プロテアーゼ
ノカルジオプシス由来の熱安定性プロテアーゼに相同の高い比活性のプロテアーゼ、及び野生型による及び組換え宿主細胞含有トランスジェニック植物及び非ヒトトランスジェニック動物におけるその生成に関する。プロテアーゼは、大豆ボーマン−バークインヒビター、及び他の抗栄養因子、例えば大豆アグルチニン及びKunitzトリプシンインヒビター、並びに単離された大豆貯蔵タンパク質グリシニン及びβ−コングリシニンを分解することができる。ペプチダーゼファミリーS2A又はS1Eの熱安定性についての適切な特徴的構造特徴が開示される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）配列番号２のアミノ酸１−188、配列番号８のアミノ酸１−196、配列番号10のアミノ酸１−189及び/又は配列番号12のアミノ酸１−188に対して少なくとも60％の程度の同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチド；
（ｂ）配列番号１のヌクレオチド499−1062、配列番号７のヌクレオチド577−1164、配列番号９のヌクレオチド586−1152及び/又は配列番号11のヌクレオチド502−1065のいずれかと、低い緊縮条件下でハイブリダイズする核酸配列によりコードされるポリペプチド；及び
（ｃ）配列番号１のヌクレオチド499−1062、配列番号７のヌクレオチド577−1164、配列番号９のヌクレオチド586−1152、及び/又は配列番号11のヌクレオチド502−1065のいずれかに対して少なくとも60％の程度の同一性を有する核酸配列によりコードされるポリペプチドから成る群から選択される、プロテアーゼ活性を有し、そして10mMのリン酸ナトリウム、50mMの塩化ナトリウム緩衝液（pH7.0）において、1.5℃/分の一定走査速度を用いて、示差走査熱量法（DSC）により決定される場合、少なくとも78℃の溶融温度（Tm）を有する単離されたポリペプチド。
【請求項２】
請求項１記載のポリペプチドをコードする核酸配列を含んで成る単離された核酸配列。
【請求項３】
（ａ）配列番号１のヌクレオチド499−1062、配列番号７のヌクレオチド577−1164、配列番号９のヌクレオチド586−1152及び/又は配列番号11のヌクレオチド502−1065のいずれかと、低い緊縮条件下でハイブリダイズし；
（ｂ）配列番号１のヌクレオチド499−1062、配列番号７のヌクレオチド577−1164、配列番号９のヌクレオチド586−1152、及び/又は配列番号11のヌクレオチド502−1065のいずれかに対して少なくとも60％の程度の同一性を有し；そして/又は
（ｃ）配列番号２のアミノ酸１−188、配列番号８のアミノ酸１−196、配列番号10のアミノ酸１−189及び/又は配列番号12のアミノ酸１−188に対して少なくとも60％の程度の同一性を有するポリペプチドをコードする、プロテアーゼ活性を有し、そして10mMのリン酸ナトリウム、50mMの塩化ナトリウム緩衝液（pH7.0）において、1.5℃/分の一定走査速度を用いて、示差走査熱量法（DSC）により決定される場合、少なくとも78℃の溶融温度（Tm）を有するポリペプチドをコードする核酸配列を含んで成る単離された核酸配列。
【請求項４】
適切な発現宿主においてポリペプチドの生成を指図する１又は複数の制御配列に作用可能に連結される請求項２又は３記載の核酸配列を含んで成る核酸構造体。
【請求項５】
請求項４記載の核酸構造体を含んで成る組換え発現ベクター。
【請求項６】
請求項４記載の核酸構造体又は請求項５記載のベクターを含んで成る組み換え宿主細胞。
【請求項７】
請求項１記載のポリペプチドの生成方法であって、（ａ）前記ポリペプチドを含んで成る上清液を生成するために、請求項６記載の組換え宿主細胞を培養し；そして（ｂ）前記ポリペプチドを回収することを含んで成る方法。
【請求項８】
請求項１記載のポリペプチドを発現できる、トランスジェニック植物又は植物部分。
【請求項９】
請求項１記載のポリペプチドを発現できる、トランスジェニック非ヒト動物は、又はその生成物又は要素。
【請求項１０】
請求項１記載のポリペプチドの生成方法であって、
（ａ）次の株：
（i）ノカルジオプシス・ダソンビレイ（Nocardiopsis dassonvillei）亜種ダソンビレイDSM43235,
（ii）ノカレジオプシスsp.（Nocardiopsis sp.）DSM16424；又は
（iii）ノカレジオプシス・アルバ（Nocardiopsis alba）DSM15647；
のいずれかを培養し；そして
（ｂ）前記ポリペプチドを回収する；
ことを含んで成る方法。
【請求項１１】
（ｉ）動物飼料への；（ii）動物飼料の使用のための組成物の調製のための；（iii）動物飼料の栄養価値を改良するための；（iv）動物飼料における消化でき及び/又は溶解できるタンパク質を高めるための；（v）動物飼料におけるタンパク質の加水分解の程度を高めるための；及び/又は（vi）タンパク質の処理のための；
請求項１記載の少なくとも１つのポリペプチドの使用。
【請求項１２】
少なくとも１つの請求項１記載のポリペプチド；及び
（ａ）少なくとも１つの脂溶性ビタミン、及び/又は
（ｂ）少なくとも１つの水溶性ビタミン、及び/又は
（ｃ）少なくとも１つの微量鉱物を含んで成る動物飼料添加物。
【請求項１３】
50〜800g/kgの粗タンパク質含有物を有し、そして少なくとも１つの請求項１記載のポリペプチド、又は少なくとも１つの請求項12記載の飼料添加物を含んで成る動物用飼料組成物。
【請求項１４】
魚用飼料である請求項13記載の飼料組成物。
【請求項１５】
中でもアミラーゼ、フィターゼ、キシラナーゼ、ガラクタナーゼ、α−ガラクトシダーゼ、プロテアーゼ、ホスホリパーゼ及び/又はβ−グルカナーゼから選択された少なくとも１つの他の酵素と共に、少なくとも１つの請求項１記載のポリペプチドを含んで成る組成物。
【請求項１６】
洗剤への少なくとも１つの請求項１記載のポリペプチドの使用。
【請求項１７】
ノカルジオプシスsp. DSM16424。
【請求項１８】
ノカルジオプシス・アルバDSM15647。
【請求項１】
（ａ）配列番号２のアミノ酸１−188、配列番号８のアミノ酸１−196、配列番号10のアミノ酸１−189及び/又は配列番号12のアミノ酸１−188に対して少なくとも60％の程度の同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチド；
（ｂ）配列番号１のヌクレオチド499−1062、配列番号７のヌクレオチド577−1164、配列番号９のヌクレオチド586−1152及び/又は配列番号11のヌクレオチド502−1065のいずれかと、低い緊縮条件下でハイブリダイズする核酸配列によりコードされるポリペプチド；及び
（ｃ）配列番号１のヌクレオチド499−1062、配列番号７のヌクレオチド577−1164、配列番号９のヌクレオチド586−1152、及び/又は配列番号11のヌクレオチド502−1065のいずれかに対して少なくとも60％の程度の同一性を有する核酸配列によりコードされるポリペプチドから成る群から選択される、プロテアーゼ活性を有し、そして10mMのリン酸ナトリウム、50mMの塩化ナトリウム緩衝液（pH7.0）において、1.5℃/分の一定走査速度を用いて、示差走査熱量法（DSC）により決定される場合、少なくとも78℃の溶融温度（Tm）を有する単離されたポリペプチド。
【請求項２】
請求項１記載のポリペプチドをコードする核酸配列を含んで成る単離された核酸配列。
【請求項３】
（ａ）配列番号１のヌクレオチド499−1062、配列番号７のヌクレオチド577−1164、配列番号９のヌクレオチド586−1152及び/又は配列番号11のヌクレオチド502−1065のいずれかと、低い緊縮条件下でハイブリダイズし；
（ｂ）配列番号１のヌクレオチド499−1062、配列番号７のヌクレオチド577−1164、配列番号９のヌクレオチド586−1152、及び/又は配列番号11のヌクレオチド502−1065のいずれかに対して少なくとも60％の程度の同一性を有し；そして/又は
（ｃ）配列番号２のアミノ酸１−188、配列番号８のアミノ酸１−196、配列番号10のアミノ酸１−189及び/又は配列番号12のアミノ酸１−188に対して少なくとも60％の程度の同一性を有するポリペプチドをコードする、プロテアーゼ活性を有し、そして10mMのリン酸ナトリウム、50mMの塩化ナトリウム緩衝液（pH7.0）において、1.5℃/分の一定走査速度を用いて、示差走査熱量法（DSC）により決定される場合、少なくとも78℃の溶融温度（Tm）を有するポリペプチドをコードする核酸配列を含んで成る単離された核酸配列。
【請求項４】
適切な発現宿主においてポリペプチドの生成を指図する１又は複数の制御配列に作用可能に連結される請求項２又は３記載の核酸配列を含んで成る核酸構造体。
【請求項５】
請求項４記載の核酸構造体を含んで成る組換え発現ベクター。
【請求項６】
請求項４記載の核酸構造体又は請求項５記載のベクターを含んで成る組み換え宿主細胞。
【請求項７】
請求項１記載のポリペプチドの生成方法であって、（ａ）前記ポリペプチドを含んで成る上清液を生成するために、請求項６記載の組換え宿主細胞を培養し；そして（ｂ）前記ポリペプチドを回収することを含んで成る方法。
【請求項８】
請求項１記載のポリペプチドを発現できる、トランスジェニック植物又は植物部分。
【請求項９】
請求項１記載のポリペプチドを発現できる、トランスジェニック非ヒト動物は、又はその生成物又は要素。
【請求項１０】
請求項１記載のポリペプチドの生成方法であって、
（ａ）次の株：
（i）ノカルジオプシス・ダソンビレイ（Nocardiopsis dassonvillei）亜種ダソンビレイDSM43235,
（ii）ノカレジオプシスsp.（Nocardiopsis sp.）DSM16424；又は
（iii）ノカレジオプシス・アルバ（Nocardiopsis alba）DSM15647；
のいずれかを培養し；そして
（ｂ）前記ポリペプチドを回収する；
ことを含んで成る方法。
【請求項１１】
（ｉ）動物飼料への；（ii）動物飼料の使用のための組成物の調製のための；（iii）動物飼料の栄養価値を改良するための；（iv）動物飼料における消化でき及び/又は溶解できるタンパク質を高めるための；（v）動物飼料におけるタンパク質の加水分解の程度を高めるための；及び/又は（vi）タンパク質の処理のための；
請求項１記載の少なくとも１つのポリペプチドの使用。
【請求項１２】
少なくとも１つの請求項１記載のポリペプチド；及び
（ａ）少なくとも１つの脂溶性ビタミン、及び/又は
（ｂ）少なくとも１つの水溶性ビタミン、及び/又は
（ｃ）少なくとも１つの微量鉱物を含んで成る動物飼料添加物。
【請求項１３】
50〜800g/kgの粗タンパク質含有物を有し、そして少なくとも１つの請求項１記載のポリペプチド、又は少なくとも１つの請求項12記載の飼料添加物を含んで成る動物用飼料組成物。
【請求項１４】
魚用飼料である請求項13記載の飼料組成物。
【請求項１５】
中でもアミラーゼ、フィターゼ、キシラナーゼ、ガラクタナーゼ、α−ガラクトシダーゼ、プロテアーゼ、ホスホリパーゼ及び/又はβ−グルカナーゼから選択された少なくとも１つの他の酵素と共に、少なくとも１つの請求項１記載のポリペプチドを含んで成る組成物。
【請求項１６】
洗剤への少なくとも１つの請求項１記載のポリペプチドの使用。
【請求項１７】
ノカルジオプシスsp. DSM16424。
【請求項１８】
ノカルジオプシス・アルバDSM15647。
【公表番号】特表２００６−５２７５８３（Ｐ２００６−５２７５８３Ａ）
【公表日】平成１８年１２月７日（２００６．１２．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５１５７２５（Ｐ２００６−５１５７２５）
【出願日】平成１６年６月２１日（２００４．６．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＤＫ２００４／０００４３２
【国際公開番号】ＷＯ２００４／１１１２２０
【国際公開日】平成１６年１２月２３日（２００４．１２．２３）
【出願人】（５００５８６２９９）ノボザイムス アクティーゼルスカブ (164)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年１２月７日（２００６．１２．７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年６月２１日（２００４．６．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＤＫ２００４／０００４３２
【国際公開番号】ＷＯ２００４／１１１２２０
【国際公開日】平成１６年１２月２３日（２００４．１２．２３）
【出願人】（５００５８６２９９）ノボザイムス アクティーゼルスカブ (164)
【Ｆターム（参考）】
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