【課題】抗体組成物を製造する動物細胞の製造方法を提供することを目的とする。
【解決手段】本発明は、Ｎ−グリコシド結合コンプレックス型糖鎖が結合した抗体を含有し、すべての該抗体が還元末端のＮ−アセチルグルコサミンにフコースが結合しないＮ−グリコシド結合コンプレックス型糖鎖を有する抗体である抗体組成物を製造する動物細胞の製造方法であって、該動物細胞の細胞内糖ヌクレオチドＧＤＰ−フコースの合成に関与する酵素またはＮ−グリコシド結合糖鎖還元末端のＮ−アセチルグルコサミンの６位にフコースの１位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素をコードする遺伝子に変異を加える工程または該遺伝子を欠損させる工程を含み、かつ抗体分子をコードする遺伝子を導入する工程を含む動物細胞の製造方法。に関する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｎ−グリコシド結合コンプレックス型糖鎖が結合した抗体を含有し、すべての該抗体が還元末端のＮ−アセチルグルコサミンにフコースが結合しないＮ−グリコシド結合コンプレックス型糖鎖を有する抗体である抗体組成物を製造する動物細胞の製造方法であって、該動物細胞の細胞内糖ヌクレオチドＧＤＰ−フコースの合成に関与する酵素またはＮ−グリコシド結合糖鎖還元末端のＮ−アセチルグルコサミンの６位にフコースの１位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素をコードする遺伝子に変異を加える工程または該遺伝子を欠損させる工程を含み、かつ抗体分子をコードする遺伝子を導入する工程を含む動物細胞の製造方法。
【請求項２】
糖鎖が
【化１】

を含む糖鎖であることを特徴とする請求項１に記載の動物細胞の製造方法。
【請求項３】
下記（ａ）〜（ｄ）の少なくとも１つの手法により前記遺伝子に変異を加える工程または該遺伝子を欠損させる工程を含む請求項１または２に記載の動物細胞の製造方法。
（ａ）酵素の遺伝子を標的した遺伝子破壊の手法；
（ｂ）酵素の遺伝子のドミナントネガティブ体を導入する手法；
（ｃ）酵素についての突然変異を導入する手法；
（ｄ）酵素の遺伝子の転写又は翻訳を抑制する手法。
【請求項４】
細胞内糖ヌクレオチドＧＤＰ−フコースの合成に関与する酵素が、以下の（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）からなる群から選ばれる酵素である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の動物細胞の製造方法。
（ａ）ＧＭＤ（ＧＤＰ−ｍａｎｎｏｓｅ ４，６−ｄｅｈｙｄｒａｔａｓｅ）；
（ｂ）Ｆｘ（ＧＤＰ−ｋｅｔｏ−６−ｄｅｏｘｙｍａｎｎｏｓｅ ３，５−ｅｐｉｍｅｒａｓｅ，４−ｒｅｄｕｃｔａｓｅ）；
（ｃ）ＧＦＰＰ（ＧＤＰ−ｂｅｔａ−Ｌ−ｆｕｃｏｓｅ ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｓｅ）。
【請求項５】
ＧＭＤが、以下の（ａ）または（ｂ）であるＤＮＡがコードする蛋白質である、請求項４に記載の動物細胞の製造方法。
（ａ）配列番号６５で表される塩基配列からなるＤＮＡ；
（ｂ）配列番号６５で表される塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつＧＭＤ活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ。
【請求項６】
ＧＭＤが、以下の（ａ）または（ｂ）の蛋白質である、請求項４に記載の動物細胞の製造方法。
（ａ）配列番号７１で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質；
（ｂ）配列番号７１で表されるアミノ酸配列と８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＧＭＤ活性を有する蛋白質。
【請求項７】
Ｆｘが、以下の（ａ）または（ｂ）であるＤＮＡがコードする蛋白質である、請求項４に記載の動物細胞の製造方法。
（ａ）配列番号４８で表される塩基配列からなるＤＮＡ；
（ｂ）配列番号４８で表される塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつＦｘを有する蛋白質をコードするＤＮＡ。
【請求項８】
Ｆｘが、以下の（ａ）または（ｂ）の蛋白質である、請求項４に記載の動物細胞の製造方法。
（ａ）配列番号７２で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質；
（ｂ）配列番号７２で表されるアミノ酸配列と８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＦｘ活性を有する蛋白質。
【請求項９】
ＧＦＰＰが、以下の（ａ）または（ｂ）であるＤＮＡがコードする蛋白質である、請求項４に記載の動物細胞の製造方法。
（ａ）配列番号５１で表される塩基配列からなるＤＮＡ；
（ｂ）配列番号５１で表される塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつＧＦＰＰ活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ。
【請求項１０】
ＧＦＰＰが、以下の（ａ）または（ｂ）の蛋白質である、請求項４に記載の動物細胞の製造方法。
（ａ）配列番号７３で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質；
（ｂ）配列番号７３で表されるアミノ酸配列と８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＧＦＰＰ活性を有する蛋白質。
【請求項１１】
Ｎ−グリコシド結合糖鎖還元末端のＮ−アセチルグルコサミンの６位にフコースの１位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素がα−１，６−フコシルトランスフェラーゼである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の動物細胞の製造方法。
【請求項１２】
α−１，６−フコシルトランスフェラーゼが、以下の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）からなる群から選ばれるＤＮＡがコードする蛋白質である、請求項１１に記載の動物細胞の製造方法。
（ａ）配列番号１で表される塩基配列からなるＤＮＡ；
（ｂ）配列番号２で表される塩基配列からなるＤＮＡ；
（ｃ）配列番号１で表される塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつα−１，６−フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ；
（ｄ）配列番号２で表される塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつα−１，６−フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ。
【請求項１３】
α−１，６−フコシルトランスフェラーゼが、以下の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）からなる群から選ばれる蛋白質である、請求項１１に記載の動物細胞の製造方法。
（ａ）配列番号２３で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質；
（ｂ）配列番号２４で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質；
（ｃ）配列番号２３で表されるアミノ酸配列と８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつα−１，６−フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質；
（ｄ）配列番号２４で表されるアミノ酸配列と８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつα−１，６−フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質。
【請求項１４】
Ｎ−グリコシド結合糖鎖還元末端のＮ−アセチルグルコサミンの６位とフコースの１位がα結合した糖鎖構造を認識するレクチンに耐性である請求項１〜１３のいずれか１項に記載の動物細胞の製造方法。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載の動物細胞が、下記の（ａ）〜（ｉ）からなる群から選ばれる動物細胞の製造方法。
（ａ）チャイニーズハムスター卵巣組織由来ＣＨＯ細胞；
（ｂ）ラットミエローマ細胞株ＹＢ２／３ＨＬ．Ｐ２．Ｇ１１．１６Ａｇ．２０細胞；
（ｃ）マウスミエローマ細胞株ＮＳ０細胞；
（ｄ）マウスミエローマ細胞株ＳＰ２／０−Ａｇ１４細胞；
（ｅ）シリアンハムスター腎臓組織由来ＢＨＫ細胞；
（ｆ）抗体を産生するハイブリドーマ細胞；
（ｇ）ヒト白血病細胞株ナマルバ細胞；
（ｈ）非ヒト胚性幹細胞；
（ｉ）非ヒト受精卵細胞。
【請求項１６】
抗体分子のクラスがＩｇＧである、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の動物細胞の製造方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【図３４】

【図３５】

【図３６】

【図３７】

【図３８】

【図３９】

【図４０】

【図４１】

【図４２】

【図４３】

【図４４】

【図４５】

【図４６】

【図４７】

【図４８】

【図４９】

【図５０】

【図５１】

【図５２】

【図５３】

【図５４】

【図５５】

【公開番号】特開２０１２−８５６５５（Ｐ２０１２−８５６５５Ａ）
【公開日】平成２４年５月１０日（２０１２．５．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５６２１（Ｐ２０１２−５６２１）
【出願日】平成２４年１月１３日（２０１２．１．１３）
【分割の表示】特願２０１０−２９０５７６（Ｐ２０１０−２９０５７６）の分割
【原出願日】平成１３年１０月５日（２００１．１０．５）
【出願人】（０００００１０２９）協和発酵キリン株式会社 (276)
【Ｆターム（参考）】