再発性多発性硬化症治療のためのＴＡＣＩ−免疫グロブリン融合タンパク質
本発明は、再発性多発性硬化症の治療のためのＴＡＣＩ−免疫グロブリン融合タンパク質に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、多発性硬化症の分野におけるものである。より詳細には、これは、再発性多発性硬化症の治療のためのＴＡＣＩ−免疫グロブリン（Ｉｇ）融合タンパク質の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
ＢＬｙＳリガンド／受容体ファミリー
２種の増殖因子ＢＬｙＳ（Ｂリンパ球刺激因子）及びＡＰＲＩＬ（増殖誘発リガンド）に関する独自の結合親和性を有する、３種の受容体ＴＡＣＩ（膜貫通アクチベーター及びＣＡＭＬ−インターアクター）、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）及びＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子の受容体）が同定されている(Marstersら、2000；Thompsonら、2001)。
【０００３】
ＴＡＣＩ及びＢＣＭＡは、ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬの両方に結合するが、ＢＡＦＦ−Ｒは、ＢＬｙＳのみに高親和性で結合することが可能であるように見える(Marstersら、2000；Thompsonら、2001)。結果として、ＢＬｙＳは、３種全ての受容体を通じてシグナル伝達することができのに対し、ＡＰＲＩＬは、ＴＡＣＩ及びＢＣＭＡのみを通じてシグナル伝達することが可能であるように見える。加えて、ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬの循環性ヘテロ三量体型複合体（ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬの各サブユニットの１個又は２個のコピーを含む、３個のタンパク質サブユニットのグループ化）が、全身性免疫−ベースのリウマチ疾患の患者から採取された血清試料中において同定され、かつインビトロにおいてＢ細胞増殖を誘導することが示されている(Roschkeら、2002)。
【０００４】
ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬは、Ｂ細胞の成熟、増殖及び生存の強力な刺激因子である(Mooreら、1999；Schneiderら、1999；Doら、2000)。ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬは、自己免疫疾患、特にＢ細胞に関与した疾患の持続に必要であることがある。高レベルのＢＬｙＳを発現するように操作されたトランスジェニックマウスは、免疫細胞障害を示し、かつ全身性紅斑性狼瘡患者において認められる症状に類似した症状を呈する(Grossら、2000；Mackayら、1999)。同様に増大したレベルのＢＬｙＳ／ＡＰＲＩＬが、全身性紅斑性狼瘡患者及び関節リウマチのような他の様々な自己免疫疾患の患者から採取された血清試料中で測定され(Roschke、2002；Cheemaら、2001；Groomら、2002)、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬとＢ細胞媒介型疾患の関係を、動物モデルからヒトまで拡大している。ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬの発現は、ＭＳ患者の末梢血単球及びＴ細胞においてアップレギュレートされる(Thangarajhら、2004；Thangarajhら、2005)。ＭＳ病巣において、ＢＬｙＳ発現は、ＢＡＦＦ−Ｒを発現している免疫細胞近くに局在化された星状膠細胞上で強力にアップレギュレートされることがわかった(Krumbholzら、2005)。
【０００５】
アタシセプト
アタシセプト(atacicept)（ＩＮＮ）は、受容体ＴＡＣＩ（膜貫通アクチベーター及びカルシウムモジュレーター及びシクロフィリンリガンド（ＣＡＭＬ）−インターアクター）の細胞外リガンド結合部分及びヒトＩｇＧの修飾されたＦｃ部分を含む、組換え融合タンパク質である。アタシセプトは、ＢＬｙＳ（Ｂリンパ球刺激因子）及びＡＰＲＩＬ（増殖誘発リガンド）に対するアンタゴニストとして作用し、これらは両方共腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーの一員である。ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬは、Ｂ細胞成熟機能及び生存の重要な調節因子であることが示されている。
【０００６】
アタシセプトは、ヒトＩｇＧ１−ＦｃとＢＬｙＳ受容体ＴＡＣＩの細胞外ドメインの融合から生じる、３１３個のアミノ酸を含む可溶性糖タンパク質であり、推定質量は３５．４キロダルトン（ｋＤａ）である。この生成物の高次構造は、二量体であり、推定質量は７３．４ｋＤａである。アタシセプトは、チャイニーズはムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞から、組換え技術により作製される。
【０００７】
アタシセプトにおいて、ヒトＩｇＧ１−Ｆｃは、補体Ｃ１ｑ成分へのＦｃ結合及び抗体受容体との相互作用を低下するように修飾された(Taoら、1993；Canfieldら、1991)。アタシセプトは、これらのＦｃエフェクター機能について試験されかつ確認された。
【０００８】
多発性硬化症（ＭＳ）
多発性硬化症（ＭＳ）は、中枢神経系（ＣＮＳ）の慢性の炎症性脱髄疾患であり、かつ若年成人の神経性身体障害の最も一般的原因のひとつである。これは、変動する回復を伴う神経学的症状及び徴候の多病巣性再発性攻撃（再発）により特徴づけられる。最終的に、これらの被験者の大半は、進行性の臨床経過を呈する。
【０００９】
世界中で、成人およそ１５０万人が罹患している。本疾患は、女性の方が男性よりも２倍罹患し、時間とともに注目に値する身体障害を引き起こし、かつ該患者の生涯にわたり継続する。
【００１０】
ＭＳの正確な原因は不明であるが、自己免疫プロセスが関与している。遺伝的易罹患性は、疾患開始において非常に良好に役割を果たすように見えるが、現在確定されていない環境因子も恐らく関与しているであろう。ＣＮＳ抗原と自己反応性であるＴ細胞は、末梢循環において刺激され、かつＣＮＳへ動員されることが推定されている。抗原提示細胞による再刺激時に、自己反応性Ｔ細胞は増殖し、かつ脳内で前炎症カスケードを開始する。この炎症は、時間をかけて脱髄を生じ、最終的には軸索及び脳容積を喪失する。
【００１１】
主にＴ細胞媒介型疾患であるＭＳのパラダイムは、近年変化している(Klawiter及びCross、2007；Antelら、2006；Hauboldら、2004；Soderstronら、1993)。医学界には、Ｂ細胞は、主に以下の２つの機序により視神経炎及びＭＳ病理に貢献するという共通の理解が存在する：（１）ＣＤ４ Ｔ細胞を再刺激しかつ前炎症性サイトカインを生じる抗原提示細胞として働くことにより、細胞レベルで、並びに（２）ＣＮＳ成分に対する抗体の産生により、液性免疫のレベルで。組織学的分析は、ＭＳ集団の顕著な割合におけるＢ細胞及び抗体媒介型病理を示唆している。再発寛解型ＭＳ集団において試験された抗−Ｂ細胞薬であるリツキシマブによる第ＩＩ相試験からの有望な結果が最近報告された(Hauserら、2007)。
【００１２】
病理学的変化のいくつかの相が、ＭＳにおいて生じ、かつ血液脳障壁（ＢＢＢ）の破壊、それに続く浮腫、サイトカイン放出によるリンパ球浸潤、脱髄、及び軸索離断を含む。機能障害は、これらの病理学的相関関係のいずれかにより生じ得るが、永久欠損は、脱髄及び軸索崩壊の両方の存在において認められる。ＭＲＩ及び病理検査の両方からの証拠は、そこには、例え本疾患の初期であっても、様々な程度の軸索の機能障害又は消失が存在することを示している(Fergusonら、1997；Trappら、1998；Fuら、1998；Iannucciら、2000)。
【００１３】
ＭＳを規定する４種の臨床型が認められ、すなわち：一次進行型（ＰＰＭＳ）、進行再発型（ＰＲＭＳ）、二次進行型（ＳＰＭＳ）、及び再発寛解型（ＲＲＭＳ）である。一次進行型ＭＳ被験者は、ＭＳ被験者の約１０％を含んでいる。それらの疾患は、重複性(superimposed)攻撃を伴わない、発症開始からの神経学的欠損のゆっくりとした着実な蓄積により特徴づけられる。被験者の小さい割合は、同様の発症を有するが、場合によっては再発を伴う（進行再発型）。
【００１４】
ＲＲＭＳ被験者は、引き続き変動する回復（寛解）を伴いながら増悪又は再発する。被験者の４０〜５０％は、再発寛解型の経過を辿るが、ＭＳの発症時に、被験者の８０〜８５％は、該疾患のＲＲ型を有するであろう。総合障害度（ＥＤＳＳ）スコア＜４を持つほとんどの被験者は、多発性硬化症の再発寛解型を有する。被験者の約１０％は、良性多発性硬化症であり、これは１０〜１５年罹患後のＥＤＳＳスコアが３未満である、長期にわたる著しく残存性の神経学的欠損の蓄積の欠如により特徴づけられるＲＲＭＳサブセットである。
【００１５】
ＲＲＭＳ被験者の５０％は、発症の１０年以内にＳＰＭＳへ移行し、移行時点のピークは、本疾患発症後約８年である。ＳＰＭＳへ進行するＲＲＭＳの割合は、２５年で８０％に達する。ＳＰＭＳは、重複性再発を伴う又は伴わない、重大かつ持続性の神経学的欠損の着実な蓄積により特徴づけられる。ＥＤＳＳスコアが６．０又はそれよりも高い被験者の大半は、ＳＰＭＳである。
【００１６】
アジア人には、視神経脊髄型（ＯＳ−多発性硬化症）及び通常型（Ｃ−多発性硬化症）の二つの個別の多発性硬化症亜型が存在する。ＯＳ−多発性硬化症において、視神経及び脊髄の選択的かつ重篤な関与が特徴である。
【００１７】
疾患修飾性治療、すなわちＭＳの経過を修飾する治療である現在のＭＳ薬物治療は、免疫系を調節又は抑制する。再発性ＭＳに関してＦＤＡが承認した免疫調節薬が存在する：３種のβインターフェロン（レビフ(Rebif)（登録商標）-Merck Serono社；ベタセロン(Betaseron)（登録商標）-Berlex社；アボネックス(Avonex)（登録商標）-Biogen社)、及び酢酸グラチラマー(コパクソン(Copaxone)（登録商標）-Teva社)。ＦＤＡは、再発性多発性硬化症の単剤療法として特別に制限された流通(distribution)プログラムの下で、ナタリズマブ(Tysabri（登録商標）-Biogen社とElan社)も承認している。加えて、進行性又は慢性ＭＳのためのＦＤＡが承認した１種の免疫抑制薬、ミトキサントロン(Novantrone（登録商標）-Merck Serono社)が存在する。
【００１８】
ＭＳの治療において、例えばクラドリビン、塩素化されたプリンアナログである２−クロロ−２’デオキシアデノシン（２−ＣｄＡ）などの、いくつかの他の免疫抑制薬が評価されつつあるが、まだＦＤＡは承認していない(EP 626 853)。
【００１９】
ＭＳは慢性疾患であり、かつＭＳの再発型は頻繁に進行型へと悪化するので、新規かつ有効な再発性ＭＳ治療の可能性を有することは有益である。
【発明の概要】
【００２０】
発明の概要
本発明は、再発性多発性硬化症に罹患している患者におけるアタシセプトの有益な作用を評価する臨床試験を基にしている。
従って本発明は、再発性多発性硬化症の治療のためのＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質、及び再発性多発性硬化症を治療するのに有効な量のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質を含有する組成物を患者へ投与することを含む再発性多発性硬化症の治療方法に関する。
【００２１】
本発明は、アジア人患者における多発性硬化症亜型を構成している、視神経脊髄型（ＯＳ−多発性硬化症）及び通常型（Ｃ−多発性硬化症）にも適用されることは理解される。
【００２２】
再発性多発性硬化症は、Polmanらの論文(2005)に説明されたように改訂McDonald判定基準によるか、又は下記実施例１の付表Ａにおいて規定される。ここで再発性多発性硬化症は、患者における疾患活動の空間的及び時間的散在性(dissemination)により特徴づけられる。空間的散在性は：
−少なくとも１カ所のガドリニウム−増強病変、又はＧｄ−増強病変が存在しない場合には、９カ所のＴ２−高信号病変；
−少なくとも１カ所のテント下病変；
−少なくとも１カ所の傍皮質病変；
−少なくとも１カ所の室周囲病変：の少なくとも３つにより特徴づけられる。時間的散在性は：
−最初の臨床事象の開始後少なくとも３ヶ月経過した時点での、この最初の事象に対応しない部位でのＧｄ−増強の検出；及び
−最初の臨床事象の開始後少なくとも３０日間で実行された参照スキャンと比較し、任意の時点で現れる、新規Ｔ２病変の検出：の少なくとも一つを決定することにより、造影技術を用い測定可能である。
【００２３】
本発明に従い、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、
ａ）ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合するＴＡＣＩ細胞外ドメイン又はそれらの断片若しくは変種；並びに
ｂ）ヒト免疫グロブリン−定常ドメイン：を含んでなる。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
図面の簡単な説明
【図１】図１は、実施例１において説明された４アームのランダム二重盲検プラセボ対照多施設共同第ＩＩ相試験の治験デザインを示す。
【図２】図２は、改訂McDonald判定基準に従う「時間的散在性」のＭＲＩベースの確定に関するフローチャートを示す。Ｇｄ＝ガドリニウム−ＤＴＰＡ、実施例１付表Ａも参照のこと。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
発明の詳細な説明
本発明は、再発性多発性硬化症（再発性ＭＳ又はＲＭＳ）は、アタシセプト有効量を投与することにより治療することができるという知見を基にしている。
従って本発明は、再発性多発性硬化症の治療のためのＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質、及び再発性多発性硬化症治療有効量のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質を含有する組成物の患者への投与を含む再発性多発性硬化症の治療方法に関する。
【００２６】
再発性多発性硬化症は、Polmanらの論文(2005)に説明されたように改訂McDonald判定基準によるか、又は下記実施例１の付表Ａにおいて規定される。ここで再発性多発性硬化症は、患者における疾患活動の空間的及び時間的散在性により特徴づけられる。空間的散在性は：
−少なくとも１カ所のガドリニウム−増強病変、又はＧｄ−増強病変が存在しない場合には、９カ所のＴ２−高信号病変；
−少なくとも１カ所のテント下病変；
−少なくとも１カ所の傍皮質病変；
−少なくとも１カ所の室周囲病変：の少なくとも３つにより特徴づけられる。
【００２７】
時間的散在性は：
−最初の臨床事象の開始後少なくとも３ヶ月経過した時点での、この最初の事象に対応しない部位でのＧｄ−増強の検出；及び
−最初の臨床事象の開始後少なくとも３０日間で実行された参照スキャンと比較し、任意の時点で現れる、新規Ｔ２病変の検出：の少なくとも一つにより、造影技術を用い測定可能である。
【００２８】
本発明の一実施態様において、ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、再発寛解型多発性硬化症（ＲＲＭＳ）、重複性再発を伴う二次進行型多発性硬化症（ＳＰＭＳ）、及び進行再発型多発性硬化症（ＰＲＭＳ）から選択される再発性多発性硬化症（ＲＭＳ）の治療のためである。
【００２９】
ＭＳの進行型は一般に、レトロスペクティブ又はプロスペクティブに決定することができる、１年間の疾患進行、それに加え下記判定基準の２項目により特徴づけられる：（ａ）陽性の脳ＭＲＩ（９カ所のＴ２病変又は４カ所以上の正の視覚誘発電位を伴うＴ２病変）；（ｂ）陽性の脊髄ＭＲＩ（少なくとも２カ所の限局性Ｔ２病変）；（ｃ）ＩｇＧオリゴクローナルバンド又は増大したＩｇＧインデックス、又はこれら両方の等電点電気泳動での証拠による、陽性の脳脊髄液（ＣＳＦ）。
【００３０】
別の本発明の実施態様において、再発性多発性硬化症に罹患している患者は、下記パラメータの少なくとも一つにより特徴づけられる：
ａ）ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質による治療以前２年間に少なくとも２回の再発；
ｂ）ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質による治療以前１年間に少なくとも１回の再発；又は
ｃ）ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質による治療以前に、核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）時に検出された少なくとも１カ所のガドリニウム−ＤＴＰＡ（Ｇｄ）−増強病変。
【００３１】
再発性ＭＳにおいて、臨床再発は一般に、少なくとも１ヶ月隔てられる。
臨床攻撃又は再発は、下記の３種の判定基準により規定することができる（同じく実施例１の付表Ｃ参照）：
（１）（ｉ）先行する臨床事象の発症から少なくとも３０日隔てられた神経学的異常、及び（ｉｉ）少なくとも２４時間持続する神経学的異常：の両方により特定された異常を伴う、新たに出現した又は再出現したのいずれかの神経学的異常；
（２）発熱又は既知の感染症が存在しないこと（温度（腋窩、経口又は尿道で(intrauriculary)測定）３７．５℃／９９．５°Ｆ以上の発熱）；
（３）ｉ）ＥＤＳＳの機能別障害度の少なくとも１の上昇、又はｉｉ）総ＥＤＳＳスコアの増加：のいずれかとして規定された、被験者の報告された症状に相関する、主観的神経学的機能障害。
【００３２】
図２に示されたように、病変の時間的散在性に関する核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）判定基準は、初期臨床事象の発症後少なくとも３０日で実行されたいわゆる参照スキャン以降、任意の時点で生じる少なくとも１カ所の新規Ｔ２病変として規定されている。あるいは、ＭＲＩスキャンは、症状の発症後少なくとも３ヶ月間行われ、かつ時間的散在性は、少なくとも１カ所の新規ガドリニウム（Ｇｄ）−増強病変により確立される。「新規」病変とは、初期臨床事象に関与した部位では生じていない病変である。
【００３３】
下記判定基準のうちの３項目が満たされる場合に、脳の異常及び空間的散在性が、ＭＲＩにより明らかにされる：（１）少なくとも１カ所のガドリニウム−増強病変、又はＧｄ−増強病変が存在しない場合には、９カ所のＴ２−高信号病変；（２）少なくとも１カ所のテント下病変；（３）少なくとも１カ所の傍皮質病変；（４）少なくとも３カ所の室周囲病変。脊髄病変は、脳テント下病変と同等と考えることができる。増強する脊髄病変は、増強する脳病変と同等と考えられ、個々の脊髄病変は、個々の脳病変と一緒に、必要数のＴ２病変に達するのに貢献する。
【００３４】
本発明の状況において用語「治療」は、本疾患に関する任意の有益な作用をいい、これは病理学的顕在化又は本疾患の発症の前後の患者により顕在化された１種以上の症状の減弱、軽減、減少、減退又は緩和を含み、更には本疾患の又はそれらの症状の進行の遅延も含む。
【００３５】
特に本発明による再発性ＭＳの治療は、下記の少なくとも１項目により特徴づけられる：（ａ）ＭＲＩにより測定可能な、未治療の患者と比べ軽減されたＣＮＳ炎症、例えば、未治療の患者と比べ、３、６若しくは９ヶ月間などの長期にわたる治療で、ＭＲＩにおけるＴ１ガドリニウム−増強病変の平均数の減少、又は未治療の患者と比べ、３、６若しくは９ヶ月間の治療後のＭＲＩにおける新規Ｔ１高信号病変の数の減少；（ｃ）所定の患者における少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヶ月以上の間の、再発数の減少、好ましくは再発なし；（ｄ）所定の患者における、総合障害度（ＥＤＳＳ）の改善若しくは安定化、及び／又は多発性硬化症機能的要素検査（ＭＳＦＣ）の改善。
【００３６】
ＥＤＳＳは、疾患重症度を説明する分類スキーム（等級化基準）であり、臨床試験に登録されることが容認される病期を規定するために使用される。これは神経科医により、患者の類似した群別のために、多発性硬化症の身体障害の進行を経過観察し、かつ治療結果を評価するためにも使用される。機能別障害度（ＦＳ）の基準は、その全般的フレームワーク内に組込まれている。
【００３７】
ＥＤＳＳ尺度は、以下のように規定されている(Kurtzke, Neurology, 1983, 33:1444-52)：
０．０−神経学的検査で正常；
１．０−身体障害なし、１ＦＳの極軽い徴候；
１．５−身体障害なし、７ＦＳの２の極軽い徴候；
２．０−７ＦＳの１の極軽い身体障害；
２．５−２ＦＳの極軽い身体障害；
３．０−１ＦＳの中等度身体障害；又は、完全に歩行可能であるが、３−４ＦＳの軽度の身体障害；
３．５−完全に歩行可能であるが、１ＦＳの中等度身体障害、及び１若しくは２ＦＳの軽度身体障害；又は、２ＦＳの中等度身体障害；又は、５ＦＳの軽度身体障害；
４．０−補助なしで完全に歩行可能、比較的高度身体障害にもかかわらず１日約１２時間起き上がって動き回る。補助なし歩行可動域が５００ｍ；
４．５−補助なし完全な歩行、一日の大半を起きあがって動き回る、終日の十分な活動ができる、そうでなければ十分な活動に若干の制限があるか、若しくは最小限の補助を必要とすることがある。比較的高度身体障害。補助なし歩行可動域が３００ｍ；
５．０−補助なし約２００ｍ歩行。終日の十分な活動を損なう身体障害；
５．５−１００ｍ歩行、終日の十分な活動ができない身体障害；
６．０−休憩を入れて若しくは入れずに１００ｍ歩行するために必要な、断続的又は片側付きっきりの補助（杖、松葉杖、若しくは装具）；
６．５−休憩を入れずに２０ｍ歩行するために必要な、両側付きっきりの補助（杖、松葉杖、若しくは装具）；
７．０−補助あっても５ｍ以上歩けず、車椅子に本質的に制限される、車椅子を自分で動かせ、独りで乗降できる；１日約１２時間の車椅子での活動；
７．５−２、３歩以上歩けず、車いすに制限される、動かすのに補助必要なことがある；車椅子を自分で動かせるが、終日の活動のために電動椅子が必要なことがある；
８．０−ベッド、椅子又は車椅子に本質的に制限されるが、１日の大半はベッド外であることができる；身の回りのことを行う機能は維持され、一般に腕は有効に使える；
８．５−一日の大半は本質的にベッドに制限、腕の使用はある程度有効、身の回りのことを行う機能はある程度維持されている；
９．０−体が不自由なベッド生活、意思伝達及び飲食はできる；
９．５−有効な意思伝達又は飲食／嚥下できず；
１０．０−死亡。
【００３８】
機能別障害度（ＦＳ）の基準は、以下に言及する(Kurtzke, Neurology, 1983, 33:1444-52)：身体機能を調節するＣＮＳ領域：錐体路（歩行能）、小脳（協調）、脳幹（発語及び嚥下）、感覚（触覚及び疼痛）、直腸(bowel)及び膀胱；視覚；精神；並びに、その他（多発性硬化症による他の神経学的所見を含む）。各機能別障害度（ＦＳ）は、一番近い可能なグレードに等級化され、かつＶは、異常不明を示す；これらは、追加スコアではなく、個々の項目の比較のためにのみ使用される。
【００３９】
錐体路
０−正常
１−異常徴候あるが障害なし；
２−極軽い身体障害；
３−軽度／中等度の不全対麻痺又は片不全麻痺；高度の単不全麻痺；
４−顕著な不全対麻痺又は片不全麻痺；中等度の四肢麻痺又は単不全麻痺；
５−対麻痺、片麻痺、又は顕著な不全対麻痺；
６−四肢麻痺；
Ｖ−不明。
【００４０】
小脳機能
０−正常；
１−異常徴候あるが身体障害なし；
２−軽度の失調；
３−中等度の躯幹又は四肢の失調；
４−高度の失調；
５−協調運動の実行不能；
Ｖ−不明；
Ｘ−衰弱。
【００４１】
脳幹機能
０−正常；
１−徴候のみ；
２−中等度の眼振、又は軽度の他の身体障害；
３−高度の眼振、顕著な外眼筋麻痺、又は中等度の他の脳神経障害；
４−顕著な構音障害、又は他の顕著な機能障害；
５−発語又は嚥下の不能；
Ｖ−不明。
【００４２】
感覚機能
０−正常；
１−１〜２肢での、振動覚又は描字覚のみの低下；
２−１〜２肢での、軽度の触覚・痛覚・位置覚の低下、及び／若しくは中等度の振動覚の低下；又は、３〜４肢での、振動覚の低下；
３−１〜２肢での、中等度の触覚・痛覚・固有覚の低下、及び／若しくは本質的に振動覚の喪失；又は、３〜４肢での、軽度の触覚若しくは痛覚の低下、及び／若しくは中等度の全ての固有覚検査での低下；
４−１〜２肢の単独又は一緒での、顕著な触覚・痛覚の低下、若しくは固有覚の消失；又は２肢以上での、中等度の触覚・痛覚の低下、及び／若しくは高度の固有覚の消失；
５−１〜２肢での、全感覚の消失；又は、顎以下の体のほとんどでの、中等度の触覚・痛覚の低下、及び／若しくは固有覚の消失；
６−顎以下での、本質的に全感覚消失；
Ｖ−不明。
【００４３】
直腸及び膀胱機能
０−正常；
１−軽度の排尿困難、尿意逼迫、又は尿閉；
２−直腸又は膀胱での、中程度の困難、逼迫、又は尿閉、又は稀な尿失禁；
３−頻繁な尿失禁；
４−ほぼ常に導尿；
５−膀胱機能消失；
６−直腸機能消失；
Ｖ−不明。
【００４４】
視覚機能
０−正常；
１−暗点があり、視力＞２０／３０（矯正）；
２−悪い方の眼に暗点あり、最高視力２０／３０〜２０／５９；
３−悪い方の眼に大きな暗点、又は視野障害、視力２０／６０〜２０／９９；
４−高度視野狭窄、視力２０／１００〜２０／２００；グレード３と良眼の最高視力＜２０／６０；
５−悪い方の眼の視力＜２０／２００；グレード４と良眼の視力＜２０／６０；
Ｖ−不明。
【００４５】
精神機能
0−正常；
1−情動の変化のみ；
2−軽度の知能低下；
3−中等度の知能低下；
4−高度の知能低下；
5−痴呆；
V−不明。
【００４６】
その他の機能
０−正常；
１−その他の神経学的所見あり。
【００４７】
多発性硬化症機能的要素検査（ＭＳＦＣ）は、更に頻繁に適用される評価尺度基準である(例えばRudickら、2001)。これは、ＭＳ患者の下記の能力を評価する：２５歩の時間の２回測定；９−ＨＰＴ（９穴釘試験）による利き手の２回検査；９−ＨＰＴによる非利き手の２回検査；ペース聴覚連続足し算試験（ＰＡＳＡＴ−３’）。これらの検査は、例えば全米多発性硬化症協会（ＮＭＳＳ）により出版されたFischerらにより作成されたマニュアル(2001)に従って、又はFisher JSらの文献「多発性硬化症機能的要素検査(MSFC)に関する投与と評価マニュアル」、ニューヨーク、Demos Medical Publishing、1999に説明されたように、実行される。
【００４８】
本発明の実施態様において、ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、再発性多発性硬化症における再発としての視神経炎の治療のためである。
下記実施例４に従い実行される臨床試験は、初期臨床事象としての視神経炎を、ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質により治療することができるかどうかを確立するであろう。視神経炎が初期臨床事象としてＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質により治療され得る場合、ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、多発性硬化症の再発としての視神経炎にも有益な作用を有するであろうということを正当に予測することができる。
【００４９】
視神経炎の診断は、（ａ）視力喪失；（ｂ）眼痛；及び、（ｃ）色弱（正確な色覚の機能障害）の評価により、臨床的に行うことができる。本発明のこの実施態様により、視神経炎は、単病巣性又は多病巣性であることができ、片眼（一側性）又は両眼に作用することができる。
【００５０】
本発明により、ＴＡＣＩ−Ｉｇは、再発性多発性硬化症の治療に使用される。前記ＴＡＣＩ−免疫グロブリン（ＴＡＣＩ−Ｉｇ）融合タンパク質は、（ａ）ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合するＴＡＣＩ細胞外ドメイン又はそれらの断片若しくは変種；並びに、（ｂ）ヒト免疫グロブリン−定常ドメイン：を含んでなるかまたはからなる。
【００５１】
本発明のフレーム内で、用語「ＴＡＣＩ細胞外ドメイン」は、ＴＡＣＩ細胞外ドメイン（配列番号１）と少なくとも８０％又は８５％、好ましくは少なくとも９０％又は９５％又は９９％同一である、それらの任意の変種もいう。用語「ＴＡＣＩ細胞外ドメイン」は、５０個を超えない又は４０個又は３０個又は２０個又は１０個又は５個又は３個又は２個又は１個の保存的アミノ酸置換を含む変種も含む。任意のそのような変種は、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬ及び／又は任意のＢＬｙＳ−ＡＰＲＩＬヘテロ三量体に結合することができる。好ましくは、このような変種も、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬ及び／又は任意のＢＬｙＳ−ＡＰＲＩＬヘテロ三量体の生物活性を阻害する。ＢＬｙＳ又はＡＰＲＩＬの生物活性は、例えばＢ細胞増殖である。
【００５２】
加えてＴＡＣＩ細胞外ドメインの断片（活性断片）及び変種は、該断片がＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬ及び／又はＢＬｙＳ−ＡＰＲＩＬヘテロ三量体に結合することができる限りは、本発明の状況において使用することができる。好ましくはこのような断片は、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬ及び／又はＢＬｙＳ−ＡＰＲＩＬヘテロ三量体の生物活性も阻害若しくは低下する。
【００５３】
任意のＴＡＣＩ細胞外ドメイン、ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質、又はそれらの任意の変種若しくは断片のＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬ及び／又はＢＬｙＳ／ＡＰＲＩＬヘテロ三量体に結合する能力は、例えば下記実施例２に従い、評価することができる。ＢＬｙＳ、ＡＰＲＩＬ又はＢＬｙＳ／ＡＰＲＩＬヘテロ三量体の生物活性を阻害又は低下する能力は、例えば下記実施例３に従い、評価することができる。
【００５４】
本発明の状況において、ＴＡＣＩ細胞外ドメインのそのような断片若しくは変種又はＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、アタシセプト、すなわち配列番号３のアミノ酸配列を有するタンパク質の活性を有意に低下する生物活性を有さないことは好ましい。
【００５５】
本明細書において使用される用語「免疫グロブリン（Ｉｇ）−定常ドメイン」は、「Ｆｃドメイン」とも称され、ヒト又は動物の免疫グロブリン（Ｉｇ）に由来し、好ましくはＩｇＧである。このＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４であってよい。このＦｃドメインは、好ましくはヒンジ領域と一緒に、ＩｇＧ１の少なくともＣＨ２、ＣＨ３ドメインを含むことが好ましい。
【００５６】
好ましくは、Ｉｇ定常ドメインは、ヒトＩｇＧ１ドメインである。
一実施態様において、ヒトＩｇＧ１定常ドメインは、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）及び／又は抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を低下するように、修飾されている。
【００５７】
ＡＤＣＣにおいて、抗体のＦｃドメインは、ナチュラルキラー細胞及びマクロファージなどの、免疫エフェクター細胞の表面上のＦｃ受容体（ＦｃγＲ）に結合し、標的化された細胞のファゴサイトーシス又は溶解につながる。ＣＤＣにおいて、これらの抗体は、細胞表面で補体カスケードの引き金を引くことにより、標的化された細胞を死滅する。ＩｇＧの活性ＦｃγＲ（ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩＩＩｂ）並びに阻害ＦｃγＲ（ＦｃγＲＩＩｂ）又は補体第一成分（Ｃ１ｑ）への結合は、ヒンジ領域及びＣＨ２ドメインに位置した残基によって決まる。ＣＨ２ドメインの二つの領域は、ＦｃγＲ及び補体Ｃ１ｑ結合にとって重要であり、かつＩｇＧ２及びＩｇＧ４で独自の配列を有する。例えば、ＩｇＧ２残基の２３３−２３６位でのヒトＩｇＧ１への置換は、ＡＤＣＣ及びＣＤＣを大きく低下する(Armourら、1999、及びShieldsら、2001)。EUインデックス位置(Kabatら、1991)に従い、下記Ｆｃ変異を、例えばＩｇＧ１由来のＦｃへ導入することができる：
T250Q/M428L
M252Y/S254T/T256E+H433K/N434F
E233P/L234V/L235A/ΔG236+A327G/A330S/P331S
E333A;K322A。
【００５８】
更にＦｃ変異は、例えば３３０、３３１、２３４、又は２３５、又はそれらの組合せから選択されたＥＵインデックス位置における置換であってよい。ＣＨ２ドメイン内のＥＵインデックス位置２９７でのアミノ酸置換も、本発明の状況においてＦｃドメインに導入され、Ｎ−連結された糖結合(carbohydrate attachment)の可能性のある部位を排除する。ＥＵインデックス位置２２０のシステイン残基もセリン残基と置換され、通常免疫グロブリン軽鎖定常領域とジスルフィド結合を形成するシステイン残基を排除する。
【００５９】
本発明に従い使用されるＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質に適した特定のＦｃドメインは、調製されている。
具体的には、修飾されたヒトＩｇＧ１ Ｆｃの６種の形が、Ｆｃ融合タンパク質の作出のために作製され、かつＦｃ−４８８、更にはＦｃ４、Ｆｃ５、Ｆｃ６、Ｆｃ７、及びＦｃ８と命名されている。Ｆｃ−４８８（配列番号４のＤＮＡ配列及び配列番号５のアミノ酸配列を有する）は、ヒトγ１ Ｆｃ領域を含む融合タンパク質の通常のクローニングのためにデザインされ、並びにこれは鋳型として野生型ヒト免疫グロブリンγ１定常領域を用いて構築された。対合していないシステイン残基に起因した可能性のある有害作用に関する懸念は、通常免疫グロブリン軽鎖定常領域とジスルフィド結合するシステインをセリン残基と置換するという決断につながる。追加の変化は、ＥＵインデックス位置２１８をコードしているコドンへの、その後のＤＮＡ操作が容易になるようにＢｇＩＩＩ制限酵素認識部位の導入であった。これらの変化は、ＰＣＲプライマーでコードされたＰＣＲ産物に導入された。ＢｇＩＩＩ部位の位置により、及びＦｃヒンジ領域を完全にするために、ＥＵインデックス位置２１６及び２１７のコドンは、この融合タンパク質パートナー配列に取り込まれた。
【００６０】
Ｆｃ４、Ｆｃ５、及びＦｃ６は、ＦｃγＲＩ結合及び補体Ｃ１ｑ結合を低下することにより、Ｆｃにより媒介されたエフェクター機能を低下する変異を含む。Ｆｃ４は、Ｆｃ−４８８に導入されたものと同じアミノ酸置換を含む。追加のアミノ酸置換は、可能性のあるＦｃ媒介したエフェクター機能を低下するために導入された。具体的には、ＦｃγＲＩ結合を低下するために、３つのアミノ酸置換が導入された。これらは、ＥＵインデックス位置２３４、２３５、及び２３７での置換である。これらの位置での置換は、ＦｃγＲＩへの結合を低下することが示されている(Duncanら、1988)。これらのアミノ酸置換は、ＦｃγＲＩＩａ結合に加え、ＦｃγＲＩＩＩ結合も低下することができる(Sondermannら、2000；Winesら、2000)。
【００６１】
いくつかの基が、補体Ｃ１ｑ結合及びそれに続く補体固定におけるＥＵインデックス位置３３０及び３３１に関して説明されている(Canfield及びMorrison、1991；Taoら、1993)。これらの位置でのアミノ酸置換は、補体固定を低下するために、Ｆｃ４において導入された。Ｆｃ４のＣH3ドメインは、クローニングされたＤＮＡが大腸菌のｄａｍプラス株において増殖される場合に可能性のあるｄａｍメチル化部位を排除するために、ＴＧＡからＴＡＡへ変更された、停止コドンを除いて、対応する野生型ポリペプチドにおいて認められるものと同一である。
【００６２】
Ｆｃ５において、ＢｇＩＩＩクローニングスキームは、この特定のＦｃを含む融合タンパク質において使用されないので、ＥＵインデックス位置２１８のアルギニン残基は、リシンに戻し変異される。Ｆｃ５配列の残りは、Ｆｃ４に関する先の説明と一致する。
【００６３】
Ｆｃ６は、そのカルボキシル末端リシンコドンが排除されること以外は、Ｆｃ５と同じである。成熟免疫グロブリンのＣ−末端リシンは、Ｂ細胞から分泌される前に、翻訳後に成熟免疫グロブリンから除去されるか、又は血清循環時に除去されることが多い。結果的にこのＣ−末端リシン残基は、典型的には、循環している抗体中には認められない。先のＦｃ４及びＦｃ５のように、Ｆｃ６配列の停止コドンは、ＴＡＡに変更される。
【００６４】
Ｆｃ７は、ＣH2ドメインに配置されたＥＵインデックス位置２９７でのアミノ酸置換以外は、野生型γ１Ｆｃと同じである。ＥＵインデックス位置Ａｓｎ−２９７は、Ｎ−連結された糖結合の位置である。Ｎ−連結された糖は、その糖構造のバッチ毎の変動の可能性のために、組換えにより発現されたタンパク質における可能性のある変動性の源を導入する。この可能性のある変動性を排除する試みにおいて、Ａｓｎ−２９７は、グルタミン残基に変異され、その残基位置でのＮ−連結された糖の結合を防止する。残基２９７の糖は、ＦｃＲＩＩＩへのＦｃ結合にも関与している(Sondermannら、Nature 406:267 (2000))。従ってこの糖の除去は、概して組換えＦｃ７を含有する融合タンパク質の、ＦｃγＲへの結合を減少するはずである。前述のように、Ｆｃ７配列中の停止コドンは、ＴＡＡに変異された。
【００６５】
Ｆｃ８は、ＥＵインデックス位置２２０のシステイン残基が、セリン残基と交換されていること以外は、配列番号４に示された野生型免疫グロブリンγ１領域と同じである。この変異は、通常免疫グロブリン軽鎖定常領域とジスルフィド結合するシステイン残基を除去する。
ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質の形成のためのこれらの特定されたＦｃドメインのいずれかの使用は、本発明の範囲内である。
【００６６】
ＴＡＣＩ−Ｉｇの免疫グロブリン定常ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を有するポリペプチド、又はＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質の全般的生物活性に影響がなく、及びＴＡＣＩ−Ｉｇタンパク質の免疫原性が、アタシセプト（配列番号３）のそれよりも有意に高くない限りは、配列番号２のＩｇ定常ドメインと少なくとも８０％若しくは８５％、好ましくは少なくとも９０％若しくは９５％若しくは９９％同一であるそれらの変種、又は５０個未満、若しくは４０個若しくは３０個若しくは２０個若しくは１０個若しくは５個若しくは３個若しくは２個の保存的アミノ酸置換を含む変種を有するポリペプチドを含んでなるか又はからなることが好ましい。
【００６７】
本発明の状況において、用語「同一性」は、これらの配列を比較することにより決定された、２つ以上のポリペプチド配列の間の関係を反映している。概して、同一性は、比較される配列の長さにわたり、２つのポリペプチド配列のそれぞれの正確なアミノ酸毎の対応をいう。
【００６８】
正確な対応のない配列に関して、「同一率％」を決定することができる。一般に比較される２つの配列は、これらの配列間の最大相関をもたらすように、並置される。これは、いずれか一方又は両方の配列へ「ギャップ」を挿入し、並置度を増大することを含むことができる。同一率％は、同じ又は非常に似た長さの配列について特に適しているように、比較される各配列の長さ全体にわたり決定されてよいか（いわゆるグローバルアラインメント）、又は等しくない長さの配列についてより適しているように、より短い規定された長さの配列について決定されてよい（いわゆるローカルアラインメント）。
【００６９】
二つ以上の配列の同一性の比較法は、当該技術分野において周知である。従って例えば、Wisconsin Sequence Analysis Package、9.1版において利用可能なプログラム(Devereux Jら、1984)、例としてプログラムBESTFIT及びGAPは、二つのポリヌクレオチド間の同一率％及び二つのポリペプチド配列間の同一率％を決定するために使用することができる。BESTFITは、Smith及びWaterman(1981)の「ローカルホモロジー」アルゴリズムを利用し、二つの配列間の類似性の最良の単独領域を発見する。配列の同一性を決定するその他のプログラムも、当該技術分野において公知であり、例えばBLASTプログラムファミリー(Altschul S Fら、1990、Altschul S Fら、1997、NCBIのホームページ(www.ncbi.nlm.nih.gov)でアクセス可能)、及びFASTA(Pearson W R、1990)などがある。
【００７０】
本発明による好ましいアミノ酸置換は、「保存的」置換として公知のものである。ＴＡＣＩの細胞外ドメイン又はＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質の免疫グロブリン定常ドメイン部分の保存的アミノ酸置換は、群内のメンバーの置換がその分子の生物学的機能を保存するような、十分に類似した物理化学特性を有するような、群内の同義アミノ酸を含む(Grantham、1974)。先に規定された配列において、特に挿入又は欠失が、数個のアミノ酸、例えば５０個以下又は３０個以下、２０個以下、若しくは好ましくは１０個以下若しくは５個以下のアミノ酸残基にのみ関与し、例えばシステイン残基などの、機能的高次構造に重要であるアミノ酸を除去若しくは移動しない場合に、それらの機能を変更することなく、アミノ酸の挿入及び欠失も行われ得ることは明らかである。そのような欠失及び／又は挿入により生成されたタンパク質及び変種は、その生物活性が、アタシセプト（配列番号３のアミノ酸配列を有するタンパク質）の生物活性よりも有意に低くない限りは、再発性ＭＳの治療に使用することができる。
【００７１】
WO 00/40716及びWO 02/094852として公開された国際特許出願は、ＴＡＣＩの細胞外ドメインに加え、そのリガンドＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬと相互作用するＴＡＣＩ細胞外ドメインの特異断片の配列を開示している。
WO 00/40716に開示されたように、ＴＡＣＩ細胞外ドメインは、ＴＡＣＩ受容体が属する腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体スーパーファミリーの一員にとって特徴的である、２個のシステイン（Ｃｙｓ）−リッチな反復配列を含む。WO 00/40716において、２番目の保存性の低いＣｙｓ−リッチ反復配列のみを含む、ＢＲ４２ｘ２と称されるＴＡＣＩのスプライシング変種は、ＢＬｙＳに結合することができることも確立されている。従って本発明のフレームにおいて、本ＴＡＣＩ細胞外ドメイン断片は、好ましくは、２番目のＣｙｓ−リッチ反復配列に相当する配列番号１のアミノ酸残基７１から１０４を少なくとも含んでなるか又はからなる。本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、１番目のＣｙｓ−リッチ反復配列に相当する配列番号１のアミノ酸残基３４から６６を更に含んでなることは更に好ましい。
【００７２】
更なる本発明の実施態様において、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬ活性に結合しかつ阻害する該ＴＡＣＩ細胞外ドメイン断片は、配列番号１のアミノ酸残基３０から１１０を含んでなるか又はからなる。
【００７３】
より更なる本発明の実施態様において、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、配列番号３の配列を有するポリペプチド、又はそれらと少なくとも９０％若しくは９５％若しくは９８％若しくは９９％同一であるか、又は３０個未満若しくは２０個若しくは１５個若しくは１０個若しくは５個若しくは３個若しくは２個の保存的アミノ酸置換を有するそれらの変種であって、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合する変種を含んでなるか又はからなる。
【００７４】
より更なる本発明の実施態様において、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、配列番号８の配列を有するポリペプチド、又はそれらと少なくとも９０％若しくは９５％若しくは９８％若しくは９９％同一であるか、又は３０個未満若しくは２０個若しくは１５個若しくは１０個若しくは５個若しくは３個若しくは２個の保存的アミノ酸置換を有するそれらの変種であって、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合する変種を含んでなるか又はからなる。
【００７５】
より更なる本発明の実施態様において、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、配列番号１０の配列を有するポリペプチド、又はそれらと少なくとも９０％若しくは９５％若しくは９８％若しくは９９％同一であるか、又は３０個未満若しくは２０個若しくは１５個若しくは１０個若しくは５個若しくは３個若しくは２個の保存的アミノ酸置換を有するそれらの変種であって、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合する変種を含んでなるか又はからなる。
【００７６】
より更なる本発明の実施態様において、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、配列番号１２の配列を有するポリペプチド、又はそれらと少なくとも９０％若しくは９５％若しくは９８％若しくは９９％同一であるか、又は３０個未満若しくは２０個若しくは１５個若しくは１０個若しくは５個若しくは３個若しくは２個の保存的アミノ酸置換を有するそれらの変種であって、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合する変種を含んでなるか又はからなる。
【００７７】
より更なる本発明の実施態様において、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、配列番号１４の配列を有するポリペプチド、又はそれらと少なくとも９０％若しくは９５％若しくは９８％若しくは９９％同一であるか、又は３０個未満若しくは２０個若しくは１５個若しくは１０個若しくは５個若しくは３個若しくは２個の保存的アミノ酸置換を有するそれらの変種であって、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合する変種を含んでなるか又はからなる。
【００７８】
再発性多発性硬化症の治療のためのＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質の投与は、好ましくは約１０〜約４００ｍｇ／患者／週の範囲であり、より好ましくは約２０〜約３５０ｍｇ／患者／週の範囲である。
【００７９】
本発明の実施態様において、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、好ましくは週１回投与される、２５又は７５又は１５０ｍｇ／患者／週の量での、又は好ましくは週２回投与される５０又は１５０又は３００ｍｇ／患者／週の量での投与のために、調製又は製剤される。
【００８０】
本出願において特定された様々な範囲の数値の使用は、別に明確に記さない限りは、記載された範囲内の最小値及び最大値は両方とも語句「約」に優先するように、近似値として記載される。この様式で、記載された範囲を上回る及び下回るわずかな変動を使用し、該範囲内の数値と実質的に同じ結果を実現することができる。同じく明らかにされた範囲は、言及された最小値と最大値の間の全ての値に加え、それらにより形成可能である任意の範囲を含む、連続した範囲であることが意図されている。
【００８１】
本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、毎日又は１日おきの、好ましくは週２回又は週１回の投与のために調製又は製剤されてよい。好ましくはＴＡＣＩ−Ｉｇの投与は、週１回のボーラス投与である。
別の実施態様において、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、隔週又は月１回の投与のために調製又は製剤される。
【００８２】
一実施態様において、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、負荷期間中の１週間に２回（週２回）の投与のために調製又は製剤される。負荷期間中は、ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、５０又は１５０又は３００ｍｇ／患者／週の量で投与されることが好ましい。更なる実施態様において、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、維持期間中の１週間に１回（週１回）の投与のために調製又は製剤される。維持期間中は、ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、２５又は７５又は１５０ｍｇ／患者／週の量で投与されることが好ましい。
【００８３】
本発明の実施態様により、負荷期間は、好ましくは少なくとも１、２又は３週間であり、かつ好ましくは最大１ヶ月であり、並びに維持期間は、好ましくは少なくとも３又は５又は６又は７又は８ヶ月間であるか、又は少なくとも１年若しくは２年若しくは３年若しくは５年である。実施態様において、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、長期的に使用される。
【００８４】
本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、例えば静脈内、皮下又は筋肉内経路のために製剤されることができる。
本発明の実施態様において、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、皮下投与のために調製又は製剤される。
【００８５】
非経口（例えば静脈内、皮下、筋肉内）投与に関して、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、医薬として許容し得る非経口溶剤（例えば、水、食塩水、デキストロース溶液）及び等張性を維持する添加剤（例えばマンニトール）又は化学安定性を維持する添加剤（例えば保存剤及び緩衝剤）と一緒に、液剤、懸濁剤、乳剤又は凍結乾燥散剤として製剤することができる。この製剤は、通常使用される技術により滅菌される。
【００８６】
本発明の実施態様において、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、酢酸ナトリウム緩衝液及びトレハロースを含有する製剤中、好ましくは約ｐＨ５の１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中にである。
【００８７】
更なる実施態様において、本発明は、ａ）ＢＬｙＳに結合するＴＡＣＩ細胞外ドメイン又はそれらの断片若しくは変種；並びに、ｂ）ヒト免疫グロブリン−定常ドメイン、又はそれらの断片若しくは変種：を含む融合分子を、該再発性多発性硬化症の治療に有効な量含有する組成物を患者へ投与することを含む、先に規定されたような、再発性多発性硬化症を治療する方法に関する。
【００８８】
本発明は更に、特に患者が臨床的攻撃に冒されている場合の、ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質を、コルチコステロイドと、特にメチルプレドニゾロンと組合せた、使用及びＲＭＳ治療方法に関する。メチルプレドニゾロンを、経静脈的に１０００ｍｇ／患者／日で使用することは好ましい。
【００８９】
本発明による方法及び使用は、再発性多発性硬化症の他の治療法、例えばインターフェロン−β、クラドリビン、ミトキサントロン、酢酸グラチラマー、ナタリズマブ、リツキシマブ、テリフルノミド、フィンゴリモド、ラキニモド、又はＢＧ−１２（経口フマル酸塩）による治療などと組合せることができる。この組合せ治療は、同時、個別又は逐次であることができる。
【００９０】
ここで本発明を完全に説明する上で、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、かつ過度の実験を行うことなく、広範な同等のパラメータ、濃度及び条件で、同じ事を実行することができることは、当業者には明らかであろう。
【００９１】
本発明は、それらの具体的実施態様に結びつけて説明されているが、更なる修飾が可能であることは理解されるであろう。本出願は、概して本発明の原理に従い、かつ本発明が属する技術分野において公知の又は慣習的実践となるような、並びに添付された「特許請求の範囲」に従い先に示された本質的特徴に適用されるような、本発明の開示からのそのような逸脱を含む、本発明のあらゆる変化、使用又は適応を対象とすることが意図されている。
【００９２】
雑誌記事又は要約、公開又は非公開の米国若しくは外国の特許出願、発行された米国若しくは外国の特許又は任意の他の参考文献を含む、本明細書に引用された参考文献は全て、引用された参考文献内に示されたデータ、表、図面及び本文を含む全体が参照により本明細書中に組み込まれている。加えて、本明細書に引用された参考文献内に引用された参考文献の全内容も、全面的に参照により組込まれている。
【００９３】
公知の方法の段階、通常の方法の段階、公知の方法又は通常の方法の言及は、いかなる意味においても、本発明のいずれかの態様、説明又は実施態様が、関連技術分野において明らかにされ、教示され又は示唆されることの承認ではない。
【００９４】
先の具体的実施態様の説明は、他者(others)が、過度の実験をすることなく、本発明の全般的概念から逸脱することなく、そのような具体的実施態様の様々な適用に関して、当業者の知識（本明細書に引用された参考文献の内容を含む）の適用により、容易に修飾及び／又は適合することができる、本発明の全般的性質を完全に明らかにするであろう。従って、そのような適応及び修飾は、本明細書に示された教示及び指針を基に、明らかにされた実施態様の一連の同等物の意味内であることが意図されている。ここでの表現及び用語は、説明を目的とし、限定を目的とせず、その結果本明細書の用語又は表現は、当業者の知識と組合せて、ここで示された教示及び指針を鑑み当業者により理解されるべきであることも理解されるべきである。
【００９５】
ここで本発明を説明する上で本発明は、例証として提供され、本発明の限定を意図するものではない、以下の例証的臨床試験の概略の実施例を参照しより容易に理解されるであろう。
【実施例】
【００９６】
実施例１：３６週間の治療コースにわたる再発性多発性硬化症（ＲＭＳ）の被験者におけるアタシセプト単剤療法の３投与量の、頻回ＭＲＩ測定により判断される、安全性、忍容性及び有効性を評価するための、４アームのランダム二重盲検プラセボ対照多施設共同第ＩＩ相試験
【００９７】
略語リスト
ＡＥ 有害事象
ＡＬＴ アラニンアミノトランスフェラーゼ
ＡＮＣＯＶＡ 共分散分析
ＡＰ アルカリホスファターゼ
ＡＰＲＩＬ 増殖誘発リガンド
ＡＳＴ アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ
ＢＣＭＡ Ｂ細胞成熟抗原
ＢＩＷ １週２回
ＢＬｙＳ Ｂリンパ球刺激因子
ＣＡ 薬事当局
ＣＤＭＳ 臨床的に規定されたＭＳ
ＣＩ 信頼区間
ＣＩＳ 臨床分離された症候群
ＣＪＤ クロイツフェルト・ヤコブ病
ＣＮＳ 中枢神経系
ＣＱＡ 企業の品質保証(Corporate Quality Assurance)
ＣＲＦ 症例報告書
ＣＲＯ 治験受託機関(Clinical Research Organisation)
ＣＲＰ Ｃ−反応性タンパク質
ＣＴＣＡＥ 有害事象に関する共通用語基準(Common Terminology Criteria for Adverse Events)
ＣＴＳ 治験薬
ＤＭＤ 疾患修飾型薬剤(Disease-Modifying Drug)
ＤＭＰＫ 薬物代謝及び薬物動態
ＤＭＣ データモニタリング委員会
ＤＱＡ 開発品質保証(Development Quality Assurance)
ＤＳＴ データ標準化チーム(Data Standards Team)
ＥＣ 倫理委員会
ＥＣＧ 心電図
ＥＣＲＦ 電子症例報告書
ＥＤＳＳ 総合障害度
ＥＳＲ 赤血球沈降速度
ＥＴＤＲＳ 初期治療糖尿病性網膜症分類
ＥＵ 欧州連合
ＦＤＡ 米食品医薬品局
ＧＣＰ 医薬品の臨床試験の実施に関する基準
Ｇｄ ガドリニウム
ＧＥＥ 一般化推定方程式
ＧＤＳ 総合薬物安全性(Global Drug Safety)
ＨＢｓＡｇ Ｂ型肝炎表面抗原
ＨＩＰＡＡ 医療保険の携行性と責任に関する法律
ＨＩＶ ヒト免疫不全ウイルス
ＩＢ 治験薬概要書
ＩＣＨ 日米欧医薬品規制調和国際会議
ＩＥＣ 独立倫理委員会
ＩＭＰ 治験薬
ＩＲＢ 独立治験審査委員会
ＩＴＴ 治療目的に即した
ＩＵＤ 子宮内用具
ＩＶＩｇ 静脈内免疫グロブリン
ＩＶＲＳ 双方向音声応答システム
ＫＦＳ Kurtzke機能別障害度
ＬＤ 負荷用量
ＬＰＬＶ 最終症例の最終観察
ｍｃｇ マイクログラム
ＭＤ 維持用量
ｍｌ ミリリットル
ＭＲＩ 核磁気共鳴画像法
ＭＲＩ−ＡＣ 核磁気共鳴画像分析センター
ＭＳ 多発性硬化症
ＮＹＨＡ ニューヨーク心臓(Health)協会
ＯＣＴ 光干渉断層法
ＯＮ 視神経炎
ＰＣＦＲ 親子関係報告書(Parent-Child/Foetus Report)
ＰＤ 薬力学
ＰＧｘ 薬理遺伝学／薬理ゲノム学
ＰＫ 薬物動態
ＰＰ プロトコールに適合(Per Protocol)
ＱＷ １週１回
Ｒ＆Ｄ 研究開発
ＲＡ 関節リウマチ
ＲＤ 相対的差異
ＲＧＣ 網膜神経節細胞
ＲＭＳ 再発性多発性硬化症
ＲＮＦＬ 網膜神経線維束
ＲｏＷ 海外部門(Rest of the World)
ＳＡＥ 重篤有害事象
ＳＡＰ 統計解析計画
ｓｃ 皮下（的）
ＳＤ１ 試験第１日目
ＳＥＣ 安全性・倫理委員会
ＳＬＥ 全身性紅斑性狼瘡
ＳＯＰ 標準操作手順書
ＳＲＢ 安全性審査委員会
ＳＵＳＡＲ 重篤未知の疑いのある有害反応
ＴＡＣＩ 膜貫通アクチベーター及びシクロフィリンリガンド−インターアクター
ＴＤ 治療量
ＴＩＷ １週３回
ＴＮＦ 腫瘍壊死因子
ＵＬＮ 正常上限
ＷＢＣ 白血球数
【００９８】
試験の概要
目的：
主要目的：
本試験の主要目的は、頻回ＭＲＩにより判定されたＲＭＳ被験者において、ＣＮＳ炎症を軽減するための、アタシセプト３用量の有効性を評価することである。
【００９９】
二次目的：
感染症の発症率及び重症度を含む、ＲＭＳ被験者における、アタシセプト３用量の安全性及び忍容性の評価。
ＲＭＳ被験者における、最低有効量（ＭＥＤ）を決定するための、アタシセプト３用量の評価。
【０１００】
三次及び探索的目的：
ＲＭＳ被験者におけるアタシセプトの薬力学（ＰＤ）プロファイルと疾患活動の相関により、ＲＭＳ病理におけるＢ細胞免疫の関与に関する情報を更に得ること。
被験者のサブセットにおいて、薬理ゲノム学／薬理遺伝学（ＰＧｘ）試験を行い、遺伝子多型又は遺伝子発現プロファイルと薬物反応の間の、各々、可能性のある関係を同定する。
試験された用量と用法（負荷相：最初の４週間についてＢＷ；維持相：３２週間についてＱＷ）で、アタシセプトの薬物動態（ＰＫ）を評価。
【０１０１】
エンドポイント：
主要エンドポイント：
−主要エンドポイントは、１２週目から３６週目までの１回のスキャンで被験者１名当たりのＴ１ガドリニウム（Ｇｄ）−増強病変の平均数である。
【０１０２】
副次的エンドポイント：
ＭＲＩエンドポイント：
−２４週目から３６週目までの１回のスキャンで被験者１名当たりのＴ１ Ｇｄ−増強病変の平均数平均数：
−１２、２４、及び３６週目の被験者１名当たりの新規Ｔ１高信号病変の数。
臨床エンドポイント
−３６週間の治療期間中再発しなかった被験者の割合。
【０１０３】
安全性エンドポイント：
−有害事象及び感染症の性質、重症度及び発症率：
−臨床検査値異常の発生率及び重症度：
−注射部位反応：
−バイタルサイン、ＥＣＧにおける変化：
−本試験経過途中にアタシセプトに対する抗体を生じた被験者の割合。
【０１０４】
三次エンドポイント：
ＭＲＩエンドポイント：
−各々、１２、２４及び３６週目の、被験者１名当たりのＴ１ Ｇｄ−増強病変の数：
−１２週目から３６週目までの被験者１名当たりのＴ１ Ｇｄ−増強病変の総累積数：
−３６週目にＧｄ−増強病変を有さない被験者の割合：
−Ｔ１病変容積：
−被験者１名当たりのＴ１ Ｇｄ−増強病変の総累積容積（１２週目から３６週目まで被験者１名当たり毎月のスキャン）：
−３６週目の被験者１名当たりのＴ１ Ｇｄ−増強病変の容積：
−Ｔ２病変容積：
−ベースライン／ＳＤ１と比較した３６週目の被験者１名当たりのＴ２病変容積の変化：
−１回のスキャンで被験者１名当たりの組合せた独自（ＣＵ）活性ＭＲＩ病変の平均数（１２週目から３６週目までの被験者１名当たり毎月のスキャン）：
−１２、２４及び３６週目の被験者１名当たりの組合せた独自（ＣＵ）活性ＭＲＩ病変の数：
−１２、２４及び３６週目の被験者１名当たりの新規Ｔ２病変の数：
−ベースライン／ＳＤ１と比較した３６週目の被験者１名当たりの脳容積の変化。
【０１０５】
臨床エンドポイント：
−３６週間を超える治療の年間再発率。
探索的エンドポイント：
−３６週目でのＥＤＳＳ変化（ベースライン／ＳＤ１に対して）
−３６週目でのＭＳＦＣ変化（ベースライン／ＳＤ１に対して）
−個別のインフォームドコンセントに署名した被験者のサブグループにおける薬理ゲノム学／薬理遺伝学（ＰＧｘ）分析：
−薬物動態（ＰＫ）測定：遊離アタシセプト、混成(composite)アタシセプト（遊離アタシセプト＋アタシセプトＢＬｙＳ複合体）、総アタシセプト（遊離アタシセプト＋アタシセプト−ＢＬｙＳ複合体＋アタシセプト−Ａｐｒｉｌ複合体）、アタシセプト−ＢＬｙＳ複合体
−薬力学（ＰＤ）測定：遊離ＡＰＲＩＬ及び遊離ＢＬｙＳ（投与後試料に関する好適なアッセイが利用可能なことを条件とする）、ＥＳＲ、ＣＲＰ、総免疫グロブリン及び免疫グロブリンアイソタイプ、抗−ミエリン抗体、及びリンパ球下位個体群。
【０１０６】
これは、３６週間の治療コースにわたるＲＭＳ被験者におけるアタシセプト単剤療法の３用量対合致するプラセボの頻回ＭＲＩ測定により判断される、安全性、忍容性及び有効性を評価するための、４アームのランダム二重盲検プラセボ対照多施設共同第ＩＩ相試験である。
【０１０７】
最大２８日間のスクリーニング期間に適格判定基準に合致する被験者は、アタシセプトの３用量又はプラセボのいずれかひとつを受け取るように、１：１：１：１のランダム化比によりランダムに割付けられる。
【０１０８】
一つのアームは、アタシセプトを、最初の４週間は負荷投与量１５０ｍｇ ＳＣで週２回（ＢＩＷ）、引き続き次の３２週間にわたり投与量１５０ｍｇ ＳＣで週１回（ＱＷ）提供する。他の二つのアタシセプトアームは、同じ用法に従うが、用量が各々７５ｍｇ及び２５ｍｇである。対照アームは、合致するプラセボを受け取る。治験治療期間は、３６週間であり、４８週間（最後の投与後１２週目）の安全性経過観察来院を伴う。
【０１０９】
全てのランダム化された被験者について、被験者が、２回以上再発を経験し、及び／又は２時点以上でそれらのＥＤＳＳの持続性の増加を経験する（３ヶ月以上の期間にわたり）場合、並びに治験責任医師が、指定された疾患修飾型薬剤による治療を考慮する場合には、レビフ（本試験経過にわたり４４ｍｃｇを週３回［ＴＩＷ］）による救済治療の選択肢がある。
救済投薬を受ける被験者は、ＩＭＰから離脱されるが、本試験に留まり、来院スケジュールに従い全ての予定された評価を行う。
【０１１０】
治験集団：
被験者は、スクリーニング時に下記項目の少なくとも一つを満たさなければならない：
−先の２年間に２回以上の文書化された再発、又は
−登録前の１年間に１回以上の文書化された再発、又は
−スクリーニング時のＭＲＩで検出された１カ所以上のＧｄ−増強病変。
被験者は、世界中の約５０施設から募集される。
【０１１１】
適格判定基準：
組入れ基準：
被験者は全員、ベースライン／ＳＤ１（投与第１日目）以前に、下記のエントリー判定基準を満足しなければならない：
１．再発性多発性硬化症の診断(McDonald判定基準、2005年に従う)；
２．下記の少なくとも一つを満たす：先の２年間に２回以上の文書化された再発、登録前の１年間に１回以上の文書化された再発、又はスクリーニング時のＭＲＩで検出された１カ所以上のＧｄ−増強病変：
３．インフォームドコンセントが得られた時点で、１８〜６０歳の男性又は女性：
４．ＥＤＳＳが０から５．５までである：
５．妊娠の可能性のある女性は、投与前に授乳してはならず、かつ初回スクリーニング時及び試験第１日目（ＳＤ１）に、血清／尿妊娠検査で陰性でなければならない。本治験の目的に関して、妊娠の可能性のある女性とは、「閉経後少なくとも２年間経過、又は手術により不妊である以外の、思春期以後の全ての女性被験者」と定義される。
６．妊娠の可能性のある女性被験者は、ＳＤ１の前およそ４週間、治験投薬期間中及び治験投薬の最終投与後１２週間、適切な避妊方法を用いることにより、避妊することが求められる。この必要要件は、手術により不妊の被験者又は閉経後少なくとも２年経過した被験者には適用されない。適切な避妊は、二種の障壁法、又は殺精子剤若しくは子宮内用具若しくは経口女性避妊薬の使用を伴う一種の障壁法として規定される。
７．被験者は、本試験期間中試験手順に従う意志がありかつ可能であること。
８．米国に関して、通常の医療の一部ではないあらゆる試験関連手順の前に、医療保険の携行性と責任に関する法律（ＨＩＰＡＡ）の下での被験者承諾を含み、かつ被験者は自身の将来の医療を棄損することなくいかなる時点においてもコンセントを撤回してよいことを理解した上での、書面によるインフォームドコンセントの自発的提出（あらゆる治験関連手順の前に入手）。
【０１１２】
除外基準:
本試験の組入れに関して適格であるために、被験者は、下記の判定基準のいずれかを満たしてはならない：
１．一次進行型ＭＳに罹患。
２．重複性再発を伴わない二次進行型ＭＳに罹患。
３．治験責任医師の意見において、本試験への参加がリスク又は禁忌を構成するか、又は試験目的、実施若しくは評価を妨害し得る、臨床検査所見及び病歴若しくは試験前評価における所見を含む、任意の状態。
４．リツキシマブ若しくはベリムマブなどの、Ｂ細胞変更療法による、先行する治療。
５．ＳＤ１以前３ヶ月以内の、インターフェロンβ又は酢酸グラチラマーなどの免疫調節療法への曝露。
６．有効性の認知欠如による、先行する免疫変更療法の中断。
７．非限定的に、クラドリビン、ミトキサントロン、アレムツズマブ、シクロホスファミド、アザチオプリン、メトトレキセート、又はナタリズマブを含む、免疫抑制薬又は細胞毒性物質への過去の曝露。
８．リンパ節照射、又は骨髄移植などの、先行する骨髄抑制／細胞毒性療法。
９．ＳＤ１以前６ヶ月以内の、サイトカイン又は抗−サイトカイン療法、静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩｇ）又は血漿交換の先行する使用。
１０．ＳＤ１以前２８日以内の、経口又は全身性のコルチコステロイド又は副腎皮質刺激ホルモンによる治療。
１１．本試験中の長期又は月１回のパルスコルチコステロイドの必要性。
１２．ＳＤ１以前２ヶ月以内、又は本治験化合物の５半減期以内の、いずれか長い期間の、何らかの介入的臨床試験への参加。
１３．アタシセプト又は製剤されたアタシセプトの任意の成分に対するアレルギー又は過敏症。
１４．クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）の診断又は家族歴。
１５．中等度から重度の腎臓機能障害（Cockcroft-Gault式に従い、クレアチニンクリアランス＜５０ｍｌ／分）。
１６．ガドリニウムに対するアレルギー又は過敏症。
１７．管理できない又はニューヨーク健康協会（ＮＹＨＡ）クラス３若しくは４のうっ血性心不全の病歴又は存在。定義を追加されたい。
ＮＹＨＡクラス３：身体活動に著しい制約を生じる、心疾患。対象は、安静時には無症状である。普通以下の活動で、疲労、動悸、呼吸困難、又は狭心症疼痛を生じる。
ＮＹＨＡクラス４：不快感を伴わずに、いかなる身体活動も行うことができない、身体障害を生じる心疾患。安静時であっても、心不全の症状若しくは狭心症症候群がある。何らかの身体活動が行われる場合、不快感が増強される。
(出典：「The Criteria Committee of the New York Heart Association. Nomenclature and Criteria for Diagnosis of Diseases of the Heart and Great Vessels」第9版、ボストン、マサチューセッツ州：Little, Brown & Co；1994:253-256)；
１８．適切に治療された皮膚の基底細胞癌、子宮頸部異形成症、又は皮膚若しくは頸部に発生(in situ)した癌腫を除く、癌の病歴。
１９．スクリーニング時に、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）又はアルカリホスファターゼ（ＡＰ）レベルが、＞２．５×ＵＬＮ、総ビリルビンが＞１．５×ＵＬＮ。
２０．スクリーニング時の血液学的試験における臨床的に有意な異常（例えば、ヘモグロビン＜１００ｇ／Ｌ（６．２１ｍｍｏｌ／Ｌ）、ＷＢＣ＜３×１０9／Ｌ、リンパ球＜０．８×１０9／Ｌ、血小板＜１４０×１０9／Ｌ）。
２１．ＳＤ１以前３ヶ月以内に行われた胸部Ｘ線検査又はスクリーニング時に行われたＥＣＧにおける、臨床的に有意な異常。
２２．ＳＤ１以前１ヶ月以内の生ワクチンによる免疫化、又は本試験中のそのような治療の必要性。
２３．既知の活動期の臨床的に有意な急性若しくは慢性の感染症、又はＳＤ１の４週間以内の入院若しくは非経口抗感染薬による治療が必要となるような感染症の任意の主要エピソード。
２４．陽性のＨＩＶ、Ｃ型肝炎又はＢ型肝炎（ＨＢｓＡｇ）血清（スクリーニング時に行われる試験）。
２５．スクリーニング以前過去１年以内の活動期又は潜伏期結核の存在。被験者は、国家及び／又は地域の推奨に従い、活動期又は潜伏期結核について評価されかつスクリーニングされなければならない。
２６．スクリーニング時の血清ＩｇＧが６ｇ／Ｌ未満。
【０１１３】
治験薬：
アタシセプト製剤は、容量１ｍＬ中アタシセプト１５０ｍｇ、７５ｍｇ及び２５ｍｇの様々な用量を含有する、予め充填された注射器中の、透明からわずかに不透明で、わずかに黄色から黄色の注射用滅菌液剤として供給される。
プラセボは、各々１ｍＬ含有する、アタシセプト３用量が予め充填された注射器と合致する、予め充填された注射器中の、透明な、注射用滅菌液剤として供給される。
治験医薬品の予め充填された注射器は、被験者及び治験従事者がこれらの液剤の色の差がわからないように不透明なラベルにより被覆される。
【０１１４】
データ解析及び統計：
本試験は、主要エンドポイントにおいて、少なくとも一つの実薬投与群、対、プラセボ群の間の治療差異を検出するようにデザインされている。
合計約２９２名の被験者（１アームにつき被験者約７３名がランダム化される）は、アタシセプト３投与量（２５ｍｇ、７５ｍｇ及び１５０ｍｇ）とプラセボ群の間の少なくとも一つの治療差異を検出するための、検出力８０％を提供する。この計算は、nQuery MGTO検定を基にし、両側一元配置ＡＮＯＶＡは、以下を推定する：（１）共通ＳＤが１．５（先の治験依頼者試験PRISMS及びEVIDENCEから)、（２）治療平均が、プラセボ群において２．０であり、各実薬治療群の治療平均は各々１．４、１．３及び１．２であり、プラセボと比較して３０％、３５％及び４０％の相対減少と解釈される、並びに（３）全体で５％の１型誤判別率。この計算は更に、離脱／評価不能率は１０％と想定している。
【０１１５】
本試料サイズは、実際臨床的に意味のある差異が０．８（すなわちプラセボアームと比べ４０％の相対減少であり、１回のスキャンの被験者１名当たりのＴ１ Ｇｄ＋病変の平均数は、プラセボ群において２．０であると想定される）であり、かつ共通ＳＤが１．５である場合、試験下で、それらの実薬用量に関する最低有効量（ｍｅｄ）を決定するための、検出力少なくとも８０％も提供する。
【０１１６】
解析セット及びサブグループ：
治療目的に即した（ＩＴＴ）集団は、主要解析集団である。全てのランダム化された被験者は、ＩＴＴ集団に含まれる。３６週間の治療を完了し、大きなプロトコール逸脱を伴わずに主要エンドポイント評価を有するＩＴＴ被験者は、プロトコールに適合した集団に含まれる。有効性解析は、ＩＴＴ集団及びプロトコールに適合した集団を用いて行われる。安全性解析は、経過観察安全性データを伴う、試験治療の少なくとも一つの投与量を受け取った全ての被験者を含む。
【０１１７】
安全性エンドポイント：
有害事象数及び有害事象を伴う被験者は、全身の臓器クラス及び好ましい期間別に、各治療群についてまとめる。併用薬、被験者離脱、バイタルサイン、臨床検査、ＣＴＣＡＥ臨床検査毒性判定基準、及びアタシセプトに対する抗体力価をまとめる。
アタシセプト製剤は、各々１ｍＬ含有する、予め充填された注射器中の、透明からわずかに不透明で、わずかに黄色から黄色の注射用滅菌液剤として供給される。本治験に使用される製剤は、アタシセプトを２５ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ及び１５０ｍｇ／ｍＬの強度で、トレハロース及び賦形剤として１０ｍｍｏｌ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５）を含有する。
【０１１８】
プラセボ：
プラセボは、各々１ｍＬ含有する、アタシセプトが予め充填された注射器と合致する、予め充填された注射器中の、透明な、注射用滅菌液剤として供給される。本治験に使用される製剤は、トレハロース及び１０ｍｍｏｌ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５）を含有する。
【０１１９】
救済療法として、レビフ（登録商標）４４ｍｃｇが予め充填された注射器が、治験依頼者により供給される。初回用量の力価決定後のレビフ用量は、ｓｃ注射により、週３回（ｔｉｗ）投与される４４ｍｃｇである。レビフは、鍵のかかる調剤室内で、２〜８℃（３６〜４６°Ｆ）で、冷蔵貯蔵しなければならない。本医薬品は、凍結してはならない。
【０１２０】
治療開始時の可能性のある副作用は、図１に概略されたような、最初の４週間の用量漸増により、最小化することができる。各用量は、用量の容量及び投与の日付と時間と共に、被験者において毎日記録されなければならない。
【０１２１】
Rebiject II(商標)自動注射器は、予め充填されたガラス製注射器内のレビフの自動化された皮下注射が意図される装置の選択肢であり、これは求めに応じて提供される。
全ての被験者は、適切な医薬品の取り扱い、自己注射の手順、薬物力価決定及び投与、使用に関して、治験施設の担当者により指導されなければならない。
レビフ投与に関する完全な情報について、患者情報リーフレットを含む地域の承認されたラベリングを参照することができる。
【０１２２】
付表：方法論
付表Ａ：改訂McDONALD判定基準
改訂されたMcDonald判定基準(2005)は、以下のように、多発性硬化症病変の空間的及び時間的散在性を規定している：
空間的散在性：
被験者は、下記病変の３つを有さなければならない：
−少なくとも１カ所のガドリニウム−増強病変、又はＧｄ−増強病変が存在しない場合には、９カ所のＴ２−高信号病変；
−少なくとも１カ所のテント下病変；
−少なくとも１カ所の傍皮質病変；
−少なくとも１カ所の室周囲病変。
【０１２３】
注記：脊髄病変は、脳テント下病変と同等であるとみなすことができる。増強する脊髄病変は、増強する脳病変と同等であるとみなされ、かつ個々の脊髄病変は、Ｔ２病変の必要数に達するよう、個々の脳病変と一緒に寄与することができる。
【０１２４】
時間的散在性（図２参照）：
造影を使用し、時間的散在性を示す方法が二つある：
−最初の臨床事象の開始後少なくとも３ヶ月経過した時点での、この最初の事象に対応しない部位でのＧｄ−増強の検出；及び
−最初の臨床事象の開始後少なくとも３０日間で実行された参照スキャンと比較し、任意の時点で現れる、新規Ｔ２病変の検出。
【０１２５】
付表Ｂ：薬物投与スキーム
治療は、割付けられた用量が週２回（ＢＩＷ；試験１、４、８、１１、１５、２２及び２５日目）投与される、最初の４週間の負荷期間、それに続く割付けられた用量が週１回（ＱＷ）投与され、第２９日目／第５週目に始まり、次の３２週間にわたる維持期間からなる。
詳細は、下記表に示す：
【表１】
【０１２６】
付表Ｃ：ＭＳ臨床攻撃／再発に関する判定基準
下記判定基準（ａ、ｂ、ｃ）全てに合致しなければならない：
１．（ｉ）先行する臨床事象の発症から少なくとも３０日隔てられた神経学的異常、及び（ｉｉ）少なくとも２４時間持続する、神経学的異常：の両方により特定される異常を伴う、新たに出現した又は再出現したのいずれかの、神経学的異常。
２．発熱又は既知の感染症が存在しないこと（温度（腋窩、経口又は尿道で測定）３７．５℃／９９．５°Ｆ以上の発熱)。
３．ｉ）ＥＤＳＳ機能別障害度の少なくとも１つの上昇、又はｉｉ）総ＥＤＳＳスコアの増加：のいずれかにより規定される、被験者の報告された症状と相関する、主観的神経学的機能障害。
【０１２７】
いかなる追加症状も伴わない、感覚異常、疲労、精神症状、及び／又は自律神経症状の出現は、ＭＳ臨床攻撃としては分類されない。
【０１２８】
実施例２：ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質、それらの変種及び断片のＢＬＹＳ又はＡＰＲＩＬへの結合を試験する結合アッセイ
二つのアプローチを使用し、ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質並びにそれらの変種及び断片（以後：ＴＡＣＩ−Ｆｃ構築体）のＢＬｙＳとの結合特性を試験することができる。
一つのアプローチは、ＴＡＣＩ−Ｆｃ構築体の、121Ｉ−標識されたＢＬｙＳの結合に関して、ＴＡＣＩ−コートされたプレートと競合する能力を測定する。第二のアプローチにおいて、漸増する濃度の121Ｉ−標識されたＢＬｙＳは、各ＴＡＣＩ−Ｆｃ構築体と一緒にインキュベーションし、かつ沈殿したＢＬｙＳ−ＴＡＣＩ−Ｆｃ複合体に関連した放射活性が決定される。
【０１２９】
Ａ．競合結合アッセイ：
ＢＬｙＳは、標準方法に従い、ヨードビーズ(Pierce社)により放射性ヨウ素化される。簡単に述べると、ＢＬｙＳ ５０μｇを、単独のヨードビーズを用い、121Ｉ ４ｍＣｉでヨウ素化する。この反応を、０．２５％ウシ血清アルブミン溶液で停止し、遊離125Ｉを、ＰＤ−１０カラム(Pierce社)を使用するゲル濾過により除去する。125Ｉ−ＢＬｙＳ調製品の比放射能は、脱塩工程の前後の、トリクロロ酢酸沈殿により決定する。
【０１３０】
「ＴＡＣＩ−Ｎ」と称されるＴＡＣＩ受容体のＮ−末端断片を、９６−ウェルプレート（１００ｕ．、Ｉは０．１ｕｇ／ｍｌ）に添加し、４℃で一晩インキュベーションする。このプレートを洗浄し、Superblock(Pierce社)でブロックし、再度洗浄する。０〜１１．５ｎｇ／ｍｌの範囲の様々な濃度のＴＡＣＩ−Ｆｃ構築体を、一定濃度の125Ｉ−ＢＬＹＳ（２０ｎｇ／ｍｌ）と混合し、ＴＡＣＩ−Ｎでコートされたプレート上で３７℃で２時間インキュベーションする。対照は、溶液中ＴＡＣＩ−Ｎを含むか、ＴＡＣＩ−Ｆｃを欠いているかのいずれかである。インキュベーション後、これらのプレートを洗浄し、計測する。各測定は、３つ組で行う。
【０１３１】
これらの結果は、所定のＴＡＣＩ−Ｆｃ構築体は、濃度約１００ｎｇ／ｍｌ以上で125Ｉ−ＢＬｙＳ結合を完全に阻害するかどうかを示し、かつＴＡＣＩの完全細胞外ドメインを含む構築体（すなわち配列番号１を含む構築体）などの、公知のＴＡＣＩ−Ｆｃ構築体と比較することができる。
Ｆｃ断片単独は、更なる対照として試験することができ、これは結合を阻害しない。
ＩＣ50値は、３回の実験で各構築体について算出することができ、その後平均値が示される。
【０１３２】
Ｂ．溶液結合アッセイ：
濃度０．０５ｎＭで、各ＴＡＣＩ−Ｆｃ構築体は、０．４ｐＭ〜１．５ｎＭの125Ｉ−ＢＬＹＳと共に、総容積０．２５ｍｌ／チューブで、室温で３０分間インキュベーションする。Pansorbin(Staph A)懸濁液を各チューブに添加し、１５分後、これらの試料を遠心し、２回洗浄し、ペレットを計測する。
【０１３３】
非特異的結合は、１３０ｎＭ非標識ＢＬｙＳの125Ｉ−ＢＬｙＳ／ＴＡＣＩ−Ｆｃ混合物への添加により決定する。特異的結合は、非標識ＢＬｙＳの存在中の結合したｃｐｍを、各濃度の125Ｉ−ＢＬＹＳで結合した総ｃｐｍから減算することにより算出する。各測定は、３つ組で行う。結合定数は、GraphPad Prismソフトウェア(Macintosh（登録商標）社 v. 3.0)を用いて算出する。
先の（Ａ）及び（Ｂ）に説明されたアッセイは、ＢＬｙＳをＡＰＲＩＬと交換することにより、ＴＡＣＩ−Ｉｇ、それらの変種又は断片の、ＡＰＲＩＬへの結合の測定に使用することができる。
【０１３４】
実施例３：ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質、それらの変種及び断片によるＢｌｙｓ又はＢｌｙｓ／ＡＰＲＩＬヘテロ三量体活性の阻害を試験するための、ヒトＢ細胞増殖バイオアッセイ
本アッセイは、例えばRoschkeらの論文(2002)に説明されている。
【０１３５】
ヒト及びマウスＢ細胞の増殖
ヒト扁桃Ｂ細胞を、フィコール遠心分離、それに続くＭＡＣＳ磁気ビーズ(Miltenyi Biotec社, Auburn, CA)を使用する陰性選択により、単離する。脾細胞を、６〜１０週齢の雌のＢＡＬＢ／ｃマウスから、フィコール遠心分離により単離する。Ｂ細胞増殖は、黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)細胞（最終希釈１／１００，０００；Pansorbin；Calbiochem社, ラホヤ, CA)の存在下、タンパク質濃度範囲９０ｎｇ／ｍｌ〜０．０１ ｐｇ／ｍｌで評価する。細胞は、１×１０-5Ｍ ２−ＭＥを含有する１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩの最終容積中に１×１０5／ウェルで再懸濁し、かつＢＬｙＳ、ＡＰＲＩＬ又はＢＬｙＳ／ＡＰＲＩＬヘテロ三量体の存在下でインキュベーションし、７２時間試験する。その後細胞を、［Ｈ3］チミジン０．５μＣｉ／ウェルで更に２０時間パルス処理する。チミジンの取込みは、細胞増殖の測定として使用する。
【０１３６】
ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質、それらの変種又は断片による、ＢＬｙＳ、ＡＰＲＩＬ又はＢＬｙＳ／ＡＰＲＩＬヘテロ三量体の阻害を試験するために、細胞を、ＢＬｙＳ、ＡＰＲＩＬ又はＡＰＲＩＬ／ＢＬｙＳヘテロ三量体のいずれかの３ｎｇ／ｍｌ存在下でインキュベーションし、かつ中和活性を、濃度範囲１０μｇ／ｍｌ〜１００ｐｇ／ｍｌ（６回の１０倍希釈）で試験する。
【０１３７】
実施例４：３６週間の治療コースにわたる臨床分離された症候群（ＣＩＳ）としての視神経炎（ＯＮ）被験者における光干渉断層法（ＯＣＴ）により評価されるアタシセプトの安全性及び忍容性を評価し、かつ神経保護作用を探索するための、２アームのランダム二重盲検プラセボ対照多施設共同第ＩＩ相試験
【０１３８】
略語リスト
ＡＥ 有害事象
ＡＬＴ アラニンアミノトランスフェラーゼ
ＡＮＣＯＶＡ 共分散分析
ＡＰ アルカリホスファターゼ
ＡＰＲＩＬ 増殖誘発リガンド
ＡＳＴ アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ
ＢＣＭＡ Ｂ細胞成熟抗原
ＢＩＷ １週２回
ＢＬｙＳ Ｂリンパ球刺激因子
ＣＡ 薬事当局
ＣＤＭＳ 臨床的に規定されたＭＳ
ＣＩ 信頼区間
ＣＩＳ 臨床分離された症候群
ＣＪＤ クロイツフェルト・ヤコブ病
ＣＮＳ 中枢神経系
ＣＱＡ 企業の品質保証
ＣＲＦ 症例報告書
ＣＲＯ 治験受託機関
ＣＲＰ Ｃ−反応性タンパク質
ＣＴＣＡＥ 有害事象に関する共通用語基準
ＣＴＳ 治験薬
ＤＭＤ 疾患修飾型薬剤
ＤＭＰＫ 薬物代謝及び薬物動態
ＤＭＣ データモニタリング委員会
ＤＱＡ 開発品質保証
ＤＳＴ データ標準化チーム
ＥＣ 倫理委員会
ＥＣＧ 心電図
ＥＣＲＦ 電子症例報告書
ＥＤＳＳ 総合障害度
ＥＳＲ 赤血球沈降速度
ＥＴＤＲＳ 初期治療糖尿病性網膜症分類
ＥＵ 欧州連合
ＦＤＡ 米食品医薬品局
ＧＣＰ 医薬品の臨床試験の実施に関する基準
Ｇｄ ガドリニウム
ＧＥＥ 一般化推定方程式
ＧＤＳ 総合薬物安全性
ＨＢｓＡｇ Ｂ型肝炎表面抗原
ＨＩＰＡＡ 医療保険の携行性と責任に関する法律
ＨＩＶ ヒト免疫不全ウイルス
ＩＢ 治験薬概要書
ＩＣＨ 日米欧医薬品規制調和国際会議
ＩＥＣ 独立倫理委員会
ＩＭＰ 治験薬
ＩＲＢ 独立治験審査委員会
ＩＴＴ 治療目的に即した
ＩＵＤ 子宮内用具
ＩＶＩｇ 静脈内免疫グロブリン
ＩＶＲＳ 双方向音声応答システム
ＫＦＳ Kurtzke機能別障害度
ＬＤ 負荷用量
ＬＰＬＶ 最終症例の最終観察
ｍｃｇ マイクログラム
ＭＤ 維持用量
ｍｌ ミリリットル
ＭＲＩ 核磁気共鳴画像法
ＭＲＩ−ＡＣ 核磁気共鳴画像分析センター
ＭＳ 多発性硬化症
ＮＹＨＡ ニューヨーク健康協会
ＯＣＴ 光干渉断層法
ＯＮ 視神経炎
ＰＣＦＲ 親子関係報告書
ＰＤ 薬力学
ＰＧｘ 薬理遺伝学／薬理ゲノム学
ＰＫ 薬物動態
ＰＰ プロトコールに適合
ＱＷ １週１回
Ｒ＆Ｄ 研究開発
ＲＡ 関節リウマチ
ＲＤ 相対的差異
ＲＧＣ 網膜神経節細胞
ＲＭＳ 再発性多発性硬化症
ＲＮＦＬ 網膜神経線維束
ＲｏＷ 海外部門
ＳＡＥ 重篤有害事象
ＳＡＰ 統計解析計画
ｓｃ 皮下（的）
ＳＤ１ 試験第１日目
ＳＥＣ 安全性・倫理委員会
ＳＬＥ 全身性紅斑性狼瘡
ＳＯＰ 標準操作手順書
ＳＲＢ 安全性審査委員会
ＳＵＳＡＲ 重篤未知の疑いのある有害反応
ＴＡＣＩ 膜貫通アクチベーター及びシクロフィリンリガンド−インターアクター
ＴＤ 治療量
ＴＩＷ １週３回
ＴＮＦ 腫瘍壊死因子
ＵＬＮ 正常上限
ＷＢＣ 白血球数
【０１３９】
試験の概要
目的：
主要目的：
本試験の主要目的は、光干渉断層法（ＯＣＴ）による評価として、ＯＮにおける網膜神経線維束（ＲＮＦＬ）の厚さを保持するための、アタシセプトの有効性を評価することである。
【０１４０】
二次目的：
感染症の発症率及び重症度を含む、ＯＮ被験者における、アタシセプトの安全性及び忍容性の評価、並びにMcDonald 判定基準又は臨床的に規定されたＭＳ（ＣＤＭＳ）によるＯＮ被験者のＲＭＳへの移行。
ＯＮ被験者における低いコントラスト文字視力及びコントラスト感度などの、視覚的転帰に対するアタシセプトの作用の探索。
【０１４１】
三次及び探索的目的：
ＯＮ被験者におけるアタシセプトの薬力学（ＰＤ）プロファイルとＲＮＦＬ保持及び視覚的転帰の相関により、ＯＮ病理におけるＢ細胞免疫の関与に関する情報を更に得ること。
色覚、視野及び高コントラスト感度などの、視覚機能に対する、アタシセプトの作用の探索。
被験者のサブセットにおいて、薬理遺伝学／薬理ゲノム学試験を行い、遺伝子多型又は遺伝子発現プロファイルと薬物反応の間の、各々、可能性のある関係を同定する。
３６週間の治療過程において、最初の４週間の負荷相には１５０ｍｇ ＳＣで週２回（ＢＩＷ）、その後１５０ｍｇ ＳＣで週１回（ＱＷ）が与えられる、３６週間のアタシセプトの薬物動態の評価。
【０１４２】
エンドポイント：
主要エンドポイント：
−主要エンドポイントは、ＯＣＴにより評価された、ベースラインから３６週までのＯＮ患者の罹患した眼のＲＮＦＬ厚さの変化である。
【０１４３】
副次的エンドポイント：
有効性エンドポイント：
―１２、２４及び３６週目の、ＯＮ患者の罹患した眼及び僚眼の間のＲＮＦＬ厚さの差。
―ベースラインから１２及び２４週目までの、ＯＮ患者の罹患した眼のＲＮＦＬ厚さの変化。
―ベースラインから１２、２４及び３６週目までの、ＯＮ患者の罹患した眼の中心窩の周囲３ｍｍでの黄斑厚さの変化。
―ベースラインから１２、２４及び３６週目までの、ＯＮ患者の罹患した眼の中心窩の周囲６ｍｍでの黄斑厚さの変化。
―ベースラインから１２、２４及び３６週目までの、ＯＮ患者の罹患した眼の黄斑容積の変化。
―１２、２４及び３６週目の、低コントラスト文字視力(Sloanチャート)。
―１２、２４及び３６週目の、コントラスト感度(Pelli-Robsonチャート)。
【０１４４】
安全性エンドポイント：
−感染症を含む、有害事象の性質、重症度及び発症率：
−臨床検査値異常の発生率及び重症度：
−注射部位反応：
−バイタルサイン、ＥＣＧにおける変化：
−本試験経過途中にアタシセプトに対する抗体を生じた被験者の割合。
―３６週の治療期間中にMcDonald判定基準又はＣＤＭＳ（二次臨床的攻撃）に従いＲＭＳへ移行される被験者の割合。
―３６週目のＥＤＳＳ変化（ベースラインに対して）。
【０１４５】
三次／探索的エンドポイント：
―１２、２４及び３６週目の、高コントラスト文字視力（初期治療糖尿病性網膜症分類（ＥＴＤＲＳ）チャート）。
―１２、２４及び３６週目の、自動化された視野(Humphrey自動視野測定)。
―１２、２４及び３６週目の、色覚(Farnsworth Munsell D15試験)。
−薬物動態（ＰＫ）測定：遊離アタシセプト、混成アタシセプト（遊離アタシセプト＋アタシセプトＢＬｙＳ複合体）、総アタシセプト（遊離アタシセプト＋アタシセプト−ＢＬｙＳ複合体＋アタシセプト−ＡＰＲＩＬ複合体）、アタシセプト−ＢＬｙＳ複合体
−薬力学（ＰＤ）測定：遊離ＡＰＲＩＬ及び遊離ＢＬｙＳ（投与後試料に関する好適なアッセイが利用可能であることを条件とする）、ＥＳＲ、ＣＲＰ、総免疫グロブリンアイソタイプ、リンパ球下位個体群。
―被験者のサブセットにおいて、薬理ゲノム学／薬理遺伝学（ＰＧｘ）試験は、遺伝子多型又は遺伝子発現プロファイルと薬物反応の間の、各々、可能性のある関係を同定するために行われる。
【０１４６】
これは、３６週間の治療コースにわたるＯＮ被験者におけるアタシセプト対合致するプラセボのＯＣＴにより判断される、安全性及び忍容性、並びに神経保護作用を評価するための、２アームのランダム二重盲検プラセボ対照多施設共同第ＩＩ相試験である。
【０１４７】
被験者は、アタシセプト又はプラセボを、１：１ランダム化比で受け取る。アタシセプトは、３６週間の治療コースで、最初の４週間に１５０ｍｇ ＳＣで週２回（ＢＩＷ）の負荷用量が先行し、その後１５０ｍｇ ＳＣで週１回（ＱＷ）与えられる。対照群は、合致するプラセボを受け取る。本試験時に、１回のスクリーニング来院し（試験第１日目（ＳＤ１）来院以前２８日以内）、ＳＤ１来院時に被験者はランダム化され、試験治療が開始され、並びに１、４、８、１２、１６、２０、２４、３０及び３６週目に引き続き来院する。定期的な電話による接触は、予定された来院の間に実行される。コルチコステロイドの使用は、最初のＯＮ事象の治療の選択肢である。引き続きのコルチコステロイドの使用は、付表Ｂに規定されたようなＣＤＭＳへ移行する患者、又は同眼における二次ＯＮ攻撃を発症する患者における再発の治療に制限される。
【０１４８】
被験者は、最終用量後、１２週間経過観察される。ＯＣＴ、視覚機能及び安全性の評価は、４８週目の経過観察来院時に行われる。
全てのランダム化された被験者について、被験者がＣＤＭＳへ移行し、かつ治験責任医師が、指定された疾患修飾型薬剤による治療を考慮する場合には、レビフ（登録商標）（本試験経過にわたり４４ｍｃｇを週３回［ＴＩＷ］）による救済治療の選択肢がある。救済投薬を受ける被験者は、ＩＭＰから離脱されるが、本試験に留まり、来院スケジュールに従い全ての予定された評価を行う。
【０１４９】
治験集団：
本試験に適格である患者は、初期臨床事象として症候性片側性ＯＮと診断される（臨床的に分離された症候群、ＣＩＳ）。この組入れ基準は、ＯＮを示しているＣＩＳ被験者の登録を確実にし、かつ本治験時の安全性及び有効性の評価を混乱させ得る先行する療法を避けることを目的としている。更に、本治験時に再発しかつ安全性評価を混乱させ得る過去の感染症又は併存疾患は、除外される。
【０１５０】
脱髄疾患の最初の臨床兆候としてのＯＮは、別の種類の臨床攻撃を示しているＭＳ患者よりも本状態におけるより顕著なＲＮＦＬの喪失のために、治療作用のより頑強な評価を可能にし（ＲＮＦＬ厚さは、症候性の視覚の関与を伴わなくともＭＳにおいて減少する）、その結果安定したベースラインを保証する。単病巣性ＯＮの患者の選択は、治験集団における重度の両側性視覚機能障害のリスクを避け、かつ通常両側性で、同時及び頻繁に重度であるＯＮの存在によっても、ＭＳから識別されている、視神経脊髄炎(Cross, 2007)などの別の状態の患者の組入れを避ける。それに従い、両側性ＯＮを示している患者は、ＭＳへの進行のリスクが低いことが示されている。
本試験は、世界中の約３０施設で実行される。
【０１５１】
適格判定基準：
参加基準：
１．症状発症とＳＤ１の間で２８日以内の最初の臨床症状発現としての片側症候性視神経炎の診断；
２．インフォームドコンセントが得られた時点で、１８〜６０歳の男性又は女性：
３．あらゆる試験−関連手順の前に提出された、書面によるインフォームドコンセント。被験者は、インフォームドコンセントフォームを読み、理解しなければならず、本試験の必要要件を完全に理解しなければならず、かつ全ての試験来院及び評価を完了することを望まなければならない。
４．妊娠の可能性のある女性は、投与前に授乳してはならず、初回スクリーニング時の血清妊娠検査で陰性及びＳＤ１の尿妊娠検査で陰性でなければならない。本治験の目的に関して、妊娠の可能性のある女性とは、「閉経後少なくとも２年間経過、又は手術により不妊である以外の、思春期以後の全ての女性被験者」と定義される。
５．妊娠の可能性のある女性被験者は、ＳＤ１の前およそ４週間、治験期間中及び治験投薬の最終投与後１２週間、適切な避妊方法を用いることにより、避妊することが求められる。この必要要件は、手術により不妊の被験者又は閉経後少なくとも２年経過した被験者には適用されない。適切な避妊は、二種の障壁法、又は殺精子剤若しくは子宮内用具若しくは経口女性避妊薬の使用を伴う一種の障壁法として規定される。
６．本試験の期間に試験手順を完了する意志があり、かつ可能であること；
７．米国に関して、通常の医療の一部ではないあらゆる試験関連手順の前に、医療保険の携行性と責任に関する法律（ＨＩＰＡＡ）の下での被験者承諾を含み、かつ被験者は自身の将来の医療を棄損することなくいかなる時点においてもコンセントを撤回してよいことを理解した上での、書面によるインフォームドコンセントの自発的提出（あらゆる治験関連手順の前に入手）。
【０１５２】
除外基準:
１．現在のＯＮ攻撃前のＯＮの病歴；
２．両側性視神経炎；
３．ＭＳの診断；
４．Devic病の診断；
５．視神経炎に無関係の合併疾患の眼内状態（詳細な病歴及び検査により確認され、これは緑内障、視神経形成不全、黄斑円孔、網膜硝子体牽引、糖尿病、又は他の視神経疾患を含む）；
６．以下のように規定される、罹患した眼の浮腫に起因したスクリーニング来院時の評価不能なＯＣＴ：
２以上のセクター(sector)で正常よりも１０μｍ以上大きいＲＮＦＬ厚さ、又は１２セクターのいずれかにおいて２００μｍよりも大きいＲＮＦＬ厚さ；
７．±６ジオプターよりも大きい屈折障害；
８．治験責任医師の意見において、本試験への参加がリスク又は禁忌を構成するか、又は試験目的、実施若しくは評価を妨害し得る、臨床検査所見及び病歴若しくは試験前評価における所見（非限定的に、有意な神経系、腎臓、肝臓、内分泌腺又は消化器の疾患など）を含む、任意の状態；
９．リツキシマブ若しくはベリムマブなどの、Ｂ細胞変更療法による、先行する治療；
１０．インターフェロンβ又は酢酸グラチラマーなどの、免疫調節療法への過去の曝露；
１１．非限定的に、クラドリビン、ミトキサントロン、アレムツズマブ、シクロホスファミド、アザチオプリン、メトトレキセート、又はナタリズマブを含む、免疫抑制薬又は細胞毒性物質への過去の曝露；
１２．リンパ節照射、又は骨髄移植などの、先行する骨髄抑制／細胞毒性療法；
１３．サイトカイン又は抗−サイトカイン療法、静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩｇ）又は血漿交換の先行する使用；
１４．ＳＤ１以前６０日以内の、経口又は全身性のコルチコステロイド又は副腎皮質刺激ホルモンによる治療；最初のＯＮ事象を治療するための、任意のコルチコステロイドコースは除く；
１５．本試験中の長期又は月１回のパルスコルチコステロイドの必要性；
１６．ＳＤ１以前１ヶ月以内の生ワクチンによる免疫化又はＩｇ治療の受け取り、又は本試験中のそのような治療の必要性；
１７．ＳＤ１以前２ヶ月以内（又はＳＤ１以前の本治験化合物の５半減期以内の、いずれか長い期間）、ＳＤ１前の何らかの介入的臨床試験への参加；
１８．中等度から重度の腎臓機能障害（Cockcroft-Gault式に従い、クレアチニンクリアランス＜５０ｍｌ／分）；
１９．ガドリニウムに対するアレルギー又は過敏症；
２０．アタシセプト又は製剤されたアタシセプトの任意の成分に対する既知の過敏症；
２１．クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）の診断又は家族歴；
２２．管理できない又はニューヨーク健康協会（ＮＹＨＡ）クラス３若しくは４のうっ血性心不全の病歴又は存在；
２３．適切に治療された皮膚の基底細胞癌、子宮頸部異形成症、又は皮膚若しくは頸部に発生した癌腫を除く、癌の病歴；
２４．スクリーニング時に、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）又はアルカリホスファターゼ（ＡＰ）レベルが、＞２．５×ＵＬＮ、総ビリルビンが＞１．５×ＵＬＮ；
２５．スクリーニング時の、血液学的試験における臨床的に有意な異常（例えば、ヘモグロビン＜１００ｇ／Ｌ（６．２１ｍｍｏｌ／Ｌ）、ＷＢＣ＜３×１０9／Ｌ、リンパ球数＜０．８×１０9／Ｌ、血小板＜１４０×１０9／Ｌ）；
２６．ＳＤ１以前３ヶ月以内に行われた胸部Ｘ線検査又はスクリーニング時に行われたＥＣＧにおける、臨床的に有意な異常；
２７．既知の活動期の臨床的に有意な急性若しくは慢性の感染症、又はＳＤ１評価の４週間以内の入院若しくは非経口抗感染薬による治療が必要となるような感染症の任意の主要エピソード；
２８．陽性のＨＩＶ、Ｃ型肝炎又はＢ型肝炎（ＨＢｓＡｇ）血清（スクリーニング時に行われる試験）；
２９．スクリーニング以前過去１年以内の活動期又は潜伏期結核の存在。被験者は、国家及び／又は地域の推奨に従い、活動期又は潜伏期結核について評価されかつスクリーニングされなければならない；
３０．スクリーニング時の血清ＩｇＧが６ｇ／Ｌ未満。
【０１５３】
治験薬：
アタシセプト製剤は、容量１ｍＬ中アタシセプト１５０ｍｇを含有する予め充填された注射器中に、透明からわずかに不透明で、わずかに黄色から黄色の注射用滅菌液剤として供給される。
プラセボは、各々１ｍＬ含有する、アタシセプトが予め充填された注射器と合致する、予め充填された注射器中の、透明な、注射用滅菌液剤として供給される。
治験医薬品の予め充填された注射器は、被験者及び治験従事者がこれらの液剤の色の差がわからないように不透明なラベルにより被覆される。
【０１５４】
データ解析及び統計：
試料サイズの決定
合計８２名の患者（１アームにつきランダム化された患者４１名）は、相対差異（ＲＤ）５０％に相当する、プラセボ及びアタシセプト治療アーム、各々、２０μｍ及び１０μｍの３６週間でのＲＮＦＬ喪失を評価する、主要エンドポイントにおける差異を検出するための、検出力少なくとも８０％を提供する。この計算は、プラセボアームにおける２０μｍ及び治療アームにおける４μｍの両側１型誤判別率５％及び標準偏差（ＳＤ）を仮定し行った。この計算は、評価不能率１５％と想定している。計算は、不均等分散(unequal variances)のための２−標本Satterthwaite ｔ−検定(NQuery 5.0)を基にしている。
【０１５５】
ランダム化
被験者は、二重盲検様式で、アタシセプト又はプラセボのいずれかを受け取るように比１：１でランダム化される。被験者は、適格であることが確認された後のみランダム化される。ランダム化は、性別及びＭＲＩ病変（スクリーニング時のＭＲＩ病変の有無）により階層化される。ランダム並べ替えブロックデザインを使用し、層別因子内で１：１比で治療のバランスを得る。治療群への割付けは、音声自動応答システム（ＩＶＲＳ）により中央集中型ランダム化を用い決定される。
【０１５６】
解析集団
治療目的に即した（ＩＴＴ）集団は、全てランダム化された被験者からなる。被験者は、それらのランダム化された治療に従い解析される。本プロトコールに適合した集団は、３６−週間の治療を完了し、かつ大きいプロトコール逸脱を有さないと見なされる、全てランダム化された被験者からなる。主要エンドポイントの解析に関して、本プロトコールに適合した集団は、妥当な(valid)3６週目のＯＣＴ評価、更には入手可能なベースラインＯＣＴを有さなければならない。ＰＰ集団は、主要エンドポイントの主要解析セットである。全ての有効性エンドポイントは、ＩＴＴ及びＰＰの両集団について解析される。ＰＰ解析とＩＴＴ解析の間の結論の差異を調べ、考察する。安全性集団は、経過観察安全性データを伴う、試験治療の少なくとも一つの用量を受け取った全ての被験者を含む。
【０１５７】
統計方法論
３６週目のＲＮＦＬ厚さの保持の主要エンドポイントを、アタシセプト１５０ｍｇとプラセボの間で、不均等分散に関して両側ｔ−検定を用い、比較する。極値又は非正規性（目視により評価）が存在する場合、治療群間の比較は、主要な方法としてウイルコクソン順位和検定を用いて行う。２つの層別因子（性別及びスクリーニングＭＲＩ病変（非存在又は存在））を含むANCOVA解析を行い、治療作用が、これら２つの因子により影響を受けるかどうかを評価する。加えて、スクリーニング相における領域、ベースラインＲＮＦＬ、喫煙歴及びコルチコステロイドの使用の作用によるANCOVAは、治療作用が、これらの共変量因子により影響を受けるかどうか評価するために反復する。１２、２４及び３６週に測定された、視神経病理及び視覚機能の変化に関連した二次及び三次エンドポイントは、主要エンドポイントと同じアプローチを用いて解析される。９５％信頼区間を伴う記述統計は、治療アームにより提供され、長期にわたるエンドポイントの変化を評価する。これらの解析は、ＲＮＦＬ喪失の主要エンドポイントに対するアタシセプトの作用の時機を調べるためにも役立つ。
【０１５８】
治験薬
アタシセプト及びプラセボが予め充填された注射器は、治験依頼者により供給される。医薬品は、７．３項に説明されたように、治療キット中で提供される。
【０１５９】
アタシセプト
アタシセプト製剤は、各々１ｍＬ含有する、予め充填された注射器中に、透明からわずかに不透明で、わずかに黄色から黄色の注射用滅菌液剤として供給される。
本治験に使用される製剤は、アタシセプトを１５０ｍｇ／ｍＬの強度で、トレハロース及び賦形剤として１０ｍｍｏｌ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５）を含有する。
【０１６０】
プラセボ
プラセボは、各々１ｍＬ含有する、アタシセプトが予め充填された注射器と合致する、予め充填された注射器中の、透明な、注射用滅菌液剤として供給される。
本治験に使用されるプラセボ製剤は、トレハロース及び１０ｍｍｏｌ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５）を含有する。
【０１６１】
用量及び投与
適格の被験者は、皮下注射により投与されるアタシセプト又は合致するプラセボを受け取るように、ランダム化される。
治療は、割付けられた用量が週２回（ＢＩＷ；試験１、４、８、１１、１５、２２及び２５日目）投与される、最初の４週間の負荷期間、それに続く割付けられた用量が週１回（ＱＷ）投与され、第２９日目／第５週に始まり、次の３２週間にわたる維持期間からなる。
【０１６２】
アタシセプト群：アタシセプト１５０ｍｇ ＳＣ、週２回（ＢＩＷ）を４週間、それに続く１５０ｍｇ ＳＣ、週１回（ＱＷ）を３２週間；
プラセボ群：プラセボＳＣ、週２回（ＢＩＷ）を４週間、それに続くプラセボＳＣ、週１回（ＱＷ）を３２週間。
【０１６３】
アタシセプト及びプラセボは、提供された予め充填された注射器を用い、前腹壁にＳＣ注射される。各場合に注射される溶液の容量は、１．０ｍＬである。注射部位は循環しなければならない。
【０１６４】
救済投薬
救済療法として、レビフ（登録商標）４４ｍｃｇが予め充填された注射器が、治験依頼者により供給される。初回用量の力価決定後のレビフ用量は、ｓｃ注射により、週３回（ｔｉｗ）投与される４４ｍｃｇである。レビフは、鍵のかかる調剤室内で、２〜８℃（３６〜４６°Ｆ）で、冷蔵貯蔵しなければならない。本医薬品は、凍結してはならない。
【０１６５】
治療開始時の可能性のある副作用は、図１に概略されたような、最初の４週間の用量漸増により、最小化することができる。各用量は、用量の容量及び投与の日付と時間と共に、被験者において毎日記録されなければならない。
【０１６６】
Rebiject II(商標)自動注射器は、予め充填されたガラス製注射器内のレビフの自動化された皮下注射が意図される装置の選択肢であり、これは求めに応じて提供される。
全ての被験者は、適切な医薬品の取り扱い、自己注射の手順、薬物力価及び投与、使用に関して、治験施設の担当者により指導されなければならない。
レビフ投与に関する完全な情報について、患者情報リーフレットを含む地域の承認されたラベリングを参照することができる。
【０１６７】
付表：方法論
付表Ａ：改訂McDONALD判定基準
改訂されたMcDonald判定基準(2005)は、以下のように、多発性硬化症病変の空間的及び時間的散在性を規定している：
空間的散在性：
被験者は、下記病変の３つを有さなければならない：
−少なくとも１カ所のガドリニウム−増強病変、又はＧｄ−増強病変が存在しない場合には、９カ所のＴ２−高信号病変；
−少なくとも１カ所のテント下病変；
−少なくとも１カ所の傍皮質病変；
−少なくとも１カ所の室周囲病変。
【０１６８】
注記：脊髄病変は、脳テント下病変と同等であるとみなすことができる。増強する脊髄病変は、増強する脳病変と同等であるとみなされ、かつ個々の脊髄病変は、Ｔ２病変の必要数に達するよう、個々の脳病変と一緒に寄与することができる。
【０１６９】
時間的散在性（図２参照）：
造影を使用し、時間的散在性を示す方法が二つある：
−最初の臨床事象の開始後少なくとも３ヶ月経過した時点での、この最初の事象に対応しない部位でのＧｄ−増強の検出；及び
−最初の臨床事象の開始後少なくとも３０日間で実行された参照スキャンと比較し、任意の時点で現れる、新規Ｔ２病変の検出。
【０１７０】
付表Ｂ：ＭＳ臨床攻撃／再発に関する判定基準
下記判定基準（ａ、ｂ、ｃ）全てに合致しなければならない：
−（ｉ）先行する臨床事象の発症から少なくとも３０日隔てられた神経学的異常、及び（ｉｉ）少なくとも２４時間持続する、神経学的異常：の両方により特定される異常を伴う、新たに出現した又は再出現したのいずれかの、神経学的異常。
−発熱又は既知の感染症が存在しないこと（温度（腋窩、経口又は尿道で測定）３７．５℃／９９．５°Ｆ以上の発熱）。
−ｉ）ＥＤＳＳ機能別障害度の少なくとも１つの上昇、又はｉｉ）総ＥＤＳＳスコアの増加：のいずれかにより規定される、被験者の報告された症状と相関する、主観的神経学的機能障害。
【０１７１】
いかなる追加症状も伴わない、感覚異常、疲労、精神症状、及び／又は自律神経症状の出現は、ＭＳ臨床攻撃としては分類されない。
【０１７２】
実施例５：Ｂｌｙｓアンタゴニストの作製
４種のＴＡＣＩ−Ｆｃアミノ末端切断型が作製された。４種全て、配列番号６のアミノ酸残基番号３０に融合された、WO 02/094852に開示されたような修飾されたヒト組織プラスミノーゲン活性化因子シグナル配列（配列番号２５）を有する。しかし、これら４種のタンパク質は、Ｆｃ５が配列番号６のＴＡＣＩアミノ酸配列に融合される点の位置が異なる。表１は、４種の融合タンパク質の構造を概説している。
【０１７３】
【表２】
【０１７４】
タンパク質をコードしている発現カセットは、標準技術を用いる、オーバーラップＰＣＲにより作製した(例えば、Hortonら、1989参照)。ＴＡＣＩをコードしている核酸分子及びＦｃ５をコードしている核酸分子を、ＰＣＲ鋳型として使用する。オリゴヌクレオチドプライマーは、表２及び３に確定されている。
【０１７５】
【表３】
【０１７６】
【表４】
【０１７７】
ＰＣＲ増幅の第一ラウンドは、４種のアミノ末端切断型の各々に関する２反応からなった。これらの２反応は、各型に関して１つの反応において５’及び３’ＴＡＣＩオリゴヌクレオチドを用い、並びに別の反応において５’及び３’Ｆｃ５オリゴヌクレオチドを用い、個別に行った。第一ラウンドのＰＣＲ増幅の条件は、以下であった。最終容積２５μｌに、鋳型ＤＮＡ約２００ｎｇ、１０×Ｐｆｕ反応緩衝液(Stratagene社)２．５μｌ、２．５ｍＭ ｄＮＴＰを２μｌ、２０μＭの各５’オリゴヌクレオチド及び３’オリゴヌクレオチドを０．５μｌ、並びにＰｆｕポリメラーゼ０．５μｌ（２．５単位、Stratagene社)を添加した。増幅の熱プロファイルは、９４℃で３分間；９４℃で１５秒間、５０℃で１５秒間、７２℃で２分間を３５サイクル；その後７２℃で２分間の伸長からなる。この反応生成物は、アガロースゲル電気泳動により分画し、かつ予想されるサイズに対応するバンドをゲルから切り出し、QIAGEN QIAQUICKゲル抽出キット(Qiagen社)を製造業者の指示に従い使用し、回収した。
【０１７８】
ＰＣＲ増幅の第二ラウンド、又はオーバーラップＰＣＲ増幅反応は、ＤＮＡ鋳型として、第一ラウンドＰＣＲ由来のゲルで精製された断片を用いて行った。第二ラウンドＰＣＲ増幅の条件は、以下であった。最終容積２５μｌに、ＴＡＣＩ断片及びＦｃ５断片の各々の鋳型ＤＮＡ約１０ｎｇ、１０×Ｐｆｕ反応緩衝液(Stratagene社)２．５μｌ、２．５ｍＭ ｄＮＴＰを２μｌ、２０μＭのＺＣ２４，９０３（配列番号１５）及びＺＣ２４，９４６（配列番号１８）を各々０．５μｌ、並びにＰｆｕポリメラーゼ０．５μｌ（２．５単位、Stratagene社)を添加した。増幅の熱プロファイルは、９４℃で１分間；９４℃で１５秒間、５５℃で１５秒間、７２℃で２分間を３５サイクル；その後７２℃で２分間の伸長からなる。この反応生成物は、アガロースゲル電気泳動により分画し、かつ予想されるサイズに対応するバンドをゲルから切り出し、QIAGEN QIAQUICKゲル抽出キット(Qiagen社)を製造業者の指示に従い使用し、回収した。
【０１７９】
４種の型のアミノ末端切断型ＴＡＣＩ−Ｆｃ ＰＣＲ産物の各々は、Invitrogen社のZEROBLUNT TOPO PCRクローニングキットを製造業者の推奨プロトコールに従い用い、個別にクローニングした。表４は、これらのＴＡＣＩ−Ｆｃ構築体のヌクレオチド配列及びアミノ酸配列を確定している。
【０１８０】
【表５】
【０１８１】
これらのヌクレオチド配列を確認した後、アミノ末端切断型ＴＡＣＩ−Ｆｃ融合体の４つの型の各々を含むプラスミドを、ＦｓｅＩ及びＡｓｃＩで消化し、このアミノ酸コードしているセグメントを放出した。ＦｓｅＩ−ＡｓｃＩ断片を、ＣＭＶプロモーター及びＳＶ４０ポリＡセグメントを含む、哺乳類発現ベクターにライゲーションした。発現ベクターは、以下に説明されたようにチャイニーズハムスター卵巣細胞に導入した。
【０１８２】
実施例６：チャイニーズハムスター卵巣細胞によるＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質の生成
前記ＴＡＣＩ−Ｆｃ発現構築体を使用し、電気穿孔法により、動物タンパク質−非含有培地において増殖した懸濁−適合されたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）ＤＧ４４細胞を、トランスフェクションした(Urlaubら、1986)。ＣＨＯ ＤＧ４４細胞は、両方のジヒドロ葉酸レダクターゼ染色体座における欠失のために、機能的ジヒドロ葉酸レダクターゼ遺伝子を欠いている。漸増濃度のメトトレキセート存在下での細胞の増殖は、ジヒドロ葉酸レダクターゼ遺伝子の増幅を生じ、かつ本発現構築体上に連結された組換えタンパク質−コードされた遺伝子を生じた。
【０１８３】
ＣＨＯ ＤＧ４４細胞は、ＰＦＣＨＯ培地(JRH Biosciences社, Lenexa, KS)、４ｍＭ Ｌ−グルタミン(JRH Biosciences社)、及び１×ヒポサンキシン(hypothanxine)−チミジン補充物(Life Technologies社)中で継代し、これらの細胞を、回転振盪プラットフォーム上で、１２０ＲＰＭで、コーニング振盪フラスコ内、３７℃及び５％ＣＯ2でインキュベーションした。これらの細胞は、直線化された発現プラスミドにより個別にトランスフェクションした。無菌性を確実にするために、１回のエタノール沈殿工程を、エッペンドルフチューブ内のプラスミドＤＮＡの２００μｇを、剪断サケ精子担体ＤＮＡ(5'→3' Inc. ボールダー, CO, １０ｍｇ／ｍｌ）２０μｌ、３Ｍ ＮａＯＡｃ（ｐＨ５．２）の２２μｌ、及び１００％エタノール(Gold Shield Chemical社, Hayward, CA)４８４μｌと混合することにより、氷上で２５分間かけて行った。インキュベーション後、このチューブを、４℃のコールドルームに配置された微量遠心機において、１４，０００ＲＰＭで遠心し、上清を除去し、ペレットを７０％エタノール０．５ｍｌで２回洗浄し、風乾させた。
【０１８４】
このＤＮＡペレットが乾燥する間に、２５ｍｌコニカル遠心チューブ中で１０6個の総細胞（１６．５ｍｌ）を９００ＲＰＭで５分間遠心することにより、ＣＨＯ ＤＧ４４細胞を調製した。ＣＨＯ ＤＧ４４細胞を、総容積３００μｌのＰＦＣＨＯ増殖培地に再度懸濁し、０．４ｃｍの電極ギャップ(Bio-Rad社)を備えるGene-Pulserキュベット内に配置した。およそ５０分間の乾燥時間の後、前記ＤＮＡを、ＰＦＣＨＯ増殖培地５００μｌに再度懸濁し、総容積は８００μｌを超えないよう、キュベット中の細胞に添加し、これを室温で５分間静置し、泡の発生を鎮めた。このキュベットを、BioRad Gene Pulser IIユニットセットに０．２９６ｋＶ（キロボルト）及び０．９５０ＨＣ（高キャパシタンス）で配置し、直ちに電気穿孔した。
【０１８５】
これらの細胞を、室温で５分間インキュベーションし、その後CoStar T-75フラスコ中の総容積２０ｍｌのＰＦＣＨＯ培地中に配置した。このフラスコを、３７℃及び５％ＣＯ2に４８時間配置し、次にこれらの細胞は、トリパンブルー色素排除法を利用し、血球計によりカウントし、ヒポサンキシン−チミジン補充物を含まないが２００ｍＭメトトレキセートを含有するＰＦＣＨＯ選択培地(Cal Biochem社)に入れた。
メトトレキセート選択プロセスの回収時に、分泌されたＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質を含有する馴化培地を、ウェスタンブロット分析により試験した。
【０１８６】
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【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、多発性硬化症の分野におけるものである。より詳細には、これは、再発性多発性硬化症の治療のためのＴＡＣＩ−免疫グロブリン（Ｉｇ）融合タンパク質の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
ＢＬｙＳリガンド／受容体ファミリー
２種の増殖因子ＢＬｙＳ（Ｂリンパ球刺激因子）及びＡＰＲＩＬ（増殖誘発リガンド）に関する独自の結合親和性を有する、３種の受容体ＴＡＣＩ（膜貫通アクチベーター及びＣＡＭＬ−インターアクター）、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）及びＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子の受容体）が同定されている(Marstersら、2000；Thompsonら、2001)。
【０００３】
ＴＡＣＩ及びＢＣＭＡは、ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬの両方に結合するが、ＢＡＦＦ−Ｒは、ＢＬｙＳのみに高親和性で結合することが可能であるように見える(Marstersら、2000；Thompsonら、2001)。結果として、ＢＬｙＳは、３種全ての受容体を通じてシグナル伝達することができのに対し、ＡＰＲＩＬは、ＴＡＣＩ及びＢＣＭＡのみを通じてシグナル伝達することが可能であるように見える。加えて、ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬの循環性ヘテロ三量体型複合体（ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬの各サブユニットの１個又は２個のコピーを含む、３個のタンパク質サブユニットのグループ化）が、全身性免疫−ベースのリウマチ疾患の患者から採取された血清試料中において同定され、かつインビトロにおいてＢ細胞増殖を誘導することが示されている(Roschkeら、2002)。
【０００４】
ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬは、Ｂ細胞の成熟、増殖及び生存の強力な刺激因子である(Mooreら、1999；Schneiderら、1999；Doら、2000)。ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬは、自己免疫疾患、特にＢ細胞に関与した疾患の持続に必要であることがある。高レベルのＢＬｙＳを発現するように操作されたトランスジェニックマウスは、免疫細胞障害を示し、かつ全身性紅斑性狼瘡患者において認められる症状に類似した症状を呈する(Grossら、2000；Mackayら、1999)。同様に増大したレベルのＢＬｙＳ／ＡＰＲＩＬが、全身性紅斑性狼瘡患者及び関節リウマチのような他の様々な自己免疫疾患の患者から採取された血清試料中で測定され(Roschke、2002；Cheemaら、2001；Groomら、2002)、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬとＢ細胞媒介型疾患の関係を、動物モデルからヒトまで拡大している。ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬの発現は、ＭＳ患者の末梢血単球及びＴ細胞においてアップレギュレートされる(Thangarajhら、2004；Thangarajhら、2005)。ＭＳ病巣において、ＢＬｙＳ発現は、ＢＡＦＦ−Ｒを発現している免疫細胞近くに局在化された星状膠細胞上で強力にアップレギュレートされることがわかった(Krumbholzら、2005)。
【０００５】
アタシセプト
アタシセプト(atacicept)（ＩＮＮ）は、受容体ＴＡＣＩ（膜貫通アクチベーター及びカルシウムモジュレーター及びシクロフィリンリガンド（ＣＡＭＬ）−インターアクター）の細胞外リガンド結合部分及びヒトＩｇＧの修飾されたＦｃ部分を含む、組換え融合タンパク質である。アタシセプトは、ＢＬｙＳ（Ｂリンパ球刺激因子）及びＡＰＲＩＬ（増殖誘発リガンド）に対するアンタゴニストとして作用し、これらは両方共腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーの一員である。ＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬは、Ｂ細胞成熟機能及び生存の重要な調節因子であることが示されている。
【０００６】
アタシセプトは、ヒトＩｇＧ１−ＦｃとＢＬｙＳ受容体ＴＡＣＩの細胞外ドメインの融合から生じる、３１３個のアミノ酸を含む可溶性糖タンパク質であり、推定質量は３５．４キロダルトン（ｋＤａ）である。この生成物の高次構造は、二量体であり、推定質量は７３．４ｋＤａである。アタシセプトは、チャイニーズはムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞から、組換え技術により作製される。
【０００７】
アタシセプトにおいて、ヒトＩｇＧ１−Ｆｃは、補体Ｃ１ｑ成分へのＦｃ結合及び抗体受容体との相互作用を低下するように修飾された(Taoら、1993；Canfieldら、1991)。アタシセプトは、これらのＦｃエフェクター機能について試験されかつ確認された。
【０００８】
多発性硬化症（ＭＳ）
多発性硬化症（ＭＳ）は、中枢神経系（ＣＮＳ）の慢性の炎症性脱髄疾患であり、かつ若年成人の神経性身体障害の最も一般的原因のひとつである。これは、変動する回復を伴う神経学的症状及び徴候の多病巣性再発性攻撃（再発）により特徴づけられる。最終的に、これらの被験者の大半は、進行性の臨床経過を呈する。
【０００９】
世界中で、成人およそ１５０万人が罹患している。本疾患は、女性の方が男性よりも２倍罹患し、時間とともに注目に値する身体障害を引き起こし、かつ該患者の生涯にわたり継続する。
【００１０】
ＭＳの正確な原因は不明であるが、自己免疫プロセスが関与している。遺伝的易罹患性は、疾患開始において非常に良好に役割を果たすように見えるが、現在確定されていない環境因子も恐らく関与しているであろう。ＣＮＳ抗原と自己反応性であるＴ細胞は、末梢循環において刺激され、かつＣＮＳへ動員されることが推定されている。抗原提示細胞による再刺激時に、自己反応性Ｔ細胞は増殖し、かつ脳内で前炎症カスケードを開始する。この炎症は、時間をかけて脱髄を生じ、最終的には軸索及び脳容積を喪失する。
【００１１】
主にＴ細胞媒介型疾患であるＭＳのパラダイムは、近年変化している(Klawiter及びCross、2007；Antelら、2006；Hauboldら、2004；Soderstronら、1993)。医学界には、Ｂ細胞は、主に以下の２つの機序により視神経炎及びＭＳ病理に貢献するという共通の理解が存在する：（１）ＣＤ４ Ｔ細胞を再刺激しかつ前炎症性サイトカインを生じる抗原提示細胞として働くことにより、細胞レベルで、並びに（２）ＣＮＳ成分に対する抗体の産生により、液性免疫のレベルで。組織学的分析は、ＭＳ集団の顕著な割合におけるＢ細胞及び抗体媒介型病理を示唆している。再発寛解型ＭＳ集団において試験された抗−Ｂ細胞薬であるリツキシマブによる第ＩＩ相試験からの有望な結果が最近報告された(Hauserら、2007)。
【００１２】
病理学的変化のいくつかの相が、ＭＳにおいて生じ、かつ血液脳障壁（ＢＢＢ）の破壊、それに続く浮腫、サイトカイン放出によるリンパ球浸潤、脱髄、及び軸索離断を含む。機能障害は、これらの病理学的相関関係のいずれかにより生じ得るが、永久欠損は、脱髄及び軸索崩壊の両方の存在において認められる。ＭＲＩ及び病理検査の両方からの証拠は、そこには、例え本疾患の初期であっても、様々な程度の軸索の機能障害又は消失が存在することを示している(Fergusonら、1997；Trappら、1998；Fuら、1998；Iannucciら、2000)。
【００１３】
ＭＳを規定する４種の臨床型が認められ、すなわち：一次進行型（ＰＰＭＳ）、進行再発型（ＰＲＭＳ）、二次進行型（ＳＰＭＳ）、及び再発寛解型（ＲＲＭＳ）である。一次進行型ＭＳ被験者は、ＭＳ被験者の約１０％を含んでいる。それらの疾患は、重複性(superimposed)攻撃を伴わない、発症開始からの神経学的欠損のゆっくりとした着実な蓄積により特徴づけられる。被験者の小さい割合は、同様の発症を有するが、場合によっては再発を伴う（進行再発型）。
【００１４】
ＲＲＭＳ被験者は、引き続き変動する回復（寛解）を伴いながら増悪又は再発する。被験者の４０〜５０％は、再発寛解型の経過を辿るが、ＭＳの発症時に、被験者の８０〜８５％は、該疾患のＲＲ型を有するであろう。総合障害度（ＥＤＳＳ）スコア＜４を持つほとんどの被験者は、多発性硬化症の再発寛解型を有する。被験者の約１０％は、良性多発性硬化症であり、これは１０〜１５年罹患後のＥＤＳＳスコアが３未満である、長期にわたる著しく残存性の神経学的欠損の蓄積の欠如により特徴づけられるＲＲＭＳサブセットである。
【００１５】
ＲＲＭＳ被験者の５０％は、発症の１０年以内にＳＰＭＳへ移行し、移行時点のピークは、本疾患発症後約８年である。ＳＰＭＳへ進行するＲＲＭＳの割合は、２５年で８０％に達する。ＳＰＭＳは、重複性再発を伴う又は伴わない、重大かつ持続性の神経学的欠損の着実な蓄積により特徴づけられる。ＥＤＳＳスコアが６．０又はそれよりも高い被験者の大半は、ＳＰＭＳである。
【００１６】
アジア人には、視神経脊髄型（ＯＳ−多発性硬化症）及び通常型（Ｃ−多発性硬化症）の二つの個別の多発性硬化症亜型が存在する。ＯＳ−多発性硬化症において、視神経及び脊髄の選択的かつ重篤な関与が特徴である。
【００１７】
疾患修飾性治療、すなわちＭＳの経過を修飾する治療である現在のＭＳ薬物治療は、免疫系を調節又は抑制する。再発性ＭＳに関してＦＤＡが承認した免疫調節薬が存在する：３種のβインターフェロン（レビフ(Rebif)（登録商標）-Merck Serono社；ベタセロン(Betaseron)（登録商標）-Berlex社；アボネックス(Avonex)（登録商標）-Biogen社)、及び酢酸グラチラマー(コパクソン(Copaxone)（登録商標）-Teva社)。ＦＤＡは、再発性多発性硬化症の単剤療法として特別に制限された流通(distribution)プログラムの下で、ナタリズマブ(Tysabri（登録商標）-Biogen社とElan社)も承認している。加えて、進行性又は慢性ＭＳのためのＦＤＡが承認した１種の免疫抑制薬、ミトキサントロン(Novantrone（登録商標）-Merck Serono社)が存在する。
【００１８】
ＭＳの治療において、例えばクラドリビン、塩素化されたプリンアナログである２−クロロ−２’デオキシアデノシン（２−ＣｄＡ）などの、いくつかの他の免疫抑制薬が評価されつつあるが、まだＦＤＡは承認していない(EP 626 853)。
【００１９】
ＭＳは慢性疾患であり、かつＭＳの再発型は頻繁に進行型へと悪化するので、新規かつ有効な再発性ＭＳ治療の可能性を有することは有益である。
【発明の概要】
【００２０】
発明の概要
本発明は、再発性多発性硬化症に罹患している患者におけるアタシセプトの有益な作用を評価する臨床試験を基にしている。
従って本発明は、再発性多発性硬化症の治療のためのＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質、及び再発性多発性硬化症を治療するのに有効な量のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質を含有する組成物を患者へ投与することを含む再発性多発性硬化症の治療方法に関する。
【００２１】
本発明は、アジア人患者における多発性硬化症亜型を構成している、視神経脊髄型（ＯＳ−多発性硬化症）及び通常型（Ｃ−多発性硬化症）にも適用されることは理解される。
【００２２】
再発性多発性硬化症は、Polmanらの論文(2005)に説明されたように改訂McDonald判定基準によるか、又は下記実施例１の付表Ａにおいて規定される。ここで再発性多発性硬化症は、患者における疾患活動の空間的及び時間的散在性(dissemination)により特徴づけられる。空間的散在性は：
−少なくとも１カ所のガドリニウム−増強病変、又はＧｄ−増強病変が存在しない場合には、９カ所のＴ２−高信号病変；
−少なくとも１カ所のテント下病変；
−少なくとも１カ所の傍皮質病変；
−少なくとも１カ所の室周囲病変：の少なくとも３つにより特徴づけられる。時間的散在性は：
−最初の臨床事象の開始後少なくとも３ヶ月経過した時点での、この最初の事象に対応しない部位でのＧｄ−増強の検出；及び
−最初の臨床事象の開始後少なくとも３０日間で実行された参照スキャンと比較し、任意の時点で現れる、新規Ｔ２病変の検出：の少なくとも一つを決定することにより、造影技術を用い測定可能である。
【００２３】
本発明に従い、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、
ａ）ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合するＴＡＣＩ細胞外ドメイン又はそれらの断片若しくは変種；並びに
ｂ）ヒト免疫グロブリン−定常ドメイン：を含んでなる。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
図面の簡単な説明
【図１】図１は、実施例１において説明された４アームのランダム二重盲検プラセボ対照多施設共同第ＩＩ相試験の治験デザインを示す。
【図２】図２は、改訂McDonald判定基準に従う「時間的散在性」のＭＲＩベースの確定に関するフローチャートを示す。Ｇｄ＝ガドリニウム−ＤＴＰＡ、実施例１付表Ａも参照のこと。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
発明の詳細な説明
本発明は、再発性多発性硬化症（再発性ＭＳ又はＲＭＳ）は、アタシセプト有効量を投与することにより治療することができるという知見を基にしている。
従って本発明は、再発性多発性硬化症の治療のためのＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質、及び再発性多発性硬化症治療有効量のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質を含有する組成物の患者への投与を含む再発性多発性硬化症の治療方法に関する。
【００２６】
再発性多発性硬化症は、Polmanらの論文(2005)に説明されたように改訂McDonald判定基準によるか、又は下記実施例１の付表Ａにおいて規定される。ここで再発性多発性硬化症は、患者における疾患活動の空間的及び時間的散在性により特徴づけられる。空間的散在性は：
−少なくとも１カ所のガドリニウム−増強病変、又はＧｄ−増強病変が存在しない場合には、９カ所のＴ２−高信号病変；
−少なくとも１カ所のテント下病変；
−少なくとも１カ所の傍皮質病変；
−少なくとも１カ所の室周囲病変：の少なくとも３つにより特徴づけられる。
【００２７】
時間的散在性は：
−最初の臨床事象の開始後少なくとも３ヶ月経過した時点での、この最初の事象に対応しない部位でのＧｄ−増強の検出；及び
−最初の臨床事象の開始後少なくとも３０日間で実行された参照スキャンと比較し、任意の時点で現れる、新規Ｔ２病変の検出：の少なくとも一つにより、造影技術を用い測定可能である。
【００２８】
本発明の一実施態様において、ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、再発寛解型多発性硬化症（ＲＲＭＳ）、重複性再発を伴う二次進行型多発性硬化症（ＳＰＭＳ）、及び進行再発型多発性硬化症（ＰＲＭＳ）から選択される再発性多発性硬化症（ＲＭＳ）の治療のためである。
【００２９】
ＭＳの進行型は一般に、レトロスペクティブ又はプロスペクティブに決定することができる、１年間の疾患進行、それに加え下記判定基準の２項目により特徴づけられる：（ａ）陽性の脳ＭＲＩ（９カ所のＴ２病変又は４カ所以上の正の視覚誘発電位を伴うＴ２病変）；（ｂ）陽性の脊髄ＭＲＩ（少なくとも２カ所の限局性Ｔ２病変）；（ｃ）ＩｇＧオリゴクローナルバンド又は増大したＩｇＧインデックス、又はこれら両方の等電点電気泳動での証拠による、陽性の脳脊髄液（ＣＳＦ）。
【００３０】
別の本発明の実施態様において、再発性多発性硬化症に罹患している患者は、下記パラメータの少なくとも一つにより特徴づけられる：
ａ）ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質による治療以前２年間に少なくとも２回の再発；
ｂ）ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質による治療以前１年間に少なくとも１回の再発；又は
ｃ）ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質による治療以前に、核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）時に検出された少なくとも１カ所のガドリニウム−ＤＴＰＡ（Ｇｄ）−増強病変。
【００３１】
再発性ＭＳにおいて、臨床再発は一般に、少なくとも１ヶ月隔てられる。
臨床攻撃又は再発は、下記の３種の判定基準により規定することができる（同じく実施例１の付表Ｃ参照）：
（１）（ｉ）先行する臨床事象の発症から少なくとも３０日隔てられた神経学的異常、及び（ｉｉ）少なくとも２４時間持続する神経学的異常：の両方により特定された異常を伴う、新たに出現した又は再出現したのいずれかの神経学的異常；
（２）発熱又は既知の感染症が存在しないこと（温度（腋窩、経口又は尿道で(intrauriculary)測定）３７．５℃／９９．５°Ｆ以上の発熱）；
（３）ｉ）ＥＤＳＳの機能別障害度の少なくとも１の上昇、又はｉｉ）総ＥＤＳＳスコアの増加：のいずれかとして規定された、被験者の報告された症状に相関する、主観的神経学的機能障害。
【００３２】
図２に示されたように、病変の時間的散在性に関する核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）判定基準は、初期臨床事象の発症後少なくとも３０日で実行されたいわゆる参照スキャン以降、任意の時点で生じる少なくとも１カ所の新規Ｔ２病変として規定されている。あるいは、ＭＲＩスキャンは、症状の発症後少なくとも３ヶ月間行われ、かつ時間的散在性は、少なくとも１カ所の新規ガドリニウム（Ｇｄ）−増強病変により確立される。「新規」病変とは、初期臨床事象に関与した部位では生じていない病変である。
【００３３】
下記判定基準のうちの３項目が満たされる場合に、脳の異常及び空間的散在性が、ＭＲＩにより明らかにされる：（１）少なくとも１カ所のガドリニウム−増強病変、又はＧｄ−増強病変が存在しない場合には、９カ所のＴ２−高信号病変；（２）少なくとも１カ所のテント下病変；（３）少なくとも１カ所の傍皮質病変；（４）少なくとも３カ所の室周囲病変。脊髄病変は、脳テント下病変と同等と考えることができる。増強する脊髄病変は、増強する脳病変と同等と考えられ、個々の脊髄病変は、個々の脳病変と一緒に、必要数のＴ２病変に達するのに貢献する。
【００３４】
本発明の状況において用語「治療」は、本疾患に関する任意の有益な作用をいい、これは病理学的顕在化又は本疾患の発症の前後の患者により顕在化された１種以上の症状の減弱、軽減、減少、減退又は緩和を含み、更には本疾患の又はそれらの症状の進行の遅延も含む。
【００３５】
特に本発明による再発性ＭＳの治療は、下記の少なくとも１項目により特徴づけられる：（ａ）ＭＲＩにより測定可能な、未治療の患者と比べ軽減されたＣＮＳ炎症、例えば、未治療の患者と比べ、３、６若しくは９ヶ月間などの長期にわたる治療で、ＭＲＩにおけるＴ１ガドリニウム−増強病変の平均数の減少、又は未治療の患者と比べ、３、６若しくは９ヶ月間の治療後のＭＲＩにおける新規Ｔ１高信号病変の数の減少；（ｃ）所定の患者における少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヶ月以上の間の、再発数の減少、好ましくは再発なし；（ｄ）所定の患者における、総合障害度（ＥＤＳＳ）の改善若しくは安定化、及び／又は多発性硬化症機能的要素検査（ＭＳＦＣ）の改善。
【００３６】
ＥＤＳＳは、疾患重症度を説明する分類スキーム（等級化基準）であり、臨床試験に登録されることが容認される病期を規定するために使用される。これは神経科医により、患者の類似した群別のために、多発性硬化症の身体障害の進行を経過観察し、かつ治療結果を評価するためにも使用される。機能別障害度（ＦＳ）の基準は、その全般的フレームワーク内に組込まれている。
【００３７】
ＥＤＳＳ尺度は、以下のように規定されている(Kurtzke, Neurology, 1983, 33:1444-52)：
０．０−神経学的検査で正常；
１．０−身体障害なし、１ＦＳの極軽い徴候；
１．５−身体障害なし、７ＦＳの２の極軽い徴候；
２．０−７ＦＳの１の極軽い身体障害；
２．５−２ＦＳの極軽い身体障害；
３．０−１ＦＳの中等度身体障害；又は、完全に歩行可能であるが、３−４ＦＳの軽度の身体障害；
３．５−完全に歩行可能であるが、１ＦＳの中等度身体障害、及び１若しくは２ＦＳの軽度身体障害；又は、２ＦＳの中等度身体障害；又は、５ＦＳの軽度身体障害；
４．０−補助なしで完全に歩行可能、比較的高度身体障害にもかかわらず１日約１２時間起き上がって動き回る。補助なし歩行可動域が５００ｍ；
４．５−補助なし完全な歩行、一日の大半を起きあがって動き回る、終日の十分な活動ができる、そうでなければ十分な活動に若干の制限があるか、若しくは最小限の補助を必要とすることがある。比較的高度身体障害。補助なし歩行可動域が３００ｍ；
５．０−補助なし約２００ｍ歩行。終日の十分な活動を損なう身体障害；
５．５−１００ｍ歩行、終日の十分な活動ができない身体障害；
６．０−休憩を入れて若しくは入れずに１００ｍ歩行するために必要な、断続的又は片側付きっきりの補助（杖、松葉杖、若しくは装具）；
６．５−休憩を入れずに２０ｍ歩行するために必要な、両側付きっきりの補助（杖、松葉杖、若しくは装具）；
７．０−補助あっても５ｍ以上歩けず、車椅子に本質的に制限される、車椅子を自分で動かせ、独りで乗降できる；１日約１２時間の車椅子での活動；
７．５−２、３歩以上歩けず、車いすに制限される、動かすのに補助必要なことがある；車椅子を自分で動かせるが、終日の活動のために電動椅子が必要なことがある；
８．０−ベッド、椅子又は車椅子に本質的に制限されるが、１日の大半はベッド外であることができる；身の回りのことを行う機能は維持され、一般に腕は有効に使える；
８．５−一日の大半は本質的にベッドに制限、腕の使用はある程度有効、身の回りのことを行う機能はある程度維持されている；
９．０−体が不自由なベッド生活、意思伝達及び飲食はできる；
９．５−有効な意思伝達又は飲食／嚥下できず；
１０．０−死亡。
【００３８】
機能別障害度（ＦＳ）の基準は、以下に言及する(Kurtzke, Neurology, 1983, 33:1444-52)：身体機能を調節するＣＮＳ領域：錐体路（歩行能）、小脳（協調）、脳幹（発語及び嚥下）、感覚（触覚及び疼痛）、直腸(bowel)及び膀胱；視覚；精神；並びに、その他（多発性硬化症による他の神経学的所見を含む）。各機能別障害度（ＦＳ）は、一番近い可能なグレードに等級化され、かつＶは、異常不明を示す；これらは、追加スコアではなく、個々の項目の比較のためにのみ使用される。
【００３９】
錐体路
０−正常
１−異常徴候あるが障害なし；
２−極軽い身体障害；
３−軽度／中等度の不全対麻痺又は片不全麻痺；高度の単不全麻痺；
４−顕著な不全対麻痺又は片不全麻痺；中等度の四肢麻痺又は単不全麻痺；
５−対麻痺、片麻痺、又は顕著な不全対麻痺；
６−四肢麻痺；
Ｖ−不明。
【００４０】
小脳機能
０−正常；
１−異常徴候あるが身体障害なし；
２−軽度の失調；
３−中等度の躯幹又は四肢の失調；
４−高度の失調；
５−協調運動の実行不能；
Ｖ−不明；
Ｘ−衰弱。
【００４１】
脳幹機能
０−正常；
１−徴候のみ；
２−中等度の眼振、又は軽度の他の身体障害；
３−高度の眼振、顕著な外眼筋麻痺、又は中等度の他の脳神経障害；
４−顕著な構音障害、又は他の顕著な機能障害；
５−発語又は嚥下の不能；
Ｖ−不明。
【００４２】
感覚機能
０−正常；
１−１〜２肢での、振動覚又は描字覚のみの低下；
２−１〜２肢での、軽度の触覚・痛覚・位置覚の低下、及び／若しくは中等度の振動覚の低下；又は、３〜４肢での、振動覚の低下；
３−１〜２肢での、中等度の触覚・痛覚・固有覚の低下、及び／若しくは本質的に振動覚の喪失；又は、３〜４肢での、軽度の触覚若しくは痛覚の低下、及び／若しくは中等度の全ての固有覚検査での低下；
４−１〜２肢の単独又は一緒での、顕著な触覚・痛覚の低下、若しくは固有覚の消失；又は２肢以上での、中等度の触覚・痛覚の低下、及び／若しくは高度の固有覚の消失；
５−１〜２肢での、全感覚の消失；又は、顎以下の体のほとんどでの、中等度の触覚・痛覚の低下、及び／若しくは固有覚の消失；
６−顎以下での、本質的に全感覚消失；
Ｖ−不明。
【００４３】
直腸及び膀胱機能
０−正常；
１−軽度の排尿困難、尿意逼迫、又は尿閉；
２−直腸又は膀胱での、中程度の困難、逼迫、又は尿閉、又は稀な尿失禁；
３−頻繁な尿失禁；
４−ほぼ常に導尿；
５−膀胱機能消失；
６−直腸機能消失；
Ｖ−不明。
【００４４】
視覚機能
０−正常；
１−暗点があり、視力＞２０／３０（矯正）；
２−悪い方の眼に暗点あり、最高視力２０／３０〜２０／５９；
３−悪い方の眼に大きな暗点、又は視野障害、視力２０／６０〜２０／９９；
４−高度視野狭窄、視力２０／１００〜２０／２００；グレード３と良眼の最高視力＜２０／６０；
５−悪い方の眼の視力＜２０／２００；グレード４と良眼の視力＜２０／６０；
Ｖ−不明。
【００４５】
精神機能
0−正常；
1−情動の変化のみ；
2−軽度の知能低下；
3−中等度の知能低下；
4−高度の知能低下；
5−痴呆；
V−不明。
【００４６】
その他の機能
０−正常；
１−その他の神経学的所見あり。
【００４７】
多発性硬化症機能的要素検査（ＭＳＦＣ）は、更に頻繁に適用される評価尺度基準である(例えばRudickら、2001)。これは、ＭＳ患者の下記の能力を評価する：２５歩の時間の２回測定；９−ＨＰＴ（９穴釘試験）による利き手の２回検査；９−ＨＰＴによる非利き手の２回検査；ペース聴覚連続足し算試験（ＰＡＳＡＴ−３’）。これらの検査は、例えば全米多発性硬化症協会（ＮＭＳＳ）により出版されたFischerらにより作成されたマニュアル(2001)に従って、又はFisher JSらの文献「多発性硬化症機能的要素検査(MSFC)に関する投与と評価マニュアル」、ニューヨーク、Demos Medical Publishing、1999に説明されたように、実行される。
【００４８】
本発明の実施態様において、ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、再発性多発性硬化症における再発としての視神経炎の治療のためである。
下記実施例４に従い実行される臨床試験は、初期臨床事象としての視神経炎を、ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質により治療することができるかどうかを確立するであろう。視神経炎が初期臨床事象としてＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質により治療され得る場合、ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、多発性硬化症の再発としての視神経炎にも有益な作用を有するであろうということを正当に予測することができる。
【００４９】
視神経炎の診断は、（ａ）視力喪失；（ｂ）眼痛；及び、（ｃ）色弱（正確な色覚の機能障害）の評価により、臨床的に行うことができる。本発明のこの実施態様により、視神経炎は、単病巣性又は多病巣性であることができ、片眼（一側性）又は両眼に作用することができる。
【００５０】
本発明により、ＴＡＣＩ−Ｉｇは、再発性多発性硬化症の治療に使用される。前記ＴＡＣＩ−免疫グロブリン（ＴＡＣＩ−Ｉｇ）融合タンパク質は、（ａ）ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合するＴＡＣＩ細胞外ドメイン又はそれらの断片若しくは変種；並びに、（ｂ）ヒト免疫グロブリン−定常ドメイン：を含んでなるかまたはからなる。
【００５１】
本発明のフレーム内で、用語「ＴＡＣＩ細胞外ドメイン」は、ＴＡＣＩ細胞外ドメイン（配列番号１）と少なくとも８０％又は８５％、好ましくは少なくとも９０％又は９５％又は９９％同一である、それらの任意の変種もいう。用語「ＴＡＣＩ細胞外ドメイン」は、５０個を超えない又は４０個又は３０個又は２０個又は１０個又は５個又は３個又は２個又は１個の保存的アミノ酸置換を含む変種も含む。任意のそのような変種は、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬ及び／又は任意のＢＬｙＳ−ＡＰＲＩＬヘテロ三量体に結合することができる。好ましくは、このような変種も、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬ及び／又は任意のＢＬｙＳ−ＡＰＲＩＬヘテロ三量体の生物活性を阻害する。ＢＬｙＳ又はＡＰＲＩＬの生物活性は、例えばＢ細胞増殖である。
【００５２】
加えてＴＡＣＩ細胞外ドメインの断片（活性断片）及び変種は、該断片がＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬ及び／又はＢＬｙＳ−ＡＰＲＩＬヘテロ三量体に結合することができる限りは、本発明の状況において使用することができる。好ましくはこのような断片は、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬ及び／又はＢＬｙＳ−ＡＰＲＩＬヘテロ三量体の生物活性も阻害若しくは低下する。
【００５３】
任意のＴＡＣＩ細胞外ドメイン、ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質、又はそれらの任意の変種若しくは断片のＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬ及び／又はＢＬｙＳ／ＡＰＲＩＬヘテロ三量体に結合する能力は、例えば下記実施例２に従い、評価することができる。ＢＬｙＳ、ＡＰＲＩＬ又はＢＬｙＳ／ＡＰＲＩＬヘテロ三量体の生物活性を阻害又は低下する能力は、例えば下記実施例３に従い、評価することができる。
【００５４】
本発明の状況において、ＴＡＣＩ細胞外ドメインのそのような断片若しくは変種又はＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、アタシセプト、すなわち配列番号３のアミノ酸配列を有するタンパク質の活性を有意に低下する生物活性を有さないことは好ましい。
【００５５】
本明細書において使用される用語「免疫グロブリン（Ｉｇ）−定常ドメイン」は、「Ｆｃドメイン」とも称され、ヒト又は動物の免疫グロブリン（Ｉｇ）に由来し、好ましくはＩｇＧである。このＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４であってよい。このＦｃドメインは、好ましくはヒンジ領域と一緒に、ＩｇＧ１の少なくともＣＨ２、ＣＨ３ドメインを含むことが好ましい。
【００５６】
好ましくは、Ｉｇ定常ドメインは、ヒトＩｇＧ１ドメインである。
一実施態様において、ヒトＩｇＧ１定常ドメインは、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）及び／又は抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を低下するように、修飾されている。
【００５７】
ＡＤＣＣにおいて、抗体のＦｃドメインは、ナチュラルキラー細胞及びマクロファージなどの、免疫エフェクター細胞の表面上のＦｃ受容体（ＦｃγＲ）に結合し、標的化された細胞のファゴサイトーシス又は溶解につながる。ＣＤＣにおいて、これらの抗体は、細胞表面で補体カスケードの引き金を引くことにより、標的化された細胞を死滅する。ＩｇＧの活性ＦｃγＲ（ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩＩＩｂ）並びに阻害ＦｃγＲ（ＦｃγＲＩＩｂ）又は補体第一成分（Ｃ１ｑ）への結合は、ヒンジ領域及びＣＨ２ドメインに位置した残基によって決まる。ＣＨ２ドメインの二つの領域は、ＦｃγＲ及び補体Ｃ１ｑ結合にとって重要であり、かつＩｇＧ２及びＩｇＧ４で独自の配列を有する。例えば、ＩｇＧ２残基の２３３−２３６位でのヒトＩｇＧ１への置換は、ＡＤＣＣ及びＣＤＣを大きく低下する(Armourら、1999、及びShieldsら、2001)。EUインデックス位置(Kabatら、1991)に従い、下記Ｆｃ変異を、例えばＩｇＧ１由来のＦｃへ導入することができる：
T250Q/M428L
M252Y/S254T/T256E+H433K/N434F
E233P/L234V/L235A/ΔG236+A327G/A330S/P331S
E333A;K322A。
【００５８】
更にＦｃ変異は、例えば３３０、３３１、２３４、又は２３５、又はそれらの組合せから選択されたＥＵインデックス位置における置換であってよい。ＣＨ２ドメイン内のＥＵインデックス位置２９７でのアミノ酸置換も、本発明の状況においてＦｃドメインに導入され、Ｎ−連結された糖結合(carbohydrate attachment)の可能性のある部位を排除する。ＥＵインデックス位置２２０のシステイン残基もセリン残基と置換され、通常免疫グロブリン軽鎖定常領域とジスルフィド結合を形成するシステイン残基を排除する。
【００５９】
本発明に従い使用されるＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質に適した特定のＦｃドメインは、調製されている。
具体的には、修飾されたヒトＩｇＧ１ Ｆｃの６種の形が、Ｆｃ融合タンパク質の作出のために作製され、かつＦｃ−４８８、更にはＦｃ４、Ｆｃ５、Ｆｃ６、Ｆｃ７、及びＦｃ８と命名されている。Ｆｃ−４８８（配列番号４のＤＮＡ配列及び配列番号５のアミノ酸配列を有する）は、ヒトγ１ Ｆｃ領域を含む融合タンパク質の通常のクローニングのためにデザインされ、並びにこれは鋳型として野生型ヒト免疫グロブリンγ１定常領域を用いて構築された。対合していないシステイン残基に起因した可能性のある有害作用に関する懸念は、通常免疫グロブリン軽鎖定常領域とジスルフィド結合するシステインをセリン残基と置換するという決断につながる。追加の変化は、ＥＵインデックス位置２１８をコードしているコドンへの、その後のＤＮＡ操作が容易になるようにＢｇＩＩＩ制限酵素認識部位の導入であった。これらの変化は、ＰＣＲプライマーでコードされたＰＣＲ産物に導入された。ＢｇＩＩＩ部位の位置により、及びＦｃヒンジ領域を完全にするために、ＥＵインデックス位置２１６及び２１７のコドンは、この融合タンパク質パートナー配列に取り込まれた。
【００６０】
Ｆｃ４、Ｆｃ５、及びＦｃ６は、ＦｃγＲＩ結合及び補体Ｃ１ｑ結合を低下することにより、Ｆｃにより媒介されたエフェクター機能を低下する変異を含む。Ｆｃ４は、Ｆｃ−４８８に導入されたものと同じアミノ酸置換を含む。追加のアミノ酸置換は、可能性のあるＦｃ媒介したエフェクター機能を低下するために導入された。具体的には、ＦｃγＲＩ結合を低下するために、３つのアミノ酸置換が導入された。これらは、ＥＵインデックス位置２３４、２３５、及び２３７での置換である。これらの位置での置換は、ＦｃγＲＩへの結合を低下することが示されている(Duncanら、1988)。これらのアミノ酸置換は、ＦｃγＲＩＩａ結合に加え、ＦｃγＲＩＩＩ結合も低下することができる(Sondermannら、2000；Winesら、2000)。
【００６１】
いくつかの基が、補体Ｃ１ｑ結合及びそれに続く補体固定におけるＥＵインデックス位置３３０及び３３１に関して説明されている(Canfield及びMorrison、1991；Taoら、1993)。これらの位置でのアミノ酸置換は、補体固定を低下するために、Ｆｃ４において導入された。Ｆｃ４のＣH3ドメインは、クローニングされたＤＮＡが大腸菌のｄａｍプラス株において増殖される場合に可能性のあるｄａｍメチル化部位を排除するために、ＴＧＡからＴＡＡへ変更された、停止コドンを除いて、対応する野生型ポリペプチドにおいて認められるものと同一である。
【００６２】
Ｆｃ５において、ＢｇＩＩＩクローニングスキームは、この特定のＦｃを含む融合タンパク質において使用されないので、ＥＵインデックス位置２１８のアルギニン残基は、リシンに戻し変異される。Ｆｃ５配列の残りは、Ｆｃ４に関する先の説明と一致する。
【００６３】
Ｆｃ６は、そのカルボキシル末端リシンコドンが排除されること以外は、Ｆｃ５と同じである。成熟免疫グロブリンのＣ−末端リシンは、Ｂ細胞から分泌される前に、翻訳後に成熟免疫グロブリンから除去されるか、又は血清循環時に除去されることが多い。結果的にこのＣ−末端リシン残基は、典型的には、循環している抗体中には認められない。先のＦｃ４及びＦｃ５のように、Ｆｃ６配列の停止コドンは、ＴＡＡに変更される。
【００６４】
Ｆｃ７は、ＣH2ドメインに配置されたＥＵインデックス位置２９７でのアミノ酸置換以外は、野生型γ１Ｆｃと同じである。ＥＵインデックス位置Ａｓｎ−２９７は、Ｎ−連結された糖結合の位置である。Ｎ−連結された糖は、その糖構造のバッチ毎の変動の可能性のために、組換えにより発現されたタンパク質における可能性のある変動性の源を導入する。この可能性のある変動性を排除する試みにおいて、Ａｓｎ−２９７は、グルタミン残基に変異され、その残基位置でのＮ−連結された糖の結合を防止する。残基２９７の糖は、ＦｃＲＩＩＩへのＦｃ結合にも関与している(Sondermannら、Nature 406:267 (2000))。従ってこの糖の除去は、概して組換えＦｃ７を含有する融合タンパク質の、ＦｃγＲへの結合を減少するはずである。前述のように、Ｆｃ７配列中の停止コドンは、ＴＡＡに変異された。
【００６５】
Ｆｃ８は、ＥＵインデックス位置２２０のシステイン残基が、セリン残基と交換されていること以外は、配列番号４に示された野生型免疫グロブリンγ１領域と同じである。この変異は、通常免疫グロブリン軽鎖定常領域とジスルフィド結合するシステイン残基を除去する。
ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質の形成のためのこれらの特定されたＦｃドメインのいずれかの使用は、本発明の範囲内である。
【００６６】
ＴＡＣＩ−Ｉｇの免疫グロブリン定常ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を有するポリペプチド、又はＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質の全般的生物活性に影響がなく、及びＴＡＣＩ−Ｉｇタンパク質の免疫原性が、アタシセプト（配列番号３）のそれよりも有意に高くない限りは、配列番号２のＩｇ定常ドメインと少なくとも８０％若しくは８５％、好ましくは少なくとも９０％若しくは９５％若しくは９９％同一であるそれらの変種、又は５０個未満、若しくは４０個若しくは３０個若しくは２０個若しくは１０個若しくは５個若しくは３個若しくは２個の保存的アミノ酸置換を含む変種を有するポリペプチドを含んでなるか又はからなることが好ましい。
【００６７】
本発明の状況において、用語「同一性」は、これらの配列を比較することにより決定された、２つ以上のポリペプチド配列の間の関係を反映している。概して、同一性は、比較される配列の長さにわたり、２つのポリペプチド配列のそれぞれの正確なアミノ酸毎の対応をいう。
【００６８】
正確な対応のない配列に関して、「同一率％」を決定することができる。一般に比較される２つの配列は、これらの配列間の最大相関をもたらすように、並置される。これは、いずれか一方又は両方の配列へ「ギャップ」を挿入し、並置度を増大することを含むことができる。同一率％は、同じ又は非常に似た長さの配列について特に適しているように、比較される各配列の長さ全体にわたり決定されてよいか（いわゆるグローバルアラインメント）、又は等しくない長さの配列についてより適しているように、より短い規定された長さの配列について決定されてよい（いわゆるローカルアラインメント）。
【００６９】
二つ以上の配列の同一性の比較法は、当該技術分野において周知である。従って例えば、Wisconsin Sequence Analysis Package、9.1版において利用可能なプログラム(Devereux Jら、1984)、例としてプログラムBESTFIT及びGAPは、二つのポリヌクレオチド間の同一率％及び二つのポリペプチド配列間の同一率％を決定するために使用することができる。BESTFITは、Smith及びWaterman(1981)の「ローカルホモロジー」アルゴリズムを利用し、二つの配列間の類似性の最良の単独領域を発見する。配列の同一性を決定するその他のプログラムも、当該技術分野において公知であり、例えばBLASTプログラムファミリー(Altschul S Fら、1990、Altschul S Fら、1997、NCBIのホームページ(www.ncbi.nlm.nih.gov)でアクセス可能)、及びFASTA(Pearson W R、1990)などがある。
【００７０】
本発明による好ましいアミノ酸置換は、「保存的」置換として公知のものである。ＴＡＣＩの細胞外ドメイン又はＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質の免疫グロブリン定常ドメイン部分の保存的アミノ酸置換は、群内のメンバーの置換がその分子の生物学的機能を保存するような、十分に類似した物理化学特性を有するような、群内の同義アミノ酸を含む(Grantham、1974)。先に規定された配列において、特に挿入又は欠失が、数個のアミノ酸、例えば５０個以下又は３０個以下、２０個以下、若しくは好ましくは１０個以下若しくは５個以下のアミノ酸残基にのみ関与し、例えばシステイン残基などの、機能的高次構造に重要であるアミノ酸を除去若しくは移動しない場合に、それらの機能を変更することなく、アミノ酸の挿入及び欠失も行われ得ることは明らかである。そのような欠失及び／又は挿入により生成されたタンパク質及び変種は、その生物活性が、アタシセプト（配列番号３のアミノ酸配列を有するタンパク質）の生物活性よりも有意に低くない限りは、再発性ＭＳの治療に使用することができる。
【００７１】
WO 00/40716及びWO 02/094852として公開された国際特許出願は、ＴＡＣＩの細胞外ドメインに加え、そのリガンドＢＬｙＳ及びＡＰＲＩＬと相互作用するＴＡＣＩ細胞外ドメインの特異断片の配列を開示している。
WO 00/40716に開示されたように、ＴＡＣＩ細胞外ドメインは、ＴＡＣＩ受容体が属する腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体スーパーファミリーの一員にとって特徴的である、２個のシステイン（Ｃｙｓ）−リッチな反復配列を含む。WO 00/40716において、２番目の保存性の低いＣｙｓ−リッチ反復配列のみを含む、ＢＲ４２ｘ２と称されるＴＡＣＩのスプライシング変種は、ＢＬｙＳに結合することができることも確立されている。従って本発明のフレームにおいて、本ＴＡＣＩ細胞外ドメイン断片は、好ましくは、２番目のＣｙｓ−リッチ反復配列に相当する配列番号１のアミノ酸残基７１から１０４を少なくとも含んでなるか又はからなる。本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、１番目のＣｙｓ−リッチ反復配列に相当する配列番号１のアミノ酸残基３４から６６を更に含んでなることは更に好ましい。
【００７２】
更なる本発明の実施態様において、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬ活性に結合しかつ阻害する該ＴＡＣＩ細胞外ドメイン断片は、配列番号１のアミノ酸残基３０から１１０を含んでなるか又はからなる。
【００７３】
より更なる本発明の実施態様において、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、配列番号３の配列を有するポリペプチド、又はそれらと少なくとも９０％若しくは９５％若しくは９８％若しくは９９％同一であるか、又は３０個未満若しくは２０個若しくは１５個若しくは１０個若しくは５個若しくは３個若しくは２個の保存的アミノ酸置換を有するそれらの変種であって、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合する変種を含んでなるか又はからなる。
【００７４】
より更なる本発明の実施態様において、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、配列番号８の配列を有するポリペプチド、又はそれらと少なくとも９０％若しくは９５％若しくは９８％若しくは９９％同一であるか、又は３０個未満若しくは２０個若しくは１５個若しくは１０個若しくは５個若しくは３個若しくは２個の保存的アミノ酸置換を有するそれらの変種であって、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合する変種を含んでなるか又はからなる。
【００７５】
より更なる本発明の実施態様において、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、配列番号１０の配列を有するポリペプチド、又はそれらと少なくとも９０％若しくは９５％若しくは９８％若しくは９９％同一であるか、又は３０個未満若しくは２０個若しくは１５個若しくは１０個若しくは５個若しくは３個若しくは２個の保存的アミノ酸置換を有するそれらの変種であって、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合する変種を含んでなるか又はからなる。
【００７６】
より更なる本発明の実施態様において、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、配列番号１２の配列を有するポリペプチド、又はそれらと少なくとも９０％若しくは９５％若しくは９８％若しくは９９％同一であるか、又は３０個未満若しくは２０個若しくは１５個若しくは１０個若しくは５個若しくは３個若しくは２個の保存的アミノ酸置換を有するそれらの変種であって、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合する変種を含んでなるか又はからなる。
【００７７】
より更なる本発明の実施態様において、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、配列番号１４の配列を有するポリペプチド、又はそれらと少なくとも９０％若しくは９５％若しくは９８％若しくは９９％同一であるか、又は３０個未満若しくは２０個若しくは１５個若しくは１０個若しくは５個若しくは３個若しくは２個の保存的アミノ酸置換を有するそれらの変種であって、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合する変種を含んでなるか又はからなる。
【００７８】
再発性多発性硬化症の治療のためのＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質の投与は、好ましくは約１０〜約４００ｍｇ／患者／週の範囲であり、より好ましくは約２０〜約３５０ｍｇ／患者／週の範囲である。
【００７９】
本発明の実施態様において、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、好ましくは週１回投与される、２５又は７５又は１５０ｍｇ／患者／週の量での、又は好ましくは週２回投与される５０又は１５０又は３００ｍｇ／患者／週の量での投与のために、調製又は製剤される。
【００８０】
本出願において特定された様々な範囲の数値の使用は、別に明確に記さない限りは、記載された範囲内の最小値及び最大値は両方とも語句「約」に優先するように、近似値として記載される。この様式で、記載された範囲を上回る及び下回るわずかな変動を使用し、該範囲内の数値と実質的に同じ結果を実現することができる。同じく明らかにされた範囲は、言及された最小値と最大値の間の全ての値に加え、それらにより形成可能である任意の範囲を含む、連続した範囲であることが意図されている。
【００８１】
本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、毎日又は１日おきの、好ましくは週２回又は週１回の投与のために調製又は製剤されてよい。好ましくはＴＡＣＩ−Ｉｇの投与は、週１回のボーラス投与である。
別の実施態様において、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、隔週又は月１回の投与のために調製又は製剤される。
【００８２】
一実施態様において、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、負荷期間中の１週間に２回（週２回）の投与のために調製又は製剤される。負荷期間中は、ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、５０又は１５０又は３００ｍｇ／患者／週の量で投与されることが好ましい。更なる実施態様において、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、維持期間中の１週間に１回（週１回）の投与のために調製又は製剤される。維持期間中は、ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、２５又は７５又は１５０ｍｇ／患者／週の量で投与されることが好ましい。
【００８３】
本発明の実施態様により、負荷期間は、好ましくは少なくとも１、２又は３週間であり、かつ好ましくは最大１ヶ月であり、並びに維持期間は、好ましくは少なくとも３又は５又は６又は７又は８ヶ月間であるか、又は少なくとも１年若しくは２年若しくは３年若しくは５年である。実施態様において、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、長期的に使用される。
【００８４】
本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、例えば静脈内、皮下又は筋肉内経路のために製剤されることができる。
本発明の実施態様において、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、皮下投与のために調製又は製剤される。
【００８５】
非経口（例えば静脈内、皮下、筋肉内）投与に関して、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、医薬として許容し得る非経口溶剤（例えば、水、食塩水、デキストロース溶液）及び等張性を維持する添加剤（例えばマンニトール）又は化学安定性を維持する添加剤（例えば保存剤及び緩衝剤）と一緒に、液剤、懸濁剤、乳剤又は凍結乾燥散剤として製剤することができる。この製剤は、通常使用される技術により滅菌される。
【００８６】
本発明の実施態様において、本ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質は、酢酸ナトリウム緩衝液及びトレハロースを含有する製剤中、好ましくは約ｐＨ５の１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液中にである。
【００８７】
更なる実施態様において、本発明は、ａ）ＢＬｙＳに結合するＴＡＣＩ細胞外ドメイン又はそれらの断片若しくは変種；並びに、ｂ）ヒト免疫グロブリン−定常ドメイン、又はそれらの断片若しくは変種：を含む融合分子を、該再発性多発性硬化症の治療に有効な量含有する組成物を患者へ投与することを含む、先に規定されたような、再発性多発性硬化症を治療する方法に関する。
【００８８】
本発明は更に、特に患者が臨床的攻撃に冒されている場合の、ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質を、コルチコステロイドと、特にメチルプレドニゾロンと組合せた、使用及びＲＭＳ治療方法に関する。メチルプレドニゾロンを、経静脈的に１０００ｍｇ／患者／日で使用することは好ましい。
【００８９】
本発明による方法及び使用は、再発性多発性硬化症の他の治療法、例えばインターフェロン−β、クラドリビン、ミトキサントロン、酢酸グラチラマー、ナタリズマブ、リツキシマブ、テリフルノミド、フィンゴリモド、ラキニモド、又はＢＧ−１２（経口フマル酸塩）による治療などと組合せることができる。この組合せ治療は、同時、個別又は逐次であることができる。
【００９０】
ここで本発明を完全に説明する上で、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、かつ過度の実験を行うことなく、広範な同等のパラメータ、濃度及び条件で、同じ事を実行することができることは、当業者には明らかであろう。
【００９１】
本発明は、それらの具体的実施態様に結びつけて説明されているが、更なる修飾が可能であることは理解されるであろう。本出願は、概して本発明の原理に従い、かつ本発明が属する技術分野において公知の又は慣習的実践となるような、並びに添付された「特許請求の範囲」に従い先に示された本質的特徴に適用されるような、本発明の開示からのそのような逸脱を含む、本発明のあらゆる変化、使用又は適応を対象とすることが意図されている。
【００９２】
雑誌記事又は要約、公開又は非公開の米国若しくは外国の特許出願、発行された米国若しくは外国の特許又は任意の他の参考文献を含む、本明細書に引用された参考文献は全て、引用された参考文献内に示されたデータ、表、図面及び本文を含む全体が参照により本明細書中に組み込まれている。加えて、本明細書に引用された参考文献内に引用された参考文献の全内容も、全面的に参照により組込まれている。
【００９３】
公知の方法の段階、通常の方法の段階、公知の方法又は通常の方法の言及は、いかなる意味においても、本発明のいずれかの態様、説明又は実施態様が、関連技術分野において明らかにされ、教示され又は示唆されることの承認ではない。
【００９４】
先の具体的実施態様の説明は、他者(others)が、過度の実験をすることなく、本発明の全般的概念から逸脱することなく、そのような具体的実施態様の様々な適用に関して、当業者の知識（本明細書に引用された参考文献の内容を含む）の適用により、容易に修飾及び／又は適合することができる、本発明の全般的性質を完全に明らかにするであろう。従って、そのような適応及び修飾は、本明細書に示された教示及び指針を基に、明らかにされた実施態様の一連の同等物の意味内であることが意図されている。ここでの表現及び用語は、説明を目的とし、限定を目的とせず、その結果本明細書の用語又は表現は、当業者の知識と組合せて、ここで示された教示及び指針を鑑み当業者により理解されるべきであることも理解されるべきである。
【００９５】
ここで本発明を説明する上で本発明は、例証として提供され、本発明の限定を意図するものではない、以下の例証的臨床試験の概略の実施例を参照しより容易に理解されるであろう。
【実施例】
【００９６】
実施例１：３６週間の治療コースにわたる再発性多発性硬化症（ＲＭＳ）の被験者におけるアタシセプト単剤療法の３投与量の、頻回ＭＲＩ測定により判断される、安全性、忍容性及び有効性を評価するための、４アームのランダム二重盲検プラセボ対照多施設共同第ＩＩ相試験
【００９７】
略語リスト
ＡＥ 有害事象
ＡＬＴ アラニンアミノトランスフェラーゼ
ＡＮＣＯＶＡ 共分散分析
ＡＰ アルカリホスファターゼ
ＡＰＲＩＬ 増殖誘発リガンド
ＡＳＴ アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ
ＢＣＭＡ Ｂ細胞成熟抗原
ＢＩＷ １週２回
ＢＬｙＳ Ｂリンパ球刺激因子
ＣＡ 薬事当局
ＣＤＭＳ 臨床的に規定されたＭＳ
ＣＩ 信頼区間
ＣＩＳ 臨床分離された症候群
ＣＪＤ クロイツフェルト・ヤコブ病
ＣＮＳ 中枢神経系
ＣＱＡ 企業の品質保証(Corporate Quality Assurance)
ＣＲＦ 症例報告書
ＣＲＯ 治験受託機関(Clinical Research Organisation)
ＣＲＰ Ｃ−反応性タンパク質
ＣＴＣＡＥ 有害事象に関する共通用語基準(Common Terminology Criteria for Adverse Events)
ＣＴＳ 治験薬
ＤＭＤ 疾患修飾型薬剤(Disease-Modifying Drug)
ＤＭＰＫ 薬物代謝及び薬物動態
ＤＭＣ データモニタリング委員会
ＤＱＡ 開発品質保証(Development Quality Assurance)
ＤＳＴ データ標準化チーム(Data Standards Team)
ＥＣ 倫理委員会
ＥＣＧ 心電図
ＥＣＲＦ 電子症例報告書
ＥＤＳＳ 総合障害度
ＥＳＲ 赤血球沈降速度
ＥＴＤＲＳ 初期治療糖尿病性網膜症分類
ＥＵ 欧州連合
ＦＤＡ 米食品医薬品局
ＧＣＰ 医薬品の臨床試験の実施に関する基準
Ｇｄ ガドリニウム
ＧＥＥ 一般化推定方程式
ＧＤＳ 総合薬物安全性(Global Drug Safety)
ＨＢｓＡｇ Ｂ型肝炎表面抗原
ＨＩＰＡＡ 医療保険の携行性と責任に関する法律
ＨＩＶ ヒト免疫不全ウイルス
ＩＢ 治験薬概要書
ＩＣＨ 日米欧医薬品規制調和国際会議
ＩＥＣ 独立倫理委員会
ＩＭＰ 治験薬
ＩＲＢ 独立治験審査委員会
ＩＴＴ 治療目的に即した
ＩＵＤ 子宮内用具
ＩＶＩｇ 静脈内免疫グロブリン
ＩＶＲＳ 双方向音声応答システム
ＫＦＳ Kurtzke機能別障害度
ＬＤ 負荷用量
ＬＰＬＶ 最終症例の最終観察
ｍｃｇ マイクログラム
ＭＤ 維持用量
ｍｌ ミリリットル
ＭＲＩ 核磁気共鳴画像法
ＭＲＩ−ＡＣ 核磁気共鳴画像分析センター
ＭＳ 多発性硬化症
ＮＹＨＡ ニューヨーク心臓(Health)協会
ＯＣＴ 光干渉断層法
ＯＮ 視神経炎
ＰＣＦＲ 親子関係報告書(Parent-Child/Foetus Report)
ＰＤ 薬力学
ＰＧｘ 薬理遺伝学／薬理ゲノム学
ＰＫ 薬物動態
ＰＰ プロトコールに適合(Per Protocol)
ＱＷ １週１回
Ｒ＆Ｄ 研究開発
ＲＡ 関節リウマチ
ＲＤ 相対的差異
ＲＧＣ 網膜神経節細胞
ＲＭＳ 再発性多発性硬化症
ＲＮＦＬ 網膜神経線維束
ＲｏＷ 海外部門(Rest of the World)
ＳＡＥ 重篤有害事象
ＳＡＰ 統計解析計画
ｓｃ 皮下（的）
ＳＤ１ 試験第１日目
ＳＥＣ 安全性・倫理委員会
ＳＬＥ 全身性紅斑性狼瘡
ＳＯＰ 標準操作手順書
ＳＲＢ 安全性審査委員会
ＳＵＳＡＲ 重篤未知の疑いのある有害反応
ＴＡＣＩ 膜貫通アクチベーター及びシクロフィリンリガンド−インターアクター
ＴＤ 治療量
ＴＩＷ １週３回
ＴＮＦ 腫瘍壊死因子
ＵＬＮ 正常上限
ＷＢＣ 白血球数
【００９８】
試験の概要
目的：
主要目的：
本試験の主要目的は、頻回ＭＲＩにより判定されたＲＭＳ被験者において、ＣＮＳ炎症を軽減するための、アタシセプト３用量の有効性を評価することである。
【００９９】
二次目的：
感染症の発症率及び重症度を含む、ＲＭＳ被験者における、アタシセプト３用量の安全性及び忍容性の評価。
ＲＭＳ被験者における、最低有効量（ＭＥＤ）を決定するための、アタシセプト３用量の評価。
【０１００】
三次及び探索的目的：
ＲＭＳ被験者におけるアタシセプトの薬力学（ＰＤ）プロファイルと疾患活動の相関により、ＲＭＳ病理におけるＢ細胞免疫の関与に関する情報を更に得ること。
被験者のサブセットにおいて、薬理ゲノム学／薬理遺伝学（ＰＧｘ）試験を行い、遺伝子多型又は遺伝子発現プロファイルと薬物反応の間の、各々、可能性のある関係を同定する。
試験された用量と用法（負荷相：最初の４週間についてＢＷ；維持相：３２週間についてＱＷ）で、アタシセプトの薬物動態（ＰＫ）を評価。
【０１０１】
エンドポイント：
主要エンドポイント：
−主要エンドポイントは、１２週目から３６週目までの１回のスキャンで被験者１名当たりのＴ１ガドリニウム（Ｇｄ）−増強病変の平均数である。
【０１０２】
副次的エンドポイント：
ＭＲＩエンドポイント：
−２４週目から３６週目までの１回のスキャンで被験者１名当たりのＴ１ Ｇｄ−増強病変の平均数平均数：
−１２、２４、及び３６週目の被験者１名当たりの新規Ｔ１高信号病変の数。
臨床エンドポイント
−３６週間の治療期間中再発しなかった被験者の割合。
【０１０３】
安全性エンドポイント：
−有害事象及び感染症の性質、重症度及び発症率：
−臨床検査値異常の発生率及び重症度：
−注射部位反応：
−バイタルサイン、ＥＣＧにおける変化：
−本試験経過途中にアタシセプトに対する抗体を生じた被験者の割合。
【０１０４】
三次エンドポイント：
ＭＲＩエンドポイント：
−各々、１２、２４及び３６週目の、被験者１名当たりのＴ１ Ｇｄ−増強病変の数：
−１２週目から３６週目までの被験者１名当たりのＴ１ Ｇｄ−増強病変の総累積数：
−３６週目にＧｄ−増強病変を有さない被験者の割合：
−Ｔ１病変容積：
−被験者１名当たりのＴ１ Ｇｄ−増強病変の総累積容積（１２週目から３６週目まで被験者１名当たり毎月のスキャン）：
−３６週目の被験者１名当たりのＴ１ Ｇｄ−増強病変の容積：
−Ｔ２病変容積：
−ベースライン／ＳＤ１と比較した３６週目の被験者１名当たりのＴ２病変容積の変化：
−１回のスキャンで被験者１名当たりの組合せた独自（ＣＵ）活性ＭＲＩ病変の平均数（１２週目から３６週目までの被験者１名当たり毎月のスキャン）：
−１２、２４及び３６週目の被験者１名当たりの組合せた独自（ＣＵ）活性ＭＲＩ病変の数：
−１２、２４及び３６週目の被験者１名当たりの新規Ｔ２病変の数：
−ベースライン／ＳＤ１と比較した３６週目の被験者１名当たりの脳容積の変化。
【０１０５】
臨床エンドポイント：
−３６週間を超える治療の年間再発率。
探索的エンドポイント：
−３６週目でのＥＤＳＳ変化（ベースライン／ＳＤ１に対して）
−３６週目でのＭＳＦＣ変化（ベースライン／ＳＤ１に対して）
−個別のインフォームドコンセントに署名した被験者のサブグループにおける薬理ゲノム学／薬理遺伝学（ＰＧｘ）分析：
−薬物動態（ＰＫ）測定：遊離アタシセプト、混成(composite)アタシセプト（遊離アタシセプト＋アタシセプトＢＬｙＳ複合体）、総アタシセプト（遊離アタシセプト＋アタシセプト−ＢＬｙＳ複合体＋アタシセプト−Ａｐｒｉｌ複合体）、アタシセプト−ＢＬｙＳ複合体
−薬力学（ＰＤ）測定：遊離ＡＰＲＩＬ及び遊離ＢＬｙＳ（投与後試料に関する好適なアッセイが利用可能なことを条件とする）、ＥＳＲ、ＣＲＰ、総免疫グロブリン及び免疫グロブリンアイソタイプ、抗−ミエリン抗体、及びリンパ球下位個体群。
【０１０６】
これは、３６週間の治療コースにわたるＲＭＳ被験者におけるアタシセプト単剤療法の３用量対合致するプラセボの頻回ＭＲＩ測定により判断される、安全性、忍容性及び有効性を評価するための、４アームのランダム二重盲検プラセボ対照多施設共同第ＩＩ相試験である。
【０１０７】
最大２８日間のスクリーニング期間に適格判定基準に合致する被験者は、アタシセプトの３用量又はプラセボのいずれかひとつを受け取るように、１：１：１：１のランダム化比によりランダムに割付けられる。
【０１０８】
一つのアームは、アタシセプトを、最初の４週間は負荷投与量１５０ｍｇ ＳＣで週２回（ＢＩＷ）、引き続き次の３２週間にわたり投与量１５０ｍｇ ＳＣで週１回（ＱＷ）提供する。他の二つのアタシセプトアームは、同じ用法に従うが、用量が各々７５ｍｇ及び２５ｍｇである。対照アームは、合致するプラセボを受け取る。治験治療期間は、３６週間であり、４８週間（最後の投与後１２週目）の安全性経過観察来院を伴う。
【０１０９】
全てのランダム化された被験者について、被験者が、２回以上再発を経験し、及び／又は２時点以上でそれらのＥＤＳＳの持続性の増加を経験する（３ヶ月以上の期間にわたり）場合、並びに治験責任医師が、指定された疾患修飾型薬剤による治療を考慮する場合には、レビフ（本試験経過にわたり４４ｍｃｇを週３回［ＴＩＷ］）による救済治療の選択肢がある。
救済投薬を受ける被験者は、ＩＭＰから離脱されるが、本試験に留まり、来院スケジュールに従い全ての予定された評価を行う。
【０１１０】
治験集団：
被験者は、スクリーニング時に下記項目の少なくとも一つを満たさなければならない：
−先の２年間に２回以上の文書化された再発、又は
−登録前の１年間に１回以上の文書化された再発、又は
−スクリーニング時のＭＲＩで検出された１カ所以上のＧｄ−増強病変。
被験者は、世界中の約５０施設から募集される。
【０１１１】
適格判定基準：
組入れ基準：
被験者は全員、ベースライン／ＳＤ１（投与第１日目）以前に、下記のエントリー判定基準を満足しなければならない：
１．再発性多発性硬化症の診断(McDonald判定基準、2005年に従う)；
２．下記の少なくとも一つを満たす：先の２年間に２回以上の文書化された再発、登録前の１年間に１回以上の文書化された再発、又はスクリーニング時のＭＲＩで検出された１カ所以上のＧｄ−増強病変：
３．インフォームドコンセントが得られた時点で、１８〜６０歳の男性又は女性：
４．ＥＤＳＳが０から５．５までである：
５．妊娠の可能性のある女性は、投与前に授乳してはならず、かつ初回スクリーニング時及び試験第１日目（ＳＤ１）に、血清／尿妊娠検査で陰性でなければならない。本治験の目的に関して、妊娠の可能性のある女性とは、「閉経後少なくとも２年間経過、又は手術により不妊である以外の、思春期以後の全ての女性被験者」と定義される。
６．妊娠の可能性のある女性被験者は、ＳＤ１の前およそ４週間、治験投薬期間中及び治験投薬の最終投与後１２週間、適切な避妊方法を用いることにより、避妊することが求められる。この必要要件は、手術により不妊の被験者又は閉経後少なくとも２年経過した被験者には適用されない。適切な避妊は、二種の障壁法、又は殺精子剤若しくは子宮内用具若しくは経口女性避妊薬の使用を伴う一種の障壁法として規定される。
７．被験者は、本試験期間中試験手順に従う意志がありかつ可能であること。
８．米国に関して、通常の医療の一部ではないあらゆる試験関連手順の前に、医療保険の携行性と責任に関する法律（ＨＩＰＡＡ）の下での被験者承諾を含み、かつ被験者は自身の将来の医療を棄損することなくいかなる時点においてもコンセントを撤回してよいことを理解した上での、書面によるインフォームドコンセントの自発的提出（あらゆる治験関連手順の前に入手）。
【０１１２】
除外基準:
本試験の組入れに関して適格であるために、被験者は、下記の判定基準のいずれかを満たしてはならない：
１．一次進行型ＭＳに罹患。
２．重複性再発を伴わない二次進行型ＭＳに罹患。
３．治験責任医師の意見において、本試験への参加がリスク又は禁忌を構成するか、又は試験目的、実施若しくは評価を妨害し得る、臨床検査所見及び病歴若しくは試験前評価における所見を含む、任意の状態。
４．リツキシマブ若しくはベリムマブなどの、Ｂ細胞変更療法による、先行する治療。
５．ＳＤ１以前３ヶ月以内の、インターフェロンβ又は酢酸グラチラマーなどの免疫調節療法への曝露。
６．有効性の認知欠如による、先行する免疫変更療法の中断。
７．非限定的に、クラドリビン、ミトキサントロン、アレムツズマブ、シクロホスファミド、アザチオプリン、メトトレキセート、又はナタリズマブを含む、免疫抑制薬又は細胞毒性物質への過去の曝露。
８．リンパ節照射、又は骨髄移植などの、先行する骨髄抑制／細胞毒性療法。
９．ＳＤ１以前６ヶ月以内の、サイトカイン又は抗−サイトカイン療法、静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩｇ）又は血漿交換の先行する使用。
１０．ＳＤ１以前２８日以内の、経口又は全身性のコルチコステロイド又は副腎皮質刺激ホルモンによる治療。
１１．本試験中の長期又は月１回のパルスコルチコステロイドの必要性。
１２．ＳＤ１以前２ヶ月以内、又は本治験化合物の５半減期以内の、いずれか長い期間の、何らかの介入的臨床試験への参加。
１３．アタシセプト又は製剤されたアタシセプトの任意の成分に対するアレルギー又は過敏症。
１４．クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）の診断又は家族歴。
１５．中等度から重度の腎臓機能障害（Cockcroft-Gault式に従い、クレアチニンクリアランス＜５０ｍｌ／分）。
１６．ガドリニウムに対するアレルギー又は過敏症。
１７．管理できない又はニューヨーク健康協会（ＮＹＨＡ）クラス３若しくは４のうっ血性心不全の病歴又は存在。定義を追加されたい。
ＮＹＨＡクラス３：身体活動に著しい制約を生じる、心疾患。対象は、安静時には無症状である。普通以下の活動で、疲労、動悸、呼吸困難、又は狭心症疼痛を生じる。
ＮＹＨＡクラス４：不快感を伴わずに、いかなる身体活動も行うことができない、身体障害を生じる心疾患。安静時であっても、心不全の症状若しくは狭心症症候群がある。何らかの身体活動が行われる場合、不快感が増強される。
(出典：「The Criteria Committee of the New York Heart Association. Nomenclature and Criteria for Diagnosis of Diseases of the Heart and Great Vessels」第9版、ボストン、マサチューセッツ州：Little, Brown & Co；1994:253-256)；
１８．適切に治療された皮膚の基底細胞癌、子宮頸部異形成症、又は皮膚若しくは頸部に発生(in situ)した癌腫を除く、癌の病歴。
１９．スクリーニング時に、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）又はアルカリホスファターゼ（ＡＰ）レベルが、＞２．５×ＵＬＮ、総ビリルビンが＞１．５×ＵＬＮ。
２０．スクリーニング時の血液学的試験における臨床的に有意な異常（例えば、ヘモグロビン＜１００ｇ／Ｌ（６．２１ｍｍｏｌ／Ｌ）、ＷＢＣ＜３×１０9／Ｌ、リンパ球＜０．８×１０9／Ｌ、血小板＜１４０×１０9／Ｌ）。
２１．ＳＤ１以前３ヶ月以内に行われた胸部Ｘ線検査又はスクリーニング時に行われたＥＣＧにおける、臨床的に有意な異常。
２２．ＳＤ１以前１ヶ月以内の生ワクチンによる免疫化、又は本試験中のそのような治療の必要性。
２３．既知の活動期の臨床的に有意な急性若しくは慢性の感染症、又はＳＤ１の４週間以内の入院若しくは非経口抗感染薬による治療が必要となるような感染症の任意の主要エピソード。
２４．陽性のＨＩＶ、Ｃ型肝炎又はＢ型肝炎（ＨＢｓＡｇ）血清（スクリーニング時に行われる試験）。
２５．スクリーニング以前過去１年以内の活動期又は潜伏期結核の存在。被験者は、国家及び／又は地域の推奨に従い、活動期又は潜伏期結核について評価されかつスクリーニングされなければならない。
２６．スクリーニング時の血清ＩｇＧが６ｇ／Ｌ未満。
【０１１３】
治験薬：
アタシセプト製剤は、容量１ｍＬ中アタシセプト１５０ｍｇ、７５ｍｇ及び２５ｍｇの様々な用量を含有する、予め充填された注射器中の、透明からわずかに不透明で、わずかに黄色から黄色の注射用滅菌液剤として供給される。
プラセボは、各々１ｍＬ含有する、アタシセプト３用量が予め充填された注射器と合致する、予め充填された注射器中の、透明な、注射用滅菌液剤として供給される。
治験医薬品の予め充填された注射器は、被験者及び治験従事者がこれらの液剤の色の差がわからないように不透明なラベルにより被覆される。
【０１１４】
データ解析及び統計：
本試験は、主要エンドポイントにおいて、少なくとも一つの実薬投与群、対、プラセボ群の間の治療差異を検出するようにデザインされている。
合計約２９２名の被験者（１アームにつき被験者約７３名がランダム化される）は、アタシセプト３投与量（２５ｍｇ、７５ｍｇ及び１５０ｍｇ）とプラセボ群の間の少なくとも一つの治療差異を検出するための、検出力８０％を提供する。この計算は、nQuery MGTO検定を基にし、両側一元配置ＡＮＯＶＡは、以下を推定する：（１）共通ＳＤが１．５（先の治験依頼者試験PRISMS及びEVIDENCEから)、（２）治療平均が、プラセボ群において２．０であり、各実薬治療群の治療平均は各々１．４、１．３及び１．２であり、プラセボと比較して３０％、３５％及び４０％の相対減少と解釈される、並びに（３）全体で５％の１型誤判別率。この計算は更に、離脱／評価不能率は１０％と想定している。
【０１１５】
本試料サイズは、実際臨床的に意味のある差異が０．８（すなわちプラセボアームと比べ４０％の相対減少であり、１回のスキャンの被験者１名当たりのＴ１ Ｇｄ＋病変の平均数は、プラセボ群において２．０であると想定される）であり、かつ共通ＳＤが１．５である場合、試験下で、それらの実薬用量に関する最低有効量（ｍｅｄ）を決定するための、検出力少なくとも８０％も提供する。
【０１１６】
解析セット及びサブグループ：
治療目的に即した（ＩＴＴ）集団は、主要解析集団である。全てのランダム化された被験者は、ＩＴＴ集団に含まれる。３６週間の治療を完了し、大きなプロトコール逸脱を伴わずに主要エンドポイント評価を有するＩＴＴ被験者は、プロトコールに適合した集団に含まれる。有効性解析は、ＩＴＴ集団及びプロトコールに適合した集団を用いて行われる。安全性解析は、経過観察安全性データを伴う、試験治療の少なくとも一つの投与量を受け取った全ての被験者を含む。
【０１１７】
安全性エンドポイント：
有害事象数及び有害事象を伴う被験者は、全身の臓器クラス及び好ましい期間別に、各治療群についてまとめる。併用薬、被験者離脱、バイタルサイン、臨床検査、ＣＴＣＡＥ臨床検査毒性判定基準、及びアタシセプトに対する抗体力価をまとめる。
アタシセプト製剤は、各々１ｍＬ含有する、予め充填された注射器中の、透明からわずかに不透明で、わずかに黄色から黄色の注射用滅菌液剤として供給される。本治験に使用される製剤は、アタシセプトを２５ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ及び１５０ｍｇ／ｍＬの強度で、トレハロース及び賦形剤として１０ｍｍｏｌ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５）を含有する。
【０１１８】
プラセボ：
プラセボは、各々１ｍＬ含有する、アタシセプトが予め充填された注射器と合致する、予め充填された注射器中の、透明な、注射用滅菌液剤として供給される。本治験に使用される製剤は、トレハロース及び１０ｍｍｏｌ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５）を含有する。
【０１１９】
救済療法として、レビフ（登録商標）４４ｍｃｇが予め充填された注射器が、治験依頼者により供給される。初回用量の力価決定後のレビフ用量は、ｓｃ注射により、週３回（ｔｉｗ）投与される４４ｍｃｇである。レビフは、鍵のかかる調剤室内で、２〜８℃（３６〜４６°Ｆ）で、冷蔵貯蔵しなければならない。本医薬品は、凍結してはならない。
【０１２０】
治療開始時の可能性のある副作用は、図１に概略されたような、最初の４週間の用量漸増により、最小化することができる。各用量は、用量の容量及び投与の日付と時間と共に、被験者において毎日記録されなければならない。
【０１２１】
Rebiject II(商標)自動注射器は、予め充填されたガラス製注射器内のレビフの自動化された皮下注射が意図される装置の選択肢であり、これは求めに応じて提供される。
全ての被験者は、適切な医薬品の取り扱い、自己注射の手順、薬物力価決定及び投与、使用に関して、治験施設の担当者により指導されなければならない。
レビフ投与に関する完全な情報について、患者情報リーフレットを含む地域の承認されたラベリングを参照することができる。
【０１２２】
付表：方法論
付表Ａ：改訂McDONALD判定基準
改訂されたMcDonald判定基準(2005)は、以下のように、多発性硬化症病変の空間的及び時間的散在性を規定している：
空間的散在性：
被験者は、下記病変の３つを有さなければならない：
−少なくとも１カ所のガドリニウム−増強病変、又はＧｄ−増強病変が存在しない場合には、９カ所のＴ２−高信号病変；
−少なくとも１カ所のテント下病変；
−少なくとも１カ所の傍皮質病変；
−少なくとも１カ所の室周囲病変。
【０１２３】
注記：脊髄病変は、脳テント下病変と同等であるとみなすことができる。増強する脊髄病変は、増強する脳病変と同等であるとみなされ、かつ個々の脊髄病変は、Ｔ２病変の必要数に達するよう、個々の脳病変と一緒に寄与することができる。
【０１２４】
時間的散在性（図２参照）：
造影を使用し、時間的散在性を示す方法が二つある：
−最初の臨床事象の開始後少なくとも３ヶ月経過した時点での、この最初の事象に対応しない部位でのＧｄ−増強の検出；及び
−最初の臨床事象の開始後少なくとも３０日間で実行された参照スキャンと比較し、任意の時点で現れる、新規Ｔ２病変の検出。
【０１２５】
付表Ｂ：薬物投与スキーム
治療は、割付けられた用量が週２回（ＢＩＷ；試験１、４、８、１１、１５、２２及び２５日目）投与される、最初の４週間の負荷期間、それに続く割付けられた用量が週１回（ＱＷ）投与され、第２９日目／第５週目に始まり、次の３２週間にわたる維持期間からなる。
詳細は、下記表に示す：
【表１】
【０１２６】
付表Ｃ：ＭＳ臨床攻撃／再発に関する判定基準
下記判定基準（ａ、ｂ、ｃ）全てに合致しなければならない：
１．（ｉ）先行する臨床事象の発症から少なくとも３０日隔てられた神経学的異常、及び（ｉｉ）少なくとも２４時間持続する、神経学的異常：の両方により特定される異常を伴う、新たに出現した又は再出現したのいずれかの、神経学的異常。
２．発熱又は既知の感染症が存在しないこと（温度（腋窩、経口又は尿道で測定）３７．５℃／９９．５°Ｆ以上の発熱)。
３．ｉ）ＥＤＳＳ機能別障害度の少なくとも１つの上昇、又はｉｉ）総ＥＤＳＳスコアの増加：のいずれかにより規定される、被験者の報告された症状と相関する、主観的神経学的機能障害。
【０１２７】
いかなる追加症状も伴わない、感覚異常、疲労、精神症状、及び／又は自律神経症状の出現は、ＭＳ臨床攻撃としては分類されない。
【０１２８】
実施例２：ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質、それらの変種及び断片のＢＬＹＳ又はＡＰＲＩＬへの結合を試験する結合アッセイ
二つのアプローチを使用し、ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質並びにそれらの変種及び断片（以後：ＴＡＣＩ−Ｆｃ構築体）のＢＬｙＳとの結合特性を試験することができる。
一つのアプローチは、ＴＡＣＩ−Ｆｃ構築体の、121Ｉ−標識されたＢＬｙＳの結合に関して、ＴＡＣＩ−コートされたプレートと競合する能力を測定する。第二のアプローチにおいて、漸増する濃度の121Ｉ−標識されたＢＬｙＳは、各ＴＡＣＩ−Ｆｃ構築体と一緒にインキュベーションし、かつ沈殿したＢＬｙＳ−ＴＡＣＩ−Ｆｃ複合体に関連した放射活性が決定される。
【０１２９】
Ａ．競合結合アッセイ：
ＢＬｙＳは、標準方法に従い、ヨードビーズ(Pierce社)により放射性ヨウ素化される。簡単に述べると、ＢＬｙＳ ５０μｇを、単独のヨードビーズを用い、121Ｉ ４ｍＣｉでヨウ素化する。この反応を、０．２５％ウシ血清アルブミン溶液で停止し、遊離125Ｉを、ＰＤ−１０カラム(Pierce社)を使用するゲル濾過により除去する。125Ｉ−ＢＬｙＳ調製品の比放射能は、脱塩工程の前後の、トリクロロ酢酸沈殿により決定する。
【０１３０】
「ＴＡＣＩ−Ｎ」と称されるＴＡＣＩ受容体のＮ−末端断片を、９６−ウェルプレート（１００ｕ．、Ｉは０．１ｕｇ／ｍｌ）に添加し、４℃で一晩インキュベーションする。このプレートを洗浄し、Superblock(Pierce社)でブロックし、再度洗浄する。０〜１１．５ｎｇ／ｍｌの範囲の様々な濃度のＴＡＣＩ−Ｆｃ構築体を、一定濃度の125Ｉ−ＢＬＹＳ（２０ｎｇ／ｍｌ）と混合し、ＴＡＣＩ−Ｎでコートされたプレート上で３７℃で２時間インキュベーションする。対照は、溶液中ＴＡＣＩ−Ｎを含むか、ＴＡＣＩ−Ｆｃを欠いているかのいずれかである。インキュベーション後、これらのプレートを洗浄し、計測する。各測定は、３つ組で行う。
【０１３１】
これらの結果は、所定のＴＡＣＩ−Ｆｃ構築体は、濃度約１００ｎｇ／ｍｌ以上で125Ｉ−ＢＬｙＳ結合を完全に阻害するかどうかを示し、かつＴＡＣＩの完全細胞外ドメインを含む構築体（すなわち配列番号１を含む構築体）などの、公知のＴＡＣＩ−Ｆｃ構築体と比較することができる。
Ｆｃ断片単独は、更なる対照として試験することができ、これは結合を阻害しない。
ＩＣ50値は、３回の実験で各構築体について算出することができ、その後平均値が示される。
【０１３２】
Ｂ．溶液結合アッセイ：
濃度０．０５ｎＭで、各ＴＡＣＩ−Ｆｃ構築体は、０．４ｐＭ〜１．５ｎＭの125Ｉ−ＢＬＹＳと共に、総容積０．２５ｍｌ／チューブで、室温で３０分間インキュベーションする。Pansorbin(Staph A)懸濁液を各チューブに添加し、１５分後、これらの試料を遠心し、２回洗浄し、ペレットを計測する。
【０１３３】
非特異的結合は、１３０ｎＭ非標識ＢＬｙＳの125Ｉ−ＢＬｙＳ／ＴＡＣＩ−Ｆｃ混合物への添加により決定する。特異的結合は、非標識ＢＬｙＳの存在中の結合したｃｐｍを、各濃度の125Ｉ−ＢＬＹＳで結合した総ｃｐｍから減算することにより算出する。各測定は、３つ組で行う。結合定数は、GraphPad Prismソフトウェア(Macintosh（登録商標）社 v. 3.0)を用いて算出する。
先の（Ａ）及び（Ｂ）に説明されたアッセイは、ＢＬｙＳをＡＰＲＩＬと交換することにより、ＴＡＣＩ−Ｉｇ、それらの変種又は断片の、ＡＰＲＩＬへの結合の測定に使用することができる。
【０１３４】
実施例３：ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質、それらの変種及び断片によるＢｌｙｓ又はＢｌｙｓ／ＡＰＲＩＬヘテロ三量体活性の阻害を試験するための、ヒトＢ細胞増殖バイオアッセイ
本アッセイは、例えばRoschkeらの論文(2002)に説明されている。
【０１３５】
ヒト及びマウスＢ細胞の増殖
ヒト扁桃Ｂ細胞を、フィコール遠心分離、それに続くＭＡＣＳ磁気ビーズ(Miltenyi Biotec社, Auburn, CA)を使用する陰性選択により、単離する。脾細胞を、６〜１０週齢の雌のＢＡＬＢ／ｃマウスから、フィコール遠心分離により単離する。Ｂ細胞増殖は、黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)細胞（最終希釈１／１００，０００；Pansorbin；Calbiochem社, ラホヤ, CA)の存在下、タンパク質濃度範囲９０ｎｇ／ｍｌ〜０．０１ ｐｇ／ｍｌで評価する。細胞は、１×１０-5Ｍ ２−ＭＥを含有する１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩの最終容積中に１×１０5／ウェルで再懸濁し、かつＢＬｙＳ、ＡＰＲＩＬ又はＢＬｙＳ／ＡＰＲＩＬヘテロ三量体の存在下でインキュベーションし、７２時間試験する。その後細胞を、［Ｈ3］チミジン０．５μＣｉ／ウェルで更に２０時間パルス処理する。チミジンの取込みは、細胞増殖の測定として使用する。
【０１３６】
ＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質、それらの変種又は断片による、ＢＬｙＳ、ＡＰＲＩＬ又はＢＬｙＳ／ＡＰＲＩＬヘテロ三量体の阻害を試験するために、細胞を、ＢＬｙＳ、ＡＰＲＩＬ又はＡＰＲＩＬ／ＢＬｙＳヘテロ三量体のいずれかの３ｎｇ／ｍｌ存在下でインキュベーションし、かつ中和活性を、濃度範囲１０μｇ／ｍｌ〜１００ｐｇ／ｍｌ（６回の１０倍希釈）で試験する。
【０１３７】
実施例４：３６週間の治療コースにわたる臨床分離された症候群（ＣＩＳ）としての視神経炎（ＯＮ）被験者における光干渉断層法（ＯＣＴ）により評価されるアタシセプトの安全性及び忍容性を評価し、かつ神経保護作用を探索するための、２アームのランダム二重盲検プラセボ対照多施設共同第ＩＩ相試験
【０１３８】
略語リスト
ＡＥ 有害事象
ＡＬＴ アラニンアミノトランスフェラーゼ
ＡＮＣＯＶＡ 共分散分析
ＡＰ アルカリホスファターゼ
ＡＰＲＩＬ 増殖誘発リガンド
ＡＳＴ アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ
ＢＣＭＡ Ｂ細胞成熟抗原
ＢＩＷ １週２回
ＢＬｙＳ Ｂリンパ球刺激因子
ＣＡ 薬事当局
ＣＤＭＳ 臨床的に規定されたＭＳ
ＣＩ 信頼区間
ＣＩＳ 臨床分離された症候群
ＣＪＤ クロイツフェルト・ヤコブ病
ＣＮＳ 中枢神経系
ＣＱＡ 企業の品質保証
ＣＲＦ 症例報告書
ＣＲＯ 治験受託機関
ＣＲＰ Ｃ−反応性タンパク質
ＣＴＣＡＥ 有害事象に関する共通用語基準
ＣＴＳ 治験薬
ＤＭＤ 疾患修飾型薬剤
ＤＭＰＫ 薬物代謝及び薬物動態
ＤＭＣ データモニタリング委員会
ＤＱＡ 開発品質保証
ＤＳＴ データ標準化チーム
ＥＣ 倫理委員会
ＥＣＧ 心電図
ＥＣＲＦ 電子症例報告書
ＥＤＳＳ 総合障害度
ＥＳＲ 赤血球沈降速度
ＥＴＤＲＳ 初期治療糖尿病性網膜症分類
ＥＵ 欧州連合
ＦＤＡ 米食品医薬品局
ＧＣＰ 医薬品の臨床試験の実施に関する基準
Ｇｄ ガドリニウム
ＧＥＥ 一般化推定方程式
ＧＤＳ 総合薬物安全性
ＨＢｓＡｇ Ｂ型肝炎表面抗原
ＨＩＰＡＡ 医療保険の携行性と責任に関する法律
ＨＩＶ ヒト免疫不全ウイルス
ＩＢ 治験薬概要書
ＩＣＨ 日米欧医薬品規制調和国際会議
ＩＥＣ 独立倫理委員会
ＩＭＰ 治験薬
ＩＲＢ 独立治験審査委員会
ＩＴＴ 治療目的に即した
ＩＵＤ 子宮内用具
ＩＶＩｇ 静脈内免疫グロブリン
ＩＶＲＳ 双方向音声応答システム
ＫＦＳ Kurtzke機能別障害度
ＬＤ 負荷用量
ＬＰＬＶ 最終症例の最終観察
ｍｃｇ マイクログラム
ＭＤ 維持用量
ｍｌ ミリリットル
ＭＲＩ 核磁気共鳴画像法
ＭＲＩ−ＡＣ 核磁気共鳴画像分析センター
ＭＳ 多発性硬化症
ＮＹＨＡ ニューヨーク健康協会
ＯＣＴ 光干渉断層法
ＯＮ 視神経炎
ＰＣＦＲ 親子関係報告書
ＰＤ 薬力学
ＰＧｘ 薬理遺伝学／薬理ゲノム学
ＰＫ 薬物動態
ＰＰ プロトコールに適合
ＱＷ １週１回
Ｒ＆Ｄ 研究開発
ＲＡ 関節リウマチ
ＲＤ 相対的差異
ＲＧＣ 網膜神経節細胞
ＲＭＳ 再発性多発性硬化症
ＲＮＦＬ 網膜神経線維束
ＲｏＷ 海外部門
ＳＡＥ 重篤有害事象
ＳＡＰ 統計解析計画
ｓｃ 皮下（的）
ＳＤ１ 試験第１日目
ＳＥＣ 安全性・倫理委員会
ＳＬＥ 全身性紅斑性狼瘡
ＳＯＰ 標準操作手順書
ＳＲＢ 安全性審査委員会
ＳＵＳＡＲ 重篤未知の疑いのある有害反応
ＴＡＣＩ 膜貫通アクチベーター及びシクロフィリンリガンド−インターアクター
ＴＤ 治療量
ＴＩＷ １週３回
ＴＮＦ 腫瘍壊死因子
ＵＬＮ 正常上限
ＷＢＣ 白血球数
【０１３９】
試験の概要
目的：
主要目的：
本試験の主要目的は、光干渉断層法（ＯＣＴ）による評価として、ＯＮにおける網膜神経線維束（ＲＮＦＬ）の厚さを保持するための、アタシセプトの有効性を評価することである。
【０１４０】
二次目的：
感染症の発症率及び重症度を含む、ＯＮ被験者における、アタシセプトの安全性及び忍容性の評価、並びにMcDonald 判定基準又は臨床的に規定されたＭＳ（ＣＤＭＳ）によるＯＮ被験者のＲＭＳへの移行。
ＯＮ被験者における低いコントラスト文字視力及びコントラスト感度などの、視覚的転帰に対するアタシセプトの作用の探索。
【０１４１】
三次及び探索的目的：
ＯＮ被験者におけるアタシセプトの薬力学（ＰＤ）プロファイルとＲＮＦＬ保持及び視覚的転帰の相関により、ＯＮ病理におけるＢ細胞免疫の関与に関する情報を更に得ること。
色覚、視野及び高コントラスト感度などの、視覚機能に対する、アタシセプトの作用の探索。
被験者のサブセットにおいて、薬理遺伝学／薬理ゲノム学試験を行い、遺伝子多型又は遺伝子発現プロファイルと薬物反応の間の、各々、可能性のある関係を同定する。
３６週間の治療過程において、最初の４週間の負荷相には１５０ｍｇ ＳＣで週２回（ＢＩＷ）、その後１５０ｍｇ ＳＣで週１回（ＱＷ）が与えられる、３６週間のアタシセプトの薬物動態の評価。
【０１４２】
エンドポイント：
主要エンドポイント：
−主要エンドポイントは、ＯＣＴにより評価された、ベースラインから３６週までのＯＮ患者の罹患した眼のＲＮＦＬ厚さの変化である。
【０１４３】
副次的エンドポイント：
有効性エンドポイント：
―１２、２４及び３６週目の、ＯＮ患者の罹患した眼及び僚眼の間のＲＮＦＬ厚さの差。
―ベースラインから１２及び２４週目までの、ＯＮ患者の罹患した眼のＲＮＦＬ厚さの変化。
―ベースラインから１２、２４及び３６週目までの、ＯＮ患者の罹患した眼の中心窩の周囲３ｍｍでの黄斑厚さの変化。
―ベースラインから１２、２４及び３６週目までの、ＯＮ患者の罹患した眼の中心窩の周囲６ｍｍでの黄斑厚さの変化。
―ベースラインから１２、２４及び３６週目までの、ＯＮ患者の罹患した眼の黄斑容積の変化。
―１２、２４及び３６週目の、低コントラスト文字視力(Sloanチャート)。
―１２、２４及び３６週目の、コントラスト感度(Pelli-Robsonチャート)。
【０１４４】
安全性エンドポイント：
−感染症を含む、有害事象の性質、重症度及び発症率：
−臨床検査値異常の発生率及び重症度：
−注射部位反応：
−バイタルサイン、ＥＣＧにおける変化：
−本試験経過途中にアタシセプトに対する抗体を生じた被験者の割合。
―３６週の治療期間中にMcDonald判定基準又はＣＤＭＳ（二次臨床的攻撃）に従いＲＭＳへ移行される被験者の割合。
―３６週目のＥＤＳＳ変化（ベースラインに対して）。
【０１４５】
三次／探索的エンドポイント：
―１２、２４及び３６週目の、高コントラスト文字視力（初期治療糖尿病性網膜症分類（ＥＴＤＲＳ）チャート）。
―１２、２４及び３６週目の、自動化された視野(Humphrey自動視野測定)。
―１２、２４及び３６週目の、色覚(Farnsworth Munsell D15試験)。
−薬物動態（ＰＫ）測定：遊離アタシセプト、混成アタシセプト（遊離アタシセプト＋アタシセプトＢＬｙＳ複合体）、総アタシセプト（遊離アタシセプト＋アタシセプト−ＢＬｙＳ複合体＋アタシセプト−ＡＰＲＩＬ複合体）、アタシセプト−ＢＬｙＳ複合体
−薬力学（ＰＤ）測定：遊離ＡＰＲＩＬ及び遊離ＢＬｙＳ（投与後試料に関する好適なアッセイが利用可能であることを条件とする）、ＥＳＲ、ＣＲＰ、総免疫グロブリンアイソタイプ、リンパ球下位個体群。
―被験者のサブセットにおいて、薬理ゲノム学／薬理遺伝学（ＰＧｘ）試験は、遺伝子多型又は遺伝子発現プロファイルと薬物反応の間の、各々、可能性のある関係を同定するために行われる。
【０１４６】
これは、３６週間の治療コースにわたるＯＮ被験者におけるアタシセプト対合致するプラセボのＯＣＴにより判断される、安全性及び忍容性、並びに神経保護作用を評価するための、２アームのランダム二重盲検プラセボ対照多施設共同第ＩＩ相試験である。
【０１４７】
被験者は、アタシセプト又はプラセボを、１：１ランダム化比で受け取る。アタシセプトは、３６週間の治療コースで、最初の４週間に１５０ｍｇ ＳＣで週２回（ＢＩＷ）の負荷用量が先行し、その後１５０ｍｇ ＳＣで週１回（ＱＷ）与えられる。対照群は、合致するプラセボを受け取る。本試験時に、１回のスクリーニング来院し（試験第１日目（ＳＤ１）来院以前２８日以内）、ＳＤ１来院時に被験者はランダム化され、試験治療が開始され、並びに１、４、８、１２、１６、２０、２４、３０及び３６週目に引き続き来院する。定期的な電話による接触は、予定された来院の間に実行される。コルチコステロイドの使用は、最初のＯＮ事象の治療の選択肢である。引き続きのコルチコステロイドの使用は、付表Ｂに規定されたようなＣＤＭＳへ移行する患者、又は同眼における二次ＯＮ攻撃を発症する患者における再発の治療に制限される。
【０１４８】
被験者は、最終用量後、１２週間経過観察される。ＯＣＴ、視覚機能及び安全性の評価は、４８週目の経過観察来院時に行われる。
全てのランダム化された被験者について、被験者がＣＤＭＳへ移行し、かつ治験責任医師が、指定された疾患修飾型薬剤による治療を考慮する場合には、レビフ（登録商標）（本試験経過にわたり４４ｍｃｇを週３回［ＴＩＷ］）による救済治療の選択肢がある。救済投薬を受ける被験者は、ＩＭＰから離脱されるが、本試験に留まり、来院スケジュールに従い全ての予定された評価を行う。
【０１４９】
治験集団：
本試験に適格である患者は、初期臨床事象として症候性片側性ＯＮと診断される（臨床的に分離された症候群、ＣＩＳ）。この組入れ基準は、ＯＮを示しているＣＩＳ被験者の登録を確実にし、かつ本治験時の安全性及び有効性の評価を混乱させ得る先行する療法を避けることを目的としている。更に、本治験時に再発しかつ安全性評価を混乱させ得る過去の感染症又は併存疾患は、除外される。
【０１５０】
脱髄疾患の最初の臨床兆候としてのＯＮは、別の種類の臨床攻撃を示しているＭＳ患者よりも本状態におけるより顕著なＲＮＦＬの喪失のために、治療作用のより頑強な評価を可能にし（ＲＮＦＬ厚さは、症候性の視覚の関与を伴わなくともＭＳにおいて減少する）、その結果安定したベースラインを保証する。単病巣性ＯＮの患者の選択は、治験集団における重度の両側性視覚機能障害のリスクを避け、かつ通常両側性で、同時及び頻繁に重度であるＯＮの存在によっても、ＭＳから識別されている、視神経脊髄炎(Cross, 2007)などの別の状態の患者の組入れを避ける。それに従い、両側性ＯＮを示している患者は、ＭＳへの進行のリスクが低いことが示されている。
本試験は、世界中の約３０施設で実行される。
【０１５１】
適格判定基準：
参加基準：
１．症状発症とＳＤ１の間で２８日以内の最初の臨床症状発現としての片側症候性視神経炎の診断；
２．インフォームドコンセントが得られた時点で、１８〜６０歳の男性又は女性：
３．あらゆる試験−関連手順の前に提出された、書面によるインフォームドコンセント。被験者は、インフォームドコンセントフォームを読み、理解しなければならず、本試験の必要要件を完全に理解しなければならず、かつ全ての試験来院及び評価を完了することを望まなければならない。
４．妊娠の可能性のある女性は、投与前に授乳してはならず、初回スクリーニング時の血清妊娠検査で陰性及びＳＤ１の尿妊娠検査で陰性でなければならない。本治験の目的に関して、妊娠の可能性のある女性とは、「閉経後少なくとも２年間経過、又は手術により不妊である以外の、思春期以後の全ての女性被験者」と定義される。
５．妊娠の可能性のある女性被験者は、ＳＤ１の前およそ４週間、治験期間中及び治験投薬の最終投与後１２週間、適切な避妊方法を用いることにより、避妊することが求められる。この必要要件は、手術により不妊の被験者又は閉経後少なくとも２年経過した被験者には適用されない。適切な避妊は、二種の障壁法、又は殺精子剤若しくは子宮内用具若しくは経口女性避妊薬の使用を伴う一種の障壁法として規定される。
６．本試験の期間に試験手順を完了する意志があり、かつ可能であること；
７．米国に関して、通常の医療の一部ではないあらゆる試験関連手順の前に、医療保険の携行性と責任に関する法律（ＨＩＰＡＡ）の下での被験者承諾を含み、かつ被験者は自身の将来の医療を棄損することなくいかなる時点においてもコンセントを撤回してよいことを理解した上での、書面によるインフォームドコンセントの自発的提出（あらゆる治験関連手順の前に入手）。
【０１５２】
除外基準:
１．現在のＯＮ攻撃前のＯＮの病歴；
２．両側性視神経炎；
３．ＭＳの診断；
４．Devic病の診断；
５．視神経炎に無関係の合併疾患の眼内状態（詳細な病歴及び検査により確認され、これは緑内障、視神経形成不全、黄斑円孔、網膜硝子体牽引、糖尿病、又は他の視神経疾患を含む）；
６．以下のように規定される、罹患した眼の浮腫に起因したスクリーニング来院時の評価不能なＯＣＴ：
２以上のセクター(sector)で正常よりも１０μｍ以上大きいＲＮＦＬ厚さ、又は１２セクターのいずれかにおいて２００μｍよりも大きいＲＮＦＬ厚さ；
７．±６ジオプターよりも大きい屈折障害；
８．治験責任医師の意見において、本試験への参加がリスク又は禁忌を構成するか、又は試験目的、実施若しくは評価を妨害し得る、臨床検査所見及び病歴若しくは試験前評価における所見（非限定的に、有意な神経系、腎臓、肝臓、内分泌腺又は消化器の疾患など）を含む、任意の状態；
９．リツキシマブ若しくはベリムマブなどの、Ｂ細胞変更療法による、先行する治療；
１０．インターフェロンβ又は酢酸グラチラマーなどの、免疫調節療法への過去の曝露；
１１．非限定的に、クラドリビン、ミトキサントロン、アレムツズマブ、シクロホスファミド、アザチオプリン、メトトレキセート、又はナタリズマブを含む、免疫抑制薬又は細胞毒性物質への過去の曝露；
１２．リンパ節照射、又は骨髄移植などの、先行する骨髄抑制／細胞毒性療法；
１３．サイトカイン又は抗−サイトカイン療法、静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩｇ）又は血漿交換の先行する使用；
１４．ＳＤ１以前６０日以内の、経口又は全身性のコルチコステロイド又は副腎皮質刺激ホルモンによる治療；最初のＯＮ事象を治療するための、任意のコルチコステロイドコースは除く；
１５．本試験中の長期又は月１回のパルスコルチコステロイドの必要性；
１６．ＳＤ１以前１ヶ月以内の生ワクチンによる免疫化又はＩｇ治療の受け取り、又は本試験中のそのような治療の必要性；
１７．ＳＤ１以前２ヶ月以内（又はＳＤ１以前の本治験化合物の５半減期以内の、いずれか長い期間）、ＳＤ１前の何らかの介入的臨床試験への参加；
１８．中等度から重度の腎臓機能障害（Cockcroft-Gault式に従い、クレアチニンクリアランス＜５０ｍｌ／分）；
１９．ガドリニウムに対するアレルギー又は過敏症；
２０．アタシセプト又は製剤されたアタシセプトの任意の成分に対する既知の過敏症；
２１．クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）の診断又は家族歴；
２２．管理できない又はニューヨーク健康協会（ＮＹＨＡ）クラス３若しくは４のうっ血性心不全の病歴又は存在；
２３．適切に治療された皮膚の基底細胞癌、子宮頸部異形成症、又は皮膚若しくは頸部に発生した癌腫を除く、癌の病歴；
２４．スクリーニング時に、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）又はアルカリホスファターゼ（ＡＰ）レベルが、＞２．５×ＵＬＮ、総ビリルビンが＞１．５×ＵＬＮ；
２５．スクリーニング時の、血液学的試験における臨床的に有意な異常（例えば、ヘモグロビン＜１００ｇ／Ｌ（６．２１ｍｍｏｌ／Ｌ）、ＷＢＣ＜３×１０9／Ｌ、リンパ球数＜０．８×１０9／Ｌ、血小板＜１４０×１０9／Ｌ）；
２６．ＳＤ１以前３ヶ月以内に行われた胸部Ｘ線検査又はスクリーニング時に行われたＥＣＧにおける、臨床的に有意な異常；
２７．既知の活動期の臨床的に有意な急性若しくは慢性の感染症、又はＳＤ１評価の４週間以内の入院若しくは非経口抗感染薬による治療が必要となるような感染症の任意の主要エピソード；
２８．陽性のＨＩＶ、Ｃ型肝炎又はＢ型肝炎（ＨＢｓＡｇ）血清（スクリーニング時に行われる試験）；
２９．スクリーニング以前過去１年以内の活動期又は潜伏期結核の存在。被験者は、国家及び／又は地域の推奨に従い、活動期又は潜伏期結核について評価されかつスクリーニングされなければならない；
３０．スクリーニング時の血清ＩｇＧが６ｇ／Ｌ未満。
【０１５３】
治験薬：
アタシセプト製剤は、容量１ｍＬ中アタシセプト１５０ｍｇを含有する予め充填された注射器中に、透明からわずかに不透明で、わずかに黄色から黄色の注射用滅菌液剤として供給される。
プラセボは、各々１ｍＬ含有する、アタシセプトが予め充填された注射器と合致する、予め充填された注射器中の、透明な、注射用滅菌液剤として供給される。
治験医薬品の予め充填された注射器は、被験者及び治験従事者がこれらの液剤の色の差がわからないように不透明なラベルにより被覆される。
【０１５４】
データ解析及び統計：
試料サイズの決定
合計８２名の患者（１アームにつきランダム化された患者４１名）は、相対差異（ＲＤ）５０％に相当する、プラセボ及びアタシセプト治療アーム、各々、２０μｍ及び１０μｍの３６週間でのＲＮＦＬ喪失を評価する、主要エンドポイントにおける差異を検出するための、検出力少なくとも８０％を提供する。この計算は、プラセボアームにおける２０μｍ及び治療アームにおける４μｍの両側１型誤判別率５％及び標準偏差（ＳＤ）を仮定し行った。この計算は、評価不能率１５％と想定している。計算は、不均等分散(unequal variances)のための２−標本Satterthwaite ｔ−検定(NQuery 5.0)を基にしている。
【０１５５】
ランダム化
被験者は、二重盲検様式で、アタシセプト又はプラセボのいずれかを受け取るように比１：１でランダム化される。被験者は、適格であることが確認された後のみランダム化される。ランダム化は、性別及びＭＲＩ病変（スクリーニング時のＭＲＩ病変の有無）により階層化される。ランダム並べ替えブロックデザインを使用し、層別因子内で１：１比で治療のバランスを得る。治療群への割付けは、音声自動応答システム（ＩＶＲＳ）により中央集中型ランダム化を用い決定される。
【０１５６】
解析集団
治療目的に即した（ＩＴＴ）集団は、全てランダム化された被験者からなる。被験者は、それらのランダム化された治療に従い解析される。本プロトコールに適合した集団は、３６−週間の治療を完了し、かつ大きいプロトコール逸脱を有さないと見なされる、全てランダム化された被験者からなる。主要エンドポイントの解析に関して、本プロトコールに適合した集団は、妥当な(valid)3６週目のＯＣＴ評価、更には入手可能なベースラインＯＣＴを有さなければならない。ＰＰ集団は、主要エンドポイントの主要解析セットである。全ての有効性エンドポイントは、ＩＴＴ及びＰＰの両集団について解析される。ＰＰ解析とＩＴＴ解析の間の結論の差異を調べ、考察する。安全性集団は、経過観察安全性データを伴う、試験治療の少なくとも一つの用量を受け取った全ての被験者を含む。
【０１５７】
統計方法論
３６週目のＲＮＦＬ厚さの保持の主要エンドポイントを、アタシセプト１５０ｍｇとプラセボの間で、不均等分散に関して両側ｔ−検定を用い、比較する。極値又は非正規性（目視により評価）が存在する場合、治療群間の比較は、主要な方法としてウイルコクソン順位和検定を用いて行う。２つの層別因子（性別及びスクリーニングＭＲＩ病変（非存在又は存在））を含むANCOVA解析を行い、治療作用が、これら２つの因子により影響を受けるかどうかを評価する。加えて、スクリーニング相における領域、ベースラインＲＮＦＬ、喫煙歴及びコルチコステロイドの使用の作用によるANCOVAは、治療作用が、これらの共変量因子により影響を受けるかどうか評価するために反復する。１２、２４及び３６週に測定された、視神経病理及び視覚機能の変化に関連した二次及び三次エンドポイントは、主要エンドポイントと同じアプローチを用いて解析される。９５％信頼区間を伴う記述統計は、治療アームにより提供され、長期にわたるエンドポイントの変化を評価する。これらの解析は、ＲＮＦＬ喪失の主要エンドポイントに対するアタシセプトの作用の時機を調べるためにも役立つ。
【０１５８】
治験薬
アタシセプト及びプラセボが予め充填された注射器は、治験依頼者により供給される。医薬品は、７．３項に説明されたように、治療キット中で提供される。
【０１５９】
アタシセプト
アタシセプト製剤は、各々１ｍＬ含有する、予め充填された注射器中に、透明からわずかに不透明で、わずかに黄色から黄色の注射用滅菌液剤として供給される。
本治験に使用される製剤は、アタシセプトを１５０ｍｇ／ｍＬの強度で、トレハロース及び賦形剤として１０ｍｍｏｌ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５）を含有する。
【０１６０】
プラセボ
プラセボは、各々１ｍＬ含有する、アタシセプトが予め充填された注射器と合致する、予め充填された注射器中の、透明な、注射用滅菌液剤として供給される。
本治験に使用されるプラセボ製剤は、トレハロース及び１０ｍｍｏｌ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５）を含有する。
【０１６１】
用量及び投与
適格の被験者は、皮下注射により投与されるアタシセプト又は合致するプラセボを受け取るように、ランダム化される。
治療は、割付けられた用量が週２回（ＢＩＷ；試験１、４、８、１１、１５、２２及び２５日目）投与される、最初の４週間の負荷期間、それに続く割付けられた用量が週１回（ＱＷ）投与され、第２９日目／第５週に始まり、次の３２週間にわたる維持期間からなる。
【０１６２】
アタシセプト群：アタシセプト１５０ｍｇ ＳＣ、週２回（ＢＩＷ）を４週間、それに続く１５０ｍｇ ＳＣ、週１回（ＱＷ）を３２週間；
プラセボ群：プラセボＳＣ、週２回（ＢＩＷ）を４週間、それに続くプラセボＳＣ、週１回（ＱＷ）を３２週間。
【０１６３】
アタシセプト及びプラセボは、提供された予め充填された注射器を用い、前腹壁にＳＣ注射される。各場合に注射される溶液の容量は、１．０ｍＬである。注射部位は循環しなければならない。
【０１６４】
救済投薬
救済療法として、レビフ（登録商標）４４ｍｃｇが予め充填された注射器が、治験依頼者により供給される。初回用量の力価決定後のレビフ用量は、ｓｃ注射により、週３回（ｔｉｗ）投与される４４ｍｃｇである。レビフは、鍵のかかる調剤室内で、２〜８℃（３６〜４６°Ｆ）で、冷蔵貯蔵しなければならない。本医薬品は、凍結してはならない。
【０１６５】
治療開始時の可能性のある副作用は、図１に概略されたような、最初の４週間の用量漸増により、最小化することができる。各用量は、用量の容量及び投与の日付と時間と共に、被験者において毎日記録されなければならない。
【０１６６】
Rebiject II(商標)自動注射器は、予め充填されたガラス製注射器内のレビフの自動化された皮下注射が意図される装置の選択肢であり、これは求めに応じて提供される。
全ての被験者は、適切な医薬品の取り扱い、自己注射の手順、薬物力価及び投与、使用に関して、治験施設の担当者により指導されなければならない。
レビフ投与に関する完全な情報について、患者情報リーフレットを含む地域の承認されたラベリングを参照することができる。
【０１６７】
付表：方法論
付表Ａ：改訂McDONALD判定基準
改訂されたMcDonald判定基準(2005)は、以下のように、多発性硬化症病変の空間的及び時間的散在性を規定している：
空間的散在性：
被験者は、下記病変の３つを有さなければならない：
−少なくとも１カ所のガドリニウム−増強病変、又はＧｄ−増強病変が存在しない場合には、９カ所のＴ２−高信号病変；
−少なくとも１カ所のテント下病変；
−少なくとも１カ所の傍皮質病変；
−少なくとも１カ所の室周囲病変。
【０１６８】
注記：脊髄病変は、脳テント下病変と同等であるとみなすことができる。増強する脊髄病変は、増強する脳病変と同等であるとみなされ、かつ個々の脊髄病変は、Ｔ２病変の必要数に達するよう、個々の脳病変と一緒に寄与することができる。
【０１６９】
時間的散在性（図２参照）：
造影を使用し、時間的散在性を示す方法が二つある：
−最初の臨床事象の開始後少なくとも３ヶ月経過した時点での、この最初の事象に対応しない部位でのＧｄ−増強の検出；及び
−最初の臨床事象の開始後少なくとも３０日間で実行された参照スキャンと比較し、任意の時点で現れる、新規Ｔ２病変の検出。
【０１７０】
付表Ｂ：ＭＳ臨床攻撃／再発に関する判定基準
下記判定基準（ａ、ｂ、ｃ）全てに合致しなければならない：
−（ｉ）先行する臨床事象の発症から少なくとも３０日隔てられた神経学的異常、及び（ｉｉ）少なくとも２４時間持続する、神経学的異常：の両方により特定される異常を伴う、新たに出現した又は再出現したのいずれかの、神経学的異常。
−発熱又は既知の感染症が存在しないこと（温度（腋窩、経口又は尿道で測定）３７．５℃／９９．５°Ｆ以上の発熱）。
−ｉ）ＥＤＳＳ機能別障害度の少なくとも１つの上昇、又はｉｉ）総ＥＤＳＳスコアの増加：のいずれかにより規定される、被験者の報告された症状と相関する、主観的神経学的機能障害。
【０１７１】
いかなる追加症状も伴わない、感覚異常、疲労、精神症状、及び／又は自律神経症状の出現は、ＭＳ臨床攻撃としては分類されない。
【０１７２】
実施例５：Ｂｌｙｓアンタゴニストの作製
４種のＴＡＣＩ−Ｆｃアミノ末端切断型が作製された。４種全て、配列番号６のアミノ酸残基番号３０に融合された、WO 02/094852に開示されたような修飾されたヒト組織プラスミノーゲン活性化因子シグナル配列（配列番号２５）を有する。しかし、これら４種のタンパク質は、Ｆｃ５が配列番号６のＴＡＣＩアミノ酸配列に融合される点の位置が異なる。表１は、４種の融合タンパク質の構造を概説している。
【０１７３】
【表２】
【０１７４】
タンパク質をコードしている発現カセットは、標準技術を用いる、オーバーラップＰＣＲにより作製した(例えば、Hortonら、1989参照)。ＴＡＣＩをコードしている核酸分子及びＦｃ５をコードしている核酸分子を、ＰＣＲ鋳型として使用する。オリゴヌクレオチドプライマーは、表２及び３に確定されている。
【０１７５】
【表３】
【０１７６】
【表４】
【０１７７】
ＰＣＲ増幅の第一ラウンドは、４種のアミノ末端切断型の各々に関する２反応からなった。これらの２反応は、各型に関して１つの反応において５’及び３’ＴＡＣＩオリゴヌクレオチドを用い、並びに別の反応において５’及び３’Ｆｃ５オリゴヌクレオチドを用い、個別に行った。第一ラウンドのＰＣＲ増幅の条件は、以下であった。最終容積２５μｌに、鋳型ＤＮＡ約２００ｎｇ、１０×Ｐｆｕ反応緩衝液(Stratagene社)２．５μｌ、２．５ｍＭ ｄＮＴＰを２μｌ、２０μＭの各５’オリゴヌクレオチド及び３’オリゴヌクレオチドを０．５μｌ、並びにＰｆｕポリメラーゼ０．５μｌ（２．５単位、Stratagene社)を添加した。増幅の熱プロファイルは、９４℃で３分間；９４℃で１５秒間、５０℃で１５秒間、７２℃で２分間を３５サイクル；その後７２℃で２分間の伸長からなる。この反応生成物は、アガロースゲル電気泳動により分画し、かつ予想されるサイズに対応するバンドをゲルから切り出し、QIAGEN QIAQUICKゲル抽出キット(Qiagen社)を製造業者の指示に従い使用し、回収した。
【０１７８】
ＰＣＲ増幅の第二ラウンド、又はオーバーラップＰＣＲ増幅反応は、ＤＮＡ鋳型として、第一ラウンドＰＣＲ由来のゲルで精製された断片を用いて行った。第二ラウンドＰＣＲ増幅の条件は、以下であった。最終容積２５μｌに、ＴＡＣＩ断片及びＦｃ５断片の各々の鋳型ＤＮＡ約１０ｎｇ、１０×Ｐｆｕ反応緩衝液(Stratagene社)２．５μｌ、２．５ｍＭ ｄＮＴＰを２μｌ、２０μＭのＺＣ２４，９０３（配列番号１５）及びＺＣ２４，９４６（配列番号１８）を各々０．５μｌ、並びにＰｆｕポリメラーゼ０．５μｌ（２．５単位、Stratagene社)を添加した。増幅の熱プロファイルは、９４℃で１分間；９４℃で１５秒間、５５℃で１５秒間、７２℃で２分間を３５サイクル；その後７２℃で２分間の伸長からなる。この反応生成物は、アガロースゲル電気泳動により分画し、かつ予想されるサイズに対応するバンドをゲルから切り出し、QIAGEN QIAQUICKゲル抽出キット(Qiagen社)を製造業者の指示に従い使用し、回収した。
【０１７９】
４種の型のアミノ末端切断型ＴＡＣＩ−Ｆｃ ＰＣＲ産物の各々は、Invitrogen社のZEROBLUNT TOPO PCRクローニングキットを製造業者の推奨プロトコールに従い用い、個別にクローニングした。表４は、これらのＴＡＣＩ−Ｆｃ構築体のヌクレオチド配列及びアミノ酸配列を確定している。
【０１８０】
【表５】
【０１８１】
これらのヌクレオチド配列を確認した後、アミノ末端切断型ＴＡＣＩ−Ｆｃ融合体の４つの型の各々を含むプラスミドを、ＦｓｅＩ及びＡｓｃＩで消化し、このアミノ酸コードしているセグメントを放出した。ＦｓｅＩ−ＡｓｃＩ断片を、ＣＭＶプロモーター及びＳＶ４０ポリＡセグメントを含む、哺乳類発現ベクターにライゲーションした。発現ベクターは、以下に説明されたようにチャイニーズハムスター卵巣細胞に導入した。
【０１８２】
実施例６：チャイニーズハムスター卵巣細胞によるＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質の生成
前記ＴＡＣＩ−Ｆｃ発現構築体を使用し、電気穿孔法により、動物タンパク質−非含有培地において増殖した懸濁−適合されたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）ＤＧ４４細胞を、トランスフェクションした(Urlaubら、1986)。ＣＨＯ ＤＧ４４細胞は、両方のジヒドロ葉酸レダクターゼ染色体座における欠失のために、機能的ジヒドロ葉酸レダクターゼ遺伝子を欠いている。漸増濃度のメトトレキセート存在下での細胞の増殖は、ジヒドロ葉酸レダクターゼ遺伝子の増幅を生じ、かつ本発現構築体上に連結された組換えタンパク質−コードされた遺伝子を生じた。
【０１８３】
ＣＨＯ ＤＧ４４細胞は、ＰＦＣＨＯ培地(JRH Biosciences社, Lenexa, KS)、４ｍＭ Ｌ−グルタミン(JRH Biosciences社)、及び１×ヒポサンキシン(hypothanxine)−チミジン補充物(Life Technologies社)中で継代し、これらの細胞を、回転振盪プラットフォーム上で、１２０ＲＰＭで、コーニング振盪フラスコ内、３７℃及び５％ＣＯ2でインキュベーションした。これらの細胞は、直線化された発現プラスミドにより個別にトランスフェクションした。無菌性を確実にするために、１回のエタノール沈殿工程を、エッペンドルフチューブ内のプラスミドＤＮＡの２００μｇを、剪断サケ精子担体ＤＮＡ(5'→3' Inc. ボールダー, CO, １０ｍｇ／ｍｌ）２０μｌ、３Ｍ ＮａＯＡｃ（ｐＨ５．２）の２２μｌ、及び１００％エタノール(Gold Shield Chemical社, Hayward, CA)４８４μｌと混合することにより、氷上で２５分間かけて行った。インキュベーション後、このチューブを、４℃のコールドルームに配置された微量遠心機において、１４，０００ＲＰＭで遠心し、上清を除去し、ペレットを７０％エタノール０．５ｍｌで２回洗浄し、風乾させた。
【０１８４】
このＤＮＡペレットが乾燥する間に、２５ｍｌコニカル遠心チューブ中で１０6個の総細胞（１６．５ｍｌ）を９００ＲＰＭで５分間遠心することにより、ＣＨＯ ＤＧ４４細胞を調製した。ＣＨＯ ＤＧ４４細胞を、総容積３００μｌのＰＦＣＨＯ増殖培地に再度懸濁し、０．４ｃｍの電極ギャップ(Bio-Rad社)を備えるGene-Pulserキュベット内に配置した。およそ５０分間の乾燥時間の後、前記ＤＮＡを、ＰＦＣＨＯ増殖培地５００μｌに再度懸濁し、総容積は８００μｌを超えないよう、キュベット中の細胞に添加し、これを室温で５分間静置し、泡の発生を鎮めた。このキュベットを、BioRad Gene Pulser IIユニットセットに０．２９６ｋＶ（キロボルト）及び０．９５０ＨＣ（高キャパシタンス）で配置し、直ちに電気穿孔した。
【０１８５】
これらの細胞を、室温で５分間インキュベーションし、その後CoStar T-75フラスコ中の総容積２０ｍｌのＰＦＣＨＯ培地中に配置した。このフラスコを、３７℃及び５％ＣＯ2に４８時間配置し、次にこれらの細胞は、トリパンブルー色素排除法を利用し、血球計によりカウントし、ヒポサンキシン−チミジン補充物を含まないが２００ｍＭメトトレキセートを含有するＰＦＣＨＯ選択培地(Cal Biochem社)に入れた。
メトトレキセート選択プロセスの回収時に、分泌されたＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質を含有する馴化培地を、ウェスタンブロット分析により試験した。
【０１８６】
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
疾患活動の空間的及び時間的散在性により特徴づけられる患者における再発性多発性硬化症の治療のための、
ａ）ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合するＴＡＣＩ細胞外ドメイン又はそれらの断片若しくは変種；並びに
ｂ）免疫グロブリン−定常ドメイン：
を含んでなる、ＴＡＣＩ−免疫グロブリン（ＴＡＣＩ−Ｉｇ）融合タンパク質であって、ここで、空間的散在性が以下：
−少なくとも１カ所のガドリニウム−増強病変、又はＧｄ−増強病変が存在しない場合には、９カ所のＴ２−高信号病変；
−少なくとも１カ所のテント下病変；
−少なくとも１カ所の傍皮質病変；
−少なくとも１カ所の室周囲病変：
の少なくとも３つにより特徴づけられ、並びに時間的散在性が以下：
−最初の臨床事象の開始後少なくとも３ヶ月経過した時点での、この最初の事象に対応しない部位でのＧｄ−増強の検出；及び
−最初の臨床事象の開始後少なくとも３０日間で実行された参照スキャンと比較し、任意の時点で現れる、新規Ｔ２病変の検出：
の少なくとも一つにより測定可能である、ＴＡＣＩ−免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項２】
再発寛解型多発性硬化症、重複性再発を伴う二次進行型多発性硬化症、及び進行再発型多発性硬化症から選択される再発性多発性硬化症の治療のための、請求項１記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項３】
ｉ）治療前の２年間に少なくとも２回の再発；
ｉｉ）治療前の１年間に少なくとも１回の再発；又は
ｉｉｉ）核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）において検出された少なくとも１カ所のガドリニウム−ＤＴＰＡ（Ｇｄ）−増強病変：
の少なくとも一つにより特定される再発性多発性硬化症の治療のための、請求項１又は２記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項４】
再発性多発性硬化症の再発としての視神経炎の治療のための、請求項１〜３のいずれか一項記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項５】
前記ＴＡＣＩ細胞外ドメインが、配列番号１の配列、又は配列番号１と少なくとも９０％若しくは９５％若しくは９９％同一であるそれらの変種、又は２０個未満の保存的アミノ酸置換を含むそれらの変種であって、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合する変種を含む、請求項１〜４のいずれか一項記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項６】
前記断片が、配列番号１のアミノ酸残基３４〜６６及び／又はアミノ酸残基７１〜１０４を含む、請求項１〜５のいずれか一項記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項７】
前記断片が、配列番号１のアミノ酸残基３０〜１１０、それらと少なくとも９０％同一であるか、又は１０個未満の保存的アミノ酸置換を含むそれらの変種であって、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合する変種を含む、請求項１〜６のいずれか一項記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項８】
前記免疫グロブリン−定常ドメインが、ヒトＩｇＧ１定常ドメインである、請求項１〜７のいずれか一項記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項９】
ヒトＩｇＧ１定常ドメインが、低下した補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）及び／又は抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）のために修飾されている、請求項７記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項１０】
前記ヒト免疫グロブリン−定常ドメインが、配列番号２の配列又は２０個未満の保存的アミノ酸置換を含むそれらの変種を有する、請求項１〜９のいずれか一項記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項１１】
配列番号３の配列、又はそれらと少なくとも９０％同一であるか若しくは３０個未満の保存的アミノ酸置換を有するそれらの変種であって、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合する変種を含む、請求項１〜１０のいずれか一項記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項１２】
１週間に患者１名につき２５又は７５又は１５０ｍｇの量での投与のために製剤された、請求項１〜１１のいずれか一項記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項１３】
１週間に２回の投与のために製剤された、請求項１〜１０のいずれか一項記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項１４】
負荷期間には１週間に２回の投与のために製剤され、かつ維持期間には１週間に１回の投与のために製剤される、請求項１１又は１２記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項１５】
負荷期間は最大１ヶ月であり、かつ維持期間は少なくとも８ヶ月間である、請求項１３記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項１６】
皮下投与のために製剤される、請求項１〜１５いずれか一項記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項１７】
トレハロースを含有するｐＨ５の酢酸ナトリウム緩衝液中に製剤される、請求項１〜１６のいずれか一項記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項１】
疾患活動の空間的及び時間的散在性により特徴づけられる患者における再発性多発性硬化症の治療のための、
ａ）ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合するＴＡＣＩ細胞外ドメイン又はそれらの断片若しくは変種；並びに
ｂ）免疫グロブリン−定常ドメイン：
を含んでなる、ＴＡＣＩ−免疫グロブリン（ＴＡＣＩ−Ｉｇ）融合タンパク質であって、ここで、空間的散在性が以下：
−少なくとも１カ所のガドリニウム−増強病変、又はＧｄ−増強病変が存在しない場合には、９カ所のＴ２−高信号病変；
−少なくとも１カ所のテント下病変；
−少なくとも１カ所の傍皮質病変；
−少なくとも１カ所の室周囲病変：
の少なくとも３つにより特徴づけられ、並びに時間的散在性が以下：
−最初の臨床事象の開始後少なくとも３ヶ月経過した時点での、この最初の事象に対応しない部位でのＧｄ−増強の検出；及び
−最初の臨床事象の開始後少なくとも３０日間で実行された参照スキャンと比較し、任意の時点で現れる、新規Ｔ２病変の検出：
の少なくとも一つにより測定可能である、ＴＡＣＩ−免疫グロブリン融合タンパク質。
【請求項２】
再発寛解型多発性硬化症、重複性再発を伴う二次進行型多発性硬化症、及び進行再発型多発性硬化症から選択される再発性多発性硬化症の治療のための、請求項１記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項３】
ｉ）治療前の２年間に少なくとも２回の再発；
ｉｉ）治療前の１年間に少なくとも１回の再発；又は
ｉｉｉ）核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）において検出された少なくとも１カ所のガドリニウム−ＤＴＰＡ（Ｇｄ）−増強病変：
の少なくとも一つにより特定される再発性多発性硬化症の治療のための、請求項１又は２記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項４】
再発性多発性硬化症の再発としての視神経炎の治療のための、請求項１〜３のいずれか一項記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項５】
前記ＴＡＣＩ細胞外ドメインが、配列番号１の配列、又は配列番号１と少なくとも９０％若しくは９５％若しくは９９％同一であるそれらの変種、又は２０個未満の保存的アミノ酸置換を含むそれらの変種であって、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合する変種を含む、請求項１〜４のいずれか一項記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項６】
前記断片が、配列番号１のアミノ酸残基３４〜６６及び／又はアミノ酸残基７１〜１０４を含む、請求項１〜５のいずれか一項記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項７】
前記断片が、配列番号１のアミノ酸残基３０〜１１０、それらと少なくとも９０％同一であるか、又は１０個未満の保存的アミノ酸置換を含むそれらの変種であって、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合する変種を含む、請求項１〜６のいずれか一項記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項８】
前記免疫グロブリン−定常ドメインが、ヒトＩｇＧ１定常ドメインである、請求項１〜７のいずれか一項記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項９】
ヒトＩｇＧ１定常ドメインが、低下した補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）及び／又は抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）のために修飾されている、請求項７記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項１０】
前記ヒト免疫グロブリン−定常ドメインが、配列番号２の配列又は２０個未満の保存的アミノ酸置換を含むそれらの変種を有する、請求項１〜９のいずれか一項記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項１１】
配列番号３の配列、又はそれらと少なくとも９０％同一であるか若しくは３０個未満の保存的アミノ酸置換を有するそれらの変種であって、ＢＬｙＳ及び／又はＡＰＲＩＬに結合する変種を含む、請求項１〜１０のいずれか一項記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項１２】
１週間に患者１名につき２５又は７５又は１５０ｍｇの量での投与のために製剤された、請求項１〜１１のいずれか一項記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項１３】
１週間に２回の投与のために製剤された、請求項１〜１０のいずれか一項記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項１４】
負荷期間には１週間に２回の投与のために製剤され、かつ維持期間には１週間に１回の投与のために製剤される、請求項１１又は１２記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項１５】
負荷期間は最大１ヶ月であり、かつ維持期間は少なくとも８ヶ月間である、請求項１３記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項１６】
皮下投与のために製剤される、請求項１〜１５いずれか一項記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項１７】
トレハロースを含有するｐＨ５の酢酸ナトリウム緩衝液中に製剤される、請求項１〜１６のいずれか一項記載のＴＡＣＩ−Ｉｇ融合タンパク質。
【図１】
【図２】
【図２】
【公表番号】特表２０１１−５０３０３６（Ｐ２０１１−５０３０３６Ａ）
【公表日】平成２３年１月２７日（２０１１．１．２７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５３２６１４（Ｐ２０１０−５３２６１４）
【出願日】平成２０年１１月１１日（２００８．１１．１１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０６５２８２
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０６２９２６
【国際公開日】平成２１年５月２２日（２００９．５．２２）
【出願人】（５０４１０４８９９）アレス トレーディング ソシエテ アノニム (59)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年１月２７日（２０１１．１．２７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１１月１１日（２００８．１１．１１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０６５２８２
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０６２９２６
【国際公開日】平成２１年５月２２日（２００９．５．２２）
【出願人】（５０４１０４８９９）アレス トレーディング ソシエテ アノニム (59)
【Ｆターム（参考）】
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