脂質代謝改善剤
【課題】 サツマイモの水可溶性成分を含む抽出液（特には澱粉回収後の廃液）から、優れた生理活性作用を有する組成物を簡便に製造すること、を目的とする。
【解決手段】 原料であるサツマイモを水抽出して、得られた抽出液（特に、澱粉回収後の廃液）に含まれる水可溶性成分をタンパク質分解酵素で処理することを特徴とする、脂質代謝改善作用（特に、血中の悪玉コレステロールおよび中性脂肪の低減作用、内臓脂肪蓄積抑制作用）を有する組成物の製造方法、；前記医薬用途を有する薬剤、；を提供する。
【解決手段】 原料であるサツマイモを水抽出して、得られた抽出液（特に、澱粉回収後の廃液）に含まれる水可溶性成分をタンパク質分解酵素で処理することを特徴とする、脂質代謝改善作用（特に、血中の悪玉コレステロールおよび中性脂肪の低減作用、内臓脂肪蓄積抑制作用）を有する組成物の製造方法、；前記医薬用途を有する薬剤、；を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、サツマイモ水可溶性成分のタンパク質分解酵素処理物（特に、特定ペプチドを含有するもの）を有効成分として含有してなることを特徴とする、脂質代謝改善作用を有する薬剤（特に、血中の悪玉コレステロールおよび中性脂肪の低減作用を有する薬剤、内臓脂肪蓄積抑制作用を有する薬剤）に関する。
また、本発明は、原料であるサツマイモを水抽出して、得られた抽出液（特に、澱粉回収後の廃液）に含まれる水可溶性成分をタンパク質分解酵素で処理することを特徴とする、特定ペプチドを含有する組成物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
サツマイモは、江戸時代に日本に伝来して以来、重要な作物であり数々の飢饉を救った救荒作物としても知られている。
南九州地域では、食用以外にも澱粉や焼酎原料として多く利用されているが、澱粉や焼酎を製造する際に廃棄される残渣の処理が問題となっている。澱粉や焼酎滓には、サツマイモ由来の有用成分が多く含まれており、これらを有効利用する方法が検討されている。
【０００３】
サツマイモの可溶性有機成分である糖類、タンパク質、ポリフェノール類などは、澱粉製造時に排水とともに排出されている。
この可溶性成分には、澱粉の糖化酵素であるβ−アミラーゼ（特許文献１参照）や、血糖値の低減効果を示すトリプシンインヒビター（非特許文献１参照）などのタンパク質が含まれる。また、ポリフェノール類としては、ラジカル消去活性（特許文献２参照）、抗糖尿病（特許文献３参照）、抗高血圧効果（特許文献４参照）、などが報告されている。
しかし、澱粉廃液中に占めるこれら可溶性有用成分は、相当希釈されているため、実用的に利用されていないのが現状である。
【０００４】
そこで、澱粉廃液中に含まれる可溶性成分の有効利用方法を開発し、新規の需要創出をはかることは、廃液処理費および環境への負荷の軽減に寄与すると期待される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００５−０４６１１０号公報
【特許文献２】特開２００５−２７８５９６号公報
【特許文献３】特開２００７−１１９３４６号公報
【特許文献４】特開２００５−３３０２４０号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】J. Clin. Biochem. Nutr., 43 Suppl. 1, 410-412, 2008
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、上記課題を解決し、サツマイモの水可溶性成分を含む抽出液（特に澱粉回収後の廃液）から、優れた生理活性作用を有する組成物を簡便に製造することを目的とする。また、本発明は、得られた当該組成物を含有する、優れた生理活性作用を有する薬剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、サツマイモ水可溶性成分のタンパク質分解酵素処理物に、脂質代謝改善作用があることを見出した。
詳しくは、まず、サツマイモに水を加えた磨砕液（水可溶性成分抽出液）から固形分（澱粉等）を除去し、タンパク質分解酵素で処理して、ペプチドを主成分とする組成物を得た。そして、これをマウスに経口摂取させたところ、優れた脂質代謝改善作用（特に、血中の悪玉コレステロールおよび中性脂肪の低減作用を有する薬剤、内臓脂肪蓄積抑制作用）があることを見出した。
本発明は、これらの知見に基づいて完成したものである。
【０００９】
即ち、請求項１に係る本発明は、サツマイモ水可溶性成分のタンパク質分解酵素処理物を有効成分として含有してなることを特徴とする、脂質代謝改善作用を有する薬剤に関するものである。
請求項２に係る本発明は、前記タンパク質分解酵素処理物が、アミノ酸配列ＩＴＰ、ＧＱＹ、ＩＩＰ、またはＳＴＹＱＴからなる４種類のペプチドを含有するものである、請求項１に記載の薬剤に関するものである。
請求項３に係る本発明は、原料であるサツマイモを水抽出して、得られた抽出液に含まれる水可溶性成分をタンパク質分解酵素で処理することを特徴とする、アミノ酸配列ＩＴＰ、ＧＱＹ、ＩＩＰ、またはＳＴＹＱＴからなる４種類のペプチドを含有する組成物の製造方法に関するものである。
請求項４に係る本発明は、前記抽出液が、サツマイモから澱粉を回収した後に得られる廃液である、請求項３に記載の組成物の製造方法に関するものである。
請求項５に係る本発明は、請求項３又は４に記載の製造方法から得られる組成物を含有してなる飲食品に関するものである。
請求項６に係る本発明は、請求項３又は４に記載の製造方法から得られる組成物を有効成分として含有してなる、脂質代謝改善作用を有する薬剤に関するものである。
請求項７に係る本発明は、前記脂質代謝改善剤が、血中の悪玉コレステロールおよび中性脂肪の低減作用を有するものである、請求項１，２，６のいずれかに記載の薬剤に関するものである。
請求項８に係る本発明は、前記脂質代謝改善剤が、内臓脂肪蓄積抑制作用を有するものである、請求項１，２，６のいずれかに記載の薬剤に関するものである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明は、サツマイモの水可溶性成分を含む抽出液（特に、澱粉回収後の廃液）から、簡便な操作によって、脂質代謝改善作用（特に、血中の悪玉コレステロールおよび中性脂肪の低減作用、内臓脂肪蓄積抑制作用）を有する組成物を得ることを可能とする。また、当該脂質代謝改善作用を有する薬剤を提供することを可能とする。
【００１１】
従って、本発明は、高脂血症、肥満、メタボリックシンドローム、に対して有効な薬剤の提供を可能とする。
また、ひいては高脂血症の悪化により引き起こる動脈硬化、さらには心筋梗塞や脳梗塞の予防に有効な薬剤の提供を可能とする。
また、本発明は、原料がサツマイモ由来であり、製造工程において有害な化学薬品等を用いないため、経口摂取において安全性に優れた組成物を提供することを可能とする。
また、本発明は、サツマイモからの澱粉回収後の廃液の有効利用を可能とし、廃液処理費および環境への負荷の軽減することを可能とする。さらには、焼酎滓、廃棄されている規格外イモやトリミング残渣などの有効利用も可能とする。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】サツマイモ（Ipomoea batatas）のスポラミンアミノ酸配列において、ＩＴＰ、ＧＱＹ、ＳＴＹＱＴが含まれる部位を示した図である。
【図２】実施例２におけるマウスの給餌飼育日程を示した図である。
【図３】実施例２における餌摂取量の累計を示した図である。
【図４】実施例２における体重の測定結果を示した図である。
【図５】実施例２における肝臓重量の測定結果を示した図である。
【図６】実施例２における腸間膜脂肪重量の測定結果を示した図である。
【図７】実施例２における精巣上体周囲脂肪重量の測定結果を示した図である。
【図８】実施例２における血中の総コレステロール含量の測定結果を示した図である。
【図９】実施例２における血中の中性脂肪の測定結果を示した図である。
【図１０】リポタンパク質の粒径と密度の相関関係を示した図である。
【図１１】実施例２における各種リポタンパク質（４分画）中のコレステロール含量の測定結果を示した図である。
【図１２】実施例２における各種リポタンパク質（４分画）中の中性脂肪含量の測定結果を示した図である。
【図１３】実施例２における各種リポタンパク質（２０分画）中のコレステロール含量の測定結果を示した図である。
【図１４】実施例２における各種リポタンパク質（２０分画）中の中性脂肪含量の測定結果を示した図である。
【図１５】実施例２における血中のアディポネクチン濃度を示した図である。
【図１６】実施例２における血中のレプチン濃度を示した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は、原料であるサツマイモを水抽出して、得られた抽出液（特に、澱粉回収後の廃液）に含まれる水可溶性成分をタンパク質分解酵素で処理することを特徴とする、脂質代謝改善作用（特に、血中の悪玉コレステロールおよび中性脂肪の低減作用、内臓脂肪蓄積抑制作用）を有する組成物の製造方法に関する。また、本発明は、前記医薬用途を有する薬剤に関する。
【００１４】
＜サツマイモ原料＞
本発明に原料として用いる「サツマイモ」としては、サツマイモ植物体の地下部、特に養分を蓄えて肥大化したイモである「塊根」（以下、単に‘イモ’を記載する場合がある）を用いるものである。
本発明におけるサツマイモの種類としては、サツマイモ（薩摩芋、甘藷：Ipomoea batas）に属する品種、亜種、系統のものであれば如何なるものも用いることができる。
例えば、シロユタカ、ダイチノユメ、コナホマレ、シロサツマ、コガネセンガン、クイックスイート、ベニアズマ、ベニコマチ、べにはるか、べにまさり、高系１４号、パープルスイートロード、アヤムラサキ（アントシアニン色素を多く含む）、アヤコマチ（カロテン色素を多く含む）などを挙げることができる。
特に、原料のサツマイモは、スポラミンを代表するサツマイモ特有のタンパク質やポリペプチドの含有量が多い品種系統を用いることが好ましく、例えば、シロユタカなどを用いることが好適である。
また、タンパク質含有量が高くなる栽培条件、例えば長期多肥栽培のものが好適である。
【００１５】
また、本発明では、サツマイモからの澱粉回収後の廃液の有効利用の観点から、澱粉生産用のイモ（例えば、シロユタカ、ダイチノユメ、コナホマレ、シロサツマ、コガネセンガンなど）を原料として用いることも好適である。また、栽培過程で廃棄される規格外のイモやトリミングされた未発達のイモ、さらには、食品加工において廃棄されるイモの残渣を有効に用いることも望ましい。
【００１６】
＜水可溶性成分の抽出工程＞
本発明では、前記原料であるサツマイモから水抽出することによって、水可溶性成分を抽出する工程を含むものである。
水抽出工程は、原料であるサツマイモを、生のまま用いることもできるが、乾燥、冷蔵、冷凍状態で保存したものを用いることもできる。
また、当該原料は、そのままの形状のまま用いることもできるが、磨砕等の処理（例えば、細断、細砕、磨砕、擂潰、粉末化、など）を行ってから、水を加水し、攪拌、混合、などを行って水抽出を行うものである。また、加水してから前記磨砕等の処理を行い、水抽出を行うことができる。なお、加える水の量としては、原料から水可溶成分を抽出できる量（例えば、６倍量程度以下）であればよい。
なお、抽出成分の濃度が薄くなると、後述の濃縮処理や粉末化処理の効率が悪くなるため、無加水（０倍量）もしくは低加水（１倍量程度以下）で行うことが望ましいが、抽出効率を踏まえると、好ましくは０．５〜１倍量程度の水を加えて行うことが望ましい。
水抽出は、室温程度で行うことがきるが、例えば、２０〜４５℃で、１０秒〜５分、３０秒〜３分間行うことで、「水可溶性成分を多く含む抽出液」を得ることができる。
【００１７】
また、本発明では、工業的なサツマイモ澱粉の生産における‘廃液’を回収して利用することで、当該「水可溶性成分を含む抽出液」として用いることもできる。当該澱粉回収後の廃液を有効利用することは、環境負荷や廃棄物有効利用の観点で望ましい。
【００１８】
上記より得られた水可溶性成分を含む抽出液は、タンパク質の含有量の高いものであることが望ましいため、当該含有量を高める処理を行うことが望ましい。
例えば、遠心分離（例えばフィルター付きの遠心脱水機、高速遠心分離機）、濾過、などを行って、固形分（澱粉等を多く含む画分）を除去することが好ましい。
また、限外濾過、逆浸透、イオン交換カラム処理などを行うことで、水可溶性成分の濃縮、糖や色素などの低分子も除去、を行うことも好ましい。
また、煮沸処理（約１０〜６０分、例えば約３０分）を行い、抽出した多糖類を除去することも好ましい。
なお、さらには、ＵＦ膜、ゲルろ過、アルコール沈殿、などによって糖や色素などの低分子を除去したり、等電点沈殿法を利用してβ−アミラーゼを除去してもよい。
また、これらの各分離処理の後に、必要に応じては、さらにメッシュ等（例えば２００〜８００μｍメッシュ）で濾過を行って不純物を除去してもよい。
【００１９】
なお、当該工程で除去された固形分（澱粉を多く含む）、色素成分、β−アミラーゼなどは、廃棄することなく、有効に用いることが望ましい。
【００２０】
＜タンパク質分解酵素処理工程＞
本発明においては、前記抽出液に含有される水可溶性成分を、タンパク質分解酵素で処理する工程を含むものである。
タンパク質分解酵素処理は、具体的には、前記抽出液（もしくはこの希釈液、濃縮液、乾燥物の再溶解液）にタンパク質分解酵素を添加し反応させることで、行うことができる。
【００２１】
本工程で用いるタンパク質分解酵素としては、耐熱性を有するもの、サツマイモタンパク質を効率よく分解する性質を有するものであれば、基本的に如何なるものを用いることができるが、例えば、Bacillus属から精製された酵素製剤を用いることができる。
具体的には、Bacillus stearothermophilusから精製された酵素製剤（特にプロテアーゼＳ〔天野エンザイム(株)〕）、Bacillus subtilisから精製された酵素製剤（特にプロレザーＦＧ−Ｆ〔天野エンザイム(株)〕）、Bacillus thermoproteolyticus由来のエンドプロテアーゼ製剤（サモアーゼ〔天野エンザイム(株)〕）、を用いることができ、さらには、これら３種類の酵素を混合して用いることが望ましい。
また、これらの酵素の添加量としては、例えば、抽出液１ｋｇあたり、プロテアーゼSは2.5ｇ程度、プロレーザーFG-Fは2.5ｇ程度、サモアーゼは0.25ｇ程度を添加すればよい。
【００２２】
本工程のタンパク質分解酵素処理は、前記抽出液のｐＨを、タンパク質分解酵素の活性に合わせたｐＨに調整してから行うことが望ましい。ｐＨの調整は、緩衝液やｐＨ調整剤を用いて行うことができる。例えば、ｐＨ７〜９、前記酵素製剤を用いた場合は、ｐＨ８〜９（具体的にはｐＨ８．５付近）、に調整して、行うことができる。
また、本工程のタンパク質分解酵素処理は、５０〜７５℃、前記酵素製剤を用いた場合は、６０〜７０℃（具体的には６５℃付近）で、行うことが望ましい。
また当該処理は、１〜７２時間、好ましくは８〜２４時間（具体的には約１６時間）、反応で行うことで、十分な量のタンパク質分解酵素処理物を得ることができる。
【００２３】
反応終了後、得られた反応液（「タンパク質分解酵素処理物（サツマイモペプチド含有組成物）」）は、煮沸処理（具体的には３０分程度）、などを行い、添加したタンパク質分解酵素を失活させることが望ましい。
また、濾過や遠心分離によって残渣を取り除くことや、活性炭処理（具体的には活性炭濾過）を行って、脱色、脱臭を行うことが望ましい。
また、得られた反応液は、乾燥処理（具体的にはスプレードライ）を行うことで、乾燥物（具体的には乾燥粉末）にすると、様々な形態への利用がしやすい点で好適である。
【００２４】
＜サツマイモ由来の４種類のペプチド＞
このようにして得られた「タンパク質分解酵素処理物」は、サツマイモ由来のペプチドを極めて高い含有量（具体的には、上記工程を好適範囲で行った場合、乾燥物換算で５０％以上）で含むものである。
なお、当該組成物は、イオン交換樹脂やＵＦ膜で処理することによって、当該ペプチドを単離精製したもの（単離精製物）とすることもできる。
具体的には、前記組成物を、吸着カラムクロマトグラフィーにアプライし、１０〜３０％エタノール(具体的には２０％エタノール)での溶出画分をＯＤＳカラムクロマトグラフィーにアプライし、アセトニトリル濃度勾配によりメジャーピークの分取を繰り返すことで、４種類のペプチドとして単離することができる。
【００２５】
ここで得られる、４種類のペプチドとしては、具体的には、アミノ酸配列が「ＩＴＰ」、「ＧＱＹ」、「ＩＩＰ」、「ＳＴＹＱＴ」からなるペプチドである。
なお、これらのうちのＩＴＰ、ＧＱＹ、ＳＴＹＱＴは、スポラミン（サツマイモ塊根中のタンパク質の６０〜８０％を占める）のアミノ酸配列に含まれることから、これらはスポラミンに由来するものと考えられる。
【００２６】
＜脂質代謝改善作用＞
上記工程を経て得られたタンパク質分解酵素処理物（サツマイモペプチド含有組成物）は、優れた「脂質代謝改善作用」を有するものである。
具体的には、「血中脂質の低減作用」と「内臓脂肪の蓄積抑制作用」に対して、優れた有効性を示すものであり、特には、血中脂質の低減作用に極めて優れた有効性を示すものである。
【００２７】
前記血中脂質の低減作用としては、具体的には、血中における‘悪玉コレステロール’（ＶＬＤＬとＬＤＬに多く含まれるコレステロール）と‘中性脂肪’の低減に優れた有効性を示すものである。なお、善玉コレステロール（ＨＤＬに多く含まれるコレステロール）に対しては、大きな変動を与えないものである。
また、前記内臓脂肪の蓄積抑制作用としては、例えば、肝臓、腸間膜脂肪、精巣上体周囲脂肪、などへの脂肪の蓄積を抑制することに、優れた有効性を示すものである。また、特に脂肪肝や脾臓の血腫が形成されるのを抑制することにも有効性を示す。
【００２８】
なお、当該タンパク質分解酵素処理物は、肝臓脂肪組織における肥満関連因子の発現にも影響を与えるものである。
例えば、善玉アディポサイトカイン（例えばアディポネクチン）、摂食抑制因子（例えば、ＭＳＨ−α、Ｋｉｓｓ１、Neuromedin U）には、発現が増加するように作用する。一方、悪玉アディポサイトカイン（例えばＴＮＦ−α）には発現が減少するように作用する。
また、当該タンパク質分解酵素処理物は、血中における悪玉アディポサイトカイン（例えばレプチン）を減少させるように作用する。
本発明における前記脂質改善作用は、これらの肥満関連因子の発現の影響によって、発揮されているものと考えられる。
【００２９】
＜薬剤、飲食品＞
本発明における当該タンパク質分解酵素処理物（サツマイモペプチド含有組成物）は、経口摂取することによって、前記した優れた生理活性を奏するものである。
前記血中脂質の低減作用を期待する場合、本発明における当該タンパク質分解酵素処理物の有効量としては、当該処理物に含有される‘サツマイモペプチド’の量に換算して、体重６０ｋｇの成人一人一日あたり、０．１ｇ以上、好ましくは１ｇ以上経口摂取することにより、上記のような優れた生理活性作用が得られる。
また、前記内臓脂肪の蓄積抑制作用を期待する場合、本発明における当該タンパク質分解酵素処理物の有効量としては、当該処理物に含有される‘サツマイモペプチド’の量に換算して、体重６０ｋｇの成人一人一日あたり、０．５ｇ以上、好ましくは１０ｇ以上経口摂取することにより、上記のような優れた生理活性作用が得られる。（なお、これらの値は、後記した実施例におけるマウスの有効投与量のデータから、マウスからヒトへの換算係数を１２．３、サツマイモペプチド含量を約５０％として、算出した値である。）
従って、この必要量を確保できる形態や摂取方法（回数、量）で、本発明における当該タンパク質分解酵素処理物を摂取すればよい。
【００３０】
本発明における当該タンパク質分解酵素処理物は、薬剤や飲食品に含有させる形態にすることができる。
すなわち、上記工程で得られるタンパク質分解酵素処理物（サツマイモペプチド含有組成物）、もしくはサツマイモペプチドの単離物、を、各種原料に混合することで、薬剤や飲食品の形態として製造することができる。
なお、本発明における有効成分である前記タンパク質分解酵素処理物は、サツマイモ由来であるため、経口摂取の上で安全性に優れたものである。
【００３１】
また、薬剤の形態としては、粉末状、細粒状、顆粒状、などとすることができ、カプセルに充填する形態の他、水に分散した溶液の形態、賦形剤等と混和して得られる錠剤の形態、などにすることができる。
また、飲食品としては、如何なるものにも含有させることができるが、例えば、タブレット、レトルト食品、スナック菓子、ドリンク、スープ、ゼリー、ビスケット、調味料、などの形態にすることができる。
【実施例】
【００３２】
以下、実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明の技術範囲はこれらにより限定されるものではない。
＜実施例１＞ サツマイモペプチド含有組成物の製造
まず、サツマイモの塊根（品種：シロユタカ、１００ｋｇ）に水（５０ｋｇ）を加え、高速磨砕機を用いて磨砕した。
得られた磨砕液（１５０ｋｇ）は、遠心脱水機（800メッシュのフィルター）で遠心することによって、澱粉を含む固体部と搾汁液（約９０ｋｇ）を分離し、さらに搾汁液を限外濾過により約１．８倍に濃縮した濃縮液（４８ｋｇ）を得た。
この濃縮液（２ｋｇ）を２倍に希釈し、煮沸処理を３０分行って多糖類を抽出させた後、２００メッシュのフィルターを用いて濾過し、変性沈殿したタンパク質を含む残渣を得た。
これに４Ｌの水を加え、サモアーゼPC10F（大和化成、１ｇ），プロテアーゼＳ（天野エンザイム、１０ｇ），プロレーザーFG-F（天野エンザイム、１０ｇ）を加え、ｐＨ８．５、６５℃で１６時間反応させることで、タンパク質分解酵素処理を行った。その後、煮沸処理を３０分行って酵素を失活させた。
得られた反応液（タンパク質分解酵素処理物＝‘サツマイモペプチド含有組成物’）を、活性炭濾過（特選白鷲、武田キリン）を行って脱色・脱臭し、スプレードライにより噴霧乾燥することで、‘サツマイモペプチド含有組成物’の乾燥粉末（３０ｇ）を得た。
そして、得られた粉末の成分組成を調べた。その結果、表１が示すように、当該粉末には、ペプチドが５０．３％と大量に含有されることが示され、ペプチドを主成分とする組成物であることが分った。
【００３３】
【表１】
【００３４】
（２）ペプチドの単離
上記で得た乾燥粉末を、吸着カラムクロマトグラフィー（セパビーズSP825）にアプライし、エタノール濃度０，２０，４０，８０，１００％で溶出させて分画した。
２０％溶出画分をＯＤＳカラムクロマトグラフィー（コスモシール 5C18-AR-300）にアプライし、アセトニトリル濃度勾配によりメジャーピークの分取を繰り返し、４つのペプチドを単離してアミノ酸配列を決定した。
【００３５】
その結果、４つのペプチドは、「ＩＴＰ」、「ＧＱＹ」、「ＩＩＰ」、「ＳＴＹＱＴ」からなるペプチドであることが明らかになった（Ｉ：イソロイシン、Ｔ：トレオニン、Ｐ：プロリン、Ｇ：グリシン、Ｑ：グルタミン、Ｙ：チロシン、Ｓ：セリン、を表す）。
なお、図１が示すように、これらのうちのＩＴＰ、ＧＱＹ、ＳＴＹＱＴは、スポラミン（サツマイモ塊根中のタンパク質の６０〜８０％を占める）のアミノ酸配列に含まれることから、これらはスポラミンに由来することが示唆された。
【００３６】
＜実施例２＞ 脂質代謝改善作用の検証
サツマイモペプチド含有組成物の、体重、血中脂質、内臓脂肪、に対する影響を調べた。
（１）マウスの給餌飼育
マウス（C57BL/6系統、オス、５週齢、日本SLC(株)）を、１週間の予備飼育後、表２に示す３群（各５匹ずつ）に分けて、２８日間給餌飼育を行った。なお、開始日（１日目）と終了日（２８日目）の前日には、午後１０時から絶食させた。
各飼料は、サツマイモペプチド含有組成物としては、実施例１で得られたスプレードライ粉末を、高脂肪食としては、High Fat Diet 32（日本クレア〕を用いて、表２に示す処方により混合して調製した。また、飼育条件は、表３に示す条件で行った。飼育日程をまとめたものを、図２に示す。
なお、飼育期間が終了するまで、異常な行動や変化を示した個体や死亡した個体はみられなかった。
【００３７】
【表２】
【００３８】
【表３】
【００３９】
（２）体重の測定
給餌飼育の開始日（１日目）および終了日（２８日目）の午前１０時に、パーソナル電子天秤ＥＫ1200i（(株)エー・アンド・デイ）で測定した。なお、給餌毎に摂取した餌の摂取残量と、新たに加える餌の量を測定することで、餌摂取量の累計を算出した。
餌摂取量の結果を図３に、給餌飼育終了日に測定した体重の結果を図４に示す。（なお、以降の測定結果のグラフを示す図において、「＊」は５％の危険率で、「＊＊」は１％の危険率で、対照に対して有意差があることを示す。）
その結果、餌摂取量については、各群間に相違が見られなかったにも関わらず、体重については、サツマイモペプチド含有組成物の添加量の増加に依存して、体重が有意に減少することが示された。
【００４０】
（３）臓器重量の測定
給餌終了日（２８日目）後、肝臓、腸間膜脂肪、精巣上体周囲脂肪を摘出し、それぞれの重量を測定した。重量測定には、ベーシック天秤アドベンチャープロAV213C（ＯＨＡＵＳ社）を使用した。各重量の測定結果について、肝臓の結果を図５に、腸間膜脂肪の結果を図６に、精巣上体周囲脂肪の結果を図７にそれぞれを示す。なお、解剖所見を行い、特に肝臓については脂肪肝について判定した。結果を表４に示す。
その結果、サツマイモペプチド含有組成物の添加量の増加に依存して、内臓脂肪を蓄積する臓器である肝臓、腸間膜脂肪、精巣上体周囲脂肪の重量が、有意に減少することが示された。また、脂肪肝の程度も軽減することが示された。
特に、当該組成物を５％含有する飼料を摂取させた群（Ｂ群）では、上記臓器重量に大幅な減少がみられ、さらに肝臓も脂肪肝になっていないことが示された。また、脾臓に血腫が生じる個体も見られなくなった。
【００４１】
【表４】
【００４２】
（４）血中脂質の測定
i ）採血
給餌飼育開始日（１日目）と終了日（２８日目）の午前１０時に採血を行った。なお、前記したように、これらの日の前日の午後１０時からは絶食させた。
給餌飼育開始日（１日目）の採血は、尾静脈よりヘパリン処理済の毛細管で、約１６０μｌを採血した。また、給餌飼育終了日（２８日目）の採血は、前記臓器摘出の前にマウスをケタミンで麻酔し、心臓採血を行った。全頭の採血を行った後、血清分離を行って、得られた血清を−８０℃で凍結保存した。
【００４３】
ii）血中総コレステロールおよび中性脂肪の測定
血中の総コレステロールおよび中性脂肪の測定は、上記採血により得た血清を、コレステストＣＨＯ（第一化学薬品(株)）とコレステストＴＧ（第一化学薬品(株)）にて、(株)スカイライト・バイオテック解析センター内で測定した。給餌飼育終了日における血中の総コレステロール含量の値を図８に、中性脂肪含量の値を図９に示す。
その結果、血中の総コレステロール含量と中性脂肪含量は、サツマイモペプチド含有組成物の添加によって減少することが示された。特に、中性脂肪含量は当該組成物を０．５％しか含有しない飼料を給餌した群（Ｃ群）でも、大きな効果があることが示された。
【００４４】
（５）リポタンパク質中のコレステロールおよび中性脂肪の測定
i ）粒径の異なる４種類のサブクラスへの分画
血液中のコレステロールと中性脂肪は、リポタンパク質中に含有されている。リポタンパク質は、粒径の違いにより大まかに、カイロミクロン（以下、ＣＭやＣＨＹＬＯと略す），ＶＬＤＬ，ＬＤＬ，ＨＤＬの４種類のサブクラスに分類される（図１０参照）。
そこで、上記段落（４）で給餌飼育終了日に採血した血清を、ゲルろ過カラムを装備した高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって、各種リポタンパク質を分離し、分離されたリポタンパク質中のコレステロールと中性脂肪の含量を試薬反応により測定した。給餌飼育終了日におけるコレステロール含量の結果を図１１に、中性脂肪含量の結果を図１２に示す。
その結果、‘コレステロール’は、ＶＬＤＬ、ＬＤＬにおいて当該組成物の摂取量依存的に減少し、特にＶＬＤＬにおけるコレステロールの減少は、当該組成物を０．５％しか含有しない飼料を給餌した群（Ｃ群）でも、顕著であることが示された。また、ＨＤＬについては、大きな減少がみられなかった。
また、‘中性脂肪’は、ＣＭ、ＶＬＤＬ、ＬＤＬ、ＨＤＬの全てにおいて当該組成物の摂取量依存的に減少し、特にＶＬＤＬ、ＬＤＬ、ＨＤＬ（即ち、ＣＭを除く残り３分画のリポタンパク質）においては、当該組成物を０．５％しか含有しない飼料を給餌した群（Ｃ群）でも、大きな低減作用があることが示された。
【００４５】
ii）粒径の異なる２０種類のサブクラスへの分画
さらに、粒径を、上記４種類よりもさらに細かい２０種類のサブクラスに分類して、各分画におけるコレステロールと中性脂肪の含量を測定した。リポタンパク質の分離およびコレステロールと中性脂肪の含量の測定は、粒径が大きい順にG01〜20に分離したことを除いては、前段落と同様にして行った。
２０分画のうち、G05（粒径44.5nm＝large VLDL），G06（粒径36.8nm＝medium VLDL），G08（粒径28.6nm＝large LDL），G13（粒径16.7nm＝very small LDL），G16（粒径12.1nm＝large HDL），G20（粒径7.6nm＝very small HDL）についてのコレステロール含量の値を図１３に示す。
また、G05（粒径44.5nm＝large VLDL），G06（粒径36.8nm＝medium VLDL），G09（粒径25.5nm＝medium LDL），G12（粒径18.6nm＝very small LDL），G17（粒径10.9nm＝medium HDL），G19（粒径8.8nm＝very small HDL）についての中性脂肪含量の値を図１４に示す。
【００４６】
その結果、‘コレステロール’は、ＶＬＤＬ（G05，G06）、およびＬＤＬ（G08，G13）において、当該組成物の摂取量依存的に減少することが示された。特にＶＬＤＬ（G05，G06）におけるコレステロールの減少は、当該組成物を０．５％しか含有しない飼料を給餌した群（Ｃ群）でも、顕著であることが示された。また、ＨＤＬにおいては、当該組成物を５％含有した飼料を給餌した群（Ｂ群）では粒子径の大きいＨＤＬ（G16）では減少したが、粒子径の小さいHDL(G20)ではむしろ増加する傾向が示された。
‘中性脂肪’は、ＶＬＤＬ（G05，G06）、ＬＤＬ（G09，G12）、ＨＤＬ（G17，G19）において、当該組成物を０．５％しか含有しない飼料を給餌した群（Ｃ群）でも、大きな低減作用があることが示された。
【００４７】
iii）考察
これらのことより、当該サツマイモペプチド含有組成物は、‘悪玉コレステロール’（ＬＤＬとＶＬＤＬに含まれるコレステロール）を、大幅に減少させる作用を有することが示された。そして、その中の超悪玉コレステロール（very small LDLに含まれるコレステロール）についても、大幅に減少させる作用を有することが示された。
また、善玉コレステロール（ＨＤＬに含まれるコレステロール）の中の特にvery small HDLに含まれるコレステロールについては、５％摂取群（Ｂ群）においてむしろ増加させる作用を有することが示唆された。
なお、‘中性脂肪’については、いずれのリポタンパク質（ＣＭ、ＶＬＤＬ、ＬＤＬ、ＨＤＬ）に含まれるものに対しても、大幅に減少させる作用を有することが示された。
【００４８】
（６）各種肥満関連因子の解析
i ）血中アディポサイトカインの測定
血液中において、善玉アディポサイトカインである‘アディポネクチン’と、悪玉アディポサイトカインである‘レプチン’の濃度を測定した。
測定は、上記段落（４）で給餌飼育終了日に採血した血清を用いて、ELISA法によりアディポネクチンとレプチン濃度を定量した。
血中のアディポネクチン濃度の値を図１５に、レプチン濃度の値を図１６に示す。
その結果、血中におけるアディポネクチン（善玉アディポサイトカイン）の濃度は、各群で差違が見られなかったが、レプチン（悪玉アディポサイトカイン）の濃度は、当該組成物を５％摂取した群（Ｂ群）で有意に低下することが示された。
【００４９】
ii）肝臓脂肪組織における各種肥満関連因子の解析
肝臓脂肪組織において、表５に示す各種肥満関連因子の発現量を測定した。
測定は、上記段落（３）で摘出した肝臓組織から、タンパク質を抽出し、Obesity Peptide Biomarker Array(Phoenix社製)による、網羅的肥満関連因子解析によって測定した。結果を表５に示す。
その結果、善玉アディポサイトカインである‘アディポネクチン’、；摂食抑制因子である‘ＭＳＨ−α’、‘Ｋｉｓｓ１’、‘Neuromedin U’、；の発現に当該組成物の摂取量依存的な増加（５％摂取群での増加）が見られた。一方、悪玉アディポサイトカインである‘ＴＮＦ−α’の発現には、摂取量依存的な減少（５％摂取群での減少）が見られた。
【００５０】
【表５】
【００５１】
iii）考察
これらの結果から、サツマイモペプチド含有組成物は、脂肪組織（肝臓）における‘アディポサイトカイン’の発現を調節（善玉促進、悪玉抑制）する作用、‘摂食抑制因子’の発現を促進する作用、を有することが示された。
そして、これによって、血中における悪玉コレステロール含量と中性脂肪含量が低減され、また内臓への脂肪蓄積も抑制させることが示唆された。
【産業上の利用可能性】
【００５２】
本発明は、血液中の悪玉コレステロールや中性脂肪が多すぎる高脂血症や、内臓脂肪の蓄積、に対する予防や治療について、医薬分野における広範な利用が期待される。また、食品分野での利用も期待される。
なお、サツマイモは、アレルゲンを含まず、植物防疫法により青果物としての輸入が禁止されている。そのため、本発明のサツマイモ由来の組成物は、安全性に優れるとともに、国産サツマイモが原料という優位性を有している。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、サツマイモ水可溶性成分のタンパク質分解酵素処理物（特に、特定ペプチドを含有するもの）を有効成分として含有してなることを特徴とする、脂質代謝改善作用を有する薬剤（特に、血中の悪玉コレステロールおよび中性脂肪の低減作用を有する薬剤、内臓脂肪蓄積抑制作用を有する薬剤）に関する。
また、本発明は、原料であるサツマイモを水抽出して、得られた抽出液（特に、澱粉回収後の廃液）に含まれる水可溶性成分をタンパク質分解酵素で処理することを特徴とする、特定ペプチドを含有する組成物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
サツマイモは、江戸時代に日本に伝来して以来、重要な作物であり数々の飢饉を救った救荒作物としても知られている。
南九州地域では、食用以外にも澱粉や焼酎原料として多く利用されているが、澱粉や焼酎を製造する際に廃棄される残渣の処理が問題となっている。澱粉や焼酎滓には、サツマイモ由来の有用成分が多く含まれており、これらを有効利用する方法が検討されている。
【０００３】
サツマイモの可溶性有機成分である糖類、タンパク質、ポリフェノール類などは、澱粉製造時に排水とともに排出されている。
この可溶性成分には、澱粉の糖化酵素であるβ−アミラーゼ（特許文献１参照）や、血糖値の低減効果を示すトリプシンインヒビター（非特許文献１参照）などのタンパク質が含まれる。また、ポリフェノール類としては、ラジカル消去活性（特許文献２参照）、抗糖尿病（特許文献３参照）、抗高血圧効果（特許文献４参照）、などが報告されている。
しかし、澱粉廃液中に占めるこれら可溶性有用成分は、相当希釈されているため、実用的に利用されていないのが現状である。
【０００４】
そこで、澱粉廃液中に含まれる可溶性成分の有効利用方法を開発し、新規の需要創出をはかることは、廃液処理費および環境への負荷の軽減に寄与すると期待される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００５−０４６１１０号公報
【特許文献２】特開２００５−２７８５９６号公報
【特許文献３】特開２００７−１１９３４６号公報
【特許文献４】特開２００５−３３０２４０号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】J. Clin. Biochem. Nutr., 43 Suppl. 1, 410-412, 2008
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、上記課題を解決し、サツマイモの水可溶性成分を含む抽出液（特に澱粉回収後の廃液）から、優れた生理活性作用を有する組成物を簡便に製造することを目的とする。また、本発明は、得られた当該組成物を含有する、優れた生理活性作用を有する薬剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、サツマイモ水可溶性成分のタンパク質分解酵素処理物に、脂質代謝改善作用があることを見出した。
詳しくは、まず、サツマイモに水を加えた磨砕液（水可溶性成分抽出液）から固形分（澱粉等）を除去し、タンパク質分解酵素で処理して、ペプチドを主成分とする組成物を得た。そして、これをマウスに経口摂取させたところ、優れた脂質代謝改善作用（特に、血中の悪玉コレステロールおよび中性脂肪の低減作用を有する薬剤、内臓脂肪蓄積抑制作用）があることを見出した。
本発明は、これらの知見に基づいて完成したものである。
【０００９】
即ち、請求項１に係る本発明は、サツマイモ水可溶性成分のタンパク質分解酵素処理物を有効成分として含有してなることを特徴とする、脂質代謝改善作用を有する薬剤に関するものである。
請求項２に係る本発明は、前記タンパク質分解酵素処理物が、アミノ酸配列ＩＴＰ、ＧＱＹ、ＩＩＰ、またはＳＴＹＱＴからなる４種類のペプチドを含有するものである、請求項１に記載の薬剤に関するものである。
請求項３に係る本発明は、原料であるサツマイモを水抽出して、得られた抽出液に含まれる水可溶性成分をタンパク質分解酵素で処理することを特徴とする、アミノ酸配列ＩＴＰ、ＧＱＹ、ＩＩＰ、またはＳＴＹＱＴからなる４種類のペプチドを含有する組成物の製造方法に関するものである。
請求項４に係る本発明は、前記抽出液が、サツマイモから澱粉を回収した後に得られる廃液である、請求項３に記載の組成物の製造方法に関するものである。
請求項５に係る本発明は、請求項３又は４に記載の製造方法から得られる組成物を含有してなる飲食品に関するものである。
請求項６に係る本発明は、請求項３又は４に記載の製造方法から得られる組成物を有効成分として含有してなる、脂質代謝改善作用を有する薬剤に関するものである。
請求項７に係る本発明は、前記脂質代謝改善剤が、血中の悪玉コレステロールおよび中性脂肪の低減作用を有するものである、請求項１，２，６のいずれかに記載の薬剤に関するものである。
請求項８に係る本発明は、前記脂質代謝改善剤が、内臓脂肪蓄積抑制作用を有するものである、請求項１，２，６のいずれかに記載の薬剤に関するものである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明は、サツマイモの水可溶性成分を含む抽出液（特に、澱粉回収後の廃液）から、簡便な操作によって、脂質代謝改善作用（特に、血中の悪玉コレステロールおよび中性脂肪の低減作用、内臓脂肪蓄積抑制作用）を有する組成物を得ることを可能とする。また、当該脂質代謝改善作用を有する薬剤を提供することを可能とする。
【００１１】
従って、本発明は、高脂血症、肥満、メタボリックシンドローム、に対して有効な薬剤の提供を可能とする。
また、ひいては高脂血症の悪化により引き起こる動脈硬化、さらには心筋梗塞や脳梗塞の予防に有効な薬剤の提供を可能とする。
また、本発明は、原料がサツマイモ由来であり、製造工程において有害な化学薬品等を用いないため、経口摂取において安全性に優れた組成物を提供することを可能とする。
また、本発明は、サツマイモからの澱粉回収後の廃液の有効利用を可能とし、廃液処理費および環境への負荷の軽減することを可能とする。さらには、焼酎滓、廃棄されている規格外イモやトリミング残渣などの有効利用も可能とする。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】サツマイモ（Ipomoea batatas）のスポラミンアミノ酸配列において、ＩＴＰ、ＧＱＹ、ＳＴＹＱＴが含まれる部位を示した図である。
【図２】実施例２におけるマウスの給餌飼育日程を示した図である。
【図３】実施例２における餌摂取量の累計を示した図である。
【図４】実施例２における体重の測定結果を示した図である。
【図５】実施例２における肝臓重量の測定結果を示した図である。
【図６】実施例２における腸間膜脂肪重量の測定結果を示した図である。
【図７】実施例２における精巣上体周囲脂肪重量の測定結果を示した図である。
【図８】実施例２における血中の総コレステロール含量の測定結果を示した図である。
【図９】実施例２における血中の中性脂肪の測定結果を示した図である。
【図１０】リポタンパク質の粒径と密度の相関関係を示した図である。
【図１１】実施例２における各種リポタンパク質（４分画）中のコレステロール含量の測定結果を示した図である。
【図１２】実施例２における各種リポタンパク質（４分画）中の中性脂肪含量の測定結果を示した図である。
【図１３】実施例２における各種リポタンパク質（２０分画）中のコレステロール含量の測定結果を示した図である。
【図１４】実施例２における各種リポタンパク質（２０分画）中の中性脂肪含量の測定結果を示した図である。
【図１５】実施例２における血中のアディポネクチン濃度を示した図である。
【図１６】実施例２における血中のレプチン濃度を示した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は、原料であるサツマイモを水抽出して、得られた抽出液（特に、澱粉回収後の廃液）に含まれる水可溶性成分をタンパク質分解酵素で処理することを特徴とする、脂質代謝改善作用（特に、血中の悪玉コレステロールおよび中性脂肪の低減作用、内臓脂肪蓄積抑制作用）を有する組成物の製造方法に関する。また、本発明は、前記医薬用途を有する薬剤に関する。
【００１４】
＜サツマイモ原料＞
本発明に原料として用いる「サツマイモ」としては、サツマイモ植物体の地下部、特に養分を蓄えて肥大化したイモである「塊根」（以下、単に‘イモ’を記載する場合がある）を用いるものである。
本発明におけるサツマイモの種類としては、サツマイモ（薩摩芋、甘藷：Ipomoea batas）に属する品種、亜種、系統のものであれば如何なるものも用いることができる。
例えば、シロユタカ、ダイチノユメ、コナホマレ、シロサツマ、コガネセンガン、クイックスイート、ベニアズマ、ベニコマチ、べにはるか、べにまさり、高系１４号、パープルスイートロード、アヤムラサキ（アントシアニン色素を多く含む）、アヤコマチ（カロテン色素を多く含む）などを挙げることができる。
特に、原料のサツマイモは、スポラミンを代表するサツマイモ特有のタンパク質やポリペプチドの含有量が多い品種系統を用いることが好ましく、例えば、シロユタカなどを用いることが好適である。
また、タンパク質含有量が高くなる栽培条件、例えば長期多肥栽培のものが好適である。
【００１５】
また、本発明では、サツマイモからの澱粉回収後の廃液の有効利用の観点から、澱粉生産用のイモ（例えば、シロユタカ、ダイチノユメ、コナホマレ、シロサツマ、コガネセンガンなど）を原料として用いることも好適である。また、栽培過程で廃棄される規格外のイモやトリミングされた未発達のイモ、さらには、食品加工において廃棄されるイモの残渣を有効に用いることも望ましい。
【００１６】
＜水可溶性成分の抽出工程＞
本発明では、前記原料であるサツマイモから水抽出することによって、水可溶性成分を抽出する工程を含むものである。
水抽出工程は、原料であるサツマイモを、生のまま用いることもできるが、乾燥、冷蔵、冷凍状態で保存したものを用いることもできる。
また、当該原料は、そのままの形状のまま用いることもできるが、磨砕等の処理（例えば、細断、細砕、磨砕、擂潰、粉末化、など）を行ってから、水を加水し、攪拌、混合、などを行って水抽出を行うものである。また、加水してから前記磨砕等の処理を行い、水抽出を行うことができる。なお、加える水の量としては、原料から水可溶成分を抽出できる量（例えば、６倍量程度以下）であればよい。
なお、抽出成分の濃度が薄くなると、後述の濃縮処理や粉末化処理の効率が悪くなるため、無加水（０倍量）もしくは低加水（１倍量程度以下）で行うことが望ましいが、抽出効率を踏まえると、好ましくは０．５〜１倍量程度の水を加えて行うことが望ましい。
水抽出は、室温程度で行うことがきるが、例えば、２０〜４５℃で、１０秒〜５分、３０秒〜３分間行うことで、「水可溶性成分を多く含む抽出液」を得ることができる。
【００１７】
また、本発明では、工業的なサツマイモ澱粉の生産における‘廃液’を回収して利用することで、当該「水可溶性成分を含む抽出液」として用いることもできる。当該澱粉回収後の廃液を有効利用することは、環境負荷や廃棄物有効利用の観点で望ましい。
【００１８】
上記より得られた水可溶性成分を含む抽出液は、タンパク質の含有量の高いものであることが望ましいため、当該含有量を高める処理を行うことが望ましい。
例えば、遠心分離（例えばフィルター付きの遠心脱水機、高速遠心分離機）、濾過、などを行って、固形分（澱粉等を多く含む画分）を除去することが好ましい。
また、限外濾過、逆浸透、イオン交換カラム処理などを行うことで、水可溶性成分の濃縮、糖や色素などの低分子も除去、を行うことも好ましい。
また、煮沸処理（約１０〜６０分、例えば約３０分）を行い、抽出した多糖類を除去することも好ましい。
なお、さらには、ＵＦ膜、ゲルろ過、アルコール沈殿、などによって糖や色素などの低分子を除去したり、等電点沈殿法を利用してβ−アミラーゼを除去してもよい。
また、これらの各分離処理の後に、必要に応じては、さらにメッシュ等（例えば２００〜８００μｍメッシュ）で濾過を行って不純物を除去してもよい。
【００１９】
なお、当該工程で除去された固形分（澱粉を多く含む）、色素成分、β−アミラーゼなどは、廃棄することなく、有効に用いることが望ましい。
【００２０】
＜タンパク質分解酵素処理工程＞
本発明においては、前記抽出液に含有される水可溶性成分を、タンパク質分解酵素で処理する工程を含むものである。
タンパク質分解酵素処理は、具体的には、前記抽出液（もしくはこの希釈液、濃縮液、乾燥物の再溶解液）にタンパク質分解酵素を添加し反応させることで、行うことができる。
【００２１】
本工程で用いるタンパク質分解酵素としては、耐熱性を有するもの、サツマイモタンパク質を効率よく分解する性質を有するものであれば、基本的に如何なるものを用いることができるが、例えば、Bacillus属から精製された酵素製剤を用いることができる。
具体的には、Bacillus stearothermophilusから精製された酵素製剤（特にプロテアーゼＳ〔天野エンザイム(株)〕）、Bacillus subtilisから精製された酵素製剤（特にプロレザーＦＧ−Ｆ〔天野エンザイム(株)〕）、Bacillus thermoproteolyticus由来のエンドプロテアーゼ製剤（サモアーゼ〔天野エンザイム(株)〕）、を用いることができ、さらには、これら３種類の酵素を混合して用いることが望ましい。
また、これらの酵素の添加量としては、例えば、抽出液１ｋｇあたり、プロテアーゼSは2.5ｇ程度、プロレーザーFG-Fは2.5ｇ程度、サモアーゼは0.25ｇ程度を添加すればよい。
【００２２】
本工程のタンパク質分解酵素処理は、前記抽出液のｐＨを、タンパク質分解酵素の活性に合わせたｐＨに調整してから行うことが望ましい。ｐＨの調整は、緩衝液やｐＨ調整剤を用いて行うことができる。例えば、ｐＨ７〜９、前記酵素製剤を用いた場合は、ｐＨ８〜９（具体的にはｐＨ８．５付近）、に調整して、行うことができる。
また、本工程のタンパク質分解酵素処理は、５０〜７５℃、前記酵素製剤を用いた場合は、６０〜７０℃（具体的には６５℃付近）で、行うことが望ましい。
また当該処理は、１〜７２時間、好ましくは８〜２４時間（具体的には約１６時間）、反応で行うことで、十分な量のタンパク質分解酵素処理物を得ることができる。
【００２３】
反応終了後、得られた反応液（「タンパク質分解酵素処理物（サツマイモペプチド含有組成物）」）は、煮沸処理（具体的には３０分程度）、などを行い、添加したタンパク質分解酵素を失活させることが望ましい。
また、濾過や遠心分離によって残渣を取り除くことや、活性炭処理（具体的には活性炭濾過）を行って、脱色、脱臭を行うことが望ましい。
また、得られた反応液は、乾燥処理（具体的にはスプレードライ）を行うことで、乾燥物（具体的には乾燥粉末）にすると、様々な形態への利用がしやすい点で好適である。
【００２４】
＜サツマイモ由来の４種類のペプチド＞
このようにして得られた「タンパク質分解酵素処理物」は、サツマイモ由来のペプチドを極めて高い含有量（具体的には、上記工程を好適範囲で行った場合、乾燥物換算で５０％以上）で含むものである。
なお、当該組成物は、イオン交換樹脂やＵＦ膜で処理することによって、当該ペプチドを単離精製したもの（単離精製物）とすることもできる。
具体的には、前記組成物を、吸着カラムクロマトグラフィーにアプライし、１０〜３０％エタノール(具体的には２０％エタノール)での溶出画分をＯＤＳカラムクロマトグラフィーにアプライし、アセトニトリル濃度勾配によりメジャーピークの分取を繰り返すことで、４種類のペプチドとして単離することができる。
【００２５】
ここで得られる、４種類のペプチドとしては、具体的には、アミノ酸配列が「ＩＴＰ」、「ＧＱＹ」、「ＩＩＰ」、「ＳＴＹＱＴ」からなるペプチドである。
なお、これらのうちのＩＴＰ、ＧＱＹ、ＳＴＹＱＴは、スポラミン（サツマイモ塊根中のタンパク質の６０〜８０％を占める）のアミノ酸配列に含まれることから、これらはスポラミンに由来するものと考えられる。
【００２６】
＜脂質代謝改善作用＞
上記工程を経て得られたタンパク質分解酵素処理物（サツマイモペプチド含有組成物）は、優れた「脂質代謝改善作用」を有するものである。
具体的には、「血中脂質の低減作用」と「内臓脂肪の蓄積抑制作用」に対して、優れた有効性を示すものであり、特には、血中脂質の低減作用に極めて優れた有効性を示すものである。
【００２７】
前記血中脂質の低減作用としては、具体的には、血中における‘悪玉コレステロール’（ＶＬＤＬとＬＤＬに多く含まれるコレステロール）と‘中性脂肪’の低減に優れた有効性を示すものである。なお、善玉コレステロール（ＨＤＬに多く含まれるコレステロール）に対しては、大きな変動を与えないものである。
また、前記内臓脂肪の蓄積抑制作用としては、例えば、肝臓、腸間膜脂肪、精巣上体周囲脂肪、などへの脂肪の蓄積を抑制することに、優れた有効性を示すものである。また、特に脂肪肝や脾臓の血腫が形成されるのを抑制することにも有効性を示す。
【００２８】
なお、当該タンパク質分解酵素処理物は、肝臓脂肪組織における肥満関連因子の発現にも影響を与えるものである。
例えば、善玉アディポサイトカイン（例えばアディポネクチン）、摂食抑制因子（例えば、ＭＳＨ−α、Ｋｉｓｓ１、Neuromedin U）には、発現が増加するように作用する。一方、悪玉アディポサイトカイン（例えばＴＮＦ−α）には発現が減少するように作用する。
また、当該タンパク質分解酵素処理物は、血中における悪玉アディポサイトカイン（例えばレプチン）を減少させるように作用する。
本発明における前記脂質改善作用は、これらの肥満関連因子の発現の影響によって、発揮されているものと考えられる。
【００２９】
＜薬剤、飲食品＞
本発明における当該タンパク質分解酵素処理物（サツマイモペプチド含有組成物）は、経口摂取することによって、前記した優れた生理活性を奏するものである。
前記血中脂質の低減作用を期待する場合、本発明における当該タンパク質分解酵素処理物の有効量としては、当該処理物に含有される‘サツマイモペプチド’の量に換算して、体重６０ｋｇの成人一人一日あたり、０．１ｇ以上、好ましくは１ｇ以上経口摂取することにより、上記のような優れた生理活性作用が得られる。
また、前記内臓脂肪の蓄積抑制作用を期待する場合、本発明における当該タンパク質分解酵素処理物の有効量としては、当該処理物に含有される‘サツマイモペプチド’の量に換算して、体重６０ｋｇの成人一人一日あたり、０．５ｇ以上、好ましくは１０ｇ以上経口摂取することにより、上記のような優れた生理活性作用が得られる。（なお、これらの値は、後記した実施例におけるマウスの有効投与量のデータから、マウスからヒトへの換算係数を１２．３、サツマイモペプチド含量を約５０％として、算出した値である。）
従って、この必要量を確保できる形態や摂取方法（回数、量）で、本発明における当該タンパク質分解酵素処理物を摂取すればよい。
【００３０】
本発明における当該タンパク質分解酵素処理物は、薬剤や飲食品に含有させる形態にすることができる。
すなわち、上記工程で得られるタンパク質分解酵素処理物（サツマイモペプチド含有組成物）、もしくはサツマイモペプチドの単離物、を、各種原料に混合することで、薬剤や飲食品の形態として製造することができる。
なお、本発明における有効成分である前記タンパク質分解酵素処理物は、サツマイモ由来であるため、経口摂取の上で安全性に優れたものである。
【００３１】
また、薬剤の形態としては、粉末状、細粒状、顆粒状、などとすることができ、カプセルに充填する形態の他、水に分散した溶液の形態、賦形剤等と混和して得られる錠剤の形態、などにすることができる。
また、飲食品としては、如何なるものにも含有させることができるが、例えば、タブレット、レトルト食品、スナック菓子、ドリンク、スープ、ゼリー、ビスケット、調味料、などの形態にすることができる。
【実施例】
【００３２】
以下、実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明の技術範囲はこれらにより限定されるものではない。
＜実施例１＞ サツマイモペプチド含有組成物の製造
まず、サツマイモの塊根（品種：シロユタカ、１００ｋｇ）に水（５０ｋｇ）を加え、高速磨砕機を用いて磨砕した。
得られた磨砕液（１５０ｋｇ）は、遠心脱水機（800メッシュのフィルター）で遠心することによって、澱粉を含む固体部と搾汁液（約９０ｋｇ）を分離し、さらに搾汁液を限外濾過により約１．８倍に濃縮した濃縮液（４８ｋｇ）を得た。
この濃縮液（２ｋｇ）を２倍に希釈し、煮沸処理を３０分行って多糖類を抽出させた後、２００メッシュのフィルターを用いて濾過し、変性沈殿したタンパク質を含む残渣を得た。
これに４Ｌの水を加え、サモアーゼPC10F（大和化成、１ｇ），プロテアーゼＳ（天野エンザイム、１０ｇ），プロレーザーFG-F（天野エンザイム、１０ｇ）を加え、ｐＨ８．５、６５℃で１６時間反応させることで、タンパク質分解酵素処理を行った。その後、煮沸処理を３０分行って酵素を失活させた。
得られた反応液（タンパク質分解酵素処理物＝‘サツマイモペプチド含有組成物’）を、活性炭濾過（特選白鷲、武田キリン）を行って脱色・脱臭し、スプレードライにより噴霧乾燥することで、‘サツマイモペプチド含有組成物’の乾燥粉末（３０ｇ）を得た。
そして、得られた粉末の成分組成を調べた。その結果、表１が示すように、当該粉末には、ペプチドが５０．３％と大量に含有されることが示され、ペプチドを主成分とする組成物であることが分った。
【００３３】
【表１】
【００３４】
（２）ペプチドの単離
上記で得た乾燥粉末を、吸着カラムクロマトグラフィー（セパビーズSP825）にアプライし、エタノール濃度０，２０，４０，８０，１００％で溶出させて分画した。
２０％溶出画分をＯＤＳカラムクロマトグラフィー（コスモシール 5C18-AR-300）にアプライし、アセトニトリル濃度勾配によりメジャーピークの分取を繰り返し、４つのペプチドを単離してアミノ酸配列を決定した。
【００３５】
その結果、４つのペプチドは、「ＩＴＰ」、「ＧＱＹ」、「ＩＩＰ」、「ＳＴＹＱＴ」からなるペプチドであることが明らかになった（Ｉ：イソロイシン、Ｔ：トレオニン、Ｐ：プロリン、Ｇ：グリシン、Ｑ：グルタミン、Ｙ：チロシン、Ｓ：セリン、を表す）。
なお、図１が示すように、これらのうちのＩＴＰ、ＧＱＹ、ＳＴＹＱＴは、スポラミン（サツマイモ塊根中のタンパク質の６０〜８０％を占める）のアミノ酸配列に含まれることから、これらはスポラミンに由来することが示唆された。
【００３６】
＜実施例２＞ 脂質代謝改善作用の検証
サツマイモペプチド含有組成物の、体重、血中脂質、内臓脂肪、に対する影響を調べた。
（１）マウスの給餌飼育
マウス（C57BL/6系統、オス、５週齢、日本SLC(株)）を、１週間の予備飼育後、表２に示す３群（各５匹ずつ）に分けて、２８日間給餌飼育を行った。なお、開始日（１日目）と終了日（２８日目）の前日には、午後１０時から絶食させた。
各飼料は、サツマイモペプチド含有組成物としては、実施例１で得られたスプレードライ粉末を、高脂肪食としては、High Fat Diet 32（日本クレア〕を用いて、表２に示す処方により混合して調製した。また、飼育条件は、表３に示す条件で行った。飼育日程をまとめたものを、図２に示す。
なお、飼育期間が終了するまで、異常な行動や変化を示した個体や死亡した個体はみられなかった。
【００３７】
【表２】
【００３８】
【表３】
【００３９】
（２）体重の測定
給餌飼育の開始日（１日目）および終了日（２８日目）の午前１０時に、パーソナル電子天秤ＥＫ1200i（(株)エー・アンド・デイ）で測定した。なお、給餌毎に摂取した餌の摂取残量と、新たに加える餌の量を測定することで、餌摂取量の累計を算出した。
餌摂取量の結果を図３に、給餌飼育終了日に測定した体重の結果を図４に示す。（なお、以降の測定結果のグラフを示す図において、「＊」は５％の危険率で、「＊＊」は１％の危険率で、対照に対して有意差があることを示す。）
その結果、餌摂取量については、各群間に相違が見られなかったにも関わらず、体重については、サツマイモペプチド含有組成物の添加量の増加に依存して、体重が有意に減少することが示された。
【００４０】
（３）臓器重量の測定
給餌終了日（２８日目）後、肝臓、腸間膜脂肪、精巣上体周囲脂肪を摘出し、それぞれの重量を測定した。重量測定には、ベーシック天秤アドベンチャープロAV213C（ＯＨＡＵＳ社）を使用した。各重量の測定結果について、肝臓の結果を図５に、腸間膜脂肪の結果を図６に、精巣上体周囲脂肪の結果を図７にそれぞれを示す。なお、解剖所見を行い、特に肝臓については脂肪肝について判定した。結果を表４に示す。
その結果、サツマイモペプチド含有組成物の添加量の増加に依存して、内臓脂肪を蓄積する臓器である肝臓、腸間膜脂肪、精巣上体周囲脂肪の重量が、有意に減少することが示された。また、脂肪肝の程度も軽減することが示された。
特に、当該組成物を５％含有する飼料を摂取させた群（Ｂ群）では、上記臓器重量に大幅な減少がみられ、さらに肝臓も脂肪肝になっていないことが示された。また、脾臓に血腫が生じる個体も見られなくなった。
【００４１】
【表４】
【００４２】
（４）血中脂質の測定
i ）採血
給餌飼育開始日（１日目）と終了日（２８日目）の午前１０時に採血を行った。なお、前記したように、これらの日の前日の午後１０時からは絶食させた。
給餌飼育開始日（１日目）の採血は、尾静脈よりヘパリン処理済の毛細管で、約１６０μｌを採血した。また、給餌飼育終了日（２８日目）の採血は、前記臓器摘出の前にマウスをケタミンで麻酔し、心臓採血を行った。全頭の採血を行った後、血清分離を行って、得られた血清を−８０℃で凍結保存した。
【００４３】
ii）血中総コレステロールおよび中性脂肪の測定
血中の総コレステロールおよび中性脂肪の測定は、上記採血により得た血清を、コレステストＣＨＯ（第一化学薬品(株)）とコレステストＴＧ（第一化学薬品(株)）にて、(株)スカイライト・バイオテック解析センター内で測定した。給餌飼育終了日における血中の総コレステロール含量の値を図８に、中性脂肪含量の値を図９に示す。
その結果、血中の総コレステロール含量と中性脂肪含量は、サツマイモペプチド含有組成物の添加によって減少することが示された。特に、中性脂肪含量は当該組成物を０．５％しか含有しない飼料を給餌した群（Ｃ群）でも、大きな効果があることが示された。
【００４４】
（５）リポタンパク質中のコレステロールおよび中性脂肪の測定
i ）粒径の異なる４種類のサブクラスへの分画
血液中のコレステロールと中性脂肪は、リポタンパク質中に含有されている。リポタンパク質は、粒径の違いにより大まかに、カイロミクロン（以下、ＣＭやＣＨＹＬＯと略す），ＶＬＤＬ，ＬＤＬ，ＨＤＬの４種類のサブクラスに分類される（図１０参照）。
そこで、上記段落（４）で給餌飼育終了日に採血した血清を、ゲルろ過カラムを装備した高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって、各種リポタンパク質を分離し、分離されたリポタンパク質中のコレステロールと中性脂肪の含量を試薬反応により測定した。給餌飼育終了日におけるコレステロール含量の結果を図１１に、中性脂肪含量の結果を図１２に示す。
その結果、‘コレステロール’は、ＶＬＤＬ、ＬＤＬにおいて当該組成物の摂取量依存的に減少し、特にＶＬＤＬにおけるコレステロールの減少は、当該組成物を０．５％しか含有しない飼料を給餌した群（Ｃ群）でも、顕著であることが示された。また、ＨＤＬについては、大きな減少がみられなかった。
また、‘中性脂肪’は、ＣＭ、ＶＬＤＬ、ＬＤＬ、ＨＤＬの全てにおいて当該組成物の摂取量依存的に減少し、特にＶＬＤＬ、ＬＤＬ、ＨＤＬ（即ち、ＣＭを除く残り３分画のリポタンパク質）においては、当該組成物を０．５％しか含有しない飼料を給餌した群（Ｃ群）でも、大きな低減作用があることが示された。
【００４５】
ii）粒径の異なる２０種類のサブクラスへの分画
さらに、粒径を、上記４種類よりもさらに細かい２０種類のサブクラスに分類して、各分画におけるコレステロールと中性脂肪の含量を測定した。リポタンパク質の分離およびコレステロールと中性脂肪の含量の測定は、粒径が大きい順にG01〜20に分離したことを除いては、前段落と同様にして行った。
２０分画のうち、G05（粒径44.5nm＝large VLDL），G06（粒径36.8nm＝medium VLDL），G08（粒径28.6nm＝large LDL），G13（粒径16.7nm＝very small LDL），G16（粒径12.1nm＝large HDL），G20（粒径7.6nm＝very small HDL）についてのコレステロール含量の値を図１３に示す。
また、G05（粒径44.5nm＝large VLDL），G06（粒径36.8nm＝medium VLDL），G09（粒径25.5nm＝medium LDL），G12（粒径18.6nm＝very small LDL），G17（粒径10.9nm＝medium HDL），G19（粒径8.8nm＝very small HDL）についての中性脂肪含量の値を図１４に示す。
【００４６】
その結果、‘コレステロール’は、ＶＬＤＬ（G05，G06）、およびＬＤＬ（G08，G13）において、当該組成物の摂取量依存的に減少することが示された。特にＶＬＤＬ（G05，G06）におけるコレステロールの減少は、当該組成物を０．５％しか含有しない飼料を給餌した群（Ｃ群）でも、顕著であることが示された。また、ＨＤＬにおいては、当該組成物を５％含有した飼料を給餌した群（Ｂ群）では粒子径の大きいＨＤＬ（G16）では減少したが、粒子径の小さいHDL(G20)ではむしろ増加する傾向が示された。
‘中性脂肪’は、ＶＬＤＬ（G05，G06）、ＬＤＬ（G09，G12）、ＨＤＬ（G17，G19）において、当該組成物を０．５％しか含有しない飼料を給餌した群（Ｃ群）でも、大きな低減作用があることが示された。
【００４７】
iii）考察
これらのことより、当該サツマイモペプチド含有組成物は、‘悪玉コレステロール’（ＬＤＬとＶＬＤＬに含まれるコレステロール）を、大幅に減少させる作用を有することが示された。そして、その中の超悪玉コレステロール（very small LDLに含まれるコレステロール）についても、大幅に減少させる作用を有することが示された。
また、善玉コレステロール（ＨＤＬに含まれるコレステロール）の中の特にvery small HDLに含まれるコレステロールについては、５％摂取群（Ｂ群）においてむしろ増加させる作用を有することが示唆された。
なお、‘中性脂肪’については、いずれのリポタンパク質（ＣＭ、ＶＬＤＬ、ＬＤＬ、ＨＤＬ）に含まれるものに対しても、大幅に減少させる作用を有することが示された。
【００４８】
（６）各種肥満関連因子の解析
i ）血中アディポサイトカインの測定
血液中において、善玉アディポサイトカインである‘アディポネクチン’と、悪玉アディポサイトカインである‘レプチン’の濃度を測定した。
測定は、上記段落（４）で給餌飼育終了日に採血した血清を用いて、ELISA法によりアディポネクチンとレプチン濃度を定量した。
血中のアディポネクチン濃度の値を図１５に、レプチン濃度の値を図１６に示す。
その結果、血中におけるアディポネクチン（善玉アディポサイトカイン）の濃度は、各群で差違が見られなかったが、レプチン（悪玉アディポサイトカイン）の濃度は、当該組成物を５％摂取した群（Ｂ群）で有意に低下することが示された。
【００４９】
ii）肝臓脂肪組織における各種肥満関連因子の解析
肝臓脂肪組織において、表５に示す各種肥満関連因子の発現量を測定した。
測定は、上記段落（３）で摘出した肝臓組織から、タンパク質を抽出し、Obesity Peptide Biomarker Array(Phoenix社製)による、網羅的肥満関連因子解析によって測定した。結果を表５に示す。
その結果、善玉アディポサイトカインである‘アディポネクチン’、；摂食抑制因子である‘ＭＳＨ−α’、‘Ｋｉｓｓ１’、‘Neuromedin U’、；の発現に当該組成物の摂取量依存的な増加（５％摂取群での増加）が見られた。一方、悪玉アディポサイトカインである‘ＴＮＦ−α’の発現には、摂取量依存的な減少（５％摂取群での減少）が見られた。
【００５０】
【表５】
【００５１】
iii）考察
これらの結果から、サツマイモペプチド含有組成物は、脂肪組織（肝臓）における‘アディポサイトカイン’の発現を調節（善玉促進、悪玉抑制）する作用、‘摂食抑制因子’の発現を促進する作用、を有することが示された。
そして、これによって、血中における悪玉コレステロール含量と中性脂肪含量が低減され、また内臓への脂肪蓄積も抑制させることが示唆された。
【産業上の利用可能性】
【００５２】
本発明は、血液中の悪玉コレステロールや中性脂肪が多すぎる高脂血症や、内臓脂肪の蓄積、に対する予防や治療について、医薬分野における広範な利用が期待される。また、食品分野での利用も期待される。
なお、サツマイモは、アレルゲンを含まず、植物防疫法により青果物としての輸入が禁止されている。そのため、本発明のサツマイモ由来の組成物は、安全性に優れるとともに、国産サツマイモが原料という優位性を有している。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
サツマイモ水可溶性成分のタンパク質分解酵素処理物を有効成分として含有してなることを特徴とする、脂質代謝改善作用を有する薬剤。
【請求項２】
前記タンパク質分解酵素処理物が、アミノ酸配列ＩＴＰ、ＧＱＹ、ＩＩＰ、またはＳＴＹＱＴからなる４種類のペプチドを含有するものである、請求項１に記載の薬剤。
【請求項３】
原料であるサツマイモを水抽出して、得られた抽出液に含まれる水可溶性成分をタンパク質分解酵素で処理することを特徴とする、アミノ酸配列ＩＴＰ、ＧＱＹ、ＩＩＰ、またはＳＴＹＱＴからなる４種類のペプチドを含有する組成物の製造方法。
【請求項４】
前記抽出液が、サツマイモから澱粉を回収した後に得られる廃液である、請求項３に記載の組成物の製造方法。
【請求項５】
請求項３又は４に記載の製造方法から得られる組成物を含有してなる飲食品。
【請求項６】
請求項３又は４に記載の製造方法から得られる組成物を有効成分として含有してなる、脂質代謝改善作用を有する薬剤。
【請求項７】
前記脂質代謝改善剤が、血中の悪玉コレステロールおよび中性脂肪の低減作用を有するものである、請求項１，２，６のいずれかに記載の薬剤。
【請求項８】
前記脂質代謝改善剤が、内臓脂肪蓄積抑制作用を有するものである、請求項１，２，６のいずれかに記載の薬剤。
【請求項１】
サツマイモ水可溶性成分のタンパク質分解酵素処理物を有効成分として含有してなることを特徴とする、脂質代謝改善作用を有する薬剤。
【請求項２】
前記タンパク質分解酵素処理物が、アミノ酸配列ＩＴＰ、ＧＱＹ、ＩＩＰ、またはＳＴＹＱＴからなる４種類のペプチドを含有するものである、請求項１に記載の薬剤。
【請求項３】
原料であるサツマイモを水抽出して、得られた抽出液に含まれる水可溶性成分をタンパク質分解酵素で処理することを特徴とする、アミノ酸配列ＩＴＰ、ＧＱＹ、ＩＩＰ、またはＳＴＹＱＴからなる４種類のペプチドを含有する組成物の製造方法。
【請求項４】
前記抽出液が、サツマイモから澱粉を回収した後に得られる廃液である、請求項３に記載の組成物の製造方法。
【請求項５】
請求項３又は４に記載の製造方法から得られる組成物を含有してなる飲食品。
【請求項６】
請求項３又は４に記載の製造方法から得られる組成物を有効成分として含有してなる、脂質代謝改善作用を有する薬剤。
【請求項７】
前記脂質代謝改善剤が、血中の悪玉コレステロールおよび中性脂肪の低減作用を有するものである、請求項１，２，６のいずれかに記載の薬剤。
【請求項８】
前記脂質代謝改善剤が、内臓脂肪蓄積抑制作用を有するものである、請求項１，２，６のいずれかに記載の薬剤。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１０】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１０】
【公開番号】特開２０１１−３７７５４（Ｐ２０１１−３７７５４Ａ）
【公開日】平成２３年２月２４日（２０１１．２．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−１８６２４１（Ｐ２００９−１８６２４１）
【出願日】平成２１年８月１１日（２００９．８．１１）
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成２０年度、農林水産省、「バイオマス利用モデルの構築・実証・評価」委託事業、産業技術力強化法第１９条の適用を受ける特許出願
【出願人】（５０１２０３３４４）独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構 (827)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年２月２４日（２０１１．２．２４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年８月１１日（２００９．８．１１）
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成２０年度、農林水産省、「バイオマス利用モデルの構築・実証・評価」委託事業、産業技術力強化法第１９条の適用を受ける特許出願
【出願人】（５０１２０３３４４）独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構 (827)
【Ｆターム（参考）】
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