本発明は、抗ＣＲＩＰＴＯ抗体のヒト化形およびその一部に関する。１つの実施形態において、これらの抗体の可変領域またはそれらを含むポリペプチド（たとえば全長抗体またはドメイン欠失抗体）を使用して、癌などの障害を処置できる。本発明は少なくとも一部は、ＣＤＲグラフトおよび他のヒト化抗Ｃｒｉｐｔｏ抗体の開発に基づく。本発明により、ヒト化抗Ｃｒｉｐｔｏ抗体の複数の形が開発され、腫瘍成長について動物モデルで試験するためにメイタンソイドに接合させた。本実施例に示した結果は、生体内での腫瘍細胞成長を阻害するためのこれら抗体の有用性を証明している。これらのヒト化抗Ｃｒｉｐｔｏ抗体は、ヒト被験体において使用するにはマウス抗体よりも適している。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
結合分子であって：
（ｉ）
【化１】

を含む群より選択される少なくとも１個のＣＤＲ配列と；
（ｉｉ）ヒトアクセプタ免疫グロブリン配列由来の可変フレームワーク領域配列と；
を含み、ヒトＣｒｉｐｔｏ抗原に特異的に結合する結合分子。
【請求項２】
ＣＤＲ Ｈ３配列
【化２】

（配列番号：１４）を含む、請求項１に記載の結合分子。
【請求項３】
ＣＤＲ Ｈ２配列
【化３】

（配列番号：１３）を含む、請求項１または２に記載の結合分子。
【請求項４】
ＣＤＲ Ｈ１配列
【化４】

（配列番号：１２）を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の結合分子。
【請求項５】
ＣＤＲ Ｌ３配列
【化５】

（配列番号：１１）を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の結合分子。
【請求項６】
ＣＤＲ Ｌ２配列
【化６】

（配列番号：１０）を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の結合分子。
【請求項７】
ＣＤＲ Ｌ１配列
【化７】

（配列番号：９）を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の結合分子。
【請求項８】
前記可変フレームワーク領域配列の少なくとも１個のフレームワーク残基が相当するマウスＢ３Ｆ６可変領域配列由来の対応するアミノ酸残基によって置換される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の結合分子。
【請求項９】
結合分子であって：
（ａ）配列番号：３９のＣＤＲ１〜３と、ヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖配列由来の可変フレームワーク領域とを含む軽鎖可変領域と；
（ｂ）配列番号：４０のＣＤＲ１〜３と、ヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖由来の可変フレームワーク領域とを含む重鎖可変領域と；
を含み、ヒトＣｒｉｐｔｏ抗原に特異的に結合する；
結合分子。
【請求項１０】
前記ヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖由来の可変フレームワーク領域が、配列番号：４０のフレームワークおよびＣＤＲ領域と少なくとも約５０％は同一である、請求項９に記載の結合分子。
【請求項１１】
前記ヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖由来の可変フレームワーク領域がヒトサブグループ１配列、ヒトサブグループ１コンセンサス配列、またはヒト生殖系列配列に由来する、請求項９または１０に記載の結合分子。
【請求項１２】
前記ヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖由来の可変フレームワーク領域が配列番号：４６で示すアミノ酸配列を含む、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の結合分子。
【請求項１３】
前記ヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖配列由来の可変フレームワーク領域が、配列番号：３９のフレームワークおよびＣＤＲ領域と少なくとも約６０％は同一である、請求項９〜１２のいずれか一項に記載の結合分子。
【請求項１４】
前記ヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖配列由来の可変フレームワーク領域がヒトサブグループＫａｐｐａ ２配列、ヒトサブグループＫａｐｐａ ２コンセンサス配列、またはヒト生殖系列配列に由来する、請求項９〜１３のいずれか一項に記載の結合分子。
【請求項１５】
前記ヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖配列由来の可変フレームワーク領域が配列番号：４５で示すアミノ酸配列を含む、請求項９〜１４のいずれか一項に記載の結合分子。
【請求項１６】
前記ヒトアクセプタ免疫グロブリン重鎖由来の可変フレームワーク領域の少なくとも１個のフレームワーク残基が、配列番号：４０で示すマウスアミノ酸配列由来の対応するアミノ酸残基と置換され、該少なくとも１個のアミノ酸残基が
ａ）標準残基、
ｂ）インタフェースパッキング残基、
ｃ）結合部位に近い異常または希少な残基、
ｄ）ＣＤＲ内の一部の原子の約３オングストロームユニット以内の側鎖原子を有する残基、
である、請求項９〜１５のいずれかに記載の結合分子。
【請求項１７】
前記少なくとも１個のフレームワーク残基がＨ１、Ｈ４８、Ｈ６７、Ｈ７１、Ｈ７３、Ｈ８１、Ｈ８２ｂ、Ｈ９３、およびＨ１１２（Ｋａｂａｔ番号付け規則）から成る群より選択される、請求項１６に記載の結合分子。
【請求項１８】
前記少なくとも１個のフレームワーク残基がＨ４８、Ｈ６７、Ｈ７１、Ｈ７３、Ｈ９３、およびＨ１１２を含む請求項１６または１７に記載の結合分子。
【請求項１９】
前記少なくとも１個のフレームワーク残基がＨ７１およびＨ１１２である、請求項１６〜１８のいずれかに記載の結合分子。
【請求項２０】
前記少なくとも１個のフレームワーク残基がＨ１、Ｈ４８、Ｈ７１、Ｈ８１、Ｈ８２ｂ、およびＨ１１２を含む、請求項１６〜１９のいずれかに記載の結合分子。
【請求項２１】
前記ヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖配列由来の可変フレームワーク領域の少なくとも１個のフレームワーク残基が配列番号：３９で示すマウス配列由来の対応するアミノ酸残基と置換され、該少なくとも１個のアミノ酸残基が
ａ）標準残基、
ｂ）インタフェースパッキング残基、
ｃ）結合部位に近い異常または希少な残基、
ｄ）ＣＤＲ内の一部の原子の約３オングストロームユニット以内の側鎖原子を有する残基、
である、請求項１６〜２０のいずれかに記載の結合分子。
【請求項２２】
前記ヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖配列由来の可変フレームワーク領域がＬ２またはＬ１００（Ｋａｂａｔ番号付け規則）である、請求項２１のいずれかに記載の結合分子。
【請求項２３】
前記ヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖配列由来の可変フレームワーク領域がＬ２である、請求項２１または２２に記載の結合分子。
【請求項２４】
前記ヒトアクセプタ免疫グロブリン軽鎖配列由来の可変フレームワーク領域がＬ２およびＬ１００を含む、請求項２１〜２３に記載の結合分子。
【請求項２５】
結合分子であって：
（ａ）配列番号：４７、配列番号：５０、および配列番号：５２のアミノ酸残基１〜１１２から成る群より選択されるＶＬ配列で示すＣＤＲおよびフレームワークアミノ酸配列と；場合によりシグナル配列とを含む軽鎖と；
（ｂ）配列番号：４８、配列番号：４９、配列番号：５１、および配列番号：５５のアミノ酸残基１〜１２１から成る群より選択されるＶＨ配列で示すＣＤＲおよびフレームワークアミノ酸配列と；場合によりシグナル配列とを含む重鎖と；
を含み、ヒトＣｒｉｐｔｏ抗原に特異的に結合する；
結合分子。
【請求項２６】
（ａ）配列番号：５２のアミノ酸１〜１１２で示すフレームワークおよびＣＤＲアミノ酸配列と、場合によりシグナル配列とを含む軽鎖と；
（ｂ）配列番号：５５のアミノ酸１〜１２１で示すフレームワークおよびＣＤＲアミノ酸配列と、場合によりシグナル配列とを含む重鎖と；
を含む、請求項２５に記載の結合分子。
【請求項２７】
（ａ）配列番号：４７で示すフレームワークおよびＣＤＲアミノ酸配列と、場合によりシグナル配列とを含む軽鎖と；
（ｂ）配列番号：４８で示すフレームワークおよびＣＤＲアミノ酸配列と、場合によりシグナル配列とを含む重鎖と；
を含む、請求項２５に記載の結合分子。
【請求項２８】
（ａ）配列番号：４７で示すフレームワークおよびＣＤＲアミノ酸配列と、場合によりシグナル配列とを含む軽鎖と；
（ｂ）配列番号：４９で示すフレームワークおよびＣＤＲアミノ酸配列と、場合によりシグナル配列とを含む重鎖と；
を含む、請求項２５に記載の結合分子。
【請求項２９】
（ａ）配列番号：４７で示すフレームワークおよびＣＤＲアミノ酸配列と、場合によりシグナル配列とを含む軽鎖と；
（ｂ）配列番号：５１で示すフレームワークおよびＣＤＲアミノ酸配列と、場合によりシグナル配列とを含む重鎖と；
を含む、請求項２５に記載の結合分子。
【請求項３０】
（ａ）配列番号：５０で示すフレームワークおよびＣＤＲアミノ酸配列と、場合によりシグナル配列とを含む軽鎖と；
（ｂ）配列番号：４８で示すフレームワークおよびＣＤＲアミノ酸配列と、場合によりシグナル配列とを含む重鎖と；
を含む、請求項２５に記載の結合分子。
【請求項３１】
（ａ）配列番号：５０で示すフレームワークおよびＣＤＲアミノ酸配列と、場合によりシグナル配列とを含む軽鎖と；
（ｂ）配列番号：４９で示すフレームワークおよびＣＤＲアミノ酸配列と、場合によりシグナル配列とを含む重鎖と；
を含む、請求項２５に記載の結合分子。
【請求項３２】
（ａ）配列番号：５０で示すフレームワークおよびＣＤＲアミノ酸配列と、場合によりシグナル配列とを含む軽鎖と；
（ｂ）配列番号：５１で示すフレームワークおよびＣＤＲアミノ酸配列と、場合によりシグナル配列とを含む重鎖と；
を含む、請求項２５に記載の結合分子。
【請求項３３】
前記結合分子重鎖が、ＶＨ、ＶＬ、またはＣＨ１ドメインに合成結合ペプチドを介して遺伝的に融合したＣＨ３ドメインを含む、請求項９〜３２のいずれかに記載の結合分子。
【請求項３４】
前記結合分子重鎖がＣＨ２ドメインの全部または一部を欠失している、請求項９〜３３のいずれかに記載の結合分子。
【請求項３５】
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４から成る群より選択されるアイソタイプの抗体に由来する定常領域を含む、請求項９〜３４のいずれかに記載の結合分子。
【請求項３６】
γ１ヒンジ、γ２ヒンジ、γ３ヒンジ、およびγ４ヒンジから成る群より選択されるヒンジ領域に由来するアミノ酸配列を含む、請求項９〜３５のいずれかに記載の結合分子。
【請求項３７】
キメラヒンジを含む、請求項９〜３６のいずれかに記載の結合分子。
【請求項３８】
前記結合分子がＩｇＧ１ヒンジドメインの少なくとも部分、ＩｇＧ３ヒンジドメインの少なくとも部分を含む、請求項９〜３７のいずれかに記載の結合分子。
【請求項３９】
前記結合分子が位置２３９または２４２（Ｋａｂａｔ番号付けシステム）にシステイン残基を含む重鎖定常領域を含む、請求項９〜３８のいずれかに記載の結合分子。
【請求項４０】
前記結合分子が野生型Ｆｃ領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む重鎖定常領域を含む、請求項９〜３９のいずれかに記載の結合分子。
【請求項４１】
前記修飾が、哺乳類細胞内で改変体が発現されたときに実質的にグリコシル化されるように、ＥＵ位置２９７〜２９９のいずれかにアミノ酸置換を含む、請求項４０に記載の結合分子。
【請求項４２】
前記結合分子が野生型Ｆｃ領域を有する結合分子と比較して低下したエフェクタ機能を有する、請求項４０または４１に記載の結合分子。
【請求項４３】
低下した抗原依存性細胞毒性を有する、請求項４２に記載の結合分子。
【請求項４４】
延長された半減期を有する、請求項４２または４３に記載の結合分子。
【請求項４５】
前記修飾Ｆｃ領域が少なくとも１個の操作されたシステイン残基を有する、請求項４０〜４５のいずれかに記載の結合分子。
【請求項４６】
前記操作されたシステイン残基が前記Ｆｃ領域のＣＨ３ドメイン内にある、請求項４５に記載の結合分子。
【請求項４７】
エフェクタ部分に接合された、請求項１〜４６のいずれかに記載の結合分子。
【請求項４８】
前記エフェクタ部分が細胞毒、プロドラッグ、生体毒素、および放射性同位体から成る群より選択される、請求項４７に記載の結合分子。
【請求項４９】
前記エフェクタ部分がアミド結合を介して接合される。請求項４７に記載の結合分子。
【請求項５０】
前記エフェクタ部分がメイタンシノイドである、請求項４８に記載の結合分子。
【請求項５１】
前記軽鎖が配列番号：５３で示すフレームワークおよびＣＤＲアミノ酸配列を含み、前記重鎖が配列番号：５６で示すフレームワークおよびＣＤＲアミノ酸配列を含む、請求項２５に記載の結合分子。
【請求項５２】
前記軽鎖が配列番号：５３で示すフレームワークおよびＣＤＲアミノ酸配列を含み、前記重鎖が配列番号：５７で示すフレームワークおよびＣＤＲアミノ酸配列を含む、請求項２５に記載の結合分子。
【請求項５３】
γ１アイソタイプの重鎖定常領域を含む、請求項５２に記載の結合分子。
【請求項５４】
配列番号：７１で示す重鎖定常領域配列を含む、請求項５２に記載の結合分子。
【請求項５５】
アクセション番号 でＡＴＣＣに寄託された細胞系統によって産生された、ヒト化抗Ｃｒｉｐｔｏモノクローナル抗体。
【請求項５６】
前記軽鎖が配列番号：５３で示す配列を有し、前記重鎖が配列番号：５８で示す配列を有する、請求項２５に記載の結合分子。
【請求項５７】
前記軽鎖が配列番号：５４で示す配列を有し、前記重鎖が配列番号：５６で示す配列を有する、請求項２５に記載の結合分子。
【請求項５８】
前記軽鎖が配列番号：５４で示す配列を有し、前記重鎖が配列番号：５７で示す配列を有する、請求項２５に記載の結合分子。
【請求項５９】
前記軽鎖が配列番号：５４で示す配列を有し、前記重鎖が配列番号：５８で示す配列を有する、請求項２５に記載の結合分子。
【請求項６０】
前記軽鎖が配列番号：５２で示す配列を有し、前記重鎖が配列番号：５５で示す配列を有する、請求項２５に記載の結合分子。
【請求項６１】
（ａ）配列番号：５２、配列番号：５３、および配列番号：５４から成る群より選択される軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む軽鎖と；
（ｂ）配列番号：５５；配列番号：５６、配列番号：５７、および配列番号：５８から成る群より選択される重鎖可変領域（ＶＨ）配列を含む重鎖と；
を含み、ヒトＣｒｉｐｔｏ抗原に特異的に結合する；
ＣＨ２ドメイン欠失結合分子。
【請求項６２】
前記軽鎖が配列番号：５３で示す配列を有し、前記重鎖が配列番号：６０で示す配列を有する、請求項５７に記載のドメイン欠失結合分子。
【請求項６３】
前記軽鎖が配列番号：５３で示す配列を有し、前記重鎖が配列番号：６１で示す配列を有する、請求項５７に記載のドメイン欠失結合分子。
【請求項６４】
前記軽鎖が配列番号：５３で示す配列を有し、前記重鎖が配列番号：６２で示す配列を有する、請求項５７に記載のドメイン欠失結合分子。
【請求項６５】
前記軽鎖が配列番号：５４で示す配列を有し、前記重鎖が配列番号：６０で示す配列を有する、請求項５７に記載のドメイン欠失結合分子。
【請求項６６】
前記軽鎖が配列番号：５４で示す配列を有し、前記重鎖が配列番号：６１で示す配列を有する、請求項５７に記載のドメイン欠失結合分子。
【請求項６７】
前記軽鎖が配列番号：５４で示す配列を有し、前記重鎖が配列番号：６２で示す配列を有する、請求項５７に記載のヒト化Ｂ３Ｆ６結合分子。
【請求項６８】
前記軽鎖が配列番号：５２で示す配列を有し、前記重鎖が配列番号：５９で示す配列を有する、請求項５７に記載のヒト化Ｂ３Ｆ６結合分子。
【請求項６９】
前記結合分子が、該結合分子の少なくとも１個のＣＤＲ内に少なくとも１個の保存的アミノ酸置換を含むように改変される、請求項９〜６８のいずれかに記載の結合分子。
【請求項７０】
二重特異性である、請求項９〜６９のいずれかに記載の結合分子。
【請求項７１】
４価である、請求項９〜６９のいずれかに記載の結合分子。
【請求項７２】
全長抗体である、請求項９〜６９のいずれかに記載の結合分子。
【請求項７２】
抗体断片である、請求項９〜６９のいずれかに記載の結合分子。
【請求項７３】
少なくとも２個の結合部位および少なくとも２個のポリペプチド鎖を有するポリペプチドダイマーを含む組成物であって、該少なくとも２個の結合部位のうち少なくとも一方がヒト化Ｂ３Ｆ６可変領域を含み、該少なくとも２個のポリペプチド鎖が少なくとも１個の重鎖部分および合成結合ペプチドを含み、該ポリペプチドダイマーの約７０％超が少なくとも１個の鎖間ジスルフィド結合を介して結合されるポリペプチド鎖を含み、該結合ペプチドがＫａｂａｔ番号付けシステムの位置２４３にプロリン残基を含む、組成物。
【請求項７４】
前記ポリペプチドダイマーの９０％超が少なくとも１個の鎖間ジスルフィド結合を介して連結される、請求項７３に記載の組成物。
【請求項７５】
前記合成結合ペプチドがＫａｂａｔ番号付けシステムの位置２３９または２４２にシステイン残基をさらに含む、請求項７３または７４に記載の組成物。
【請求項７６】
前記ポリペプチド鎖の少なくとも一方が、前記結合ペプチドを介してＶＬ、ＶＨまたはＣＨ１ドメインに連結されたＣＨ３ドメインを含む、請求項７３〜７５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７７】
前記合成結合ペプチドがＫａｂａｔ番号付けシステムの位置２４４にアラニン残基を、Ｋａｂａｔ番号付けシステムの位置２４５にプロリン残基をさらに含む、請求項７３〜７６のいずれかに記載の組成物。
【請求項７８】
配列番号：５３で示す軽鎖アミノ酸配列と、配列番号：５７で示す重鎖アミノ酸配列とを含むヒト化抗Ｃｒｉｐｔｏ抗体であって、メイタンソイドに接合される抗体。
【請求項７９】
請求項１〜７８のいずれか一項に記載の結合分子と、製薬的に許容される担体とを含む組成物。
【請求項８０】
請求項７８に記載の抗体の改変体であって、該改変体が少なくとも１個の保存的アミノ酸置換を含み、ヒトＣｒｉｐｔｏに特異的に結合する能力を保持する改変体。
【請求項８１】
請求項９〜５５のいずれか一項に記載の結合分子の重鎖または軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む単離核酸分子。
【請求項８２】
高ストリンジェンシー条件下で請求項８１に記載の核酸分子の相補体にハイブリダイズする核酸分子。
【請求項８３】
ベクター内にある、請求項８２に記載の核酸分子。
【請求項８４】
請求項８３に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項８５】
前記結合分子を産生する方法であって、請求項９〜５５に記載のいずれか一項の宿主細胞を、該結合分子が産生される条件下で培養するステップと、該宿主細胞または培養物から該結合分子を単離するステップと、を包含する方法。
【請求項８６】
請求項１〜８０のいずれかに記載の結合分子による処置から恩恵を得る被験体を処置する方法であって、該結合分子をそのような処置が行われる被験体に投与するステップを含む方法。
【請求項８７】
悪性疾患が患者にて処置されるように、請求項１〜８０のいずれか一項に記載の結合分子をコード化する核酸分子を、該結合分子が発現されるような条件下で悪性疾患を有する患者に投与するステップを含む、悪性疾患を処置する方法。
【請求項８８】
前記被験体が癌に罹患している、請求項８６または８７に記載の方法。
【請求項８９】
追加の薬剤を投与するステップをさらに含む、請求項８６または８７に記載の方法。
【請求項９０】
前記追加の薬剤が化学療法剤である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記追加の薬剤がナタリズマブ、トラスツズマブ、ベバシズマブ、インフリキシマブ、リツキシマブ、イブリツモマブチウキセタン、セツキシマブ、塩酸レバミゾール、トシツモマブ、アレムツズマブ、ＩＭＣ−Ｃ２２５、メシル酸イマチニブ、フルベストラント、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、タモキシフェン、インターフェロンアルファ、デニロイキンディフチトクス、オブリマーセン、エルロチニブＨＣｌ、ボルテゾミブ、サリドマイド、およびエンドスタチンから成る群より選択される、請求項８９に記載の方法。
【請求項９２】
前記患者に請求項７８に記載の結合分子の有効な投薬量を投与するステップを含む、患者の細胞におけるＣｒｉｐｔｏ発現の効果を阻害する方法。
【請求項９３】
前記結合分子の有効投薬量が少なくとも約５ｍｇ／ｋｇである、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
前記結合分子の有効投薬量が少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇである、請求項９２に記載の方法。
【請求項９５】
前記結合分子が腹腔内に、経口的に、経鼻的に、皮下に、筋肉内に、局所的に、または静脈内に投与される、請求項９２に記載の方法。
【請求項９６】
前記患者が脳、乳房、精巣、結腸、肺、卵巣、膀胱、子宮、子宮頸部、膵臓および胃から成る群より選択される臓器の癌に罹患している、請求項９２に記載の方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１Ａ】

【図１１Ｂ】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９Ａ】

【図１９Ｂ】

【図２０】

【図２１】

【図２２Ａ】

【図２２Ｂ】

【図２３Ａ】

【図２３Ｂ】

【図２４Ａ】

【図２４Ｂ】

【図２５Ａ】

【図２５Ｂ】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【公表番号】特表２００８−５２６２３４（Ｐ２００８−５２６２３４Ａ）
【公表日】平成２０年７月２４日（２００８．７．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５５０５１０（Ｐ２００７−５５０５１０）
【出願日】平成１８年１月５日（２００６．１．５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０００５０２
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０７４３９７
【国際公開日】平成１８年７月１３日（２００６．７．１３）
【出願人】（５９２２２１５２８）バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド (224)
【Ｆターム（参考）】