抗Ｃ型肝炎ウイルス効果を有するベンゾフラン誘導体
【課題】ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬、およびその利用方法を提供することを課題とする。
【解決手段】本発明に係るＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬は、下記一般式（１）：
（式中、Ｒ1 は、水素原子、アシル基、又はアリールアルコキシカルボニル基であり；Ｒ2 及びＲ3 は、独立して、置換若しくは未置換のアルキル基、置換若しくは未置換のアルケニル基、又は置換若しくは未置換のアルキニル基であるか、又はＲ2 とＲ3 とが一緒になってシクロアルキル基を形成してもよい。）で表される化合物およびインターフェロンを組み合わせてなることを特徴とする。
【解決手段】本発明に係るＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬は、下記一般式（１）：
（式中、Ｒ1 は、水素原子、アシル基、又はアリールアルコキシカルボニル基であり；Ｒ2 及びＲ3 は、独立して、置換若しくは未置換のアルキル基、置換若しくは未置換のアルケニル基、又は置換若しくは未置換のアルキニル基であるか、又はＲ2 とＲ3 とが一緒になってシクロアルキル基を形成してもよい。）で表される化合物およびインターフェロンを組み合わせてなることを特徴とする。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ベンゾフラン誘導体およびインターフェロンを用いる、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬、およびその利用に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症は通常、慢性肝炎を引き起こし、しばしば肝硬変または肝細胞癌に至る。保因者の数は、現在では全世界の人口の約３％（〜１億７０００万人）に上る。ＨＣＶは、いまだ明らかでない原因により宿主の免疫機構を回避するため、免疫機構の発達した大人に感染した場合でも持続感染が成立することが多く、慢性肝炎、肝硬変、肝癌へと進行し、手術により摘出しても、非癌部で引き続き起こる炎症のため肝癌が再発する患者が多いことも知られている。
【０００３】
現在のところＨＣＶ感染症に対する最も有効な治療方法として、ＰＥＧ化インターフェロン（ＰＥＧ−ＩＦＮ）とリバビリン（非特許文献１、２）の併用が知られている。しかし、インターフェロン治療が有効な患者は、全患者の１／３程度に限られており、特にＨＣＶ遺伝子型１ｂに対するインターフェロンの奏効率は非常に低い。従って、インターフェロンに代わる、もしくはそれと併用し得る抗ＨＣＶ薬の開発が望まれている。その中でも、抗炎症剤により炎症を抑える対症療法とは別に、患部である肝臓においてＨＣＶを減らすあるいは根絶させる薬剤の開発が強く望まれている。
【０００４】
ＨＣＶは、フラビウイルス科に属する一本鎖ＲＮＡウイルスである。ＲＮＡゲノムは少なくとも１０個のウイルスタンパク質を産生し、これには構造および非構造（ＮＳ）タンパク質が含まれる。前者はＨＣＶ粒子の形成に関与している。後者は、ＨＣＶゲノム複製において重要な役割を果たしている（非特許文献３）。一般的に、ＮＳタンパク質の複合体はゴルジおよび小胞体膜上の脂質ラフトに会合し、ここでＨＣＶ感染が起こることが容認されている（非特許文献４、５）。このように、脂質ラフト集合体が破壊されると、ＨＣＶ複製の抑制が起こる可能性がある。
【０００５】
本発明者らは、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン（以下、ＢＯ−６５３という）が低比重リポタンパク（ＬＤＬ）の酸化を抑制するため動脈硬化に有効であることを報告した（非特許文献６）。また、本発明者らは、ＢＯ−６５３とその類似化合物が、抗酸化作用及び脂質過酸化抑制作用を有するため、動脈硬化症の治療剤として有用であること、及び、心筋梗塞、脳卒中等の虚血性臓器障害の治療に有用であること（特許文献１、２）、血管内膜肥厚抑制剤として及び経皮的冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）後の再狭窄抑制剤として有用であること（特許文献３、４）、臓腎疾患の治療又は予防剤、及び臓器保存剤として有用であること（特許文献５、６）、粥状動脈硬化症又は黄色腫症の予防又は治療剤として有用であること（特許文献７、８、９）、急性冠症候群の発生頻度の低減又は症状の低減のための薬剤として有用であること（特許文献１０）、脂肪肝又は肝疾患を治療するための薬剤として有用であること（特許文献１１）を開示した。
【０００６】
しかしながら、ＢＯ−６５３及びその類似化合物およびインターフェロンの併用が、ＨＣＶ感染症の予防及び／又は治療剤として有用であることについては、これまでに開示も示唆もなされていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開平６−２０６８４２号公報
【特許文献２】米国特許第５５７４１７８号
【特許文献３】特開平９−１８８６１９号公報
【特許文献４】米国特許第６１０３７５３号
【特許文献５】特開平１０−７２４５８号公報
【特許文献６】米国特許第６１３３２７９号
【特許文献７】特開平１１−２１２３８号公報
【特許文献８】米国特許第６１５６７９３号
【特許文献９】米国特許第６４１７２２５号
【特許文献１０】ＷＯ０３／０１８００１
【特許文献１１】ＷＯ２００５／０３０１９８
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Glue, P. et al., Hepatology, 32, 647-653 (2000)
【非特許文献２】Reddy, K.R. et al., Hepatology, 33, 433-438 (2001)
【非特許文献３】Rosenberg, S., J Mol Biol, 313, 451-464(2001)
【非特許文献４】Aizaki, H. et al., Virology, 324, 450-461 (2004)
【非特許文献５】Gao, L. et al., J Virol, 78, 3480-3488 (2004)
【非特許文献６】Cynshi O, Kawabe Y, Suzuki T, Takashima Y, Kaise H, Nakamura M, Ohba Y, Kato Y, Tamura K, Hayasaka A, Higashida A, Sakaguchi H, Takeya M, Takahashi K, Inoue K, Noguchi N, Niki E, Kodama T. Antiatherogenic effects of the antioxidant BO-653 in three different animal models. Proc Natl Acad Sci U S A. 1998 95:10123-8
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、このような状況に鑑みてなされたものであり、その目的は、ベンゾフラン誘導体およびインターフェロンを組み合わせてなる、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬を提供することにある。また、ベンゾフラン誘導体およびインターフェロンを対象に投与する工程を含む、ＨＣＶ感染症を治療または予防する方法の提供も目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、具体的には以下を含む。
〔１〕下記一般式（１）：
（式中、Ｒ1 は、水素原子、アシル基、又はアリールアルコキシカルボニル基であり；Ｒ2 及びＲ3 は、独立して、置換若しくは未置換のアルキル基、置換若しくは未置換のアルケニル基、又は置換若しくは未置換のアルキニル基であるか、又はＲ2 とＲ3 とが一緒になってシクロアルキル基を形成してもよい。）で表される化合物およびインターフェロンを組み合わせてなる、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬。
【００１１】
〔２〕ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬が、配合剤であることを特徴とする〔１〕に記載の医薬。
【００１２】
〔３〕前記一般式（１）で表される化合物と、インターフェロンとが併用されることを特徴とする、〔１〕に記載の医薬。
【００１３】
〔４〕前記一般式（１）で表される化合物と、インターフェロンとが同時に、順次に、または別々に投与されることを特徴とする、〔３〕に記載の医薬。
【００１４】
〔５〕ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬が、前記一般式（１）で表される化合物を含有する医薬組成物およびインターフェロンを含有する医薬組成物を備えるキットである、〔３〕または〔４〕に記載の医薬。
【００１５】
〔６〕下記一般式（１）：
（式中、Ｒ1 は、水素原子、アシル基、又はアリールアルコキシカルボニル基であり；Ｒ2 及びＲ3 は、独立して、置換若しくは未置換のアルキル基、置換若しくは未置換のアルケニル基、又は置換若しくは未置換のアルキニル基であるか、又はＲ2 とＲ3 とが一緒になってシクロアルキル基を形成してもよい。）で表される化合物を有効成分として含有し、インターフェロンと併用することを特徴とする、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬。
【００１６】
〔７〕インターフェロンを有効成分として含有し、下記一般式（１）：
（式中、Ｒ1 は、水素原子、アシル基、又はアリールアルコキシカルボニル基であり；Ｒ2 及びＲ3 は、独立して、置換若しくは未置換のアルキル基、置換若しくは未置換のアルケニル基、又は置換若しくは未置換のアルキニル基であるか、又はＲ2 とＲ3 とが一緒になってシクロアルキル基を形成してもよい。）で表される化合物と併用することを特徴とする、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬。
【００１７】
〔８〕Ｒ1 が水素原子である、〔１〕〜〔７〕のいずれかに記載の医薬。
【００１８】
〔９〕Ｒ2 及びＲ3 が未置換のアルキル基である、〔１〕〜〔８〕のいずれかに記載の医薬。
【００１９】
〔１０〕未置換のアルキル基が、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基又はｎ−ヘプチル基である、〔９〕に記載の医薬。
【００２０】
〔１１〕式（１）で表される化合物が、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ブチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘキシル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、又は４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘプチル−２，３−ジヒドロベンゾフランである、〔１〕〜〔１０〕のいずれかに記載の医薬。
【００２１】
〔１２〕式（１）で表される化合物が４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフランである、〔１〕〜〔１１〕のいずれかに記載の医薬。
【００２２】
〔１３〕インターフェロンが、ペグ化インターフェロンである、〔１〕〜〔１２〕のいずれかに記載の医薬。
【００２３】
〔１４〕ＨＣＶ感染症が、Ｃ型肝炎、肝硬変、肝繊維化、または肝癌である、〔１〕〜〔１３〕のいずれかに記載の医薬。
【００２４】
〔１５〕下記一般式（１）：
（式中、Ｒ1 は、水素原子、アシル基、又はアリールアルコキシカルボニル基であり；Ｒ2 及びＲ3 は、独立して、置換若しくは未置換のアルキル基、置換若しくは未置換のアルケニル基、又は置換若しくは未置換のアルキニル基であるか、又はＲ2 とＲ3 とが一緒になってシクロアルキル基を形成してもよい。）で表される化合物およびインターフェロンを対象に投与する工程を含む、ＨＣＶ感染症を治療または予防する方法。
【００２５】
〔１６〕前記一般式（１）で表される化合物およびインターフェロンを、対象に同時に投与することを特徴とする、〔１５〕に記載の方法。
【００２６】
〔１７〕前記一般式（１）で表される化合物およびインターフェロンを、対象に別々に投与することを特徴とする、〔１５〕に記載の方法。
【００２７】
〔１８〕Ｒ1 が水素原子である、〔１５〕に記載の方法。
【００２８】
〔１９〕Ｒ2 及びＲ3 が未置換のアルキル基である、〔１５〕に記載の方法。
【００２９】
〔２０〕未置換のアルキル基が、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基又はｎ−ヘプチル基である、〔１９〕に記載の方法。
【００３０】
〔２１〕式（１）で表される化合物が、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ブチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘキシル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、又は４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘプチル−２，３−ジヒドロベンゾフランである、〔１５〕に記載の方法。
【００３１】
〔２２〕式（１）で表される化合物が４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフランである、〔１５〕に記載の方法。
【００３２】
〔２３〕インターフェロンが、ペグ化インターフェロンである、〔１５〕に記載の方法。
【００３３】
〔２４〕ＨＣＶ感染症が、Ｃ型肝炎、肝硬変、肝繊維化、または肝癌である、〔１５〕に記載の方法。
【００３４】
〔２５〕ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬を製造するための、下記一般式（１）：
（式中、Ｒ1 は、水素原子、アシル基、又はアリールアルコキシカルボニル基であり；Ｒ2 及びＲ3 は、独立して、置換若しくは未置換のアルキル基、置換若しくは未置換のアルケニル基、又は置換若しくは未置換のアルキニル基であるか、又はＲ2 とＲ3 とが一緒になってシクロアルキル基を形成してもよい。）で表される化合物およびインターフェロンの使用。
【００３５】
〔２６〕インターフェロンと併用してＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬を製造するための、下記一般式（１）：
（式中、Ｒ1 は、水素原子、アシル基、又はアリールアルコキシカルボニル基であり；Ｒ2 及びＲ3 は、独立して、置換若しくは未置換のアルキル基、置換若しくは未置換のアルケニル基、又は置換若しくは未置換のアルキニル基であるか、又はＲ2 とＲ3 とが一緒になってシクロアルキル基を形成してもよい。）で表される化合物の使用。
【００３６】
〔２７〕下記一般式（１）：
（式中、Ｒ1 は、水素原子、アシル基、又はアリールアルコキシカルボニル基であり；Ｒ2 及びＲ3 は、独立して、置換若しくは未置換のアルキル基、置換若しくは未置換のアルケニル基、又は置換若しくは未置換のアルキニル基であるか、又はＲ2 とＲ3 とが一緒になってシクロアルキル基を形成してもよい。）で表される化合物と併用してＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬を製造するための、インターフェロンの使用。
【００３７】
〔２８〕Ｒ1 が水素原子である、〔２５〕〜〔２７〕のいずれかに記載の使用。
【００３８】
〔２９〕Ｒ2 及びＲ3 が未置換のアルキル基である、〔２５〕〜〔２８〕のいずれかに記載の使用。
【００３９】
〔３０〕未置換のアルキル基が、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基又はｎ−ヘプチル基である、〔２９〕に記載の使用。
【００４０】
〔３１〕式（１）で表される化合物が、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ブチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘキシル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、又は４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘプチル−２，３−ジヒドロベンゾフランである、〔２５〕〜〔３０〕のいずれかに記載の使用。
【００４１】
〔３２〕式（１）で表される化合物が４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフランである、〔２５〕〜〔３１〕のいずれかに記載の使用。
【００４２】
〔３３〕インターフェロンが、ペグ化インターフェロンである、〔２５〕〜〔３２〕のいずれかに記載の使用。
【００４３】
〔３４〕ＨＣＶ感染症が、Ｃ型肝炎、肝硬変、肝繊維化、または肝癌である、〔２５〕〜〔３３〕のいずれかに記載の使用。
【発明の効果】
【００４４】
本発明者らは、一般式（１）で表される、特定のベンゾフラン誘導体とインターフェロンとを組み合わせて用いることにより、ＨＣＶの複製が相乗的に抑制されることを明らかにした。たとえば、これら二つの成分からなる医薬は、より安全性が高く、より有効性が高いＨＣＶ感染症を治療するための新規薬剤となりうる。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１】HCR（遺伝子型1b）に感染させた、ヒト肝臓を有するキメラマウスにおけるBO-653およびPEG-INの併用による抗ＨＣＶ効果を示すもので、具体的にはキメラマウスの血清中のＨＣＶ RNAレベルを示すグラフである。グラフ中、●はBO-653投与群、△はPEG-IFN投与群、○はBO-653＋PEG-IFN併用群、□は未投与群を示す。
【図２】HCR（遺伝子型1b）に感染させた、ヒト肝臓を有するキメラマウスにおけるBO-653およびPEG-INの併用による肝障害への影響を示すもので、具体的にはキメラマウスの血清中のヒトアルブミン濃度を示すグラフである。棒グラフ中、右下がり斜線の棒グラフは投与一日前、白の棒グラフは投与一日後、左下がり斜線の棒グラフは投与7又は8日後、黒の棒グラフは投与14日後の結果を示す。
【図３】ＨＣＶレプリコン保持細胞を用いた、ルシフェラーゼアッセイ法およびWST-8アッセイ法によるBO-653の抗ＨＣＶ作用を示すグラフである。Ｙ軸の左の目盛りはルシフェラーゼアッセイ法によるルシフェラーゼ活性（％）を示し、Ｙ軸の右の目盛りはWST-8アッセイ法による細胞生存性（％）を示し、グラフ中、○はルシフェラーゼ活性を示し、●は細胞生存性を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４６】
本発明において、「Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）」とは、Ｃ型肝炎を発症させる能力を持つウイルスの全てを意味する。ＨＣＶのサブタイプとしては、例えば遺伝子型（genotype）の違いに基づくものおよびセログループ（serogroup）の違いに基づくものが挙げられる。遺伝子型としては、例えば１ａ、１ｂ、２ａ、２ｂ、３ａ、３ｂ、４、５および６が挙げられるが、本発明において好ましい遺伝子型としては１ａおよび１ｂが、更に好ましい遺伝子型としては１ｂが挙げられる。セログループは抗原抗体反応に基づく血清学的グルーピングであり、その具体例としては、セログループ１、セログループ２、および前記の２グループのいずれにも該当しないセログループが挙げられる。また、genotype 1ａおよび１ｂはserogroup １に、genotype ２ａおよび２ｂはserogroup ２に、それぞれ対応させることができる。
【００４７】
本発明において、「ＨＣＶ感染症」とは、前記ＨＣＶの生体（ヒトおよびチンパンジーなどのサルを含む）への感染によって引き起こされる症状の全てを意味し、具体例としては、Ｃ型肝炎、肝硬変、肝繊維化、肝癌などが挙げられる。Ｃ型肝炎は、慢性肝炎、急性肝炎、劇症肝炎等に分類することができ、また、これらの各々の肝炎におけるウイルス血症もＨＣＶ感染症に含まれる。生体がＨＣＶ感染症であるか否かは、例えば、血清中のＨＣＶ抗体量の測定、血清中のＨＣＶのコア抗原の検出および血清中のＨＣＶのＲＮＡの検出、ならびにこれらの組み合わせにより判断することができる。
【００４８】
本発明において、「一般式（１）で表される化合物およびインターフェロンを組み合わせてなる、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬」とは、一般式（１）で表される化合物およびインターフェロンを、ＨＣＶ感染症の治療または予防において同時に、別々に、又は順次に投与するために組み合わせた医薬であればよい。本発明の医薬は、一般式（１）で表される化合物とインターフェロンを同一医薬組成物中に含有してもよい（すなわち、配合剤であってもよい）し、また一般式（１）で表される化合物とインターフェロンを別々の医薬組成物に含有するものであってもよい。なお、配合剤中の一般式（１）で表される化合物とインターフェロンとの配合割合は、予め一定の割合とすることも、症状の軽重や医師の判断などにより、投与時に任意の割合に変更することもできる。また、本発明の医薬は、一般式（１）で表される化合物を含有する医薬組成物とインターフェロンを含有する医薬組成物とをキットとしたものであってもよい。
【００４９】
ここで、上記の「組み合わせてなる、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬」において、一般式（１）で表される化合物とインターフェロンが別々の医薬組成物に含有される場合には、２個の別個の製剤の剤型は同じであってもよいし、別々であってもよい。例えば、いずれか一方又は両方が、非経口製剤、注射剤、点滴剤、静脈内点滴剤であってもよい。
上述したような、ＨＣＶ感染症の治療または予防において用いる上記組み合わせてなる医薬に対して、さらに１個以上の製剤を組み合わせたものも、上記「組み合わせてなる、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬」に含まれる。
【００５０】
また、本発明は、一般式（１）で表される化合物を有効成分として含有する、インターフェロンと併用することを特徴とする、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬に関する。本医薬をインターフェロンと併用する際には、インターフェロンと同時に投与してもよいし、インターフェロンの投与前または投与後に本医薬を投与してもよい。
【００５１】
また、本発明は、インターフェロンを有効成分として含有する、一般式（１）で表される化合物と併用することを特徴とする、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬に関する。インターフェロンを本医薬と併用する際には、本医薬と同時に投与してもよいし、本医薬の投与前または投与後にインターフェロンを投与してもよい。
【００５２】
本発明で用いる前記一般式（１）の化合物のＲ1 は、水素原子、アシル基又はアリールアルコキシカルボニル基である。好ましいアシル基は、１〜１０の炭素原子を有するアシル基であり、その例には、ホルミル、アセチル、プロピオニル、及びベンゾイル基が含まれる。好ましいアリールアルキルオキシカルボニル基は、７〜１１の炭素原子を有するアリールアルキルオキシカルボニル基であり、その例には、ベンジルオキシカルボニル及びナフチルメチルオキシカルボニル基が含まれる。
【００５３】
好ましいＲ1 は、水素原子及びアシル基であり、水素原子及びアセチル基がより好ましく、特に水素原子が好ましい。
【００５４】
一般式（１）の化合物のＲ2 及びＲ3 は、独立して、置換若しくは未置換のアルキル基、置換若しくは未置換のアルケニル基、又は置換若しくは未置換のアルキニル基である。
【００５５】
好ましいアルキル基は、１〜２０の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖状のアルキル基であり、その例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ｓｅｃ−ペンチル、ｔ−ペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル、エチルブチル、ｎ−ヘプチル、イソヘプチル、エチルペンチル、ｎ−オクチル、エチルヘキシル、プロピルペンチル、ノニル、デシル、ペンタデシル、及びステアリル基が含まれる。より好ましくは、１〜１０の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖状のアルキル基であり、特に３〜８の炭素原子を有する直鎖状のアルキル基が好ましい。
【００５６】
好ましいアルケニル基は、２〜２０の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖状のアルケニル基であり、その例には、エテニル、プロペニル、イソプロペニル、ブテニル、イソブテニル、ペンテニル、イソペンテニル、ヘキセニル、イソヘキセニル、エチルブテニル、ヘプテニル、イソヘプテニル、エチルペンテニル、オクテニル、ノネニル、デセニル、及びペンタデセニル基が含まれる。より好ましくは、２〜１０の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖状のアルケニル基であり、特に３〜８の炭素原子を有する直鎖状のアルケニル基が好ましい。
【００５７】
好ましいアルキニル基は、２〜２０、好ましくは２〜１０の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖状のアルキニル基であり、特に３〜８の炭素原子を有する直鎖状のアルキニル基が好ましい。その例には、アルケニル基について挙げた例に対応するアルキニル基が含まれる。
【００５８】
Ｒ2 とＲ3 とは、一緒になって、５〜１０の炭素原子を有するシクロアルキル基を形成してもよい。好ましいシクロアルキル基の例には、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、及びシクロデシルが含まれる。
【００５９】
Ｒ2 及びＲ3 がアルキル基、アルケニル基、又はアルキニル基である場合に有することができる置換基の例には、ハロゲン、低級アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ、及びトリフルオロメチル基が含まれる。
【００６０】
好ましいＲ2 及びＲ3 は、３〜８の炭素原子を有する直鎖状の未置換アルキル基であり、Ｒ2 及びＲ3 の双方が、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基又はｎ−ヘプチル基である場合が特に好ましい。Ｒ2 及びＲ3 の双方がｎ−ペンチル基である場合が最も好ましい。
【００６１】
好ましい式（１）の化合物としては：
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジエチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−プロピル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−イソプロピル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ブチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｓ−ブチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｔ−ブチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｔ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−イソペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ネオペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘキシル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘプチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−オクチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ノニル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；及び
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−デシル−２，３−ジヒドロベンゾフラン
が挙げられる。
【００６２】
特に好ましい式（１）の化合物としては、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ブチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘキシル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、及び４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘプチル−２，３−ジヒドロベンゾフランが挙げられ、以下の式で表される４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン（ＢＯ−６５３）が最も好ましい。
【００６３】
本発明で用いられる式（１）で表される化合物は、たとえば、ＷＯ２００５／０３０１９８に記載されているように、特開平６−２０６８４２号公報、それに対応する米国特許第５５７４１７８号、ＷＯ０２／０６２６３、それに対応するＥＰ１３０４３２８Ａ、のほか、Tamura K, Kato Y, Ishikawa A, Kato Y, Himori M, Yoshida M, Takashima Y, Suzuki T, Kawabe Y, Cynshi O, Kodama T, Niki E, Shimizu M. Design and synthesis of 4,6-di-tert-butyl-2,3-dihydro-5-benzofuranols as a novel series of antiatherogenic antioxidants. J Med Chem. 2003 46:3083-93等に記載の方法によって合成することができる。
【００６４】
本発明において、「インターフェロン」とは、ウイルス、二本鎖RNA、レクチンなどによって動物細胞から誘発される抗ウイルス作用をもったタンパク質または糖タンパク質の総称を意味する。抗ウイルス作用の他、細胞増殖抑制作用、免疫調節作用を有する。産生細胞、特異的受容体との結合能、生物・物理化学的性質から数種のタイプに分類され、主要なものとしてはα、β、γがあるが、このほか、ＩＦＮω、ＩＦＮτの存在が知られている。さらにインターフェロンαには、２０種以上のサブタイプの存在が知られている。現在、天然型のみならず、ＰＥＧ化、コンセンサスインターフェロン等の各種遺伝子組み換え型の製剤が開発・上市されている。
【００６５】
本発明におけるインターフェロンは、上記タイプのいずれでもよいが、好ましくはαまたはγである。また、本発明におけるインターフェロンは、一般式（１）で表される化合物との併用でＨＣＶ増殖抑制能を増強する限り、天然型、人工的に変異された遺伝子組み換え型、天然に存在する変異体、融合タンパク質、又はこれらの断片などのいずれであってもよい。また、本発明のインターフェロンはＰＥＧ（ポリエチレングリコール）化されていてもよい（PEG-IFN）。インターフェロンのＰＥＧ化は当業者に公知の方法（特許２９８０５６９号）により行うことができる。ＰＥＧ化されたインターフェロンとしては、例えば、ペグインターフェロン−α−２ａ（ペガシス（登録商標））、ペグインターフェロンα−２ｂ（ペグイントロン（登録商標））が挙げられる。本願実施例１で用いているＰＥＧ−ＩＦＮは、ペグインターフェロン−α−２ａを指す。さらに、本発明のインターフェロンは、アルブミンと結合したインターフェロンであってもよい。アルブミンと結合したインターフェロンとしては、例えば、アルブインターフェロンα−２ｂ（アルブフェロン（登録商標））が挙げられる。
【００６６】
本発明におけるインターフェロンの由来に特に制限はなく、例えば、ヒト、チンパンジー、オランウータン、イヌ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ロバ、ブタ、ネコ、マウス、モルモット、ラット、ウサギなどを由来とすることができるが、これらに限らずその他の哺乳動物を由来とすることができる。好ましくはヒト由来のインターフェロンである。
【００６７】
ヒトインターフェロンα又はγのアミノ酸配列は公知であり、例えば、インターフェロンαであればGenBank:NM_024013に記載のアミノ酸配列を用いることができ、インターフェロンγであればGenBank:NM_000619に記載のアミノ酸配列を用いることができる。インターフェロンαのアミノ酸配列を配列番号：１に、塩基配列を配列番号：２に、インターフェロンγのアミノ酸配列を配列番号：３に、同γの塩基配列を配列番号：４に示す。上記インターフェロンは、当業者に周知の方法によって調製可能である。例えば、ヒト由来のインターフェロン産生細胞から周知手段によりｍＲＮＡを調製してｃＤＮＡライブラリーを作製し、該ｃＤＮＡライブラリーの中から、配列番号：２または配列番号：４に記載の塩基配列の全部または一部の塩基配列からなるプローブとストリンジェントな条件でハイブリダイズするｃＤＮＡを選択し、該ｃＤＮＡを適当な宿主・ベクター系を用いて発現させ、得られたタンパク質を精製することにより調製可能である。宿主・ベクター系は、後述の、抗体の製造に使用可能な宿主・ベクター系の例の中から使用してもよい。または、配列番号：２または配列番号：４に記載の塩基配列に基づいてプライマーを設計し、ヒト由来のインターフェロン産生細胞から調製したｍＲＮＡを鋳型にして上記プライマーを用いてＲＴ−ＰＣＲを実施し、得られたｃＤＮＡを発現させて調製することもできる。
【００６８】
上記ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、当業者であれば、適宜選択することができる。一例を示せば、２５％ホルムアミド、より厳しい条件では５０％ホルムアミド、４×ＳＳＣ、５０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ ｐＨ７．０、１０×デンハルト溶液、２０μｇ／ｍｌ変性サケ精子ＤＮＡを含むハイブリダイゼーション溶液中、４２℃で一晩プレハイブリダイゼーションを行った後、標識したプローブを添加し、４２℃で一晩保温することによりハイブリダイゼーションを行う。その後の洗浄における洗浄液および温度条件は、「１ｘＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳ、３７℃」程度で、より厳しい条件としては「０．５ｘＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳ、４２℃」程度で、さらに厳しい条件としては「０．２ｘＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳ、６５℃」程度で実施することができる。このようにハイブリダイゼーションの洗浄の条件が厳しくなるほどプローブ配列と高い相同性を有するポリヌクレオチドの単離を期待しうる。但し、上記ＳＳＣ、ＳＤＳおよび温度の条件の組み合わせは例示であり、当業者であれば、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーを決定する上記若しくは他の要素（例えば、プローブ濃度、プローブの長さ、ハイブリダイゼーション反応時間など）を適宜組み合わせることにより、上記と同様のストリンジェンシーを実現することが可能である。
【００６９】
このようなハイブリダイゼーション技術を利用して単離されるポリヌクレオチドがコードするポリペプチドは、通常、本発明者らにより同定されたポリペプチドとアミノ酸配列において高い相同性を有する。高い相同性とは、少なくとも４０％以上、好ましくは６０％以上、さらに好ましくは８０％以上、さらに好ましくは９０％以上、さらに好ましくは少なくとも９５％以上、さらに好ましくは少なくとも９７％以上（例えば、９８から９９％）の配列の相同性を指す。アミノ酸配列の同一性は、例えば、Karlin and Altschul によるアルゴリズムBLAST (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268, 1990、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877, 1993)によって決定することができる。このアルゴリズムに基づいて、ＢＬＡＳＴＸと呼ばれるプログラムが開発されている(Altschul et al. J. Mol. Biol.215:403-410, 1990)。ＢＬＡＳＴＸによってアミノ酸配列を解析する場合には、パラメーターはたとえばｓｃｏｒｅ＝５０、ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ＝３とする。ＢＬＡＳＴとＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを用いる場合には、各プログラムのデフォルトパラメーターを用いる。これらの解析方法の具体的な手法は公知である(http://www.ncbi.nlm.nih.gov.)。
【００７０】
また上記配列のインターフェロンに限らず、上記配列のインターフェロンに類似するポリペプチドも、一般式（１）で表される化合物との併用でＨＣＶ増殖抑制能を増強する限り、本発明において好適に用いることができる。このようなポリペプチドとして、配列番号：１記載のアミノ酸配列において、１又は複数のアミノ酸が欠失、置換、付加または／および挿入されたアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、一般式（１）で表される化合物との併用で高いＨＣＶ増殖抑制能を有するポリペプチド、配列番号：３記載のアミノ酸配列において、１又は複数のアミノ酸が欠失、置換、付加または／および挿入されたアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、一般式（１）で表される化合物との併用で高いＨＣＶ増殖抑制能を有するポリペプチド、配列番号：２記載の塩基配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズする塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、一般式（１）で表される化合物との併用で高いＨＣＶ増殖抑制能を有するポリペプチド、配列番号：４記載の塩基配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズする塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、一般式（１）で表される化合物との併用で高いＨＣＶ増殖抑制能を有するポリペプチドを挙げることができる。
【００７１】
このようなポリペプチドは、当業者に周知の方法によって調製することができる。例えば、配列番号：２または４に記載の塩基配列の全部または一部をプローブとし、インターフェロン産生細胞から調製したｃＤＮＡライブラリーの中からハイブリダイズするクローンを選択し、発現させることで調製することができる。または、配列番号：２または４記載の塩基配列に、ＰＣＲによる変異導入法やカセット変異法などの当業者に周知の遺伝子改変方法を施し、部位特異的にまたはランダムに変異を導入することによって、調製することができる。または配列番号：２または４記載の塩基配列に変異を導入した配列を、市販の核酸合成装置によって合成することも可能である。
なお、本発明の一般式（１）で表される化合物およびインターフェロンを組み合わせてなる、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬に、さらにリバビリンを組み合わせてもよい。
【００７２】
本明細書において「治療」という記載は、本発明の薬物を被験者に投与することによって、ＨＣＶを消滅あるいは減少させること、さらなるＨＣＶの広がりを抑制すること、ＨＣＶの感染による症状を軽減することを意味し、具体例としては、ＨＣＶの排除、肝炎の沈静化、ならびに肝炎から肝硬変、肝繊維化および肝癌への進展の阻止および軽減が挙げられる。また「予防」という記載は、ＨＣＶが感染する前に、被験者に投与され、ＨＣＶの感染を防いだり、増殖を抑制させることを意味する。
【００７３】
本発明において一般式（１）で表される化合物とインターフェロンとの併用とは、一般式（１）で表される化合物とインターフェロンとを共に投与または使用（以下、単に「投与」と記載する。）することを意味し、投与の順番や投与間隔などで限定されるものではない。また、本発明の化合物とインターフェロンとを組み合わせたキットとして実施してもよい。さらに、一般式（１）で表される化合物とインターフェロンとを併用する場合は、いずれかを単独で用いる場合に比べて、所望により各々の投与量を少なくすることも可能である。
【００７４】
一般式（１）で表される化合物とインターフェロンの投与の順番は、該化合物の投与後にインターフェロンを投与、一般式（１）で表される化合物とインターフェロンを同時に投与、インターフェロン投与後に一般式（１）で表される化合物を投与、のいずれの順番でもよい。
【００７５】
一般式（１）で表される化合物とインターフェロンを別々に投与する場合、一般式（１）で表される化合物とインターフェロンの投与間隔は特に限定されず、投与経路や剤形等の要因を考慮して設定することができる。あえて投与間隔の一例を挙げるとすれば、通常、０時間〜１６８時間であり、好ましくは０時間〜７２時間であり、さらに好ましくは０時間〜２４時間であり、さらに好ましくは０時間〜１２時間である。
【００７６】
なお、インターフェロンの投与間隔としては、限定されるものではないが、通常１日に１回〜１月に１回であり、好ましくは週１回である。また、一般式（１）で表される化合物の投与間隔としては、限定されるものではないが、通常１日に１回〜２月に１回、好ましくは１日に１回〜１月に１回である。
また、一般式（１）で表される化合物とインターフェロンを別々に投与する場合、投与方法や１日あたりの投与回数は同じでも異なっていてもよい。さらに、一般式（１）で表される化合物とインターフェロンの重量比も特に限定されない。
【００７７】
一般式（１）で表される化合物は、そのまま、又は、その薬理学的に許容される塩として医薬に使用することができる。上記塩としては薬理学的に許容されるものであれば特に限定されず、例えば、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、臭化水素酸などの鉱酸との塩；酢酸、酒石酸、乳酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、ショウノウスルホン酸などの有機酸との塩；ナトリウム、カリウム、カルシウムなどのアルカリ金属又はアルカリ土類金属などとの塩などを挙げることができる。
【００７８】
一般式（１）で表される化合物または薬理学的に許容される塩は、溶媒付加形態（溶媒和物）、結晶形態（多系）を含んでもよい。
【００７９】
上記医薬に含まれる有効成分化合物の量は、特に限定されず広範囲に適宜選択されるが、例えば、０．１〜９９．５重量％、好ましくは０．５〜９０重量％である。
【００８０】
一般式（１）で表される化合物または薬理学的に許容される塩、および／またはインターフェロンを、常法に従って主薬として、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などの医薬の製剤技術分野において通常使用し得る既知の補助剤を用いて製剤化することができる。錠剤の形態に成形するに際しては、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えば乳糖、白糖、塩化ナトリウム、グルコース、尿素、澱粉、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸などの賦形剤；水、エタノール、プロパノール、単シロップ、グルコース液、澱粉液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドンなどの結合剤；乾燥澱粉、アルギン酸ナトリウム、寒天末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、澱粉、乳糖などの崩壊剤；白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油などの崩壊抑制剤；第４級アンモニウム塩類、ラウリル硫酸ナトリウムなどの吸収促進剤；グリセリン、澱粉などの保湿剤；澱粉、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸などの吸着剤；精製タルク、ステアリン酸塩、硼酸末、ポリエチレングリコールなどの潤沢剤などが例示できる。
【００８１】
さらに錠剤は、必要に応じ、通常の剤皮を施した錠剤、例えば、糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠あるいは二重錠、多層錠とすることができる。丸剤の形態に成形するに際しては、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えばグルコース、乳糖、カカオバター、澱粉、硬化植物油、カオリン、タルクなどの賦形剤；アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノールなどの結合剤；ラミナラン寒天などの崩壊剤などが例示できる。坐剤の形態に成形するに際しては、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えばポリエチレングリコール、カカオバター、高級アルコール、高級アルコールのエステル類、ゼラチン、半合成グリセリドなどを挙げることができる。注射剤として調製される場合には、液剤および懸濁剤は殺菌され、かつ血液と等張であるのが好ましく、これら液剤、乳剤および懸濁剤の形態に成形するに際しては、希釈剤としてこの分野で慣用されているものをすべて使用でき、例えば、水、エタノール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類などを挙げることができる。なお、この場合、等張性の溶液を調製するのに充分な量の食塩、グルコース、あるいはグリセリンを医薬製剤中に含有せしめてもよく、また通常の溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤などを添加してもよい。さらに必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤などや他の医薬品を含有することもできる。
【００８２】
上記医薬は、投与単位形態で投与することが好ましく、経口投与、組織内投与（皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与など）、局所投与（経皮投与など）又は経直腸的に投与することができる。上記医薬は、これらの投与方法に適した剤型で投与されることは当然である。
【００８３】
一般式（１）で表される化合物又はその薬理学的に許容され得る塩、およびインターフェロンを医薬として投与する場合、その用量は、年齢、体重などの患者の状態、投与経路、病気の性質と程度などを考慮した上で調整することが望ましいが、通常は、ヒトについては、成人に対して本発明の有効成分量として、一日当たり、０．００１〜２０００ｍｇの範囲である。上記範囲未満の用量で足りる場合もあるが、逆に上記範囲を超える用量を必要とする場合もある。多量に投与するときは、一日数回に分割して投与することが望ましい。
【００８４】
上記経口投与は、固形、粉末又は液状の用量単位で行うことができ、例えば、末剤、散剤、錠剤、糖衣剤、カプセル剤、ドロップ剤、舌下剤、その他の剤型などにより行うことができる。
【００８５】
上記組織内投与は、例えば、溶液や懸濁剤などの皮下、筋肉内又は静脈内注射用の液状用量単位形態を用いることによって行うことができる。これらのものは、一般式（１）で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩、および／またはインターフェロンの一定量を、例えば、水性や油性の媒体などの注射目的に適合する非毒性の液状担体に懸濁又は溶解し、ついで上記懸濁液又は溶液を滅菌することにより製造される。
【００８６】
上記局所投与（経皮投与など）は、例えば、液剤、クリーム剤、粉末剤、ペースト剤、ゲル剤、軟膏剤などの外用製剤の形態を用いることによって行うことができる。これらのものは、一般式（１）で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩、および／またはインターフェロンの一定量を、外用製剤の目的に適合する香料、着色料、充填剤、界面活性剤、保湿剤、皮膚軟化剤、ゲル化剤、担体、保存剤、安定剤などのうちの一種以上と組み合わせることにより製造される。
【００８７】
上記経直腸的投与は、一般式（１）で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩、および／またはインターフェロンの一定量を、例えば、パルミチン酸ミリスチルエステルなどの高級エステル類、ポリエチレングリコール、カカオ脂、これらの混合物などからなる低融点固体に混入した座剤などを用いて行うことができる。
【００８８】
上記投与は、例えば、溶液や懸濁剤などの皮下、筋肉内又は静脈内注射用の液状用量単位形態を用いることによって行うことができる。これらのものは、一般式（１）で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩、および／またはインターフェロンの一定量を、例えば、水性や油性の媒体などの注射の目的に適合する非毒性の液状担体に懸濁又は溶解し、ついで上記懸濁液又は溶液を滅菌することにより製造される。
なお、本明細書において引用された全ての先行技術文献は、参照として本明細書に組み入れられる。
【実施例】
【００８９】
以下、本発明の一態様を実施例によりさらに具体的に説明する。
【００９０】
[実施例１] ＨＣＶに感染したキメラマウスにおけるＢＯ−６５３及びＰＥＧ−ＩＦＮの抗ＨＣＶ効果
【００９１】
ＨＣＲ６（遺伝子型１ｂ）に感染させた、ヒト肝臓を有するキメラマウスを用いて、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン（ＢＯ−６５３）の阻害能を調べた。キメラマウスは、購入したもの（株式会社フェニックスバイオ、広島、日本）を用いた。
【００９２】
具体的には、表１に従ってＢＯ−６５３及び／またはＰＥＧ−ＩＦＮ（Chugai, Tokyo, Japan）を、ＨＣＶ遺伝子型１ｂ（HCR6、アクセッション番号AY045702）感染マウスに経口投与または皮下注射によって投与し、血液を採取した。
【００９３】
〔表１〕ＨＣＶ遺伝子型１ｂ感染キメラマウスへの投与スケジュール
【００９４】
表１において、Ｂ、Ｉ、ならびにＢＯは各操作が必要に応じて行われたこと、及び試薬の投与が０日目から始まったことを示している。ＰＥＧ−ＩＦＮを３０μｇ／ｋｇで注射した。経口投与したＢＯ−６５３の量は、２０００ｍｇ／ｋｇ（ＢＯ）とした。
【００９５】
次に、総RNAを、ＡＧＰＣ法を用いてキメラマウスから採取した血清１μｌから精製した。ＨＣＶ ＲＮＡを、当業者に公知の方法(Takeuchi, T. et al. Gasteroenterology, 116, 636-642 (1999))によって、リアルタイムPCRによって定量した。
【００９６】
その結果、臨床治療で使用される量の２０倍量のＰＥＧ−ＩＦＮ（30μg/kg/週2回）を投与した群では、投与前（1.3 x 107コピー / ml血清）から投与後８日で約１／３０量（4.6 x 105コピー / ml血清）、投与後１４日では約１／４５量（2.8 x 105コピー / ml血清）に減少した。一方、ＢＯ−６５３ 単独投与群においては、有意なＨＣＶ ＲＮＡ量の低下は認められなかったが、ＰＥＧ−ＩＦＮとの併用治療群では、投与後８日では約１／３０量（3.1 x 105コピー / ml血清）、投与後１４日では約１／１８０量（5.4 x 104コピー / ml血清）まで減少した（図１）。
【００９７】
同時に、本発明者らは、ヒトアルブミン（h-Alb）濃度をモニターした。ヒトアルブミン濃度は、Ａｌｂ−ＩＩキット（Eiken Chemical, Tokyo, Japan）を用いて製造元の説明書にしたがって血清２μｌにおいて測定した。いずれの投与群においても顕著な低下は認められなかった（図２）。
【００９８】
これらの結果より、ＨＣＶ感染キメラマウスにおいて、ＢＯ−６５３単独投与では顕著なウイルス量の減少は見られなかったが、ＰＥＧ−ＩＦＮと併用することによって、投与１４日後にはＰＥＧ−ＩＦＮ単独投与群に比べてウイルス量の有意な減少が認められた（＊ｐ<０．０５）。また、いずれの投与群においても顕著な肝障害は観察されなかった。
【００９９】
［実施例２］BO-653のＨＣＶレプリコン複製阻害作用
実験開始前日にルシフェラーゼ遺伝子を含むＨＣＶレプリコン保持細胞Ｈｕｈ７＃３−１を９６ウェル白色マルチウェルプレート（ルシフェラーゼ用）と９６ウェルマルチウェルプレート（毒性試験用）のそれぞれに４５００個／ウェルで撒いた。このとき、５％ＦＣＳを含むＤＭＥＭ ＧｌｕｔａＭａｘＩ(DMEM5)培地を使用した。翌日約20時間後、DMEM5で希釈したBO-653を終濃度が０．２、０．５、１、４、１２、３７、１１１、３３３、１０００マイクロモルになるように各ウェルに加えた。５％ＣＯ２、３７℃７２時間後、ルシフェラーゼアッセイおよびＷＳＴ−８による細胞毒性試験を行った。ＢＯ−６５３を加えないものを陰性コントロールとした。
【０１００】
ルシフェラーゼアッセイ
Steady-Glo Lucifease Assay BufferTMとSubstrateTM (Promega, cat#E2520)を室温に戻した。SubstrateにBufferを加えてよく混ぜた。
プレートをインキュベータから取り出し、３０分間以上経過してからこれをマルチチャンネルピペットで１ウェル当たり１００マイクロリットルを加えて３〜４回ピペッティングした。５分以上放置後、EnVisionTM 2103 Multilabel Readerにて測定し、化学発光量（Chemiluminescence）から活性を求めた。ＢＯ−６５３のＩＣ５０（５０％阻害濃度）は３４マイクロモルであった。
【０１０１】
WST-8アッセイ
Cell Counting Kit-8(DOJINDO Laboratories, cat# 341-08001)を用いて細胞毒性を評価した。培養したプレートをインキュベータから取り出し培地を捨てた。これにＰＢＳで１１倍に希釈したCell Counting Kit-8を１ウェル当たり１１０μＬ加えて６０分間３７℃で培養した。培養後プレートを取り出し、プレート振とう器で１０秒間振とうした。プレートの吸光度をEnVisionTM 2103 Multilabel Reader(測定波長450nm, 対照波長 590nm)にて測定し、ＢＯ−６５３を入れないウェルを１００％として、各薬剤の細胞毒性を求めた。ＢＯ−６５３の細胞毒性は認められなかった（ＩＣ５０>１０００マイクロモル）。
【０１０２】
以上の結果を図３および表２に示す。この結果より、一般式（１）の化合物が、単独（単剤）として用いても、ＨＣＶ感染症の治療剤または予防剤として有用であることが確認された。
〔表２〕
【０１０３】
［参考例１］Ｍｅｔ−ＢＯのＨＣＶレプリコン複製阻害作用
上記実施例２において、ＢＯ−６５３を用いる代わりに、Free Radical Research, 2006; 40(1): 21-30に記載の４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−メトキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンソフラン(Met-BO)を用いて、ＨＣＶレプリコン複製阻害作用を調べた。
すなわち、実験開始前日にルシフェラーゼ遺伝子を含むＨＣＶレプリコン保持細胞Ｈｕｈ７＃３−１を９６ウェル白色マルチウェルプレート（ルシフェラーゼ用）と９６ウェルマルチウェルプレート（毒性試験用）のそれぞれに４５００個／ウェルで撒いた。このとき、５％ＦＣＳを含むDMEM GlutaMaxI(DMEM5)培地を使用した。翌日約２０時間後、ＤＭＥＭ５で希釈したＭｅｔ−ＢＯを終濃度が０．２、０．５、１、４、１２、３７、１１１、３３３、１０００マイクロモルになるように各ウェルに加えた。５％ＣＯ２、３７℃７２時間後、ルシフェラーゼアッセイおよびＷＳＴ−８による細胞毒性試験を行った。Ｍｅｔ−ＢＯを加えないものを陰性コントロールとした。
【０１０４】
ルシフェラーゼアッセイ
Steady-Glo Lucifease Assay BufferTMとSubstrateTM (Promega, cat#E2520)を室温に戻した。SubstrateにBufferを加えてよく混ぜた。
プレートをインキュベータから取り出し、３０分間以上経過してからこれをマルチチャンネルピペットで１ウェル当たり１００マイクロリットルを加えて３〜４回ピペッティングした。５分以上放置後、EnVisionTM 2103 Multilabel Readerにて測定し、化学発光量（Chemiluminescence）から活性を求めた。Ｍｅｔ−ＢＯのＩＣ５０（５０％阻害濃度）は６０マイクロモルであった。
【０１０５】
ＷＳＴ−８アッセイ
Cell Counting Kit-8(DOJINDO Laboratories, cat# 341-08001)を用いて細胞毒性を評価した。培養したプレートをインキュベータから取り出し培地を捨てた。これにＰＢＳで１１倍に希釈したCell Counting Kit-8を1ウェル当たり１１０μＬ加えて６０分間３７℃で培養した。培養後プレートを取り出し、プレート振とう器で１０秒間振とうした。プレートの吸光度をEnVisionTM 2103 Multilabel Reader(測定波長４５０ｎｍ，対照波長５９０ｎｍ)にて測定し、Ｍｅｔ−ＢＯを入れないウェルを１００％として、各薬剤の細胞毒性を求めた。Ｍｅｔ−ＢＯの細胞毒性は認められなかった（ＩＣ５０>１０００マイクロモル）。
以上の結果を表３に示す。この結果より、Ｍｅｔ−ＢＯが、ＨＣＶ感染症の治療剤または予防剤として有用であることが確認された。
〔表３〕
【産業上の利用可能性】
【０１０６】
本発明により、ＨＣＶ感染症の予防および／または治療のための医薬ならびに方法が提供される。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ベンゾフラン誘導体およびインターフェロンを用いる、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬、およびその利用に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症は通常、慢性肝炎を引き起こし、しばしば肝硬変または肝細胞癌に至る。保因者の数は、現在では全世界の人口の約３％（〜１億７０００万人）に上る。ＨＣＶは、いまだ明らかでない原因により宿主の免疫機構を回避するため、免疫機構の発達した大人に感染した場合でも持続感染が成立することが多く、慢性肝炎、肝硬変、肝癌へと進行し、手術により摘出しても、非癌部で引き続き起こる炎症のため肝癌が再発する患者が多いことも知られている。
【０００３】
現在のところＨＣＶ感染症に対する最も有効な治療方法として、ＰＥＧ化インターフェロン（ＰＥＧ−ＩＦＮ）とリバビリン（非特許文献１、２）の併用が知られている。しかし、インターフェロン治療が有効な患者は、全患者の１／３程度に限られており、特にＨＣＶ遺伝子型１ｂに対するインターフェロンの奏効率は非常に低い。従って、インターフェロンに代わる、もしくはそれと併用し得る抗ＨＣＶ薬の開発が望まれている。その中でも、抗炎症剤により炎症を抑える対症療法とは別に、患部である肝臓においてＨＣＶを減らすあるいは根絶させる薬剤の開発が強く望まれている。
【０００４】
ＨＣＶは、フラビウイルス科に属する一本鎖ＲＮＡウイルスである。ＲＮＡゲノムは少なくとも１０個のウイルスタンパク質を産生し、これには構造および非構造（ＮＳ）タンパク質が含まれる。前者はＨＣＶ粒子の形成に関与している。後者は、ＨＣＶゲノム複製において重要な役割を果たしている（非特許文献３）。一般的に、ＮＳタンパク質の複合体はゴルジおよび小胞体膜上の脂質ラフトに会合し、ここでＨＣＶ感染が起こることが容認されている（非特許文献４、５）。このように、脂質ラフト集合体が破壊されると、ＨＣＶ複製の抑制が起こる可能性がある。
【０００５】
本発明者らは、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン（以下、ＢＯ−６５３という）が低比重リポタンパク（ＬＤＬ）の酸化を抑制するため動脈硬化に有効であることを報告した（非特許文献６）。また、本発明者らは、ＢＯ−６５３とその類似化合物が、抗酸化作用及び脂質過酸化抑制作用を有するため、動脈硬化症の治療剤として有用であること、及び、心筋梗塞、脳卒中等の虚血性臓器障害の治療に有用であること（特許文献１、２）、血管内膜肥厚抑制剤として及び経皮的冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）後の再狭窄抑制剤として有用であること（特許文献３、４）、臓腎疾患の治療又は予防剤、及び臓器保存剤として有用であること（特許文献５、６）、粥状動脈硬化症又は黄色腫症の予防又は治療剤として有用であること（特許文献７、８、９）、急性冠症候群の発生頻度の低減又は症状の低減のための薬剤として有用であること（特許文献１０）、脂肪肝又は肝疾患を治療するための薬剤として有用であること（特許文献１１）を開示した。
【０００６】
しかしながら、ＢＯ−６５３及びその類似化合物およびインターフェロンの併用が、ＨＣＶ感染症の予防及び／又は治療剤として有用であることについては、これまでに開示も示唆もなされていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開平６−２０６８４２号公報
【特許文献２】米国特許第５５７４１７８号
【特許文献３】特開平９−１８８６１９号公報
【特許文献４】米国特許第６１０３７５３号
【特許文献５】特開平１０−７２４５８号公報
【特許文献６】米国特許第６１３３２７９号
【特許文献７】特開平１１−２１２３８号公報
【特許文献８】米国特許第６１５６７９３号
【特許文献９】米国特許第６４１７２２５号
【特許文献１０】ＷＯ０３／０１８００１
【特許文献１１】ＷＯ２００５／０３０１９８
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Glue, P. et al., Hepatology, 32, 647-653 (2000)
【非特許文献２】Reddy, K.R. et al., Hepatology, 33, 433-438 (2001)
【非特許文献３】Rosenberg, S., J Mol Biol, 313, 451-464(2001)
【非特許文献４】Aizaki, H. et al., Virology, 324, 450-461 (2004)
【非特許文献５】Gao, L. et al., J Virol, 78, 3480-3488 (2004)
【非特許文献６】Cynshi O, Kawabe Y, Suzuki T, Takashima Y, Kaise H, Nakamura M, Ohba Y, Kato Y, Tamura K, Hayasaka A, Higashida A, Sakaguchi H, Takeya M, Takahashi K, Inoue K, Noguchi N, Niki E, Kodama T. Antiatherogenic effects of the antioxidant BO-653 in three different animal models. Proc Natl Acad Sci U S A. 1998 95:10123-8
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、このような状況に鑑みてなされたものであり、その目的は、ベンゾフラン誘導体およびインターフェロンを組み合わせてなる、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬を提供することにある。また、ベンゾフラン誘導体およびインターフェロンを対象に投与する工程を含む、ＨＣＶ感染症を治療または予防する方法の提供も目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、具体的には以下を含む。
〔１〕下記一般式（１）：
（式中、Ｒ1 は、水素原子、アシル基、又はアリールアルコキシカルボニル基であり；Ｒ2 及びＲ3 は、独立して、置換若しくは未置換のアルキル基、置換若しくは未置換のアルケニル基、又は置換若しくは未置換のアルキニル基であるか、又はＲ2 とＲ3 とが一緒になってシクロアルキル基を形成してもよい。）で表される化合物およびインターフェロンを組み合わせてなる、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬。
【００１１】
〔２〕ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬が、配合剤であることを特徴とする〔１〕に記載の医薬。
【００１２】
〔３〕前記一般式（１）で表される化合物と、インターフェロンとが併用されることを特徴とする、〔１〕に記載の医薬。
【００１３】
〔４〕前記一般式（１）で表される化合物と、インターフェロンとが同時に、順次に、または別々に投与されることを特徴とする、〔３〕に記載の医薬。
【００１４】
〔５〕ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬が、前記一般式（１）で表される化合物を含有する医薬組成物およびインターフェロンを含有する医薬組成物を備えるキットである、〔３〕または〔４〕に記載の医薬。
【００１５】
〔６〕下記一般式（１）：
（式中、Ｒ1 は、水素原子、アシル基、又はアリールアルコキシカルボニル基であり；Ｒ2 及びＲ3 は、独立して、置換若しくは未置換のアルキル基、置換若しくは未置換のアルケニル基、又は置換若しくは未置換のアルキニル基であるか、又はＲ2 とＲ3 とが一緒になってシクロアルキル基を形成してもよい。）で表される化合物を有効成分として含有し、インターフェロンと併用することを特徴とする、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬。
【００１６】
〔７〕インターフェロンを有効成分として含有し、下記一般式（１）：
（式中、Ｒ1 は、水素原子、アシル基、又はアリールアルコキシカルボニル基であり；Ｒ2 及びＲ3 は、独立して、置換若しくは未置換のアルキル基、置換若しくは未置換のアルケニル基、又は置換若しくは未置換のアルキニル基であるか、又はＲ2 とＲ3 とが一緒になってシクロアルキル基を形成してもよい。）で表される化合物と併用することを特徴とする、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬。
【００１７】
〔８〕Ｒ1 が水素原子である、〔１〕〜〔７〕のいずれかに記載の医薬。
【００１８】
〔９〕Ｒ2 及びＲ3 が未置換のアルキル基である、〔１〕〜〔８〕のいずれかに記載の医薬。
【００１９】
〔１０〕未置換のアルキル基が、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基又はｎ−ヘプチル基である、〔９〕に記載の医薬。
【００２０】
〔１１〕式（１）で表される化合物が、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ブチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘキシル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、又は４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘプチル−２，３−ジヒドロベンゾフランである、〔１〕〜〔１０〕のいずれかに記載の医薬。
【００２１】
〔１２〕式（１）で表される化合物が４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフランである、〔１〕〜〔１１〕のいずれかに記載の医薬。
【００２２】
〔１３〕インターフェロンが、ペグ化インターフェロンである、〔１〕〜〔１２〕のいずれかに記載の医薬。
【００２３】
〔１４〕ＨＣＶ感染症が、Ｃ型肝炎、肝硬変、肝繊維化、または肝癌である、〔１〕〜〔１３〕のいずれかに記載の医薬。
【００２４】
〔１５〕下記一般式（１）：
（式中、Ｒ1 は、水素原子、アシル基、又はアリールアルコキシカルボニル基であり；Ｒ2 及びＲ3 は、独立して、置換若しくは未置換のアルキル基、置換若しくは未置換のアルケニル基、又は置換若しくは未置換のアルキニル基であるか、又はＲ2 とＲ3 とが一緒になってシクロアルキル基を形成してもよい。）で表される化合物およびインターフェロンを対象に投与する工程を含む、ＨＣＶ感染症を治療または予防する方法。
【００２５】
〔１６〕前記一般式（１）で表される化合物およびインターフェロンを、対象に同時に投与することを特徴とする、〔１５〕に記載の方法。
【００２６】
〔１７〕前記一般式（１）で表される化合物およびインターフェロンを、対象に別々に投与することを特徴とする、〔１５〕に記載の方法。
【００２７】
〔１８〕Ｒ1 が水素原子である、〔１５〕に記載の方法。
【００２８】
〔１９〕Ｒ2 及びＲ3 が未置換のアルキル基である、〔１５〕に記載の方法。
【００２９】
〔２０〕未置換のアルキル基が、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基又はｎ−ヘプチル基である、〔１９〕に記載の方法。
【００３０】
〔２１〕式（１）で表される化合物が、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ブチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘキシル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、又は４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘプチル−２，３−ジヒドロベンゾフランである、〔１５〕に記載の方法。
【００３１】
〔２２〕式（１）で表される化合物が４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフランである、〔１５〕に記載の方法。
【００３２】
〔２３〕インターフェロンが、ペグ化インターフェロンである、〔１５〕に記載の方法。
【００３３】
〔２４〕ＨＣＶ感染症が、Ｃ型肝炎、肝硬変、肝繊維化、または肝癌である、〔１５〕に記載の方法。
【００３４】
〔２５〕ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬を製造するための、下記一般式（１）：
（式中、Ｒ1 は、水素原子、アシル基、又はアリールアルコキシカルボニル基であり；Ｒ2 及びＲ3 は、独立して、置換若しくは未置換のアルキル基、置換若しくは未置換のアルケニル基、又は置換若しくは未置換のアルキニル基であるか、又はＲ2 とＲ3 とが一緒になってシクロアルキル基を形成してもよい。）で表される化合物およびインターフェロンの使用。
【００３５】
〔２６〕インターフェロンと併用してＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬を製造するための、下記一般式（１）：
（式中、Ｒ1 は、水素原子、アシル基、又はアリールアルコキシカルボニル基であり；Ｒ2 及びＲ3 は、独立して、置換若しくは未置換のアルキル基、置換若しくは未置換のアルケニル基、又は置換若しくは未置換のアルキニル基であるか、又はＲ2 とＲ3 とが一緒になってシクロアルキル基を形成してもよい。）で表される化合物の使用。
【００３６】
〔２７〕下記一般式（１）：
（式中、Ｒ1 は、水素原子、アシル基、又はアリールアルコキシカルボニル基であり；Ｒ2 及びＲ3 は、独立して、置換若しくは未置換のアルキル基、置換若しくは未置換のアルケニル基、又は置換若しくは未置換のアルキニル基であるか、又はＲ2 とＲ3 とが一緒になってシクロアルキル基を形成してもよい。）で表される化合物と併用してＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬を製造するための、インターフェロンの使用。
【００３７】
〔２８〕Ｒ1 が水素原子である、〔２５〕〜〔２７〕のいずれかに記載の使用。
【００３８】
〔２９〕Ｒ2 及びＲ3 が未置換のアルキル基である、〔２５〕〜〔２８〕のいずれかに記載の使用。
【００３９】
〔３０〕未置換のアルキル基が、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基又はｎ−ヘプチル基である、〔２９〕に記載の使用。
【００４０】
〔３１〕式（１）で表される化合物が、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ブチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘキシル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、又は４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘプチル−２，３−ジヒドロベンゾフランである、〔２５〕〜〔３０〕のいずれかに記載の使用。
【００４１】
〔３２〕式（１）で表される化合物が４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフランである、〔２５〕〜〔３１〕のいずれかに記載の使用。
【００４２】
〔３３〕インターフェロンが、ペグ化インターフェロンである、〔２５〕〜〔３２〕のいずれかに記載の使用。
【００４３】
〔３４〕ＨＣＶ感染症が、Ｃ型肝炎、肝硬変、肝繊維化、または肝癌である、〔２５〕〜〔３３〕のいずれかに記載の使用。
【発明の効果】
【００４４】
本発明者らは、一般式（１）で表される、特定のベンゾフラン誘導体とインターフェロンとを組み合わせて用いることにより、ＨＣＶの複製が相乗的に抑制されることを明らかにした。たとえば、これら二つの成分からなる医薬は、より安全性が高く、より有効性が高いＨＣＶ感染症を治療するための新規薬剤となりうる。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１】HCR（遺伝子型1b）に感染させた、ヒト肝臓を有するキメラマウスにおけるBO-653およびPEG-INの併用による抗ＨＣＶ効果を示すもので、具体的にはキメラマウスの血清中のＨＣＶ RNAレベルを示すグラフである。グラフ中、●はBO-653投与群、△はPEG-IFN投与群、○はBO-653＋PEG-IFN併用群、□は未投与群を示す。
【図２】HCR（遺伝子型1b）に感染させた、ヒト肝臓を有するキメラマウスにおけるBO-653およびPEG-INの併用による肝障害への影響を示すもので、具体的にはキメラマウスの血清中のヒトアルブミン濃度を示すグラフである。棒グラフ中、右下がり斜線の棒グラフは投与一日前、白の棒グラフは投与一日後、左下がり斜線の棒グラフは投与7又は8日後、黒の棒グラフは投与14日後の結果を示す。
【図３】ＨＣＶレプリコン保持細胞を用いた、ルシフェラーゼアッセイ法およびWST-8アッセイ法によるBO-653の抗ＨＣＶ作用を示すグラフである。Ｙ軸の左の目盛りはルシフェラーゼアッセイ法によるルシフェラーゼ活性（％）を示し、Ｙ軸の右の目盛りはWST-8アッセイ法による細胞生存性（％）を示し、グラフ中、○はルシフェラーゼ活性を示し、●は細胞生存性を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４６】
本発明において、「Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）」とは、Ｃ型肝炎を発症させる能力を持つウイルスの全てを意味する。ＨＣＶのサブタイプとしては、例えば遺伝子型（genotype）の違いに基づくものおよびセログループ（serogroup）の違いに基づくものが挙げられる。遺伝子型としては、例えば１ａ、１ｂ、２ａ、２ｂ、３ａ、３ｂ、４、５および６が挙げられるが、本発明において好ましい遺伝子型としては１ａおよび１ｂが、更に好ましい遺伝子型としては１ｂが挙げられる。セログループは抗原抗体反応に基づく血清学的グルーピングであり、その具体例としては、セログループ１、セログループ２、および前記の２グループのいずれにも該当しないセログループが挙げられる。また、genotype 1ａおよび１ｂはserogroup １に、genotype ２ａおよび２ｂはserogroup ２に、それぞれ対応させることができる。
【００４７】
本発明において、「ＨＣＶ感染症」とは、前記ＨＣＶの生体（ヒトおよびチンパンジーなどのサルを含む）への感染によって引き起こされる症状の全てを意味し、具体例としては、Ｃ型肝炎、肝硬変、肝繊維化、肝癌などが挙げられる。Ｃ型肝炎は、慢性肝炎、急性肝炎、劇症肝炎等に分類することができ、また、これらの各々の肝炎におけるウイルス血症もＨＣＶ感染症に含まれる。生体がＨＣＶ感染症であるか否かは、例えば、血清中のＨＣＶ抗体量の測定、血清中のＨＣＶのコア抗原の検出および血清中のＨＣＶのＲＮＡの検出、ならびにこれらの組み合わせにより判断することができる。
【００４８】
本発明において、「一般式（１）で表される化合物およびインターフェロンを組み合わせてなる、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬」とは、一般式（１）で表される化合物およびインターフェロンを、ＨＣＶ感染症の治療または予防において同時に、別々に、又は順次に投与するために組み合わせた医薬であればよい。本発明の医薬は、一般式（１）で表される化合物とインターフェロンを同一医薬組成物中に含有してもよい（すなわち、配合剤であってもよい）し、また一般式（１）で表される化合物とインターフェロンを別々の医薬組成物に含有するものであってもよい。なお、配合剤中の一般式（１）で表される化合物とインターフェロンとの配合割合は、予め一定の割合とすることも、症状の軽重や医師の判断などにより、投与時に任意の割合に変更することもできる。また、本発明の医薬は、一般式（１）で表される化合物を含有する医薬組成物とインターフェロンを含有する医薬組成物とをキットとしたものであってもよい。
【００４９】
ここで、上記の「組み合わせてなる、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬」において、一般式（１）で表される化合物とインターフェロンが別々の医薬組成物に含有される場合には、２個の別個の製剤の剤型は同じであってもよいし、別々であってもよい。例えば、いずれか一方又は両方が、非経口製剤、注射剤、点滴剤、静脈内点滴剤であってもよい。
上述したような、ＨＣＶ感染症の治療または予防において用いる上記組み合わせてなる医薬に対して、さらに１個以上の製剤を組み合わせたものも、上記「組み合わせてなる、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬」に含まれる。
【００５０】
また、本発明は、一般式（１）で表される化合物を有効成分として含有する、インターフェロンと併用することを特徴とする、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬に関する。本医薬をインターフェロンと併用する際には、インターフェロンと同時に投与してもよいし、インターフェロンの投与前または投与後に本医薬を投与してもよい。
【００５１】
また、本発明は、インターフェロンを有効成分として含有する、一般式（１）で表される化合物と併用することを特徴とする、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬に関する。インターフェロンを本医薬と併用する際には、本医薬と同時に投与してもよいし、本医薬の投与前または投与後にインターフェロンを投与してもよい。
【００５２】
本発明で用いる前記一般式（１）の化合物のＲ1 は、水素原子、アシル基又はアリールアルコキシカルボニル基である。好ましいアシル基は、１〜１０の炭素原子を有するアシル基であり、その例には、ホルミル、アセチル、プロピオニル、及びベンゾイル基が含まれる。好ましいアリールアルキルオキシカルボニル基は、７〜１１の炭素原子を有するアリールアルキルオキシカルボニル基であり、その例には、ベンジルオキシカルボニル及びナフチルメチルオキシカルボニル基が含まれる。
【００５３】
好ましいＲ1 は、水素原子及びアシル基であり、水素原子及びアセチル基がより好ましく、特に水素原子が好ましい。
【００５４】
一般式（１）の化合物のＲ2 及びＲ3 は、独立して、置換若しくは未置換のアルキル基、置換若しくは未置換のアルケニル基、又は置換若しくは未置換のアルキニル基である。
【００５５】
好ましいアルキル基は、１〜２０の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖状のアルキル基であり、その例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ｓｅｃ−ペンチル、ｔ−ペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル、エチルブチル、ｎ−ヘプチル、イソヘプチル、エチルペンチル、ｎ−オクチル、エチルヘキシル、プロピルペンチル、ノニル、デシル、ペンタデシル、及びステアリル基が含まれる。より好ましくは、１〜１０の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖状のアルキル基であり、特に３〜８の炭素原子を有する直鎖状のアルキル基が好ましい。
【００５６】
好ましいアルケニル基は、２〜２０の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖状のアルケニル基であり、その例には、エテニル、プロペニル、イソプロペニル、ブテニル、イソブテニル、ペンテニル、イソペンテニル、ヘキセニル、イソヘキセニル、エチルブテニル、ヘプテニル、イソヘプテニル、エチルペンテニル、オクテニル、ノネニル、デセニル、及びペンタデセニル基が含まれる。より好ましくは、２〜１０の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖状のアルケニル基であり、特に３〜８の炭素原子を有する直鎖状のアルケニル基が好ましい。
【００５７】
好ましいアルキニル基は、２〜２０、好ましくは２〜１０の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖状のアルキニル基であり、特に３〜８の炭素原子を有する直鎖状のアルキニル基が好ましい。その例には、アルケニル基について挙げた例に対応するアルキニル基が含まれる。
【００５８】
Ｒ2 とＲ3 とは、一緒になって、５〜１０の炭素原子を有するシクロアルキル基を形成してもよい。好ましいシクロアルキル基の例には、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、及びシクロデシルが含まれる。
【００５９】
Ｒ2 及びＲ3 がアルキル基、アルケニル基、又はアルキニル基である場合に有することができる置換基の例には、ハロゲン、低級アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ、及びトリフルオロメチル基が含まれる。
【００６０】
好ましいＲ2 及びＲ3 は、３〜８の炭素原子を有する直鎖状の未置換アルキル基であり、Ｒ2 及びＲ3 の双方が、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基又はｎ−ヘプチル基である場合が特に好ましい。Ｒ2 及びＲ3 の双方がｎ−ペンチル基である場合が最も好ましい。
【００６１】
好ましい式（１）の化合物としては：
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジメチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジエチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−プロピル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−イソプロピル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ブチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｓ−ブチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｔ−ブチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｔ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−イソペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ネオペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘキシル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘプチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−オクチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ノニル−２，３−ジヒドロベンゾフラン；及び
４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−デシル−２，３−ジヒドロベンゾフラン
が挙げられる。
【００６２】
特に好ましい式（１）の化合物としては、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ブチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘキシル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、及び４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘプチル−２，３−ジヒドロベンゾフランが挙げられ、以下の式で表される４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン（ＢＯ−６５３）が最も好ましい。
【００６３】
本発明で用いられる式（１）で表される化合物は、たとえば、ＷＯ２００５／０３０１９８に記載されているように、特開平６−２０６８４２号公報、それに対応する米国特許第５５７４１７８号、ＷＯ０２／０６２６３、それに対応するＥＰ１３０４３２８Ａ、のほか、Tamura K, Kato Y, Ishikawa A, Kato Y, Himori M, Yoshida M, Takashima Y, Suzuki T, Kawabe Y, Cynshi O, Kodama T, Niki E, Shimizu M. Design and synthesis of 4,6-di-tert-butyl-2,3-dihydro-5-benzofuranols as a novel series of antiatherogenic antioxidants. J Med Chem. 2003 46:3083-93等に記載の方法によって合成することができる。
【００６４】
本発明において、「インターフェロン」とは、ウイルス、二本鎖RNA、レクチンなどによって動物細胞から誘発される抗ウイルス作用をもったタンパク質または糖タンパク質の総称を意味する。抗ウイルス作用の他、細胞増殖抑制作用、免疫調節作用を有する。産生細胞、特異的受容体との結合能、生物・物理化学的性質から数種のタイプに分類され、主要なものとしてはα、β、γがあるが、このほか、ＩＦＮω、ＩＦＮτの存在が知られている。さらにインターフェロンαには、２０種以上のサブタイプの存在が知られている。現在、天然型のみならず、ＰＥＧ化、コンセンサスインターフェロン等の各種遺伝子組み換え型の製剤が開発・上市されている。
【００６５】
本発明におけるインターフェロンは、上記タイプのいずれでもよいが、好ましくはαまたはγである。また、本発明におけるインターフェロンは、一般式（１）で表される化合物との併用でＨＣＶ増殖抑制能を増強する限り、天然型、人工的に変異された遺伝子組み換え型、天然に存在する変異体、融合タンパク質、又はこれらの断片などのいずれであってもよい。また、本発明のインターフェロンはＰＥＧ（ポリエチレングリコール）化されていてもよい（PEG-IFN）。インターフェロンのＰＥＧ化は当業者に公知の方法（特許２９８０５６９号）により行うことができる。ＰＥＧ化されたインターフェロンとしては、例えば、ペグインターフェロン−α−２ａ（ペガシス（登録商標））、ペグインターフェロンα−２ｂ（ペグイントロン（登録商標））が挙げられる。本願実施例１で用いているＰＥＧ−ＩＦＮは、ペグインターフェロン−α−２ａを指す。さらに、本発明のインターフェロンは、アルブミンと結合したインターフェロンであってもよい。アルブミンと結合したインターフェロンとしては、例えば、アルブインターフェロンα−２ｂ（アルブフェロン（登録商標））が挙げられる。
【００６６】
本発明におけるインターフェロンの由来に特に制限はなく、例えば、ヒト、チンパンジー、オランウータン、イヌ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ロバ、ブタ、ネコ、マウス、モルモット、ラット、ウサギなどを由来とすることができるが、これらに限らずその他の哺乳動物を由来とすることができる。好ましくはヒト由来のインターフェロンである。
【００６７】
ヒトインターフェロンα又はγのアミノ酸配列は公知であり、例えば、インターフェロンαであればGenBank:NM_024013に記載のアミノ酸配列を用いることができ、インターフェロンγであればGenBank:NM_000619に記載のアミノ酸配列を用いることができる。インターフェロンαのアミノ酸配列を配列番号：１に、塩基配列を配列番号：２に、インターフェロンγのアミノ酸配列を配列番号：３に、同γの塩基配列を配列番号：４に示す。上記インターフェロンは、当業者に周知の方法によって調製可能である。例えば、ヒト由来のインターフェロン産生細胞から周知手段によりｍＲＮＡを調製してｃＤＮＡライブラリーを作製し、該ｃＤＮＡライブラリーの中から、配列番号：２または配列番号：４に記載の塩基配列の全部または一部の塩基配列からなるプローブとストリンジェントな条件でハイブリダイズするｃＤＮＡを選択し、該ｃＤＮＡを適当な宿主・ベクター系を用いて発現させ、得られたタンパク質を精製することにより調製可能である。宿主・ベクター系は、後述の、抗体の製造に使用可能な宿主・ベクター系の例の中から使用してもよい。または、配列番号：２または配列番号：４に記載の塩基配列に基づいてプライマーを設計し、ヒト由来のインターフェロン産生細胞から調製したｍＲＮＡを鋳型にして上記プライマーを用いてＲＴ−ＰＣＲを実施し、得られたｃＤＮＡを発現させて調製することもできる。
【００６８】
上記ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、当業者であれば、適宜選択することができる。一例を示せば、２５％ホルムアミド、より厳しい条件では５０％ホルムアミド、４×ＳＳＣ、５０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ ｐＨ７．０、１０×デンハルト溶液、２０μｇ／ｍｌ変性サケ精子ＤＮＡを含むハイブリダイゼーション溶液中、４２℃で一晩プレハイブリダイゼーションを行った後、標識したプローブを添加し、４２℃で一晩保温することによりハイブリダイゼーションを行う。その後の洗浄における洗浄液および温度条件は、「１ｘＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳ、３７℃」程度で、より厳しい条件としては「０．５ｘＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳ、４２℃」程度で、さらに厳しい条件としては「０．２ｘＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳ、６５℃」程度で実施することができる。このようにハイブリダイゼーションの洗浄の条件が厳しくなるほどプローブ配列と高い相同性を有するポリヌクレオチドの単離を期待しうる。但し、上記ＳＳＣ、ＳＤＳおよび温度の条件の組み合わせは例示であり、当業者であれば、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーを決定する上記若しくは他の要素（例えば、プローブ濃度、プローブの長さ、ハイブリダイゼーション反応時間など）を適宜組み合わせることにより、上記と同様のストリンジェンシーを実現することが可能である。
【００６９】
このようなハイブリダイゼーション技術を利用して単離されるポリヌクレオチドがコードするポリペプチドは、通常、本発明者らにより同定されたポリペプチドとアミノ酸配列において高い相同性を有する。高い相同性とは、少なくとも４０％以上、好ましくは６０％以上、さらに好ましくは８０％以上、さらに好ましくは９０％以上、さらに好ましくは少なくとも９５％以上、さらに好ましくは少なくとも９７％以上（例えば、９８から９９％）の配列の相同性を指す。アミノ酸配列の同一性は、例えば、Karlin and Altschul によるアルゴリズムBLAST (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268, 1990、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877, 1993)によって決定することができる。このアルゴリズムに基づいて、ＢＬＡＳＴＸと呼ばれるプログラムが開発されている(Altschul et al. J. Mol. Biol.215:403-410, 1990)。ＢＬＡＳＴＸによってアミノ酸配列を解析する場合には、パラメーターはたとえばｓｃｏｒｅ＝５０、ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ＝３とする。ＢＬＡＳＴとＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを用いる場合には、各プログラムのデフォルトパラメーターを用いる。これらの解析方法の具体的な手法は公知である(http://www.ncbi.nlm.nih.gov.)。
【００７０】
また上記配列のインターフェロンに限らず、上記配列のインターフェロンに類似するポリペプチドも、一般式（１）で表される化合物との併用でＨＣＶ増殖抑制能を増強する限り、本発明において好適に用いることができる。このようなポリペプチドとして、配列番号：１記載のアミノ酸配列において、１又は複数のアミノ酸が欠失、置換、付加または／および挿入されたアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、一般式（１）で表される化合物との併用で高いＨＣＶ増殖抑制能を有するポリペプチド、配列番号：３記載のアミノ酸配列において、１又は複数のアミノ酸が欠失、置換、付加または／および挿入されたアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、一般式（１）で表される化合物との併用で高いＨＣＶ増殖抑制能を有するポリペプチド、配列番号：２記載の塩基配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズする塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、一般式（１）で表される化合物との併用で高いＨＣＶ増殖抑制能を有するポリペプチド、配列番号：４記載の塩基配列とストリンジェントな条件でハイブリダイズする塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、一般式（１）で表される化合物との併用で高いＨＣＶ増殖抑制能を有するポリペプチドを挙げることができる。
【００７１】
このようなポリペプチドは、当業者に周知の方法によって調製することができる。例えば、配列番号：２または４に記載の塩基配列の全部または一部をプローブとし、インターフェロン産生細胞から調製したｃＤＮＡライブラリーの中からハイブリダイズするクローンを選択し、発現させることで調製することができる。または、配列番号：２または４記載の塩基配列に、ＰＣＲによる変異導入法やカセット変異法などの当業者に周知の遺伝子改変方法を施し、部位特異的にまたはランダムに変異を導入することによって、調製することができる。または配列番号：２または４記載の塩基配列に変異を導入した配列を、市販の核酸合成装置によって合成することも可能である。
なお、本発明の一般式（１）で表される化合物およびインターフェロンを組み合わせてなる、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬に、さらにリバビリンを組み合わせてもよい。
【００７２】
本明細書において「治療」という記載は、本発明の薬物を被験者に投与することによって、ＨＣＶを消滅あるいは減少させること、さらなるＨＣＶの広がりを抑制すること、ＨＣＶの感染による症状を軽減することを意味し、具体例としては、ＨＣＶの排除、肝炎の沈静化、ならびに肝炎から肝硬変、肝繊維化および肝癌への進展の阻止および軽減が挙げられる。また「予防」という記載は、ＨＣＶが感染する前に、被験者に投与され、ＨＣＶの感染を防いだり、増殖を抑制させることを意味する。
【００７３】
本発明において一般式（１）で表される化合物とインターフェロンとの併用とは、一般式（１）で表される化合物とインターフェロンとを共に投与または使用（以下、単に「投与」と記載する。）することを意味し、投与の順番や投与間隔などで限定されるものではない。また、本発明の化合物とインターフェロンとを組み合わせたキットとして実施してもよい。さらに、一般式（１）で表される化合物とインターフェロンとを併用する場合は、いずれかを単独で用いる場合に比べて、所望により各々の投与量を少なくすることも可能である。
【００７４】
一般式（１）で表される化合物とインターフェロンの投与の順番は、該化合物の投与後にインターフェロンを投与、一般式（１）で表される化合物とインターフェロンを同時に投与、インターフェロン投与後に一般式（１）で表される化合物を投与、のいずれの順番でもよい。
【００７５】
一般式（１）で表される化合物とインターフェロンを別々に投与する場合、一般式（１）で表される化合物とインターフェロンの投与間隔は特に限定されず、投与経路や剤形等の要因を考慮して設定することができる。あえて投与間隔の一例を挙げるとすれば、通常、０時間〜１６８時間であり、好ましくは０時間〜７２時間であり、さらに好ましくは０時間〜２４時間であり、さらに好ましくは０時間〜１２時間である。
【００７６】
なお、インターフェロンの投与間隔としては、限定されるものではないが、通常１日に１回〜１月に１回であり、好ましくは週１回である。また、一般式（１）で表される化合物の投与間隔としては、限定されるものではないが、通常１日に１回〜２月に１回、好ましくは１日に１回〜１月に１回である。
また、一般式（１）で表される化合物とインターフェロンを別々に投与する場合、投与方法や１日あたりの投与回数は同じでも異なっていてもよい。さらに、一般式（１）で表される化合物とインターフェロンの重量比も特に限定されない。
【００７７】
一般式（１）で表される化合物は、そのまま、又は、その薬理学的に許容される塩として医薬に使用することができる。上記塩としては薬理学的に許容されるものであれば特に限定されず、例えば、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、臭化水素酸などの鉱酸との塩；酢酸、酒石酸、乳酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、ショウノウスルホン酸などの有機酸との塩；ナトリウム、カリウム、カルシウムなどのアルカリ金属又はアルカリ土類金属などとの塩などを挙げることができる。
【００７８】
一般式（１）で表される化合物または薬理学的に許容される塩は、溶媒付加形態（溶媒和物）、結晶形態（多系）を含んでもよい。
【００７９】
上記医薬に含まれる有効成分化合物の量は、特に限定されず広範囲に適宜選択されるが、例えば、０．１〜９９．５重量％、好ましくは０．５〜９０重量％である。
【００８０】
一般式（１）で表される化合物または薬理学的に許容される塩、および／またはインターフェロンを、常法に従って主薬として、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などの医薬の製剤技術分野において通常使用し得る既知の補助剤を用いて製剤化することができる。錠剤の形態に成形するに際しては、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えば乳糖、白糖、塩化ナトリウム、グルコース、尿素、澱粉、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸などの賦形剤；水、エタノール、プロパノール、単シロップ、グルコース液、澱粉液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドンなどの結合剤；乾燥澱粉、アルギン酸ナトリウム、寒天末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、澱粉、乳糖などの崩壊剤；白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油などの崩壊抑制剤；第４級アンモニウム塩類、ラウリル硫酸ナトリウムなどの吸収促進剤；グリセリン、澱粉などの保湿剤；澱粉、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸などの吸着剤；精製タルク、ステアリン酸塩、硼酸末、ポリエチレングリコールなどの潤沢剤などが例示できる。
【００８１】
さらに錠剤は、必要に応じ、通常の剤皮を施した錠剤、例えば、糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠あるいは二重錠、多層錠とすることができる。丸剤の形態に成形するに際しては、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えばグルコース、乳糖、カカオバター、澱粉、硬化植物油、カオリン、タルクなどの賦形剤；アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノールなどの結合剤；ラミナラン寒天などの崩壊剤などが例示できる。坐剤の形態に成形するに際しては、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えばポリエチレングリコール、カカオバター、高級アルコール、高級アルコールのエステル類、ゼラチン、半合成グリセリドなどを挙げることができる。注射剤として調製される場合には、液剤および懸濁剤は殺菌され、かつ血液と等張であるのが好ましく、これら液剤、乳剤および懸濁剤の形態に成形するに際しては、希釈剤としてこの分野で慣用されているものをすべて使用でき、例えば、水、エタノール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類などを挙げることができる。なお、この場合、等張性の溶液を調製するのに充分な量の食塩、グルコース、あるいはグリセリンを医薬製剤中に含有せしめてもよく、また通常の溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤などを添加してもよい。さらに必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤などや他の医薬品を含有することもできる。
【００８２】
上記医薬は、投与単位形態で投与することが好ましく、経口投与、組織内投与（皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与など）、局所投与（経皮投与など）又は経直腸的に投与することができる。上記医薬は、これらの投与方法に適した剤型で投与されることは当然である。
【００８３】
一般式（１）で表される化合物又はその薬理学的に許容され得る塩、およびインターフェロンを医薬として投与する場合、その用量は、年齢、体重などの患者の状態、投与経路、病気の性質と程度などを考慮した上で調整することが望ましいが、通常は、ヒトについては、成人に対して本発明の有効成分量として、一日当たり、０．００１〜２０００ｍｇの範囲である。上記範囲未満の用量で足りる場合もあるが、逆に上記範囲を超える用量を必要とする場合もある。多量に投与するときは、一日数回に分割して投与することが望ましい。
【００８４】
上記経口投与は、固形、粉末又は液状の用量単位で行うことができ、例えば、末剤、散剤、錠剤、糖衣剤、カプセル剤、ドロップ剤、舌下剤、その他の剤型などにより行うことができる。
【００８５】
上記組織内投与は、例えば、溶液や懸濁剤などの皮下、筋肉内又は静脈内注射用の液状用量単位形態を用いることによって行うことができる。これらのものは、一般式（１）で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩、および／またはインターフェロンの一定量を、例えば、水性や油性の媒体などの注射目的に適合する非毒性の液状担体に懸濁又は溶解し、ついで上記懸濁液又は溶液を滅菌することにより製造される。
【００８６】
上記局所投与（経皮投与など）は、例えば、液剤、クリーム剤、粉末剤、ペースト剤、ゲル剤、軟膏剤などの外用製剤の形態を用いることによって行うことができる。これらのものは、一般式（１）で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩、および／またはインターフェロンの一定量を、外用製剤の目的に適合する香料、着色料、充填剤、界面活性剤、保湿剤、皮膚軟化剤、ゲル化剤、担体、保存剤、安定剤などのうちの一種以上と組み合わせることにより製造される。
【００８７】
上記経直腸的投与は、一般式（１）で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩、および／またはインターフェロンの一定量を、例えば、パルミチン酸ミリスチルエステルなどの高級エステル類、ポリエチレングリコール、カカオ脂、これらの混合物などからなる低融点固体に混入した座剤などを用いて行うことができる。
【００８８】
上記投与は、例えば、溶液や懸濁剤などの皮下、筋肉内又は静脈内注射用の液状用量単位形態を用いることによって行うことができる。これらのものは、一般式（１）で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩、および／またはインターフェロンの一定量を、例えば、水性や油性の媒体などの注射の目的に適合する非毒性の液状担体に懸濁又は溶解し、ついで上記懸濁液又は溶液を滅菌することにより製造される。
なお、本明細書において引用された全ての先行技術文献は、参照として本明細書に組み入れられる。
【実施例】
【００８９】
以下、本発明の一態様を実施例によりさらに具体的に説明する。
【００９０】
[実施例１] ＨＣＶに感染したキメラマウスにおけるＢＯ−６５３及びＰＥＧ−ＩＦＮの抗ＨＣＶ効果
【００９１】
ＨＣＲ６（遺伝子型１ｂ）に感染させた、ヒト肝臓を有するキメラマウスを用いて、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン（ＢＯ−６５３）の阻害能を調べた。キメラマウスは、購入したもの（株式会社フェニックスバイオ、広島、日本）を用いた。
【００９２】
具体的には、表１に従ってＢＯ−６５３及び／またはＰＥＧ−ＩＦＮ（Chugai, Tokyo, Japan）を、ＨＣＶ遺伝子型１ｂ（HCR6、アクセッション番号AY045702）感染マウスに経口投与または皮下注射によって投与し、血液を採取した。
【００９３】
〔表１〕ＨＣＶ遺伝子型１ｂ感染キメラマウスへの投与スケジュール
【００９４】
表１において、Ｂ、Ｉ、ならびにＢＯは各操作が必要に応じて行われたこと、及び試薬の投与が０日目から始まったことを示している。ＰＥＧ−ＩＦＮを３０μｇ／ｋｇで注射した。経口投与したＢＯ−６５３の量は、２０００ｍｇ／ｋｇ（ＢＯ）とした。
【００９５】
次に、総RNAを、ＡＧＰＣ法を用いてキメラマウスから採取した血清１μｌから精製した。ＨＣＶ ＲＮＡを、当業者に公知の方法(Takeuchi, T. et al. Gasteroenterology, 116, 636-642 (1999))によって、リアルタイムPCRによって定量した。
【００９６】
その結果、臨床治療で使用される量の２０倍量のＰＥＧ−ＩＦＮ（30μg/kg/週2回）を投与した群では、投与前（1.3 x 107コピー / ml血清）から投与後８日で約１／３０量（4.6 x 105コピー / ml血清）、投与後１４日では約１／４５量（2.8 x 105コピー / ml血清）に減少した。一方、ＢＯ−６５３ 単独投与群においては、有意なＨＣＶ ＲＮＡ量の低下は認められなかったが、ＰＥＧ−ＩＦＮとの併用治療群では、投与後８日では約１／３０量（3.1 x 105コピー / ml血清）、投与後１４日では約１／１８０量（5.4 x 104コピー / ml血清）まで減少した（図１）。
【００９７】
同時に、本発明者らは、ヒトアルブミン（h-Alb）濃度をモニターした。ヒトアルブミン濃度は、Ａｌｂ−ＩＩキット（Eiken Chemical, Tokyo, Japan）を用いて製造元の説明書にしたがって血清２μｌにおいて測定した。いずれの投与群においても顕著な低下は認められなかった（図２）。
【００９８】
これらの結果より、ＨＣＶ感染キメラマウスにおいて、ＢＯ−６５３単独投与では顕著なウイルス量の減少は見られなかったが、ＰＥＧ−ＩＦＮと併用することによって、投与１４日後にはＰＥＧ−ＩＦＮ単独投与群に比べてウイルス量の有意な減少が認められた（＊ｐ<０．０５）。また、いずれの投与群においても顕著な肝障害は観察されなかった。
【００９９】
［実施例２］BO-653のＨＣＶレプリコン複製阻害作用
実験開始前日にルシフェラーゼ遺伝子を含むＨＣＶレプリコン保持細胞Ｈｕｈ７＃３−１を９６ウェル白色マルチウェルプレート（ルシフェラーゼ用）と９６ウェルマルチウェルプレート（毒性試験用）のそれぞれに４５００個／ウェルで撒いた。このとき、５％ＦＣＳを含むＤＭＥＭ ＧｌｕｔａＭａｘＩ(DMEM5)培地を使用した。翌日約20時間後、DMEM5で希釈したBO-653を終濃度が０．２、０．５、１、４、１２、３７、１１１、３３３、１０００マイクロモルになるように各ウェルに加えた。５％ＣＯ２、３７℃７２時間後、ルシフェラーゼアッセイおよびＷＳＴ−８による細胞毒性試験を行った。ＢＯ−６５３を加えないものを陰性コントロールとした。
【０１００】
ルシフェラーゼアッセイ
Steady-Glo Lucifease Assay BufferTMとSubstrateTM (Promega, cat#E2520)を室温に戻した。SubstrateにBufferを加えてよく混ぜた。
プレートをインキュベータから取り出し、３０分間以上経過してからこれをマルチチャンネルピペットで１ウェル当たり１００マイクロリットルを加えて３〜４回ピペッティングした。５分以上放置後、EnVisionTM 2103 Multilabel Readerにて測定し、化学発光量（Chemiluminescence）から活性を求めた。ＢＯ−６５３のＩＣ５０（５０％阻害濃度）は３４マイクロモルであった。
【０１０１】
WST-8アッセイ
Cell Counting Kit-8(DOJINDO Laboratories, cat# 341-08001)を用いて細胞毒性を評価した。培養したプレートをインキュベータから取り出し培地を捨てた。これにＰＢＳで１１倍に希釈したCell Counting Kit-8を１ウェル当たり１１０μＬ加えて６０分間３７℃で培養した。培養後プレートを取り出し、プレート振とう器で１０秒間振とうした。プレートの吸光度をEnVisionTM 2103 Multilabel Reader(測定波長450nm, 対照波長 590nm)にて測定し、ＢＯ−６５３を入れないウェルを１００％として、各薬剤の細胞毒性を求めた。ＢＯ−６５３の細胞毒性は認められなかった（ＩＣ５０>１０００マイクロモル）。
【０１０２】
以上の結果を図３および表２に示す。この結果より、一般式（１）の化合物が、単独（単剤）として用いても、ＨＣＶ感染症の治療剤または予防剤として有用であることが確認された。
〔表２〕
【０１０３】
［参考例１］Ｍｅｔ−ＢＯのＨＣＶレプリコン複製阻害作用
上記実施例２において、ＢＯ−６５３を用いる代わりに、Free Radical Research, 2006; 40(1): 21-30に記載の４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−メトキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンソフラン(Met-BO)を用いて、ＨＣＶレプリコン複製阻害作用を調べた。
すなわち、実験開始前日にルシフェラーゼ遺伝子を含むＨＣＶレプリコン保持細胞Ｈｕｈ７＃３−１を９６ウェル白色マルチウェルプレート（ルシフェラーゼ用）と９６ウェルマルチウェルプレート（毒性試験用）のそれぞれに４５００個／ウェルで撒いた。このとき、５％ＦＣＳを含むDMEM GlutaMaxI(DMEM5)培地を使用した。翌日約２０時間後、ＤＭＥＭ５で希釈したＭｅｔ−ＢＯを終濃度が０．２、０．５、１、４、１２、３７、１１１、３３３、１０００マイクロモルになるように各ウェルに加えた。５％ＣＯ２、３７℃７２時間後、ルシフェラーゼアッセイおよびＷＳＴ−８による細胞毒性試験を行った。Ｍｅｔ−ＢＯを加えないものを陰性コントロールとした。
【０１０４】
ルシフェラーゼアッセイ
Steady-Glo Lucifease Assay BufferTMとSubstrateTM (Promega, cat#E2520)を室温に戻した。SubstrateにBufferを加えてよく混ぜた。
プレートをインキュベータから取り出し、３０分間以上経過してからこれをマルチチャンネルピペットで１ウェル当たり１００マイクロリットルを加えて３〜４回ピペッティングした。５分以上放置後、EnVisionTM 2103 Multilabel Readerにて測定し、化学発光量（Chemiluminescence）から活性を求めた。Ｍｅｔ−ＢＯのＩＣ５０（５０％阻害濃度）は６０マイクロモルであった。
【０１０５】
ＷＳＴ−８アッセイ
Cell Counting Kit-8(DOJINDO Laboratories, cat# 341-08001)を用いて細胞毒性を評価した。培養したプレートをインキュベータから取り出し培地を捨てた。これにＰＢＳで１１倍に希釈したCell Counting Kit-8を1ウェル当たり１１０μＬ加えて６０分間３７℃で培養した。培養後プレートを取り出し、プレート振とう器で１０秒間振とうした。プレートの吸光度をEnVisionTM 2103 Multilabel Reader(測定波長４５０ｎｍ，対照波長５９０ｎｍ)にて測定し、Ｍｅｔ−ＢＯを入れないウェルを１００％として、各薬剤の細胞毒性を求めた。Ｍｅｔ−ＢＯの細胞毒性は認められなかった（ＩＣ５０>１０００マイクロモル）。
以上の結果を表３に示す。この結果より、Ｍｅｔ−ＢＯが、ＨＣＶ感染症の治療剤または予防剤として有用であることが確認された。
〔表３〕
【産業上の利用可能性】
【０１０６】
本発明により、ＨＣＶ感染症の予防および／または治療のための医薬ならびに方法が提供される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）：
（式中、Ｒ1 は、水素原子、アシル基、又はアリールアルコキシカルボニル基であり；Ｒ2 及びＲ3 は、独立して、置換若しくは未置換のアルキル基、置換若しくは未置換のアルケニル基、又は置換若しくは未置換のアルキニル基であるか、又はＲ2 とＲ3 とが一緒になってシクロアルキル基を形成してもよい。）で表される化合物およびインターフェロンを組み合わせてなる、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬。
【請求項２】
ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬が、配合剤であることを特徴とする、請求項１に記載の医薬。
【請求項３】
前記一般式（１）で表される化合物と、インターフェロンとが併用されることを特徴とする、請求項１に記載の医薬。
【請求項４】
前記一般式（１）で表される化合物と、インターフェロンとが同時に、順次に、または別々に投与されることを特徴とする、請求項３に記載の医薬。
【請求項５】
ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬が、前記一般式（１）で表される化合物を含有する医薬組成物およびインターフェロンを含有する医薬組成物を備えるキットである、請求項３または４に記載の医薬。
【請求項６】
下記一般式（１）：
（式中、Ｒ1 は、水素原子、アシル基、又はアリールアルコキシカルボニル基であり；Ｒ2 及びＲ3 は、独立して、置換若しくは未置換のアルキル基、置換若しくは未置換のアルケニル基、又は置換若しくは未置換のアルキニル基であるか、又はＲ2 とＲ3 とが一緒になってシクロアルキル基を形成してもよい。）で表される化合物を有効成分として含有し、インターフェロンと併用することを特徴とする、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬。
【請求項７】
インターフェロンを有効成分として含有し、下記一般式（１）：
（式中、Ｒ1 は、水素原子、アシル基、又はアリールアルコキシカルボニル基であり；Ｒ2 及びＲ3 は、独立して、置換若しくは未置換のアルキル基、置換若しくは未置換のアルケニル基、又は置換若しくは未置換のアルキニル基であるか、又はＲ2 とＲ3 とが一緒になってシクロアルキル基を形成してもよい。）で表される化合物と併用することを特徴とする、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬。
【請求項８】
Ｒ1 が水素原子である、請求項１〜７のいずれかに記載の医薬。
【請求項９】
Ｒ2 及びＲ3 が未置換のアルキル基である、請求項１〜８のいずれかに記載の医薬。
【請求項１０】
未置換のアルキル基が、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基又はｎ−ヘプチル基である、請求項９に記載の医薬。
【請求項１１】
式（１）で表される化合物が、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ブチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘキシル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、又は４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘプチル−２，３−ジヒドロベンゾフランである、請求項１〜１０のいずれかに記載の医薬。
【請求項１２】
式（１）で表される化合物が４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフランである、請求項１〜１１のいずれかに記載の医薬。
【請求項１３】
インターフェロンが、ペグ化インターフェロンである、請求項１〜１２のいずれかに記載の医薬。
【請求項１４】
ＨＣＶ感染症が、Ｃ型肝炎、肝硬変、肝繊維化、または肝癌である、請求項１〜１３のいずれかに記載の医薬。
【請求項１】
下記一般式（１）：
（式中、Ｒ1 は、水素原子、アシル基、又はアリールアルコキシカルボニル基であり；Ｒ2 及びＲ3 は、独立して、置換若しくは未置換のアルキル基、置換若しくは未置換のアルケニル基、又は置換若しくは未置換のアルキニル基であるか、又はＲ2 とＲ3 とが一緒になってシクロアルキル基を形成してもよい。）で表される化合物およびインターフェロンを組み合わせてなる、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬。
【請求項２】
ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬が、配合剤であることを特徴とする、請求項１に記載の医薬。
【請求項３】
前記一般式（１）で表される化合物と、インターフェロンとが併用されることを特徴とする、請求項１に記載の医薬。
【請求項４】
前記一般式（１）で表される化合物と、インターフェロンとが同時に、順次に、または別々に投与されることを特徴とする、請求項３に記載の医薬。
【請求項５】
ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬が、前記一般式（１）で表される化合物を含有する医薬組成物およびインターフェロンを含有する医薬組成物を備えるキットである、請求項３または４に記載の医薬。
【請求項６】
下記一般式（１）：
（式中、Ｒ1 は、水素原子、アシル基、又はアリールアルコキシカルボニル基であり；Ｒ2 及びＲ3 は、独立して、置換若しくは未置換のアルキル基、置換若しくは未置換のアルケニル基、又は置換若しくは未置換のアルキニル基であるか、又はＲ2 とＲ3 とが一緒になってシクロアルキル基を形成してもよい。）で表される化合物を有効成分として含有し、インターフェロンと併用することを特徴とする、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬。
【請求項７】
インターフェロンを有効成分として含有し、下記一般式（１）：
（式中、Ｒ1 は、水素原子、アシル基、又はアリールアルコキシカルボニル基であり；Ｒ2 及びＲ3 は、独立して、置換若しくは未置換のアルキル基、置換若しくは未置換のアルケニル基、又は置換若しくは未置換のアルキニル基であるか、又はＲ2 とＲ3 とが一緒になってシクロアルキル基を形成してもよい。）で表される化合物と併用することを特徴とする、ＨＣＶ感染症を治療または予防するための医薬。
【請求項８】
Ｒ1 が水素原子である、請求項１〜７のいずれかに記載の医薬。
【請求項９】
Ｒ2 及びＲ3 が未置換のアルキル基である、請求項１〜８のいずれかに記載の医薬。
【請求項１０】
未置換のアルキル基が、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基又はｎ−ヘプチル基である、請求項９に記載の医薬。
【請求項１１】
式（１）で表される化合物が、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ブチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘキシル−２，３−ジヒドロベンゾフラン、又は４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ヘプチル−２，３−ジヒドロベンゾフランである、請求項１〜１０のいずれかに記載の医薬。
【請求項１２】
式（１）で表される化合物が４，６−ジ−ｔ−ブチル−５−ヒドロキシ−２，２−ジ−ｎ−ペンチル−２，３−ジヒドロベンゾフランである、請求項１〜１１のいずれかに記載の医薬。
【請求項１３】
インターフェロンが、ペグ化インターフェロンである、請求項１〜１２のいずれかに記載の医薬。
【請求項１４】
ＨＣＶ感染症が、Ｃ型肝炎、肝硬変、肝繊維化、または肝癌である、請求項１〜１３のいずれかに記載の医薬。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２０１０−２４１７５０（Ｐ２０１０−２４１７５０Ａ）
【公開日】平成２２年１０月２８日（２０１０．１０．２８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−９３６０８（Ｐ２００９−９３６０８）
【出願日】平成２１年４月８日（２００９．４．８）
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成１８〜２０年度、独立行政法人 医薬基盤研究所基礎研究推進事業、産業活力再生特別措置法旧第３０条または産業技術力強化法第１９条の適用を受ける特許出願
【出願人】（５９１０６３３９４）財団法人 東京都医学研究機構 (69)
【出願人】（０００００３３１１）中外製薬株式会社 (228)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年１０月２８日（２０１０．１０．２８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年４月８日（２００９．４．８）
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成１８〜２０年度、独立行政法人 医薬基盤研究所基礎研究推進事業、産業活力再生特別措置法旧第３０条または産業技術力強化法第１９条の適用を受ける特許出願
【出願人】（５９１０６３３９４）財団法人 東京都医学研究機構 (69)
【出願人】（０００００３３１１）中外製薬株式会社 (228)
【Ｆターム（参考）】
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