口腔用軟膏組成物及び口腔バイオフィルム殺菌剤
【課題】口腔バイオフィルム殺菌効果に優れ、その殺菌効果が持続する口腔用軟膏組成物及び口腔バイオフィルム殺菌剤を提供する。
【解決手段】（Ａ）陽イオン性抗菌剤、（Ｂ）アズレン、（Ｃ）低級１価アルコール及び（Ｄ）水溶性ビニル系高分子を含有してなることを特徴とする口腔用軟膏組成物、及び上記（Ａ）〜（Ｄ）成分からなる口腔バイオフィルム殺菌剤。
【解決手段】（Ａ）陽イオン性抗菌剤、（Ｂ）アズレン、（Ｃ）低級１価アルコール及び（Ｄ）水溶性ビニル系高分子を含有してなることを特徴とする口腔用軟膏組成物、及び上記（Ａ）〜（Ｄ）成分からなる口腔バイオフィルム殺菌剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、口腔バイオフィルム殺菌効果に優れ、その殺菌効果が持続する口腔用軟膏組成物及び口腔バイオフィルム殺菌剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
歯周病は、口腔内の病原性細菌の１種である歯周病原因菌が口腔内に定着することにより始まる炎症性疾患である。口腔清掃が不十分であると歯垢（口腔細菌とその代謝物）が歯肉と歯の境目に付着後、定着し、増殖する。この異物に反応して好中球やマクロファージが浸潤し、炎症が起こる。早めの段階でブラッシング等により口腔清掃ができればこの炎症は改善される。しかし、歯垢が蓄積した状態を放置すると炎症は拡大し、歯周ポケットが形成されると、そこに蓄積された歯垢はブラッシング等では除去し難くなる。そのため、歯周病の予防・改善に有効な手段として歯垢の抑制、即ち、口腔内の病原性細菌を殺菌・静菌することが有用であると言われている。
【０００３】
近年、歯垢はバイオフィルムとして捉えられ（非特許文献１；Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８４，ｐ１３１８−１３２２，１９９９参照）、口腔バイオフィルム（歯垢）中の細菌は、浮遊性細菌と比較すると細菌のたんぱく質発現パターンや薬剤耐性が大きく異なり、浮遊性細菌に有効であった薬剤がバイオフィルム構成細菌に対して有効でないことが明らかになってきた。
【０００４】
これまでに殺菌手段として数多くの抗菌剤、例えば塩化セチルピリジニウム、塩化ベンゼトニウム、クロルヘキシジン等のカチオン性抗菌剤や、トリクロサン等の非イオン性抗菌剤が、口腔用組成物に配合され有効であることが知られている。例えば、トリクロサンは歯垢形成抑制剤として歯磨組成物に配合すること（特許文献１；特開昭６０−２３９４１０号公報）、チモール等のフェノール性化合物も口腔用組成物に配合することで歯垢を抑制すること（特許文献２；特表２００１−５２６２０２号公報）が知られている。
【０００５】
しかしながら、これら抗菌剤は、バイオフィルム細菌の薬剤耐性メカニズムにより、これだけでは十分なバイオフィルム抑制効果が得られないことが明らかとなった。これら抗菌剤の殺菌力を向上させるべく、抗菌剤の滞留性向上（特許文献３；特開平０８−２６９５３号公報）や香料成分との併用（特許文献４；特開２００２−３７０９５３号公報）による改善技術が提案されているが、いずれもバイオフィルムへの薬剤浸透性の低さなどにより顕著な効果が得られていなかった。
【０００６】
更に、バイオフィルム抑制組成物としてラクトン及び／又はフラン誘導体の配合（特許文献５；特開２００４−１５５６８１号公報）、非イオン性抗菌剤及びジカルボン酸化化合物の配合（特許文献６；特開２００５−０１５３６９号公報）、クランベリー又はその抽出物の配合（特許文献７；特開２００９−１５５２７１号公報）などが提案されている。しかし、これら技術は、コストや供給性、製剤安定性等に問題があり、未だ市場に導入されていないのが現状であった。
【０００７】
一方、キク科植物カミツレやユソウ木、ユーカリなどの油性成分は古くから消炎作用を有することが知られており、その消炎成分はカマアズレンやグアイアズレンなどのアズレン類である。本来、水に不溶性のアズレン類はスルホン化などの化学合成をすることで水溶性となる。特に、グアイアズレンの誘導体であるアズレンスルホン酸塩は、抗炎症作用、抗アレルギー作用、抗潰瘍作用、組織修復作用等を有するため、様々な医療分野で治療や予防の目的で広く使用されている。
【０００８】
アズレン類は、暗青色の結晶又は液体であり、アズレンスルホン酸ナトリウムを水に溶解すると青紫色の水溶液になる。しかしながら、アズレン水溶液中のアズレンは、光、熱、酸素などの影響で分解し、その水溶液は退色することが知られている。そのため、アズレン液剤を安定化する方法として、アズレン類を含む液剤に、炭酸水素塩を濃度３０〜１００重量％のアルコールと共に配合する方法（特許文献８；特公平７−３５３４２号公報）が提案されているが、この方法は、溶媒としてアルコールを大量に添加しなければならず、口腔内で使用する場合は刺激の点で改善の余地があった。また、緩衝液に水溶性アズレンを溶解し、縮合リン酸塩を添加することで、液製剤でのアズレン安定性を高めた製法（特許文献９；特開昭５８−１４４３６５号公報）、アズレンス水溶液に陽イオン性界面活性剤又はクロルヘキシジンと非イオン性界面活性剤を配合し安定化する方法（特許文献１０；特開昭５９−１９６８１６号公報）が開示されているが、これら安定化方法は長期間の安定性という面では不十分であった。このようにアズレン類の安定化については種々検討がなされているが、いずれも水溶液での検討に限られていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開昭６０−２３９４１０号公報
【特許文献２】特表２００１−５２６２０２号公報
【特許文献３】特開平０８−２６９５３号公報
【特許文献４】特開２００２−３７０９５３号公報
【特許文献５】特開２００４−１５５６８１号公報
【特許文献６】特開２００５−０１５３６９号公報
【特許文献７】特開２００９−１５５２７１号公報
【特許文献８】特公平７−３５３４２号公報
【特許文献９】特開昭５８−１４４３６５号公報
【特許文献１０】特開昭５９−１９６８１６号公報
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８４，ｐ１３１８−１３２２，１９９９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
このような現状から、従来の技術に代わる、口腔バイオフィルム中の細菌に対して有効な新たな殺菌技術が望まれる。
本発明は上記事情に鑑みなされたもので、高い口腔バイオフィルム殺菌効果を奏し、その効果が持続する口腔用軟膏組成物及び口腔バイオフィルム殺菌剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、上記目的を達成するため鋭意検討した結果、（Ａ）陽イオン性抗菌剤と（Ｂ）アズレンとを併用すると、高い口腔バイオフィルム殺菌効果が発現し、かかる併用系と（Ｃ）低級１価アルコール及び（Ｄ）水溶性ビニル系高分子とを配合することにより、特に軟膏組成物中でアズレンが経時で安定化し、口腔バイオフィルム殺菌効果が持続すること、これにより高い口腔バイオフィルム殺菌効果を奏し、その殺菌効果が持続する口腔用軟膏組成物及び口腔バイオフィルム殺菌剤を提供できることを知見し、本発明をなすに至った。
【００１３】
即ち、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンゼトニウム等の陽イオン性抗菌剤は、口腔内の浮遊菌殺菌効果は高いものの、口腔バイオフィルム殺菌効果は非常に弱いものであったが、本発明者らは、このような陽イオン性抗菌剤にアズレンを併用すると、意外にも口腔バイオフィルム殺菌効果が有効に発現することを見出した。しかしながら、更にこの場合、アズレンを口腔用組成物、特に軟膏組成物に安定に配合することが難しいという問題があることを知見した。即ち、本発明者らが、グアイアズレンスルホン酸ナトリウム等の水溶性アズレンを一般的な水溶性高分子であるセルロース系の水溶性高分子を主体とする水溶性軟膏剤に配合したところ、経時的にアズレン特有の青紫色が退色し分解することが確認された。そこで、本発明者らは、アズレンを軟膏組成物に安定に配合すべく更に研究を進めた結果、アズレンと共に低級１価アルコール及び水溶性ビニル系高分子を配合すると、アズレンの分解が抑えられて安定化し、特に軟膏組成物で上記併用系による口腔バイオフィルム殺菌効果が持続し、長期保存しても高い殺菌効果を奏することを見出した。
【００１４】
従って、本発明は下記の口腔用軟膏組成物及び口腔バイオフィルム殺菌剤を提供する。
請求項１：
（Ａ）陽イオン性抗菌剤、（Ｂ）アズレン、（Ｃ）低級１価アルコール及び（Ｄ）水溶性ビニル系高分子を含有してなることを特徴とする口腔用軟膏組成物。
請求項２：
（Ａ）成分／（Ｂ）成分が、質量比として０．２〜５０である請求項１記載の組成物。
請求項３：
（Ａ）陽イオン性抗菌剤が、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンゼトニウム及び塩化ベンザルコニウムから選ばれる１種以上の第４級アンモニウム塩である請求項１又は２記載の組成物。
請求項４：
（Ｄ）水溶性ビニル系高分子が、ポリビニルピロリドン及び／又はカルボキシビニルポリマーである請求項１乃至３のいずれか１項記載の組成物。
請求項５：
（Ａ）陽イオン性抗菌剤、（Ｂ）アズレン、（Ｃ）低級１価アルコール及び（Ｄ）水溶性ビニル系高分子からなる口腔バイオフィルム殺菌剤。
請求項６：
（Ａ）成分／（Ｂ）成分が、質量比として０．２〜５０である請求項５記載の殺菌剤。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、高い口腔バイオフィルム殺菌効果を奏し、その殺菌効果が持続する口腔用軟膏組成物及び口腔バイオフィルム殺菌剤を提供できる。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本発明につき更に詳述する。本発明の口腔用軟膏組成物は、（Ａ）陽イオン性抗菌剤、（Ｂ）アズレン、（Ｃ）低級１価アルコール及び（Ｄ）水溶性ビニル系高分子を含有する。
【００１７】
（Ａ）成分；陽イオン性抗菌剤
陽イオン性抗菌剤としては、ビスグアニド系や第４級アンモニウム塩系が用いられ、例えば塩化セチルピリジニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化デカリウム、グルコン酸クロルヘキシジン等のクロルヘキシジン類、臭化ドミフェン等が挙げられる。これらから選ばれる１種類を単独で又は２種類以上を組み合わせて配合することができる。好ましくは第４級アンモニウム塩であり、具体的には塩化セチルピリジニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化ベンザルコニウムが挙げられる。
【００１８】
陽イオン性抗菌剤の配合量は、バイオフィルム殺菌作用の点から、組成物全体の０．０１〜１％（質量％、以下同様。）、特に０．０２〜０．５％が好ましい。配合量が０．０１％未満では十分なバイオフィルム殺菌効果が得られない場合がある。１％を超えて配合しても、もはやバイオフィルム殺菌効果の向上は望めず、逆に苦味が出てしまい口腔内での使用上好ましくない場合がある。製剤の有効性と使用感を両立するためには１％を超えないことが望ましい。
【００１９】
（Ｂ）成分；アズレン
アズレンとは、キク科植物カミツレやユウソウ木、ユーカリなどに含まれる成分で、抗炎症作用を有することから、古くから民間薬として種々の抗炎症疾患に使用されている。
ここで、アズレンとしては、アズレンの誘導体、その水溶性塩なども含む。このようなアズレンの代表としては、カマズアズレン（１，４−ジメチル−７−エチルアズレン）、グアイアズレン（１，４−ジメチル−７−イソプロピルアズレン）などのアズレン誘導体、更にはこれらのアズレン誘導体の３位にスルホン酸基を導入した水溶性塩が挙げられ、これらは水溶性アズレンやグアイアズレンスルホン酸塩とも称される。水溶性塩は、特に限定されないが、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩などを例示することができ、ナトリウム塩を用いるのが好ましい。これらアズレンの中で、アズレンスルホン酸ナトリウムがより好適である。
【００２０】
アズレンの配合量は、組成物全体の０．０１％以上０．４％未満、特に０．０２〜０．３％、とりわけ０．０２〜０．２％が好ましい。配合量が０．０１％未満では十分なバイオフィルム殺菌効果が得られない場合がある。０．４％以上配合してもバイオフィルム殺菌効果の増強は望めず、逆にアズレン特有の甘みが出てきてしまい口腔内で使用上好ましくない場合がある。有効性と使用面を両立するには０．４％に満たないことが望ましい。
【００２１】
（Ａ）陽イオン性抗菌剤と（Ｂ）アズレンとの配合比率は、バイオフィルム殺菌効果の発現の点から、（Ａ）／（Ｂ）が質量比として０．２以上、特に０．２５以上であることが望ましく、好ましい範囲は０．２〜５０、より好ましくは０．２５〜３０である。上記範囲を外れるとバイオフィルム殺菌効果が満足に得られない場合がある。
【００２２】
（Ｃ）成分；低級１価アルコール
本発明では、（Ｃ）低級１価アルコールを（Ｄ）水溶性ビニル系高分子と組み合わせて配合することで、アズレンが安定化し、これにより上記併用系の口腔バイオフィルム殺菌効果が高まり長期保存後も高い殺菌効果を奏する。
低級１価アルコールとしては、一般式ＲＯＨで示される化合物で、Ｒが炭素数６以下、特に炭素数１〜６、とりわけ１〜４の直鎖又は分枝鎖状のアルキル基であるものが好適である。具体的には、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール等が挙げられ、これらから選ばれる１種を単独で又は２種以上を組み合わせて使用できる。特に、エタノールが好適である。
【００２３】
低級１価アルコールの配合量は、アズレンの安定化の点から、組成物全体の０．１〜２５％、特に０．１〜２０％が好ましい。配合量が０．１％未満ではアズレンの安定性を確保できない場合がある。２５％を超えるとアズレンの安定性は確保できても軟膏剤の製剤としての安定性を確保できない場合がある。アズレンの安定化と製剤の安定化を両立し、口腔バイオフィルム殺菌効果を高めるには、２５％を超えないことが望ましい。
【００２４】
また、本発明組成物には、更に低級多価アルコールを配合することが好ましい。上記（Ｃ）成分の低級１価アルコールに加え、低級多価アルコールを配合することが、アズレンの安定性向上に有効である。具体的には、グリセリン、エチレングリコール、プロピレングリコール等の低級多価アルコールが挙げられ、中でもグリセリンが好ましい。
低級多価アルコールを配合する場合、その配合量は本発明の効果を妨げない範囲であれば特に限定されないが、組成物全体の５〜６０％、特に１０〜４５％が好ましい。
【００２５】
（Ｄ）成分；水溶性ビニル系高分子
（Ｄ）水溶性ビニル系高分子としては、具体的にポリビニルピロリドン、ポリビニルメチルエーテル、カルボキシビニルポリマー、ポリアクリル酸塩等が挙げられ、これらから選ばれる１種又は２種以上を使用できる。特にポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマーが好適に用いられる。とりわけ製剤調製時の製剤均一性の点でポリビニルピロリドンが好適である。
【００２６】
ポリビニルピロリドンとしては、重量平均分子量（光散乱法による）が２，０００〜１，６００，０００のものが好ましく、２０，０００〜１，４００，０００のものがより好ましく、本発明の効果を妨げない限り種々のグレードのものを用いることができる。例えば、ポリビニルピロリドンＫ２５、ポリビニルピロリドンＫ３０、ポリビニルピロリドンＫ６０、ポリビニルピロリドンＫ９０等が挙げられ、これらの１種又は２種以上を使用できる。
具体的な市販製品としては、プラスドン（ＰＬＡＳＤＯＮＥ）Ｋ−２５、プラスドンＫ−９０、プラスドンＫ−９０Ｄ、プラスドンＫ−９０Ｍ、プラスドンＫ−２９／３２（ＩＳＰ社製）、コリドン１２ＰＦ、コリドン１７ＰＦ、コリドン２５、コリドン３０、コリドン９０Ｆ（ＢＡＳＦ社製）などが挙げられる。
【００２７】
カルボキシビニルポリマーとしては、粘度（ＢＨ型回転粘度計、濃度０．２質量％、ローターＮｏ．７、回転数２０ｒｐｍ、２５℃）の範囲が３，０００〜８０，０００ｍＰａ・ｓのものが好ましく、５，０００〜５０，０００ｍＰａ・ｓのものがより好ましい。カルボキシビニルポリマーはその塩も含まれる。具体的な市販製品としては、カーボポール（Ｃａｒｂｏｐｏｌ）９１４、９３４、９３４Ｐ、９７１Ｐ、９７４Ｐ、９８０、９８１、２９８４、５９８４、ＥＴＤ２０５０、Ｕｌｔｒｅｚ１０（ＮＯＶＥＯＮ社製）、ジュロンＰＷ−１１０、ＰＷ−１１１、ＰＷ−１５０、ＰＷ−３０２、ＰＷ−３１０、ＰＷ−３５０（日本純薬（株）製）、ハイビスワコー１０３、１０４、１０５（和光純薬工業（株）製）、ＡＱＵＰＥＣＨＶ−５０１、ＨＶ−５０４、ＨＶ−５０５（住友精化（株）製）などが挙げられ、これらの１種又は２種以上を使用できる。
【００２８】
水溶性ビニル系高分子の配合量は、アズレンの安定化の点から、組成物全体の０．０５〜１５％、特に０．１〜１０％、とりわけ０．２〜５％が好ましい。配合量が０．０５％未満では、アズレンの安定性を確保することができない場合があり、１５％を超えるとアズレンの安定性は確保できても、軟膏剤の製剤としての安定性が確保できない場合がある。アズレンの安定化と製剤の安定化を両立し口腔バイオフィルム殺菌効果を高めるには、１５％を超えないことが望ましい。
【００２９】
（Ｃ）低級１価アルコールと（Ｄ）水溶性ビニル系高分子との配合比率は、特に制限されないが、（Ｃ）／（Ｄ）が質量比として０．０５〜１３０、特に０．１〜１００、とりわけ０．５〜７５であることが好ましい。比率が前記範囲外であると、アズレンの安定性が満足に得られない場合がある。
【００３０】
本発明の口腔用軟膏組成物は、ペースト状、ゲル状等の形状に調製できる。更に、本発明組成物には、その形状等に応じ、上記成分以外に、軟膏組成物に通常配合される公知成分を任意に配合できる。具体的には、湿潤剤、界面活性剤、増粘剤、溶剤、更には必要により薬効成分、保存剤、ｐＨ調整剤、香料などが添加されるが、これら成分は、本発明の効果を妨げない範囲で配合し得る。
【００３１】
軟膏基剤としては水溶性基剤、油性基剤が用いられるが、本発明組成物は水溶性軟膏剤として好適に調製されるもので、このため水溶性基剤が好適に用いられる。本発明では、特に水溶性軟膏剤に水溶性アズレンを配合した場合のアズレンの分解を効果的に抑制し、アズレンの安定性を改善することができる。ここで、本発明において水溶性軟膏剤とは、水溶性高分子を溶剤（水、アルコール、マクロゴール（ポリエチレングリコール）等）でゲル化させたもの、あるいは、マクロゴール等の水溶性基剤を使用したものである。なお、本発明組成物は、特に流動パラフィン、固形パラフィン等の石油系炭化水素などの油性基剤は含まなくてもよい。
【００３２】
湿潤剤としては、上記低級多価アルコール以外にソルビトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、ラクチトール等の糖アルコールが挙げられる。
増粘剤としては、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム等のセルロース誘導体、アルギン酸ナトリウム等のアルギン酸塩やアルギン酸プロピレングリコールエステル等のアルギン酸誘導体、キサンタンガム、トラガカントガム、ジェラガム、カラヤガム、アラビアガム等のガム類等が挙げられる。これらの中で、アルギン酸塩には口腔患部への滞留性向上作用があるとされるが、本発明においては、アルギン酸塩を必須成分として配合する必要はない。
界面活性剤としては特に制限されないが、ノニオン性界面活性剤が好ましい。例えばポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタンエステル、ステアリン酸ソルビタン、オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン等が挙げられる。特にショ糖脂肪酸エステルやステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン等のポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル等が好ましい。
溶剤としては、水、１，３−ブチレングリコール、ポリエチレングリコール２００〜２０，０００などのポリエチレングリコール等が挙げられる。
【００３３】
薬効成分としては、上記以外の抗菌剤、殺菌剤、抗炎症剤、抗ヒスタミン剤、組織修復剤、局所麻酔剤、生薬、ビタミン剤、血行促進剤等が挙げられる。
【００３４】
組成物のｐＨは特に限定されないが、２５℃でのｐＨが４．５〜９．６、特に５．５〜９．０が好適である。
【００３５】
また、組成物の粘度は、特に限定されないが、ＢＨ型回転粘度計（測定条件：ローターＮｏ．７、回転数２０ｒｐｍ、回転６０秒後、２５℃）での測定値で５０〜３００Ｐａ・ｓ、特に６０〜２００Ｐａ・ｓに調整することが好ましい。
【００３６】
本発明の軟膏組成物の調製方法は特に限定されず、常法に従い調製することができ、例えば水溶性軟膏剤の場合は、（Ａ）〜（Ｄ）成分、更には水溶性基剤などの任意成分を通常の方法で混合することにより調製できる。
【００３７】
また、本発明は、（Ａ）陽イオン性抗菌剤、（Ｂ）アズレン、（Ｃ）低級１価アルコール及び（Ｄ）水溶性ビニル系高分子からなる口腔バイオフィルム殺菌剤を提供する。この場合、（Ａ）〜（Ｄ）成分については上記と同様であり、各成分の配合比率等も同様である。
【実施例】
【００３８】
以下、実施例及び比較例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の実施例に制限されるものではない。なお、下記の例において％は特に断らない限りいずれも質量％を示す。
【００３９】
なお、試験組成物の調製は常法により行った。
用いた配合原料の詳細は以下の通りである。
塩化セチルピリジニウム（東京化成工業社製）
塩化ベンゼトニウム（東京化成工業社製）
塩化ベンザルコニウム（東京化成工業社製）
アズレンスルホン酸ナトリウム（アルプス薬品工業社製）
エタノール（和光純薬工業社製）
ポリビニルピロリドン（ＩＳＰ社製、商品名：ＰＬＡＳＤＯＮＥ Ｋ−９０）
カルボキシビニルポリマー（ＮＯＶＥＯＮ社製、商品名：Ｃａｒｂｏｐｏｌ ９８０）
【００４０】
［実施例、比較例］
表１〜５に示す組成の口腔用軟膏組成物を調製し、得られた組成物を試験組成物として、下記方法でバイオフィルム殺菌効果、アズレンスルホン酸ナトリウムの安定性を下記方法で評価した。結果を表１〜５に示す。
なお、得られた実施例の軟膏組成物の粘度はいずれも５０〜１００Ｐａ・ｓ（ＢＨ型回転粘度計、ローターＮｏ．７、回転数２０ｒｐｍ、回転６０秒後、２５℃での測定値。）、ｐＨは５．０〜７．０の範囲内であった。
【００４１】
（１）バイオフィルム殺菌効果の評価方法
試験組成物として作製した口腔用軟膏組成物について、調製直後（保存試験前）と、後述の過酷試験を供し５０℃で１ヶ月間保存した後（保存試験後）のバイオフィルム殺菌効果を評価した。
【００４２】
アメリカン タイプ カルチャー コレクション（ＡＴＣＣ）より購入したアクチノマイセイス ヴィスコサス（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｖｉｓｃｏｃｕｓ）ＡＴＣＣ４３１４６、フゾバクテリウム ヌクレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）ＡＴＣＣ１０９５３、ポルフィロモナス ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）ＡＴＣＣ３３２７７の３菌種の菌液４０μＬをそれぞれ１２１℃で１５分間オートクレーブした５ｍｇ／ｍＬヘミン（Ｓｉｇｍａ社製）及び１ｍｇ／ｍＬビタミンＫ（和光純薬工業社製）を含むトッドヘウィットブロース（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）培養液（ＴＨＢＨＭ※1）４ｍＬに添加し、３７℃で一晩嫌気培養（８０ｖｏｌ％窒素、１０ｖｏｌ％二酸化炭素、１０ｖｏｌ％水素）した。
同様に保存してあったベイヨネラ パルビュラ（Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａ ｐａｒｖｕｌａ）ＡＴＣＣ１７７４５菌液８０μＬを、１．２６％乳酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ社製）を含むトッドヘウィットブロース（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）培養液（ＴＨＢＬ※2）４ｍＬに添加し、同様に培養した。
培養後、ベイヨネラ パルビュラを除く３菌種の菌液からそれぞれ３００μＬを採取し、３０ｍＬのＴＨＢＨＭに添加し、更に一晩培養した。ベイヨネラ パルビュラの菌液から同様に３００μＬを採取し、３０ｍＬのＴＨＢＬに添加し一晩培養した。
再培養後、各菌液を遠心分離（１０，０００ｒｐｍ、１０分間）し、上清を廃棄した。各沈渣（細菌）に対して１２１℃で１５分間オートクレーブしたベイサルメディウムムチン培養液（ＢＭＭ※3）を添加し、再懸濁した後、予めＢＭＭ１，０００ｍＬを入れた培養槽（直径１４０ｍｍ×高さ２００ｍｍ）に、上記各菌数がそれぞれ１×１０7個／ｍＬになるように摂取し、スターラーで撹拌（約１００ｒｐｍで回転）しながら、３７℃、嫌気条件下（９５ｖｏｌ％窒素、５ｖｏｌ％二酸化炭素）で一晩培養した。
その後、ＢＭＭを１００ｍＬ／ｈの速度で供給するとともに、同速度で培養液を排出した。上記培養槽から排出された培養液は、液量が３００ｍＬに保たれる別の培養槽に連続的に供給した。この培養槽内の回転盤（約８０ｒｐｍで回転）には、付着担体として直径７ｍｍのハイドロキシアパタイト板を０．４５μｍのフィルターで濾過したヒト無刺激唾液で２時間処置したものを装着し、その表面に２１日間かけてバイオフィルムを形成させた。
【００４３】
試験組成物のバイオフィルム殺菌効果を評価するため、バイオフィルムが付着したハイドロキシアパタイト板を培養槽から取り出し、シャーレ（直径３５ｍｍ×高さ１４ｍｍ）に移し、表に示した試験組成物５ｇ※4に１０分間浸漬させた後、生理食塩水（大塚製薬社製）５ｇで３回洗浄後、バイオフィルムの付着したハイドロキシアパタイトを４ｍＬのＴＨＢＨＭを添加した試験管（直径１３ｍｍ×１００ｍｍ）に移した。直ちに超音波破砕（２００μＡの出力で１０秒間）し、段階希釈（１０倍希釈を６段階）を行い、常法に従い血液寒天平板培地※5に塗沫した。同平板培地は、肉眼でコロニーが確認できるまで嫌気培養（８０ｖｏｌ％窒素、１０ｖｏｌ％二酸化炭素、１０ｖｏｌ％水素）し、コロニー数をカウント後、生菌数を算出した。
【００４４】
結果は、比較例１を対照とした試験組成物の効果を下式により算出し、その算出値から下記の評価基準に基づき判定した。
比較例１を対照とした試験組成物のバイオフィルム殺菌効果＝
−ｌｏｇ（試験組成物で処置後の生菌数／比較例１の組成物で処置後の生菌数）
評価基準；
◎：３．０以上（高いバイオフィルム殺菌効果が認められる。）
○：２．０以上３．０未満（ややバイオフィルム殺菌効果が認められる。）
△：１．０以上２．０未満（わずかにバイオフィルム殺菌効果が認められる。）
×：１．０未満（バイオフィルム殺菌効果が対照と同等、もしくは劣る。）
【００４５】
※１ ＴＨＢＨＭの組成：１Ｌ中の質量で表す。
トッドヘウィットブロース（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）：
３０ｇ／Ｌ
ヘミン（シグマ アルドリッチ社製）： ５ｍｇ／Ｌ
ビタミンＫ（和光純薬工業社製）： １ｍｇ／Ｌ
蒸留水： 残
（全量が１Ｌになるようにメスアップし、１２１℃で１５分間オートクレーブした。）
【００４６】
※２ ＴＨＢＬの組成：１Ｌ中の質量で表す。
トッドヘウィットブロース（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）：
３０ｇ／Ｌ
６０％乳酸ナトリウム水溶液（シグマ アルドリッチ社製）： ２１ｇ／Ｌ
蒸留水： 残
（全量が１Ｌになるようにメスアップし、１２１℃で１５分間オートクレーブした。）
【００４７】
※３ ＢＭＭの組成：１Ｌ中の質量で表す。
プロテオースペプトン（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）：
４ｇ／Ｌ
トリプトン（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）：
２ｇ／Ｌ
イーストエキストラクト（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）：
２ｇ／Ｌ
ムチン（シグマ アルドリッチ社製）： ５ｇ／Ｌ
ヘミン（シグマ アルドリッチ社製）： ２．５ｍｇ／Ｌ
ビタミンＫ（和光純薬工業社製）： ０．５ｍｇ／Ｌ
ＫＣｌ（和光純薬工業社製）： １ｇ／Ｌ
システイン（和光純薬工業社製）： ０．２ｇ／Ｌ
蒸留水： 残
（全量が１Ｌになるようにメスアップし、１２１℃で１５分間オートクレーブした。）
【００４８】
※４ 試験組成物５ｇ
２０ｍＬビーカーを用いて、試験組成物５ｇに生理食塩水１０ｇを添加し、回転数３６０ｒｐｍで３時間（３７℃）で分散させたもの。
【００４９】
※５ 血液寒天平板培地の組成：１Ｌ中の質量で表す。
トッドヘウィットブロース（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）：
３０ｇ／Ｌ
寒天（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）： １５ｇ／Ｌ
ヘミン（シグマ アルドリッチ社製）： ５ｍｇ／Ｌ
ビタミンＫ（和光純薬工業社製）： １ｍｇ／Ｌ
蒸留水： 残
（全量が１Ｌになるようにメスアップし、１２１℃で１５分間オートクレーブした。）
馬脱繊血（日本バイオテスト研究所製）： ５０ｇ／Ｌ
（オートクレーブ後、５０℃に冷却し添加）
【００５０】
（２）アズレンスルホン酸ナトリウムの安定性評価
試験組成物を下記の苛酷試験に供した。苛酷試験開始後１ヶ月経過時にアズレンスルホン酸ナトリウムの含有量を測定し、苛酷試験開始前と比べてアズレンスルホン酸ナトリウムが残存している割合を下記式により残存率（％）として算出した。算出された残存率から下記判定基準に基づき安定性を判定した。
【００５１】
苛酷試験；
苛酷試験は、組成物２０ｇをエポキシ・フェノール樹脂焼付けコーティングアルミチューブに充填し、５０℃で１ヶ月間保存した。
【００５２】
アズレンスルホン酸ナトリウムの含有量は、高速液体クロマトグラフィーで測定した。測定条件は以下の通りである。
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２４６ｎｍ）。
カラム：内径約４．６ｍｍ、長さ１５ｃｍのステンレス管に５μｍの液体クロマトグラフ用オクタデシルシリル化シリカゲルを充填した。
カラム温度：４０℃付近の一定温度。
移動相：トリエチルアミン０．７ｍＬに蒸留水９００ｍＬを加えた後、リン酸を加えてｐＨを７．５に調整し、更に蒸留水を加えて１，０００ｍＬとした溶液にアセトニトリルを７：３の割合で加えた。
【００５３】
アズレンスルホン酸ナトリウムの残存率（％）＝
（苛酷試験後の含量／苛酷試験前の含量）×１００
判定基準；
◎：９５％以上１００％以下
○：９０％以上９５％未満
×：９０％未満
【００５４】
【表１】
【００５５】
【表２】
【００５６】
【表３】
【００５７】
【表４】
【００５８】
【表５】
【００５９】
表１〜５の結果から、（Ａ）陽イオン性抗菌剤又は（Ｂ）アズレンを欠く場合はバイオフィルム殺菌効果が発現せず、また、トリクロサン又はイソプロピルメチルフェノールにアズレンを併用してもバイオフィルム殺菌効果は発現しないが、（Ａ）成分と（Ｂ）成分とを併用するとバイオフィルム殺菌効果が有効に発現することがわかった。更に、（Ａ）及び（Ｂ）成分の併用系に（Ｃ）成分又は（Ｄ）成分を配合してもアズレンスルホン酸ナトリウムを安定化できないが、上記併用系に（Ｃ）及び（Ｄ）成分を配合するとアズレンスルホン酸ナトリウムの経時での分解が抑制されて安定化し、保存後もバイオフィルム殺菌効果を奏することがわかった。従って、（Ａ）〜（Ｄ）成分を配合することで、高いバイオフィルム殺菌効果を奏し、かつその殺菌効果が持続することが確認できた。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、口腔バイオフィルム殺菌効果に優れ、その殺菌効果が持続する口腔用軟膏組成物及び口腔バイオフィルム殺菌剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
歯周病は、口腔内の病原性細菌の１種である歯周病原因菌が口腔内に定着することにより始まる炎症性疾患である。口腔清掃が不十分であると歯垢（口腔細菌とその代謝物）が歯肉と歯の境目に付着後、定着し、増殖する。この異物に反応して好中球やマクロファージが浸潤し、炎症が起こる。早めの段階でブラッシング等により口腔清掃ができればこの炎症は改善される。しかし、歯垢が蓄積した状態を放置すると炎症は拡大し、歯周ポケットが形成されると、そこに蓄積された歯垢はブラッシング等では除去し難くなる。そのため、歯周病の予防・改善に有効な手段として歯垢の抑制、即ち、口腔内の病原性細菌を殺菌・静菌することが有用であると言われている。
【０００３】
近年、歯垢はバイオフィルムとして捉えられ（非特許文献１；Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８４，ｐ１３１８−１３２２，１９９９参照）、口腔バイオフィルム（歯垢）中の細菌は、浮遊性細菌と比較すると細菌のたんぱく質発現パターンや薬剤耐性が大きく異なり、浮遊性細菌に有効であった薬剤がバイオフィルム構成細菌に対して有効でないことが明らかになってきた。
【０００４】
これまでに殺菌手段として数多くの抗菌剤、例えば塩化セチルピリジニウム、塩化ベンゼトニウム、クロルヘキシジン等のカチオン性抗菌剤や、トリクロサン等の非イオン性抗菌剤が、口腔用組成物に配合され有効であることが知られている。例えば、トリクロサンは歯垢形成抑制剤として歯磨組成物に配合すること（特許文献１；特開昭６０−２３９４１０号公報）、チモール等のフェノール性化合物も口腔用組成物に配合することで歯垢を抑制すること（特許文献２；特表２００１−５２６２０２号公報）が知られている。
【０００５】
しかしながら、これら抗菌剤は、バイオフィルム細菌の薬剤耐性メカニズムにより、これだけでは十分なバイオフィルム抑制効果が得られないことが明らかとなった。これら抗菌剤の殺菌力を向上させるべく、抗菌剤の滞留性向上（特許文献３；特開平０８−２６９５３号公報）や香料成分との併用（特許文献４；特開２００２−３７０９５３号公報）による改善技術が提案されているが、いずれもバイオフィルムへの薬剤浸透性の低さなどにより顕著な効果が得られていなかった。
【０００６】
更に、バイオフィルム抑制組成物としてラクトン及び／又はフラン誘導体の配合（特許文献５；特開２００４−１５５６８１号公報）、非イオン性抗菌剤及びジカルボン酸化化合物の配合（特許文献６；特開２００５−０１５３６９号公報）、クランベリー又はその抽出物の配合（特許文献７；特開２００９−１５５２７１号公報）などが提案されている。しかし、これら技術は、コストや供給性、製剤安定性等に問題があり、未だ市場に導入されていないのが現状であった。
【０００７】
一方、キク科植物カミツレやユソウ木、ユーカリなどの油性成分は古くから消炎作用を有することが知られており、その消炎成分はカマアズレンやグアイアズレンなどのアズレン類である。本来、水に不溶性のアズレン類はスルホン化などの化学合成をすることで水溶性となる。特に、グアイアズレンの誘導体であるアズレンスルホン酸塩は、抗炎症作用、抗アレルギー作用、抗潰瘍作用、組織修復作用等を有するため、様々な医療分野で治療や予防の目的で広く使用されている。
【０００８】
アズレン類は、暗青色の結晶又は液体であり、アズレンスルホン酸ナトリウムを水に溶解すると青紫色の水溶液になる。しかしながら、アズレン水溶液中のアズレンは、光、熱、酸素などの影響で分解し、その水溶液は退色することが知られている。そのため、アズレン液剤を安定化する方法として、アズレン類を含む液剤に、炭酸水素塩を濃度３０〜１００重量％のアルコールと共に配合する方法（特許文献８；特公平７−３５３４２号公報）が提案されているが、この方法は、溶媒としてアルコールを大量に添加しなければならず、口腔内で使用する場合は刺激の点で改善の余地があった。また、緩衝液に水溶性アズレンを溶解し、縮合リン酸塩を添加することで、液製剤でのアズレン安定性を高めた製法（特許文献９；特開昭５８−１４４３６５号公報）、アズレンス水溶液に陽イオン性界面活性剤又はクロルヘキシジンと非イオン性界面活性剤を配合し安定化する方法（特許文献１０；特開昭５９−１９６８１６号公報）が開示されているが、これら安定化方法は長期間の安定性という面では不十分であった。このようにアズレン類の安定化については種々検討がなされているが、いずれも水溶液での検討に限られていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開昭６０−２３９４１０号公報
【特許文献２】特表２００１−５２６２０２号公報
【特許文献３】特開平０８−２６９５３号公報
【特許文献４】特開２００２−３７０９５３号公報
【特許文献５】特開２００４−１５５６８１号公報
【特許文献６】特開２００５−０１５３６９号公報
【特許文献７】特開２００９−１５５２７１号公報
【特許文献８】特公平７−３５３４２号公報
【特許文献９】特開昭５８−１４４３６５号公報
【特許文献１０】特開昭５９−１９６８１６号公報
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８４，ｐ１３１８−１３２２，１９９９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
このような現状から、従来の技術に代わる、口腔バイオフィルム中の細菌に対して有効な新たな殺菌技術が望まれる。
本発明は上記事情に鑑みなされたもので、高い口腔バイオフィルム殺菌効果を奏し、その効果が持続する口腔用軟膏組成物及び口腔バイオフィルム殺菌剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、上記目的を達成するため鋭意検討した結果、（Ａ）陽イオン性抗菌剤と（Ｂ）アズレンとを併用すると、高い口腔バイオフィルム殺菌効果が発現し、かかる併用系と（Ｃ）低級１価アルコール及び（Ｄ）水溶性ビニル系高分子とを配合することにより、特に軟膏組成物中でアズレンが経時で安定化し、口腔バイオフィルム殺菌効果が持続すること、これにより高い口腔バイオフィルム殺菌効果を奏し、その殺菌効果が持続する口腔用軟膏組成物及び口腔バイオフィルム殺菌剤を提供できることを知見し、本発明をなすに至った。
【００１３】
即ち、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンゼトニウム等の陽イオン性抗菌剤は、口腔内の浮遊菌殺菌効果は高いものの、口腔バイオフィルム殺菌効果は非常に弱いものであったが、本発明者らは、このような陽イオン性抗菌剤にアズレンを併用すると、意外にも口腔バイオフィルム殺菌効果が有効に発現することを見出した。しかしながら、更にこの場合、アズレンを口腔用組成物、特に軟膏組成物に安定に配合することが難しいという問題があることを知見した。即ち、本発明者らが、グアイアズレンスルホン酸ナトリウム等の水溶性アズレンを一般的な水溶性高分子であるセルロース系の水溶性高分子を主体とする水溶性軟膏剤に配合したところ、経時的にアズレン特有の青紫色が退色し分解することが確認された。そこで、本発明者らは、アズレンを軟膏組成物に安定に配合すべく更に研究を進めた結果、アズレンと共に低級１価アルコール及び水溶性ビニル系高分子を配合すると、アズレンの分解が抑えられて安定化し、特に軟膏組成物で上記併用系による口腔バイオフィルム殺菌効果が持続し、長期保存しても高い殺菌効果を奏することを見出した。
【００１４】
従って、本発明は下記の口腔用軟膏組成物及び口腔バイオフィルム殺菌剤を提供する。
請求項１：
（Ａ）陽イオン性抗菌剤、（Ｂ）アズレン、（Ｃ）低級１価アルコール及び（Ｄ）水溶性ビニル系高分子を含有してなることを特徴とする口腔用軟膏組成物。
請求項２：
（Ａ）成分／（Ｂ）成分が、質量比として０．２〜５０である請求項１記載の組成物。
請求項３：
（Ａ）陽イオン性抗菌剤が、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンゼトニウム及び塩化ベンザルコニウムから選ばれる１種以上の第４級アンモニウム塩である請求項１又は２記載の組成物。
請求項４：
（Ｄ）水溶性ビニル系高分子が、ポリビニルピロリドン及び／又はカルボキシビニルポリマーである請求項１乃至３のいずれか１項記載の組成物。
請求項５：
（Ａ）陽イオン性抗菌剤、（Ｂ）アズレン、（Ｃ）低級１価アルコール及び（Ｄ）水溶性ビニル系高分子からなる口腔バイオフィルム殺菌剤。
請求項６：
（Ａ）成分／（Ｂ）成分が、質量比として０．２〜５０である請求項５記載の殺菌剤。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、高い口腔バイオフィルム殺菌効果を奏し、その殺菌効果が持続する口腔用軟膏組成物及び口腔バイオフィルム殺菌剤を提供できる。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本発明につき更に詳述する。本発明の口腔用軟膏組成物は、（Ａ）陽イオン性抗菌剤、（Ｂ）アズレン、（Ｃ）低級１価アルコール及び（Ｄ）水溶性ビニル系高分子を含有する。
【００１７】
（Ａ）成分；陽イオン性抗菌剤
陽イオン性抗菌剤としては、ビスグアニド系や第４級アンモニウム塩系が用いられ、例えば塩化セチルピリジニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化デカリウム、グルコン酸クロルヘキシジン等のクロルヘキシジン類、臭化ドミフェン等が挙げられる。これらから選ばれる１種類を単独で又は２種類以上を組み合わせて配合することができる。好ましくは第４級アンモニウム塩であり、具体的には塩化セチルピリジニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化ベンザルコニウムが挙げられる。
【００１８】
陽イオン性抗菌剤の配合量は、バイオフィルム殺菌作用の点から、組成物全体の０．０１〜１％（質量％、以下同様。）、特に０．０２〜０．５％が好ましい。配合量が０．０１％未満では十分なバイオフィルム殺菌効果が得られない場合がある。１％を超えて配合しても、もはやバイオフィルム殺菌効果の向上は望めず、逆に苦味が出てしまい口腔内での使用上好ましくない場合がある。製剤の有効性と使用感を両立するためには１％を超えないことが望ましい。
【００１９】
（Ｂ）成分；アズレン
アズレンとは、キク科植物カミツレやユウソウ木、ユーカリなどに含まれる成分で、抗炎症作用を有することから、古くから民間薬として種々の抗炎症疾患に使用されている。
ここで、アズレンとしては、アズレンの誘導体、その水溶性塩なども含む。このようなアズレンの代表としては、カマズアズレン（１，４−ジメチル−７−エチルアズレン）、グアイアズレン（１，４−ジメチル−７−イソプロピルアズレン）などのアズレン誘導体、更にはこれらのアズレン誘導体の３位にスルホン酸基を導入した水溶性塩が挙げられ、これらは水溶性アズレンやグアイアズレンスルホン酸塩とも称される。水溶性塩は、特に限定されないが、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩などを例示することができ、ナトリウム塩を用いるのが好ましい。これらアズレンの中で、アズレンスルホン酸ナトリウムがより好適である。
【００２０】
アズレンの配合量は、組成物全体の０．０１％以上０．４％未満、特に０．０２〜０．３％、とりわけ０．０２〜０．２％が好ましい。配合量が０．０１％未満では十分なバイオフィルム殺菌効果が得られない場合がある。０．４％以上配合してもバイオフィルム殺菌効果の増強は望めず、逆にアズレン特有の甘みが出てきてしまい口腔内で使用上好ましくない場合がある。有効性と使用面を両立するには０．４％に満たないことが望ましい。
【００２１】
（Ａ）陽イオン性抗菌剤と（Ｂ）アズレンとの配合比率は、バイオフィルム殺菌効果の発現の点から、（Ａ）／（Ｂ）が質量比として０．２以上、特に０．２５以上であることが望ましく、好ましい範囲は０．２〜５０、より好ましくは０．２５〜３０である。上記範囲を外れるとバイオフィルム殺菌効果が満足に得られない場合がある。
【００２２】
（Ｃ）成分；低級１価アルコール
本発明では、（Ｃ）低級１価アルコールを（Ｄ）水溶性ビニル系高分子と組み合わせて配合することで、アズレンが安定化し、これにより上記併用系の口腔バイオフィルム殺菌効果が高まり長期保存後も高い殺菌効果を奏する。
低級１価アルコールとしては、一般式ＲＯＨで示される化合物で、Ｒが炭素数６以下、特に炭素数１〜６、とりわけ１〜４の直鎖又は分枝鎖状のアルキル基であるものが好適である。具体的には、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール等が挙げられ、これらから選ばれる１種を単独で又は２種以上を組み合わせて使用できる。特に、エタノールが好適である。
【００２３】
低級１価アルコールの配合量は、アズレンの安定化の点から、組成物全体の０．１〜２５％、特に０．１〜２０％が好ましい。配合量が０．１％未満ではアズレンの安定性を確保できない場合がある。２５％を超えるとアズレンの安定性は確保できても軟膏剤の製剤としての安定性を確保できない場合がある。アズレンの安定化と製剤の安定化を両立し、口腔バイオフィルム殺菌効果を高めるには、２５％を超えないことが望ましい。
【００２４】
また、本発明組成物には、更に低級多価アルコールを配合することが好ましい。上記（Ｃ）成分の低級１価アルコールに加え、低級多価アルコールを配合することが、アズレンの安定性向上に有効である。具体的には、グリセリン、エチレングリコール、プロピレングリコール等の低級多価アルコールが挙げられ、中でもグリセリンが好ましい。
低級多価アルコールを配合する場合、その配合量は本発明の効果を妨げない範囲であれば特に限定されないが、組成物全体の５〜６０％、特に１０〜４５％が好ましい。
【００２５】
（Ｄ）成分；水溶性ビニル系高分子
（Ｄ）水溶性ビニル系高分子としては、具体的にポリビニルピロリドン、ポリビニルメチルエーテル、カルボキシビニルポリマー、ポリアクリル酸塩等が挙げられ、これらから選ばれる１種又は２種以上を使用できる。特にポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマーが好適に用いられる。とりわけ製剤調製時の製剤均一性の点でポリビニルピロリドンが好適である。
【００２６】
ポリビニルピロリドンとしては、重量平均分子量（光散乱法による）が２，０００〜１，６００，０００のものが好ましく、２０，０００〜１，４００，０００のものがより好ましく、本発明の効果を妨げない限り種々のグレードのものを用いることができる。例えば、ポリビニルピロリドンＫ２５、ポリビニルピロリドンＫ３０、ポリビニルピロリドンＫ６０、ポリビニルピロリドンＫ９０等が挙げられ、これらの１種又は２種以上を使用できる。
具体的な市販製品としては、プラスドン（ＰＬＡＳＤＯＮＥ）Ｋ−２５、プラスドンＫ−９０、プラスドンＫ−９０Ｄ、プラスドンＫ−９０Ｍ、プラスドンＫ−２９／３２（ＩＳＰ社製）、コリドン１２ＰＦ、コリドン１７ＰＦ、コリドン２５、コリドン３０、コリドン９０Ｆ（ＢＡＳＦ社製）などが挙げられる。
【００２７】
カルボキシビニルポリマーとしては、粘度（ＢＨ型回転粘度計、濃度０．２質量％、ローターＮｏ．７、回転数２０ｒｐｍ、２５℃）の範囲が３，０００〜８０，０００ｍＰａ・ｓのものが好ましく、５，０００〜５０，０００ｍＰａ・ｓのものがより好ましい。カルボキシビニルポリマーはその塩も含まれる。具体的な市販製品としては、カーボポール（Ｃａｒｂｏｐｏｌ）９１４、９３４、９３４Ｐ、９７１Ｐ、９７４Ｐ、９８０、９８１、２９８４、５９８４、ＥＴＤ２０５０、Ｕｌｔｒｅｚ１０（ＮＯＶＥＯＮ社製）、ジュロンＰＷ−１１０、ＰＷ−１１１、ＰＷ−１５０、ＰＷ−３０２、ＰＷ−３１０、ＰＷ−３５０（日本純薬（株）製）、ハイビスワコー１０３、１０４、１０５（和光純薬工業（株）製）、ＡＱＵＰＥＣＨＶ−５０１、ＨＶ−５０４、ＨＶ−５０５（住友精化（株）製）などが挙げられ、これらの１種又は２種以上を使用できる。
【００２８】
水溶性ビニル系高分子の配合量は、アズレンの安定化の点から、組成物全体の０．０５〜１５％、特に０．１〜１０％、とりわけ０．２〜５％が好ましい。配合量が０．０５％未満では、アズレンの安定性を確保することができない場合があり、１５％を超えるとアズレンの安定性は確保できても、軟膏剤の製剤としての安定性が確保できない場合がある。アズレンの安定化と製剤の安定化を両立し口腔バイオフィルム殺菌効果を高めるには、１５％を超えないことが望ましい。
【００２９】
（Ｃ）低級１価アルコールと（Ｄ）水溶性ビニル系高分子との配合比率は、特に制限されないが、（Ｃ）／（Ｄ）が質量比として０．０５〜１３０、特に０．１〜１００、とりわけ０．５〜７５であることが好ましい。比率が前記範囲外であると、アズレンの安定性が満足に得られない場合がある。
【００３０】
本発明の口腔用軟膏組成物は、ペースト状、ゲル状等の形状に調製できる。更に、本発明組成物には、その形状等に応じ、上記成分以外に、軟膏組成物に通常配合される公知成分を任意に配合できる。具体的には、湿潤剤、界面活性剤、増粘剤、溶剤、更には必要により薬効成分、保存剤、ｐＨ調整剤、香料などが添加されるが、これら成分は、本発明の効果を妨げない範囲で配合し得る。
【００３１】
軟膏基剤としては水溶性基剤、油性基剤が用いられるが、本発明組成物は水溶性軟膏剤として好適に調製されるもので、このため水溶性基剤が好適に用いられる。本発明では、特に水溶性軟膏剤に水溶性アズレンを配合した場合のアズレンの分解を効果的に抑制し、アズレンの安定性を改善することができる。ここで、本発明において水溶性軟膏剤とは、水溶性高分子を溶剤（水、アルコール、マクロゴール（ポリエチレングリコール）等）でゲル化させたもの、あるいは、マクロゴール等の水溶性基剤を使用したものである。なお、本発明組成物は、特に流動パラフィン、固形パラフィン等の石油系炭化水素などの油性基剤は含まなくてもよい。
【００３２】
湿潤剤としては、上記低級多価アルコール以外にソルビトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、ラクチトール等の糖アルコールが挙げられる。
増粘剤としては、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム等のセルロース誘導体、アルギン酸ナトリウム等のアルギン酸塩やアルギン酸プロピレングリコールエステル等のアルギン酸誘導体、キサンタンガム、トラガカントガム、ジェラガム、カラヤガム、アラビアガム等のガム類等が挙げられる。これらの中で、アルギン酸塩には口腔患部への滞留性向上作用があるとされるが、本発明においては、アルギン酸塩を必須成分として配合する必要はない。
界面活性剤としては特に制限されないが、ノニオン性界面活性剤が好ましい。例えばポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタンエステル、ステアリン酸ソルビタン、オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン等が挙げられる。特にショ糖脂肪酸エステルやステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン等のポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル等が好ましい。
溶剤としては、水、１，３−ブチレングリコール、ポリエチレングリコール２００〜２０，０００などのポリエチレングリコール等が挙げられる。
【００３３】
薬効成分としては、上記以外の抗菌剤、殺菌剤、抗炎症剤、抗ヒスタミン剤、組織修復剤、局所麻酔剤、生薬、ビタミン剤、血行促進剤等が挙げられる。
【００３４】
組成物のｐＨは特に限定されないが、２５℃でのｐＨが４．５〜９．６、特に５．５〜９．０が好適である。
【００３５】
また、組成物の粘度は、特に限定されないが、ＢＨ型回転粘度計（測定条件：ローターＮｏ．７、回転数２０ｒｐｍ、回転６０秒後、２５℃）での測定値で５０〜３００Ｐａ・ｓ、特に６０〜２００Ｐａ・ｓに調整することが好ましい。
【００３６】
本発明の軟膏組成物の調製方法は特に限定されず、常法に従い調製することができ、例えば水溶性軟膏剤の場合は、（Ａ）〜（Ｄ）成分、更には水溶性基剤などの任意成分を通常の方法で混合することにより調製できる。
【００３７】
また、本発明は、（Ａ）陽イオン性抗菌剤、（Ｂ）アズレン、（Ｃ）低級１価アルコール及び（Ｄ）水溶性ビニル系高分子からなる口腔バイオフィルム殺菌剤を提供する。この場合、（Ａ）〜（Ｄ）成分については上記と同様であり、各成分の配合比率等も同様である。
【実施例】
【００３８】
以下、実施例及び比較例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の実施例に制限されるものではない。なお、下記の例において％は特に断らない限りいずれも質量％を示す。
【００３９】
なお、試験組成物の調製は常法により行った。
用いた配合原料の詳細は以下の通りである。
塩化セチルピリジニウム（東京化成工業社製）
塩化ベンゼトニウム（東京化成工業社製）
塩化ベンザルコニウム（東京化成工業社製）
アズレンスルホン酸ナトリウム（アルプス薬品工業社製）
エタノール（和光純薬工業社製）
ポリビニルピロリドン（ＩＳＰ社製、商品名：ＰＬＡＳＤＯＮＥ Ｋ−９０）
カルボキシビニルポリマー（ＮＯＶＥＯＮ社製、商品名：Ｃａｒｂｏｐｏｌ ９８０）
【００４０】
［実施例、比較例］
表１〜５に示す組成の口腔用軟膏組成物を調製し、得られた組成物を試験組成物として、下記方法でバイオフィルム殺菌効果、アズレンスルホン酸ナトリウムの安定性を下記方法で評価した。結果を表１〜５に示す。
なお、得られた実施例の軟膏組成物の粘度はいずれも５０〜１００Ｐａ・ｓ（ＢＨ型回転粘度計、ローターＮｏ．７、回転数２０ｒｐｍ、回転６０秒後、２５℃での測定値。）、ｐＨは５．０〜７．０の範囲内であった。
【００４１】
（１）バイオフィルム殺菌効果の評価方法
試験組成物として作製した口腔用軟膏組成物について、調製直後（保存試験前）と、後述の過酷試験を供し５０℃で１ヶ月間保存した後（保存試験後）のバイオフィルム殺菌効果を評価した。
【００４２】
アメリカン タイプ カルチャー コレクション（ＡＴＣＣ）より購入したアクチノマイセイス ヴィスコサス（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｖｉｓｃｏｃｕｓ）ＡＴＣＣ４３１４６、フゾバクテリウム ヌクレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）ＡＴＣＣ１０９５３、ポルフィロモナス ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）ＡＴＣＣ３３２７７の３菌種の菌液４０μＬをそれぞれ１２１℃で１５分間オートクレーブした５ｍｇ／ｍＬヘミン（Ｓｉｇｍａ社製）及び１ｍｇ／ｍＬビタミンＫ（和光純薬工業社製）を含むトッドヘウィットブロース（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）培養液（ＴＨＢＨＭ※1）４ｍＬに添加し、３７℃で一晩嫌気培養（８０ｖｏｌ％窒素、１０ｖｏｌ％二酸化炭素、１０ｖｏｌ％水素）した。
同様に保存してあったベイヨネラ パルビュラ（Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａ ｐａｒｖｕｌａ）ＡＴＣＣ１７７４５菌液８０μＬを、１．２６％乳酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ社製）を含むトッドヘウィットブロース（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）培養液（ＴＨＢＬ※2）４ｍＬに添加し、同様に培養した。
培養後、ベイヨネラ パルビュラを除く３菌種の菌液からそれぞれ３００μＬを採取し、３０ｍＬのＴＨＢＨＭに添加し、更に一晩培養した。ベイヨネラ パルビュラの菌液から同様に３００μＬを採取し、３０ｍＬのＴＨＢＬに添加し一晩培養した。
再培養後、各菌液を遠心分離（１０，０００ｒｐｍ、１０分間）し、上清を廃棄した。各沈渣（細菌）に対して１２１℃で１５分間オートクレーブしたベイサルメディウムムチン培養液（ＢＭＭ※3）を添加し、再懸濁した後、予めＢＭＭ１，０００ｍＬを入れた培養槽（直径１４０ｍｍ×高さ２００ｍｍ）に、上記各菌数がそれぞれ１×１０7個／ｍＬになるように摂取し、スターラーで撹拌（約１００ｒｐｍで回転）しながら、３７℃、嫌気条件下（９５ｖｏｌ％窒素、５ｖｏｌ％二酸化炭素）で一晩培養した。
その後、ＢＭＭを１００ｍＬ／ｈの速度で供給するとともに、同速度で培養液を排出した。上記培養槽から排出された培養液は、液量が３００ｍＬに保たれる別の培養槽に連続的に供給した。この培養槽内の回転盤（約８０ｒｐｍで回転）には、付着担体として直径７ｍｍのハイドロキシアパタイト板を０．４５μｍのフィルターで濾過したヒト無刺激唾液で２時間処置したものを装着し、その表面に２１日間かけてバイオフィルムを形成させた。
【００４３】
試験組成物のバイオフィルム殺菌効果を評価するため、バイオフィルムが付着したハイドロキシアパタイト板を培養槽から取り出し、シャーレ（直径３５ｍｍ×高さ１４ｍｍ）に移し、表に示した試験組成物５ｇ※4に１０分間浸漬させた後、生理食塩水（大塚製薬社製）５ｇで３回洗浄後、バイオフィルムの付着したハイドロキシアパタイトを４ｍＬのＴＨＢＨＭを添加した試験管（直径１３ｍｍ×１００ｍｍ）に移した。直ちに超音波破砕（２００μＡの出力で１０秒間）し、段階希釈（１０倍希釈を６段階）を行い、常法に従い血液寒天平板培地※5に塗沫した。同平板培地は、肉眼でコロニーが確認できるまで嫌気培養（８０ｖｏｌ％窒素、１０ｖｏｌ％二酸化炭素、１０ｖｏｌ％水素）し、コロニー数をカウント後、生菌数を算出した。
【００４４】
結果は、比較例１を対照とした試験組成物の効果を下式により算出し、その算出値から下記の評価基準に基づき判定した。
比較例１を対照とした試験組成物のバイオフィルム殺菌効果＝
−ｌｏｇ（試験組成物で処置後の生菌数／比較例１の組成物で処置後の生菌数）
評価基準；
◎：３．０以上（高いバイオフィルム殺菌効果が認められる。）
○：２．０以上３．０未満（ややバイオフィルム殺菌効果が認められる。）
△：１．０以上２．０未満（わずかにバイオフィルム殺菌効果が認められる。）
×：１．０未満（バイオフィルム殺菌効果が対照と同等、もしくは劣る。）
【００４５】
※１ ＴＨＢＨＭの組成：１Ｌ中の質量で表す。
トッドヘウィットブロース（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）：
３０ｇ／Ｌ
ヘミン（シグマ アルドリッチ社製）： ５ｍｇ／Ｌ
ビタミンＫ（和光純薬工業社製）： １ｍｇ／Ｌ
蒸留水： 残
（全量が１Ｌになるようにメスアップし、１２１℃で１５分間オートクレーブした。）
【００４６】
※２ ＴＨＢＬの組成：１Ｌ中の質量で表す。
トッドヘウィットブロース（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）：
３０ｇ／Ｌ
６０％乳酸ナトリウム水溶液（シグマ アルドリッチ社製）： ２１ｇ／Ｌ
蒸留水： 残
（全量が１Ｌになるようにメスアップし、１２１℃で１５分間オートクレーブした。）
【００４７】
※３ ＢＭＭの組成：１Ｌ中の質量で表す。
プロテオースペプトン（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）：
４ｇ／Ｌ
トリプトン（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）：
２ｇ／Ｌ
イーストエキストラクト（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）：
２ｇ／Ｌ
ムチン（シグマ アルドリッチ社製）： ５ｇ／Ｌ
ヘミン（シグマ アルドリッチ社製）： ２．５ｍｇ／Ｌ
ビタミンＫ（和光純薬工業社製）： ０．５ｍｇ／Ｌ
ＫＣｌ（和光純薬工業社製）： １ｇ／Ｌ
システイン（和光純薬工業社製）： ０．２ｇ／Ｌ
蒸留水： 残
（全量が１Ｌになるようにメスアップし、１２１℃で１５分間オートクレーブした。）
【００４８】
※４ 試験組成物５ｇ
２０ｍＬビーカーを用いて、試験組成物５ｇに生理食塩水１０ｇを添加し、回転数３６０ｒｐｍで３時間（３７℃）で分散させたもの。
【００４９】
※５ 血液寒天平板培地の組成：１Ｌ中の質量で表す。
トッドヘウィットブロース（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）：
３０ｇ／Ｌ
寒天（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）： １５ｇ／Ｌ
ヘミン（シグマ アルドリッチ社製）： ５ｍｇ／Ｌ
ビタミンＫ（和光純薬工業社製）： １ｍｇ／Ｌ
蒸留水： 残
（全量が１Ｌになるようにメスアップし、１２１℃で１５分間オートクレーブした。）
馬脱繊血（日本バイオテスト研究所製）： ５０ｇ／Ｌ
（オートクレーブ後、５０℃に冷却し添加）
【００５０】
（２）アズレンスルホン酸ナトリウムの安定性評価
試験組成物を下記の苛酷試験に供した。苛酷試験開始後１ヶ月経過時にアズレンスルホン酸ナトリウムの含有量を測定し、苛酷試験開始前と比べてアズレンスルホン酸ナトリウムが残存している割合を下記式により残存率（％）として算出した。算出された残存率から下記判定基準に基づき安定性を判定した。
【００５１】
苛酷試験；
苛酷試験は、組成物２０ｇをエポキシ・フェノール樹脂焼付けコーティングアルミチューブに充填し、５０℃で１ヶ月間保存した。
【００５２】
アズレンスルホン酸ナトリウムの含有量は、高速液体クロマトグラフィーで測定した。測定条件は以下の通りである。
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２４６ｎｍ）。
カラム：内径約４．６ｍｍ、長さ１５ｃｍのステンレス管に５μｍの液体クロマトグラフ用オクタデシルシリル化シリカゲルを充填した。
カラム温度：４０℃付近の一定温度。
移動相：トリエチルアミン０．７ｍＬに蒸留水９００ｍＬを加えた後、リン酸を加えてｐＨを７．５に調整し、更に蒸留水を加えて１，０００ｍＬとした溶液にアセトニトリルを７：３の割合で加えた。
【００５３】
アズレンスルホン酸ナトリウムの残存率（％）＝
（苛酷試験後の含量／苛酷試験前の含量）×１００
判定基準；
◎：９５％以上１００％以下
○：９０％以上９５％未満
×：９０％未満
【００５４】
【表１】
【００５５】
【表２】
【００５６】
【表３】
【００５７】
【表４】
【００５８】
【表５】
【００５９】
表１〜５の結果から、（Ａ）陽イオン性抗菌剤又は（Ｂ）アズレンを欠く場合はバイオフィルム殺菌効果が発現せず、また、トリクロサン又はイソプロピルメチルフェノールにアズレンを併用してもバイオフィルム殺菌効果は発現しないが、（Ａ）成分と（Ｂ）成分とを併用するとバイオフィルム殺菌効果が有効に発現することがわかった。更に、（Ａ）及び（Ｂ）成分の併用系に（Ｃ）成分又は（Ｄ）成分を配合してもアズレンスルホン酸ナトリウムを安定化できないが、上記併用系に（Ｃ）及び（Ｄ）成分を配合するとアズレンスルホン酸ナトリウムの経時での分解が抑制されて安定化し、保存後もバイオフィルム殺菌効果を奏することがわかった。従って、（Ａ）〜（Ｄ）成分を配合することで、高いバイオフィルム殺菌効果を奏し、かつその殺菌効果が持続することが確認できた。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）陽イオン性抗菌剤、（Ｂ）アズレン、（Ｃ）低級１価アルコール及び（Ｄ）水溶性ビニル系高分子を含有してなることを特徴とする口腔用軟膏組成物。
【請求項２】
（Ａ）成分／（Ｂ）成分が、質量比として０．２〜５０である請求項１記載の組成物。
【請求項３】
（Ａ）陽イオン性抗菌剤が、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンゼトニウム及び塩化ベンザルコニウムから選ばれる１種以上の第４級アンモニウム塩である請求項１又は２記載の組成物。
【請求項４】
（Ｄ）水溶性ビニル系高分子が、ポリビニルピロリドン及び／又はカルボキシビニルポリマーである請求項１乃至３のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５】
（Ａ）陽イオン性抗菌剤、（Ｂ）アズレン、（Ｃ）低級１価アルコール及び（Ｄ）水溶性ビニル系高分子からなる口腔バイオフィルム殺菌剤。
【請求項６】
（Ａ）成分／（Ｂ）成分が、質量比として０．２〜５０である請求項５記載の殺菌剤。
【請求項１】
（Ａ）陽イオン性抗菌剤、（Ｂ）アズレン、（Ｃ）低級１価アルコール及び（Ｄ）水溶性ビニル系高分子を含有してなることを特徴とする口腔用軟膏組成物。
【請求項２】
（Ａ）成分／（Ｂ）成分が、質量比として０．２〜５０である請求項１記載の組成物。
【請求項３】
（Ａ）陽イオン性抗菌剤が、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンゼトニウム及び塩化ベンザルコニウムから選ばれる１種以上の第４級アンモニウム塩である請求項１又は２記載の組成物。
【請求項４】
（Ｄ）水溶性ビニル系高分子が、ポリビニルピロリドン及び／又はカルボキシビニルポリマーである請求項１乃至３のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５】
（Ａ）陽イオン性抗菌剤、（Ｂ）アズレン、（Ｃ）低級１価アルコール及び（Ｄ）水溶性ビニル系高分子からなる口腔バイオフィルム殺菌剤。
【請求項６】
（Ａ）成分／（Ｂ）成分が、質量比として０．２〜５０である請求項５記載の殺菌剤。
【公開番号】特開２０１３−４３８６９（Ｐ２０１３−４３８６９Ａ）
【公開日】平成２５年３月４日（２０１３．３．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−１８３６５９（Ｐ２０１１−１８３６５９）
【出願日】平成２３年８月２５日（２０１１．８．２５）
【出願人】（０００００６７６９）ライオン株式会社 (1,816)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２５年３月４日（２０１３．３．４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年８月２５日（２０１１．８．２５）
【出願人】（０００００６７６９）ライオン株式会社 (1,816)
【Ｆターム（参考）】
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