５４】
［製造例６］キャンディ
砂糖６０％、水あめ３９％、及び香料０．５％と本発明の楡根皮及び決明子、蒲公英、スモモ抽出物０．５％を配合して通常の方法でキャンディを製造する。
【００５５】
［製造例７］ビスケット
薄力粉２５％、中力粉２３％、精白糖６％、食塩１％、パームショートニング１３％、ミルクフレーバ０．１％、脱脂粉乳３％、全粉乳７％、及び水１６．９％と本発明の楡根皮及び決明子、蒲公英、スモモ抽出物５％を配合して通常の方法でビスケットを製造する。
【００５６】
［製造例８］健康飲料
蜂蜜５重量％、果糖３％、塩酸リボフラビンナトリウム０．０００１％、塩酸ピリドキシン０．０００１％、及び水８６．９９９８％と本発明の楡根皮及び決明子、蒲公英、スモモ抽出物５％を配合して通常の方法で健康飲料を製造する。
【００５７】
［製造例９］健康機能食品
オクタコサノール粉末１５％、乳糖加水分解粉末１５％、分離大豆たんぱく粉末１５％、キトオリゴ糖１５％、酵母抽出物粉末１０％、ビタミンミネラル混合製材１０％、ステアリン酸マグネシウム４．６％、二酸化チタニウム０．２％、及びグリセリン脂肪酸エステル０．２％と本発明の楡根皮及び決明子、蒲公英、スモモ抽出物２０％を配合して通常の方法で錠剤型健康機能食品を製造する。
【００５８】
以上、本発明の実施例によって詳細に説明したが、本発明はこれに限定されず、本発明が属する技術分野において通常の知識を有するものであれば本発明の思想と精神を離脱することなく、本発明を修正または変更できる。
【図面の簡単な説明】
【００５９】
【図１】植物抽出物処理濃度別β−ヘキソサミニダーゼ（β−ｈｅｘｏｓａｍｉｎｉｄａｓｅ）の分泌量の変化を示すグラフである。
【図２】ＡＦ−３４３処理濃度によるβ−ヘキソサミニダーゼ（β−ｈｅｘｏｓａｍｉｎｉｄａｓｅ）の分泌量の変化を示すグラフである。
【図３】ＡＦ−３４３処理濃度によるＴＮＦ−αの分泌量の変化を示すグラフである。
【図４】ＡＦ−３４３処理濃度によるＩＬ−６分泌量の変化を示すグラフである。
【図５】ＡＦ−３４３処理濃度によるＩＬ−８分泌量の変化を示すグラフである。
【図６】ＡＦ−３４３の給与がアトピー性皮膚炎誘発物質処理マウスの耳の厚さに及ぼす影響を示す顕微鏡写真である。
【図７】アトピー性皮膚炎誘発物質処理の後、ＡＦ−３４３の投与が耳の組織に及ぼす影響を示す顕微鏡写真である。
【図８】アトピー性皮膚炎誘発物質処理の後、ＡＦ−３４３の投与が耳の組織に及ぼす影響を示す顕微鏡写真である。
【図９】アトピー性皮膚炎誘発物質処理の後、ＡＦ−３４３の投与が耳の組織に及ぼす影響を示す顕微鏡写真である。
【図１０】アトピー性皮膚炎誘発物質処理の後、ＡＦ−３４３の投与が耳の組織に及ぼす影響を示す顕微鏡写真である。
【図１１】アトピー性皮膚炎誘発物質処理の後、ＡＦ−３４３の投与が耳の組織に及ぼす影響を示す顕微鏡写真である。
【図１２】アトピー性皮膚炎誘発物質の処理後、ＡＦ−３４３の投与がマウスの血液内のＩｇＥ濃度に及ぼす影響を示すグラフである。
【図１３】ＡＦ−３４３の摂取がアトピー性皮膚炎の症状に及ぼす影響を示すグラフである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アトピー性皮膚炎の症状を改善させる植物混合抽出物を含有する組成物に係り、より詳細には、このような組成物、これを含む健康増進用食品及びアトピー性皮膚改善用組成物を製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
アトピー性皮膚炎は、増悪と寛解とが繰り返される慢性の炎症性皮膚疾患であって、そう痒症とアレルギー性鼻炎や喘息などにも関連する。
【０００３】
アトピー性皮膚炎は、その原因が十分には解明されていないが、下記のような原因によるとされている。即ち、アレルギーに係る免疫グロブリンであるＩｇＥの増加による免疫過敏反応またはＴリンパ球の機能不全によるものとされている。
【０００４】
ＩｇＥは、粘膜や皮膚の肥満細胞(ｍａｓｔ ｃｅｌｌ)に結合し、その濃度が高いと、肥満細胞からヒスタミン（ｈｉｓｔａｍｉｎｅ）が分泌されて炎症を生じさせる。多くのアトピー性皮膚炎患者において、血清ＩｇＥの値が上昇しており、その数値とアトピー性皮膚炎の臨床的重症度が正の相関があることに明らかになっている。
【０００５】
肥満細胞により、ＩｇＥの産生を誘導するＩＬ−４、ＩｇＥの生成を促進するＩＬ−５、ＩｇＥの生成を増幅させるＩＬ−６などのサイトカインを分泌するとされている。アトピー性皮膚炎の更に他の因子として、活性酸素を含むフリーラジカル（ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ）が考えられていて、活性酸素の発生が多すぎると皮膚細胞のコレステロールや中性脂肪などと反応して過酸化脂質が生成され、これによって皮膚角質層の保湿機能が低下することによってダニなど接触性の刺激に敏感になりアトピー性皮膚炎が発生するとされる。
【０００６】
このような免疫過敏反応と活性酸素の過剰発生は根本的な発生原因が明確ではないが、遺伝的原因の他、主に環境汚染によるダイオキシンのような環境ホルモンの人体内への流入など、外因的ストレスによる免疫系の機能悪化や障害によって発生すると考えられている。そして、アトピー性皮膚炎に伴い、二次的な細菌感染、薬物の副作用による感受性の上昇、真菌やウイルスなどの感染による抵抗力の低下なども現れる。
【０００７】
アトピー性皮膚炎を治療する方法としては、アレルギー源を除去するか免疫系を改善させる方法が行われているが、アレルギー源は除去しにくいため、主に免疫にかかわる治療と、肥満細胞からのヒスタミンの放出を減少させるための薬物治療を受けるのが一般的な方法である。現在行われている治療方法としては、免疫抑制剤を用いてアトピー性皮膚炎によって発生する各種症状を緩和させるか、もしくはアトピー性皮膚炎の患者の皮膚の乾燥を防ぐために保湿剤を塗布すると同時に、炎症を治療するために、外用合成副腎皮質ホルモン剤などを塗布している。
【０００８】
しかし、外用合成副腎皮質ホルモン剤を長期間用いる場合、皮膚の萎縮及び血管拡張など多様な皮膚の副作用を誘発するので、このような副作用を起こすことなく抗炎症効果を有する天然素材を開発するための研究が活発に進行されつつある。
【０００９】
アトピー性皮膚炎の症状緩和のための抗菌性及びフリーラジカル消去能を活用した天然物由来の先行技術としては、アトピー性皮膚炎の二次的な疾患である、皮膚炎をさらに悪化させる炎症を誘発する細菌等の増殖を抑制する抗菌成分を含有したアロエベラ、緑茶、及びオウゴン抽出物などを含有した化粧品（特許文献１）が開発され、霊芝、及び楡根皮、決明子、蒲公英などを用いて皮膚組織の角質化と感染した細菌の増殖を抑制しうる漢方化粧品（特許文献２）がある。
【００１０】
また、殺菌効果を有する桂枝抽出物を含有するアトピー性皮膚炎の緩和及び予防用化粧料（特許文献３）、苦参及び白きゅう、知母、小葉麦門冬（ジャノヒゲ）などの混合抽出物を有効成分にして抗菌及びフリーラジカルの消去、抗炎症、保湿効果を有してアトピー性皮膚炎を改善する化粧品（特許文献４）、白きゅう及び紫蘇、エキナシア、醗酵大豆抽出物を一定の割合で混合して抗菌効果及び保湿効果、抗炎症効果、フリーラジカル除去効果などがあってアトピー性皮膚炎の治癒改善効能を有する化粧品（特許文献５）、グアバ抽出物を醗酵して抗酸化及び抗菌、抗炎症効果を有するアトピー改善組成物（特許文献６）などが知られている。
【００１１】
そして、アロエ及び竹などに存在するイソオリエンチン（ｉｓｏｏｒｉｅｎｔｉｎ）を含み、過剰のヒスタミンによって惹起された疾患の予防あるいは治療用薬学組成物（特許文献７）が報告されている。
【００１２】
免疫過敏反応の抑制を通してアトピー性皮膚炎を治療する先行技術としては、三白草（ｓａｕｒｕｒｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）抽出物、あるいはこれから分離された（−）−ソーサーネオール（ｓａｕｃｅｒｎｅｏｌ）、ソーサーネオールＣ、マナサンチンＡまたはＢを有効成分として含有する免疫抑制用組成物であって、正常でないＢ細胞及びＴ細胞の増殖を効果的に抑制して、優れた免疫抑制効果を有するため、臓器移植拒否反応、自己免疫疾患、アレルギー、アトピーなどのような免疫過敏反応によって惹起される疾患の予防及び治療のための薬学組成物及び食品添加物（特許文献８）と、地楡（ｓａｎｕｉｓｏｒｂａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）抽出物を有効成分に含有する過敏性皮膚疾患治療剤で、ＩｇＥを減少させる効果及びフリーラジカル消去及び免疫細胞の増殖を促進する効果がり、細胞毒性の少ないアトピー性皮膚炎治療剤（特許文献９）が報告されている。
【００１３】
なお、蓁ぎょう（Ｇｅｎｔｉａｎａｅ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａｅ ｒａｄｉｘ）抽出物も地楡抽出物と同様の効果を有している皮膚疾患治療剤（特許文献１０）として知られていて、樺皮及び生地おう、玄参、当帰、桂枝、蒼朮、麻黄、羌活、荊芥、防風、細辛、川烏、川きゅう、甘草、何首烏、石雄黄を用いてＩｇＥ及びＩＬ−４などサイトカイン分泌を調節してアトピー性皮膚炎に役立つ漢薬組成物（特許文献１１）が報告されている。
【００１４】
しかし、アトピー性皮膚炎の発生原因のうち、ダイオキシンのような環境ホルモンによる免疫系の障害がもっとも深刻な発病原因と判断され、体内に吸収された環境ホルモンを解毒するとともに免疫過敏反応を起こすＩｇＥを減少させ、ＩＬ−６などのサイトカインの分泌を抑制させる物質を探索して適正割合で混合した新規な組成物の製造が要求されている。
【特許文献１】韓国特許出願第２００１−１６１６２号
【特許文献２】韓国特許出願第２００３−２８２７号
【特許文献３】韓国特許出願第２００２−６０２８６号
【特許文献４】韓国特許出願第２００３−５３３７０号
【特許文献５】韓国特許出願第２００３−３８８５１号
【特許文献６】韓国特許出願第２００６−１１６２７９号
【特許文献７】韓国特許出願第２００５−２２７７２号
【特許文献８】韓国特許出願第２００５−１３０６０１号
【特許文献９】韓国特許出願第２００５−２４４３０号
【特許文献１０】韓国特許出願第２００５−２４４２９号
【特許文献１１】韓国特許出願第２００５−２６５５１号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明の目的は、体内への環境ホルモンの流入による免疫系の混乱によって発生するアトピー性皮膚炎の予防及び治療に有用なアトピー性皮膚炎改善用組成物を提供することにある。また、本発明の目的は、前記組成物を含む健康増進用食品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
このような課題を実施するために本発明の一実施例によるアトピー性皮膚改善用組成物は、楡根皮、決明子、蒲公英、及びスモモ抽出物を含む。例えば、前記各抽出物は、全て同一の固形分含量を有するように濃縮されたものを基準に、１〜６０重量部の楡根皮抽出物、１〜６０重量部の決明子抽出物、１〜６０重量部の蒲公英抽出物、及び１〜６０重量部のスモモ抽出物を含んでいてもよい。
【００１７】
例えば、前記の各植物抽出物は、抽出液を乾燥させた粉末状態であってもよい。
【００１８】
本発明の一実施例による健康増進用食品は、前記の組成物を含有する。前記食品は、散剤、錠剤、カプセル剤、禅食、チューインガム、キャンディ、ビスケット、健康飲料などの形態に製造してもよい。
【００１９】
本発明の一実施例によるアトピー性皮膚炎予防及び治療用組成物の製造方法は、楡根皮、決明子、蒲公英、及びスモモにそれぞれ１０〜３０倍の有機溶媒を加え、有機溶媒が加えられたそれぞれの楡根皮、決明子、蒲公英、及びスモモを１０℃〜３０℃で２〜５日間抽出して濾過し、前記濾過後の結果物の減圧濃縮する、前記減圧濃縮の結果物を乾燥すること、を含む。
【００２０】
例えば、前記有機溶媒としては、４０〜９０％のエタノール水溶液を用いることができる。また、前記アトピー性皮膚炎及び治療用組成物の製造方法は、前記各楡根皮、決明子、蒲公英、及びスモモ抽出物は、全て同一の固形分含量を有するように濃縮されたものを基準に、１〜６０重量部の楡根皮抽出物、１〜６０重量部の決明子抽出物、１〜６０重量部の蒲公英抽出物、及び１〜６０重量部のスモモ抽出物を混合することを更に含むようにしてもよい。
【発明の効果】
【００２１】
本発明による組成物は、周辺で容易に得ることができる人体に無害な植物であって、過剰量服用しても副作用なしにアトピー性皮膚炎に代表される過敏性皮膚疾患の予防及び治療に優れる効果を有する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
前記目的を達成するために、本発明では、免疫調節活性のみならず炎症抑制効果を有する４種の植物抽出物を含有することを特徴とする天然物素材を提供する。例えば、前記各抽出物は、いずれも同一の固形分含量を有するように濃縮されたものを基準に、１〜６０重量部の楡根皮抽出物、１〜６０重量部の決明子抽出物、１〜６０重量部の蒲公英抽出物、及び１〜６０重量部のスモモ抽出物を含むことができる。以下、本発明をより詳細に説明する。
【００２３】
（実施例1）本発明から選別された４種の植物抽出物の製法
本発明から得られた４種の植物に対する抽出方法を整理すると下記のようである。
楡根皮抽出物の製法
楡根皮（Ｕｌｍｕｓ ｄａｖｉｄｉａｎａ ｖａｒ．）、すなわち、陰乾したニレの根の皮を粉砕機で細切してその体積に対して２〜２００倍、望ましくは１０〜３０倍の有機溶媒を加えて、１０〜５０℃で１〜１０日間、望ましくは２〜５日間抽出して濾過したした後、減圧濃縮して乾燥する工程によって製造することができる。このとき、抽出溶媒としてはエタノール及びメタノール、ジクロロメタンなどを用いることができ、４０〜９０％のエタノール水溶液が望ましい。
【００２４】
決明子抽出物の製法
決明子（Ｃａｓｓｉａ ｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａ）を粉砕した後、その体積に対して２〜２００倍、望ましくは１０〜３０倍の有機溶媒を加えて、１０〜３０℃で１〜１０日間、望ましくは２〜５日間抽出して濾過した後、減圧濃縮して乾燥する工程によって製造することができる。ここで、抽出溶媒としては、エタノール及びメタノール、ジクロロメタンなどを用いることができ、４０〜９０％のエタノール水溶液が望ましい。
【００２５】
蒲公英抽出物の製法
蒲公英（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｐｌａｔｙｃａｒｐｕｍ）を粉砕した後、その体積に対して２〜２００倍、望ましくは１０〜３０倍の有機溶媒を加えて、１０〜３０℃で１〜１０日間、望ましくは２〜５日間抽出して濾過した後、減圧濃縮して乾燥する工程によって製造することができる。ここで、抽出溶媒としては、エタノール及びメタノール、ジクロロメタンなどを用いることができ、４０〜９０％のエタノール水溶液が望ましい。
【００２６】
スモモ抽出物の製法
スモモ（Ｐｒｕｎｕｓ ｓａｌｉｃｉｎａ）の核を除去して４等分して５０℃以下の熱風乾燥または凍結乾燥した後、その体積に対して２〜２００倍、望ましくは１０〜３０倍の有機溶媒を加えて、１０〜３０℃で１〜１０日間、望ましくは２〜５日間抽出して濾過した後、減圧濃縮して乾燥する工程で製造することができる。ここで、抽出溶媒としては、エタノール及びメタノール、ジクロロメタンなどを用いることができ、４０〜９０％のエタノール水溶液が望ましい。
【００２７】
具体的に、本発明の望ましい実施例では、還流装置が接続された抽出機を用いて楡根皮及び決明子、蒲公英、スモモまたはそれの乾燥物に対して１０倍の７０％エタノール水溶液を用いて７２時間攪拌しながら抽出してから濾過し、濾液を減圧濃縮してエタノール抽出物を得、この抽出物に必要に応じてはマルトデキストリンのような賦形剤を添加して凍結乾燥するか、あるいは噴霧乾燥して抽出物粉末を得る。
【００２８】
（実施例２）脱顆粒抑制の効果
β−ヘキソサミニダーゼ（β−ｈｅｘｏｓａｍｉｎｉｄａｓｅ）は、ヒト肥満細胞（ｈｕｍａｎ ｍａｓｔ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ−１（ＨＭＣ−１））中の顆粒内にヒスタミン（ｈｉｓｔａｍｉｎｅ）のように存在する炎症前駆物質である。抗原が、肥満細胞（ｍａｓｔ ｃｅｌｌ）の細胞膜の表面に存在するＦｃ受容体と結合しているIｇＥ抗体との間に架橋結合（ｃｒｏｓｓ ｌｉｋｉｎｇ）を形成すると、細胞膜が活性化され、酵素反応を経て短時間に脱顆粒されてβ−ヘキソサミニダーゼとヒスタミンが分泌される。ヒスタミンは、肥満細胞内に低い濃度で存在し、その測定には多数の段階を経るため、分析偏差が大きい。そのため、比較的誤差が少なく、安定的に測定されるβ−ヘキソサミニダーゼアッセイ（β−ｈｅｘｏｓａｍｉｎｉｄａｓｅ ａｓｓａｙ）を用いた。
【００２９】
ＨＭＣ−１を培養した後、遠心分離して細胞を集め、サイロイドバッファー（ｔｈｙｒｏｉｄ ｂｕｆｆｅｒ）に２×１０６ｃｅｌｌ／ｍｌに濃度を合わせて９００μｌずつ４８ウェルプレート（４８ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ）に分取した。サイロイドバッファーに最終濃度が１０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌとなるように希釈された楡根皮及び決明子、蒲公英、スモモ抽出物を各ウェルに添加した後、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーター（ｉｎｃｕｂａｔｏｒ）で３０分間培養した後、脱顆粒誘発物質であるコンパウンド４８／８０（ｃｏｍｐｏｕｎｄ ４８／８０）を６μｇ／ｍｌの濃度になるように添加して、再び３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターで３０分間培養した。
【００３０】
４８ウェルプレートを１０分間アイスバス（ｉｃｅ ｂａｔｈ）に置いて反応を終結させた後、遠心分離して細胞を沈め、上澄液３０μｌを９６ウェルプレートに移した後、各ウェルに基質として１ｎＭ ｐ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ−Ｎ−ａｃｅｔｙｌ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｄｅの３０μｌを添加して３７℃で１時間反応させた後、１２０μｌの反応停止液（ｓｏｄｉｕｍ ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ、ｐＨ １０．２）を入れてエライザマイクロプレートリーダー（ＥＬＩＳＡ ｍｉｃｒｏ ｒｅａｄｅｒ）を用いて４０５ｎｍで吸光度を測定した。
β−ヘキソサミニダーゼ（β−ｈｅｘｏｓａｍｉｎｉｄａｓｅ）の分泌量は、下記の数式（１）を用いて求めた。
【００３１】
【数１】
【００３２】
前記式において、Ａはポジティブコントロール（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ）吸光度であり、Ｂは試料で処理したサンプルの吸光度を示す。
その結果を図１に示す。
【００３３】
即ち、コンパウンド４８／８０（ｃｏｍｐｏｕｎｄ ４８／８０）を単独処理したポジティブコントロールに比べて決明子及び楡根皮、蒲公英、スモモ抽出物を１０μｇ／ｍｌ処理した場合、９５％のレベルの有意差がある脱顆粒の抑制を示し、１００μｇ／ｍｌ処理時に全ての処理サンプルで、９９％のレベルの有意差がある脱顆粒の抑制を示した。
【００３４】
（実施例３）皮膚疾患の症状改善用混合抽出物（ＡＦ−３４３）の組成比
外部抗原に対する反応としてヒト肥満細胞（ｈｕｍａｎ ｍａｓｔ ｃｅｌｌ）の脱顆粒によるβ−ヘキソサミニダーゼとヒスタミンの分泌を抑制して、皮膚疾患に有用な４種の植物抽出物、即ち、楡根皮及び決明子、蒲公英、スモモ抽出物などをそれぞれ同一の成分割合に混合して天然物製剤（ＡＦ−３４３）を完成した。ＡＦ−３４３を用いてβ−ヘキソサミニダーゼ分泌抑制能を測定した結果、各植物の抽出物を単独に用いるよりも優れた効果を示した（図２）。即ち、１μｇ／ｍｌのレベルにおいても９５％レベルの有意差が認められ、処理濃度が増加するほど脱顆粒抑制効果が強く現れた。
【００３５】
（実施例４）免疫活性（ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ分泌量の抑制効果）
多くのアトピー性皮膚炎患者において、免疫過敏の反応として血清ＩｇＥ値が増加していて、ＩｇＥの生成を増幅させるＩＬ−６などのサイトカインを分泌することが知られている。よって、実施例３で、脱顆粒を抑制する効能が明らかになったＡＦ−３４３を用いて免疫活性にかかわるサイトカインの分泌量を確認した。
【００３６】
即ち、ＨＭＣ−１をＩＭＤＭに３×１０６ｃｅｌｌ／ｍｌの濃度で２４ウェルプレート（２４ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ）に分取し、混合抽出物１μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌの濃度に希釈された試料を添加して３７℃、５％のＣＯ２インキュベーターで３０分間培養した後、４０ｎＭのホルボール（ｐｈｏｒｂｏｌ）１２−ｍｙｒｉｓｔａｔｅ １３−ａｃｅｔａｔと１ｕＭのＣａｌｃｉｕｍ ｉｏｎｏｐｈｏｒｅ Ａ２３１８７Ｉを添加して３７℃、５％のＣＯ２インキュベーターで４時間培養した後、１２００ｒｐｍで５分間遠心分離して上澄液を得た。
【００３７】
この上澄液を用いてＴＮＦ−αとＩＬ−６、ＩＬ−８の定量はＱｕａｎｔｉｋｉｎｅ ｋｉｔ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、ｃａｔ．ＤＴＡ００Ｃ）を用いて定量し、ＲＴ−ＰＣＲ（Ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｅｓ−ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ）を用いて確認した。結果は、図３、図４、及び図５のようである。即ち、図３に示すＴＮＦ−αの場合、９５％の有意差レベルで１μｇ／ｍｌの濃度以上での処理時、有意に低下することに示されたが、濃度が増加してもその抑制力には大きな差異がないことがわかった。
【００３８】
また、ＩＬ−６の場合、図４のように９５％の有意差レベルで１μｇ／ｍｌの濃度以上での処理時、有意に低下することが示されたが、１０μｇ／ｍｌでは濃度増加による差はなく、１００μｇ／ｍｌ処理時に大きく減少することが示された。図５に示すＩＬ−８の場合、ＴＮＦ−αと類似に９５％の有意差レベルで１μｇ／ｍｌの濃度以上での処理時に有意に低下することが示されたが、濃度が増加してもその抑制力には大きな差異がないことがわかった。
【００３９】
（実施例５）抗炎症効能評価
アトピー性皮膚炎誘発モデルとしてよく知られている６週齢の雄のマウスＮＣ／Ｎｇａを用いて７日間、実験環境に適応させるため飼育した後、４週間の実験を行った。無処理群とアトピー性皮膚炎の誘発物質処理群、及びアトピー性皮膚炎誘発物質処理群にＡＦ−３４３を１．６６７ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ（体重６０ｋｇである場合１日０．１ｇ）、１６．６７ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ，１６６．７ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ経口投与した実験群に区分して実験した。
【００４０】
各試料は、同一時間に毎日経口投与し、対照群は１％のＤＭＳＯの含まれたＰＢＳ試料を投与したマウスに同様の方法で体重に合わせて投与した。また、アトピー性皮膚炎誘発のためにコナヒョウヒダニ（Ｄｅｒｍａｔｏ−ｐｈａｇｏｉｄｅｓ ｆａｒｉｎａｅ（ＤＦ））を抗原として用いて、二日に一度ずつ両耳に５ｍｇ／ｍｌの濃度で１０μｌずつ塗布した。炎症の発症現像を測定するために二日に一度ずつ抗原を塗布する前に、ノギス(ｖｅｒｎｉｅｒ ｃａｌｉｐｅｒｓ)を用いて耳の厚さを測定した。実験結果は、図６に示したとおりである。
【００４１】
即ち、１．６６７ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ以上、４週間経口投与時、アトピー性皮膚炎誘発物質処理群に比べて９５％のレベルの有意差で炎症が抑制されることがわかり、処理濃度が増加するほど炎症抑制効果が強く現れた。
【００４２】
図７〜図１１は、アトピー性皮膚炎誘発物質処理後、ＡＦ−３４３の投与が耳の組織に及ぼす影響を確認するために、耳組織をｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ ａｎｄ ｅｏｓｉｎ染色をして組織を観察した結果である。より詳細には、図７は正常群（ＮＣ）、図８はアトピー性皮膚炎誘発物質処理群（ＰＣ）、図９は１．６６７ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙを投与した群、図１０は、１６．６７ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙを投与した群、図１１は、１６６．７ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙを投与した群の耳組織の写真である。
【００４３】
図７〜図１１の顕微鏡写真でも確認できるように、正常群（ＮＣ）に比べてアトピー性皮膚炎誘発物質処理群（ＰＣ）では、浮腫が発生して組織が厚くなって破壊されることがわかった。そして、ＡＦ−３４３処理濃度が増加するに応じて耳の厚さが薄くなり、組織も正常化することがわかった。
【００４４】
(実施例６)実験動物の血中ＩｇＥの測定
図１２は、４週間試験飼育したＮＣ／Ｎｇａマウスの血清を採取してアトピー性皮膚炎の誘発にかかわるＩｇＥの濃度を測定した結果である。即ち、アトピー性皮膚炎誘発物質のみを処理したＰＣ群に比べて、アトピー性皮膚炎誘発物質で処理しＡＦ−３４３を１．６６７ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙずつ経口投与した場合、９５％の有意差レベルでＩｇＥの低下効果が示され、１６．６７ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ以上では、アトピー性皮膚炎誘発物質を処理しない正常群のＩｇＥの濃度とは差があるものの、９９％のレベルでＰＣ群に比べて有意差のあるＩｇＥの分泌を抑制することが示された。
【００４５】
(実施例７)臨床実験
アトピー性皮膚炎の一般人３０名を対象として、４週間、ＡＦ−３４３を５００ｍｇ／ｄａｙ投与した後、その治療効果を確認した質問の結果である（図１３）。質問の番号は下記の内容で、７点尺度法を用いて、最も深刻な場合７点、全然そうでない場合１点にして評価した。
【００４６】
１．石けんまたは化粧品の使用後、痒くてちくちくする程度がどれくらいですか。
２．花粉の飛ぶ季節には他の季節に比べて痒いかあるいは赤くなる程度がどれくらいですか。
３．腕の内側や首しわなど折られる部分に汗が出ると、痒いかあるいは赤くなる程度はどれくらいですか。
４．皮膚が乾燥しており、特に皮膚が更に乾燥した場合、痒いですか。
５．平素に患部の痒みの程度はどれくらいですか。
６．皮膚を掻いた後、痒いかあるいは赤く腫れる程度がどれくらいですか。
７．皮膚を掻いた後、掻いた部位に炎症が生じる程度どれくらいですか。
８．皮膚を掻いた後、掻いた部位に角質が生じる程度どれくらいですか。
９．寝ているとき、患部を掻いて血が出るか、あるいは痒みで目が覚めたことがありますか。
１０．ほこりの多い日に外出した後、患部の痒みや炎症が更にひどくなりますか。
【００４７】
図１３で示したように、アトピー性皮膚炎である一般人に１日にＡＦ−３４３ ５００ｍｇを４週間摂取させたとき、全ての項目でアトピー性皮膚炎にかかわる症状が緩和したことがわかった。
【００４８】
［製造例１］散剤
楡根皮及び決明子、蒲公英、スモモ抽出物 ２ｇ
乳糖 １ｇ
前記の成分を混合し、包装用袋に充填して散剤を製造する。
【００４９】
［製造例２］錠剤
楡根皮及び決明子、蒲公英、スモモ抽出物 １００mｇ
乳糖 １００mｇ
トウモロコシでんぷん １００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ２ｍｇ
前記の成分を混合した後、通常の錠剤の製造方法によって打錠して錠剤を製造する。
【００５０】
［製造例３］カプセル剤
楡根皮及び決明子、蒲公英、スモモ抽出物 １００mｇ
乳糖 １００mｇ
トウモロコシでんぷん １００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ２ｍｇ
前記の成分を混合した後、通常のカプセルの剤製造方法によってゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造する。
【００５１】
［製造例４］禅食
玄米４０％、麦３０％、はと麦２０％、アルファ米粉１０％を焙煎した後、粉砕機で粒度６０メッシュの穀類粉末を作る。
黒豆４０％、黒ゴマ３０％、エゴマ３０％を焙煎した後、粉砕機で粒度６０メッシュの種実類粉末を作る。
【００５２】
本発明の楡根皮及び決明子、蒲公英、スモモ抽出物を、噴霧乾燥機を用いて乾燥粉末を作る。
前記製造した穀類７５％、種実類２０％、及び楡根皮及び決明子、蒲公英、スモモ抽出物の乾燥粉末５％を配合した後、顆粒化して禅食を製造する。
【００５３】
［製造例５］チューインガム
ガムベース２０％、砂糖７６％、香料１．５％、及び水２％と本発明の楡根皮及び決明子、蒲公英、スモモ抽出物０．５％を配合して通常の方法でチューインガムを製造する。
【００５４】
［製造例６］キャンディ
砂糖６０％、水あめ３９％、及び香料０．５％と本発明の楡根皮及び決明子、蒲公英、スモモ抽出物０．５％を配合して通常の方法でキャンディを製造する。
【００５５】
［製造例７］ビスケット
薄力粉２５％、中力粉２３％、精白糖６％、食塩１％、パームショートニング１３％、ミルクフレーバ０．１％、脱脂粉乳３％、全粉乳７％、及び水１６．９％と本発明の楡根皮及び決明子、蒲公英、スモモ抽出物５％を配合して通常の方法でビスケットを製造する。
【００５６】
［製造例８］健康飲料
蜂蜜５重量％、果糖３％、塩酸リボフラビンナトリウム０．０００１％、塩酸ピリドキシン０．０００１％、及び水８６．９９９８％と本発明の楡根皮及び決明子、蒲公英、スモモ抽出物５％を配合して通常の方法で健康飲料を製造する。
【００５７】
［製造例９］健康機能食品
オクタコサノール粉末１５％、乳糖加水分解粉末１５％、分離大豆たんぱく粉末１５％、キトオリゴ糖１５％、酵母抽出物粉末１０％、ビタミンミネラル混合製材１０％、ステアリン酸マグネシウム４．６％、二酸化チタニウム０．２％、及びグリセリン脂肪酸エステル０．２％と本発明の楡根皮及び決明子、蒲公英、スモモ抽出物２０％を配合して通常の方法で錠剤型健康機能食品を製造する。
【００５８】
以上、本発明の実施例によって詳細に説明したが、本発明はこれに限定されず、本発明が属する技術分野において通常の知識を有するものであれば本発明の思想と精神を離脱することなく、本発明を修正または変更できる。
【図面の簡単な説明】
【００５９】
【図１】植物抽出物処理濃度別β−ヘキソサミニダーゼ（β−ｈｅｘｏｓａｍｉｎｉｄａｓｅ）の分泌量の変化を示すグラフである。
【図２】ＡＦ−３４３処理濃度によるβ−ヘキソサミニダーゼ（β−ｈｅｘｏｓａｍｉｎｉｄａｓｅ）の分泌量の変化を示すグラフである。
【図３】ＡＦ−３４３処理濃度によるＴＮＦ−αの分泌量の変化を示すグラフである。
【図４】ＡＦ−３４３処理濃度によるＩＬ−６分泌量の変化を示すグラフである。
【図５】ＡＦ−３４３処理濃度によるＩＬ−８分泌量の変化を示すグラフである。
【図６】ＡＦ−３４３の給与がアトピー性皮膚炎誘発物質処理マウスの耳の厚さに及ぼす影響を示す顕微鏡写真である。
【図７】アトピー性皮膚炎誘発物質処理の後、ＡＦ−３４３の投与が耳の組織に及ぼす影響を示す顕微鏡写真である。
【図８】アトピー性皮膚炎誘発物質処理の後、ＡＦ−３４３の投与が耳の組織に及ぼす影響を示す顕微鏡写真である。
【図９】アトピー性皮膚炎誘発物質処理の後、ＡＦ−３４３の投与が耳の組織に及ぼす影響を示す顕微鏡写真である。
【図１０】アトピー性皮膚炎誘発物質処理の後、ＡＦ−３４３の投与が耳の組織に及ぼす影響を示す顕微鏡写真である。
【図１１】アトピー性皮膚炎誘発物質処理の後、ＡＦ−３４３の投与が耳の組織に及ぼす影響を示す顕微鏡写真である。
【図１２】アトピー性皮膚炎誘発物質の処理後、ＡＦ−３４３の投与がマウスの血液内のＩｇＥ濃度に及ぼす影響を示すグラフである。
【図１３】ＡＦ−３４３の摂取がアトピー性皮膚炎の症状に及ぼす影響を示すグラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アトピー性皮膚炎の予防及び治療に効果を有する楡根皮、決明子、蒲公英、及びスモモ抽出物を含むことを特徴とする組成物。
【請求項２】
前記各抽出物は、全て同一の固形分含量を有するように濃縮されたものを基準に、１〜６０重量部の楡根皮抽出物、１〜６０重量部の決明子抽出物、１〜６０重量部の蒲公英抽出物、及び１〜６０重量部のスモモ抽出物を含むことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記各抽出物は、抽出液を乾燥させた粉末状態であることを特徴とする請求項１又は請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
請求項１から請求項３の何れかによる組成物を含有することを特徴とする健康増進用食品。
【請求項５】
前記食品が飲料形態であることを特徴とする請求項４に記載の乾燥増進用食品。
【請求項６】
楡根皮、決明子、蒲公英、及びスモモにそれぞれ１０〜３０倍の有機溶媒を加え、
前記有機溶媒が加えられたそれぞれの楡根皮、決明子、蒲公英、及びスモモを１０℃〜３０℃で２〜５日間抽出して濾過し、
前記濾過後の結果物を減圧して濃縮し、
前記減圧濃縮の結果物を乾燥する、ことを含むアトピー性皮膚炎の予防及び治療用組成物の製造方法。
【請求項７】
前記有機溶媒は、４０〜９０％のエタノール水溶液であることを特徴とする請求項６に記載のアトピー性皮膚炎の予防及び治療用組成物の製造方法。
【請求項８】
前記楡根皮、決明子、蒲公英、及びスモモの抽出物は、全て同一の固形分含量を有するように濃縮されたものを基準に、１〜６０重量部の楡根皮抽出物、１〜６０重量部の決明子抽出物、１〜６０重量部の蒲公英抽出物、及び１〜６０重量部のスモモ抽出物を混合することを更に含むことを特徴とする請求項６に記載アトピー性皮膚炎の予防及び治療用組成物の製造方法。
【請求項１】
アトピー性皮膚炎の予防及び治療に効果を有する楡根皮、決明子、蒲公英、及びスモモ抽出物を含むことを特徴とする組成物。
【請求項２】
前記各抽出物は、全て同一の固形分含量を有するように濃縮されたものを基準に、１〜６０重量部の楡根皮抽出物、１〜６０重量部の決明子抽出物、１〜６０重量部の蒲公英抽出物、及び１〜６０重量部のスモモ抽出物を含むことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記各抽出物は、抽出液を乾燥させた粉末状態であることを特徴とする請求項１又は請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
請求項１から請求項３の何れかによる組成物を含有することを特徴とする健康増進用食品。
【請求項５】
前記食品が飲料形態であることを特徴とする請求項４に記載の乾燥増進用食品。
【請求項６】
楡根皮、決明子、蒲公英、及びスモモにそれぞれ１０〜３０倍の有機溶媒を加え、
前記有機溶媒が加えられたそれぞれの楡根皮、決明子、蒲公英、及びスモモを１０℃〜３０℃で２〜５日間抽出して濾過し、
前記濾過後の結果物を減圧して濃縮し、
前記減圧濃縮の結果物を乾燥する、ことを含むアトピー性皮膚炎の予防及び治療用組成物の製造方法。
【請求項７】
前記有機溶媒は、４０〜９０％のエタノール水溶液であることを特徴とする請求項６に記載のアトピー性皮膚炎の予防及び治療用組成物の製造方法。
【請求項８】
前記楡根皮、決明子、蒲公英、及びスモモの抽出物は、全て同一の固形分含量を有するように濃縮されたものを基準に、１〜６０重量部の楡根皮抽出物、１〜６０重量部の決明子抽出物、１〜６０重量部の蒲公英抽出物、及び１〜６０重量部のスモモ抽出物を混合することを更に含むことを特徴とする請求項６に記載アトピー性皮膚炎の予防及び治療用組成物の製造方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【公開番号】特開２００９−２２７６５４（Ｐ２００９−２２７６５４Ａ）
【公開日】平成２１年１０月８日（２００９．１０．８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−２８８６００（Ｐ２００８−２８８６００）
【出願日】平成２０年１１月１１日（２００８．１１．１１）
【出願人】（５９９１５１２８２）大韓民国農村振興庁 (16)
【氏名又は名称原語表記】ＲＵＲＡＬ ＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴ ＡＤＭＩＮＩＳＴＲＡＴＩＯＮ
【住所又は居所原語表記】２５０ Ｓｅｏｄｕｎｄｏｎｇ，Ｋｗｏｎｓｅｏｎｇｕ，Ｓｕｗｏｎ，Ｇｙｅｏｎｇｉｄｏ ４４１−７０７，Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｋｏｒｅａ
【出願人】（５０８３３５４５１）スン キュン バイオテック カンパニー リミテッド (1)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年１０月８日（２００９．１０．８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１１月１１日（２００８．１１．１１）
【出願人】（５９９１５１２８２）大韓民国農村振興庁 (16)
【氏名又は名称原語表記】ＲＵＲＡＬ ＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴ ＡＤＭＩＮＩＳＴＲＡＴＩＯＮ
【住所又は居所原語表記】２５０ Ｓｅｏｄｕｎｄｏｎｇ，Ｋｗｏｎｓｅｏｎｇｕ，Ｓｕｗｏｎ，Ｇｙｅｏｎｇｉｄｏ ４４１−７０７，Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｋｏｒｅａ
【出願人】（５０８３３５４５１）スン キュン バイオテック カンパニー リミテッド (1)
【Ｆターム（参考）】
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